JPH05170795A - Ｃ−末端アザアミノ酸アミドを含有するペプチドの固相合成法 - Google Patents
Ｃ−末端アザアミノ酸アミドを含有するペプチドの固相合成法Info
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- JPH05170795A JPH05170795A JP4151785A JP15178592A JPH05170795A JP H05170795 A JPH05170795 A JP H05170795A JP 4151785 A JP4151785 A JP 4151785A JP 15178592 A JP15178592 A JP 15178592A JP H05170795 A JPH05170795 A JP H05170795A
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
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- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 Ｃ−末端アザアミノ酸アミドを含有するペプ
チドの固相合成法。 【構成】 Ｃ−末端アザアミノ酸を除くペプチドの全ア
ミノ酸を、慣用の固相合成により会合させ、ヒドラジン
又は置換ヒドラジンを用いて基体からペプチドを切り離
し、かつこうして遊離されたヒドラジドとシアネートイ
オンとを反応させて、アザアミノ酸を含有するペプチ
ド、例えばデカペプチドゴセレリンを固相合成する。
チドの固相合成法。 【構成】 Ｃ−末端アザアミノ酸を除くペプチドの全ア
ミノ酸を、慣用の固相合成により会合させ、ヒドラジン
又は置換ヒドラジンを用いて基体からペプチドを切り離
し、かつこうして遊離されたヒドラジドとシアネートイ
オンとを反応させて、アザアミノ酸を含有するペプチ
ド、例えばデカペプチドゴセレリンを固相合成する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ペプチドの製法に関
し、特に、デカペプチドゴセレリンを製造するための固
相ペプチド合成法に関する。
し、特に、デカペプチドゴセレリンを製造するための固
相ペプチド合成法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ペプチドの固相合成は、１９６２年に初
めて出版されたメリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌ
ｄ）の先駆的な研究に続きほぼ３０年の間公知であっ
た。このタイプの合成の一般的原理は次のとおりであ
る： （ａ） Ｎ−保護されたアミノ酸（保護基は一般にｔ−
ブトキシカルボニル、略字Ｂｏｃである）を、固体の、
不溶性基体（一般にポリスチレン樹脂）に結合基（一般
にベンジルエステル）を介してそのカルボキシル末端で
結合させる。
めて出版されたメリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌ
ｄ）の先駆的な研究に続きほぼ３０年の間公知であっ
た。このタイプの合成の一般的原理は次のとおりであ
る： （ａ） Ｎ−保護されたアミノ酸（保護基は一般にｔ−
ブトキシカルボニル、略字Ｂｏｃである）を、固体の、
不溶性基体（一般にポリスチレン樹脂）に結合基（一般
にベンジルエステル）を介してそのカルボキシル末端で
結合させる。
【０００３】（ｂ） 固体基体からアミノ酸をはずさな
い手段でＮ−保護基を除去し、第２のＮ−保護されたア
ミノ酸を、すでに結合したものにカップリングさせる
（一般にカルボジ−イミドカップリング剤を使用し
て）。
い手段でＮ−保護基を除去し、第２のＮ−保護されたア
ミノ酸を、すでに結合したものにカップリングさせる
（一般にカルボジ−イミドカップリング剤を使用し
て）。
【０００４】（ｃ） この順序を、所望の数のＮ−保護
されたアミノ酸を用いて、所望のペプチドが形成され、
そのカルボキシル末端で固体基体になお結合している状
態まで繰り返す。
されたアミノ酸を用いて、所望のペプチドが形成され、
そのカルボキシル末端で固体基体になお結合している状
態まで繰り返す。
【０００５】（ｄ） 最後のＮ−保護基を除去し、結合
基の切り離しにより（通例、強酸を用いて）ペプチドを
固体基体から分離させる。
基の切り離しにより（通例、強酸を用いて）ペプチドを
固体基体から分離させる。
【０００６】この全合成は、機械で助成でき、かつ事情
によってはペプチドを手の介在なしに形成することがで
きる。Ｂｏｃ保護基はトリフルオル酢酸により除去し、
ペプチド鎖は、より強い酸、例えばフッ化水素酸で固体
基体から除去する。
によってはペプチドを手の介在なしに形成することがで
きる。Ｂｏｃ保護基はトリフルオル酢酸により除去し、
ペプチド鎖は、より強い酸、例えばフッ化水素酸で固体
基体から除去する。
【０００７】この技術の紹介以来多くの修正が採り入れ
られたが、今日一般に使用されている方法は、本質的に
は最初に記載されたものである。２つの主な革新は、固
体基体としてのポリアミドの使用及びアミノ酸の
られたが、今日一般に使用されている方法は、本質的に
は最初に記載されたものである。２つの主な革新は、固
体基体としてのポリアミドの使用及びアミノ酸の
【０００８】
【化１】
【０００９】のためのＮ−フルオレン−９−イルメトキ
シカルボニル（Ｆｍｏｃ）保護基の使用であった。Ｆｍ
ｏｃ基は、塩基（一般にビペリシン）に対して不安定で
あることにより際立っている。詳細に関しては、例えば
アテルトン及びシエパード、「ソリッド・フエイズ・ペ
プチド・シンセシス−ア・プラクティカル・アプロー
チ」、ＩＲＬプレス・アツ・オクスフォード・ユニバー
シティ・プレス、１９８９（Ａｔｈｅｒｔｏｎ ａｎｄ
Ｓｈｅｐｐａｒｄ，“Ｓｏｌｉｄ ＰｈａｓｅＰｅｐ
ｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ−ａ ｐｒａｃｔｉｃａ
ｌ ａｐｐｒｏａｃｈ”，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ ａｔ
Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｐｒｅｓｓ，１
９８９）；バラニイ等、「ソリッド−フエイス・ペプチ
ド・シンセシス：ア・シルバー・アニバーサリ・レポー
ト」、Ｉｎｔ．Ｊ．ペプチド・プロテイン・Ｒｅｓ．、
１９８７、３０、７０５〜７３９及びフィールド等、同
書、１９９０、３５、１６１〜２１４（Ｂａｒａｎｙ
ｅｔ ａｌ．，“Ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ ｐｅｐｔｉ
ｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：ａ ｓｉｌｖｅｒ ａｎｎ
ｉｖｅｒｓａｒｙ ｒｅｐｏｒｔ”，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅ
ｐｔｉｄｅＰｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．，１９８７，３
０，７０５〜７３９ａｎｄ Ｆｉｅｌｄｓ ｅｔ ａ
ｌ．，ｉｂｉｄ，１９９０，３５，１６１〜２１４）が
参照される。
シカルボニル（Ｆｍｏｃ）保護基の使用であった。Ｆｍ
ｏｃ基は、塩基（一般にビペリシン）に対して不安定で
あることにより際立っている。詳細に関しては、例えば
アテルトン及びシエパード、「ソリッド・フエイズ・ペ
プチド・シンセシス−ア・プラクティカル・アプロー
チ」、ＩＲＬプレス・アツ・オクスフォード・ユニバー
シティ・プレス、１９８９（Ａｔｈｅｒｔｏｎ ａｎｄ
Ｓｈｅｐｐａｒｄ，“Ｓｏｌｉｄ ＰｈａｓｅＰｅｐ
ｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ−ａ ｐｒａｃｔｉｃａ
ｌ ａｐｐｒｏａｃｈ”，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ ａｔ
Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｐｒｅｓｓ，１
９８９）；バラニイ等、「ソリッド−フエイス・ペプチ
ド・シンセシス：ア・シルバー・アニバーサリ・レポー
ト」、Ｉｎｔ．Ｊ．ペプチド・プロテイン・Ｒｅｓ．、
１９８７、３０、７０５〜７３９及びフィールド等、同
書、１９９０、３５、１６１〜２１４（Ｂａｒａｎｙ
ｅｔ ａｌ．，“Ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ ｐｅｐｔｉ
ｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：ａ ｓｉｌｖｅｒ ａｎｎ
ｉｖｅｒｓａｒｙ ｒｅｐｏｒｔ”，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅ
ｐｔｉｄｅＰｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．，１９８７，３
０，７０５〜７３９ａｎｄ Ｆｉｅｌｄｓ ｅｔ ａ
ｌ．，ｉｂｉｄ，１９９０，３５，１６１〜２１４）が
参照される。
【００１０】この明細書を通じて、アミノ酸、保護基、
カップリング剤等に関し、標準的な略語を使用する。不
明確を避けるため、前記Ｂｏｃ及びＦｍｏｃと同様に、
次のものが適切な標準的な略語である： Ａｒｇ アルギニン Ａｚｇｌｙ アザグリシン（Ｈ2Ｎ−ＮＨ−ＣＯＯＨ） Ｄ−Ｓｅｒ Ｄ−セリン Ｇｌｐ ピログルタミン酸 Ｈｉｓ ヒスチジン Ｌｅｕ ロイシン Ｐｒｏ プロリン Ｓｅｒ セリン Ｔｒｐ トリプトファン Ｔｙｒ チロシン ＤＩＰＣ ジ−イソプロピルカルボジ−イミド ＨＯＢｔ １−ヒドロキシベンゾトリアゾール ＤＭＦ Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド ＢｒＺ ２−ブロモベンジルオキシカルボニル Ｂｕt ｔ−ブチル Ｂｚｌ ベンジル ゴセレリンは、前立腺ガン、乳ガン及び特定の婦人科の
状態の治療に使用されるＬＨＲＨ同族体である。前記の
治療で、それは、化学的去勢を誘発することにより作用
する。その構造式は： Glp-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-Azgly-NH2 である。慣用の固相ペプチド合成法とは相いれないこの
構造の２つの特徴があることが明らかになるであろう。
第１の特徴は、Ａｚｇｌｙカルボキシ末端アミノ酸であ
る；クノル等（Ｋｎｏｌｌ ｅｔ ａｌ．）がペプチド
（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）１９９０、４１４〜４１５に、置
換フエニルプロピオン酸結合基を介してアミノメチル樹
脂にジペプチドＰｒｏ−Ａｚｇｌｙを結合させることを
記載しているが、そのような基を固体基体へ結合させる
方法は、公知ではない。遊離アザグリシンは、もちろん
末端−ＮＨ−ＣＯＯＨ基を有し、これは不安定なカルバ
ミン酸である。
カップリング剤等に関し、標準的な略語を使用する。不
明確を避けるため、前記Ｂｏｃ及びＦｍｏｃと同様に、
次のものが適切な標準的な略語である： Ａｒｇ アルギニン Ａｚｇｌｙ アザグリシン（Ｈ2Ｎ−ＮＨ−ＣＯＯＨ） Ｄ−Ｓｅｒ Ｄ−セリン Ｇｌｐ ピログルタミン酸 Ｈｉｓ ヒスチジン Ｌｅｕ ロイシン Ｐｒｏ プロリン Ｓｅｒ セリン Ｔｒｐ トリプトファン Ｔｙｒ チロシン ＤＩＰＣ ジ−イソプロピルカルボジ−イミド ＨＯＢｔ １−ヒドロキシベンゾトリアゾール ＤＭＦ Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド ＢｒＺ ２−ブロモベンジルオキシカルボニル Ｂｕt ｔ−ブチル Ｂｚｌ ベンジル ゴセレリンは、前立腺ガン、乳ガン及び特定の婦人科の
状態の治療に使用されるＬＨＲＨ同族体である。前記の
治療で、それは、化学的去勢を誘発することにより作用
する。その構造式は： Glp-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-Azgly-NH2 である。慣用の固相ペプチド合成法とは相いれないこの
構造の２つの特徴があることが明らかになるであろう。
第１の特徴は、Ａｚｇｌｙカルボキシ末端アミノ酸であ
る；クノル等（Ｋｎｏｌｌ ｅｔ ａｌ．）がペプチド
（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）１９９０、４１４〜４１５に、置
換フエニルプロピオン酸結合基を介してアミノメチル樹
脂にジペプチドＰｒｏ−Ａｚｇｌｙを結合させることを
記載しているが、そのような基を固体基体へ結合させる
方法は、公知ではない。遊離アザグリシンは、もちろん
末端−ＮＨ−ＣＯＯＨ基を有し、これは不安定なカルバ
ミン酸である。
【００１１】慣用の固相合成と相いれないゴセレリンの
第２の特徴は、Ｄ−セリン分に結合されたｔ−ブチル基
であり；この基を保護するために、強酸を使用して固体
基体から完成されたペプチドを切り離すための慣用法を
使用することはできない。
第２の特徴は、Ｄ−セリン分に結合されたｔ−ブチル基
であり；この基を保護するために、強酸を使用して固体
基体から完成されたペプチドを切り離すための慣用法を
使用することはできない。
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、ゴセレリン
およびＣ−末端アザアミノ酸を含有する他のペプチドを
固相合成により製造する方法を提供する。
およびＣ−末端アザアミノ酸を含有する他のペプチドを
固相合成により製造する方法を提供する。
【００１３】
【課題を解決するための手段】本発明によりＣ−末端ア
ザアミノ酸アミドを含有するペプチドの固相合成法が提
供され、これは、（ｉ） Ｃ−末端アザアミノ酸を除く
ペプチドの全アミノ酸を、慣用の固相合成により会合さ
せ、（ｉｉ） ヒドラジン又は置換ヒドラジンを用いて
基体からペプチドを切り離し、かつ（ｉｉｉ） そうし
て遊離されたヒドラジドをシアネートイオンと反応させ
ることよりなる。
ザアミノ酸アミドを含有するペプチドの固相合成法が提
供され、これは、（ｉ） Ｃ−末端アザアミノ酸を除く
ペプチドの全アミノ酸を、慣用の固相合成により会合さ
せ、（ｉｉ） ヒドラジン又は置換ヒドラジンを用いて
基体からペプチドを切り離し、かつ（ｉｉｉ） そうし
て遊離されたヒドラジドをシアネートイオンと反応させ
ることよりなる。
【００１４】この方法の最後の２工程は、第１に式： −ＣＯＮＨ−ＮＨ−Ｒ ［式中、Ｒは水素（Ａｚｇｌｙ中の）又はＨ2Ｎ−ＮＲ
−ＣＯＯＨがアミノ酸のアザー同族体であるような基で
ある］のカルボキシル末端を有するペプチドを形成し、
第２に式： −ＣＯＮＨ−ＮＲ−ＣＯＮＨ2 のカルボキシル末端を有するペプチドを形成する。
−ＣＯＯＨがアミノ酸のアザー同族体であるような基で
ある］のカルボキシル末端を有するペプチドを形成し、
第２に式： −ＣＯＮＨ−ＮＲ−ＣＯＮＨ2 のカルボキシル末端を有するペプチドを形成する。
【００１５】基体からのペプチドの切り離しは、ＤＭ
Ｆ、Ｎ−メチル−ピロリドン又は類似溶剤中の溶液のヒ
ドラジン又は置換ヒドラジンを使用して実施できる。
Ｆ、Ｎ−メチル−ピロリドン又は類似溶剤中の溶液のヒ
ドラジン又は置換ヒドラジンを使用して実施できる。
【００１６】好適なシアネートイオンは、アルカリ金属
シアン酸塩、例えばシアン酸カリウム又はシアン酸ナト
リウムにより提供されうる。この反応は水性酸性条件下
で実施できる。
シアン酸塩、例えばシアン酸カリウム又はシアン酸ナト
リウムにより提供されうる。この反応は水性酸性条件下
で実施できる。
【００１７】本発明のもう１つの特徴によれば、側鎖に
ｔ−ブチルオキシ基を有し、アミノ酸を有するペプチド
の固相合成法が提供され、これは、ｏ−ｔ−ブチル基を
切り離さない条件下で化学変化をおこしやすい固体基に
アミノ酸を結合させる結合基の使用からなる。
ｔ−ブチルオキシ基を有し、アミノ酸を有するペプチド
の固相合成法が提供され、これは、ｏ−ｔ−ブチル基を
切り離さない条件下で化学変化をおこしやすい固体基に
アミノ酸を結合させる結合基の使用からなる。
【００１８】好適な結合基は、ｔ−ブチルエーテルを切
り離さないヒドラジン、例えばベンジルエステルを使用
して切り離されうるものである。側鎖上のｔ−ブチル基
を除去することなく樹脂からペプチドを切り離す好適な
条件は、例えばヒドラジンの使用である。
り離さないヒドラジン、例えばベンジルエステルを使用
して切り離されうるものである。側鎖上のｔ−ブチル基
を除去することなく樹脂からペプチドを切り離す好適な
条件は、例えばヒドラジンの使用である。
【００１９】側鎖にｔ−ブチルオキシ基を有するアミノ
酸は、例えばセリン、Ｄ−セリン、トレオニン、チロシ
ン及びヒドロキシプロリンである。
酸は、例えばセリン、Ｄ−セリン、トレオニン、チロシ
ン及びヒドロキシプロリンである。
【００２０】更に特に、本発明は、ゴセレリンの固相合
成法を提供し、これは、（ｉ） Ｃ−末端アザグリシン
を除くゴセレリンの全アミノ酸を、慣用の固相合成によ
り会合させ、（ｉｉ） ヒドラジンまたは置換ヒドラジ
ンを用いて基体からペプチドを切り離し、かつ（ｉｉ
ｉ） このようにして遊離されたヒドラジドとシアネー
トイオンとを反応させてゴセレリンを形成することより
なる。
成法を提供し、これは、（ｉ） Ｃ−末端アザグリシン
を除くゴセレリンの全アミノ酸を、慣用の固相合成によ
り会合させ、（ｉｉ） ヒドラジンまたは置換ヒドラジ
ンを用いて基体からペプチドを切り離し、かつ（ｉｉ
ｉ） このようにして遊離されたヒドラジドとシアネー
トイオンとを反応させてゴセレリンを形成することより
なる。
【００２１】
【実施例】本発明を次の例により詳説するが、本発明は
この範囲に限定されるものではない。
この範囲に限定されるものではない。
【００２２】（ａ） ノナペプチドの固相製造 固相合成を、アプライド・ビオシステムス４３０Ａペプ
チド合成装置（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ
４３０Ａ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ）
上でジビニルベンゼンで１％架橋されたＢｏｃ−Ｐｒｏ
−ＯＢｚｌ−ポリスチレン樹脂（Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、１．２５ｇ、０．３８ｍｅ
ｑ／ｇ、もつとも名義上は０．７ｍｅｑ／ｇ）を使用し
て自動方式で実施した。次の保護されたアミノ酸を、Ｄ
ＭＦ中でＨＯＢｔ及びＤＩＰＣを使用直前に反応させ
て、ベンゾトリアゾリルエステルに変換した。保護され
たアミノ酸を次の順序でカップリングさせた： Ｂｏｃ−Ａｒｇ（ＨＣｌ）−ＯＨ Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ Ｆｍｏｃ−ＤＳｅｒ（Ｂｕt）−ＯＨ Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ＢｒＺ）−ＯＨ Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨ Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨ Ｐｙｒ−ＯＨ 最初の２段階（Ｂｏｃ−保護されたアミノ酸を使用す
る）の操作の順序は次のとおりであった：ジクロルメタ
ン中の４５％トリフルオル酢酸を用いるＢｏｃの除去；
１０％ＤＩＥＡ／ＤＭＦ洗浄；カップリング（保護され
たアミノ酸ＨＯＢｔエステル２当量）；前記のようにす
るＢｏｃの除去。
チド合成装置（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ
４３０Ａ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ）
上でジビニルベンゼンで１％架橋されたＢｏｃ−Ｐｒｏ
−ＯＢｚｌ−ポリスチレン樹脂（Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、１．２５ｇ、０．３８ｍｅ
ｑ／ｇ、もつとも名義上は０．７ｍｅｑ／ｇ）を使用し
て自動方式で実施した。次の保護されたアミノ酸を、Ｄ
ＭＦ中でＨＯＢｔ及びＤＩＰＣを使用直前に反応させ
て、ベンゾトリアゾリルエステルに変換した。保護され
たアミノ酸を次の順序でカップリングさせた： Ｂｏｃ−Ａｒｇ（ＨＣｌ）−ＯＨ Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ Ｆｍｏｃ−ＤＳｅｒ（Ｂｕt）−ＯＨ Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ＢｒＺ）−ＯＨ Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨ Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨ Ｐｙｒ−ＯＨ 最初の２段階（Ｂｏｃ−保護されたアミノ酸を使用す
る）の操作の順序は次のとおりであった：ジクロルメタ
ン中の４５％トリフルオル酢酸を用いるＢｏｃの除去；
１０％ＤＩＥＡ／ＤＭＦ洗浄；カップリング（保護され
たアミノ酸ＨＯＢｔエステル２当量）；前記のようにす
るＢｏｃの除去。
【００２３】最後の６段階（Ｆｍｏｃ−保護されたアミ
ノ酸を使用する）の操作の順序は次のとおりであった：
２０％ピペリジン／ＤＭＦを用いるＦｍｏｃの除去；
０．５モルＨＯＢｔ／ＤＭＦ洗浄；カップリング（保護
されたアミノ酸ＨＯＢｔエステルの１当量）。
ノ酸を使用する）の操作の順序は次のとおりであった：
２０％ピペリジン／ＤＭＦを用いるＦｍｏｃの除去；
０．５モルＨＯＢｔ／ＤＭＦ洗浄；カップリング（保護
されたアミノ酸ＨＯＢｔエステルの１当量）。
【００２４】Ｂｏｃ−Ａｒｇ（ＨＣｌ）−ＯＨの使用を
除くすべてのカップリング反応は、１時間続いた；Ｂｏ
ｃ−Ａｒｇ（ＨＣｌ）−ＯＨのそれは２時間続いた。ノ
ナペプチド−樹脂（１．７ｇ；１ｇ当りのペプチド０．
２９ｍｍｏｌｅ）は、ＢｒＺによりまだ保護されている
Ｔｙｒを用いて、こうして得られた。
除くすべてのカップリング反応は、１時間続いた；Ｂｏ
ｃ−Ａｒｇ（ＨＣｌ）−ＯＨのそれは２時間続いた。ノ
ナペプチド−樹脂（１．７ｇ；１ｇ当りのペプチド０．
２９ｍｍｏｌｅ）は、ＢｒＺによりまだ保護されている
Ｔｙｒを用いて、こうして得られた。
【００２５】（ｂ） 樹脂からのペプチドの切り離し 前記のように製造されたペプチド樹脂を、２０倍過剰の
ＤＭＦ（２０ｍｌ）中の無水ヒドラジンで、実験室温度
で２４時間処理し、混合物を濾過し、蒸発乾燥させた。
この方法で、ＢｒＺ保護基もＴｙｒから除去された。残
分を溶離剤としての水及び酢酸の２０：１Ｖ／Ｖ混合物
を用いて、カラム（ＬＨ２０Ｓｅｐｈａｄｅｘ）でゲル
濾過することにより精製した。
ＤＭＦ（２０ｍｌ）中の無水ヒドラジンで、実験室温度
で２４時間処理し、混合物を濾過し、蒸発乾燥させた。
この方法で、ＢｒＺ保護基もＴｙｒから除去された。残
分を溶離剤としての水及び酢酸の２０：１Ｖ／Ｖ混合物
を用いて、カラム（ＬＨ２０Ｓｅｐｈａｄｅｘ）でゲル
濾過することにより精製した。
【００２６】このようにして、 Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-DSer(But)-Leu-Arg-(H+)-Pro-NH-NH2 が得られ、その構造は、アミノ酸分析及びＦＡＢ質量分
析（Ｍ＋Ｈ）+＝１２２６により確認された。
析（Ｍ＋Ｈ）+＝１２２６により確認された。
【００２７】（ｃ） ゴセレリンの製造 水（１．３６ｍｌ）中のシアン酸カリウム（１１ｍｇ）
の溶液を、水及び酢酸の２０：１Ｖ／Ｖ混合物（１０ｍ
ｌ）中の前記ヒドラジド（１１８ｍｇ）の溶液に１時間
にわたり小量宛添加した。混合物を凍結乾燥させ、残分
を、トリフルオル酢酸０．１％を含有する水中のアセト
ニトリルの容量１０％〜４０％の勾配を用いる逆相カラ
ムクロマトグラフィー（Ｄｙｎａｍａｘ６０Å，Ｃ18，
１インチ直径）により精製した。このようにしてゴセレ
リンが得られ（１００ｍｇ、全体で２５％の収率）、そ
の構造はＦＡＢ質量分析により確認され、１２６９で特
徴的質量イオンを与える。
の溶液を、水及び酢酸の２０：１Ｖ／Ｖ混合物（１０ｍ
ｌ）中の前記ヒドラジド（１１８ｍｇ）の溶液に１時間
にわたり小量宛添加した。混合物を凍結乾燥させ、残分
を、トリフルオル酢酸０．１％を含有する水中のアセト
ニトリルの容量１０％〜４０％の勾配を用いる逆相カラ
ムクロマトグラフィー（Ｄｙｎａｍａｘ６０Å，Ｃ18，
１インチ直径）により精製した。このようにしてゴセレ
リンが得られ（１００ｍｇ、全体で２５％の収率）、そ
の構造はＦＡＢ質量分析により確認され、１２６９で特
徴的質量イオンを与える。
Claims (2)
- 【請求項１】 Ｃ−末端アザアミノ酸アミドを含有する
ペプチドの固相合成法において、これは （ｉ） Ｃ−末端アザアミノ酸を除くペプチドの全アミ
ノ酸を、慣用の固相合成により会合させ、 （ｉｉ） ヒドラジン又は置換ヒドラジンを用いて基体
からペプチドを切り離し、かつ （ｉｉｉ） こうして遊離されたヒドラジドとシアネー
トイオンとを反応させることよりなることを特徴とす
る、Ｃ−末端アザアミノ酸アミドを含有するペプチドの
固相合成法。 - 【請求項２】 ゴセレリンの固相合成法において、これ
は、 （ｉ） Ｃ−末端アザグリシンを除くゴセレリンの全ア
ミノ酸を慣用の固相合成により会合させ、 （ｉｉ） ヒドラジン又は置換ヒドラジンを用いて基体
からペプチドを切り離し、かつ （ｉｉｉ） このようにして遊離されたヒドラジドとシ
アネートイオンとを反応させてゴセレリンを形成するこ
とよりなることを特徴とする、ゴセレリンの固相合成
法。
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