JPH05255129A - 分離剤 - Google Patents
分離剤Info
- Publication number
- JPH05255129A JPH05255129A JP4087499A JP8749992A JPH05255129A JP H05255129 A JPH05255129 A JP H05255129A JP 4087499 A JP4087499 A JP 4087499A JP 8749992 A JP8749992 A JP 8749992A JP H05255129 A JPH05255129 A JP H05255129A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- silica gel
- separating agent
- cellulose
- straight chain
- chemically bonded
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 β−１，４−結合をしたグルコース直鎖の中
で水酸基にＮ−アセチルグルコサミン残基をもつ糖をシ
リカゲルに化学結合させたものを有効成分とする分離剤
並びにＮ−アセチルグルコサミン残基をもつ糖をリゾチ
ームまたはセルラーゼで分解処理したのち、シリカゲル
に化学結合させたものを有効成分とする分離剤。 【効果】 本発明のＮ−アセチルグルコサミン残基をも
つ糖をシリカゲルと化学結合させた化合物を分離剤とし
てクロマトグラフィーに用いれば、光学異性体や類似化
合物の分離等を効率よく行うことができる。
で水酸基にＮ−アセチルグルコサミン残基をもつ糖をシ
リカゲルに化学結合させたものを有効成分とする分離剤
並びにＮ−アセチルグルコサミン残基をもつ糖をリゾチ
ームまたはセルラーゼで分解処理したのち、シリカゲル
に化学結合させたものを有効成分とする分離剤。 【効果】 本発明のＮ−アセチルグルコサミン残基をも
つ糖をシリカゲルと化学結合させた化合物を分離剤とし
てクロマトグラフィーに用いれば、光学異性体や類似化
合物の分離等を効率よく行うことができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、クロマト用分離剤に関
し、詳しくは光学分割用分離剤に関するものである。
し、詳しくは光学分割用分離剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】これ
までにシリカゲルにセルロースなどの多糖類やその誘導
体を化学結合させた化合物が知られている。しかし、こ
の場合、シリカゲルに化学結合させる部位が選択できな
いため、糖自体の高次構造が崩れたり、結合部位が不特
定であることに起因して得られるシリカゲル化合物の品
質のばらつきが大きい等の欠点があった。そのため、該
シリカゲル化合物は光学分割用分離剤として用いる場
合、分割能力に問題があり、実用化されるに至っていな
い。
までにシリカゲルにセルロースなどの多糖類やその誘導
体を化学結合させた化合物が知られている。しかし、こ
の場合、シリカゲルに化学結合させる部位が選択できな
いため、糖自体の高次構造が崩れたり、結合部位が不特
定であることに起因して得られるシリカゲル化合物の品
質のばらつきが大きい等の欠点があった。そのため、該
シリカゲル化合物は光学分割用分離剤として用いる場
合、分割能力に問題があり、実用化されるに至っていな
い。
【０００３】例えば、シリカゲルに多糖類やその誘導体
を化学結合させたものの例として、多糖の水酸基の一部
とシラン処理をしたシリカゲルとを多官能のイソシアネ
ート誘導体を介して化学結合させ、その後多糖の水酸基
の残部に置換基を導入することによって得られるシリカ
ゲル化合物があり、このものは光学分割剤として用いら
れる（例えば特開昭６０−１９６６６３号、特開昭６２
−２７０６０２号参照）が、前記した課題があり、実用
上その改善が望まれている。
を化学結合させたものの例として、多糖の水酸基の一部
とシラン処理をしたシリカゲルとを多官能のイソシアネ
ート誘導体を介して化学結合させ、その後多糖の水酸基
の残部に置換基を導入することによって得られるシリカ
ゲル化合物があり、このものは光学分割剤として用いら
れる（例えば特開昭６０−１９６６６３号、特開昭６２
−２７０６０２号参照）が、前記した課題があり、実用
上その改善が望まれている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】そこで、本発明者らはシ
リカゲルと化学結合させる多糖類について検討し、繊維
学会誌、Vol. 47, No.8,pp456-460(1991) に開示されて
いる分子中にＮ−アセチルグルコサミン残基を含むセル
ロースに注目した。このセルロースの性質について検討
する過程で、その分解産物である該セルロース懸濁液に
リゾチームやセルラーゼ等を作用させることにより、分
子末端あるいは途中にＮ−アセチルグルコサミン残基を
有するβ−１，４結合したグルコース直鎖を脱アセチル
化してアミノ残基とした後、シリカゲルと化学結合させ
ることによって前記の課題を解決できることを見出し、
本発明を完成するに至った。
リカゲルと化学結合させる多糖類について検討し、繊維
学会誌、Vol. 47, No.8,pp456-460(1991) に開示されて
いる分子中にＮ−アセチルグルコサミン残基を含むセル
ロースに注目した。このセルロースの性質について検討
する過程で、その分解産物である該セルロース懸濁液に
リゾチームやセルラーゼ等を作用させることにより、分
子末端あるいは途中にＮ−アセチルグルコサミン残基を
有するβ−１，４結合したグルコース直鎖を脱アセチル
化してアミノ残基とした後、シリカゲルと化学結合させ
ることによって前記の課題を解決できることを見出し、
本発明を完成するに至った。
【０００５】すなわち、本発明はβ−１，４−結合をし
たグルコース直鎖の中で水酸基にＮ−アセチルグルコサ
ミン残基をもつ糖をシリカゲルに化学結合させたものを
有効成分とする分離剤並びにＮ−アセチルグルコサミン
残基をもつ糖をリゾチームまたはセルラーゼで分解処理
したのち、シリカゲルに化学結合させたものを有効成分
とする分離剤を提供するものである。
たグルコース直鎖の中で水酸基にＮ−アセチルグルコサ
ミン残基をもつ糖をシリカゲルに化学結合させたものを
有効成分とする分離剤並びにＮ−アセチルグルコサミン
残基をもつ糖をリゾチームまたはセルラーゼで分解処理
したのち、シリカゲルに化学結合させたものを有効成分
とする分離剤を提供するものである。
【０００６】以下、本明細書においては、分子末端ある
いは途中にＮ−アセチルグルコサミン残基を有するβ−
１，４結合したグルコース直鎖をを単に「該直鎖」と称
することがある。
いは途中にＮ−アセチルグルコサミン残基を有するβ−
１，４結合したグルコース直鎖をを単に「該直鎖」と称
することがある。
【０００７】（１）該直鎖の調製法について 本発明に使用する該直鎖は、繊維学会誌、Vol. 47, No.
8, pp456-460(1991)に示されているように、分子中にＮ
−アセチルグルコサミン残基を含むセルロースを培養法
により調製した後、該セルロースの分散懸濁液に酵素を
添加して反応処理をすれば得られる。本培養に用いる微
生物は、基本的にはセルロース生産能を有するものであ
ればよいが、アセトバクター属，グルコバクター属など
の酢酸菌が好ましく、特に前者はセルロース生産能が高
く、より好適である。具体的にはアセトバクター・キシ
リナム(Acetobacter xylinum) ATCC 10245株，アセトバ
クター・キシリナム NBI1051株（FERM P-12000）などが
挙げられる。なお、本発明にはこれら微生物から誘導さ
れた変異株も使用できる。
8, pp456-460(1991)に示されているように、分子中にＮ
−アセチルグルコサミン残基を含むセルロースを培養法
により調製した後、該セルロースの分散懸濁液に酵素を
添加して反応処理をすれば得られる。本培養に用いる微
生物は、基本的にはセルロース生産能を有するものであ
ればよいが、アセトバクター属，グルコバクター属など
の酢酸菌が好ましく、特に前者はセルロース生産能が高
く、より好適である。具体的にはアセトバクター・キシ
リナム(Acetobacter xylinum) ATCC 10245株，アセトバ
クター・キシリナム NBI1051株（FERM P-12000）などが
挙げられる。なお、本発明にはこれら微生物から誘導さ
れた変異株も使用できる。
【０００８】Ｎ−アセチルグルコサミン残基を含むセル
ロースを生産させる培地としては、炭素源としてＮ−ア
セチルグルコサミンを単独でもしくは他の炭素源と組合
わせて使用するものであればよく、さらに窒素源，無機
塩類，その他必要に応じてアミノ酸，ビタミンや微生物
の生育に必要な栄養源を含む。アセトバクター属に属す
る微生物を用いる場合には、ヘキソサミンを炭素源とし
て含有させたSchramm-Hestrin 培地が特に好適である。
Ｎ−アセチルグルコサミンの培地への添加濃度は、微生
物の培養に影響がない範囲で適宜決定すればよく、通常
は0.１〜５％の範囲が望ましい。
ロースを生産させる培地としては、炭素源としてＮ−ア
セチルグルコサミンを単独でもしくは他の炭素源と組合
わせて使用するものであればよく、さらに窒素源，無機
塩類，その他必要に応じてアミノ酸，ビタミンや微生物
の生育に必要な栄養源を含む。アセトバクター属に属す
る微生物を用いる場合には、ヘキソサミンを炭素源とし
て含有させたSchramm-Hestrin 培地が特に好適である。
Ｎ−アセチルグルコサミンの培地への添加濃度は、微生
物の培養に影響がない範囲で適宜決定すればよく、通常
は0.１〜５％の範囲が望ましい。
【０００９】次に、培養条件については、用いる酢酸菌
が生育し、目的とするセルロースを生産する条件であれ
ばよく、通常、ｐＨは５〜９が適当であり、温度は２０
〜４０℃、時間は１〜１０日間が適当である。また、培
養方法については特に制限がなく、通気攪拌培養でも静
置培養でもよい。静置培養の場合は、目的とするセルロ
ースは培養液表面にゲル状物質として生産され、容易に
回収することができるので好ましい。
が生育し、目的とするセルロースを生産する条件であれ
ばよく、通常、ｐＨは５〜９が適当であり、温度は２０
〜４０℃、時間は１〜１０日間が適当である。また、培
養方法については特に制限がなく、通気攪拌培養でも静
置培養でもよい。静置培養の場合は、目的とするセルロ
ースは培養液表面にゲル状物質として生産され、容易に
回収することができるので好ましい。
【００１０】生産されたセルロースは、必要に応じて除
タンパク処理をした後、ブレンダー等の破砕機で離解す
る。離解したセルロースは分散懸濁液にした後、酵素を
添加して反応処理に用いる。酵素は基本的にはＮ−アセ
チルグルコサミニド結合あるいはβ−１，４−グルコシ
ド結合を加水分解できるものであればよく、具体的には
リゾチーム，キチナーゼ，セルラーゼなどが挙げられ
る。なお、反応条件については、用いる酵素が該セルロ
ースのβ−１，４−グルコシド結合やＮ−アセチルグル
コサミニド結合を加水分解できる条件であればよく、通
常、ｐＨは３〜１１、温度は２０〜８０℃、時間は５分
〜２４時間、酵素濃度は１mg／ml以下が適当である。
タンパク処理をした後、ブレンダー等の破砕機で離解す
る。離解したセルロースは分散懸濁液にした後、酵素を
添加して反応処理に用いる。酵素は基本的にはＮ−アセ
チルグルコサミニド結合あるいはβ−１，４−グルコシ
ド結合を加水分解できるものであればよく、具体的には
リゾチーム，キチナーゼ，セルラーゼなどが挙げられ
る。なお、反応条件については、用いる酵素が該セルロ
ースのβ−１，４−グルコシド結合やＮ−アセチルグル
コサミニド結合を加水分解できる条件であればよく、通
常、ｐＨは３〜１１、温度は２０〜８０℃、時間は５分
〜２４時間、酵素濃度は１mg／ml以下が適当である。
【００１１】本発明により製造された分子中にＮ−アセ
チルグルコサミン残基を含むセルロースの酵素反応分解
産物が、分子末端や鎖長の途中にＮ−アセチル残基をも
つことは、セルラーゼやリゾチームの加水分解反応作用
機作や該直鎖にβ−Ｎ−アセチルヘキソサミニダーゼを
作用させると、非還元末端のＮ−アセチルグルコサミン
が遊離してくること、該直鎖のＣ13−ＮＭＲによる解析
やメチル化分析を用いた糖鎖の構造解析等から確認する
ことができる。
チルグルコサミン残基を含むセルロースの酵素反応分解
産物が、分子末端や鎖長の途中にＮ−アセチル残基をも
つことは、セルラーゼやリゾチームの加水分解反応作用
機作や該直鎖にβ−Ｎ−アセチルヘキソサミニダーゼを
作用させると、非還元末端のＮ−アセチルグルコサミン
が遊離してくること、該直鎖のＣ13−ＮＭＲによる解析
やメチル化分析を用いた糖鎖の構造解析等から確認する
ことができる。
【００１２】また、該直鎖の鎖長はＧＰＣ分析測定によ
り重合度として求めることができる。これら該直鎖の鎖
長（数平均重合度、１分子中に含まれるピラノース環の
平均数）は５以上、好ましくは１０以上であり、特に上
限はないが、５００以下であることが取り扱いの容易さ
において好ましい。
り重合度として求めることができる。これら該直鎖の鎖
長（数平均重合度、１分子中に含まれるピラノース環の
平均数）は５以上、好ましくは１０以上であり、特に上
限はないが、５００以下であることが取り扱いの容易さ
において好ましい。
【００１３】（２）シリカゲルについて 本発明に使用するシリカゲルの粒径は１μｍ〜１０ｍｍ
であり、好ましくは１μｍ〜３００μｍである。平均孔
径は１０Å〜１００μｍであり、好ましくは５０Å〜５
００００Åである。
であり、好ましくは１μｍ〜３００μｍである。平均孔
径は１０Å〜１００μｍであり、好ましくは５０Å〜５
００００Åである。
【００１４】本発明中のシラン処理剤としては、具体的
には次の一般式で示されるものが挙げられる。 １）イソチオシアネートを含むシラン処理剤
には次の一般式で示されるものが挙げられる。 １）イソチオシアネートを含むシラン処理剤
【００１５】
【数１】
【００１６】２）イソシアネートを含むシラン処理剤
【００１７】
【数２】
【００１８】３）ハロゲン基を含むシラン処理剤
【００１９】
【数３】
【００２０】ｎ：１より３までの整数で、好ましくは１
である。 Ｒ1 ：１より３０までの炭素数を持つ炭化水素または該
誘導体。 Ｘ：少なくとも１個はハロゲン原子又は炭素数１〜５ま
でのアルコキシ基。 Ｙ：クロル、ブロム、フッ素原子で、好ましくはクロル
原子。
である。 Ｒ1 ：１より３０までの炭素数を持つ炭化水素または該
誘導体。 Ｘ：少なくとも１個はハロゲン原子又は炭素数１〜５ま
でのアルコキシ基。 Ｙ：クロル、ブロム、フッ素原子で、好ましくはクロル
原子。
【００２１】本発明においてシリカゲルのシラン処理
は、上記シラン処理剤を用い公知の方法で実施すること
ができる。
は、上記シラン処理剤を用い公知の方法で実施すること
ができる。
【００２２】（３）該直鎖とシリカゲルの化学結合方法
について シラン処理をしたシリカゲルを該直鎖のＮ−アセチルグ
ルコサミン残基と化学結合させるとき、あらかじめ該直
鎖の有するＮ−アセチルグルコサミン残基をグルコサミ
ン残基に変換した方が取り扱い上好ましく、その処理は
従来より公知である脱アセチル化反応が使用できる。例
えば、該直鎖を１０％ ＮａＯＨ水溶液中、窒素還流
下、２５℃で７７時間処理することによりグルコサミン
残基をもつセルロース直鎖に変換できる。
について シラン処理をしたシリカゲルを該直鎖のＮ−アセチルグ
ルコサミン残基と化学結合させるとき、あらかじめ該直
鎖の有するＮ−アセチルグルコサミン残基をグルコサミ
ン残基に変換した方が取り扱い上好ましく、その処理は
従来より公知である脱アセチル化反応が使用できる。例
えば、該直鎖を１０％ ＮａＯＨ水溶液中、窒素還流
下、２５℃で７７時間処理することによりグルコサミン
残基をもつセルロース直鎖に変換できる。
【００２３】この脱アセチル化処理をした該直鎖をシリ
カゲルと化学結合させるには、シリカゲルの表面にイソ
チオシアネート基やハロゲンを含有するシラン処理剤を
化学結合し、さらに該直鎖のアミノ基と反応させればよ
い。なお、シリカゲルに化学結合させる該直鎖の量は、
シリカゲルに対して0.１〜１００重量％、好ましくは１
〜５０重量％である。
カゲルと化学結合させるには、シリカゲルの表面にイソ
チオシアネート基やハロゲンを含有するシラン処理剤を
化学結合し、さらに該直鎖のアミノ基と反応させればよ
い。なお、シリカゲルに化学結合させる該直鎖の量は、
シリカゲルに対して0.１〜１００重量％、好ましくは１
〜５０重量％である。
【００２４】
【実施例】次に、本発明を製造例および実施例より説明
する。 製造例１ アセトバクター・キシリナムＡＴＣＣ１０２４５を、グ
ルコースの代わりにＮ−アセチルグルコサミン（以下、
GlcNAcと称する。）を炭素源とするSchramm-Hestrin 培
地（GlcNAc 2.０ｇ，バクトペプトン（ディフコ社製）
0.５ｇ，酵母エキス（ディフコ社製）0.５ｇ，クエン酸
0.１１５ｇ，リン酸水素二ナトリウム0.２７ｇ，蒸留
水１００ｍｌ，ｐＨ6.０）１５ｍｌにて３０℃で３日間
の継代培養を５回行ったのち、菌液0.５ｍｌを炭素源と
してグルコース1.５％，GlcNAc0.５％の割合で含むSchr
amm-Hestrin 培地１５ｍｌに植え、３０℃で５日間静置
培養した。
する。 製造例１ アセトバクター・キシリナムＡＴＣＣ１０２４５を、グ
ルコースの代わりにＮ−アセチルグルコサミン（以下、
GlcNAcと称する。）を炭素源とするSchramm-Hestrin 培
地（GlcNAc 2.０ｇ，バクトペプトン（ディフコ社製）
0.５ｇ，酵母エキス（ディフコ社製）0.５ｇ，クエン酸
0.１１５ｇ，リン酸水素二ナトリウム0.２７ｇ，蒸留
水１００ｍｌ，ｐＨ6.０）１５ｍｌにて３０℃で３日間
の継代培養を５回行ったのち、菌液0.５ｍｌを炭素源と
してグルコース1.５％，GlcNAc0.５％の割合で含むSchr
amm-Hestrin 培地１５ｍｌに植え、３０℃で５日間静置
培養した。
【００２５】培養終了後、培養液表面に生産されたゲル
状の膜をとり出し、１％ＳＤＳ溶液で３時間煮沸後、２
％ＮａＯＨ水溶液に３７℃で３時間浸漬する操作を２回
繰り返した。さらに、１％酢酸水溶液で中和後、水洗し
てセルロースを得た。このときのセルロースの収量は培
養液１５ｍｌあたり４〜１６ｍｇであった。
状の膜をとり出し、１％ＳＤＳ溶液で３時間煮沸後、２
％ＮａＯＨ水溶液に３７℃で３時間浸漬する操作を２回
繰り返した。さらに、１％酢酸水溶液で中和後、水洗し
てセルロースを得た。このときのセルロースの収量は培
養液１５ｍｌあたり４〜１６ｍｇであった。
【００２６】製造例２ 製造例１で得た未乾燥のGlcNAc残基を含むセルロースを
0.２Ｍトリメチルピリジン−ＨＣｌバッファー（ｐＨ7.
０）に浸し、水分を該トリメチルピリジンバッファーに
置換後、ワーリング ブレンダーで離解し、離解物を得
た。この離解物を含む懸濁液の吸光値５４０ｎｍを1.０
になるように該トリメチルピリジンバッファー（ｐＨ7.
０）で調整して３７℃にて１時間プレインキュベートし
た。
0.２Ｍトリメチルピリジン−ＨＣｌバッファー（ｐＨ7.
０）に浸し、水分を該トリメチルピリジンバッファーに
置換後、ワーリング ブレンダーで離解し、離解物を得
た。この離解物を含む懸濁液の吸光値５４０ｎｍを1.０
になるように該トリメチルピリジンバッファー（ｐＨ7.
０）で調整して３７℃にて１時間プレインキュベートし
た。
【００２７】次に、酵素最終濃度が５μｇ／ｍｌになる
ように卵白リゾチーム溶液を加え、３７℃で反応させ経
時的にサンプリング３ｍｌを行い、その上清画分を凍結
乾燥後、0.３ｍｌの水で溶解した。しかる後、２０μｌ
をゲルパーミュエーションクロマトグラフィー（ＧＰ
Ｃ）に供し、反応産物の重合度を分析測定した。使用し
たＧＰＣは日立製Ｌ−６０００型で、カラムはアサヒパ
ックＧＳ２２０（7.６ｍｍφ×５０ｃｍ）を使用した。
カラム溶出は、イオン交換水６０℃で行った。そのとき
の溶出速度は、0.５ｍｌ／分であった。分析の結果、重
合度が、１９，１５，７に相当するリゾチーム分解産物
が生産されていることが確認された。
ように卵白リゾチーム溶液を加え、３７℃で反応させ経
時的にサンプリング３ｍｌを行い、その上清画分を凍結
乾燥後、0.３ｍｌの水で溶解した。しかる後、２０μｌ
をゲルパーミュエーションクロマトグラフィー（ＧＰ
Ｃ）に供し、反応産物の重合度を分析測定した。使用し
たＧＰＣは日立製Ｌ−６０００型で、カラムはアサヒパ
ックＧＳ２２０（7.６ｍｍφ×５０ｃｍ）を使用した。
カラム溶出は、イオン交換水６０℃で行った。そのとき
の溶出速度は、0.５ｍｌ／分であった。分析の結果、重
合度が、１９，１５，７に相当するリゾチーム分解産物
が生産されていることが確認された。
【００２８】該直鎖はGlcNAc残基を含むセルロースにＮ
−アセチルグコサミニド結合を加水分解できるリゾチー
ムを作用させた反応産物であることより、少なくとも分
子末端にＮ−アセチルグコサミン残基をもつことがわか
る。
−アセチルグコサミニド結合を加水分解できるリゾチー
ムを作用させた反応産物であることより、少なくとも分
子末端にＮ−アセチルグコサミン残基をもつことがわか
る。
【００２９】実施例１ 製造例２で得た該直鎖のうち重合度１５〜１９のもの
（５ｇ）について１０％ＮａＯＨ水溶液２０ｍｌ中、窒
素還流下、２５℃で７７時間の条件で脱アセチル化処理
することにより末端にグルコサミン残基をもち、β−
１，４結合でつらなるグルコース直鎖４ｇを得た。最後
に６０℃で２時間真空乾燥を行って次のシリカゲルとの
反応に用いた。
（５ｇ）について１０％ＮａＯＨ水溶液２０ｍｌ中、窒
素還流下、２５℃で７７時間の条件で脱アセチル化処理
することにより末端にグルコサミン残基をもち、β−
１，４結合でつらなるグルコース直鎖４ｇを得た。最後
に６０℃で２時間真空乾燥を行って次のシリカゲルとの
反応に用いた。
【００３０】脱アセチル化反応の様子はＩＲスペクトル
にて測定した。測定には、日立製ＩＲＡ−２型赤外分光
光度計を使用した。孔径１０００Åの市販シリカゲル
（Lichrospher Merck 社）４０ｇを１８０℃で２時間真
空乾燥後、反応系内を窒素置換した。これに金属ナトリ
ウムで乾燥したベンゼン４００ｍｌ、ピリジン４ｍｌ、
アミノ基とのみ化学結合できる３−イソチオシアネート
プロピルトリエトキシシラン８ｍｌを加え、１７時間加
熱還流した。反応液をメタノールに注ぎ入れ吸引濾過洗
浄した後、真空乾燥した。
にて測定した。測定には、日立製ＩＲＡ−２型赤外分光
光度計を使用した。孔径１０００Åの市販シリカゲル
（Lichrospher Merck 社）４０ｇを１８０℃で２時間真
空乾燥後、反応系内を窒素置換した。これに金属ナトリ
ウムで乾燥したベンゼン４００ｍｌ、ピリジン４ｍｌ、
アミノ基とのみ化学結合できる３−イソチオシアネート
プロピルトリエトキシシラン８ｍｌを加え、１７時間加
熱還流した。反応液をメタノールに注ぎ入れ吸引濾過洗
浄した後、真空乾燥した。
【００３１】次に、グルコサミン残基を有する該直鎖を
ジメチルスルホキシド（以下、ＤＭＳＯと称する、モレ
キュラーシーブスにて脱水）に溶かし、この溶液に表面
処理をしたシリカゲルを加えて１０時間加熱還流した。
加熱停止後、グラスフィルターにて吸引濾過し、ＤＭＳ
Ｏで洗浄した。反応で得られた白色の結晶をメタノー
ル，アセトン，ヘキサンで濾過洗浄したが、濾液からは
該直鎖は検出されなかった。以上の操作より、該直鎖の
グルコサミン残基をシリカゲルと化学結合させた白色の
結晶化合物を得ることができた。このシリカゲルを高速
液体クロマトグラフィー用充填剤として使用した。
ジメチルスルホキシド（以下、ＤＭＳＯと称する、モレ
キュラーシーブスにて脱水）に溶かし、この溶液に表面
処理をしたシリカゲルを加えて１０時間加熱還流した。
加熱停止後、グラスフィルターにて吸引濾過し、ＤＭＳ
Ｏで洗浄した。反応で得られた白色の結晶をメタノー
ル，アセトン，ヘキサンで濾過洗浄したが、濾液からは
該直鎖は検出されなかった。以上の操作より、該直鎖の
グルコサミン残基をシリカゲルと化学結合させた白色の
結晶化合物を得ることができた。このシリカゲルを高速
液体クロマトグラフィー用充填剤として使用した。
【００３２】応用例１ 実施例１で得られた充填剤を内径4.６mm，長さ２５０mm
のステンレススチール製のカラムにスラリー充填法で充
填した。高速液体クロマトグラフィーには島津製作所製
のＬＣ７Ａを使用した。検知器には紫外吸収測定器：島
津製作所製のＳＰＤ−７Ａと旋光計：堀場製作所製ＳＥ
ＰＡ−２００（セル：５×0.３(id)cm）を使用した。作
製したカラムの元素分析値および結合量を表１に示す。
ここで結合量とは、得られた充填剤中で該直鎖の占める
重量％を示す。
のステンレススチール製のカラムにスラリー充填法で充
填した。高速液体クロマトグラフィーには島津製作所製
のＬＣ７Ａを使用した。検知器には紫外吸収測定器：島
津製作所製のＳＰＤ−７Ａと旋光計：堀場製作所製ＳＥ
ＰＡ−２００（セル：５×0.３(id)cm）を使用した。作
製したカラムの元素分析値および結合量を表１に示す。
ここで結合量とは、得られた充填剤中で該直鎖の占める
重量％を示す。
【００３３】
【表１】
【００３４】作成したカラムのメタノール溶媒でアセト
ンに対する理論段数は７０００程度であった。作成した
カラムを用いて、スティルビンオキサイドを溶媒にメタ
ノールを用いて光学分割したところ、分離係数α＝1.３
４、分離度Ｒｓ＝1.６３となり、セルロースを１８ｗｔ
％シリカゲルに物理吸着させたカラムよりも同じ測定条
件で良い分離結果が得られた。
ンに対する理論段数は７０００程度であった。作成した
カラムを用いて、スティルビンオキサイドを溶媒にメタ
ノールを用いて光学分割したところ、分離係数α＝1.３
４、分離度Ｒｓ＝1.６３となり、セルロースを１８ｗｔ
％シリカゲルに物理吸着させたカラムよりも同じ測定条
件で良い分離結果が得られた。
【００３５】
【発明の効果】本発明のＮ−アセチルグルコサミン残基
をもつ糖をシリカゲルと化学結合させた化合物を分離剤
としてクロマトグラフィーに用いれば、光学異性体や類
似化合物の分離等を効率よく行うことができる。
をもつ糖をシリカゲルと化学結合させた化合物を分離剤
としてクロマトグラフィーに用いれば、光学異性体や類
似化合物の分離等を効率よく行うことができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 川村 吉也 愛知県江南市古知野町古渡132
Claims (2)
- 【請求項１】 β−１，４−結合をしたグルコース直鎖
の中で水酸基にＮ−アセチルグルコサミン残基をもつ糖
をシリカゲルに化学結合させたものを有効成分とする分
離剤。 - 【請求項２】 Ｎ−アセチルグルコサミン残基をもつ糖
をリゾチームまたはセルラーゼで分解処理したのち、シ
リカゲルに化学結合させたものを有効成分とする分離
剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4087499A JPH05255129A (ja) | 1992-03-12 | 1992-03-12 | 分離剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4087499A JPH05255129A (ja) | 1992-03-12 | 1992-03-12 | 分離剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05255129A true JPH05255129A (ja) | 1993-10-05 |
Family
ID=13916673
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4087499A Pending JPH05255129A (ja) | 1992-03-12 | 1992-03-12 | 分離剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05255129A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006107081A1 (ja) * | 2005-03-31 | 2006-10-12 | Daicel Chemical Industries, Ltd. | 光学異性体分離剤 |
-
1992
- 1992-03-12 JP JP4087499A patent/JPH05255129A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006107081A1 (ja) * | 2005-03-31 | 2006-10-12 | Daicel Chemical Industries, Ltd. | 光学異性体分離剤 |
| JP4871861B2 (ja) * | 2005-03-31 | 2012-02-08 | 株式会社ダイセル | 光学異性体分離剤 |
| US8679346B2 (en) | 2005-03-31 | 2014-03-25 | Daicel Corporation | Optical-isomer-separating agent |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4303787A (en) | Process for recovering cyclodextrins | |
| US20060166335A1 (en) | Glucuronofucan sulfate | |
| Osman et al. | Structure of an acidic exopolysaccharide of Pseudomonas marginalis HT041B | |
| JP3181337B2 (ja) | キトサンオリゴ糖混合物の製造方法、及びキチンオリゴ糖混合物の製造方法 | |
| US4958016A (en) | Bifunctional oligosaccharides and also active compounds derived therefrom | |
| JP4262601B2 (ja) | 硫酸化フカン | |
| Konno et al. | Cellouronate (β-1, 4-linked polyglucuronate) lyase from Brevundimonas sp. SH203: Purification and characterization | |
| WO2000039321A1 (de) | α-1,4-GLUCANKETTEN ENTHALTENDE POLYSACCHARIDE SOWIE VERFAHREN ZU IHRER HERSTELLUNG | |
| US5686132A (en) | Glucans having a cycle structure, and processes for preparing the same | |
| US5330903A (en) | Method for producing capsular polysaccharides | |
| JPH05255129A (ja) | 分離剤 | |
| DE69433102T2 (de) | N-Acetyl-D-Glucosamin Deacetylase und Verfahren zu deren Herstellung | |
| KR20040008145A (ko) | 황산화 푸코글루쿠로노만난 | |
| KR100903771B1 (ko) | 황산화 푸칸 올리고당 | |
| JPH0614789A (ja) | 分岐シクロデキストリンの製造方法 | |
| US5364794A (en) | Process for producing saccharides | |
| US5861505A (en) | Synthetic analog of sialic Lewis antigen from bacterial capsular polysaccharide | |
| JPH02252701A (ja) | 新規環状イヌロオリゴ糖およびその製造法 | |
| JP2002095493A (ja) | 酢酸菌の菌膜を形成する多糖及びその精製方法 | |
| JP3012924B2 (ja) | ２−メチル−｛４−Ｏ−（２−アミノ−２−デオキシ−β−グルコピラノシル）−１、２−ジデオキシ−α−グルコピラノ｝（２、１−ｄ）−２−オキサゾリンおよびその塩 | |
| AU738188B2 (en) | Galactosylated hydroxyalkyl polysaccharides and their derivatives | |
| JPH06277085A (ja) | 低分子量分岐β−１，３−グルカン及び分岐ラミナリオリゴ糖の製造方法 | |
| JP2639221B2 (ja) | 糖類の製造法 | |
| JPH0248561B2 (ja) | ||
| JP3599640B2 (ja) | キトサンの低分子化方法 |