JPH0515390A - タンパク質様組成物の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 原料タンパク質に十分な量のアミノ酸を導入
することができ、かつ、導入率が低いとされているアミ
ノ酸を確実かつ効率的に原料タンパク質に導入すること
ができるタンパク質様組成物の製造方法を提供する。 【構成】 原料タンパク質と、少なくとも一種のアミノ
酸エステルと、タンパク質分解酵素とが添加された溶液
中に、該溶液に対し、塩類を添加し、前記タンパク質に
前記アミノ酸エステル中のアミノ酸をプラステイン反応
により導入するタンパク質様組成物の製造方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、原料タンパク質にプラ
ステイン反応を利用して、アミノ酸を導入するタンパク
質様組成物の製造方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】従来より、タンパク質を酵素的に加水分
解し、それに特定のアミノ酸を導入する方法には２通り
の方法が考えられている。第１の方法は、タンパク質を
加水分解して、低分子のペプチドとし、その次に酵素的
逆反応を利用してアミノ酸を導入しながら、比較的高分
子のポリペプチドを合成するものである。第２の方法
は、タンパク質を酵素の至適条件から外れたところで反
応させ、アミノ酸を導入しながら分解し、低分子のペプ
チドを得るものである。

【０００３】いわゆる、プラステイン反応は、本来は前
者の現象に対してつけられたものであり、後者は正確に
はアミノ分解（アミノリシス）と呼ばれるべきものであ
るが、現在では、上記の前者および後者をすべて総称し
てプラステイン反応と呼んでいる。最近では、原料タン
パク質をそのまま使用でき、操作方法もより単純である
という点から、アミノ酸を導入し、原料タンパク質の栄
養価を高める等の目的で、主に後者のアミノ分解を利用
したプラステイン反応が用いられることが多い。

【０００４】そこで、本件出願人は、以前にプラステイ
ン反応を利用した低分子ペプチド混合物の製造方法を提
供している。（特公昭６２−１７５２０号公報）上記公
報に示されている方法では、大豆タンパク質に必須アミ
ノ酸で不足なメチオニンを、また、大豆タンパク質にバ
リン、ロイシン、イソロイシンなどの分枝鎖アミノ酸を
ペプチド状に導入して、原料タンパク質の栄養価を改善
し、さらにそれをジ、トリのような低分子ペプチドに分
解することにより、吸収性を向上させている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】上記公報の方法は、原
料タンパク質の栄養価の改善という点において十分な効
果を有している。しかし、近年、窒素源の供給に際し
て、ある特定のアミノ酸の過剰な状態を作り、それによ
る栄養的な特異性、いわゆるアミノ酸インバランス効果
を利用する事が検討されるようになってきた。特に分枝
鎖アミノ酸（バリン、ロイシン、イソロイシン）の過剰
な窒素源は、重症な熱症、外傷などの筋タンパク質が分
解しやすい状態あるいは肝不全時の精神障害などの改善
に効果があることが明らかとなった。

【０００６】しかし、アミノ酸インバランス効果を利用
するためには、原料タンパク質に対し、十分な量のアミ
ノ酸を添加する事が必要となり、上記公報に示された方
法では、十分なアミノ酸の導入を行うことが困難であっ
た。また、オボアルブミンのパパイン水解物を用いて、
これに各種アミノ酸エチルエステルをパパイン存在下で
反応させ、各種アミノ酸の導入率を調べたところ、バリ
ン、イソロイシン、グリシン、アラニンの導入率が１０
〜３０％程度と他のアミノ酸に比べて低かったという報
告もなされている（栄養と食糧，２９巻，２９５項、１
９７６年）。同文献によれば、このようなアミノ酸も疎
水性の高いアルコール、例えばヘキシルアルコールのよ
うなものでエステル化しておけば、導入率も上がるとい
う事であるが、人体に対する安全性から問題がある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明の目的は、原料タ
ンパク質に十分な量のアミノ酸を導入することができ、
かつ、導入率が低いとされているアミノ酸を確実かつ効
率的に原料タンパク質に導入することができるタンパク
質様組成物の製造方法を提供するものである。

【０００８】上記目的を達成するものは、原料タンパク
質と、少なくとも一種のアミノ酸エステルと、タンパク
質分解酵素とが添加された溶液中に、該溶液に対し、塩
類を添加し、前記タンパク質に前記アミノ酸エステル中
のアミノ酸をプラステイン反応により導入するタンパク
質様組成物の製造方法である。

【０００９】そして、添加する塩類は、ナトリウム塩も
しくはカリウム塩であることが好ましい。また、前記塩
類の添加量は、前記溶液に対して５〜３０Ｗ／Ｖ％であ
ることが好ましい。さらに、前記アミノ酸エステルは、
アミノ酸エチルエステルであることが好ましい。

【００１０】以下、本発明のタンパク質様組成物の製造
方法について詳細に説明する。本発明のタンパク質様組
成物の製造方法は、原料タンパク質と、少なくとも一種
のアミノ酸エステルと、タンパク質分解酵素とが添加さ
れた溶液中に、該溶液に対し、５〜３０Ｗ／Ｖ％の塩類
を添加し、前記タンパク質に前記アミノ酸エステル中の
アミノ酸をプラステイン反応により導入するものであ
る。この方法によれば、原料タンパク質に十分な量のア
ミノ酸を導入することができ、かつ、導入率が低いとさ
れているアミノ酸を確実かつ効率的に原料タンパク質に
導入することができ、よって、原料タンパク質に従来よ
りも高い割合でアミノ酸が導入されたタンパク質様組成
物を得ることができる。

【００１１】本発明の製造方法では、プラステイン反応
に適したｐＨに調整した緩衝液（反応溶液）中に、少な
くとも一種の分枝鎖アミノ酸エステル、塩類、原料タン
パク質およびタンパク質分解酵素を添加して、原料タン
パク質に、分枝鎖アミノ酸エステル中のアミノ酸をプラ
ステイン反応より、原料タンパク質に導入する。添加順
序としては、あらかじめ作成したアミノ酸エステル、塩
類および必要により還元剤を添加し、所定ｐＨに調整し
た水溶液に、原料タンパク質を添加し、撹拌し、原料タ
ンパク質溶液を作成する。そして、タンパク質分解酵素
を水に添加した液体を、上記原料タンパク質溶液に添加
し、撹拌したのち、所定温度例えば４０〜５０℃で、所
定時間８〜２４時間、プラステイン反応を行わせる。添
加順序としては、上述の順序に限られず、例えば、所定
量の水に、あらかじめ作成したアミノ酸エステル、塩類
および必要により還元剤を添加し、所定ｐＨに調整した
水溶液と、所定量の水に原料タンパク質を添加し、撹拌
した原料タンパク質液とをそれぞれ作成し、上記水溶液
に上記原料タンパク質液を添加し、十分撹拌するととも
に、必要に応じ、ｐＨを再度調整して、原料タンパク質
溶液を作成して、この溶液に、タンパク質分解酵素を水
に添加した液体を添加してもよい。

【００１２】本発明のタンパク質様組成物の製造方法に
使用される原料タンパク質としては、食品として使用で
きるものであれば、どのようなものでよい。例えば、ホ
エー、カゼインなどの乳タンパク質、卵白、ゼラチン、
小麦タンパク、大豆タンパク、魚肉タンパクなど、さら
にはそれらの分解物などが使用できる。

【００１３】さらに、原料タンパク質としては、プラス
チン反応（アミノ酸の導入）が、ややアルカリ側で、か
つ高濃度な原料タンパク質溶液中にて行われることを考
慮すると、反応液中において、変性しハードゲル化しな
いものが好ましく、具体的には、ホエー、カゼインおよ
びそれらの分解物などが好ましい。また、形成されるタ
ンパク質様組成物のアミノ酸構成より考えると、原料タ
ンパク質としては、導入しようとするアミノ酸の割合が
高いタンパク質原料を選択することが好ましい。

【００１４】さらに、製造されるタンパク質様組成物を
肝疾患用の栄養剤の主成分として用いる場合には、ゼラ
チンおよびその分解物が好ましい。肝疾患発症時には、
血液中の分枝鎖アミノ酸が減少するとともに、芳香族ア
ミノ酸（例えば、チロシン、トリプトファン、フェニル
アラニン）が増加すると言われている。ゼラチンおよび
その分解物中には、他の原料タンパク質に比べて、比較
的芳香族アミノ酸が少ないので、原料タンパク質とし
て、特に好ましい。

【００１５】そして、原料タンパク質溶液中の原料タン
パク質濃度（基質濃度）としては、タンパク質を加水分
解する場合よりも、高くすることが好ましい。原料タン
パク質の種類によってプラステイン反応に最適な濃度が
異なることもあるため、原料によって相違し、一率のも
のではないが、一般的には、２０〜６０Ｗ／Ｖ％程度と
することが好ましい。反応溶液中に添加される酵素は、
原料タンパク質の種類、導入されるアミノ酸の種類によ
って最適なものが異なるが、エンドペプチターゼを使用
することが好ましく、具体的には、パパイン、トリプシ
ン、ブロメライン、キモトリプシン、サーモリシン等が
好適である。また、酵素として上記のパパイン、ブロメ
ラインのようなチオールプロテアーゼを用いる場合に
は、還元剤としてシステイン塩酸塩、アスコルビン酸等
を添加することが好ましい。原料タンパク質溶液のｐＨ
は、原料タンパク質の種類、導入されるアミノ酸の種類
によって最適なものが異なるが、、添加された酵素の加
水分解時における最適値よりもややアルカリ側とするこ
とが好ましい。

【００１６】導入対象となるアミノ酸としては、バリ
ン、ロイシン、イソロイシンなどの分枝鎖アミノ酸、さ
らには、メチオニン、リジン、アルギニンなどが考えら
れる。そして、これらの導入対象のアミノ酸は、アルコ
ールエステル（例えば、メチルエステル、エチルエステ
ル）等の透導体として、原料タンパク質溶液中に添加さ
れる。アミノ酸エステルとしては、生体安全性の点よ
り、エチルエステルの状態で添加することが好ましい。

【００１７】そして、本発明のタンパク質様組成物の製
造方法では、原料タンパク質溶液中に塩類を添加してい
るので、従来より多量のアミノ酸、具体的には、原料タ
ンパク質の０．３〜１．２倍の量のアミノ酸を原料タン
パク質に効率よく導入できる。従来のプラステイン反応
を用いた方法でも、反応液中にリン酸ナトリウム、炭酸
ナトリウムなどの緩衝剤として機能する塩類が添加され
ている。そして、本発明者は、上記のような緩衝機能を
有する塩さらには緩衝作用が余り期待できない塩化ナト
リウム、塩化カリウムなどの塩を、従来、緩衝剤として
添加されてきた量より多めの５〜３０Ｗ／Ｖ％原料タン
パク質溶液に添加することにより、アミノ酸の原料タン
パク質への導入効果を上げることを知見した。添加する
量としては、より好ましくは、１０〜２０Ｗ／Ｖ％であ
る。そして、傾向としては、添加する塩類が多いほど導
入効果は上がるが、３０Ｗ／Ｖ％以上では溶解性の問題
や後の脱塩作業において問題が生じる。

【００１８】塩類としては、ナトリウム塩（例えば、炭
酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩
化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム）、カリウム塩（例
えば、炭酸カリウム、リン酸カリウム、酢酸カリウム、
塩化カリウム、炭酸水素カリウム）、マグネシウム塩
（例えば、炭酸マグネシウム、リン酸マグネシウム、酢
酸マグネシウム、塩化マグネシウム、炭酸水素マグネシ
ウム）、カルシウム塩（例えば、酢酸カルシウム、塩化
カルシウム）などが使用でき、後の脱塩作業の容易さな
どから上記のナトリウム塩、カリウム塩が望ましい。

【００１９】上記のような塩類を原料タンパク質溶液中
に添加しているので、アミノ酸を５０％以上の導入率
（添加したアミノ酸量に対するペプチド状に導入された
アミノ酸の割合）で原料タンパク質へ導入することがで
きる。

【００２０】そして、上記のようにアミノ酸が導入され
たタンパク質様組成物の反応溶液中には、未反応のアミ
ノ酸エステル、また中和により形成された無機塩が含ま
れているので、それらの不純物を除去する。この除去作
業は、反応溶液を遠心分離、濾過あるいは透析すること
により行うことができ、タンパク質様組成物を不溶分と
して得ることができる。そして、得られたタンパク質様
組成物を乾燥させて、粉末状あるいは粒状としてもよ
く、さらには、乾燥させずに、水に添加して懸濁液とし
てもよい。

【００２１】そして、本発明により得られたタンパク質
様組成物は、溶液状として、必要に応じ調味料香辛料等
を添加して、窒素源、特に分枝鎖アミノ酸の補給飲料の
主成分に用いることができる。また、粉末化して、一般
の食事に添加することもでき、さらに、糖質、脂質、ビ
タミンおよびミネラルを適量配合して、総合的な経管・
経口栄養剤として使用することができる。

【００２２】

【実施例】以下、本発明の実施例を具体的に説明する。 （実施例１） ［分枝鎖アミノ酸エチルエステルの作成］Ｌ−バリン６
０ｇ、Ｌ−ロイシン６０ｇ、Ｌ−イソロイシン６０ｇを
それぞれ濃硫酸４０ｍｌに溶解させ、エチルアルコール
１９０ｍｌを加え、それぞれを独立に９０℃で４時間加
熱還流し、エステル化反応を行った。反応終了後、炭酸
ナトリウムを反応液のｐＨが６．５〜７．５となるまで
添加、溶解させ、中和を行った。その後、形成された芒
硝の沈殿を遠心分離により除去し、それぞれのアミノ酸
エチルエステル溶液を得た。アルカリ処理による脱エス
テルしたものと比較することにより算出されたエステル
化率は、Ｌ−バリンエチルエステル９４％、Ｌ−ロイシ
ンエチルエステル９３％、Ｌ−イソロイシンエチルエス
テル９１％であった。以下にに示す実施例では、これら
アミノ酸エステルを、記載した量のアミノ酸が含まれる
ように溶液を計量し、エチルアルコールをできるかぎり
エバポレーターで除去したものを用いた。

【００２３】［タンパク質様組成物の合成］上述のよう
にして合成したロイシンエチルエステル、イソロイシン
エチルエステル、バリンエチルエステルをそれぞれ各ア
ミノ酸量として、１６１０ｍｇ、７３５ｍｇ、１０１９
ｍｇを１００ｍｌ容量の三角フラスコにとり、さらに、
システイン塩酸塩０．１５ｇ、炭酸ナトリウム３ｇを加
えて、すべてを水に溶解した後、水酸化ナトリウムに
て、ＰＨを８に調整した。次に、ホエー粉末（商品名セ
イボプロ７５、ゴールデンカリフォルニア株式会社製）
１０ｇを添加、混合して全体を５０ｍｌ（炭酸ナトリウ
ム添加濃度６Ｗ／Ｖ％）とした。反応時間０時間のサン
プルとして１ｍｌ分取した。そして、上記のビーカー
に、少量の水に溶解させたパパイン（天野製薬株式会
社）０．２ｇを添加、混合して撹拌しながら、４０℃で
２０時間、プラスチン反応を行った。反応２０時間のサ
ンプルとして１ｍｌ分取しておき、反応０時間のサンプ
ルとともにアルカリ脱エステルを行い、クエン酸緩衝液
（ｐＨ２．２）にて希釈し、アミノ酸分析計（日立８３
５型）を用いて計測した減少量から導入率を求めたとこ
ろ、バリン５１％、イソロイシン５４％、ロイシン８１
％であった。

【００２４】次に、反応終了後、約５０ｍｌの溶液に、
１Ｎ水酸化ナトリウムを１５０ｍｌ加え、撹拌しながら
４０℃で１時間脱エステル反応を行った後、２Ｎ塩酸を
ＰＨが６となるまで加えた。こうして得た約３００ｍｌ
の溶液を、イオン交換膜透析装置（ＴＳ−２−１０型，
徳山曹達株式会社製）にかけ、脱塩処理を行って電導度
が２ｍｓ／ｃｍ（当初は、５９ｍｓ／ｃｍ）となったと
ころで終了させた。脱塩処理後の溶液を、凍結乾燥する
ことにより、約１１ｇのタンパク質様組成物の粉末を得
た。この粉末は、ほとんど無味無臭であり、全窒素量よ
り求めたタンパク質含量は７８％、また、アミノ酸分析
計により調べた遊離アミノ酸量はそのうちの１０％であ
った。本発明の粉末５ｍｇを６Ｎ塩酸により、完全加水
分解をし、アミノ酸分析計により、アミノ酸組成を調べ
たところ、表１のような結果を得た。合わせて、原料タ
ンパク質であるホエーのアミノ酸組成を表２に示す。

【００２５】

【表１】

【００２６】

【表２】

【００２７】表１に示す通り、実施例１のタンパク質様
組成物は、アミノ酸組成中の分枝鎖アミノ酸の量（バリ
ン、ロイシン、イソロイシンの総量）は、４３Ｗ／Ｖ％
であり、全遊離アミノ酸は１０％であった。

【００２８】（実施例２）実施例１における炭酸ナトリ
ウム３ｇのかわりに、リン酸２ナトリウム３ｇ（添加濃
度６Ｗ／Ｖ％）を添加した以外は、実施例１と同様に行
った。得られたタンパク質様組成物の導入率を求めたと
ころ、バリン５５％、イソロイシン５６％、ロイシン８
１％であった。また、この粉末は、ほとんど無味無臭で
あり、全窒素量より求めたタンパク質含量は７７％、ま
た、アミノ酸分析計により調べた遊離アミノ酸量はその
うちの１０％であった。

【００２９】（実施例３）実施例１における炭酸ナトリ
ウム３ｇのかわりに、リン酸２カリウム３ｇ（添加濃度
６Ｗ／Ｖ％）を添加した以外は、実施例１と同様に行っ
た。得られたタンパク質様組成物の導入率を求めたとこ
ろ、バリン５８％、イソロイシン５８％、ロイシン８０
％であった。また、この粉末は、ほとんど無味無臭であ
り、全窒素量より求めたタンパク質含量は７６％、ま
た、アミノ酸分析計により調べた遊離アミノ酸量はその
うちの９％であった。

【００３０】（実施例４）実施例１における炭酸ナトリ
ウム３ｇのかわりに、酢酸ナトリウム３ｇ（添加濃度６
Ｗ／Ｖ％）を添加した以外は、実施例１と同様に行っ
た。得られたタンパク質様組成物の導入率を求めたとこ
ろ、バリン５６％、イソロイシン５８％、ロイシン８１
％であった。また、この粉末は、ほとんど無味無臭であ
り、全窒素量より求めたタンパク質含量は７７％、ま
た、アミノ酸分析計により調べた遊離アミノ酸量はその
うちの９％であった。

【００３１】（実施例５）実施例１における炭酸ナトリ
ウム３ｇのかわりに、塩化ナトリウム３ｇ（添加濃度６
Ｗ／Ｖ％）を添加した以外は、実施例１と同様に行っ
た。得られたタンパク質様組成物の導入率を求めたとこ
ろ、バリン５１％、イソロイシン５３％、ロイシン７９
％であった。また、この粉末は、ほとんど無味無臭であ
り、全窒素量より求めたタンパク質含量は７７％、ま
た、アミノ酸分析計により調べた遊離アミノ酸量はその
うちの１０％であった。

【００３２】（実施例６）実施例１における炭酸ナトリ
ウム３ｇのかわりに、塩化カリウム３ｇ（添加濃度６Ｗ
／Ｖ％）を添加した以外は、実施例１と同様に行った。
得られたタンパク質様組成物の導入率を求めたところ、
バリン５３％、イソロイシン５１％、ロイシン８０％で
あった。また、この粉末は、ほとんど無味無臭であり、
全窒素量より求めたタンパク質含量は７６％、また、ア
ミノ酸分析計により調べた遊離アミノ酸量はそのうちの
１０％であった。

【００３３】（比較例１）実施例１における炭酸ナトリ
ウム３ｇの添加を行わなかった以外は、実施例１と同様
に行った。得られたタンパク質様組成物の導入率を求め
たところ、バリン２７％、イソロイシン３０％、ロイシ
ン６９％であった。また、この粉末は、ほとんど無味無
臭であり、全窒素量より求めたタンパク質含量は７６
％、また、アミノ酸分析計により調べた遊離アミノ酸量
はそのうちの１５％であった。実施例１ないし６および
比較例１におけアミノ酸導入率を表３に示す。

【００３４】

【表３】

【００３５】表３に示すように、実施例では、３種のア
ミノ酸ともに、塩類を添加していない比較例に比べて導
入率が高く、特に、実施例では、比較例で導入率の悪か
ったバリン、イソロイシンも５０％以上の導入率を有し
ていた。

【００３６】（実施例７）実施例１における炭酸ナトリ
ウム３ｇのかわりに、炭酸ナトリウム２．５ｇ（添加濃
度５Ｗ／Ｖ％）を添加した以外は、実施例１と同様に行
った。得られたタンパク質様組成物の導入率を求めたと
ころ、バリン５０％、イソロイシン５６％、ロイシン８
０％であった。また、この粉末は、ほとんど無味無臭で
あり、全窒素量より求めたタンパク質含量は７７％、ま
た、アミノ酸分析計により調べた遊離アミノ酸量はその
うちの１０％であった。

【００３７】（実施例８）実施例１における炭酸ナトリ
ウム３ｇのかわりに、炭酸ナトリウム７．５ｇ（添加濃
度１５Ｗ／Ｖ％）を添加した以外は、実施例１と同様に
行った。得られたタンパク質様組成物の導入率を求めた
ところ、バリン５８％、イソロイシン６２％、ロイシン
８６％であった。また、この粉末は、ほとんど無味無臭
であり、全窒素量より求めたタンパク質含量は７６％、
また、アミノ酸分析計により調べた遊離アミノ酸量はそ
のうちの８％であった。

【００３８】（比較例２）実施例１における炭酸ナトリ
ウム３ｇのかわりに、炭酸ナトリウム１ｇ（添加濃度２
Ｗ／Ｖ％）を添加した以外は、実施例１と同様に行っ
た。得られたタンパク質様組成物の導入率を求めたとこ
ろ、バリン４２％、イソロイシン４６％、ロイシン７７
％であった。また、この粉末は、ほとんど無味無臭であ
り、全窒素量より求めたタンパク質含量は７６％、ま
た、アミノ酸分析計により調べた遊離アミノ酸量はその
うちの１２％であった。

【００３９】（実施例９）実施例１における炭酸ナトリ
ウム３ｇのかわりに、塩化ナトリウム２．５ｇ（添加濃
度５Ｗ／Ｖ％）を添加した以外は、実施例１と同様に行
った。得られたタンパク質様組成物の導入率を求めたと
ころ、バリン５０％、イソロイシン６２％、ロイシン７
５％であった。また、この粉末は、ほとんど無味無臭で
あり、全窒素量より求めたタンパク質含量は７７％、ま
た、アミノ酸分析計により調べた遊離アミノ酸量はその
うちの１１％であった。

【００４０】（実施例１０）実施例１における炭酸ナト
リウム３ｇのかわりに、塩化ナトリウム７．５ｇ（添加
濃度１５Ｗ／Ｖ％）を添加した以外は、実施例１と同様
に行った。得られたタンパク質様組成物の導入率を求め
たところ、バリン５８％、イソロイシン６０％、ロイシ
ン８０％であった。また、この粉末は、ほとんど無味無
臭であり、全窒素量より求めたタンパク質含量は７６
％、また、アミノ酸分析計により調べた遊離アミノ酸量
はそのうちの９％であった。

【００４１】（比較例３）実施例１における炭酸ナトリ
ウム３ｇのかわりに、塩化ナトリウム１ｇ（添加濃度２
Ｗ／Ｖ％）を添加した以外は、実施例１と同様に行っ
た。得られたタンパク質様組成物の導入率を求めたとこ
ろ、バリン３８％、イソロイシン３９％、ロイシン７３
％であった。また、この粉末は、ほとんど無味無臭であ
り、全窒素量より求めたタンパク質含量は７７％、ま
た、アミノ酸分析計により調べた遊離アミノ酸量はその
うちの１４％であった。実施例７〜１０および比較例
２，３におけるアミノ酸導入率を表４に示す。

【００４２】

【表４】

【００４３】表４に示されるように、２．５ｇ（５Ｗ／
Ｖ％）以上の塩類の添加により、３種アミノ酸の導入
率、特に、バリン、イソロイシンの導入率は５０％以上
となり、導入率向上効果を有することがわかった。

【００４４】（実施例１１） ［分枝鎖アミノ酸エチルエステルの作成］Ｌ−バリン６
０ｇ、Ｌ−ロイシン６０ｇ、Ｌ−イソロイシン６０ｇを
それぞれ濃硫酸４０ｍｌに溶解させ、エチルアルコール
１９０ｍｌを加え、それぞれを独立に９０℃で４時間加
熱還流し、エステル化反応を行った。反応終了後、炭酸
ナトリウムを反応液のｐＨが６．５〜７．５となるまで
添加、溶解させ、中和を行った。その後、形成された硫
酸ナトリウムの沈殿を遠心分離により除去し、それぞれ
のアミノ酸エチルエステル溶液を得た。アルカリ処理に
よる脱エステルしたものと比較することにより算出され
たエステル化率は、Ｌ−バリンエチルエステル９４％、
Ｌ−ロイシンエチルエステル９３％、Ｌ−イソロイシン
エチルエステル９１％であった。以下にに示す実施例で
は、これらアミノ酸エステルを、記載した量のアミノ酸
が含まれるように溶液を計量し、エチルアルコールをで
きるかぎりエバポレーターで除去したものを用いた。

【００４５】［タンパク質様組成物の合成］１００ｍｌ
の三角フラスコに低分子ゼラチン（新田ゼラチン製）
７．５ｇ、炭酸ナトリウム２．８ｇ、炭酸水素ナトリウ
ム０．８ｇ、システイン−塩酸塩０．１５ｇ、Ｌ−イソ
ロイシンエステルをアミノ酸量として２１６２ｍｇ、Ｌ
−ロイシンエステルをアミノ酸量として４２９７ｍｇ、
Ｌ−バリンエステルをアミノ酸量として２２２３ｍｇ、
パパイン（アマノ製薬）０．８ｇを水に溶解させたもの
を少量ずつ序々に添加後、全量を５０ｍｌ（炭酸ナトリ
ウム添加濃度５．６Ｗ／Ｖ％、炭酸水素ナトリウム添加
濃度１．６Ｗ／Ｖ％、炭酸ナトリウムおよび炭酸ナトリ
ウムの総添加濃度７．２Ｗ／Ｖ％）にし、４０℃で２０
時間酵素反応を行った。生成したタンパク質様物質に組
み入れられた分枝鎖アミノ酸は、Ｌ−イソロイシン１０
８０ｇ、Ｌ−ロイシン３６０７ｇ、Ｌ−バリン１１３４
ｍｇであり、導入率（添加量に対する組み入れられた量
の比率）は各々、５０％、７０％、５１％であった。

【００４６】次に、反応終了後、約５０ｍｌの溶液に、
１Ｎ水酸化ナトリウムを１５０ｍｌ加え、撹拌しながら
４０℃で１時間脱エステル反応を行った後、２Ｎ塩酸を
ＰＨが６となるまで加えた。こうして得た約３００ｍｌ
の溶液を、イオン交換膜透析装置（ＴＳ−２−１０型，
徳山曹達株式会社製）にかけ、脱塩処理を行って電導度
が２ｍｓ／ｃｍ（当初は、６２ｍｓ／ｃｍ）となったと
ころで終了させた。脱塩処理後の溶液を、凍結乾燥する
ことにより、約１２ｇのタンパク質様組成物の粉末を得
た。この粉末は、ほとんど無味無臭であった。このタン
パク質様組成物の粉末５ｍｇを６Ｎ塩酸により、完全加
水分解をし、アミノ酸分析計により、アミノ酸組成を調
べたところ、表５のような結果を得た。

【００４７】

【表５】

【００４８】（実施例１２）実施例１１における炭酸ナ
トリウム２．８ｇ、炭酸水素ナトリウム０．８ｇのかわ
りに、炭酸ナトリウム４．２ｇ、炭酸水素ナトリウム
１．２ｇ（炭酸ナトリリウム添加濃度８．４Ｗ／Ｖ％、
炭酸水素ナトリウム添加濃度１０．８Ｗ／Ｖ％）を添加
した以外は実施例１１と同様に行った。得られたタンパ
ク質様組成物の導入率を求めたところ、バリン５８％、
イソロイシン５３％、ロイシン７３％であった。また、
この粉末は、ほとんど無味無臭であり、全窒素量より求
めたタンパク質含量は８１％、また、アミノ酸分析計に
より調べた遊離アミノ酸量はそのうちの１８％であっ
た。

【００４９】（比較例４）実施例１１における炭酸ナト
リウム２．８ｇ、炭酸水素ナトリウム０．８ｇのかわり
に、炭酸ナトリウム１．４ｇ、炭酸水素ナトリウム０．
４ｇ（炭酸ナトリウム添加濃度２．８Ｗ／Ｖ％、炭酸水
素ナトリウム添加濃度０．８Ｗ／Ｖ％、炭酸ナトリウム
および炭酸ナトリウムの総添加濃度３１６Ｗ／Ｖ％）を
添加した以外は、実施例１１と同様に行った。得られた
タンパク質様組成物の導入率を求めたところ、バリン３
６％、イソロイシン３２％、ロイシン６５％であった。
また、この粉末は、ほとんど無味無臭であり、全窒素量
より求めたタンパク質含量は８２％、また、アミノ酸分
析計により調べた遊離アミノ酸量はそのうちの２２％で
あった。

【００５０】（比較例５）実施例１１における炭酸ナト
リウム２．８ｇ、炭酸水素ナトリウム０．８ｇの添加を
行わなかった以外は、実施例１１と同様に行った。得ら
れたタンパク質様組成物の導入率を求めたところ、バリ
ン２７％、イソロイシン２０％、ロイシン６０％であっ
た。また、この粉末は、ほとんど無味無臭であり、全窒
素量より求めたタンパク質含量は８２％、また、アミノ
酸分析計により調べた遊離アミノ酸量はそのうちの２５
％であった。実施例１１，１２および比較例４，５にお
けるアミノ酸導入率を表６に示す。

【００５１】

【表６】

【００５２】Ａ：炭酸ナトリウム添加濃度、Ｂ：炭酸水
素ナトリウム添加濃度、Ｃ：炭酸ナトリウムおよび炭酸
水素ナトリウムの総添加濃度

【００５３】表６に示されるように、炭酸ナトリウム
２．８ｇ、炭酸水素ナトリウム０．８ｇ（炭酸ナトリウ
ム濃度５．６Ｗ／Ｖ％、炭酸水素ナトリウム１．６Ｗ／
Ｖ％、炭酸ナトリウムおよび炭酸ナトリウムの総量濃度
７．２Ｗ／Ｖ％）以上の添加により、３種アミノ酸の導
入率、特に、バリン、イソロイシンの導入率は５０％以
上となり、導入率向上効果を有することがわかった。

【００５４】（実施例１３）実施例１１における炭酸ナ
トリウム２．８ｇ、炭酸水素ナトリウム０．８ｇのかわ
りに、塩化ナトリウム３ｇ（塩化ナトリウム添加濃度６
Ｗ／Ｖ％）を添加した以外は、実施例１１と同様に行っ
た。得られたタンパク質様組成物の導入率を求めたとこ
ろ、バリン５１％、イソロイシン５５％、ロイシン７１
％であった。また、この粉末は、ほとんど無味無臭であ
り、全窒素量より求めたタンパク質含量は８２％、ま
た、アミノ酸分析計により調べた遊離アミノ酸量はその
うちの２０％であった。

【００５５】（比較例６）実施例１１における炭酸ナト
リウム２．８ｇ、炭酸水素ナトリウム０．８ｇのかわり
に、塩化ナトリウム１．５ｇ（塩化ナトリウム添加濃度
３Ｗ／Ｖ％）を添加した以外は、実施例１１と同様に行
った。得られたタンパク質様組成物の導入率を求めたと
ころ、バリン３３％、イソロイシン３０％、ロイシン６
０％であった。また、この粉末は、ほとんど無味無臭で
あり、全窒素量より求めたタンパク質含量は８２％、ま
た、アミノ酸分析計により調べた遊離アミノ酸量はその
うちの２３％であった。実施例１３および比較例６にお
けるアミノ酸導入率を表７に示す。

【００５６】

【表７】

【００５７】表７示されるように、塩化ナトリウム３ｇ
（塩化ナトリウム濃度６Ｗ／Ｖ％）以上の添加により、
３種アミノ酸の導入率、特に、バリン、イソロイシンの
導入率は５０％以上となり、導入率向上効果を有するこ
とがわかった。

【００５８】（実施例１４） ［グリシン、アラニン、アルギニンの各エチルエステル
の作成］Ｌ−グリシン６０ｇ、Ｌ−アラニン６０ｇ、Ｌ
−アルギニン６０ｇをそれぞれ濃硫酸４０ｍｌに溶解さ
せ、エチルアルコール１９０ｍｌを加え、それぞれを独
立に９０℃で４時間加熱還流し、エステル化反応を行っ
た。反応終了後、炭酸ナトリウムを反応液のｐＨが６．
５〜７．５となるまで添加、溶解させ、中和を行った。
その後、形成された硫酸ナトリウムの沈殿を遠心分離に
より除去し、それぞれのアミノ酸エチルエステル溶液を
得た。アルカリ処理による脱エステルしたものと比較す
ることにより算出されたエステル化率は、Ｌ−グリシン
エチルエステル８４％、Ｌ−アラニンエチルエステル８
０％、Ｌ−アルギニンエチルエステル８６％であった。
以下にに示す実施例では、これらアミノ酸エステルを、
記載した量のアミノ酸が含まれるように溶液を計量し、
エチルアルコールをできるかぎりエバポレーターで除去
したものを用いた。

【００５９】［タンパク質様組成物の合成］上述のよう
にして合成したグリシンエチルエステル、アラニンエチ
ルエステル、アルギニンエチルエステルをそれぞれ各ア
ミノ酸量として１０００ｍｇずつを１００ｍｌの三角フ
ラスコにとり、さらに、システイン塩酸塩０．１５ｇ、
炭酸ナトリウム３ｇを加えて、すべてを水に溶解した
後、水酸化ナトリウムにて、ＰＨを８に調整した。次
に、ホエー粉末（商品名セイボプロ７５、ゴールデンカ
リフォルニア株式会社製）１０ｇを添加、混合して全体
を５０ｍｌ（炭酸ナトリウム添加濃度６Ｗ／Ｖ％）とし
た。反応時間０時間のサンプルとして１ｍｌ分取した。
そして、上記のビーカーに、少量の水に溶解させたパパ
イン（天野製薬株式会社）０．２ｇを添加、混合して撹
拌しながら、４０℃で２０時間、プラスチン反応を行っ
た。反応２０時間のサンプルとして１ｍｌ分取してお
き、反応０時間のサンプルとともにアルカリ脱エステル
を行い、クエン酸緩衝液（ｐＨ２．２）にて希釈し、ア
ミノ酸分析計（日立８３５型）を用いて計測した減少量
から導入率を求めたところ、グリシン５１％、アラニン
５３％、アルギニン８１％であった。また、この粉末は
ほとんど無味・無臭であり、全窒素より求めたタンパク
質含量は７７％、また、アミノ酸分析計により調べた遊
離アミノ酸量はそのうちの８％であった。

【００６０】（比較例７）実施例１４における炭酸ナト
リウム３ｇの添加を行わなかった以外は、実施例１４と
同様に行った。得られたタンパク質様組成物の導入率を
求めたところ、グリシン４４％、アラニン３７％、アル
ギニン６５％であった。また、この粉末はほとんど無味
・無臭であり、全窒素量より求めたタンパク質含量は７
７％、また、アミノ酸分析計により調べた遊離アミノ酸
量はそのうちの１０％であった。実施例１４および比較
例７におけるアミノ酸導入率を表８に示す。

【００６１】

【表８】

【００６２】表８に示されるように、炭酸ナトリウム３
ｇの添加により、３種のアミノ酸の導入率、特にグリシ
ン、アラニンの導入率は５０％以上となり、導入率向上
効果を有することが分かった。

【００６３】

【発明の効果】本発明のタンパク質様組成物の製造方法
は、原料タンパク質と、少なくとも一種のアミノ酸エス
テルと、タンパク質分解酵素とが添加された溶液中に、
該溶液に対し、塩類を添加し、前記タンパク質に前記ア
ミノ酸エステル中のアミノ酸をプラステイン反応により
導入するものであるので、原料タンパク質に十分な量の
アミノ酸を導入することができ、かつ、導入率が低いと
されているアミノ酸を確実かつ効率的に原料タンパク質
に導入することができ、よって、原料タンパク質に従来
よりも高い割合でアミノ酸が導入されたタンパク質様組
成物を得ることができる。したがって、本発明によるタ
ンパク質様組成物の製造方法は、少なくとも一種のアミ
ノ酸を多量に反応液中に添加し、導入させたい場合に適
している。ペプチド状に導入することによって、アミノ
酸自体のもつ不快な味やにおい、あるいは、溶解・分散
性の悪さなどの改善が期待できる。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 原料タンパク質と、少なくとも一種のア
   ミノ酸エステルと、タンパク質分解酵素とが添加された
   溶液中に、該溶液に対し、塩類を添加し、前記タンパク
   質に前記アミノ酸エステル中のアミノ酸をプラステイン
   反応により導入することを特徴とするタンパク質様組成
   物の製造方法。
2. 【請求項２】 添加する塩類は、ナトリウム塩もしくは
   カリウム塩である請求項１に記載のタンパク質様組成物
   の製造方法。
3. 【請求項３】 前記塩類の添加量は、前記溶液に対して
   ５〜３０Ｗ／Ｖ％である請求項１に記載のタンパク質様
   組成物の製造方法。
4. 【請求項４】 前記アミノ酸エステルは、アミノ酸エチ
   ルエステルである請求項１ないし３のいずれかに記載の
   タンパク質様組成物の製造方法。