JPH05268946A - ザントモナス・カンペストリス新菌株及びそれを有効成分として含有するスズメノカタビラ防除剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 ゴルフ場のパッティンググリーン、公園の芝
生等の人為的に管理された緑地に生育する強害雑草スズ
メノカタビラの防除に有効な植物病原細菌の新菌株を提
供すること及び該菌株を有効成分として含有するスズメ
ノカタビラ防除剤を提供すること。 【構成】 スズメノカタビラに病原性を有するザントモ
ナス・カンペストリス及びこれを有効成分とするスズメ
ノカタビラ防除剤を提供した。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はゴルフ場のパッティング
グリーン、公園の芝生、庭園あるいはラグビー場等の運
動競技場にみられる人為的に管理された芝地に生育する
強害雑草スズメノカタビラ（Ｐｏａ ａｎｎｕａ）の防
除に有効な植物病原細菌ザントモナス・カンペストリス
（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）菌
の新菌株及びこれを有効成分として含有するスズメノカ
タビラ防除剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】芝生地ではその性格上、雑草が周年、繰
り返し発生するので刈り込み、手取り除草さらに農耕地
で行われているような耕種的な手段では広大な面積をた
えず完全に除草することはできない。特に、ゴルフ場で
はティーグランド、フェアウェー、ラフ、パッティング
グリーンのようにさまざまな地形を有する緑地ではそれ
ぞれの地形に適した多種多様な雑草が発生する。

【０００３】スズメノカタビラは秋から翌春ないし、初
夏にかけて芝生地に発生し、刈り取りに強く、地面に横
に広がって育つうえに群がって成長するため芝生の生育
に著しい影響をおよぼす芝生地における強害雑草であ
る。化学除草剤による防除は芝草に薬害が生じないよう
にするため発芽前〜発芽初期にしか行えず、成長したス
ズメノカタビラに対する有効な薬剤はこれまでに開発さ
れていない。

【０００４】一方、化学農薬の使用は近年、人畜に対す
る安全性、残留性、環境破壊の点で問題となっており、
化学農薬に頼らない雑草の防除剤とその利用法の開発が
望まれている。これまでのところ微生物の代謝産物を利
用した非選択性の非農耕地用の除草剤および、雑草の病
原菌を成分とする農耕地用に除草剤が開発されているの
みである。微生物除草剤の特徴は自然界に存在する微生
物自体、あるいはその代謝物の作用によって雑草を防除
するものであり、化学的に合成された薬剤に比較して環
境におよぼす影響が少ないことである。

【０００５】芝地を対象とした微生物除草剤として、ザ
ントモナス・カンペストリスを用いる雑草イネ科植物の
抑制法（特願昭６３−５０２４３８）が知られている
が、同菌（ＮＲＲＬ−Ｂ−１８０７８）による顕著なス
ズメノカタビラの生育抑制は２８〜３０℃という温度条
件に加え、接種直後に過湿処理（相対湿度１００％、連
続４８時間）を行うことによって実現されたものであ
る。すなわち、この従来技術では、高い抑制効果を得る
ためには接種直後の過湿処理によって雑草植物への感染
を成立させた後、一定期間の高温条件を必要とする。し
かしながら、スズメノカタビラが発生する秋から翌春な
いし、初夏の時期における最高気温が２５℃を超えるこ
とは少なく、また、相対湿度１００％の環境が野外で４
８時間連続することはありまれである。従って、前記従
来技術を用いて芝地雑草の防除を行なうことは現実的に
不可能である。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明は前記従来技術
の課題を解決し、芝生地に発生する雑草スズメノカタビ
ラの効果的な防除手段を提供するものである。すなわ
ち、本発明の目的は、ゴルフ場のパッティンググリー
ン、公園の芝生等の人為的に管理された緑地に生育する
強害雑草スズメノカタビラの防除に有効な植物病原細菌
の新菌株を提供すること及び該菌株を有効成分として含
有するスズメノカタビラ防除剤を提供することである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】有用芝生には全く薬害を
与えず雑草であるスズメノカタビラにのみ殺草あるいは
生育抑制効果を持つ雑草防除剤、雑草防除方法を研究す
るために、本願発明者らは植物病原菌の持つ宿主特異性
に着目し、スズメノカタビラの病原細菌の探索を行っ
た。さらに、萎凋病を起こす細菌が宿主植物に感染侵入
後は宿主植物の導管内に定着、増殖することに着目し、
採集された植物の組織内部から様々な細菌を分離し、さ
らに、それら分離細菌の中からスズメノカタビラに対し
てのみ病原性を持つザントモナス・カンペストリスを分
離した。本菌の選抜に当たっては、、スズメノカタビラ
が野外で発生する期間の気候条件に近い環境条件に（温
度２０−２５℃、相対湿度６０％）に調節した温室内で
接種試験を行なった。さらに、ゴルフ場で栽培される主
要な芝草、およびイネに代表されるイネ科作物に対する
病原性についても詳しく検討した。その結果、(1) 接種
後４８時間の９５−１００％の相対湿度を必要とせず、
(2) 幅広い温度適性を持つ。スズメノカタビラに対し萎
凋症状に加え、本菌の代謝産物によると思われる黄化症
状を引き起こす。(3) 有用芝生にウインターバッチ病を
起こす病原糸状菌リゾクトニア・ソラニ（Rhizoctnia s
olani)に対し抗糸状菌活性を示す。さらに、(4) ゴルフ
場における主要な芝草に対して病原性を持たないという
点で、高い性能を有するザントモナス・カンペストリス
の新菌株を発見し、本発明を完成するに至った。

【０００８】すなわち、本発明は、スズメノカタビラに
病原性を有するザントモナス・カンペストリスを提供す
る。また、本発明は、ザントモナス・カンペストリスを
有効成分として含有するスズメノカタビラ防除剤を提供
する。

【０００９】本発明の菌株は、上述のように、また下記
実施例において詳述するように、スズメノカタビラの葉
及び茎からスクリーニングにより分離されたものであ
る。

【００１０】本発明の菌株は、下記に詳述した菌学的性
質及び理由からＸａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓ
ｔｒｉｓの新菌株と同定された。

【００１１】本発明の菌株の１つであるザントモナス・
カンペストリスＰ−１９２菌株は、工業技術院微生物工
業技術研究所（微工研）に微工研菌寄第１２６１３号と
して寄託されている。

【００１２】本発明の菌株は、下記実施例に示す種々の
培地で生育可能であり、例えば、普通寒天培地（Ｎｕｔ
ｒｉｅｎｔ ａｇａｒ）上で２８℃で培養した後、普通
培地（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｂｒｏｔｈ）に接種し、２８
℃で振盪培養することによりよく増殖させることができ
る。

【００１３】本発明のスズメノカタビラ防除剤は、前記
本発明のザントモナス・カンペストリスを有効成分とし
て含むものである。該菌株の生菌を含むものであれば、
該菌株細胞の懸濁液であっても、培養液であってもよ
い。防除剤中のＰ−１９２菌株の濃度は、特に限定され
ないが１０⁵ ないし１０¹⁰ｃｆｕ／ｍｌが好ましく、さ
らには１０⁸ ないし１０¹⁰ｃｆｕ／ｍｌ程度が好まし
い。

【００１４】本発明のスズメノカタビラ防除剤は、スズ
メノカタビラの発芽前及び発芽後のいずれの生育段階に
おいてもスズメノカタビラに対して防除効果を発揮す
る。散布量は、防除剤中の菌株濃度及びスズメノカタビ
ラの生育段階に応じて適宜選択されるが、例えば、防除
剤中の菌株濃度が１０⁹ ｃｆｕ／ｍｌであり、生育した
スズメノカタビラを防除する場合には、１ｍ² 当り０．
３４リットル程度で十分な防除効果を与えることができ
る。スズメノカタビラが発芽前や生育途中である場合に
は、これより少ない量で防除効果が得られる。

【００１５】

【実施例】実施例１ １ 病原細菌の分離方法 ゴルフ場あるいは公園等に生育するスズメノカタビラ
（Poa annua)を採集し、損傷組織を除いて得られた植物
標本から長さ１ｃｍの葉あるいは茎の切片を作製し、７
０％エタノール水溶液に１分間浸漬してから殺菌蒸留水
で洗浄することにより表面殺菌を行った。表面殺菌した
切片は２００μｌの殺菌蒸留水中で磨砕された後、普通
寒天培地（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ ａｇａｒ）上に画線さ
れ、２８℃の恒温器内で培養された。以上の操作によっ
て植物内部に存在する細菌のみを分離することができ
る。

【００１６】培養期間中に寒天培地上に現われた多数の
コロニーの中からザントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａ
ｓ）属菌に類似するコロニーを選抜し、それらを少量の
殺菌蒸留水に懸濁した。この細菌懸濁液に７０％エタノ
ールおよび火炎殺菌したハサミを浸漬し、温室内でおよ
そ１カ月間育苗したスズメノカタビラの葉先を切断する
ことにより植物体中に接種してそれらの病原性を検定し
た。その結果、１０都道府県、２２箇所からｐ−１９２
菌に代表されるスズメノカタビラ病原菌５８菌株が分離
された。分離されたスズメノカタビラ病原菌を表１に示
した。

【００１７】

【表１】 表１ 分離したザントモナス属菌に類似した細菌のスズメノカタビラに対する病 原性 ─────────────────────────────────── 分離菌株 病原力 ─────────────────────────────────── Ｐ−１９２ ＋＋＋ Ｐ−１９５ ＋＋＋ Ｐ−１９６ ＋＋＋ Ｐ−１９７ ＋＋＋ Ｐ−２７５ ＋＋＋ Ｐ−３２８ ＋＋＋ Ｐ−３２９ ＋＋＋ Ｐ−３３０ ＋＋＋ Ｐ−３３１ ＋＋＋ Ｐ−３３２ ＋＋＋ Ｐ−３３３ ＋＋＋ Ｐ−３３４ ＋＋＋ Ｐ−３３５ ＋＋＋ Ｐ−３３６ ＋＋＋ Ｐ−３３７ ＋＋＋ Ｐ−３３８ ＋＋＋ Ｐ−３３９ ＋＋＋ Ｐ−３４０ ＋＋＋ Ｐ−３４１ ＋＋＋ Ｐ−３４２ ＋＋＋ Ｐ−３４３ ＋＋＋ Ｐ−３４４ ＋＋＋ Ｐ−３４５ ＋＋＋ Ｐ−３４６ ＋＋＋ Ｐ−３４７ ＋＋＋ Ｐ−４０３ ＋＋ Ｐ−４０４ ＋＋ Ｐ−４０５ ＋＋＋ Ｐ−４０６ ＋＋＋ Ｐ−４０７ ＋＋＋ Ｐ−４０８ ＋＋＋ Ｐ−４０９ ＋＋＋ Ｐ−４１０ ＋＋＋ Ｐ−４１１ ＋＋＋ Ｐ−４１２ ＋＋＋ Ｐ−４１３ ＋＋＋ Ｐ−４１４ ＋＋＋ Ｐ−４１５ ＋＋＋ Ｐ−４１６ ＋＋ Ｐ−４１７ ＋＋ Ｐ−４１８ ＋ Ｐ−４１９ ＋ Ｐ−４２０ ＋＋＋ Ｐ−４２１ ＋＋＋ Ｐ−４２２ ＋＋＋ Ｐ−４２３ ＋ Ｐ−４２４ ＋ Ｐ−４２５ ＋＋ Ｐ−４２６ ＋＋＋ Ｐ−４２７ ＋＋＋ Ｐ−４２８ ＋＋＋ Ｐ−４２９ ＋＋＋ Ｐ−４３０ ＋＋＋ Ｐ−４３１ ＋＋＋ Ｐ−４３２ ＋＋＋ Ｐ−４３３ ＋＋＋ Ｐ−４３４ ＋＋＋ Ｐ−４３５ ＋＋＋ ─────────────────────────────────── ＋＋＋：枯死あるいは萎凋による植物の生育抑制が６０
％以上 ＋＋：枯死あるいは萎凋による植物の生育抑制が３０ー
６０％ ＋：枯死あるいは萎凋による植物の生育抑制が１０ー３
０％ −：植物の生育に影響なし

【００１８】表１に示すようにＰ−１９２菌株に代表さ
れるスズメノカタビラに対し病原性を有するザントモナ
ス・カンペストリスは日本各地に広く、一般的に存在し
ている。Ｐ−１９２菌に代表される表１に示した菌株を
接種されたスズメノカタビラの接種葉上には接種４日後
に水浸病斑が現われ、接種７〜１０日後には接種葉全体
の萎凋および、淡緑〜白色の葉の抽出等の萎凋病の症状
が観察された。接種３週間後には接種植物のほとんどが
枯死した。

【００１９】実施例２ Ｐ−１９２菌の菌学的性質 実施例１で得られたＰ−１９２菌の菌学的性質を下記表
２に示す。

【００２０】

【表２】 表２ Ｐ−１９２菌の菌学的性質 ─────────────────────────────────── 形態 桿菌 鞭毛 極毛１本 本グラム反応 陰性 酸素に対する要求性 好気性 レバン産生（５％ショ糖寒天） ＋（粘性集落） オキシダーゼ反応 ＋ カタラーゼ反応 ＋ アルギニン加水分解 − デンプンの加水分解 − ゼラチン液化試験 − 色素：普通寒天 黄色 キングＢ（蛍光色素） − リトマスミルク反応 青変・脱色・凝固 サッカロース還元 − グルコン酸の酸化 − カゼインの消化試験 ＋ ツイーン８０の分解 ＋ レシチナーゼ ＋ ペクチンの溶解 ＋ 配糖体の分解（エスクリン） ＋ メチルレッド試験 − アセトインの産生 − インドールの産生 − 硫化水素の産生 ＋ 硝酸塩の還元性 − ウレアーゼ反応 − 耐食塩性 ４％ ＣおよびＮ源としての アスパラギンの利用 − ０．１％ＴＴＣ培地発育性 − ジャガイモの腐敗能力 − タバコ過敏感反応 − 分解能： Ｌ・アラビノース ＋ キシロース ＋ リボース − グルコース ＋ フラクトース ＋ ガラクトース ＋ マンノース ＋ Ｌ・ラムノース − サッカロース ＋ マルトース − セロビオース ＋ トレハロース ＋ メリビオース − ラクトース ＋ メレジトース − ラフィノース − α−メチル・Ｄ・グルコシド − アルブチン ＋ サリシン − エスクリン − エタノール − マニトール − イノシトール − エリトリトール − ドルシトール − ソルビトール − アドニトール − グリセリン ＋ デンプン − イヌリン − リンゴ酸ナトリウム ＋ コハク酸ナトリウム ＋ クエン酸ナトリウム ＋ フマール酸ナトリウム ＋ 乳酸ナトリウム ＋ 酢酸ナトリウム ＋ マロン酸ナトリウム ＋ 酒石酸ナトリウム − プロピオン酸ナトリウム − 蟻酸ナトリウム − シュウ酸ナトリウム − グリコール酸ナトリウム − マレイン酸ナトリウム ＋ 安息香酸ナトリウム − グルコン酸ナトリウム − ｎ−酢酸ナトリウム − α−ケトグルタール酸ナトリウム ＋ ガラクツロン酸ナトリウム − ゲラニオール ＋ トリアセチン − ＤＬ−α−アラニン ＋ Ｌ−ロイシン − Ｌ−ヒスチヂン ＋ Ｌ−チロシン ＋ Ｌ−トリプトファン − ───────────────────────────────────

【００２１】分離されたスズメノカタビラに対する病原
細菌Ｐ−１９２菌に代表される植物病原細菌は普通培地
（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｂｒｏｔｈ）および馬鈴薯ブドウ
糖寒天培地上で黄色集落を形成するグラム陰性細菌であ
り、顕微鏡観察の結果からは桿菌で、極毛１本を持つこ
とが確認された。また、好気性で、硝酸塩を還元せず、
唯一の炭素源及び窒素源としてアスパラギンを利用しな
い、０．１％ＴＴＣ添加培地で生育しないなどの諸性質
でＸａｎｔｈｏｍｏｎａｓ属に属する細菌と判定され
た。さらに、５％ショ糖添加普通寒天培地上で粘性集落
を形成し、エスクリンを分解し、硫化水素を産生する、
ウレアーゼ反応は陰性、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）耐
性は４％、アラビノース、グルコース、フラクトース、
マンノース、ガラクトース、セルビオースから酸を生ず
る、などの細菌学的諸性質からＸａｎｔｈｏｍｏｎａｓ
ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓと同定された。また、ジャガイ
モの腐敗能力がなく、マルトース、メリビオース、メレ
ジトース、ラフィノース、マニトール及びデンプンの分
解能がなく、Ｌ−チロシンの分解能を有する点でＸａｎ
ｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ．ｏｒ
ｙｚａｅ（以下、ｏｒｙｚａｅ）と異なっている。さら
に、脂肪酸の検定の結果、ｏｒｙｚａｅでは、ａｎｔｅ
ｉｓｏ １５：０がほとんど０で、ｉｓｏ １５も数％
程度なのに対してＰ−１９２菌は両者併せて２５．６％
もあり明らかに異なる。また、ｏｒｙｚａｅは１６：０
が普通２０％近くに達するが、Ｐ−１９２菌は４．７％
で、この点においても異なる。

【００２２】実施例３ Ｐ−１９２菌に代表されるザン
トモナス・カンペストリスとＮＲＲＬ−Ｂ−１８０７８
菌のプラスミドＤＮＡに関する相違点 日本各地より分離されたザントモナス・カンペストリス
１３菌株（Ｐ−１９２、Ｐ−１９５、Ｐ−１９６、Ｐ−
１９７、Ｐ−２７５、Ｐ−３２８、Ｐ−３３０、Ｐ−３
３４、Ｐ−３３７、Ｐ−３４７、Ｐ−４２１、Ｐ−４３
３、Ｐ−４３１）及びＮＲＲＬ−Ｂ−１８０７８菌より
ＤＮＡを抽出した後、０．７％及び０．５％のアガロー
スゲルを用いたサブマリン電気泳動を行うことにより、
これら菌株のプラスミドＤＮＡの有無を調べた。その結
果、ＮＲＲＬ−Ｂ−１８０７８菌は約３８キロベースペ
アーのプラスミドＤＮＡを有していることが明らかとな
った。しかし、Ｐ−１９２菌をはじめとする日本各地よ
り分離されたスズメノカタビラに病原性を有し、実施例
４に示す特徴的な病徴をスズメノカタビラに起こすザン
トモナス・カンペストリス１３菌株は全てプラスミドＤ
ＮＡを有していなかった。この結果を表３に示した。

【００２３】

【表３】 表３ プラスミドＤＮＡの有無 ─────────────────────────────────── 菌株 プラスミド ─────────────────────────────────── Ｐ−１９２ − Ｐ−１９５ − Ｐ−１９６ − Ｐ−１９７ − Ｐ−２７５ − Ｐ−３２８ − Ｐ−３３０ − Ｐ−３３４ − Ｐ−３３７ − Ｐ−３４７ − Ｐ−４２１ − Ｐ−４３３ − Ｐ−４３１ − ＮＲＲＬ−Ｂ−１８０７８ ＋ ─────────────────────────────────── ＋ プラスミドＤＮＡ有り − プラスミドＤＮＡ無し

【００２４】実施例４ Ｐ−１９２菌に代表されるザン
トモナス・カンペストリス菌によるスズメノカタビラ
（Poa annua)の病徴とＮＲＲＬ−Ｂ−１８０７８菌によ
る病徴の相違点 Ｐ−１９２菌に代表されるザントモナス・カンペストリ
ス菌を接種されたスズメノカタビラの接種葉上には接種
４日後に水浸病班が現れ、接種７〜１０日後には接種葉
全体が萎凋し、さらに、該菌株の代謝産物によると思わ
れる未接種葉の黄化症状あるいは白化症状が観察され
た。そして、接種３週間後には接種植物のほとんどが枯
死した。ここに示した病徴は、実施例１に示した５８菌
株全てについて同様であった。しかし、ＮＲＲＬ−Ｂ−
１８０７８菌によるスズメノカタビラの病徴はこれと違
っていた。すなわち、ＮＲＲＬ−Ｂ−１８０７８菌に感
染したスズメノカタビラは萎凋するものの、未接種葉の
黄化症状あるいは白化症状は全く観察されなかった。

【００２５】実施例５ 日本国内より分離された５菌株
（Ｐ−１９２、Ｐ−１９５、Ｐ−１９６、Ｐ−１９７、
Ｐ−２７５）の抗糸状菌活性に関する相違点 日本国内より分離されたＰ−１９２、Ｐ−１９５、Ｐ−
１９６、Ｐ−１９７、Ｐ−２７５及びＮＲＲＬ−Ｂ−１
８０７８菌を白金耳を用い、直径９ｃｍの馬鈴薯半合成
寒天培地（馬鈴薯３００ｇ抽出物、０．０５％硝酸カル
シウム、０．２％リン酸水素二カリウム、０．５％ペプ
トン、１．５％ショ糖、１．８％寒天）プレートの中央
に植菌し、２８℃のインキュベ−タ−で培養した。２日
後、インキュベ−タ−より取り出し、生育した細菌塊よ
り２ｃｍ離れた位置に直径９ｍｍのリゾクトニア・ソラ
ニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ）菌株ＷＰ
−ＷＧ−ＪＢの菌糸体ディスクを置き、さらに２８℃の
インキュベ−タ−で培養を続けた。ここで用いたリゾク
トニア・ソラニは芝にウインターバッチ病を起こす芝の
重要病害である。その結果、日本国内より分離された５
菌株（Ｐ−１９２、Ｐ−１９５、Ｐ−１９６、Ｐ−１９
７、Ｐ−２７５）はリゾクトニア・ソラニに対し阻止体
を形成させた。しかし、ＮＲＲＬ−Ｂ−１８０７８菌は
阻止体を形成しなかった。結果を表４に示した。この結
果より、日本国内より分離された５菌株（Ｐー１９２、
Ｐ−１９５、Ｐ−１９６、Ｐ−１９７、Ｐ−２７５）を
用いたスズメノカタビラ除草剤は芝草の重要病害である
ウインターバッチ病の抑制効果についても期待される。

【００２６】以上実施例３、実施例４、実施例５が示す
ようにＰ−１９２菌に代表されるザントモナス・カンペ
ストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒ
ｉｓ）はＮＲＲＬ−Ｂ−１８０７８菌に比較し、いくつ
かの異なった性質を有していることから、ザントモナス
・カンペストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐ
ｅｓｔｒｉｓ）の新菌株であると同定できる。

【００２７】

【表４】 表４ リゾクトニア・ソラニ菌株ＷＰ−ＷＧ−ＩＢに対するスズメノカタビラに 病原性を有するザントモナス・カンペストリスの抗糸状菌活性 ─────────────────────────────────── 菌株 抗糸状菌活性 ─────────────────────────────────── Ｐ−１９２ ＋ Ｐ−１９５ ＋ Ｐ−１９６ ＋ Ｐ−１９２ ＋ Ｐ−１９２ ＋ ＮＲＲＬ−Ｂ−１８０７８ − ─────────────────────────────────── ＋ 阻止帯を形成した − 阻止帯を形成しなかった

【００２８】実施例６ Ｐ−１９２菌培養物のスズメノ
カタビラ(Poa annua）に対する殺草活性 普通寒天培地（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ ａｇａｒ）上で培養
されたＰ−１９２菌を三角フラスコに入った普通培地
（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｂｒｏｔｈ）に接種し、２８℃で
７２時間振とう培養することにより１０¹⁰ｃｆｕ／ｍｌ
の濃度まで増殖させることができる。本実験ではこの培
養物を１０⁹ ｃｆｕ／ｍｌの濃度に調整したものを接種
源として用いた。

【００２９】スズメノカタビラは種子を育苗ポット（１
２ｃｍ×１２ｃｍ×６ｃｍ）の表面に均一になるように
播種した後、温室内で３週間育苗した植物を接種試験に
使用した。植物は接種に先立ち、電動芝刈り機を用いて
草丈を２ｃｍの高さまで刈り込まれた後、上述した１０
⁹ ｃｆｕ／ｍｌの濃度のＰ−１９２菌の懸濁液を液量５
ｍｌ噴霧接種した。また、対照標準として同量の栄養培
地（Ｎｕｔｒｉｅｎｔｂｒｏｔｈ）のみを噴霧接種し
た。接種された植物の半数は相対湿度（９５−１００
％）を維持するように濡れたペーパータオルを入れたプ
ラスチック袋に入れ、温度を昼間２８℃／夜間２５℃に
制御された温室に移された。これら植物は４８時間後に
プラスチック袋から取り出された。残りの半数の植物は
接種後、過湿処理は行わず温室に移された。Ｐ−１９２
菌を噴霧接種された植物体上には同菌をハサミを用いて
接種したのと同様の病徴が観察された。接種３週間後の
結果を表５に示した。

【００３０】試験の結果、本発明のザントモナス・カン
ペストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔ
ｒｉｓ）Ｐ−１９２菌はスズメノカタビラに対する防除
の点ではザントモナス・カンペストリスＮＲＲＬ−Ｂ−
１８０７８菌に比べ、接種後４８時間の過湿処理無しに
同等かまたは上回るスズメノカタビラに対する防除効果
を示した。

【００３１】また、普通寒天培地（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ
ａｇａｒ）上で培養したＰ−１９２菌株を殺菌蒸留水に
懸濁してスズメノカタビラに接種した場合にも同様の結
果が得られている。

【００３２】

【表５】 表５ Ｐ−１９２菌培養物によるスズメノカタビラ殺草活性 ─────────────────────────────────── 処理 過湿処理 非過湿処理 ─────────────────────────────────── 刈込みのみ − − 普通培地（Nutrient broth） − − Ｐ−１９２（１０⁹ cfu/ml） ＋＋ ＋＋＋ ─────────────────────────────────── ＋＋＋：枯死あるいは萎凋による植物の生育抑制が６０
％以上 ＋＋：枯死あるいは萎凋による植物の生育抑制が３０−
６０％ ＋：枯死あるいは萎凋による植物の生育抑制が１０−３
０％ −：植物の生育に影響なし

【００３３】実施例７ 異なる温度条件下でのＰ−１９
２菌培養物施用によるスズメノカタビラ（Poa annua)に
対する除草活性 普通寒天培地（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ ａｇａｒ）上で培養
されたＰ−１９２菌は三角フラスコに入った普通培地
（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｂｒｏｔｈ）に接種し、２８℃で
７２時間振とう培養により得られた培養物を１０⁹ ｃｆ
ｕ／ｍｌの濃度に調整したものを接種源として用いた。

【００３４】ススメノカタビラは種子を育苗ポット（１
２ｃｍ×１２ｃｍ×６ｃｍ）の表面に均一になるように
播種した後温室内で３週間育苗した植物を接種試験に使
用した。植物は接種に先立ち、電動芝刈り機を用いて草
丈を２ｃｍの高さまで刈り込まれた後、上述した１０⁹
ｃｆｕ／ｍｌの濃度のＰ−１９２菌の懸濁液を液量５ｍ
ｌ噴霧接種した。また、対照標準として同量の栄養培地
（Ｎｕｔｒｉｅｎｔｂｒｏｔｈ）のみを噴霧接種した。
接種された植物は温度を昼間２８℃／夜間２５℃、昼間
２５℃／夜間２５℃あるいは昼間２５℃／夜間２０℃に
制御された温室に移された。本実験期間中は接種植物に
対していかなる過湿処理も行われなかった。接種３週間
後の結果を表６に示した。

【００３５】試験の結果、本発明に係わる病原微生物ザ
ントモナス・カンペストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ
ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）Ｐ−１９２菌はスズメノカタ
ビラに対する防除の点では温度条件にかかわらず、優れ
た防除効果を示した。

【００３６】

【表６】 表６ 異なる温度条件下でのＰ−１９２菌培養物の除草活性（％） ─────────────────────────────────── 処理 ２５℃／２０℃ ２５℃／２５℃ ２８℃／２５℃ ─────────────────────────────────── 刈込みのみ ０ ０ ０ 栄養培地のみ ０ ０ ０ １×１０⁹ cfu/ml ８４ ８０ ７５ ───────────────────────────────────

【００３７】実施例８ 種々の接種濃度のＰ−１９２菌
培養物の施用による除草活性 普通寒天培地（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ ａｇａｒ）上で培養
されたＰ−１９２菌は三角フラスコに入った普通培地
（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｂｒｏｔｈ）に接種し、２８℃で
７２時間振とう培養により得られた培養物を１０⁷ 、１
０⁵ 、１０³ 、１０² および１０ｃｆｕ／ｍｌの濃度に
調整したものを接種源とし、実施例６と同様の方法で温
室内で３週間で育苗した植物に接種した。接種された植
物は温度を昼間２５℃〜２８℃に抑制した温室に移され
た。本実験期間中は接種植物に対していかなる過湿処理
も行われなかった。接種３週間後の結果を表７に示し
た。

【００３８】試験の結果、本発明のザントモナス・カン
ペストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔ
ｒｉｓ）Ｐ−１９２菌は濃度１０〜１０⁷ cfu/mlの範囲
であっても接種したスズメノカタビラに感染し、接種植
物の生育を阻害する活性を持つことが判明した。

【００３９】

【表７】 表７ 種々の接種濃度のＰ−１９２菌培養物の施用による除草活性（％） ─────────────────────────────────── 濃度（ｃｆｕ／ｍｌ） 防除率（％） ─────────────────────────────────── １０⁷ ７０ １０⁵ ６０ １０³ １０ １０² １３ １０ １０ ───────────────────────────────────

【００４０】実施例９ 分離病原細菌の芝草およびイネ
に対する病原性 Ｐ−１９２菌を普通栄養培地（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｂｒ
ｏｔｈ）で４８時間振とう培養し、得られた培養物を接
種源として温室内でおよそ１カ月間育苗されたスズメノ
カタビラ（Poa annua)、主要な芝草およびイネに対して
ハサミを用いて接種を行い、主要なイネ科作物に対する
病原性を検定した。その結果を表８に示した。

【００４１】表８に示すように本発明に係わる病原微生
物であるザントモナス・カンペストリス(Xanthomonas c
ampestris)の新菌株Ｐ−１９２菌はスズメノカタビラに
対してのみ強い病原性を示し、主要な芝草さらにイネに
対しては病原性を持たないことが判明した。試験の結
果、本発明に係わるＰ−１９２菌は、ゴルフ場のバッテ
ィンググリーンをはじめとする芝生地に発生するスズメ
ノカタビラ防除のための微生物除草剤として使用可能で
あることが確認された。

【００４２】

【表８】 表８ Ｐ−１９２菌の有用植物に対する病原性 ─────────────────────────────────── 植物名 病原性 ─────────────────────────────────── スズメノカタビラ ＋ ベントグラス − メドウフェスキュー − ペレニアルライグラス − イタリアンライグラス − イネ − ─────────────────────────────────── ＋：病原性有、−：病原性無

【００４３】

【発明の効果】本発明により、スズメノカタビラ防除剤
として有用なザントモナス・カンペストリス新菌株及び
これを有効成分とするスズメノカタビラ防除剤が提供さ
れた。本発明の防除剤は、スズメノカタビラを有効に防
除することができ、しかも、他の有用植物に対して病原
性を示さない。従って、本発明の防除剤は、ゴルフ場の
パッティンググリーン、公園の芝生、庭園あるいはラグ
ビー場等の運動競技場にみられる人為的に管理された芝
地に生育する強害雑草スズメノカタビラの防除に威力を
発揮するものと考えられる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 今泉 誠子 神奈川県横浜市緑区梅が丘６−２ 日本た ばこ産業株式会社植物開発研究所横浜セン ター内

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 スズメノカタビラに病原性を有するザン
   トモナス・カンペストリス。
2. 【請求項２】 スズメノカタビラの未接種葉に黄化又は
   白化症状を引き起こす請求項１記載のザントモナス・カ
   ンペストリス。
3. 【請求項３】 ザントモナス・カンペストリスＰ−１９
   ２菌株（微工研菌寄第１２６１３号）である請求項２記
   載のザントモナス・カンペストリス。
4. 【請求項４】 スズメノカタビラに病原性を有するザン
   トモナス・カンペストリスを有効成分とするスズメノカ
   タビラ防除剤。
5. 【請求項５】 前記ザントモナス・カンペストリスはス
   ズメノカタビラの未接種葉に黄化又は白化症状を引き起
   こす請求項４記載のスズメノカタビラ防除剤。
6. 【請求項６】 前記ザントモナス・カンペストリスはザ
   ントモナス・カンペストリスＰ−１９２菌株（微工研菌
   寄第１２６１３号）である請求項５記載の防除剤。