JPH05294939A - ８−ヒドロキシ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆアゼピン−２−オン系染料 - Google Patents
８−ヒドロキシ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆアゼピン−２−オン系染料Info
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Abstract
(57)【要約】
【目的】酸／塩基指示薬及び色原性酵素基質として有用
な、新規な一連の２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−
２−オン化合物を提供する。 【構成】次式： 【化１２】 （式中、ＸはＣＨ2 ＣＨ2 又はＣＨ＝ＣＨであり、Ｙは
Ｈであるか又は酵素によって切断されうる基である）で
示される２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オン
をベ−スとする化合物ならびにそれらを含浸した分析試
験器具及び分析方法。
な、新規な一連の２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−
２−オン化合物を提供する。 【構成】次式： 【化１２】 （式中、ＸはＣＨ2 ＣＨ2 又はＣＨ＝ＣＨであり、Ｙは
Ｈであるか又は酵素によって切断されうる基である）で
示される２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オン
をベ−スとする化合物ならびにそれらを含浸した分析試
験器具及び分析方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、酸／塩基指示薬として
有用であり、加水分解酵素の色原性基質として作用する
８−ヒドロキシ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−
２−オン系染料を包含する。この基質は優れた光学的性
質を有し、低レベルの酵素濃度を測定するのに用いられ
る。
有用であり、加水分解酵素の色原性基質として作用する
８−ヒドロキシ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−
２−オン系染料を包含する。この基質は優れた光学的性
質を有し、低レベルの酵素濃度を測定するのに用いられ
る。
【０００２】
【従来の技術】２，８−ジ置換のジベンズ［ｂ，ｆ］ア
ゼピン類は公知であるがこの群の化合物のうち８個だけ
が文献に報告されているにすぎない。また、２Ｈ−ジベ
ンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オン類の８例も知られて
いる。それらは、
ゼピン類は公知であるがこの群の化合物のうち８個だけ
が文献に報告されているにすぎない。また、２Ｈ−ジベ
ンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オン類の８例も知られて
いる。それらは、
【０００３】２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−
オン、１−クロロ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン
−２−オン、１−ブロモ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］ア
ゼピン−２−オン、１−ニトロ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，
ｆ］アゼピン−２−オン、３，６，１０−トリヒドロキ
シ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オン、１
−アセチル−３，６，１０−トリヒドロキシ−２Ｈ−ジ
ベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オン、１０，１１−ジ
ヒドロ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オ
ン、４，６，８−トリブロモ−１０，１１−ジヒドロ−
２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オンである。
オン、１−クロロ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン
−２−オン、１−ブロモ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］ア
ゼピン−２−オン、１−ニトロ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，
ｆ］アゼピン−２−オン、３，６，１０−トリヒドロキ
シ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オン、１
−アセチル−３，６，１０−トリヒドロキシ−２Ｈ−ジ
ベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オン、１０，１１−ジ
ヒドロ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オ
ン、４，６，８−トリブロモ−１０，１１−ジヒドロ−
２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オンである。
【０００４】最後に示した化合物は２Ｈ−ジベンズ
［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オンの８位置換体の唯一の報
告例である。その合成は、Teuber及びSchmidtke による
[ Chem.Ber. 93, 1257(1960)]に記載されている。上記
の２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オン類のう
ちいくつかはｐＨの変化により着色するが、いずれもｐ
Ｈ指示薬ではない。
［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オンの８位置換体の唯一の報
告例である。その合成は、Teuber及びSchmidtke による
[ Chem.Ber. 93, 1257(1960)]に記載されている。上記
の２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オン類のう
ちいくつかはｐＨの変化により着色するが、いずれもｐ
Ｈ指示薬ではない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、酸／
塩基指示薬として用いるのに好適な、新規な８位置換の
２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オン類を提供
することである。この８位にイオン化しうるヒドロキシ
ル基を有することにより、そのような指示薬が生成す
る。酵素によって切断されうる好適な基で該酸／塩基指
示薬化合物を誘導体化して、加水分解酵素の色原性基質
を提供することも本発明の目的である。
塩基指示薬として用いるのに好適な、新規な８位置換の
２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オン類を提供
することである。この８位にイオン化しうるヒドロキシ
ル基を有することにより、そのような指示薬が生成す
る。酵素によって切断されうる好適な基で該酸／塩基指
示薬化合物を誘導体化して、加水分解酵素の色原性基質
を提供することも本発明の目的である。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明は、次式；
【０００７】
【化４】
【０００８】（式中、ＸはＣＨ2 ＣＨ2 又はＣＨ＝ＣＨ
であり、ＹはＨであるか又は酵素により切断されうる基
である）で示される２，８−ジ置換２Ｈ−ジベンズ
［ｂ，ｆ］アゼピンをベ−スとした化合物を包含する。
であり、ＹはＨであるか又は酵素により切断されうる基
である）で示される２，８−ジ置換２Ｈ−ジベンズ
［ｂ，ｆ］アゼピンをベ−スとした化合物を包含する。
【０００９】本発明は、ｐＨ指示薬及び比色分析の酵素
基質として有用な新規な一連の染料を包含する。これら
の染料は２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オン
環系を有し、その最も単純な形は式１及び２の構造で代
表される。
基質として有用な新規な一連の染料を包含する。これら
の染料は２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オン
環系を有し、その最も単純な形は式１及び２の構造で代
表される。
【００１０】
【化５】
【００１１】構造１は、８−ヒドロキシ−２Ｈ−ジベン
ズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オンであり、酸中ではサ−
モン色（ｐＨ＝４．９８、４５６nm、ε＝７，２７０)
、塩基中では暗赤色（ｐＨ＝７．８、５７４nm、ε＝
７０，２５０）であるｐＨ指示薬であって、pKa 値は
６．３４である。構造２は、８−ヒドロキシ−１０，１
１−ジヒドロ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２
−オンであって，酸中では黄色（ｐＨ＝４．５、４７８
nm、 ε＝１９，７６０）、塩基中では青色（ｐＨ＝１
０．６１、６０２nm、 ε＝６５，０００）であるｐＨ指
示薬であって、pKa 値は６．９５である。
ズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オンであり、酸中ではサ−
モン色（ｐＨ＝４．９８、４５６nm、ε＝７，２７０)
、塩基中では暗赤色（ｐＨ＝７．８、５７４nm、ε＝
７０，２５０）であるｐＨ指示薬であって、pKa 値は
６．３４である。構造２は、８−ヒドロキシ−１０，１
１−ジヒドロ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２
−オンであって，酸中では黄色（ｐＨ＝４．５、４７８
nm、 ε＝１９，７６０）、塩基中では青色（ｐＨ＝１
０．６１、６０２nm、 ε＝６５，０００）であるｐＨ指
示薬であって、pKa 値は６．９５である。
【００１２】関連の染料は、式１又は２の芳香環上のＹ
の水素原子を色々な官能基で置き換えることによって製
造される。このようにして、前記の一般式においてＹが
Ｈでないとき、それは分析対象の対応する特定の酵素に
対する特異性を付与するように選択される酵素によって
切断されうる基を表わす。この、酵素により切断されう
る基Ｙは、例えば糖及びその誘導体の残基、脂肪族及び
芳香族カルボン酸から誘導されるアシル基、アミノ酸の
残基及びペプチドの残基並びに燐酸及び硫酸などの無機
酸の残基のような、広範ないかなる酵素、特に加水分解
酵素に対する特異性を付与するように選択される酵素特
異的部分を有する化合物Ｙ−ＯＨの残基である。したが
って、本発明は、有用な酸／塩基指示薬であって、その
指示薬が酵素によって切断されうる好適な基Ｙにより誘
導体化されたときには、臨床的に興味ある種々の酵素の
検出にも用いられる指示薬を提供する。
の水素原子を色々な官能基で置き換えることによって製
造される。このようにして、前記の一般式においてＹが
Ｈでないとき、それは分析対象の対応する特定の酵素に
対する特異性を付与するように選択される酵素によって
切断されうる基を表わす。この、酵素により切断されう
る基Ｙは、例えば糖及びその誘導体の残基、脂肪族及び
芳香族カルボン酸から誘導されるアシル基、アミノ酸の
残基及びペプチドの残基並びに燐酸及び硫酸などの無機
酸の残基のような、広範ないかなる酵素、特に加水分解
酵素に対する特異性を付与するように選択される酵素特
異的部分を有する化合物Ｙ−ＯＨの残基である。したが
って、本発明は、有用な酸／塩基指示薬であって、その
指示薬が酵素によって切断されうる好適な基Ｙにより誘
導体化されたときには、臨床的に興味ある種々の酵素の
検出にも用いられる指示薬を提供する。
【００１３】それゆえ、ＹがｐＨ７から１１の塩基性溶
液中で特定の酵素によって切断された場合、脱プロトン
化した形の色原体が放出され、本発明の切断されていな
い色原性酵素基質の吸収極大よりも実質的に大きい吸収
極大を有する。はっきりした吸収の変化は容易に目視で
き、かつ検出できる光学的な信号を提供し、この信号は
正確に測定され、液体試料中に存在する酵素の量に関連
する。
液中で特定の酵素によって切断された場合、脱プロトン
化した形の色原体が放出され、本発明の切断されていな
い色原性酵素基質の吸収極大よりも実質的に大きい吸収
極大を有する。はっきりした吸収の変化は容易に目視で
き、かつ検出できる光学的な信号を提供し、この信号は
正確に測定され、液体試料中に存在する酵素の量に関連
する。
【００１４】酸性及び塩基性の形態の間の容易に目で確
認できる色の変化並びに低いpKa 値及び大きな吸光係数
により、これらの染料は加水分解酵素の比色分析用基質
に包含されるのに適している。例えば、対応するβ−Ｄ
−ガラクトピラノシド（Ｙ−ＯＨがβ−Ｄ−ガラクトピ
ラノ−スである）である下記の３及び４は、イムノアッ
セイにおいて指示薬酵素として一般に用いられるグリコ
シダ−ゼであるβ−ガラクトシダ−ゼ（Ｅ．Ｃ．３．
２．１．２３）の比色分析用基質として優れている。
認できる色の変化並びに低いpKa 値及び大きな吸光係数
により、これらの染料は加水分解酵素の比色分析用基質
に包含されるのに適している。例えば、対応するβ−Ｄ
−ガラクトピラノシド（Ｙ−ＯＨがβ−Ｄ−ガラクトピ
ラノ−スである）である下記の３及び４は、イムノアッ
セイにおいて指示薬酵素として一般に用いられるグリコ
シダ−ゼであるβ−ガラクトシダ−ゼ（Ｅ．Ｃ．３．
２．１．２３）の比色分析用基質として優れている。
【００１５】
【化６】
【００１６】酵素により切断されうる他の基による化合
物（１）及び（２）の同様な誘導体化により、他の加水
分解酵素の比色分析用基質が生成する。これらの基質は
特定の加水分解酵素の検出及び検量のための比色指示薬
として、試験器具中に包含させることができる。
物（１）及び（２）の同様な誘導体化により、他の加水
分解酵素の比色分析用基質が生成する。これらの基質は
特定の加水分解酵素の検出及び検量のための比色指示薬
として、試験器具中に包含させることができる。
【００１７】本発明の指示薬化合物の製造はスキ−ムＩ
に示すとおりである。
に示すとおりである。
【００１８】
【化７】
【００１９】スキ−ムＩを参照して工業的に入手可能な
イミノジベンジル（５）からの化合物（１）の合成を説
明する。このようにして化合物（５）から、２，８−ジ
ブロモイミノジベンジル（６）が最初にKricka及びLedw
ith の方法により製造される（J.Chem.Soc.Perkin I 、
859 (1973)）。化合物（６）大過剰のナトリウムメトキ
シドによって処理することにより［Hseih 及びLittの方
法、Macromolecules１９、516(1986) ]、２，８−ジメト
キシイミノジベンジル（７）の良好な収量が可能であ
る。化合物（７）の脱水素化により、２，８−ジメトキ
シ−５Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン（８）を得る反
応は、炭素上のパラジウムとともに２２０℃に熱するこ
とにより中程度の収量で達成される。ＣＨ2 Ｃｌ2 中で
ＢＢｒ3 によってメチルエ−テルを開裂すると、ほとん
ど定量的にジオ−ル（９）に転換され、これは単離せず
にすぐに過ヨウ素酸ナトリウムによって酸化されると所
望の生成物（１）となる。
イミノジベンジル（５）からの化合物（１）の合成を説
明する。このようにして化合物（５）から、２，８−ジ
ブロモイミノジベンジル（６）が最初にKricka及びLedw
ith の方法により製造される（J.Chem.Soc.Perkin I 、
859 (1973)）。化合物（６）大過剰のナトリウムメトキ
シドによって処理することにより［Hseih 及びLittの方
法、Macromolecules１９、516(1986) ]、２，８−ジメト
キシイミノジベンジル（７）の良好な収量が可能であ
る。化合物（７）の脱水素化により、２，８−ジメトキ
シ−５Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン（８）を得る反
応は、炭素上のパラジウムとともに２２０℃に熱するこ
とにより中程度の収量で達成される。ＣＨ2 Ｃｌ2 中で
ＢＢｒ3 によってメチルエ−テルを開裂すると、ほとん
ど定量的にジオ−ル（９）に転換され、これは単離せず
にすぐに過ヨウ素酸ナトリウムによって酸化されると所
望の生成物（１）となる。
【００２０】スキ−ムIIはイミノジベンジル（５）から
化合物（２）を合成する概略を示している。合成の順序
は、ジオ−ルを得るために２，８−ジメトキシイミノジ
ベンジル（７）が脱メチルされ、それに続いてすぐに酸
化されると所望の色原体２が得られることを除いてはス
キ−ムＩと同様である。
化合物（２）を合成する概略を示している。合成の順序
は、ジオ−ルを得るために２，８−ジメトキシイミノジ
ベンジル（７）が脱メチルされ、それに続いてすぐに酸
化されると所望の色原体２が得られることを除いてはス
キ−ムＩと同様である。
【００２１】
【化８】
【００２２】化合物（１）のβ−ガラクトシドの合成の
段階はスキ−ムIII に示した。
段階はスキ−ムIII に示した。
【００２３】
【化９】
【００２４】スキ−ムIII を参照すると、該染料（１）
はキノリン中でアセトブロモガラクト−ス及び酸化銀と
一晩反応させて、保護されたガラクトシド（１１）を良
好な収量で得る。保護基をメタノ−ル中でナトリウムメ
トキシドによって加水分解することにより、８−β−Ｄ
−ガラクトピラノシロキシ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］
アゼピン−２−オン（３）、すなわち新規な比色反応性
のβ−ガラクトシダ−ゼ用の色原体が生成する。化合物
（２）のβ−ガラクトシドの合成も基本的に同様であ
る。
はキノリン中でアセトブロモガラクト−ス及び酸化銀と
一晩反応させて、保護されたガラクトシド（１１）を良
好な収量で得る。保護基をメタノ−ル中でナトリウムメ
トキシドによって加水分解することにより、８−β−Ｄ
−ガラクトピラノシロキシ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］
アゼピン−２−オン（３）、すなわち新規な比色反応性
のβ−ガラクトシダ−ゼ用の色原体が生成する。化合物
（２）のβ−ガラクトシドの合成も基本的に同様であ
る。
【００２５】本発明の化合物の芳香族炭素環及びヘテロ
環は、本発明の範囲からそれることなしに種々の置換基
を有することができる。そのような置換基は、所望の色
原性酵素基質としての性質を有する安定な化合物を製造
する当業者の能力によってのみ制限を受けるものであっ
て、置換及び非置換のアルキル、置換及び非置換のアリ
−ル、アルコキシ、アリ−ルオキシ、ハロゲン（例えば
フルオロ、クロロ及びブロモ）、ニトロ及びジアルキル
アミノのような置換アミノ基などの基を含む。
環は、本発明の範囲からそれることなしに種々の置換基
を有することができる。そのような置換基は、所望の色
原性酵素基質としての性質を有する安定な化合物を製造
する当業者の能力によってのみ制限を受けるものであっ
て、置換及び非置換のアルキル、置換及び非置換のアリ
−ル、アルコキシ、アリ−ルオキシ、ハロゲン（例えば
フルオロ、クロロ及びブロモ）、ニトロ及びジアルキル
アミノのような置換アミノ基などの基を含む。
【００２６】本発明の色原性化合物において、ＹがＨで
あるとき、それらの化合物はｐＨ指示薬として有用であ
る。これらが色原性基質に誘導体化されたとき、すなわ
ちＹが酵素によって切断されうる基に変えられたとき、
ｐＨ約７から１１までの溶液中でその酵素と接触した場
合、この酵素により切断されうる基Ｙは酵素によって切
断されて、色原性酵素基質の吸収極大より実質的に大き
な吸収極大を有する解離した形の色原体を放出し、その
吸収極大の比に明確な変化を生じる。したがって、本発
明の化合物は、Ｙが酵素によって切断されうる基である
ときには、特に検出される酵素標識分析試薬を採用した
分析試験系において有用である。基質化合物と酵素によ
って切断された形の色原体との間の明確なかつ測定可能
な吸収極大の変化は、正確に検出測定することができ、
液体試料中に存在する分析対象物の量に相関性がある。
あるとき、それらの化合物はｐＨ指示薬として有用であ
る。これらが色原性基質に誘導体化されたとき、すなわ
ちＹが酵素によって切断されうる基に変えられたとき、
ｐＨ約７から１１までの溶液中でその酵素と接触した場
合、この酵素により切断されうる基Ｙは酵素によって切
断されて、色原性酵素基質の吸収極大より実質的に大き
な吸収極大を有する解離した形の色原体を放出し、その
吸収極大の比に明確な変化を生じる。したがって、本発
明の化合物は、Ｙが酵素によって切断されうる基である
ときには、特に検出される酵素標識分析試薬を採用した
分析試験系において有用である。基質化合物と酵素によ
って切断された形の色原体との間の明確なかつ測定可能
な吸収極大の変化は、正確に検出測定することができ、
液体試料中に存在する分析対象物の量に相関性がある。
【００２７】本発明によれば、この色原体が酸／塩基指
示薬として用いられるときは、Ｙ基はＨであってよく、
あるいは臨床分析化学において遭遇する広範な酵素、特
に加水分解酵素に対する特異性を付与する新規な色原性
酵素基質化合物を提供するような酵素特異的部分であっ
てもよい。酵素により切断されうる特定の基Ｙの選択は
対象となる特定の酵素に依存する。例えば、測定対象と
なる酵素がグリコシダ−ゼであるとき、Ｙは特定のグリ
コシダ−ゼのための天然の基質に相当するグリコシド性
の基である。例えば特定のグリコシダ−ゼ酵素に特異的
であるグリコシド基質中に結合されており、その酵素に
よって切断されうるモノ−及びオリゴ−サッカライド、
例えばβ−Ｄ−ガラクトピラノ−ス、α−Ｄ−ガラクト
ピラノ−ス、β−Ｄ−グルコピラノ−ス、α−Ｄ−グル
コピラノ−ス及びα−Ｄ−マンノピラノ−スなどの残
基、並びにＮ−アセチルグルコサミン及びＮ−アセチル
ノイラミン酸などのアミノ糖の残基であるようなグリコ
シドが製造される。その他の好適なグリコシド性の基
は、約２から２０、好ましくは２から７個のオリゴサッ
カライド鎖であって、サッカライド鎖切断酵素によって
切断されうるα−１，４グルコシド結合により、例えば
マルトペント−ス、マルトヘキソ−ス及びマルトヘプト
−ス残基のようなモノ−又はオリゴ−サッカライドに結
合したモノサッカライド単位を含み、それらは対応する
グリコシダ−ゼにより順番に切断される。
示薬として用いられるときは、Ｙ基はＨであってよく、
あるいは臨床分析化学において遭遇する広範な酵素、特
に加水分解酵素に対する特異性を付与する新規な色原性
酵素基質化合物を提供するような酵素特異的部分であっ
てもよい。酵素により切断されうる特定の基Ｙの選択は
対象となる特定の酵素に依存する。例えば、測定対象と
なる酵素がグリコシダ−ゼであるとき、Ｙは特定のグリ
コシダ−ゼのための天然の基質に相当するグリコシド性
の基である。例えば特定のグリコシダ−ゼ酵素に特異的
であるグリコシド基質中に結合されており、その酵素に
よって切断されうるモノ−及びオリゴ−サッカライド、
例えばβ−Ｄ−ガラクトピラノ−ス、α−Ｄ−ガラクト
ピラノ−ス、β−Ｄ−グルコピラノ−ス、α−Ｄ−グル
コピラノ−ス及びα−Ｄ−マンノピラノ−スなどの残
基、並びにＮ−アセチルグルコサミン及びＮ−アセチル
ノイラミン酸などのアミノ糖の残基であるようなグリコ
シドが製造される。その他の好適なグリコシド性の基
は、約２から２０、好ましくは２から７個のオリゴサッ
カライド鎖であって、サッカライド鎖切断酵素によって
切断されうるα−１，４グルコシド結合により、例えば
マルトペント−ス、マルトヘキソ−ス及びマルトヘプト
−ス残基のようなモノ−又はオリゴ−サッカライドに結
合したモノサッカライド単位を含み、それらは対応する
グリコシダ−ゼにより順番に切断される。
【００２８】酵素によって切断されうる基Ｙの選択は、
もちろん分析対象の特定の酵素に依存する。このように
して、非特異的エステラ−ゼ酵素の場合には、酵素によ
って切断される基Ｙはアシル基であって、次式：
もちろん分析対象の特定の酵素に依存する。このように
して、非特異的エステラ−ゼ酵素の場合には、酵素によ
って切断される基Ｙはアシル基であって、次式：
【００２９】
【化１０】
【００３０】（式中、Ｚは低級アルキル又はアリ−ルで
ある）で示される、コリンエステラ−ゼ、アシラ−ゼ又
はリパ−ゼのような非特異的エステラ−ゼの存在を検出
するのに有用な色原性エステルを提供する。本発明の色
原性酵素基質化合物は、また白血球の中に通常見られる
タンパク分解酵素の検出にも用いられる。このような化
合物は、例えばＮ−トシル−Ｌ−アラニンのようなＮが
保護されたアミノ酸又は約２から５個のアミノ酸単位か
らなる短いペプチドであるＹ−ＯＨ化合物のＹ基によっ
て一般式１又は２のＨが置換されているエステルであ
る。
ある）で示される、コリンエステラ−ゼ、アシラ−ゼ又
はリパ−ゼのような非特異的エステラ−ゼの存在を検出
するのに有用な色原性エステルを提供する。本発明の色
原性酵素基質化合物は、また白血球の中に通常見られる
タンパク分解酵素の検出にも用いられる。このような化
合物は、例えばＮ−トシル−Ｌ−アラニンのようなＮが
保護されたアミノ酸又は約２から５個のアミノ酸単位か
らなる短いペプチドであるＹ−ＯＨ化合物のＹ基によっ
て一般式１又は２のＨが置換されているエステルであ
る。
【００３１】同様に、液体試料中のアルカリホスファタ
−ゼの検出のためには、酵素によって切断されうる基Ｙ
は、化合物Ｙ−ＯＨのＹ基であって、Ｙ−ＯＨは次式：
−ゼの検出のためには、酵素によって切断されうる基Ｙ
は、化合物Ｙ−ＯＨのＹ基であって、Ｙ−ＯＨは次式：
【００３２】
【化１１】
【００３３】の色原性リン酸エステルを与えるリン酸で
ある。本発明の色原性酵素基質化合物は，存在する酵素
の量の測定を必要とする分析試験系、特に酵素標識分析
試薬を採用した分析試験系において有用である。そのよ
うな分析試験系では、例えば、一定分画中の酵素標識の
量が測定され、液体試料から得られる分析対象物の量と
相関する、競合法、サンドウイッチ法及び免疫学的技術
として知られている酵素イムノアッセイが開発され、特
異的な結合物質、例えば酵素標識した抗原、ハプテン、
抗体、レクチン、受容体、アビジン及びその他の結合タ
ンパク質及びポリヌクレオチドなどへの使用が、生物学
的液体中の物質の測定に適用されてきた。一般に、酵素
標識された結合物質を含む標識試薬を、結合の程度を測
定するために採用する測定方法は、結合物質、例えば抗
体又は抗原の特定の分析対象物へ結合する能力に依存す
る。一般に、結合の程度は標識された試薬中に存在する
酵素標識の量を測定することにより決定され、このとき
検出された酵素の量は液体試料中に存在する分析対象物
の量と相関する。
ある。本発明の色原性酵素基質化合物は，存在する酵素
の量の測定を必要とする分析試験系、特に酵素標識分析
試薬を採用した分析試験系において有用である。そのよ
うな分析試験系では、例えば、一定分画中の酵素標識の
量が測定され、液体試料から得られる分析対象物の量と
相関する、競合法、サンドウイッチ法及び免疫学的技術
として知られている酵素イムノアッセイが開発され、特
異的な結合物質、例えば酵素標識した抗原、ハプテン、
抗体、レクチン、受容体、アビジン及びその他の結合タ
ンパク質及びポリヌクレオチドなどへの使用が、生物学
的液体中の物質の測定に適用されてきた。一般に、酵素
標識された結合物質を含む標識試薬を、結合の程度を測
定するために採用する測定方法は、結合物質、例えば抗
体又は抗原の特定の分析対象物へ結合する能力に依存す
る。一般に、結合の程度は標識された試薬中に存在する
酵素標識の量を測定することにより決定され、このとき
検出された酵素の量は液体試料中に存在する分析対象物
の量と相関する。
【００３４】本発明の色原性酵素基質化合物は、色原性
酵素基質化合物を含浸したキャリアマトリックスからな
る分析試験器具に採用され、その際酵素特異的部分の性
質が検出される特定の酵素に依存する分析試験系に特に
有用である。キャリアマトルックスは、本発明の色原性
酵素基質化合物が含浸されうる物質であるなら何でもよ
く、液体分析のための試薬片に用いられるような物質で
よい。そのような素材の例としては、フェルト、多孔性
セラミック片並びに織った又はマット状にしたガラス繊
維を含む。それに代って、木片、織布、海綿状の素材、
合成樹脂フリ−ス及びガラス繊維フェルトもマトリック
ス素材として用いうる。好ましくは、キャリアマトリッ
クスは吸水性の素材、例えば濾紙がよく、この吸水性素
材を色原性酵素基質化合物の溶液に接触させることによ
り、この化合物を含浸させたものがよい。
酵素基質化合物を含浸したキャリアマトリックスからな
る分析試験器具に採用され、その際酵素特異的部分の性
質が検出される特定の酵素に依存する分析試験系に特に
有用である。キャリアマトルックスは、本発明の色原性
酵素基質化合物が含浸されうる物質であるなら何でもよ
く、液体分析のための試薬片に用いられるような物質で
よい。そのような素材の例としては、フェルト、多孔性
セラミック片並びに織った又はマット状にしたガラス繊
維を含む。それに代って、木片、織布、海綿状の素材、
合成樹脂フリ−ス及びガラス繊維フェルトもマトリック
ス素材として用いうる。好ましくは、キャリアマトリッ
クスは吸水性の素材、例えば濾紙がよく、この吸水性素
材を色原性酵素基質化合物の溶液に接触させることによ
り、この化合物を含浸させたものがよい。
【００３５】好適な実施態様においては、キャリアマト
リックスは色原性酵素基質化合物を含浸させた面又は層
の形の吸水性素材であって、標識された試薬を結合型か
ら遊離型に物理的に分離するための技術上公知の不溶性
分析試薬を採用して、液体環境中で特定の分析が実施さ
れうるものが用いられる。そのような分析系を実施する
にあたり、遊離型を含有する液体の試験最小量を取り出
しキャリアマトリックスに適用すると、このマトリック
スに含浸された色原性酵素基質化合物が、液体試料中の
遊離型の標識試薬の酵素標識と相互作用して、目で見る
ことができ及び／又は分光光度計のような好適な計器で
測定することができる検知可能な色の変化を示す。
リックスは色原性酵素基質化合物を含浸させた面又は層
の形の吸水性素材であって、標識された試薬を結合型か
ら遊離型に物理的に分離するための技術上公知の不溶性
分析試薬を採用して、液体環境中で特定の分析が実施さ
れうるものが用いられる。そのような分析系を実施する
にあたり、遊離型を含有する液体の試験最小量を取り出
しキャリアマトリックスに適用すると、このマトリック
スに含浸された色原性酵素基質化合物が、液体試料中の
遊離型の標識試薬の酵素標識と相互作用して、目で見る
ことができ及び／又は分光光度計のような好適な計器で
測定することができる検知可能な色の変化を示す。
【００３６】
【実施例】本発明を実施する方法を、さらに以下の実施
例で示す。
例で示す。
【００３７】実施例１−化合物の製造 ａ． ２，８−ジメトキシ−１０、１１−ジヒドロ−５
Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン（７） 無水メタノ−ル（２５０ml）中の金属ナトリウム（２３
g ；１mol ）の溶液に、ジメチルホルムアミド（ＤＭ
Ｆ）（１２５ml；４Åのモレキュラ−シ−ブ上で乾
燥）、ヨウ化銅（Ｉ）（３８g ；１９９．５mmol）、
２，８−ジブロモ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベ
ンズ［ｂ，ｆ］アゼピン（６）（１７．９g ；５０．７
mmol）を加え［L.Kricka及びA.Ledwitn 、J.Chem.Soc.
Perkin I、859(1973) ］、ついでＤＭＦ（１２５ml）を
追加した。混合物を機械的に撹拌し、加熱し（マント
ル）、一時間還流温度で（内部温度は９２℃）４時間加
熱した。約３５℃まで冷却した後、銅色の混合物をセラ
イト（Johns-Manville Corp., Denver, CO, U.S.A.）を
通して濾過し、濾取したケ−キを酢酸エチル（ＥｔＯＡ
ｃ ;５００ ml）で洗った。合わせた濾液及び洗浄液を
水（２リットル）に混合し、相を分離した。水性相をＥ
ｔＯＡｃ（各回５００ml）によって二回抽出し、ついで
合わせたＥｔＯＡｃ相を、水（５００ml）で一度、塩水
（飽和食塩水；５００ml）で一度洗浄し、ＭｇＳＯ4
（５０ｇ）及びＤａｒｃｏ Ｇ−６０（ICI Americas,I
nc.,Wilmington,DE,U.S.A ；20g ）上で乾燥した。この
溶液を、セライトを通して濾過し、減圧下で濃縮して総
容量４０−５０mlとした。濃縮液を沸騰するまで加熱
し、ヘキサン（約６０ml）で希釈し、一晩放置して周囲
の温度まで冷却すると、表記の化合物（７）（７．０４
g ）が淡褐色の平板状に分離した。母液を第二の収得物
を得るために処理した（１．６８g ；総収量は６７．６
％）。第一の収得物の一部分を蒸着させて（０．１tor
r；１２２−４℃浴）白い平板状の分析試料を得た。 ｍｐ＝１２３−４℃： ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1 3390, 2946, 1510, 1262, 1221, 1
039, 1031, 911, 852,810；1 Ｈ ＮＭＲ（300.12MHz)(DMSO-d6) δ 2.90(s, 4H),
3.64(s, 6H), 6.55-6.65(m, 4H), 6.83(d, J=8.5Hz, 2
H), 7.64(s, 1H) ；13 Ｃ ＮＭＲ（75.47MHz) (DMSO-d6) ppm 151.9, 137.
6, 128.7, 118.7, 115.2, 112.5, 55.2, 34.3； 質量スペクトルm/e 255, 240（ベ−ス）, 225, 209, 19
7, 180, 168 分析結果：Ｃ16Ｈ17ＮＯ2 計算上の含有量：C, 75.27; H, 6.71; N, 5.49 実際の含有量：C, 75.31; H, 6.54; N, 5.40
Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン（７） 無水メタノ−ル（２５０ml）中の金属ナトリウム（２３
g ；１mol ）の溶液に、ジメチルホルムアミド（ＤＭ
Ｆ）（１２５ml；４Åのモレキュラ−シ−ブ上で乾
燥）、ヨウ化銅（Ｉ）（３８g ；１９９．５mmol）、
２，８−ジブロモ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベ
ンズ［ｂ，ｆ］アゼピン（６）（１７．９g ；５０．７
mmol）を加え［L.Kricka及びA.Ledwitn 、J.Chem.Soc.
Perkin I、859(1973) ］、ついでＤＭＦ（１２５ml）を
追加した。混合物を機械的に撹拌し、加熱し（マント
ル）、一時間還流温度で（内部温度は９２℃）４時間加
熱した。約３５℃まで冷却した後、銅色の混合物をセラ
イト（Johns-Manville Corp., Denver, CO, U.S.A.）を
通して濾過し、濾取したケ−キを酢酸エチル（ＥｔＯＡ
ｃ ;５００ ml）で洗った。合わせた濾液及び洗浄液を
水（２リットル）に混合し、相を分離した。水性相をＥ
ｔＯＡｃ（各回５００ml）によって二回抽出し、ついで
合わせたＥｔＯＡｃ相を、水（５００ml）で一度、塩水
（飽和食塩水；５００ml）で一度洗浄し、ＭｇＳＯ4
（５０ｇ）及びＤａｒｃｏ Ｇ−６０（ICI Americas,I
nc.,Wilmington,DE,U.S.A ；20g ）上で乾燥した。この
溶液を、セライトを通して濾過し、減圧下で濃縮して総
容量４０−５０mlとした。濃縮液を沸騰するまで加熱
し、ヘキサン（約６０ml）で希釈し、一晩放置して周囲
の温度まで冷却すると、表記の化合物（７）（７．０４
g ）が淡褐色の平板状に分離した。母液を第二の収得物
を得るために処理した（１．６８g ；総収量は６７．６
％）。第一の収得物の一部分を蒸着させて（０．１tor
r；１２２−４℃浴）白い平板状の分析試料を得た。 ｍｐ＝１２３−４℃： ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1 3390, 2946, 1510, 1262, 1221, 1
039, 1031, 911, 852,810；1 Ｈ ＮＭＲ（300.12MHz)(DMSO-d6) δ 2.90(s, 4H),
3.64(s, 6H), 6.55-6.65(m, 4H), 6.83(d, J=8.5Hz, 2
H), 7.64(s, 1H) ；13 Ｃ ＮＭＲ（75.47MHz) (DMSO-d6) ppm 151.9, 137.
6, 128.7, 118.7, 115.2, 112.5, 55.2, 34.3； 質量スペクトルm/e 255, 240（ベ−ス）, 225, 209, 19
7, 180, 168 分析結果：Ｃ16Ｈ17ＮＯ2 計算上の含有量：C, 75.27; H, 6.71; N, 5.49 実際の含有量：C, 75.31; H, 6.54; N, 5.40
【００３８】ｂ．２，８−ジメトキシ−５Ｈ−ジベンズ
［ｂ，ｆ］アゼピン（８） ２，８−ジメトキシ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジ
ベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン（７）（３．０g ；１１．７
５mmol）及び１０％パラジウムを担持した炭素（３．０
g ）をジフェニルエ−テル（１００ml）中に入れ、２２
０−２２２℃の油浴上で２日間加熱し、その間ＣＯ2 ガ
スの緩やかな流れを混合物中に泡として通過させた。反
応物を冷却し、セライトを通して濾過し、ついでKugelr
ohr の蒸留方法により（０．１torr；１１０−１２０
℃）ジフェニルエ−テルを除去すると橙色の結晶状の残
渣（２．５２g ）が得られた。未反応の化合物（７）を
ＣＨＣｌ3 ／ヘキサン（１：３）の最少量から結晶化す
ることにより除去すると、表記の化合物（８）（０．８
８g ；２９．５％）が綿毛状の黄色の平板状のものとし
て得られた。その一部をＣＨＣｌ3 によりシリカゲルカ
ラム上で展開してクロマトグラムにかけ、ついで上述の
ようにして結晶化してｍｐ＝２０４．５−２０５．５℃
の分析試料を得た。 ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1 3360, 1598, 1500, 1474, 1265, 1
227, 1035, 862, 813;1 Ｈ ＮＭＲ（CDCl3)δ；3.73(s, 6H), 4.77(v. br.
s, 1H), 6.4-6.7(m, 8H) ；13 Ｃ ＮＭＲ (DMSO-d6) ppm 154.6, 143.3, 132.4, 13
0.3, 119.9, 115.3, 114.6, 55.2； 質量スペクトルm/e 253 （ベ−ス）, 238, 210, 167 分析結果：Ｃ16Ｈ15ＮＯ2 計算上の含有量：C, 75.87; H, 5.97; N, 5.53 実際の含有量：C, 76.07; H, 6.31; N, 5.37
［ｂ，ｆ］アゼピン（８） ２，８−ジメトキシ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジ
ベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン（７）（３．０g ；１１．７
５mmol）及び１０％パラジウムを担持した炭素（３．０
g ）をジフェニルエ−テル（１００ml）中に入れ、２２
０−２２２℃の油浴上で２日間加熱し、その間ＣＯ2 ガ
スの緩やかな流れを混合物中に泡として通過させた。反
応物を冷却し、セライトを通して濾過し、ついでKugelr
ohr の蒸留方法により（０．１torr；１１０−１２０
℃）ジフェニルエ−テルを除去すると橙色の結晶状の残
渣（２．５２g ）が得られた。未反応の化合物（７）を
ＣＨＣｌ3 ／ヘキサン（１：３）の最少量から結晶化す
ることにより除去すると、表記の化合物（８）（０．８
８g ；２９．５％）が綿毛状の黄色の平板状のものとし
て得られた。その一部をＣＨＣｌ3 によりシリカゲルカ
ラム上で展開してクロマトグラムにかけ、ついで上述の
ようにして結晶化してｍｐ＝２０４．５−２０５．５℃
の分析試料を得た。 ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1 3360, 1598, 1500, 1474, 1265, 1
227, 1035, 862, 813;1 Ｈ ＮＭＲ（CDCl3)δ；3.73(s, 6H), 4.77(v. br.
s, 1H), 6.4-6.7(m, 8H) ；13 Ｃ ＮＭＲ (DMSO-d6) ppm 154.6, 143.3, 132.4, 13
0.3, 119.9, 115.3, 114.6, 55.2； 質量スペクトルm/e 253 （ベ−ス）, 238, 210, 167 分析結果：Ｃ16Ｈ15ＮＯ2 計算上の含有量：C, 75.87; H, 5.97; N, 5.53 実際の含有量：C, 76.07; H, 6.31; N, 5.37
【００３９】ｃ．８−ヒドロキシ−２Ｈ−ジベンズ
［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オン（１） ＣａＳＯ4 乾燥管中で保持しておいた暖めたＣＨ2 Ｃｌ
2 （２３．５ml、モレキュラーシーブ４Å上で乾燥）中
の、２，８−ジメトキシ−５Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］ア
ゼピン（８）（１．０g ；３．９５mmol）を氷浴中で冷
却し（（８）が細かい懸濁物質として分離してくる）、
ＢＢｒ3 （１．８５ml；１９．６mmol；５eq）で処理し
た。混合物は直後に青色に変り均質になった。５分後に
氷浴を取り除き、周囲温度で３．５時間この反応物を撹
拌した。この混合物を注意深く水（３５０ml）に混合し
（ＨＢｒが発生してくる）、ＥｔＯＡｃ（各回１００m
l）で４回抽出した。ＥｔＯＡｃ層を合せて塩水（１０
０ml）で洗浄し、ついで３口の丸底フラスコに移して、
水（１００ml）にＮａＩＯ4 （３．０g ）を溶解した液
と共に１５分間急速に機械的に撹拌した。この間、反応
物は暗赤褐色に変化し、固体が分離してきた。混合物を
濾過し、集めた固形物を水及びＥｔＯＡｃで十分に洗
い、ついで乾燥して、表記の化合物（１）（０．７６g
；８６％）を得た。その一部を沸騰ＤＭＦから再結晶
させ、ついで１３０℃で減圧乾燥させて、ｍｐ＝２３９
−４１℃（ｄｅｃ）の細かい黒色の針状の分析試料を得
た。 ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1 3475, 1600, 1555, 1538, 1453, 1
340, 1270, 1230, 1115, 885, 895, 795；1 Ｈ ＮＭＲ (DMSO-d6)δ 6.85(br. s, 2H), 6.95-7.
08(m, 4H), 6.66(br.d, J=7.5Hz, 2H) ； 質量スペクトルm/e 223, 195 （ベ−ス）, 178, 166； λmax = 456nm(7,270)（pH=4.98 ；0.1M酢酸塩） λmax = 574nm(70,250) (pH=7.8 ；0.1Mホウ酸塩）； pKa=6.34 分析結果：Ｃ14Ｈ9 ＮＯ2 計算上の含有量：C, 75.32; H, 4.06; N, 6.28 実際の含有量：C, 74.98; H, 4.35; N, 6.54
［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オン（１） ＣａＳＯ4 乾燥管中で保持しておいた暖めたＣＨ2 Ｃｌ
2 （２３．５ml、モレキュラーシーブ４Å上で乾燥）中
の、２，８−ジメトキシ−５Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］ア
ゼピン（８）（１．０g ；３．９５mmol）を氷浴中で冷
却し（（８）が細かい懸濁物質として分離してくる）、
ＢＢｒ3 （１．８５ml；１９．６mmol；５eq）で処理し
た。混合物は直後に青色に変り均質になった。５分後に
氷浴を取り除き、周囲温度で３．５時間この反応物を撹
拌した。この混合物を注意深く水（３５０ml）に混合し
（ＨＢｒが発生してくる）、ＥｔＯＡｃ（各回１００m
l）で４回抽出した。ＥｔＯＡｃ層を合せて塩水（１０
０ml）で洗浄し、ついで３口の丸底フラスコに移して、
水（１００ml）にＮａＩＯ4 （３．０g ）を溶解した液
と共に１５分間急速に機械的に撹拌した。この間、反応
物は暗赤褐色に変化し、固体が分離してきた。混合物を
濾過し、集めた固形物を水及びＥｔＯＡｃで十分に洗
い、ついで乾燥して、表記の化合物（１）（０．７６g
；８６％）を得た。その一部を沸騰ＤＭＦから再結晶
させ、ついで１３０℃で減圧乾燥させて、ｍｐ＝２３９
−４１℃（ｄｅｃ）の細かい黒色の針状の分析試料を得
た。 ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1 3475, 1600, 1555, 1538, 1453, 1
340, 1270, 1230, 1115, 885, 895, 795；1 Ｈ ＮＭＲ (DMSO-d6)δ 6.85(br. s, 2H), 6.95-7.
08(m, 4H), 6.66(br.d, J=7.5Hz, 2H) ； 質量スペクトルm/e 223, 195 （ベ−ス）, 178, 166； λmax = 456nm(7,270)（pH=4.98 ；0.1M酢酸塩） λmax = 574nm(70,250) (pH=7.8 ；0.1Mホウ酸塩）； pKa=6.34 分析結果：Ｃ14Ｈ9 ＮＯ2 計算上の含有量：C, 75.32; H, 4.06; N, 6.28 実際の含有量：C, 74.98; H, 4.35; N, 6.54
【００４０】ｄ．８−ヒドロキシ−１０，１１−ジヒド
ロ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オン
（２） ＣＨ2 Ｃｌ2 （２３．５ml；４Åのモレキュラーシーブ
上で乾燥）に２，８−ジメトキシ−１０，１１−ジヒド
ロ−５Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン（７）（１．０
ｇ；３．９mmol）を溶解した溶液を、ＣａＳＯ4 乾燥管
で保持し、０℃まで冷却してＢＢｒ3 （１．８５ml；１
９．６mmol；５eq）を加えた。５分後、反応物を暖め、
周囲温度で３．７５時間撹拌しつつ放置した。混合物を
注意深く水（３５０ml）に混合し、ついでこれをＥｔＯ
Ａｃ（各１００ml）で４回抽出した。合せたＥｔＯＡｃ
相を塩水（５０ml）で洗浄し、ついで撹拌機械を備えた
３口丸底フラスコに移し、ＮａＩＯ4 （３．０g ）の水
（２００ml）溶液と共に急速に１５分間撹拌した。分離
した層のうち、水性相をＥｔＯＡｃ（２５ml）で洗浄し
た。合せたＥｔＯＡｃ相を水（各１００ml）で４回洗浄
し、ついで合せた水洗浄液をＥｔＡＯｃ（５０ml）で逆
洗した。合せたＥｔＡＯｃ相をついで塩水（１００ml）
で洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥して、減圧下で蒸発乾
固させた。残渣を暖めたＥｔＡＯｃ（約１５０ml）中に
取り込み、沸騰させて約５０mlまで濃縮し、ヘキサン
（２０ml）で稀釈した。これを冷却することにより、表
記の化合物（２）が赤い粉末として分離し、濾過及び６
０℃で一夜減圧乾燥することによって単離した。二度に
わたる抽出のあとの収量は０．８０g （９０％）であっ
た。第一回目の抽出物は分析の結果、純粋なものであっ
て、２００℃以上の温度で分解し、正確な分解点は加熱
の速度に依存した。 ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1 1630, 1612, 1556, 1480, 1463, 1
295, 1222, 1207, 1107, 888, 827 ；1 Ｈ ＮＭＲ (DMSO-d6)δ 2.77(br. s, 4H), 6.2-6.9
(v. br. m, 4H), 7.1-7.5(v. br. m, 2H), 10.43(br.
s, 1H) ；13 Ｃ ＮＭＲ (DMSO-d6) ppm 186.9, 160.6, 160.4, 15
1.5, 146.4, 144.9, 138.4, 137.6, 129.4, 128.2, 11
6.0, 114.9, 33.1, 31.2 ； 質量スペクトルm/e 225（ベ−ス）, 196, 167； λmax = 478nm (19,760) (pH=4.5；0.1M酢酸塩） λmax = 602nm (65,000) (pH=10.61；0.1Mグリシン）； pKa=6.95 分析結果：Ｃ14Ｈ11ＮＯ2 計算上の含有量：C, 74.65; H, 4.92; N, 6.22 実際の含有量：C, 74.54; H, 4.88; N, 5.84
ロ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オン
（２） ＣＨ2 Ｃｌ2 （２３．５ml；４Åのモレキュラーシーブ
上で乾燥）に２，８−ジメトキシ−１０，１１−ジヒド
ロ−５Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン（７）（１．０
ｇ；３．９mmol）を溶解した溶液を、ＣａＳＯ4 乾燥管
で保持し、０℃まで冷却してＢＢｒ3 （１．８５ml；１
９．６mmol；５eq）を加えた。５分後、反応物を暖め、
周囲温度で３．７５時間撹拌しつつ放置した。混合物を
注意深く水（３５０ml）に混合し、ついでこれをＥｔＯ
Ａｃ（各１００ml）で４回抽出した。合せたＥｔＯＡｃ
相を塩水（５０ml）で洗浄し、ついで撹拌機械を備えた
３口丸底フラスコに移し、ＮａＩＯ4 （３．０g ）の水
（２００ml）溶液と共に急速に１５分間撹拌した。分離
した層のうち、水性相をＥｔＯＡｃ（２５ml）で洗浄し
た。合せたＥｔＯＡｃ相を水（各１００ml）で４回洗浄
し、ついで合せた水洗浄液をＥｔＡＯｃ（５０ml）で逆
洗した。合せたＥｔＡＯｃ相をついで塩水（１００ml）
で洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥して、減圧下で蒸発乾
固させた。残渣を暖めたＥｔＡＯｃ（約１５０ml）中に
取り込み、沸騰させて約５０mlまで濃縮し、ヘキサン
（２０ml）で稀釈した。これを冷却することにより、表
記の化合物（２）が赤い粉末として分離し、濾過及び６
０℃で一夜減圧乾燥することによって単離した。二度に
わたる抽出のあとの収量は０．８０g （９０％）であっ
た。第一回目の抽出物は分析の結果、純粋なものであっ
て、２００℃以上の温度で分解し、正確な分解点は加熱
の速度に依存した。 ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1 1630, 1612, 1556, 1480, 1463, 1
295, 1222, 1207, 1107, 888, 827 ；1 Ｈ ＮＭＲ (DMSO-d6)δ 2.77(br. s, 4H), 6.2-6.9
(v. br. m, 4H), 7.1-7.5(v. br. m, 2H), 10.43(br.
s, 1H) ；13 Ｃ ＮＭＲ (DMSO-d6) ppm 186.9, 160.6, 160.4, 15
1.5, 146.4, 144.9, 138.4, 137.6, 129.4, 128.2, 11
6.0, 114.9, 33.1, 31.2 ； 質量スペクトルm/e 225（ベ−ス）, 196, 167； λmax = 478nm (19,760) (pH=4.5；0.1M酢酸塩） λmax = 602nm (65,000) (pH=10.61；0.1Mグリシン）； pKa=6.95 分析結果：Ｃ14Ｈ11ＮＯ2 計算上の含有量：C, 74.65; H, 4.92; N, 6.22 実際の含有量：C, 74.54; H, 4.88; N, 5.84
【００４１】ｅ．８−（テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ
−ガラクトピラノシロキシ）−２Ｈ−ジベンズ−［ｂ，
ｆ］アゼピン−２−オン（１１） 無水キノリン（１８ml）に、８−ヒドロキシ−２Ｈ−ジ
ベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オン（１）（０．５５
８g ；２．５mol ）、アセトブロモガラクト−ス（１．
６４５g ；１．６eq）及び酸化銀（Ｉ）（０．９２７g
；１．６eq）を混合したものを、固く栓をした遮光フ
ラスコ中で１５．３時間撹拌した。反応物をセライトを
通して濾過し、ＥｔＡＯｃ（６０ml）で稀釈し、１．２
５M のＨＣｌ水溶液（各１００ml）で二回抽出した。合
わせたＨＣｌ抽出物をＥｔＯＡｃ（各５０ml）で二回洗
浄し、ついで合わせたＥｔＯＡｃ相を塩水（１００ml）
で洗い、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、濾過して減圧下で蒸
発乾固して赤橙色の泡（２．１０g ）を得た。これをシ
リカゲル（２００g 、５cm ＩＤカラム）上で、クロロ
ホルム中アセトン９％の溶媒を用いてクロマトグラムに
かけ、赤橙色のバンド部分を集めて、溶媒を減圧下で飛
ばして赤いガラス状のもの（１．５１g ）を得た。Ｅｔ
ＡＯｃ／ヘキサンからの結晶化により表記の化合物（１
１）（１．０３g 、７５％）を赤橙色の粉末として得
た。ＥｔＡＯｃ／ヘキサンからの再結晶により、分析試
料を得た。 ｍｐ＝１５１．５−１５２．５℃； ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1 1758, 1630, 1521, 1372, 1225, 1
076 ；1 Ｈ ＮＭＲ (DMSO-d6)δ 7.90(J=9.6Hz, 1H), 7.54
(d, J=9.9Hz, 1H), 7.30-7.36(m, 2H), 7.08(AB, JA=29
Hz 及びJB=12.0Hz, 2H), 6.92 (dd, J1=2.3Hz及びJ2=9.
9Hz, 1H), 6.67(d, J=2.2Hz, 1H), 5.73(d, J=7.4Hz, 1
H), 5.39(br. s,1H), 5.23-5.33(m, 2H), 4.51(t, J=6.
2Hz, 1H), 4.11(d, J=6.3Hz, 2H), 2.16(s, 3H), 2.06
(s, 3H), 2.01(s, 3H), 1.96(s, 3H)；13 Ｃ ＮＭＲ (DMSO-d6) ppm 185.4, 170.0, 169.9, 1
69.6, 169.3, 158.6,151.5, 144.1, 141.0, 139.4, 13
9.2, 135.3, 134.3, 134.0, 133.6, 126.9, 118.8, 97.
0, 70.8, 70.2, 68.2, 67.2, 61.4, 20.5 （余分なバン
ドが３個、一致するバンドが１個） 分析結果：Ｃ20Ｈ27ＮＯ11 計算上の含有量：C, 60.75; H, 4.63; N, 2.53 実際の含有量：C, 60.75; H, 4.98; N, 2.50
−ガラクトピラノシロキシ）−２Ｈ−ジベンズ−［ｂ，
ｆ］アゼピン−２−オン（１１） 無水キノリン（１８ml）に、８−ヒドロキシ−２Ｈ−ジ
ベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オン（１）（０．５５
８g ；２．５mol ）、アセトブロモガラクト−ス（１．
６４５g ；１．６eq）及び酸化銀（Ｉ）（０．９２７g
；１．６eq）を混合したものを、固く栓をした遮光フ
ラスコ中で１５．３時間撹拌した。反応物をセライトを
通して濾過し、ＥｔＡＯｃ（６０ml）で稀釈し、１．２
５M のＨＣｌ水溶液（各１００ml）で二回抽出した。合
わせたＨＣｌ抽出物をＥｔＯＡｃ（各５０ml）で二回洗
浄し、ついで合わせたＥｔＯＡｃ相を塩水（１００ml）
で洗い、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、濾過して減圧下で蒸
発乾固して赤橙色の泡（２．１０g ）を得た。これをシ
リカゲル（２００g 、５cm ＩＤカラム）上で、クロロ
ホルム中アセトン９％の溶媒を用いてクロマトグラムに
かけ、赤橙色のバンド部分を集めて、溶媒を減圧下で飛
ばして赤いガラス状のもの（１．５１g ）を得た。Ｅｔ
ＡＯｃ／ヘキサンからの結晶化により表記の化合物（１
１）（１．０３g 、７５％）を赤橙色の粉末として得
た。ＥｔＡＯｃ／ヘキサンからの再結晶により、分析試
料を得た。 ｍｐ＝１５１．５−１５２．５℃； ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1 1758, 1630, 1521, 1372, 1225, 1
076 ；1 Ｈ ＮＭＲ (DMSO-d6)δ 7.90(J=9.6Hz, 1H), 7.54
(d, J=9.9Hz, 1H), 7.30-7.36(m, 2H), 7.08(AB, JA=29
Hz 及びJB=12.0Hz, 2H), 6.92 (dd, J1=2.3Hz及びJ2=9.
9Hz, 1H), 6.67(d, J=2.2Hz, 1H), 5.73(d, J=7.4Hz, 1
H), 5.39(br. s,1H), 5.23-5.33(m, 2H), 4.51(t, J=6.
2Hz, 1H), 4.11(d, J=6.3Hz, 2H), 2.16(s, 3H), 2.06
(s, 3H), 2.01(s, 3H), 1.96(s, 3H)；13 Ｃ ＮＭＲ (DMSO-d6) ppm 185.4, 170.0, 169.9, 1
69.6, 169.3, 158.6,151.5, 144.1, 141.0, 139.4, 13
9.2, 135.3, 134.3, 134.0, 133.6, 126.9, 118.8, 97.
0, 70.8, 70.2, 68.2, 67.2, 61.4, 20.5 （余分なバン
ドが３個、一致するバンドが１個） 分析結果：Ｃ20Ｈ27ＮＯ11 計算上の含有量：C, 60.75; H, 4.63; N, 2.53 実際の含有量：C, 60.75; H, 4.98; N, 2.50
【００４２】ｆ．８−（β−Ｄ−ガラクトピラノシロキ
シ）−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オン
（３） 無水メタノ−ルに８−（テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ
−ガラクトピラノシロキシ）−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，
ｆ］アゼピン−２−オン（１１）（１．１２g ；２．０
２mmol）を溶解した溶液を５５℃浴中で暖め、ナトリウ
ムメトキシド（５０mg）を加え、アルゴン雰囲気下で
１．３時間撹拌した。この間、固体が分離してきた。減
圧下で溶媒をとばし、残渣を熱いＤＭＦ／ＥｔＯＨ
（５：１）から再結晶した。表記の化合物（３）（０．
４９８g ；６３％）が二度の再結晶でレンガ色のウール
状の物質として得られた。分解点は２３０℃以上であっ
た。最初に得られたものを１３０℃で６時間減圧乾燥
し、分析試料とした： ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1 3416, 3269, 2884, 1632, 1607, 1
574, 1540, 1503, 1347, 1267, 1234, 1083, 1032, 89
5；1 Ｈ ＮＭＲ (DMSO-d6)δ 7.87(d, J=9.6Hz, 1H), 7.
57(d, J=10.0Hz, 1H),7.34-7.41(m, 2H), 7.10(AB, JA=
31.9Hz 及び JB=12.0Hz, 2H), 6.92(dd, J1=1.7Hz及びJ
2=9.5Hz, 1H), 6.67(J=1.9Hz, 1H), 5.29(v. br. s, 1
H), 5.08(d, J=7.6Hz, 1H), 4.45-5.00(v. br. m, 2H),
3.40-3.76(m, 7H) ；13 Ｃ ＮＭＲ (DMSO-d6) ppm 185.3, 160.2, 144.0, 14
0.3, 139.5, 139.1, 135.6, 134.2, 133.7, 133.3, 12
6.5, 119.2, 118.5, 100.6, 75.8, 73.3, 70.2,68.1, 6
0.3) 分析結果：Ｃ20Ｈ19ＮＯ7 計算上の含有量：C, 62.33; H, 4.97; N, 3.64 実際の含有量：C, 62.53; H, 5.13; N, 3.73
シ）−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オン
（３） 無水メタノ−ルに８−（テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ
−ガラクトピラノシロキシ）−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，
ｆ］アゼピン−２−オン（１１）（１．１２g ；２．０
２mmol）を溶解した溶液を５５℃浴中で暖め、ナトリウ
ムメトキシド（５０mg）を加え、アルゴン雰囲気下で
１．３時間撹拌した。この間、固体が分離してきた。減
圧下で溶媒をとばし、残渣を熱いＤＭＦ／ＥｔＯＨ
（５：１）から再結晶した。表記の化合物（３）（０．
４９８g ；６３％）が二度の再結晶でレンガ色のウール
状の物質として得られた。分解点は２３０℃以上であっ
た。最初に得られたものを１３０℃で６時間減圧乾燥
し、分析試料とした： ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1 3416, 3269, 2884, 1632, 1607, 1
574, 1540, 1503, 1347, 1267, 1234, 1083, 1032, 89
5；1 Ｈ ＮＭＲ (DMSO-d6)δ 7.87(d, J=9.6Hz, 1H), 7.
57(d, J=10.0Hz, 1H),7.34-7.41(m, 2H), 7.10(AB, JA=
31.9Hz 及び JB=12.0Hz, 2H), 6.92(dd, J1=1.7Hz及びJ
2=9.5Hz, 1H), 6.67(J=1.9Hz, 1H), 5.29(v. br. s, 1
H), 5.08(d, J=7.6Hz, 1H), 4.45-5.00(v. br. m, 2H),
3.40-3.76(m, 7H) ；13 Ｃ ＮＭＲ (DMSO-d6) ppm 185.3, 160.2, 144.0, 14
0.3, 139.5, 139.1, 135.6, 134.2, 133.7, 133.3, 12
6.5, 119.2, 118.5, 100.6, 75.8, 73.3, 70.2,68.1, 6
0.3) 分析結果：Ｃ20Ｈ19ＮＯ7 計算上の含有量：C, 62.33; H, 4.97; N, 3.64 実際の含有量：C, 62.53; H, 5.13; N, 3.73
【００４３】ｇ． ８−（テトラ−Ｏ−アセチル−β−
Ｄ−ガラクトピラノシロキシ）−１０，１１−ジヒドロ
−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２ーオン（１
２） 無水キノリン（７．５ml）中の８−ヒドロキシ−１０，
１１−ジヒドロ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−
２−オン（２）（０．２２５２g ；１．０mmol）、アセ
トブロモガラクト−ス（０．６５７９g ；１．６eq）及
び酸化銀（Ｉ）（０．３７０８g ；１．６eq）の混合物
を、固く栓をした遮光フラスコ中で２２．５時間撹拌し
た。反応物をセライトを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（１
００ml）で希釈して１．０M 塩酸水溶液（各１００ml）
で二回抽出した。ＨＣｌ抽出物を合せてＥｔＯＡｃ（２
０ml）で洗浄し、ついで合せたＥｔＯＡｃ相を塩水（５
０ml）で洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、濾過し、減
圧下で蒸発乾固して赤橙色のタ−ル状のものを（０．８
２g ）得た。これをシリカゲル（７５g ；３cm ＩＤカ
ラム）上で１３％のクロロホルム中エチルエ−テル（Ｅ
ｔ2 Ｏ）溶媒を用いてクロマトグラフィ−を行って、赤
橙色の生成物のバンドを集め、減圧下で溶媒を蒸発乾固
し、橙色の泡（０．５４g ）を得、これをＥｔＯＡｃ／
ヘキサン（１：１）から結晶化した。表記の化合物（１
２）（０．４５g ；８５％）が二度の処理によって橙色
のウ−ル状の物質として得られた。 ｍｐ＝１３７−８℃： ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1 1754, 1641, 1615, 1510, 1371, 1
230, 1077 ；1 Ｈ ＮＭＲ (CDCl3)δ 7.58(d, J=8.75Hz, 1H), 7.2
6(d, J=9.9Hz, 1H), 6.97(dd, J1=2.8Hz及び J2=8.75H
z, 1H), 6.80(d, J=2.8Hz, 1H), 6.59 (dd, J1=2.2Hz
及び J2=9.9Hz, 1H), 6.27(d, J=2.1Hz 1H), 5.47-5.55
(m, 2H), 5.10-5.18(m, 2H), 4.09-4.30(m, 3H),；13 Ｃ ＮＭＲ (DMSO-d6) ppm 187.0, 170.0, 169.9, 16
9.6, 169.3, 157.4, 153.3, 146.2, 145.0, 141.3, 13
8.0, 136.2, 130.2, 128.8, 116.6, 114.8, 97.0, 70.
6, 70.2, 68.2, 67.3, 61.5, 33.2, 30.8, 20.5 （３つ
の一致するバンド） 分析結果：Ｃ28Ｈ29ＮＯ11 計算上の含有量：C, 60.53; H, 5.26; N, 2.52 実際の含有量：C, 60.16; H, 5.36; N, 2.62
Ｄ−ガラクトピラノシロキシ）−１０，１１−ジヒドロ
−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２ーオン（１
２） 無水キノリン（７．５ml）中の８−ヒドロキシ−１０，
１１−ジヒドロ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−
２−オン（２）（０．２２５２g ；１．０mmol）、アセ
トブロモガラクト−ス（０．６５７９g ；１．６eq）及
び酸化銀（Ｉ）（０．３７０８g ；１．６eq）の混合物
を、固く栓をした遮光フラスコ中で２２．５時間撹拌し
た。反応物をセライトを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（１
００ml）で希釈して１．０M 塩酸水溶液（各１００ml）
で二回抽出した。ＨＣｌ抽出物を合せてＥｔＯＡｃ（２
０ml）で洗浄し、ついで合せたＥｔＯＡｃ相を塩水（５
０ml）で洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、濾過し、減
圧下で蒸発乾固して赤橙色のタ−ル状のものを（０．８
２g ）得た。これをシリカゲル（７５g ；３cm ＩＤカ
ラム）上で１３％のクロロホルム中エチルエ−テル（Ｅ
ｔ2 Ｏ）溶媒を用いてクロマトグラフィ−を行って、赤
橙色の生成物のバンドを集め、減圧下で溶媒を蒸発乾固
し、橙色の泡（０．５４g ）を得、これをＥｔＯＡｃ／
ヘキサン（１：１）から結晶化した。表記の化合物（１
２）（０．４５g ；８５％）が二度の処理によって橙色
のウ−ル状の物質として得られた。 ｍｐ＝１３７−８℃： ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1 1754, 1641, 1615, 1510, 1371, 1
230, 1077 ；1 Ｈ ＮＭＲ (CDCl3)δ 7.58(d, J=8.75Hz, 1H), 7.2
6(d, J=9.9Hz, 1H), 6.97(dd, J1=2.8Hz及び J2=8.75H
z, 1H), 6.80(d, J=2.8Hz, 1H), 6.59 (dd, J1=2.2Hz
及び J2=9.9Hz, 1H), 6.27(d, J=2.1Hz 1H), 5.47-5.55
(m, 2H), 5.10-5.18(m, 2H), 4.09-4.30(m, 3H),；13 Ｃ ＮＭＲ (DMSO-d6) ppm 187.0, 170.0, 169.9, 16
9.6, 169.3, 157.4, 153.3, 146.2, 145.0, 141.3, 13
8.0, 136.2, 130.2, 128.8, 116.6, 114.8, 97.0, 70.
6, 70.2, 68.2, 67.3, 61.5, 33.2, 30.8, 20.5 （３つ
の一致するバンド） 分析結果：Ｃ28Ｈ29ＮＯ11 計算上の含有量：C, 60.53; H, 5.26; N, 2.52 実際の含有量：C, 60.16; H, 5.36; N, 2.62
【００４４】ｈ．８−（β−Ｄ−ガラクトピラノシロキ
シ）−１０，１１−ジヒドロ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，
ｆ］アゼピン−２−オン（４） 無水メタノール（２７．５ml）中に８−（テトラ−Ｏ−
アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシロキシ）−１０，
１１−ジヒドロ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−
２−オン（１２）（０．３８g ；０．６９mmol）を溶解
した溶液にナトリウムメトキシド（１７．７mg）を加
え、５０℃の浴中で１時間、アルゴン雰囲気下で撹拌し
た。この間、固形物が分離してきた。反応物を氷で冷却
し、氷酢酸（２２μl ）で中和し、１時間放置した。固
形物を濾過し、氷冷したメタノールで二回洗い、ついで
減圧乾燥して、分析的に純粋な表記の化合物（４）
（０．２１６g ；８１％）を橙色の粉末として得、これ
は２２０℃を越える温度で分解した。 ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1 3330, 2910, 1640, 1605, 1500, 1
315, 1255, 1230, 1085, 887；1 Ｈ ＮＭＲ (DMSO-d6)δ 7.52(d, J=8.7Hz, 1H), 7.
25(d, J=9.9Hz, 1H),7.03 (dd, J1=2.8Hz及びJ2=8.7Hz,
1H), 6.95(d, J=2.8Hz, 1H), 6.54 (dd, J1=2.3Hz及
び J2=9.9Hz, 1H), 6.32(d, J=2.3Hz, 1H), 5.19(d, J=
5.2Hz, 1H), 4.93(d, J=7.7Hz, 1H), 4.88(d, J=5.7Hz,
1H), 4.66(t, J=5.4Hz, 1H), 4.52(d,J=4.6Hz, 1H),
3.70(br. t. J=3.8Hz, 1H), 3.37-3.66(m, 5H), 2.74-
2.91(br.m, 4H)；13 Ｃ ＮＭＲ (DMSO-d6) ppm 187.0, 159.0, 152.7, 14
6.3, 145.0, 140.6, 137.8, 136.4, 129.9, 128.6, 11
6.6, 115.0, 100.7, 75.7, 73.3, 70.2, 68.2,60.4, 3
3.3, 31.0； Ｃ20Ｈ21ＮＯ7 計算上の含有量：C, 62.01; H, 5.46; N, 3.62 実際の含有量：C, 61.76; H, 5.32; N, 3.51
シ）−１０，１１−ジヒドロ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，
ｆ］アゼピン−２−オン（４） 無水メタノール（２７．５ml）中に８−（テトラ−Ｏ−
アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシロキシ）−１０，
１１−ジヒドロ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−
２−オン（１２）（０．３８g ；０．６９mmol）を溶解
した溶液にナトリウムメトキシド（１７．７mg）を加
え、５０℃の浴中で１時間、アルゴン雰囲気下で撹拌し
た。この間、固形物が分離してきた。反応物を氷で冷却
し、氷酢酸（２２μl ）で中和し、１時間放置した。固
形物を濾過し、氷冷したメタノールで二回洗い、ついで
減圧乾燥して、分析的に純粋な表記の化合物（４）
（０．２１６g ；８１％）を橙色の粉末として得、これ
は２２０℃を越える温度で分解した。 ＩＲ（ＫＢｒ）cm-1 3330, 2910, 1640, 1605, 1500, 1
315, 1255, 1230, 1085, 887；1 Ｈ ＮＭＲ (DMSO-d6)δ 7.52(d, J=8.7Hz, 1H), 7.
25(d, J=9.9Hz, 1H),7.03 (dd, J1=2.8Hz及びJ2=8.7Hz,
1H), 6.95(d, J=2.8Hz, 1H), 6.54 (dd, J1=2.3Hz及
び J2=9.9Hz, 1H), 6.32(d, J=2.3Hz, 1H), 5.19(d, J=
5.2Hz, 1H), 4.93(d, J=7.7Hz, 1H), 4.88(d, J=5.7Hz,
1H), 4.66(t, J=5.4Hz, 1H), 4.52(d,J=4.6Hz, 1H),
3.70(br. t. J=3.8Hz, 1H), 3.37-3.66(m, 5H), 2.74-
2.91(br.m, 4H)；13 Ｃ ＮＭＲ (DMSO-d6) ppm 187.0, 159.0, 152.7, 14
6.3, 145.0, 140.6, 137.8, 136.4, 129.9, 128.6, 11
6.6, 115.0, 100.7, 75.7, 73.3, 70.2, 68.2,60.4, 3
3.3, 31.0； Ｃ20Ｈ21ＮＯ7 計算上の含有量：C, 62.01; H, 5.46; N, 3.62 実際の含有量：C, 61.76; H, 5.32; N, 3.51
【００４５】実施例２ 物質の評価 化合物４はβ−ガラクトシダ−ゼの基質であって、ミハ
エリス−メンテン動力学を示した。ｐＨ７．４の５０mM
燐酸緩衝液（マグネシウムを含有しない）中の化合物４
の溶液は、β−ガラクトシダ−ゼの存在下で加水分解さ
れて７．０７ｘ１０3 mol. min-1/mol活性部分の速度
（Ｋcat ）で化合物２となり、０．０９６mMのKmを示し
た。
エリス−メンテン動力学を示した。ｐＨ７．４の５０mM
燐酸緩衝液（マグネシウムを含有しない）中の化合物４
の溶液は、β−ガラクトシダ−ゼの存在下で加水分解さ
れて７．０７ｘ１０3 mol. min-1/mol活性部分の速度
（Ｋcat ）で化合物２となり、０．０９６mMのKmを示し
た。
【００４６】化合物３もまた、β−ガラクトシダ−ゼの
基質であって、この酵素に感受性のある試験器具を製造
した。この器具は小さな長方形のポリスチレンフィルム
片の一端に載せた小さな長方形の濾紙片からなる。この
紙を化合物３、緩衝液及び無機塩を含む種々の成分で含
浸した。ワットマンCCP500濾紙の２インチ幅の紙片を以
下の組成を有する水溶液に浸漬した。 ０．３M バイシン緩衝液 ｐＨ＝７．４ ４．０mM ＭｇＣｌ2 この紙を乾燥し、ついで５．０mMの化合物３を含有する
ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液に浸漬した。この
紙を再度乾燥してサ−モン色の試験紙を得た。この含浸
され乾燥した紙を０．２インチｘ０．４インチの長方形
に切り分け、両面テ−プを用いて軸方向を向いた０．２
インチｘ３．２５インチのポリスチレン片の一端上に接
着した。
基質であって、この酵素に感受性のある試験器具を製造
した。この器具は小さな長方形のポリスチレンフィルム
片の一端に載せた小さな長方形の濾紙片からなる。この
紙を化合物３、緩衝液及び無機塩を含む種々の成分で含
浸した。ワットマンCCP500濾紙の２インチ幅の紙片を以
下の組成を有する水溶液に浸漬した。 ０．３M バイシン緩衝液 ｐＨ＝７．４ ４．０mM ＭｇＣｌ2 この紙を乾燥し、ついで５．０mMの化合物３を含有する
ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液に浸漬した。この
紙を再度乾燥してサ−モン色の試験紙を得た。この含浸
され乾燥した紙を０．２インチｘ０．４インチの長方形
に切り分け、両面テ−プを用いて軸方向を向いた０．２
インチｘ３．２５インチのポリスチレン片の一端上に接
着した。
【００４７】この試験紙を種々の濃度のβ−ガラクトシ
ダ−ゼを含有するいくつかの水溶液に浸した。これらの
紙片をセラライザ− (Seralyzer ：商品名）反射光度計
で７５０nmで４０−６０秒後に読み取りした。反射率の
デ−タ対酵素濃度は１ミリリットル当たりβ−ガラクト
シダ−ゼ０．０−０．１５単位の酵素濃度の範囲にわた
って直線的な用量反応関係を示した。
ダ−ゼを含有するいくつかの水溶液に浸した。これらの
紙片をセラライザ− (Seralyzer ：商品名）反射光度計
で７５０nmで４０−６０秒後に読み取りした。反射率の
デ−タ対酵素濃度は１ミリリットル当たりβ−ガラクト
シダ−ゼ０．０−０．１５単位の酵素濃度の範囲にわた
って直線的な用量反応関係を示した。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 21/78 Ｚ 7906−2Ｊ
Claims (13)
- 【請求項１】 次式： 【化１】 （式中、ＸはＣＨ2 ＣＨ2 又はＣＨ＝ＣＨであり、Ｙは
Ｈであるか又は酵素によって切断されうる基である）で
示される２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オン
をベ−スとする化合物。 - 【請求項２】 Ｙが、酵素により切断されうる基であっ
て、対応する特定の酵素に対する特異性を付与するよう
に選択される請求項１記載の化合物。 - 【請求項３】 Ｙが、糖又はその誘導体の残基、アシル
基、あるいはアミノ酸の残基、ペプチドの残基又は無機
酸の残基である請求項２記載の化合物。 - 【請求項４】 アシル基が、脂肪族又は芳香族カルボン
酸から誘導されるアシル基である請求項３記載の化合
物。 - 【請求項５】 Ｙが、Ｎが保護されたアミノ酸の残基で
ある、請求項３記載の化合物。 - 【請求項６】 Ｎが保護されたアミノ酸が、Ｎ−トシル
−Ｌ−アラニンである請求項５記載の化合物。 - 【請求項７】 ペプチドが、２から５個のアミノ酸単位
を有するペプチドである請求項３記載の化合物。 - 【請求項８】 無機酸が、リン酸又は硫酸である請求項
３記載の化合物。 - 【請求項９】 糖が、グリコシド性の基を有する糖であ
る請求項３記載の化合物。 - 【請求項１０】 グリコシド性の基が、β−Ｄ−ガラク
トピラノ−ス、α−Ｄ−ガラクトピラノ−ス、β−Ｄ−
グルコピラノ−ス、α−Ｄ−グルコピラノ−ス、α−Ｄ
−マンノピラノ−ス、Ｎ−アセチルグルコサミン又はＮ
−アセチルノイラミン酸から誘導される基である請求項
９記載の化合物。 - 【請求項１１】 Ｙが、約２から２０個のモノサッカラ
イド単位を有するオリゴサッカライドから誘導される基
である請求項９記載の化合物。 - 【請求項１２】 次式： 【化２】 （式中、ＸはＣＨ2 ＣＨ2 又はＣＨ＝ＣＨであり、Ｙは
Ｈであるか又は酵素によって切断されうる基である）に
よって特徴づけられる色原性酵素基質化合物が含浸され
ているキャリアマトリックスを含む分析試験器具。 - 【請求項１３】 次式： 【化３】 （式中、ＸはＣＨ2 ＣＨ2 又はＣＨ＝ＣＨであり、Ｙは
Ｈであるか又は酵素によって切断されうる基である）に
よって特徴づけられる色原性酵素基質化合物を溶液に接
触させて、それによりＹ基を切断せしめてこの色原性酵
素基質中に検出可能な応答を起こさせることからなる、
溶液中の酵素を検出する方法。
Applications Claiming Priority (2)
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|---|---|---|---|
| US789317 | 1991-11-08 | ||
| US07/789,317 US5208326A (en) | 1991-11-08 | 1991-11-08 | 8-hydroxy-2h-dibenz(b,f)azepin-2-one dyes |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05294939A true JPH05294939A (ja) | 1993-11-09 |
| JP3262868B2 JP3262868B2 (ja) | 2002-03-04 |
Family
ID=25147273
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP32138692A Expired - Fee Related JP3262868B2 (ja) | 1991-11-08 | 1992-11-06 | ８−ヒドロキシ−２Ｈ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゼピン−２−オン系染料 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5208326A (ja) |
| EP (1) | EP0542019B1 (ja) |
| JP (1) | JP3262868B2 (ja) |
| AU (1) | AU644753B2 (ja) |
| CA (1) | CA2081867A1 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4124704A (en) * | 1976-09-20 | 1978-11-07 | Riker Laboratories, Inc. | 2-Nitro-3-phenylbenzofuran alkanoic (or propenoic) acids |
| DE3106815A1 (de) * | 1981-02-24 | 1982-09-09 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | "chemische verbindungen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als antigene oder immunadsorbentien" |
| JPS58994A (ja) * | 1981-03-17 | 1983-01-06 | Shionogi & Co Ltd | 新規Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミン誘導体およびこれを基質として用いるＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダ−ゼ活性測定法 |
| EP0108715A1 (de) * | 1982-10-15 | 1984-05-16 | Ciba-Geigy Ag | Dibenzazepincarboxamide |
| DE3411997A1 (de) * | 1984-03-31 | 1985-10-17 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Neue redox-indikatoren |
| DE3412939A1 (de) * | 1984-04-06 | 1985-10-17 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Substrate fuer hydrolasen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| GB8426584D0 (en) * | 1984-10-19 | 1984-11-28 | Beecham Group Plc | Compounds |
| US5081131A (en) * | 1986-01-13 | 1992-01-14 | American Cyanamid Company | Omega-((hetero)alkyl)benz(cd)-indol-2-amines |
| US4810636A (en) * | 1986-12-09 | 1989-03-07 | Miles Inc. | Chromogenic acridinone enzyme substrates |
| DE3710937A1 (de) * | 1987-04-01 | 1988-10-13 | Boehringer Mannheim Gmbh | Chromogene verbindungen, ihre herstellung und verwendung als enzymsubstrate |
| US5104980A (en) * | 1989-06-12 | 1992-04-14 | Miles Inc. | Chromogenic dibenzoxazepinone and dibenzothiazepinone enzyme substrates |
| US5079247A (en) * | 1990-03-14 | 1992-01-07 | American Cyanamid Company | N1 -substituted benz(cd)indol-2-imine compounds as cardiovascular agents |
-
1991
- 1991-11-08 US US07/789,317 patent/US5208326A/en not_active Expired - Fee Related
-
1992
- 1992-10-26 EP EP92118291A patent/EP0542019B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-26 DE DE69212772T patent/DE69212772T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1992-10-29 AU AU27432/92A patent/AU644753B2/en not_active Ceased
- 1992-10-30 CA CA002081867A patent/CA2081867A1/en not_active Abandoned
- 1992-11-06 JP JP32138692A patent/JP3262868B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| DE69212772T2 (de) | 1996-12-19 |
| DE69212772D1 (de) | 1996-09-19 |
| AU644753B2 (en) | 1993-12-16 |
| JP3262868B2 (ja) | 2002-03-04 |
| US5208326A (en) | 1993-05-04 |
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| AU2743292A (en) | 1993-05-13 |
| CA2081867A1 (en) | 1993-05-09 |
| EP0542019A1 (en) | 1993-05-19 |
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