JPH05178899A - 修飾ポリペプチドおよびそれを有効成分とする血小板減少症治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 生理活性タンパク質のＮ末端あるいはＣ末端
に、Ａｓｎ−Ｘ−ＴｈｒまたはＡｓｎ−Ｘ−Ｓｅｒの配
列（ここでＸはＰｒｏ以外のアミノ酸を示す）を含むア
ミノ酸配列を付加した修飾ポリペプチド、それを暗号化
する遺伝子、およびそれを有効成分とする血小板減少症
治療剤。 【効果】 本発明の糖鎖修飾型ポリペプチドは、天然型
に比べ多量の糖鎖を付加することが可能であり、従って
安定性が向上する。また、該ポリペプチドは血小板増加
活性を有し、血小板減少症治療剤として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、修飾ポリペプチドおよ
びそれを有効成分とする血小板減少症治療剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】真核細胞由来タンパク質には、翻訳後の
修飾により糖鎖の付加されている場合のあることが知ら
れている。最近、このような天然型タンパク質に付加さ
れている糖鎖が、タンパク質の安定化や、生理機能の発
現に積極的な役割を果たす場合のあることが明かとなっ
てきた（早川ら(1989)医薬品研究 20,735-759）。さら
に、ウロキナーゼやＧ−ＣＳＦでは、天然型タンパク質
では糖鎖の付加していなかった部位に、遺伝子操作の手
法を利用して糖鎖を導入することにより、プロテアーゼ
抵抗性を賦与することができることが報告されてる（佐
々木ら、安村ら(1990)日本農芸化学会年次大会）。すな
わち、天然から得られる生理活性タンパク質に人為的に
糖鎖を付加させることにより、そのタンパク質の安定性
を高めたり、活性を修飾する可能性のあることが明らか
となってきた。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、天然か
ら得られる生理活性タンパク質に人為的に糖鎖を付加さ
せる試みはまだ少ない。さらに、すでに報告されてる上
記の例においても、糖鎖の付加するアミノ酸配列は、既
存のタンパク質のアミノ酸配列の１部を変異させるよう
な形で導入されたものである。このような方法において
は、そのアミノ酸変異により元のタンパク質の立体構造
が破壊される場合があり、またその部分に実際に糖鎖が
付加するかどうかは予測しがたく、きわめて試行錯誤的
な要素が強い。

【０００４】本発明は、かかる従来技術の欠点を改良す
るため、医薬あるいは診断薬として利用しうる生理活性
タンパク質のＮあるいはＣ末端にＮグリコシド型の糖鎖
の付加する配列を付加し、そのタンパク質を、真核細胞
を宿主として発現させることにより、その部位に糖鎖の
付加したタンパク質を提供するものである。さらに本発
明は該修飾ポリペプチドを有効成分とする血小板減少症
治療剤も提供する。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明は、生理活性タン
パク質のＮ末端あるいはＣ末端に、Ａｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒ
またはＡｓｎ−Ｘ−Ｓｅｒの配列（ここでＸはＰｒｏ以
外のアミノ酸を示す）を含むアミノ酸配列を付加した修
飾ポリペプチド、およびそれを有効成分とする血小板減
少症治療剤に関する。すなわち本発明は、生理活性タン
パク質のＮあるいはＣ末端にＡｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒまたは
Ａｓｎ−Ｘ−Ｓｅｒで示される配列を含むアミノ酸配列
を付加し、そのタンパク質を真核細胞を宿主として発現
させることにより、該アミノ酸配列のアスパラギン残基
に、糖鎖が付加することを特徴とする修飾ポリペプチド
に関する。一般に、タンパク質のＮあるいはＣ末端は立
体構造上タンパク質の外側に出ていることが多く、この
部分への糖鎖付加配列の付加により、従来技術に比べは
るかに効率よく糖鎖の付加した生理活性タンパク質が得
られることを見出したものである。

【０００６】本発明における生理活性タンパク質は、い
かなるものであっても良く、例えば、インターフェロン
類、インターロイキン類、ＴＮＦなどのリンフォカイン
類、ＥＣＧＦ、ＴＧＦ、ＦＧＦなどの増殖因子類、Ｇ−
ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＥＰＯ、ＰＦ４などの造血ホル
モン類などが挙げられるが、これに限定されない。本発
明では、インターロイキン類、特にインターロイキン−
６が好ましく用いられる。インターロイキン−６は、従
来ＢＳＦ−２，ＩＦＮ−β２、２６Ｋタンパク、ハイブ
リドーマ／プラズマサイトーマ増殖因子、肝細胞増殖因
子などの名称で呼ばれていたタンパク質を指す。インタ
ーロイキン−６の具体的なアミノ酸配列は、Hiranoらの
報告に記載されている（Nature 324, 73-76 (1986)）。
ただしインターロイキン−６本来の活性を損なわない変
異を含むもの、たとえばＮ末端アミノ酸の欠失した変異
体（Brakenhoffら(1989) J.Immunol. 143, 1175-1182）
やシステイン残基を他のアミノ酸に置換した変異体（Ja
mbouら(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 85, 9426-9430
）なども、本発明のインターロイキン−６に含まれる
ものとする。

【０００７】本発明における付加させるアミノ酸配列
は、Asn-X-Thr あるいはAsn-X-Ser を含むもので、かつ
それ自身では高次構造を形成し得ないものをさす。すな
わち、該配列を含むある一定の構造を持った別のペプチ
ドあるいはタンパク質を連結する場合は、本発明に含ま
れないものとする。本発明において、付加させるアミノ
酸配列は該配列を含む５残基以下のペプチドであること
が好ましい。またこのペプチド中でAsn-X-Thr あるいは
Asn-X-Ser 配列が占める位置は、どこであってもかまわ
ない。さらにこのペプチドを構成する他のアミノ酸とし
ては、プロリン以外のアミノ酸であることが好ましい。

【０００８】該アミノ酸配列を目的のタンパク質に付加
し、糖鎖を有するタンパク質を得る方法はいかなるもの
でもよいが、通常は遺伝子操作技術により目的とするタ
ンパク質を暗号化するＤＮＡ断片を取得し、これを発現
ベクターに組み込み、さらにこれを真核細胞に導入しそ
の細胞の生産するタンパク質を得る方法が用いられる。
目的のタンパク質を暗号化する遺伝子の取得方法は、細
胞からmRNAを調製しcDNAを得る方法、あるいは化学的に
合成する方法などがあるがいずれの方法でもよい。この
DNA に該アミノ酸配列を暗号化するＤＮＡ断片を付加す
る方法としては、新たに化学的に全合成する方法、該ア
ミノ酸配列を暗号化するＤＮＡ断片を化学的に合成し付
け足す方法、該アミノ酸配列を暗号化する部分を含む合
成ＤＮＡプライマーを利用して部位特異的変異を導入す
る方法などが知られているが（Molecular Cloning(198
9)15.2-15.113）、いずれの方法を用いても良い。また
ＰＣＲ法を利用して該アミノ酸配列を暗号化するＤＮＡ
部分をつけ加えることもできる。

【０００９】ここで得られた修飾ポリペプチドを暗号化
する遺伝子を、真核細胞用の発現ベクターに組み込み、
さらにそれを真核細胞に導入することにより、糖鎖で修
飾されたポリペプチドを得ることができる。真核細胞に
は、酵母、昆虫、両性類およびほ乳類の細胞があげられ
るが、いずれの細胞を用いてもかまわない。本発明にお
いては、ほ乳動物由来の細胞、たとえばチャイニーズハ
ムスター卵巣細胞(CHO) 、マウスC127細胞、マウスＬ細
胞、サルＣＯＳ細胞、ヒトＰＣ８細胞、ヒトＰＣ１２細
胞など、を用いることが好ましい。用いる発現ベクター
についても、特に限定されるものではなく、発現に用い
る宿主にあったものを利用すれば良い。このようにして
得られた細胞の培養上清から、各種クロマトグラフィー
により修飾ポリペプチド得ることができる。

【００１０】本発明の血小板減少症治療剤は、前述のイ
ンターロイキン−６修飾体を主成分として含有する。他
の成分としては、一般的な医薬添加物が選ばれる。もち
ろん添加物が無くとも本発明の目的は達成される。一般
的には主として安定化のために添加物が加えられる。そ
のような医薬添加物としては、局法に記載された、医薬
添加物として使えるタンパク質および／または糖類の中
から選ばれる。特に好適にはヒト血清アルブミン（ＨＳ
Ａ）、ゼラチン、マンニト−ル、ソルビト−ル、ラクト
−スなどの中から適宜あるいは組み合わせて選ばれる
が、もちろんこれらに限定するものではない。

【００１１】本発明の目的の一つである血小板増加作用
を具体的に達成するためには、前述のインターロイキン
−６修飾体を主成分とする組成物を生体に投与する。投
与方法としては、特に限定するものではないが、一般的
な注射、すなわち静脈注射、皮下注射、筋肉注射、点滴
静脈内注入などの内適当な一つが選ばれる。経口、経
鼻、経肺、経腸のような経粘膜投与法も場合により、好
適に実施される。

【００１２】有効投与量としては、１日につき体重１Ｋ
ｇ当たり０．０００１から３００μｇの範囲、好適には
０．００１〜１０μｇの範囲で選ばれる。前述の投与量
は症状によっても異なり、これらの値に限定されるもの
では勿論ない。投与回数としては通常１日１ないし２
回、もしくは２ないし数日に１回の範囲で選ばれるがこ
れに限定されるものではない。

【００１３】

【実施例】以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体的
に説明する。一般的な実験方法は、実験書（Sambrook,
J. Fritsch,E.F. Maniatis,T. (1989) "Molecular Clon
ing: a laboratory manual" Cold Spring Harbor Labor
atoryPress) に従った。

【００１４】実施例１(1).インターロイキン−６遺伝子のクローニング： インターロイキン−６、Ｇ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦ
を産生するヒト甲状腺由来細胞株NIM-1 （微工研菌寄第
１１１０３号）から、グアニジウムチオシアネートを用
いる公知の方法により全RNA を調製し、さらにオリゴdT
セルロースカラムクロマトグラフィーを用い、公知の方
法にしたがってmRNAを精製した。このmRNA１μg を材料
に、公知の方法を利用したcDNA合成キット（ベーリンガ
ー社）を用いて２本鎖のcDNAを合成した。次に、以下に
示すようなEcoRI 切断部位を含む、インターロイキン−
６のＮ末端、およびＣ末端に相当する部分を暗号化する
合成オリゴマー(A,B) を作製した。

【００１５】 Ａ． 5'-CCGAATTCGAGCCCAGCTATGAACTCC-3' Ｂ． 5'-CCGAATTCGCCCATGCTACATTTGCC-3' 合成オリゴマーは、自動DNA 合成装置( アプライドバイ
オシステム社）を用いて合成した後、逆相HPLCにより精
製したものを用いた。これらをプライマーとし、合成し
たcDNAの1/3 量を用いてPCR 法により、EcoRI 切断部位
を両端に保持するインターロイキン−６cDNAを増幅し
た。PCR 反応液の組成は既報（Saiki,R.K.らScience 23
9,487-491(1988) ）に従った。反応は、DNA サーマルサ
イクラーDJ1000（パーキンエルマーシータス社）を用
い、熱変性94℃ １分間、アニーリング50℃ ２分間、
伸長反応 72℃ ３分間、の条件で４０サイクル反応を
繰り返した。得られた反応混合物をフェノール／クロロ
ホルム抽出２回、クロロホルム抽出１回した後、EcoRI
消化した。このDNA を低融点アガロースゲル電気泳道を
用いて分離し、目的の約570bp のDNA 断片を分取した。

【００１６】(2).物細胞発現ベクターへの導入： 動物細胞発現ベクターpSR α296(Takebe,Y. ら Mol.Ce
ll.Biol. 8,466-472(1988)) をEcoRI 消化後、BAP （Ba
cterial alkaline phosphatase）処理により５’末端を
脱燐酸化し、これと前記(1) で得られたインターロイキ
ン−６cDNAを混合、T4DNA リガーゼを用いて連結した
後、E.coli HB101を形質転換した。得られたアンピシリ
ン耐性を示す形質転換株を培養、アルカリ抽出法により
プラスミドDNA を調整した。インターロイキン−６cDNA
が、ベクターに正しい向きで挿入されたクローンを選ぶ
ため、調整したDNA をPstIで消化、アガロースゲル電気
泳道によりDNA を分離した。インターロイキン−６cDNA
は、その３’側に、ベクターはcDNA挿入位置５’側にPs
tI部位があり、インターロイキン−６cDNAが正しい向き
に入っている場合、約500bp のバンドが検出されること
となる。このような方法により、インターロイキン−６
cDNAを正しい方向に挿入した発現プラスミドpSR αIL6
を選び出した。

【００１７】(3).Ｃ末端に糖鎖付加アミノ酸配列を付加
したインターロイキン−６を暗号化する遺伝子の作成： 前記(1) に示すと同じ方法で、Ｃに示すＤＮＡオリゴマ
ーを合成した。

【００１８】 Ｃ． 5'-CCGAATTCTTACTAAGTAGACGCGTTCATTTGCCGAAGAGCCCTC-3' 次に、pSR αIL6 100ng とＡ，ＣのＤＮＡオリゴマー各
100pmol を混合、前記(1) に示す方法に従って、ＰＣＲ
を行った。得られた反応液から前記(1) と同様にして約
650bp のＤＮＡ断片を分取し、制限酵素EcoRI で消化
後、これを前記(2) と同様にして発現プラスミドpSR α
296 に組み込んだ。得られた発現プラスミドpSR αIL6-
NASTはインターロイキン−６のＣ末端にAsn-Ala-Ser-Th
r のアミノ酸配列を付加した修飾インターロイキン−６
を暗号化している。

【００１９】(4).Ｎ末端に糖鎖付加アミノ酸配列を付加
したインターロイキン−６を暗号化する遺伝子の作成： 前記(1) に示すと同じ方法で，Ｄ，Ｅに示すＤＮＡオリ
ゴマーを合成した。

【００２０】 Ｄ． 5'-AGCGCTAATCAGACAGTACCCCCAGGAG-3' Ｅ． 5'-TGTCTGATTAGCGCTGGCAGCAGGCAACAC-3' 次に、pSR αIL6 100ng とＡ，ＥのＤＮＡオリゴマー各
100pmol を混合、前記(1) に示す方法に従って、ＰＣＲ
を行った。また別に、pSR αIL6 100ng とＢ，ＤのＤＮ
Ａオリゴマー各100pmol を混合、前記(1) に示す方法に
従って、ＰＣＲを行った続いて、それぞれの反応液、各
１μl とＡ，Ｂ，のＤＮＡオリゴマー各100pmol を混
合、再度ＰＣＲを行った。得られた反応液から、前記
(1) の方法に従って、約650bp のＤＮＡ断片を分取し、
これを前記(2) と同様にして発現プラスミドpSR α296
に組み込んだ。得られた発現プラスミドpSR αIL6-SANQ
T はインターロイキン−６のシグナル配列からＮ末端に
いたるPhe-Pro-Ala-Pro のアミノ酸配列をSer-Ala-Asn-
Glu-Thr のアミノ酸配列に置換した修飾インターロイキ
ン−６を暗号化している。

【００２１】(5).ＣＯＳ−１における発現： インターロイキン−６およびインターロイキン−６変異
体を解析するために、前記(4) までの操作で作成したプ
ラスミド(pSRαIL6, pSRαIL6-NAST、 pSRαIL6-SANQT)
をＣＯＳ−１細胞に導入し発現を試みた。

【００２２】１０％牛胎児血清（ＦＣＳ）を含むダルベ
ッコ変法イーグル培地（Ｄ．ＭＥＭ）に懸濁させたＣＯ
Ｓ−１細胞（ＣＲＬ−１６５０）を３．５ｘ１０⁵ 個／
５mlずつ６穴プレート（コーニング社、２５８１０−
６）にシーディングし、３７℃５％ＣＯ₂ 存在下で一晩
培養を行った。このＣＯＳ−１細胞の培地を抜き取り、
１０％ニュー・セーラム（コラブレイティブ社）、２μ
ｇプラスミドＤＮＡ、１００μＭクロロキン、ＤＥＡＥ
−デキストラン４００μｇ／mlの溶液１mlを加え、３７
℃ ５％ＣＯ₂ 条件下で４時間トランスフェクションし
た後、液を抜き取り１０％ジメチルスルホキシドを含む
ＰＢＳ１mlを加え、２分間静置した。細胞をＤ．ＭＥＭ
で２回洗った後、１０％ＦＣＳを含むＤ．ＭＥＭを加
え、２日間培養し培地を交換した後、さらに３日間培養
して得られた上清をインターロイキン−６あるいはイン
ターロイキン−６変異体とし、活性および分子量を解析
した。

【００２３】(6).バイオアッセイ法によるインターロイ
キン−６の定量： １０％ＦＣＳ、５ｘ１０^-5Ｍ ２−メルカプトエタノー
ルを含むＲＰＭＩ１６４０培地に、数段階希釈した試料
溶液を加え５０μｌとし、９６穴プレート（細胞培養
用）に入れた。各ウェルに２ｘ１０³ 個／５０μｌの７
ＴＤ１細胞（インターロイキン−６依存性細胞株：Van
Damme ら(1987) J. Exp. Med. 165, 914-919) を加え、
３７℃ ５％ＣＯ₂ 存在下で３日間培養した。５mg／ml
ＭＴＴ１０μｌを各ウェルに加え５時間培養後、１５０
μｌの０．０４Ｎ塩酸−イソプロパノールを加えて細胞
を溶解した後、５７０ｎｍの吸収を測定した。標準イン
ターロイキン−６としては天然型インターロイキン−６
（東レフジバイオニクス社製ＩＬ−６ ＥＩＡキットに
付属した標準ＩＬ−６）を用いた。

【００２４】その結果、 pSRαIL6 により形質転換した
ＣＯＳ−１培養上清のインターロイキン−６濃度は２．
２μｇ／ml、 pSRαIL6-NAST形質転換体は２．８μｇ／
ml、pSRαIL6-SANQT 形質転換体は２．８μｇ／mlであ
った。

【００２５】(7).分子量の測定： 前記(5) で得た上清７．５μｌをＳＤＳ−ポリアクリル
アミドゲル電気泳動（ゲル濃度１２％）を行いタンパク
質を分離後、アトー社製ブロッティング装置を使い、デ
ィアポアフィルター（ミリポア社）にゲル上のタンパク
質をブロッティングした。転写後、フィルターを５％ス
キムミルク／ＰＢＳでブロッキングした後、抗インター
ロイキン−６モノクローナル抗体ＩＣ−６７、ＩＧ−６
１(Idaら(1989) Biochem. Biophys. Res. Comm. 165, 7
28-734）２μｇ／mlと反応させ、Ｂｉｏ−Ｒａｄ社製ゴ
ールドイミュンブロットキットを用いて検出を行った。

【００２６】その結果、 pSRαIL6 で形質転換したＣＯ
Ｓ−１の上清からは２２ｋＤａおよび２７ｋＤａにメイ
ンのバンドが得られたのに対し、 pSRαIL6-SANQT で形
質転換したものからは２４ｋＤａおよび３０ｋＤａをメ
インとするバンドが検出され、また pSRαIL6-NASTで形
質転換したものでは２７ｋＤａのバンドの割合が増加し
ており、糖鎖付加が示唆された。

【００２７】(8).インタ−ロイキン−６修飾体の精製： 糖鎖を付加させたインターロイキン−６変異体の薬効を
調べるために、COS-1細胞により発現させたインターロ
イキン−６変異体および野生型インターロイキン−６の
精製をおこなった。

【００２８】野生型インターロイキン−６(pSRαIL6 発
現物（以下IL6Wと略) ）および２種の糖鎖を付加させた
インターロイキン−６変異体タンパク質（pSR αIL6-NA
ST発現物（以下 IL6NASTと略) およびpSR αIL6-SANQT
発現物（以下IL6SANQTと略)）をそれぞれ形質転換させ
たCOS-1 細胞により発現させ、2%ウシ胎児血清を含むD.
MEM 培地で37℃３日間培養し、培養上清をそれぞれ2L得
た( 総インターロイキン−６量はIL6Wは４mg、IL6NAST
は５mg、IL6SANQTは4.8mg 含まれていた) 。

【００２９】その上清を10000r.p.m.10 分間遠心し、沈
澱物を除去した後、分子量１万以下のタンパク質のみを
通すUK-10 フィルタ−( アドバンテック社) をセットし
た限外ろ過装置( アミコン社) を用いて約20倍に濃縮し
た。続いて、その３mgを、天然型インターロイキン−６
に対するヤギポリクロ−ナル抗体をアフィゲル10( バイ
オラド社) に結合させた抗体カラム（１０mgタンパク質
/ml gel)3ml gel にかけた。

【００３０】0.15M 塩化ナトリウムを含む10mMリン酸緩
衝液(pH7.4) 、続いて水それぞれ15mlでカラムを洗浄
後、15mM HCl(pH2.0)6mlにてインターロイキン−６の溶
出を行った。溶出フラクション約6ml 中の総インターロ
イキン−６量はIL6Wは2.3mg 、L6NASTは2.0mg 、IL6SAN
QTは2.1mg で、収率は順に77％、67％、70％であった。
このフラクションのインターロイキン−６純度はC18 カ
ラムを用いて逆相−高速液体クロマトグラフィ−(HPLC)
上で、いずれも70％以上であった。純度をさらに上げる
ために、次に逆相-HPLC により精製を行った。各サンプ
ル６mlを、２回に分けて、Zorbox C18カラム(4.6x250m
m, 三井東圧) にかけ、0.1%トリフルオロ酢酸を含むア
セトニトリル(10 〜60%/25分、60%/25〜50分) で溶出さ
せた。移動相の流速は1ml/分で行い、この条件でインタ
ーロイキン−６の溶出時間は約28分であった。溶出フラ
クションは1.5ml で、このステップでの収率はIL6Wは70
％、IL6NAST は65％、IL6SANQTは72％で、純度はHPLC上
約95％以上であった。回収したインターロイキン−６溶
液に、ただちに1/10量の1M炭酸アンモニウム溶液(pH8.
0) を加えて中和した後、“セファデックスG-25”(2.5x
100cm, ファルマシア社)を用いて0.15M NaClを含む10mM
リン酸緩衝液(pH7.4) で脱塩し各約３mlの画分を得た。
得られたインターロイキン−６の濃度はIL6Wは 460μg/
ml、IL6NAST は 380μg/ml、IL6SANQTは 440μg/mlで、
最終的に３種類のインターロイキン−６をそれぞれ約1.
0mg 得た。

【００３１】(9).血小板増加作用の確認： 前項で得たインターロイキン−６を試験サンプルとして
Ｃ５７ＢＬ／６マウスに投与し、血小板増加活性を調べ
た。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの雄、５週齢のものをＳＬＣ
より購入し、１群６匹としてアクリメ−ションを１週間
行い６週齢のものを用いた。

【００３２】前項で得たインターロイキン−６修飾体
ＩＬ６ＮＡＳＴと ＩＬ６ＳＡＮＱＴ溶液をそれぞれ１
日１回１０ｍｌ／Ｋｇの容量で背部皮下に投与した。１
群６匹とし、それぞれDay-0 から投与開始して、７日間
連続投与した。投与開始時間は毎回午前９時に定めた。
所定回数の投与終了後３時間以上経過した後、血小板数
を測定した。マウスにエ−テルガス麻酔を施し、仰臥位
に固定して腋窩部をアルコ−ル綿で清拭したのち、左腋
窩動静脈を切断した。切断後流出してくる血液を、あら
かじめ１５％ＥＤＴＡ−２Ｋａ溶液１０μｌを分注して
おいたシリコンコ−ト・ガラス採血管（ベネジェクト真
空採血管、テルモ）に採取した。採取した血液はただち
に自動血球計測機 Celltac（日本光電）を用いて血小板
数を測定した。１日当たり各インターロイキン−６修飾
体を２．５μｇ／ｋｇ投与したところ、修飾体ＩＬ６Ｎ
ＡＳＴとＩＬ６ＳＡＮＱＴそれぞれについて対照（生理
食塩水投与）群にたいして、２７％、２９％の血小板増
加を見た。

【００３３】

【発明の効果】本発明により得られた糖鎖修飾型ポリペ
プチドは、その１次構造中に導入されたアスパラギン結
合型糖鎖の結合を惹起するアミノ酸配列により、天然型
に比べさらに多量の糖鎖を有することが可能となる。そ
の結果、分子量の増加、等電点の変化、安定性の変化、
など物理化学的性質が変化し、それにより血中安定性の
向上、薬効の増大、標的臓器への取り込みの促進が期待
できる。また、本発明の修飾ポリペプチドは、血小板増
加活性を有し、血小板減少症治療剤として有用である。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＧＺ 8314−4Ｃ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 8214−4Ｂ Ｋ 8214−4Ｂ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 沢田 律子 神奈川県鎌倉市手広1111番地 東レ株式会 社基礎研究所内

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 生理活性タンパク質のＮ末端あるいはＣ
   末端に、Ａｓｎ−Ｘ−ＴｈｒまたはＡｓｎ−Ｘ−Ｓｅｒ
   の配列（ここでＸはＰｒｏ以外のアミノ酸を示す）を含
   むアミノ酸配列を付加した修飾ポリペプチド。
2. 【請求項２】 生理活性タンパク質がインターロイキン
   −６である請求項１記載の修飾ポリペプチド。
3. 【請求項３】 請求項１または２記載の修飾ポリペプチ
   ドを暗号化する遺伝子。
4. 【請求項４】 請求項１または２記載の修飾ポリペプチ
   ドを有効成分とする血小板減少症治療剤。