JPH05255385A - ドーパ及び／又はヒドロキシプロリンを含有するペプチド - Google Patents
ドーパ及び／又はヒドロキシプロリンを含有するペプチドInfo
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- JPH05255385A JPH05255385A JP4051040A JP5104092A JPH05255385A JP H05255385 A JPH05255385 A JP H05255385A JP 4051040 A JP4051040 A JP 4051040A JP 5104092 A JP5104092 A JP 5104092A JP H05255385 A JPH05255385 A JP H05255385A
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- hyp
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Abstract
(57)【要約】
【目的】接着剤、医薬品又は試薬等に有用な、ドーパ及
び／又はヒドロキシプロリンを含有する新規なペプチド
を提供する。 【構成】アミノ基がＦｍｏｃ基で保護されたＨｙｐの活
性エステル、アミノ基がＦｍｏｃ基で保護されヒドロキ
シ基がフェニルホウ素で保護されたドーパ、並びにアミ
ノ基及び側鎖の官能基が保護されたその他のアミノ酸の
活性エステルを原料として、固相合成法により、Ala-Gl
y-Dopa-Gly-Gly、Ile-Thr-Dopa-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys-
Hyp-Lys、Ala-Dopa-Leu-Hyp-Thr を合成する。
び／又はヒドロキシプロリンを含有する新規なペプチド
を提供する。 【構成】アミノ基がＦｍｏｃ基で保護されたＨｙｐの活
性エステル、アミノ基がＦｍｏｃ基で保護されヒドロキ
シ基がフェニルホウ素で保護されたドーパ、並びにアミ
ノ基及び側鎖の官能基が保護されたその他のアミノ酸の
活性エステルを原料として、固相合成法により、Ala-Gl
y-Dopa-Gly-Gly、Ile-Thr-Dopa-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys-
Hyp-Lys、Ala-Dopa-Leu-Hyp-Thr を合成する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、接着剤、医薬品又は試
薬等に有用なドーパ及びヒドロキシプロリンを含有する
ペプチドに関する。
薬等に有用なドーパ及びヒドロキシプロリンを含有する
ペプチドに関する。
【０００２】
【従来の技術】イ貝、フジツボ等の貝類の分泌する接着
性タンパク質は、ポリテトラフルオロエチレン等の低エ
ネルギー表面に対して強く接着する特異な性質をもって
いる。そこで、これら接着性タンパク質を分離し、その
構造や接着機構を解明して接着剤等へ応用しようとする
研究・開発が行われている。
性タンパク質は、ポリテトラフルオロエチレン等の低エ
ネルギー表面に対して強く接着する特異な性質をもって
いる。そこで、これら接着性タンパク質を分離し、その
構造や接着機構を解明して接着剤等へ応用しようとする
研究・開発が行われている。
【０００３】ウェイト（Waite)らは、イ貝の一種のミチ
ルス エダリス(Mytilus edulis)やミチルス カリフォル
ニアヌス(Mytilus californianus)から接着性タンパク
質を抽出し、そのアミノ酸配列や接着機構を検討して、
接着性タンパク質にはアミノ酸の繰り返し配列があるこ
と、その接着性タンパク質の構成アミノ酸にドーパ及び
４−ヒドロキシプロリンが豊富に含まれ、それらが接着
機構に深く関与していること等を明らかにした（例え
ば、 Science,212,1038-1040(1981);J.Biol.Chem.,258,
2911-2915(1983);Biochemistry,24,5010-5014(1985);J.
Comp.Physiol. B,156,491-496(1986))。
ルス エダリス(Mytilus edulis)やミチルス カリフォル
ニアヌス(Mytilus californianus)から接着性タンパク
質を抽出し、そのアミノ酸配列や接着機構を検討して、
接着性タンパク質にはアミノ酸の繰り返し配列があるこ
と、その接着性タンパク質の構成アミノ酸にドーパ及び
４−ヒドロキシプロリンが豊富に含まれ、それらが接着
機構に深く関与していること等を明らかにした（例え
ば、 Science,212,1038-1040(1981);J.Biol.Chem.,258,
2911-2915(1983);Biochemistry,24,5010-5014(1985);J.
Comp.Physiol. B,156,491-496(1986))。
【０００４】ブルシオ(Buerzio)らは、別のイ貝の一種
のアウラコミア アテル(Aulacomyaater)から抽出される
接着性タンパク質を検討し、アミノ酸の繰り返し配列を
報告、開示している(Proceeding of the 1st Internati
onal Marine Biotechnology Conference,1989,Sept.,To
kyo,p353;特開平3-294292号公報)。
のアウラコミア アテル(Aulacomyaater)から抽出される
接着性タンパク質を検討し、アミノ酸の繰り返し配列を
報告、開示している(Proceeding of the 1st Internati
onal Marine Biotechnology Conference,1989,Sept.,To
kyo,p353;特開平3-294292号公報)。
【０００５】以上の報告や公開特許公報によると、上記
３種のイ貝から得られる接着性タンパク質は、いずれも
繰り返し単位のペプチドをもっているが、そのアミノ酸
配列はそれぞれ異なっており、また繰り返し単位のペプ
チドの長さも異なっている。
３種のイ貝から得られる接着性タンパク質は、いずれも
繰り返し単位のペプチドをもっているが、そのアミノ酸
配列はそれぞれ異なっており、また繰り返し単位のペプ
チドの長さも異なっている。
【０００６】ミチルス エダリス(Mytilus edulis)から
の接着性タンパク質はＡ〜Ｅの５種類の配列の混合であ
り、配列中の異なる部位については、ProとHyp、TyrとD
opaのように非常に似た性質のアミノ酸で置換されてい
る特徴があり、また、出現頻度の最も多い繰り返し単位
のペプチドの長さは１０アミノ酸残基である。
の接着性タンパク質はＡ〜Ｅの５種類の配列の混合であ
り、配列中の異なる部位については、ProとHyp、TyrとD
opaのように非常に似た性質のアミノ酸で置換されてい
る特徴があり、また、出現頻度の最も多い繰り返し単位
のペプチドの長さは１０アミノ酸残基である。
【０００７】ミチルス カリフォルニアヌス(Mytilus ca
lifornianus)からの接着性タンパク質の繰り返し単位の
ペプチドの長さも１０アミノ酸残基で、下記の式（IV）
及び式(Ｖ)が報告されている。 Ｘ-Thr-Ｙ-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys-Hyp-Lys （IV） Ile-Ｘ-Ｙ-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys-Hyp-Lys (Ｖ） 但し、上記の式（ＩＶ）及び式(Ｖ)において、ＸはSer
又はThr、ＹはTyr又はDopaである。
lifornianus)からの接着性タンパク質の繰り返し単位の
ペプチドの長さも１０アミノ酸残基で、下記の式（IV）
及び式(Ｖ)が報告されている。 Ｘ-Thr-Ｙ-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys-Hyp-Lys （IV） Ile-Ｘ-Ｙ-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys-Hyp-Lys (Ｖ） 但し、上記の式（ＩＶ）及び式(Ｖ)において、ＸはSer
又はThr、ＹはTyr又はDopaである。
【０００８】アウラコミア アテル(Aulacomya ater)か
らの接着性タンパク質の繰り返し単位のペプチドの長さ
については、前２者に比べ短く７アミノ酸残基である。
らの接着性タンパク質の繰り返し単位のペプチドの長さ
については、前２者に比べ短く７アミノ酸残基である。
【０００９】山本らは、上記イ貝のアミノ酸の繰り返し
配列を参考に、液相ペプチド合成法により、いくつかの
ペプチド、例えば、ミチルス エダリス(Mytilus eduli
s)中に存在するアミノ酸配列(Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp
-Hyp-Thr-Dopa-Lys)のペプチドやアウラコミア アテル
(Aulacomya ater)中に存在するアミノ酸配列(Ala-Gly-T
yr-Gly-Gly-X-Lys、ただし、XはAla、Val、Leu、Ile又
はPhe)のペプチドを合成している(J.Chem.Soc.Perkin T
rans 1,613-618(1987);高分子論文集,48,257-259(199
1))。この際、ペプチド鎖中へのドーパの導入は、一旦
チロシンを導入後にチロシンのベンゼン環を酸化剤を用
いて酸化してドーパとしている。
配列を参考に、液相ペプチド合成法により、いくつかの
ペプチド、例えば、ミチルス エダリス(Mytilus eduli
s)中に存在するアミノ酸配列(Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp
-Hyp-Thr-Dopa-Lys)のペプチドやアウラコミア アテル
(Aulacomya ater)中に存在するアミノ酸配列(Ala-Gly-T
yr-Gly-Gly-X-Lys、ただし、XはAla、Val、Leu、Ile又
はPhe)のペプチドを合成している(J.Chem.Soc.Perkin T
rans 1,613-618(1987);高分子論文集,48,257-259(199
1))。この際、ペプチド鎖中へのドーパの導入は、一旦
チロシンを導入後にチロシンのベンゼン環を酸化剤を用
いて酸化してドーパとしている。
【００１０】一方、ドーパは高等動物ではアドレナリン
やノルアドレナリンの前駆体で、すでに単量体としてパ
ーキンソン氏病の有効な治療薬であることはよく知られ
ている。また、４−ヒドロキシプロリンは高等動物の神
経に生理活性を示すペプチド中に多く含まれている。そ
のため、ドーパ及び/又は４−ヒドロキシプロリンを含
有するペプチドは医薬品への応用も期待されるところで
ある。
やノルアドレナリンの前駆体で、すでに単量体としてパ
ーキンソン氏病の有効な治療薬であることはよく知られ
ている。また、４−ヒドロキシプロリンは高等動物の神
経に生理活性を示すペプチド中に多く含まれている。そ
のため、ドーパ及び/又は４−ヒドロキシプロリンを含
有するペプチドは医薬品への応用も期待されるところで
ある。
【００１１】ドーパに類似する構造をもつチロシンを構
成アミノ酸にもつ生理活性なペプチドはいくつか知られ
ているが、ゴキブリの興奮性神経伝達物質プロクトリン
が次式(VI)のアミノ酸配列を有するペンタペプチドであ
ることは、スタラット（Starratt,A.N.）らにより報告
されている（Life Sci.,17,1253(1975))。 Arg-Tyr-Leu-Pro-Thr (VI)
成アミノ酸にもつ生理活性なペプチドはいくつか知られ
ているが、ゴキブリの興奮性神経伝達物質プロクトリン
が次式(VI)のアミノ酸配列を有するペンタペプチドであ
ることは、スタラット（Starratt,A.N.）らにより報告
されている（Life Sci.,17,1253(1975))。 Arg-Tyr-Leu-Pro-Thr (VI)
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら従来は、
ドーパ及び/又は４−ヒドロキシプロリン含有ペプチド
を容易に化学合成する方法がなかったため、配列中にド
ーパ及び/又は４−ヒドロキシプロリンを有する合成ペ
プチド又は合成タンパク質は、ほとんど知られていな
い。
ドーパ及び/又は４−ヒドロキシプロリン含有ペプチド
を容易に化学合成する方法がなかったため、配列中にド
ーパ及び/又は４−ヒドロキシプロリンを有する合成ペ
プチド又は合成タンパク質は、ほとんど知られていな
い。
【００１３】本発明は、ドーパ及び/又は４−ヒドロキ
シプロリンを含有するペプチドを化学合成法で容易に製
造するための、アミノ基及び／又はヒドロキシ基が保護
されたドーパ、及びアミノ基及び／又はヒドロキシ基が
保護された４−ヒドロキシプロリン、並びにそれらの活
性エステル体を開発することにより、ドーパ及び／又は
ヒドロキシプロリンを含有するペプチドを提供するもの
である。
シプロリンを含有するペプチドを化学合成法で容易に製
造するための、アミノ基及び／又はヒドロキシ基が保護
されたドーパ、及びアミノ基及び／又はヒドロキシ基が
保護された４−ヒドロキシプロリン、並びにそれらの活
性エステル体を開発することにより、ドーパ及び／又は
ヒドロキシプロリンを含有するペプチドを提供するもの
である。
【００１４】
【課題を解決するための手段】本発明は、下記の（１）
〜（４）に関するものである。すなわち、 （１）下記の式（Ｉ）〜（III）のペプチドの群から選
ばれる、ドーパ及び／又はヒドロキシプロリンを含有す
るペプチド又はその塩。 Ala-Gly-Dopa-Gly-Gly （I） Ile-Thr-Dopa-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys-Hyp-Lys （II） Ala-Dopa-Leu-Hyp-Thr （III） （２）下記の式（Ｉ）で表されるドーパを含有するペプ
チド又はその塩。 Ala-Gly-Dopa-Gly-Gly （I） （３）下記の式（II）で表されるドーパ及び／又はヒド
ロキシプロリンを含有するペプチド又はその塩。 Ile-Thr-Dopa-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys-Hyp-Lys （II） （４）下記の式（III）で表されるドーパ及びヒドロキ
シプロリンを含有するペプチド又はその塩。 Ala-Dopa-Leu-Hyp-Thr （III）
〜（４）に関するものである。すなわち、 （１）下記の式（Ｉ）〜（III）のペプチドの群から選
ばれる、ドーパ及び／又はヒドロキシプロリンを含有す
るペプチド又はその塩。 Ala-Gly-Dopa-Gly-Gly （I） Ile-Thr-Dopa-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys-Hyp-Lys （II） Ala-Dopa-Leu-Hyp-Thr （III） （２）下記の式（Ｉ）で表されるドーパを含有するペプ
チド又はその塩。 Ala-Gly-Dopa-Gly-Gly （I） （３）下記の式（II）で表されるドーパ及び／又はヒド
ロキシプロリンを含有するペプチド又はその塩。 Ile-Thr-Dopa-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys-Hyp-Lys （II） （４）下記の式（III）で表されるドーパ及びヒドロキ
シプロリンを含有するペプチド又はその塩。 Ala-Dopa-Leu-Hyp-Thr （III）
【００１５】なお、本明細書中で用いた略号は以下の意
味を示す。また、それぞれのアミノ酸はグリシンを除き
全てＬ体で、ペプチドは慣用の表し方に従いＮ末端を左
側に、Ｃ末端を右側に示している。 Ｇｌｙ：グリシン Ａｌａ：アラニン Ｉｌｅ：イソロイシン Ｔｈｒ：スレオニン Ｌｙｓ：リジン Ｈｙｐ：４−ヒドロキシプロリン Ｄｏｐａ（又はドーパ）：β−（３，４−ジヒドロキシ
フェニル）アラニン Ｂｏｐ：ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス
（ジメチルアミノ）フォスフォニウムヘキサフルオロフ
ォスフェート Ｆｍｏｃ：９−フルオレニルメトキシカルボニル ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール ｔＢｕ：ｔｅｒｔ−ブチル Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸 Ｂ−Ｃ6Ｈ5：フェニルホウ素 Ｐｆｐ：ペンタフルオロフェノール Ｄｈｂｔ：３，４−ジヒドロ−４−オキソ−１，２，３
−ベンゾトリアジン−３−イル
味を示す。また、それぞれのアミノ酸はグリシンを除き
全てＬ体で、ペプチドは慣用の表し方に従いＮ末端を左
側に、Ｃ末端を右側に示している。 Ｇｌｙ：グリシン Ａｌａ：アラニン Ｉｌｅ：イソロイシン Ｔｈｒ：スレオニン Ｌｙｓ：リジン Ｈｙｐ：４−ヒドロキシプロリン Ｄｏｐａ（又はドーパ）：β−（３，４−ジヒドロキシ
フェニル）アラニン Ｂｏｐ：ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス
（ジメチルアミノ）フォスフォニウムヘキサフルオロフ
ォスフェート Ｆｍｏｃ：９−フルオレニルメトキシカルボニル ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール ｔＢｕ：ｔｅｒｔ−ブチル Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸 Ｂ−Ｃ6Ｈ5：フェニルホウ素 Ｐｆｐ：ペンタフルオロフェノール Ｄｈｂｔ：３，４−ジヒドロ−４−オキソ−１，２，３
−ベンゾトリアジン−３−イル
【００１６】本発明で用いるＮ−（９−フルオレニルメ
トキシカルボニル）−β−３，４−（ジヒドロキシフェ
ニル）アラニンのフェニルホウ酸コンプレックス（ Fmo
c-Dopa(B-C6H5)-OHと略記する。）は、例えば次のよう
にして得られる。すなわち、ドーパをアセトニトリル−
水の混合液に溶かし、塩酸酸性下、ドーパに対して等モ
ルのフェニルホウ酸を加え、撹拌する。次いで、炭酸ナ
トリウムを加え、ｐＨを約８に調整し、９−フルオレニ
ルメトキシカルボニルクロライドを加えて、撹拌する。
更に、炭酸水素ナトリウム溶液を加え、反応液のｐＨを
８．０〜８．５に調整し、撹拌し、反応液に濃塩酸を加
え、ｐＨを約２とし、ベンゼンを加えて振り混ぜ、ベン
ゼン層を集める。ベンゼン抽出液に硫酸ナトリウムを加
えて脱水したのち、ベンゼンを減圧下に留去する。
トキシカルボニル）−β−３，４−（ジヒドロキシフェ
ニル）アラニンのフェニルホウ酸コンプレックス（ Fmo
c-Dopa(B-C6H5)-OHと略記する。）は、例えば次のよう
にして得られる。すなわち、ドーパをアセトニトリル−
水の混合液に溶かし、塩酸酸性下、ドーパに対して等モ
ルのフェニルホウ酸を加え、撹拌する。次いで、炭酸ナ
トリウムを加え、ｐＨを約８に調整し、９−フルオレニ
ルメトキシカルボニルクロライドを加えて、撹拌する。
更に、炭酸水素ナトリウム溶液を加え、反応液のｐＨを
８．０〜８．５に調整し、撹拌し、反応液に濃塩酸を加
え、ｐＨを約２とし、ベンゼンを加えて振り混ぜ、ベン
ゼン層を集める。ベンゼン抽出液に硫酸ナトリウムを加
えて脱水したのち、ベンゼンを減圧下に留去する。
【００１７】本発明で用いるＮ−（９−フルオレニルメ
トキシカルボニル）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシプロリン
の３−ヒドロキシ−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−
１，２，３−ベンゾトリアジンエステル（Fmoc-Hpy(tB
u)-ODhbtと略記する。）は、Ｎ−（９−フルオレニルメ
トキシカルボニル）−４−ヒドロキシプロリン（ Fmoc-
Hypと略記する。）を溶媒中、ジシクロヘキシルカルボ
ジイミド等のカップリング試薬の存在下に、３−ヒドロ
キシ−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，３−ベ
ンゾトリアジン（Ｄｈｂｔ−ＯＨと略記する。）を加
え、−３０℃〜０℃で１〜２４時間撹拌し、得られるＮ
−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）−４−ヒド
ロキシプロリンのＤｈｂｔエステル（Fmoc-Hpy-ODhbtと
略記する。）に触媒量の硫酸の存在下でイソブチレンを
反応させることにより製造する。
トキシカルボニル）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシプロリン
の３−ヒドロキシ−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−
１，２，３−ベンゾトリアジンエステル（Fmoc-Hpy(tB
u)-ODhbtと略記する。）は、Ｎ−（９−フルオレニルメ
トキシカルボニル）−４−ヒドロキシプロリン（ Fmoc-
Hypと略記する。）を溶媒中、ジシクロヘキシルカルボ
ジイミド等のカップリング試薬の存在下に、３−ヒドロ
キシ−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，３−ベ
ンゾトリアジン（Ｄｈｂｔ−ＯＨと略記する。）を加
え、−３０℃〜０℃で１〜２４時間撹拌し、得られるＮ
−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）−４−ヒド
ロキシプロリンのＤｈｂｔエステル（Fmoc-Hpy-ODhbtと
略記する。）に触媒量の硫酸の存在下でイソブチレンを
反応させることにより製造する。
【００１８】この際に用いるFmoc−ヒドロキシプロリン
は、ラパトサニス（L. Lapatsanis）らの方法（Synthes
is, 1983, 671-673）によっても得られるが、アンモニ
ア又はアミン類でｐＨを８〜１２に保ちつつ、４−ヒド
ロキシプロリン溶液にFmoc化剤であるＮ−（９−フルオ
レニルメチル）−Ｎ−スクシンイミディルカーボネート
を反応させ、反応液から有機溶媒抽出、ｐＨ調整、再結
晶等により得ることができる。
は、ラパトサニス（L. Lapatsanis）らの方法（Synthes
is, 1983, 671-673）によっても得られるが、アンモニ
ア又はアミン類でｐＨを８〜１２に保ちつつ、４−ヒド
ロキシプロリン溶液にFmoc化剤であるＮ−（９−フルオ
レニルメチル）−Ｎ−スクシンイミディルカーボネート
を反応させ、反応液から有機溶媒抽出、ｐＨ調整、再結
晶等により得ることができる。
【００１９】その他の原料に用いる保護アミノ酸あるい
はその活性エステル、すなわち、Fmoc-Ala-OPfp、Fmoc-
Gly-OPfp、Fmoc-Ile-OPfp、Fmoc-Leu-OPfp、Fmoc-Lys(t
Bu)-OPfp及びFmoc-Thr(tBu)-ODhbtは、市販品（試薬グ
レード）が容易に入手できる。
はその活性エステル、すなわち、Fmoc-Ala-OPfp、Fmoc-
Gly-OPfp、Fmoc-Ile-OPfp、Fmoc-Leu-OPfp、Fmoc-Lys(t
Bu)-OPfp及びFmoc-Thr(tBu)-ODhbtは、市販品（試薬グ
レード）が容易に入手できる。
【００２０】本発明のペプチドは、上記の保護アミノ酸
あるいはその活性エステルを原料として、汎用のペプチ
ド自動合成装置により、アミノ酸配列のプログラムに従
って、簡単に合成できる。
あるいはその活性エステルを原料として、汎用のペプチ
ド自動合成装置により、アミノ酸配列のプログラムに従
って、簡単に合成できる。
【００２１】なお、ペプチド鎖中へのFmoc-Dopa(B-C
6H5)-OHの伸長反応はカストロ（Castro,B.)らによって
開発されたＢｏｐ法（Tet. Lett.,1219(1975)）に基礎
をおくもので、ミリジェン／バイオサーチ社のプロトコ
ールに準じ、Fmoc-Dopa(B-C6H5)-OH／Ｂｏｐ試薬／ＨＯ
Ｂｔ（モル比で１／１／１）を混合し、Ｎ−メチルモル
ホリン（モル比で１．５）とともに、ペプチド自動合成
装置にセットして、カップリング反応を行うことができ
る。
6H5)-OHの伸長反応はカストロ（Castro,B.)らによって
開発されたＢｏｐ法（Tet. Lett.,1219(1975)）に基礎
をおくもので、ミリジェン／バイオサーチ社のプロトコ
ールに準じ、Fmoc-Dopa(B-C6H5)-OH／Ｂｏｐ試薬／ＨＯ
Ｂｔ（モル比で１／１／１）を混合し、Ｎ−メチルモル
ホリン（モル比で１．５）とともに、ペプチド自動合成
装置にセットして、カップリング反応を行うことができ
る。
【００２２】また用いる固相樹脂としては、遊離ペプチ
ド合成用又は側鎖保護基保存型ペプチド合成用のいずれ
でもよい。反応後、固相にＴＦＡ溶液を流してペプチド
を樹脂から切り出すとともに、保護基を外し、その後、
慣用の手段、例えば逆相液体クロマトグラフィー等によ
りペプチドを精製する。
ド合成用又は側鎖保護基保存型ペプチド合成用のいずれ
でもよい。反応後、固相にＴＦＡ溶液を流してペプチド
を樹脂から切り出すとともに、保護基を外し、その後、
慣用の手段、例えば逆相液体クロマトグラフィー等によ
りペプチドを精製する。
【００２３】本発明のペプチドの塩としては、塩酸塩、
臭化水素酸塩等の無機酸塩、トリフルオロ酢酸塩、ｐ−
トルエンスルホン酸塩、トリメタンスルホン酸塩、トリ
メチルシリルトリフルオロメタンスルホン酸塩等の有機
酸塩等があり、これらは相当する酸を製造工程中又は最
終段階で加えて、その塩とすることができる。
臭化水素酸塩等の無機酸塩、トリフルオロ酢酸塩、ｐ−
トルエンスルホン酸塩、トリメタンスルホン酸塩、トリ
メチルシリルトリフルオロメタンスルホン酸塩等の有機
酸塩等があり、これらは相当する酸を製造工程中又は最
終段階で加えて、その塩とすることができる。
【００２４】
実施例１ 式（Ｉ）で表されるペプチド（Ala-Gly-Dopa
-Gly-Gly）の合成 ペプチド合成装置は全自動ペプチドシンセサイザー９０
５０型（ミリジェン／バイオサーチ社製)、固相樹脂はF
moc-Gly-ペプシンKA(遊離ペプチド合成用、ミリジェン
／バイオサーチ社製）を使用した。
-Gly-Gly）の合成 ペプチド合成装置は全自動ペプチドシンセサイザー９０
５０型（ミリジェン／バイオサーチ社製)、固相樹脂はF
moc-Gly-ペプシンKA(遊離ペプチド合成用、ミリジェン
／バイオサーチ社製）を使用した。
【００２５】反応の進行に伴い、Ｃ端から順次 Fmoc-Gl
y-OPfp、Fmoc-Dopa(B-C6H5)-OH、Fmoc-Gly-OPfp及びFmo
c-Ala-OPfpを反応させた。Gly及びAlaの伸長反応は活性
エステルによるカップリング反応であり、Dopaの伸長反
応はBop/HObt法によるカップリング反応である。
y-OPfp、Fmoc-Dopa(B-C6H5)-OH、Fmoc-Gly-OPfp及びFmo
c-Ala-OPfpを反応させた。Gly及びAlaの伸長反応は活性
エステルによるカップリング反応であり、Dopaの伸長反
応はBop/HObt法によるカップリング反応である。
【００２６】ペプチド鎖の伸長反応がすべて終了したの
ち、固相にフェノール／ＴＦＡ（重量比で５：９５）を
流して、樹脂担体からペプチドを脱離するとともに、保
護基を外した。得られた粗精製ペプチドを逆相液体クロ
マトグラフィー［カラム：マイクロボンダスフェア５μ
Ｃ１８−１００Ａ、径３９mm×長さ１５０mm、ウォータ
ーズ社製、溶出液：Ａ液（０．１容量％ＴＦＡ／水）と
Ｂ液（０．１容量％ＴＦＡ／アセトニトリル）の９４：
６から３８：６２への３０分グラジェント溶出］にか
け、ペプチドを精製した。このときのクロマトグラムを
図１に示した。
ち、固相にフェノール／ＴＦＡ（重量比で５：９５）を
流して、樹脂担体からペプチドを脱離するとともに、保
護基を外した。得られた粗精製ペプチドを逆相液体クロ
マトグラフィー［カラム：マイクロボンダスフェア５μ
Ｃ１８−１００Ａ、径３９mm×長さ１５０mm、ウォータ
ーズ社製、溶出液：Ａ液（０．１容量％ＴＦＡ／水）と
Ｂ液（０．１容量％ＴＦＡ／アセトニトリル）の９４：
６から３８：６２への３０分グラジェント溶出］にか
け、ペプチドを精製した。このときのクロマトグラムを
図１に示した。
【００２７】保持時間約２．５分の主ピークをとり、こ
れを６Ｎ塩酸で１５０℃で１時間加水分解し、PICO-TAG
アミノ酸分析機(ウォーターズ社製)でアミノ酸の組成分
析を行った（表１）。アミノ酸組成の分析結果は式
（Ｉ）のアミノ酸配列から予想される値とほぼ一致し
た。
れを６Ｎ塩酸で１５０℃で１時間加水分解し、PICO-TAG
アミノ酸分析機(ウォーターズ社製)でアミノ酸の組成分
析を行った（表１）。アミノ酸組成の分析結果は式
（Ｉ）のアミノ酸配列から予想される値とほぼ一致し
た。
【表１】 表１ アミノ酸の組成分析 ───────────────────────────── アミノ酸 組成比（カッコ内は理論値） ───────────────────────────── Ｇｌｙ ３．１（３．０） Ａｌａ ０．６（１．０） Ｄｏｐａ １．２（１．０） ─────────────────────────────
【００２８】実施例２ 式（II）で表されるペプチド
（Ile-Thr-Dopa-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys-Hyp-Lys）の合
成 ペプチド合成装置は実施例１に記載した装置、固相樹脂
はFmoc-Lys-ペプシンKA(遊離ペプチド合成用、ミリジェ
ン／バイオサーチ社製）を使用した。
（Ile-Thr-Dopa-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys-Hyp-Lys）の合
成 ペプチド合成装置は実施例１に記載した装置、固相樹脂
はFmoc-Lys-ペプシンKA(遊離ペプチド合成用、ミリジェ
ン／バイオサーチ社製）を使用した。
【００２９】反応の進行に伴い、Ｃ端から順次 Fmoc-Hy
p(tBu)-ODhbt、Fmoc-Lys(tBu)-OPfp、Fmoc-Dopa(B-C
6H5)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-ODhbt、Fmoc-Hyp(tBu)-ODhb
t、Fmoc-Hyp(tBu)-ODhbt、Fmoc-Dopa(B-C6H5)-OH、Fmoc
-Thr(tBu)-ODhbt、最後にFmoc-Ile-OPfpを反応させた。
Dopaの伸長反応はBop/HObt法によるカップリング反応で
あり、それ以外のアミノ酸の伸長反応は活性エステルに
よるカップリング反応である。
p(tBu)-ODhbt、Fmoc-Lys(tBu)-OPfp、Fmoc-Dopa(B-C
6H5)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-ODhbt、Fmoc-Hyp(tBu)-ODhb
t、Fmoc-Hyp(tBu)-ODhbt、Fmoc-Dopa(B-C6H5)-OH、Fmoc
-Thr(tBu)-ODhbt、最後にFmoc-Ile-OPfpを反応させた。
Dopaの伸長反応はBop/HObt法によるカップリング反応で
あり、それ以外のアミノ酸の伸長反応は活性エステルに
よるカップリング反応である。
【００３０】ペプチド鎖の伸長反応がすべて終了したの
ち、実施例１と同様にして、固相にフェノール／ＴＦＡ
（重量比で５：９５）を流し、樹脂担体からペプチドを
脱離するとともに、保護基を外し、得られた粗精製ペプ
チドを逆相液体クロマトグラフィーにかけ、ペプチドを
精製した。このときのクロマトグラムを図２に示した。
ち、実施例１と同様にして、固相にフェノール／ＴＦＡ
（重量比で５：９５）を流し、樹脂担体からペプチドを
脱離するとともに、保護基を外し、得られた粗精製ペプ
チドを逆相液体クロマトグラフィーにかけ、ペプチドを
精製した。このときのクロマトグラムを図２に示した。
【００３１】実施例３ 式（III）で表されるペプチド
（Ala-Dopa-Leu-Hyp-Thr）の合成 ペプチド合成装置は実施例１に記載した装置、固相樹脂
はFmoc-Thr-ペプシンKA(遊離ペプチド合成用、ミリジェ
ン／バイオサーチ社製）を使用した。
（Ala-Dopa-Leu-Hyp-Thr）の合成 ペプチド合成装置は実施例１に記載した装置、固相樹脂
はFmoc-Thr-ペプシンKA(遊離ペプチド合成用、ミリジェ
ン／バイオサーチ社製）を使用した。
【００３２】反応の進行に伴い、Ｃ端から順次Fmoc-Hyp
(tBu)-ODhbt、Fmoc-Leu-OPfp、Fmoc-Dopa(B-C6H5)-OH、
最後にFmoc-Ala-OPfpを反応させた。Dopaの伸長反応はB
op/HObt法によるカップリング反応であり、それ以外の
アミノ酸の伸長反応は活性エステルによるカップリング
反応である。
(tBu)-ODhbt、Fmoc-Leu-OPfp、Fmoc-Dopa(B-C6H5)-OH、
最後にFmoc-Ala-OPfpを反応させた。Dopaの伸長反応はB
op/HObt法によるカップリング反応であり、それ以外の
アミノ酸の伸長反応は活性エステルによるカップリング
反応である。
【００３３】ペプチド鎖の伸長反応がすべて終了したの
ち、実施例１と同様にして、固相にフェノール／ＴＦＡ
(重量比で５：９５)を流し、樹脂担体からペプチドを脱
離するとともに、保護基を外し、得られた粗精製ペプチ
ドを逆相液体クロマトグラフィーにかけ、ペプチドを精
製した。このときのクロマトグラムを図３に示した。
ち、実施例１と同様にして、固相にフェノール／ＴＦＡ
(重量比で５：９５)を流し、樹脂担体からペプチドを脱
離するとともに、保護基を外し、得られた粗精製ペプチ
ドを逆相液体クロマトグラフィーにかけ、ペプチドを精
製した。このときのクロマトグラムを図３に示した。
【００３４】保持時間約１５分の主ピークをとり、これ
を６Ｎ塩酸で１５０℃で１時間加水分解し、実施例１と
同様にアミノ酸の組成分析を行った(表２)。アミノ酸組
成の分析結果は式（III）のアミノ酸配列から予想され
る値とよく一致した。
を６Ｎ塩酸で１５０℃で１時間加水分解し、実施例１と
同様にアミノ酸の組成分析を行った(表２)。アミノ酸組
成の分析結果は式（III）のアミノ酸配列から予想され
る値とよく一致した。
【表２】 表２ アミノ酸の組成分析 ───────────────────────────── アミノ酸 組成比（カッコ内は理論値） ───────────────────────────── Ｈｙｐ １．２（１．０） Ｔｈｒ １．１（１．０） Ａｌａ ０．８（１．０） Ｄｏｐａ １．０（１．０） Ｌｅｕ ０．９（１．０） ─────────────────────────────
【００３５】
【発明の効果】本発明により、接着剤、医薬品又は試薬
等に有用な、ドーパ及び／又はヒドロキシプロリンを含
有する新規なペプチドを提供することができた。
等に有用な、ドーパ及び／又はヒドロキシプロリンを含
有する新規なペプチドを提供することができた。
【図１】式（Ｉ）のペプチドの逆相液体クロマトグラム
である。
である。
【図２】式（II）のペプチドの逆相液体クロマトグラム
である。
である。
【図３】式（III）のペプチドの逆相液体クロマトグラ
ムである。
ムである。
配列番号：１ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列番号：２ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列番号：３ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
Claims (4)
- 【請求項１】下記の式（Ｉ）〜（III）のペプチドの群
から選ばれる、ドーパ及び／又はヒドロキシプロリンを
含有するペプチド又はその塩。 Ala-Gly-Dopa-Gly-Gly （I） Ile-Thr-Dopa-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys-Hyp-Lys （II） Ala-Dopa-Leu-Hyp-Thr （III） - 【請求項２】下記の式（Ｉ）で表されるドーパを含有す
るペプチド又はその塩。 Ala-Gly-Dopa-Gly-Gly （I） - 【請求項３】下記の式（II）で表されるドーパ及び／又
はヒドロキシプロリンを含有するペプチド又はその塩。 Ile-Thr-Dopa-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys-Hyp-Lys （II） - 【請求項４】下記の式（III）で表されるドーパ及びヒ
ドロキシプロリンを含有するペプチド又はその塩。 Ala-Dopa-Leu-Hyp-Thr （III）
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4051040A JPH05255385A (ja) | 1992-03-10 | 1992-03-10 | ドーパ及び／又はヒドロキシプロリンを含有するペプチド |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4051040A JPH05255385A (ja) | 1992-03-10 | 1992-03-10 | ドーパ及び／又はヒドロキシプロリンを含有するペプチド |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05255385A true JPH05255385A (ja) | 1993-10-05 |
Family
ID=12875692
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4051040A Pending JPH05255385A (ja) | 1992-03-10 | 1992-03-10 | ドーパ及び／又はヒドロキシプロリンを含有するペプチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05255385A (ja) |
-
1992
- 1992-03-10 JP JP4051040A patent/JPH05255385A/ja active Pending
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