JPH05219947A - ポリフェノール配糖体合成能を有する酵素 - Google Patents
ポリフェノール配糖体合成能を有する酵素Info
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- JPH05219947A JPH05219947A JP4027926A JP2792692A JPH05219947A JP H05219947 A JPH05219947 A JP H05219947A JP 4027926 A JP4027926 A JP 4027926A JP 2792692 A JP2792692 A JP 2792692A JP H05219947 A JPH05219947 A JP H05219947A
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 広範囲の糖基質とポリフェノール受容体を原
料として、ポリフェノール配糖体を高い合成効率で生成
する酵素を提供する。 【構成】 サイクロデキストリン合成能およびマルトー
ス分解能を有さず、ポリフェノール配糖体合成能を有す
る酵素。
料として、ポリフェノール配糖体を高い合成効率で生成
する酵素を提供する。 【構成】 サイクロデキストリン合成能およびマルトー
ス分解能を有さず、ポリフェノール配糖体合成能を有す
る酵素。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は、ポリフェノール配糖
体合成能を有する新規な酵素、酵素の製造法およびこの
酵素を用いるポリフェノール配糖体の製造法に関する。
体合成能を有する新規な酵素、酵素の製造法およびこの
酵素を用いるポリフェノール配糖体の製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ポリフェノール配糖体は、従来から、例
えば、甘味料、鎮痛剤、下剤、抗マラリヤ剤および強壮
剤等として利用されているが、本件出願人は先に、肝斑
や雀斑等の原因となるメラニン色素の生成に関与するチ
ロシナーゼの酵素作用を阻害して優れた美白効果を発揮
するポリフェノール配糖体を提供した(特願平３−３４
１５１号)。この場合、該ポリフェノール配糖体の合成
用酵素として、バシルス・マセランス(Ｂacillus mace
rans)ＩＦＯ３４９０株から分泌されるシクロマルトデ
キストリン−グルカノトランスフェラーゼ(ＣＧＴアー
ゼ)(「大阪市立工業研究所報告第５６回(１９７８年)」、
第１９頁〜第２４頁参照)を使用した。しかしながら、
ＣＧＴアーゼには、配糖体合成効率が一般に低いだけで
なく(０.５〜１％)、活性を糖基質やポリフェノール受
容体の種類が非常に制限されるという難点がある。
えば、甘味料、鎮痛剤、下剤、抗マラリヤ剤および強壮
剤等として利用されているが、本件出願人は先に、肝斑
や雀斑等の原因となるメラニン色素の生成に関与するチ
ロシナーゼの酵素作用を阻害して優れた美白効果を発揮
するポリフェノール配糖体を提供した(特願平３−３４
１５１号)。この場合、該ポリフェノール配糖体の合成
用酵素として、バシルス・マセランス(Ｂacillus mace
rans)ＩＦＯ３４９０株から分泌されるシクロマルトデ
キストリン−グルカノトランスフェラーゼ(ＣＧＴアー
ゼ)(「大阪市立工業研究所報告第５６回(１９７８年)」、
第１９頁〜第２４頁参照)を使用した。しかしながら、
ＣＧＴアーゼには、配糖体合成効率が一般に低いだけで
なく(０.５〜１％)、活性を糖基質やポリフェノール受
容体の種類が非常に制限されるという難点がある。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】この発明は、ポリフェ
ノール配糖体の合成効率が高く、広範囲の糖基質やポリ
フェノール受容体に対して活性を示すポリフェノール配
糖体合成能を有する新規な酵素を提供するためになされ
たものである。
ノール配糖体の合成効率が高く、広範囲の糖基質やポリ
フェノール受容体に対して活性を示すポリフェノール配
糖体合成能を有する新規な酵素を提供するためになされ
たものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】即ちこの発明は、サイク
ロデキストリン合成能およびマルトース分解能を有さ
ず、ポリフェノール配糖体合成能を有する酵素に関す
る。本発明による酵素は、サイクロデキストリン合成能
およびマルトース分解能を有さないが、ポリフェノール
配糖体合成能を有する新規な酵素である。本発明による
酵素は、サイクロデキストリン合成能を有さないという
点で、ＣＧＴアーゼとは基本的に相違し、また、マルト
ース分解能を有さないという点で、細菌糖化型α−アミ
ラーゼ(ＢＳＡ)(「ハンドブック・オブ・アミラーゼ・ア
ンド・リレイテッド・エンザイムズ(Ｈandbook of Ａmy
lase and Ｒelated Ｅnzymse)」、パーガモン・プレス
(Ｐergamon Ｐress)発行、第４３頁(１９８８年)参照)
とは本質的に相違する。
ロデキストリン合成能およびマルトース分解能を有さ
ず、ポリフェノール配糖体合成能を有する酵素に関す
る。本発明による酵素は、サイクロデキストリン合成能
およびマルトース分解能を有さないが、ポリフェノール
配糖体合成能を有する新規な酵素である。本発明による
酵素は、サイクロデキストリン合成能を有さないという
点で、ＣＧＴアーゼとは基本的に相違し、また、マルト
ース分解能を有さないという点で、細菌糖化型α−アミ
ラーゼ(ＢＳＡ)(「ハンドブック・オブ・アミラーゼ・ア
ンド・リレイテッド・エンザイムズ(Ｈandbook of Ａmy
lase and Ｒelated Ｅnzymse)」、パーガモン・プレス
(Ｐergamon Ｐress)発行、第４３頁(１９８８年)参照)
とは本質的に相違する。
【０００５】本発明による酵素は、例えば、バシルス属
(Ｂacillus)の細菌から生産される。好適なバシルス属
の細菌としては、バシルス・ズブチリス(Ｂacillus sub
til-is)Ｋ−５３１−１(微工研菌寄第１２６６８号)、
バシルス・スブチリスＫ−５３１−８６(微工研菌寄第
１２６６９号)、バシルス・スリンジエンシス(Ｂac-ill
us thuringiensis)(ＩＦＯ ３９５１)、バシルス・リ
ケニホルミス(Ｂacilluslicheniformis)(ＡＴＣＣ２５
９７２)およびバシルス・アミロリケファシエンス(Ｂac
illus amyloliquefaciens)(ＩＦＯ１４１４１)等が例示
される。
(Ｂacillus)の細菌から生産される。好適なバシルス属
の細菌としては、バシルス・ズブチリス(Ｂacillus sub
til-is)Ｋ−５３１−１(微工研菌寄第１２６６８号)、
バシルス・スブチリスＫ−５３１−８６(微工研菌寄第
１２６６９号)、バシルス・スリンジエンシス(Ｂac-ill
us thuringiensis)(ＩＦＯ ３９５１)、バシルス・リ
ケニホルミス(Ｂacilluslicheniformis)(ＡＴＣＣ２５
９７２)およびバシルス・アミロリケファシエンス(Ｂac
illus amyloliquefaciens)(ＩＦＯ１４１４１)等が例示
される。
【０００６】従って、本発明による酵素の特に好適な製
法は、バシルス属の細菌、就中、バシルス・ズブチリス
Ｋ−５３１−１等の上記の細菌を培養して得られる培養
物を精製処理に付す方法である。培地成分としては、各
種の炭素源(例えば、可溶性澱粉、コーンスチープリカ
ー、脱脂大豆、デキストリン、グリセロールおよびグル
コース等)、窒素源(例えば、ポリペプトン、脱脂大豆、
硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、アミノ酸、酵母
エキス、カゼイン、肉エキス、コラーゲンおよびゼラチ
ン等)、無機塩類(例えば、カリウム、ナトリウム、マグ
ネシウム、鉄、亜鉛、マンガン、銅、コバルト、カルシ
ウム、酸化モリブデンなどの硫酸塩、塩酸塩、硝酸塩、
酢酸塩等)およびビタミン類(例えば、ビオチン、ビタミ
ンＢ1、リボフラビン、パントテン酸、ピリドキシン、
ビリドキサール、ピリドキサミン、ニコチン酸ｐ−アミ
ノ安息香酸および葉酸等)を適宜使用すればよい。好適
な培地は、可溶性澱粉、ポリペプトンおよび塩化ナトリ
ウムを主成分とし、さらに無機酸の金属塩、例えば、燐
酸二カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸第一鉄、硫酸亜
鉛、硫酸銅および硫酸マンガン等を適宜含有する水性培
地である。この種の金属塩を添加することによって、該
酵素の生産量はほぼ倍増する。
法は、バシルス属の細菌、就中、バシルス・ズブチリス
Ｋ−５３１−１等の上記の細菌を培養して得られる培養
物を精製処理に付す方法である。培地成分としては、各
種の炭素源(例えば、可溶性澱粉、コーンスチープリカ
ー、脱脂大豆、デキストリン、グリセロールおよびグル
コース等)、窒素源(例えば、ポリペプトン、脱脂大豆、
硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、アミノ酸、酵母
エキス、カゼイン、肉エキス、コラーゲンおよびゼラチ
ン等)、無機塩類(例えば、カリウム、ナトリウム、マグ
ネシウム、鉄、亜鉛、マンガン、銅、コバルト、カルシ
ウム、酸化モリブデンなどの硫酸塩、塩酸塩、硝酸塩、
酢酸塩等)およびビタミン類(例えば、ビオチン、ビタミ
ンＢ1、リボフラビン、パントテン酸、ピリドキシン、
ビリドキサール、ピリドキサミン、ニコチン酸ｐ−アミ
ノ安息香酸および葉酸等)を適宜使用すればよい。好適
な培地は、可溶性澱粉、ポリペプトンおよび塩化ナトリ
ウムを主成分とし、さらに無機酸の金属塩、例えば、燐
酸二カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸第一鉄、硫酸亜
鉛、硫酸銅および硫酸マンガン等を適宜含有する水性培
地である。この種の金属塩を添加することによって、該
酵素の生産量はほぼ倍増する。
【０００７】培地のpＨは燐酸緩衝液や酸およびアルカ
リ水溶液を用いて５〜９に調整する。培地のpＨがこの
範囲外になると、酵素失活を招き、収量が大きく低下す
る。培養温度は通常２５〜５０℃である。培養効率の観
点からは、培養は、種培養と本培養の二段階に分けてお
こなうのが好ましい。通常、種培養は液体振盪培養でお
こない(振盪数:８０〜２００rpm、培養時間:１６〜３０
時間)、本培養は通気撹拌培養でおこなう(撹拌数:１０
０〜３００rpm、通気量:２〜５l／min、培養時間:２０
〜１２０時間)。但し、撹拌数、通気量、培養時間は培
養装置の形状、大きさによって大きく変化する。
リ水溶液を用いて５〜９に調整する。培地のpＨがこの
範囲外になると、酵素失活を招き、収量が大きく低下す
る。培養温度は通常２５〜５０℃である。培養効率の観
点からは、培養は、種培養と本培養の二段階に分けてお
こなうのが好ましい。通常、種培養は液体振盪培養でお
こない(振盪数:８０〜２００rpm、培養時間:１６〜３０
時間)、本培養は通気撹拌培養でおこなう(撹拌数:１０
０〜３００rpm、通気量:２〜５l／min、培養時間:２０
〜１２０時間)。但し、撹拌数、通気量、培養時間は培
養装置の形状、大きさによって大きく変化する。
【０００８】上記の培養法によって得られる培養物の精
製処理法は特に限定的ではなく、従来から酵素の精製法
として知られている方法を適宜採用すればよいが、好適
な精製法としては下記の工程(i)〜(ix)から成る方法が
例示される: (i)培養液を遠心分離処理あるいは濾過に付すことによ
って培養上清を採取する。 (ii)培養上清をカチオンカラム(例えば、アンバーライ
トＣＧ５０、ＣＭ−トヨパール、ＣＭ−セファロース、
ＣＭ−セルロース、５Ｐ−セファロースおよびＣＭ−セ
ルロファイン等)を用いるクロマトグラフィー処理に付
す。 (iii)溶出液を限外濾過、塩析または有機溶媒沈殿によ
る濃縮処理に付す。 (iv)濃縮液を透析処理に付す。 (v)透析内液をアニオンカラム(例えば、ＤＥＡＥ−セフ
ァロースＣＬ−６Ｂ、デュオライトＡ−７、ＱＡＥ−セ
ファロース、ＤＥＡＥ−セルロース、ＤＥＡＥ−セルロ
ファインおよびＤＥＡＥ−トヨパール等)を用いるクロ
マトグラフィー処理に付す。 (vi)溶出液を限外濾過膜等を用いる濃縮処理に付す。 (vii)濃縮液を高速液体クロマトグラフィー(例えば、Ｔ
sk−ゲルＤＥＡＥ−５ＰＷカラム)またはアフィニティ
ークロマトグラフィー処理に付す。 (viii)溶出液を限外濾過膜等を用いる濃縮処理に付す。 (ix)濃縮液をカラム(例えば、セファデックスＧ−７
５、セファロース６ＢおよびトヨパールＨＷ−５５等)
を用いるゲル濾過処理に付す。 場合によっては、澱粉吸着処理等も有効である。上記の
精製処理によって、酵素の精製倍率は約１０００〜３０
００となる。勿論、上記精製のステップの順序を変えた
り、一部を省略することも可能であり、酵素の使用目的
によっては精製倍率を必要最小限にすることも可能であ
る。
製処理法は特に限定的ではなく、従来から酵素の精製法
として知られている方法を適宜採用すればよいが、好適
な精製法としては下記の工程(i)〜(ix)から成る方法が
例示される: (i)培養液を遠心分離処理あるいは濾過に付すことによ
って培養上清を採取する。 (ii)培養上清をカチオンカラム(例えば、アンバーライ
トＣＧ５０、ＣＭ−トヨパール、ＣＭ−セファロース、
ＣＭ−セルロース、５Ｐ−セファロースおよびＣＭ−セ
ルロファイン等)を用いるクロマトグラフィー処理に付
す。 (iii)溶出液を限外濾過、塩析または有機溶媒沈殿によ
る濃縮処理に付す。 (iv)濃縮液を透析処理に付す。 (v)透析内液をアニオンカラム(例えば、ＤＥＡＥ−セフ
ァロースＣＬ−６Ｂ、デュオライトＡ−７、ＱＡＥ−セ
ファロース、ＤＥＡＥ−セルロース、ＤＥＡＥ−セルロ
ファインおよびＤＥＡＥ−トヨパール等)を用いるクロ
マトグラフィー処理に付す。 (vi)溶出液を限外濾過膜等を用いる濃縮処理に付す。 (vii)濃縮液を高速液体クロマトグラフィー(例えば、Ｔ
sk−ゲルＤＥＡＥ−５ＰＷカラム)またはアフィニティ
ークロマトグラフィー処理に付す。 (viii)溶出液を限外濾過膜等を用いる濃縮処理に付す。 (ix)濃縮液をカラム(例えば、セファデックスＧ−７
５、セファロース６ＢおよびトヨパールＨＷ−５５等)
を用いるゲル濾過処理に付す。 場合によっては、澱粉吸着処理等も有効である。上記の
精製処理によって、酵素の精製倍率は約１０００〜３０
００となる。勿論、上記精製のステップの順序を変えた
り、一部を省略することも可能であり、酵素の使用目的
によっては精製倍率を必要最小限にすることも可能であ
る。
【０００９】上記の特性を有する本発明による酵素は、
広範囲の糖基質を加水分解し、種々のポリフェノール類
にグルコースを転移させ、これによって多種多様なポリ
フェノール配糖体が得られる。この種の糖基質およびポ
リフェノール受容体としては下記のものが例示される:糖基質 : 澱粉、アミロペクチン、マルトオリゴ糖(Ｇ3
〜Ｇ7)。ポリフェノール受容体 : カテキン、カフェー酸、コウ
ジ酸、ハイドロキノン、カテコール、レゾルシノール、
プロトカテキュー酸、α−レゾルシル酸、フロログルシ
トール、没食子酸。
広範囲の糖基質を加水分解し、種々のポリフェノール類
にグルコースを転移させ、これによって多種多様なポリ
フェノール配糖体が得られる。この種の糖基質およびポ
リフェノール受容体としては下記のものが例示される:糖基質 : 澱粉、アミロペクチン、マルトオリゴ糖(Ｇ3
〜Ｇ7)。ポリフェノール受容体 : カテキン、カフェー酸、コウ
ジ酸、ハイドロキノン、カテコール、レゾルシノール、
プロトカテキュー酸、α−レゾルシル酸、フロログルシ
トール、没食子酸。
【００１０】本発明に包含されるポリフェノール配糖体
の新規な製造法は、澱粉等の糖基質およびカテキン等の
ポリフェノール受容体を、上述の酵素の存在下で反応さ
せる方法である。この反応は、通常、燐酸緩衝液等の緩
衝液を用いて反応系のpＨを約４〜９に調整し、約１０
〜６０℃で約３〜７０時間おこなう。反応溶媒として
は、水,メタノール／水(５〜５０体積％),エタノール／
水(５〜５０体積％),酢酸エチル／水(１０〜８０体積
％)等が例示される。又、使用する酵素を不倍性担体に
固定化することにより製造したポリフェノール配糖体か
ら酵素を除くステップを省略することもできる。以下、
本発明を実施例によって説明する。
の新規な製造法は、澱粉等の糖基質およびカテキン等の
ポリフェノール受容体を、上述の酵素の存在下で反応さ
せる方法である。この反応は、通常、燐酸緩衝液等の緩
衝液を用いて反応系のpＨを約４〜９に調整し、約１０
〜６０℃で約３〜７０時間おこなう。反応溶媒として
は、水,メタノール／水(５〜５０体積％),エタノール／
水(５〜５０体積％),酢酸エチル／水(１０〜８０体積
％)等が例示される。又、使用する酵素を不倍性担体に
固定化することにより製造したポリフェノール配糖体か
ら酵素を除くステップを省略することもできる。以下、
本発明を実施例によって説明する。
【００１１】
【実施例】実施例１ 可溶性澱粉２w／v％、ポリペプトン０．５w／v％、塩化
ナトリウム０．０５w／v％、燐酸二カリウム０．１w／v
％、硫酸マグネシウム０．０５w／v％、硫酸第一鉄０．
００１w／v％、硫酸亜鉛０．０００１w／v％、硫酸銅
０．０００１w／v％および硫酸マンガン０．０００１w
／v％含有する水溶液(pＨ６．５)を１２１℃で１５分間
加圧滅菌することによって培地を調製した。坂口フラス
コ(５００ml)内へ該培地を１００ml入れ、次いでバシル
ス・ズブチリスＫ−５３１−８６を１白金耳量植菌し、
１２０rpmの条件下、３０℃で２４時間振盪培養した(種
培養)。上記のようにして新たに調製した培地３lに、該
培養液を混入させ、該混合物をミニジャー(５l)内にお
いて、撹拌数２００rpmおよび通気量３l／minの条件下
において、３０℃で７２時間にわたって通気撹拌培養し
た(本培養)。
ナトリウム０．０５w／v％、燐酸二カリウム０．１w／v
％、硫酸マグネシウム０．０５w／v％、硫酸第一鉄０．
００１w／v％、硫酸亜鉛０．０００１w／v％、硫酸銅
０．０００１w／v％および硫酸マンガン０．０００１w
／v％含有する水溶液(pＨ６．５)を１２１℃で１５分間
加圧滅菌することによって培地を調製した。坂口フラス
コ(５００ml)内へ該培地を１００ml入れ、次いでバシル
ス・ズブチリスＫ−５３１−８６を１白金耳量植菌し、
１２０rpmの条件下、３０℃で２４時間振盪培養した(種
培養)。上記のようにして新たに調製した培地３lに、該
培養液を混入させ、該混合物をミニジャー(５l)内にお
いて、撹拌数２００rpmおよび通気量３l／minの条件下
において、３０℃で７２時間にわたって通気撹拌培養し
た(本培養)。
【００１２】培養液２．７lを遠心分離処理(９０００rp
m:１５分間)に付すことによって得られた培養上清２．
６５lを、１Ｍ酢酸を用いてpＨを５．０に調整した後、
５０mＭ酢酸緩衝液(pＨ５．０)を用いて平衡化したアン
バーライトＣＧ５０カラム(１５．９cm2×２７cm)に注
入し、該酢酸緩衝液７．５lを用いて洗浄した。次い
で、０．５Ｍ燐酸カリウム緩衝液(pＨ７．０)を用い、
流速１．６l／hrで溶出をおこない、溶出量１l〜３lに
かけての溶出液２０４０mlを、分画分子量３０００の限
外濾過膜(旭化成工業株式会社製ペンシル型モジュール
ＳＥＰ−００１３)を用いて１５０mlまで濃縮し、該濃
縮液を、０．５Ｍ燐酸二カリウム水溶液を用いてpＨを
７．０に調整した後、１０倍量の水に対し、４℃で１６
時間透析をおこなった。
m:１５分間)に付すことによって得られた培養上清２．
６５lを、１Ｍ酢酸を用いてpＨを５．０に調整した後、
５０mＭ酢酸緩衝液(pＨ５．０)を用いて平衡化したアン
バーライトＣＧ５０カラム(１５．９cm2×２７cm)に注
入し、該酢酸緩衝液７．５lを用いて洗浄した。次い
で、０．５Ｍ燐酸カリウム緩衝液(pＨ７．０)を用い、
流速１．６l／hrで溶出をおこない、溶出量１l〜３lに
かけての溶出液２０４０mlを、分画分子量３０００の限
外濾過膜(旭化成工業株式会社製ペンシル型モジュール
ＳＥＰ−００１３)を用いて１５０mlまで濃縮し、該濃
縮液を、０．５Ｍ燐酸二カリウム水溶液を用いてpＨを
７．０に調整した後、１０倍量の水に対し、４℃で１６
時間透析をおこなった。
【００１３】透析内液を、５０mＭ燐酸カリウム緩衝液
(pＨ７．０)を用いて平衡化したＤＥＡＥセファロース
ＣＬ６Ｂカラム(１１．９cm2×１６cm)に注入し、該緩
衝液を用いて洗浄した(４００ml／hr)。洗浄液量２５０
〜５５０mlにかけて溶出した溶出液３００mlを、前記の
限外濾過膜を用いて５mlまで濃縮し、該濃縮液を、０.
２ＭＮａＣｌを含む２０ｍＭ燐酸カリウム緩衝液(ｐＨ
７.０)を用いて平均化したセファデックスＧ−１５０カ
ラム(５.３ｃｍ2×９３ｃｍ)を用いるゲル濾過処理に付
した。該緩衝液を用いて溶出をおこない、溶出液量２６
０〜３００ｍｌにかけての溶出液４０ｍｌを得た。該酵
素液は電気泳動的に単一であった。上述の一連の精製過
程の結果を以下の表１にまとめて示す。
(pＨ７．０)を用いて平衡化したＤＥＡＥセファロース
ＣＬ６Ｂカラム(１１．９cm2×１６cm)に注入し、該緩
衝液を用いて洗浄した(４００ml／hr)。洗浄液量２５０
〜５５０mlにかけて溶出した溶出液３００mlを、前記の
限外濾過膜を用いて５mlまで濃縮し、該濃縮液を、０.
２ＭＮａＣｌを含む２０ｍＭ燐酸カリウム緩衝液(ｐＨ
７.０)を用いて平均化したセファデックスＧ−１５０カ
ラム(５.３ｃｍ2×９３ｃｍ)を用いるゲル濾過処理に付
した。該緩衝液を用いて溶出をおこない、溶出液量２６
０〜３００ｍｌにかけての溶出液４０ｍｌを得た。該酵
素液は電気泳動的に単一であった。上述の一連の精製過
程の結果を以下の表１にまとめて示す。
【００１４】
【表１】
【００１５】表−１中の活性量(単位)およびタンパク量
(mg)は下記の方法によって算出した値である。活性量 可溶性澱粉を５０mＭ燐酸ナトリウム緩衝液(pＨ７．０)
に０．５w／v％の濃度で溶解した溶液０．４５mlに酵素
液０．０５mlを加え、４０℃で１０分間反応をおこなっ
た後、０．５Ｎ塩酸１．０mlを添加することによって反
応を停止させ、次いで、ヨウ素５mgとヨウ化カリウム５
０mgを水１００mlに溶解させた溶液２．５mlを加え、室
温で２０分間放置後、６６０nmにおける吸光度を測定
し、該吸光度を１分間に１％低下させる酵素量を１単位
とした(ブランクテストは、酵素の替りに上記緩衝液を
用いる以外は上記と同様の操作によっておこなった)。タンパク量 次式によって算出した: タンパク量(mg)＝(２８０nmにおける吸光度)×試料の容
量（ｍｌ）
(mg)は下記の方法によって算出した値である。活性量 可溶性澱粉を５０mＭ燐酸ナトリウム緩衝液(pＨ７．０)
に０．５w／v％の濃度で溶解した溶液０．４５mlに酵素
液０．０５mlを加え、４０℃で１０分間反応をおこなっ
た後、０．５Ｎ塩酸１．０mlを添加することによって反
応を停止させ、次いで、ヨウ素５mgとヨウ化カリウム５
０mgを水１００mlに溶解させた溶液２．５mlを加え、室
温で２０分間放置後、６６０nmにおける吸光度を測定
し、該吸光度を１分間に１％低下させる酵素量を１単位
とした(ブランクテストは、酵素の替りに上記緩衝液を
用いる以外は上記と同様の操作によっておこなった)。タンパク量 次式によって算出した: タンパク量(mg)＝(２８０nmにおける吸光度)×試料の容
量（ｍｌ）
【００１６】酵素の分子量 上で得た酵素の分子量を、ゲル濾過法で測定した。酵素
液を、ｐＨ７．０の２０ｍＭの燐酸カリウム緩衝液
（０．２Ｍの食塩を含む)で平衡化したセファデックス
Ｇ−７５のカラム(１．６６ｃｍ2×５０ｃｍ)に加え、
該緩衝液で溶出した。分子量マーカーとして牛血清アル
ブミン(分子量６７０００)、卵白アルブミン(分子量、
４３０００)、キモトリプシノーゲン(分子量、２５００
０)、リボヌクレアーゼＡ(分子量、１３７００)を用い
た。その結果、酵素の分子量は２９５００であった。
液を、ｐＨ７．０の２０ｍＭの燐酸カリウム緩衝液
（０．２Ｍの食塩を含む)で平衡化したセファデックス
Ｇ−７５のカラム(１．６６ｃｍ2×５０ｃｍ)に加え、
該緩衝液で溶出した。分子量マーカーとして牛血清アル
ブミン(分子量６７０００)、卵白アルブミン(分子量、
４３０００)、キモトリプシノーゲン(分子量、２５００
０)、リボヌクレアーゼＡ(分子量、１３７００)を用い
た。その結果、酵素の分子量は２９５００であった。
【００１７】酵素の等電点 上で得た酵素の等電点を、ショ糖密度勾配等電点電気泳
動法(蛋白質・酵素の基礎実験法、堀尾武一、山下仁平
編(南江堂発行)、第２５０頁〜第２６９頁(１９８１年)
参照)によって測定した。実施例１で調製した酵素液
を、ｐＨ３．５〜１０．０のキャリア−アンフォライト
(ＬＫＢ社製)および１１０ｍｌ容泳動カラム(ＬＫＢ社
製)を用い、４００〜６００Ｖで４０時間泳動した。そ
の結果、酵素の等電点は、５．１であった。
動法(蛋白質・酵素の基礎実験法、堀尾武一、山下仁平
編(南江堂発行)、第２５０頁〜第２６９頁(１９８１年)
参照)によって測定した。実施例１で調製した酵素液
を、ｐＨ３．５〜１０．０のキャリア−アンフォライト
(ＬＫＢ社製)および１１０ｍｌ容泳動カラム(ＬＫＢ社
製)を用い、４００〜６００Ｖで４０時間泳動した。そ
の結果、酵素の等電点は、５．１であった。
【００１８】ｐＨと酵素活性 上で得た酵素の活性におよぼすｐＨの影響(作用最適ｐ
Ｈ)、該活性におよぼす温度の影響、該活性におよぼす
ｐＨの影響(ｐＨ安定範囲)および該酵素の熟安定性を常
法によって調べ、結果をそれぞれ図１、図２、図３およ
び図４に示す。酵素の活性試験は下記実施例２に準拠し
ておこなった。図１および図３において、符号１、２お
よび３はそれぞれ緩衝液として酢酸塩緩衝液を用いた場
合、燐酸ナトリウム緩衝液を用いた場合および硼酸緩衝
液を用いた場合を示す。なお、図３においては、緩衝液
として０．１Ｍ燐酸ナトリウム緩衝液(ｐＨ８．０)を使
用し、熱処理は４０℃で３０分間おこなった。また、図
４においては、緩衝液として０．１Ｍ燐酸ナトリウム緩
衝液を使用し、熱処理は各温度において３０分間おこな
った。
Ｈ)、該活性におよぼす温度の影響、該活性におよぼす
ｐＨの影響(ｐＨ安定範囲)および該酵素の熟安定性を常
法によって調べ、結果をそれぞれ図１、図２、図３およ
び図４に示す。酵素の活性試験は下記実施例２に準拠し
ておこなった。図１および図３において、符号１、２お
よび３はそれぞれ緩衝液として酢酸塩緩衝液を用いた場
合、燐酸ナトリウム緩衝液を用いた場合および硼酸緩衝
液を用いた場合を示す。なお、図３においては、緩衝液
として０．１Ｍ燐酸ナトリウム緩衝液(ｐＨ８．０)を使
用し、熱処理は４０℃で３０分間おこなった。また、図
４においては、緩衝液として０．１Ｍ燐酸ナトリウム緩
衝液を使用し、熱処理は各温度において３０分間おこな
った。
【００１９】実施例２ ハイドロキノンの酢酸エチル溶液(０．５Ｍ)０．５mlお
よび可溶性澱粉５w／v％、燐酸ナトリウム緩衝液(pＨ
７．０)５０mＭおよび実施例１で製造した酵素１０単位
／mlを含有する水溶液０．５mlを蓋付試験管(５ml)内へ
入れ、該試験管を回転数２８０rpmの条件下において、
４０℃で１８時間振盪させた。静置後、水性層を下記の
条件下での薄層クロマトグラフィー分析に付し、酵素の
ポリフェノール配糖体合成活性を確認した。 薄層: メルク社製シリカゲル６０Ｆ２５４ガラスプレ
ート 展開溶媒: 酢酸エチル／酢酸／水＝３／２／２(体積
比) 検出: ３３v／v％硫酸／メタノール混合液を薄層に噴
霧後、該薄層を１２０℃で１０分間加熱する。 Ｒf値: ０．６１〜０．８６(澱粉の分解物のＲf値は
０．５８以下である)
よび可溶性澱粉５w／v％、燐酸ナトリウム緩衝液(pＨ
７．０)５０mＭおよび実施例１で製造した酵素１０単位
／mlを含有する水溶液０．５mlを蓋付試験管(５ml)内へ
入れ、該試験管を回転数２８０rpmの条件下において、
４０℃で１８時間振盪させた。静置後、水性層を下記の
条件下での薄層クロマトグラフィー分析に付し、酵素の
ポリフェノール配糖体合成活性を確認した。 薄層: メルク社製シリカゲル６０Ｆ２５４ガラスプレ
ート 展開溶媒: 酢酸エチル／酢酸／水＝３／２／２(体積
比) 検出: ３３v／v％硫酸／メタノール混合液を薄層に噴
霧後、該薄層を１２０℃で１０分間加熱する。 Ｒf値: ０．６１〜０．８６(澱粉の分解物のＲf値は
０．５８以下である)
【００２０】実施例３および４ 澱粉の代わりに、アミロペクチンまたはマルトオリゴ糖
を使用する以外は、実施例２の手順に準拠して、本発明
による酵素のポリフェノール配糖体合成活性を確認し
た。
を使用する以外は、実施例２の手順に準拠して、本発明
による酵素のポリフェノール配糖体合成活性を確認し
た。
【００２１】実施例５〜１３ ハイドロキノンの代わりに、カテキン、カフェー酸、コ
ウジ酸、カテコール、レゾルシノール、プロトカテキュ
ー酸、α−レゾルシル酸、フロログルシノールまたは没
食子酸を使用する以外は、実施例２の手順に準拠して、
本発明による酵素のポリフェノール配糖体合成活性を確
認した。
ウジ酸、カテコール、レゾルシノール、プロトカテキュ
ー酸、α−レゾルシル酸、フロログルシノールまたは没
食子酸を使用する以外は、実施例２の手順に準拠して、
本発明による酵素のポリフェノール配糖体合成活性を確
認した。
【００２２】実施例１４ 実施例１で用いた培地と同じ培地１００ｍｌを用いてバ
シルス・スリンジエンシス(ＩＦＯ３９５１)を３０℃で
１２０ｒｐｍの条件下において３日間液体振盪培養し
た。培養物を分画分子量３０００の前記限外濾過膜(Ｓ
ＥＰ−００１３)を用いて濃縮した(１０ｍｌ；１．０単
位／ｍｌ)。該濃縮液１０ｖ／ｖ％、ハイドロキノン
２．５ｗ／ｖ％、澱粉２ｗ／ｖ％および燐酸緩衝液(ｐ
Ｈ７．０)１０ｍＭから成る混合液１００ｍｌを三角フ
ラスコ(２００ｍｌ)内に入れ、４０℃で９０時間反応を
おこなうことによってハイドロキノン配糖体を合成し
た。反応混合物を下記の条件でのＨＰＬＣ分析に付した
ところ、ハイドロキノン−α−Ｄ−グルコース(保持時
間：１２．２分)が０．６４ｇ／ｍｌの濃度で得られ
た。 カラム：コスモシール５Ｃ１８−ＡＲパックドカラム
(内径２０ｍｍ；長さ２５０ｍｍ) 溶離液：メタノール／０.１ｗ／ｖ％トリフルオロ酢酸
水(体積比１８／８２) 流速：５ｍｌ／分 検出：２７９ｎｍの紫外部吸収 温度：４０℃
シルス・スリンジエンシス(ＩＦＯ３９５１)を３０℃で
１２０ｒｐｍの条件下において３日間液体振盪培養し
た。培養物を分画分子量３０００の前記限外濾過膜(Ｓ
ＥＰ−００１３)を用いて濃縮した(１０ｍｌ；１．０単
位／ｍｌ)。該濃縮液１０ｖ／ｖ％、ハイドロキノン
２．５ｗ／ｖ％、澱粉２ｗ／ｖ％および燐酸緩衝液(ｐ
Ｈ７．０)１０ｍＭから成る混合液１００ｍｌを三角フ
ラスコ(２００ｍｌ)内に入れ、４０℃で９０時間反応を
おこなうことによってハイドロキノン配糖体を合成し
た。反応混合物を下記の条件でのＨＰＬＣ分析に付した
ところ、ハイドロキノン−α−Ｄ−グルコース(保持時
間：１２．２分)が０．６４ｇ／ｍｌの濃度で得られ
た。 カラム：コスモシール５Ｃ１８−ＡＲパックドカラム
(内径２０ｍｍ；長さ２５０ｍｍ) 溶離液：メタノール／０.１ｗ／ｖ％トリフルオロ酢酸
水(体積比１８／８２) 流速：５ｍｌ／分 検出：２７９ｎｍの紫外部吸収 温度：４０℃
【００２３】実施例１５ 他の細菌からの酵素の調製法 実施例１で用いた培養法でバシルス・スリンジエンシス
ＩＦＯ３９５１、バシルス・リケニホルミスＡＴＣＣ２
５９７２およびバシルス・アミロリケファシエンスＩＦ
Ｏ１４１４１をそれぞれ培養し、同様に培養上清２５０
０−２７００ｍｌを得た。これら培養上清に硫酸アンモ
ニウムを８０％飽和となるように加え、生じた沈殿物を
遠心分離処理(９０００ｒｐｍ、１５分間)で集め、５０
ｍＭ酢酸緩衝液(ｐＨ４．０)１００ｍｌに溶解し、該緩
衝液１リットルに対し透析した。該透析内液を該緩衝液
で平衡化したアンバライトＣＧ５０カラム(１５．９ｃ
ｍ2×２７ｃｍ)に注入し、該緩衝液７．５リットルを用
いて、洗浄した。次いで０．５Ｍ燐酸二カリウム水溶液
を用い、流速1．６リットル／ｈｒで溶出をおこない、
溶出量１リットル〜３リットルにかけての溶出液２リッ
トルを実施例１で用いた限外濾過膜を用いて１０ｍｌま
で濃縮した。以上の操作でいずれの細菌からの酵素にお
いても活性回収率は６０〜８０％、比活性は８〜１５倍
上昇した。これらの酵素液を用い後で述べるサイクロデ
キストリン合成能、マルトース分解能および配糖体合成
効率を調べた。尚、これら酵素液の活性量、タンパク量
は実施例１に述べた方法によって算出した。又、これら
酵素の作用最適ｐＨはいずれも６〜８にあり、ｐＨ安定
範囲はいずれも６〜８に含まれていた。
ＩＦＯ３９５１、バシルス・リケニホルミスＡＴＣＣ２
５９７２およびバシルス・アミロリケファシエンスＩＦ
Ｏ１４１４１をそれぞれ培養し、同様に培養上清２５０
０−２７００ｍｌを得た。これら培養上清に硫酸アンモ
ニウムを８０％飽和となるように加え、生じた沈殿物を
遠心分離処理(９０００ｒｐｍ、１５分間)で集め、５０
ｍＭ酢酸緩衝液(ｐＨ４．０)１００ｍｌに溶解し、該緩
衝液１リットルに対し透析した。該透析内液を該緩衝液
で平衡化したアンバライトＣＧ５０カラム(１５．９ｃ
ｍ2×２７ｃｍ)に注入し、該緩衝液７．５リットルを用
いて、洗浄した。次いで０．５Ｍ燐酸二カリウム水溶液
を用い、流速1．６リットル／ｈｒで溶出をおこない、
溶出量１リットル〜３リットルにかけての溶出液２リッ
トルを実施例１で用いた限外濾過膜を用いて１０ｍｌま
で濃縮した。以上の操作でいずれの細菌からの酵素にお
いても活性回収率は６０〜８０％、比活性は８〜１５倍
上昇した。これらの酵素液を用い後で述べるサイクロデ
キストリン合成能、マルトース分解能および配糖体合成
効率を調べた。尚、これら酵素液の活性量、タンパク量
は実施例１に述べた方法によって算出した。又、これら
酵素の作用最適ｐＨはいずれも６〜８にあり、ｐＨ安定
範囲はいずれも６〜８に含まれていた。
【００２４】実施例１６ 実施例１および実施例１５で調製した酵素液２０μｌ
(６０単位／ｍｌ)と可溶性でんぷん３ｗ／ｖ％の液(５
０ｍＭ燐酸ナトリウム緩衝液ｐＨ７．０の溶液)１８０
μｌと４０℃で１０分間反応させ、その反応液にトリク
ロルエチレン１００μｌを加えた後、よく撹拌し３０分
間放置し、サイクロデキストリン−トリクロルエチレン
複合体による白濁の程度を肉眼により判定した。その結
果、白濁は生じなかった。
(６０単位／ｍｌ)と可溶性でんぷん３ｗ／ｖ％の液(５
０ｍＭ燐酸ナトリウム緩衝液ｐＨ７．０の溶液)１８０
μｌと４０℃で１０分間反応させ、その反応液にトリク
ロルエチレン１００μｌを加えた後、よく撹拌し３０分
間放置し、サイクロデキストリン−トリクロルエチレン
複合体による白濁の程度を肉眼により判定した。その結
果、白濁は生じなかった。
【００２５】実施例１７ 実施例１および実施例１５で調製した酵素液(５単位／
ｍｌ)０．０５ｍｌを０．５ｗ／ｖ％マルトース溶液(溶
媒：５０ｍＭ燐酸カリウム緩衝液(ｐＨ７．０))に加
え、４０℃で１８時間反応させた後、その反応液１μｌ
を下記条件下の薄層クロマトグラフィー分析に付し、酵
素のマルトース分解能の有無を調べた。 薄層：メルク社製シリカゲル６０Ｆ２５４ガラスプレー
ト 展開溶媒：酢酸エチル／酢酸／水＝３／２／２(体積比) 検出：３３ｖ／ｖ％硫酸／メタノール混合液を薄層に噴
霧後、該薄層を１２０℃で１０分間加熱する。その結
果、マルトース(Ｒｆ値＝０．４６)は検出されたが、グ
ルコース(Ｒｆ値：０．５６)は検出されなかった。
ｍｌ)０．０５ｍｌを０．５ｗ／ｖ％マルトース溶液(溶
媒：５０ｍＭ燐酸カリウム緩衝液(ｐＨ７．０))に加
え、４０℃で１８時間反応させた後、その反応液１μｌ
を下記条件下の薄層クロマトグラフィー分析に付し、酵
素のマルトース分解能の有無を調べた。 薄層：メルク社製シリカゲル６０Ｆ２５４ガラスプレー
ト 展開溶媒：酢酸エチル／酢酸／水＝３／２／２(体積比) 検出：３３ｖ／ｖ％硫酸／メタノール混合液を薄層に噴
霧後、該薄層を１２０℃で１０分間加熱する。その結
果、マルトース(Ｒｆ値＝０．４６)は検出されたが、グ
ルコース(Ｒｆ値：０．５６)は検出されなかった。
【００２６】実施例１８ ハイドロキノン５ｗ／ｖ％、可溶性澱粉１０ｗ／ｖ％の
濃度で５０ｍＭ燐酸ナトリウム緩衝液ｐＨ７．０に溶解
した２００μｌに、実施例１および実施例１５で調製し
た酵素液および市販のＣＧＴアーゼ(天野製薬株式会社
の市販品「コンチザイム」)(４〜５単位／ｍｌ)をそれぞ
れ１００μｌ加え、４０℃で１８時間反応させた。その
反応液２５μｌを下記条件下の薄層クロマトグラフィー
に付した後、Ｒｆ値０．６〜０．９相当の薄層部分(シ
リカゲル)を削り取り配糖体をメタノール５ｍｌで２回
(計１０ｍｌ)抽出した。この抽出液を減圧濃縮乾固後、
水１ｍｌを用いて配糖体を溶解させ、配糖体水溶液中の
グリコースをフェノール・硫酸法によって、定量し、配
糖体合成効率(酵素１単位当たりの転移したグルコース
量)を比較した。その結果を表２に示す。
濃度で５０ｍＭ燐酸ナトリウム緩衝液ｐＨ７．０に溶解
した２００μｌに、実施例１および実施例１５で調製し
た酵素液および市販のＣＧＴアーゼ(天野製薬株式会社
の市販品「コンチザイム」)(４〜５単位／ｍｌ)をそれぞ
れ１００μｌ加え、４０℃で１８時間反応させた。その
反応液２５μｌを下記条件下の薄層クロマトグラフィー
に付した後、Ｒｆ値０．６〜０．９相当の薄層部分(シ
リカゲル)を削り取り配糖体をメタノール５ｍｌで２回
(計１０ｍｌ)抽出した。この抽出液を減圧濃縮乾固後、
水１ｍｌを用いて配糖体を溶解させ、配糖体水溶液中の
グリコースをフェノール・硫酸法によって、定量し、配
糖体合成効率(酵素１単位当たりの転移したグルコース
量)を比較した。その結果を表２に示す。
【００２７】
【表２】 薄層：メルク社製シリカゲル６０Ｆガラスプレート 展開溶媒：酢酸エチル／酢酸／水＝３／２／２(体積比)
【００２８】実施例１９「 アグリカルチャル・バイオロジカル・ケミストリー」、
第４１巻、第２２２１頁〜第２２２８頁(１９７７ねん)
に記載された方法に従って調製したアミロスタチンを、
５０ｍＭ燐酸ナトリウム緩衝液(ｐＨ７．０)を用いて、
濃度が１．０μｇ／ｍｌまたは３．５μｇ／ｍｌになる
ように溶解したアミロスタチン溶液０．０２５ｍｌを、
実施例１で調製した酵素液(該緩衝液で希釈した試料；
５単位／ｍｌ)０．０２５ｍｌと混合し、該混合液を４
０℃で１０分間インキュベートした後、該緩衝液を溶媒
とする０．５ｗ／ｖ％可溶性澱粉溶液０．４５ｍｌを加
え、４０℃で１０分間反応させた。０．５Ｎ塩酸１．０
ｍｌを添加することにより反応を停止させ、次いで、ヨ
ウ素５ｍｇとヨウ化カリウム５０ｍｇを水１００ｍｌに
溶解させた溶液２．５ｍｌを加え、室温で２０分間放置
後、６６０ｎｍにおける吸光度を測定した。ブランクテ
ストは、酵素液の替りに該緩衝液を、又コントロールテ
ストは、アミロスタチンの替りに、該緩衝液を用いる以
外は上記と同様の操作によっておこなった。阻害率(％)
は下記の式に従い算出した。 阻害率(％)＝{(Ａｂ−Ａｏ)−(Ａｂ−Ａｉ)}／(Ａｂ−
Ａｏ)×１００ 式中、Ａｉ、ＡｂおよびＡｏはそれぞれ阻害テスト後測
定値、ブランクテストの測定値およびコントロールテス
トの測定値を示す。濃度が１．０μ／ｍｌおよび３．５
μｇ／ｍｌのアミロスタチン溶液による阻害率はそれぞ
れ５０％および９８％であった。
第４１巻、第２２２１頁〜第２２２８頁(１９７７ねん)
に記載された方法に従って調製したアミロスタチンを、
５０ｍＭ燐酸ナトリウム緩衝液(ｐＨ７．０)を用いて、
濃度が１．０μｇ／ｍｌまたは３．５μｇ／ｍｌになる
ように溶解したアミロスタチン溶液０．０２５ｍｌを、
実施例１で調製した酵素液(該緩衝液で希釈した試料；
５単位／ｍｌ)０．０２５ｍｌと混合し、該混合液を４
０℃で１０分間インキュベートした後、該緩衝液を溶媒
とする０．５ｗ／ｖ％可溶性澱粉溶液０．４５ｍｌを加
え、４０℃で１０分間反応させた。０．５Ｎ塩酸１．０
ｍｌを添加することにより反応を停止させ、次いで、ヨ
ウ素５ｍｇとヨウ化カリウム５０ｍｇを水１００ｍｌに
溶解させた溶液２．５ｍｌを加え、室温で２０分間放置
後、６６０ｎｍにおける吸光度を測定した。ブランクテ
ストは、酵素液の替りに該緩衝液を、又コントロールテ
ストは、アミロスタチンの替りに、該緩衝液を用いる以
外は上記と同様の操作によっておこなった。阻害率(％)
は下記の式に従い算出した。 阻害率(％)＝{(Ａｂ−Ａｏ)−(Ａｂ−Ａｉ)}／(Ａｂ−
Ａｏ)×１００ 式中、Ａｉ、ＡｂおよびＡｏはそれぞれ阻害テスト後測
定値、ブランクテストの測定値およびコントロールテス
トの測定値を示す。濃度が１．０μ／ｍｌおよび３．５
μｇ／ｍｌのアミロスタチン溶液による阻害率はそれぞ
れ５０％および９８％であった。
【００２９】
【発明の効果】本発明による酵素を利用することによ
り、広範囲の糖基質とポリフェノール受容体を原料とし
て種々のポリフェノール配糖体を効率よく合成すること
ができる。
り、広範囲の糖基質とポリフェノール受容体を原料とし
て種々のポリフェノール配糖体を効率よく合成すること
ができる。
【図１】 本発明による酵素の活性におよぼすｐＨの影
響（作用最適ｐＨ）を示すグラフである。
響（作用最適ｐＨ）を示すグラフである。
【図２】 本発明による酵素の活性におよぼす温度の影
響を示すグラフである。
響を示すグラフである。
【図３】 本発明による酵素の活性におよぼすｐＨの影
響（ｐＨ安定範囲）を示すグラフである。４０℃、３０
分間それぞれのｐＨ下においてた。
響（ｐＨ安定範囲）を示すグラフである。４０℃、３０
分間それぞれのｐＨ下においてた。
【図４】 本発明による酵素の熱安定性を示すグラフで
ある。ｐＨ８で３０分間それそれの温度下においた。
ある。ｐＨ８で３０分間それそれの温度下においた。
１ 酢酸塩緩衝液を用いた場合 ２ 燐酸ナトリウム緩衝液を用いた場合 ３ 硼酸緩衝液を用いた場合
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:07） (72)発明者 西野 豊和 大阪府寝屋川市下木田町14番５号 倉敷紡 績株式会社技術研究所内 (72)発明者 村尾 澤夫 大阪府堺市堀上緑町２−８−12
Claims (8)
- 【請求項１】 サイクロデキストリン合成能およびマル
トース分解能を有さず、ポリフェノール配糖体合成能を
有する酵素。 - 【請求項２】 バシルス属の細菌が生産する請求項１記
載の酵素。 - 【請求項３】 バシルス属の細菌が、バシルス・ズブチ
リス、バシルス・スリンジエンシス、バシルス・リケニ
ホルミスおよびバシルス・アミロリケファシエンスから
成る群から選択される細菌である請求項２記載の酵素。 - 【請求項４】 バシルス属の細菌を培養して得られる培
養物を精製処理に付すことを特徴とする、請求項１〜３
いずれかに記載の酵素の製造方法。 - 【請求項５】 バシルス属の細菌が、バシルス・ズブチ
リス、バシルス・スリンジエンシス、バシルス・リケニ
ホルミスおよびバシルス・アミロリケファシエンスから
成る群から選択される細菌である請求項４記載の方法。 - 【請求項６】 糖基質およびポリフェノール受容体を、
請求項１〜３いずれかに記載の酵素の存在下で反応させ
ることを特徴とするポリフェノール配糖体の製造方法。 - 【請求項７】 糖基質が澱粉、アミロペクチンまたはマ
ルトオリゴ糖(Ｇ3〜Ｇ7)である請求項６記載の方法。 - 【請求項８】 ポリフェノール受容体が、カテキン、カ
フェー酸、コウジ酸、ハイドロキノン、カテコール、レ
ゾルシノール、プロトカテキュー酸、α−レゾルシル
酸、フロログルシトールまたは没食子酸である請求項６
記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4027926A JP2664586B2 (ja) | 1992-02-14 | 1992-02-14 | ポリフェノール配糖体合成能を有する酵素 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4027926A JP2664586B2 (ja) | 1992-02-14 | 1992-02-14 | ポリフェノール配糖体合成能を有する酵素 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05219947A true JPH05219947A (ja) | 1993-08-31 |
| JP2664586B2 JP2664586B2 (ja) | 1997-10-15 |
Family
ID=12234494
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4027926A Expired - Fee Related JP2664586B2 (ja) | 1992-02-14 | 1992-02-14 | ポリフェノール配糖体合成能を有する酵素 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2664586B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001073106A1 (fr) * | 2000-03-28 | 2001-10-04 | Ezaki Glico Co., Ltd. | Procede de production d'un produit de transfert glycosyle |
| WO2004000045A3 (en) * | 2002-06-21 | 2004-05-13 | Canacure Corp | Liquid compositions comprising non-digestible oligosaccharides and green tea catechins, method and uses thereof |
-
1992
- 1992-02-14 JP JP4027926A patent/JP2664586B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001073106A1 (fr) * | 2000-03-28 | 2001-10-04 | Ezaki Glico Co., Ltd. | Procede de production d'un produit de transfert glycosyle |
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| Publication number | Publication date |
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