JPH05113396A - フローサイトメーターの洗浄サイクル - Google Patents
フローサイトメーターの洗浄サイクルInfo
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- JPH05113396A JPH05113396A JP3137552A JP13755291A JPH05113396A JP H05113396 A JPH05113396 A JP H05113396A JP 3137552 A JP3137552 A JP 3137552A JP 13755291 A JP13755291 A JP 13755291A JP H05113396 A JPH05113396 A JP H05113396A
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Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
- A61L2/16—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor using chemical substances
- A61L2/18—Liquid substances or solutions comprising solids or dissolved gases
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- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L13/00—Cleaning or rinsing apparatus
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- G—PHYSICS
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【目的】強酸化性溶液、無粒子中性ｐＨ流体および弱酸
を逐次使用することを含むフローサイトメーター中の細
胞汚染物質を洗浄する方法の提供。 【構成】溜め８０は強酸化性溶液を含有し、溜め８１は
中性ｐＨ流体を含有し、溜め８２は弱酸を含有する。溜
めを加圧する空気は、フィルター８４を備えた管路中に
あるポンプ８３によって供給される。空気の流れをそれ
ぞれの溜めに向けるように、回転弁８５が設けられてい
る。さらに別の回転弁８６により、溜めは流体系に接続
される。
を逐次使用することを含むフローサイトメーター中の細
胞汚染物質を洗浄する方法の提供。 【構成】溜め８０は強酸化性溶液を含有し、溜め８１は
中性ｐＨ流体を含有し、溜め８２は弱酸を含有する。溜
めを加圧する空気は、フィルター８４を備えた管路中に
あるポンプ８３によって供給される。空気の流れをそれ
ぞれの溜めに向けるように、回転弁８５が設けられてい
る。さらに別の回転弁８６により、溜めは流体系に接続
される。
Description
【０００１】（発明の分野）本発明はフローサイトメー
ターの洗浄方法に関し、より詳細にはフローサイトメー
ターおよび関連周辺装置の自動洗浄サイクルに関する。
ターの洗浄方法に関し、より詳細にはフローサイトメー
ターおよび関連周辺装置の自動洗浄サイクルに関する。
【０００２】（発明の背景）フローサイトメトリーは研
究によく受け入れられる手段である。フローサイトメト
リーによって使用者は最高毎秒１万個の細胞という割合
で数万個の細胞を分析したり選別したりすることができ
る。この手段の効果は拡がり続け、ごく最近では疾病を
評価し、特定する臨床器具としてフローサイトメーター
を使用する用途が考えられ、認められるようになった。
究によく受け入れられる手段である。フローサイトメト
リーによって使用者は最高毎秒１万個の細胞という割合
で数万個の細胞を分析したり選別したりすることができ
る。この手段の効果は拡がり続け、ごく最近では疾病を
評価し、特定する臨床器具としてフローサイトメーター
を使用する用途が考えられ、認められるようになった。
【０００３】フローサイトメーターの作動方法の完全な
説明は多くの参考資料に見出すことができる。Herzenbe
rgらはSci. Amer.,231:108 (1976)において、原型機器
の作動および構造を述べている。実質的に、該器は細胞
試料を用い、細胞を、１度に実質的に１個ずつ、照射帯
域を通過させ、そこで各細胞を光源、典型的にはレーザ
ーのような単一波長の光源によって照射し、各細胞によ
る散乱光を一連の光検出器で集めるように設計されてい
る。実験結果は電算機のようなデータ記憶装置に記憶さ
せて分析する。別の形式では、細胞を、次の実験に用い
ることができるように、細胞が照射帯域を出るにつれ
て、光学的および他の特性に基づいて分離することがで
きる。フローサイトメーターの２種類の例が米国特許第
４，２８４，４１２号および同第３，８２６，３６４号
に示されている。
説明は多くの参考資料に見出すことができる。Herzenbe
rgらはSci. Amer.,231:108 (1976)において、原型機器
の作動および構造を述べている。実質的に、該器は細胞
試料を用い、細胞を、１度に実質的に１個ずつ、照射帯
域を通過させ、そこで各細胞を光源、典型的にはレーザ
ーのような単一波長の光源によって照射し、各細胞によ
る散乱光を一連の光検出器で集めるように設計されてい
る。実験結果は電算機のようなデータ記憶装置に記憶さ
せて分析する。別の形式では、細胞を、次の実験に用い
ることができるように、細胞が照射帯域を出るにつれ
て、光学的および他の特性に基づいて分離することがで
きる。フローサイトメーターの２種類の例が米国特許第
４，２８４，４１２号および同第３，８２６，３６４号
に示されている。
【０００４】細胞を、１度に実質的に１個ずつ照射帯域
に流すためには、試料中の細胞を、液体緩衝剤中のノズ
ルアセンブリー（たとえば米国特許第３，８２６，３６
４号の図１の１２参照）を通し、さらに該帯域の無粒子
被包流体中に同軸的に供給する。細胞を分離しなければ
ならない場合には、ノズルを特定周波数で振動させて、
各滴が単一細胞を含むようにノズル先端に滴を形成させ
ることができる。
に流すためには、試料中の細胞を、液体緩衝剤中のノズ
ルアセンブリー（たとえば米国特許第３，８２６，３６
４号の図１の１２参照）を通し、さらに該帯域の無粒子
被包流体中に同軸的に供給する。細胞を分離しなければ
ならない場合には、ノズルを特定周波数で振動させて、
各滴が単一細胞を含むようにノズル先端に滴を形成させ
ることができる。
【０００５】各細胞から集めたデータは２つのタイプに
分けられる。すなわち散乱性と免疫蛍光性である。前者
の場合には、各細胞は、細胞の大きさおよび粒状によっ
て光源からの光を散乱させる。散乱光は、光源に対して
或る角度に置いた光検出器によって集めることができ
る。他方、免疫蛍光は、蛍光色素に共役している単クロ
ーン抗体のような１つ以上の免疫蛍光マーカーによって
細胞に標識をつけた関数である。この場合には、蛍光色
素が光源によって励起可能であり、重なり合わないピー
クを有する波長で発光しなければならない。このよう
に、試料中の細胞に１つ以上の免疫蛍光マーカーで標識
をつけることによって、散乱および免疫蛍光の両者を特
定細胞の同定に用いることができる。米国特許第４，５
５９，３０７号および同第４，６０７，００７号は試料
中の細胞を識別するのに散乱および免疫蛍光を同時に使
用することができる方法の２つの例を提示している。
分けられる。すなわち散乱性と免疫蛍光性である。前者
の場合には、各細胞は、細胞の大きさおよび粒状によっ
て光源からの光を散乱させる。散乱光は、光源に対して
或る角度に置いた光検出器によって集めることができ
る。他方、免疫蛍光は、蛍光色素に共役している単クロ
ーン抗体のような１つ以上の免疫蛍光マーカーによって
細胞に標識をつけた関数である。この場合には、蛍光色
素が光源によって励起可能であり、重なり合わないピー
クを有する波長で発光しなければならない。このよう
に、試料中の細胞に１つ以上の免疫蛍光マーカーで標識
をつけることによって、散乱および免疫蛍光の両者を特
定細胞の同定に用いることができる。米国特許第４，５
５９，３０７号および同第４，６０７，００７号は試料
中の細胞を識別するのに散乱および免疫蛍光を同時に使
用することができる方法の２つの例を提示している。
【０００６】典型的な実験では、１０，０００ないし２
００，０００個の細胞が分析される。ほとんどのメーカ
ーは、実験中に、試料緩衝剤を試料ポート中に導入し、
ノズル（またはフローセル）を含む系全体を洗浄するた
めに機器中に通すことをすすめている。しかし、この方
法を用いると、試料中最高０．１％の細胞が系内に残
り、通常の洗浄では洗い落とせないことが判明した。通
常、このことは問題となるものではないが、試料中の稀
少事象（すなわち、１，０００，０００分の１の程度で
起こる事象）を検索しようとする場合は、先行試料から
の０．１％の汚染が真実でない結果をもたらすであろ
う。
００，０００個の細胞が分析される。ほとんどのメーカ
ーは、実験中に、試料緩衝剤を試料ポート中に導入し、
ノズル（またはフローセル）を含む系全体を洗浄するた
めに機器中に通すことをすすめている。しかし、この方
法を用いると、試料中最高０．１％の細胞が系内に残
り、通常の洗浄では洗い落とせないことが判明した。通
常、このことは問題となるものではないが、試料中の稀
少事象（すなわち、１，０００，０００分の１の程度で
起こる事象）を検索しようとする場合は、先行試料から
の０．１％の汚染が真実でない結果をもたらすであろ
う。
【０００７】従って、必要なことは系内の汚染を実質的
にゼロに低下させるフローサイトメーターの流体系を洗
浄する方法である。
にゼロに低下させるフローサイトメーターの流体系を洗
浄する方法である。
【０００８】（発明の要約）本発明は、強酸化性溶液、
ｐＨ中性液、および弱酸フローサイトメーターの流体系
内を逐次通過させるフローサイトメーター洗浄方法より
成る。一旦系が洗浄されると、被包流体を用いて、フロ
ーサイトメーターを正常作動状態に戻し、かつ弱酸の少
しの残留物をも除去することができる。
ｐＨ中性液、および弱酸フローサイトメーターの流体系
内を逐次通過させるフローサイトメーター洗浄方法より
成る。一旦系が洗浄されると、被包流体を用いて、フロ
ーサイトメーターを正常作動状態に戻し、かつ弱酸の少
しの残留物をも除去することができる。
【０００９】本発明は各流体を逐次試料ポートに導入す
ることによって行うことができる。もしくは、各流体の
溜めをフローサイトメーターに組込むことができ、さら
に一連の弁の開閉によって、各流体を逐次フローサイト
メーター内に導入することができる。
ることによって行うことができる。もしくは、各流体の
溜めをフローサイトメーターに組込むことができ、さら
に一連の弁の開閉によって、各流体を逐次フローサイト
メーター内に導入することができる。
【００１０】（発明の詳細な説明）説明上の便宜のた
め、米国特許第３，８２６，３６４号のＦｉｇ１に示す
流体系をモデル系として示す。この米国特許で示されて
いる流体系（Ｆｉｇ１）を図５として示す。以後使用す
る参照番号は図５の番号を指す。本発明の実施が流体系
の特定の構成、その個々の成分、流体の流動方向または
フローサイトメーターの使用方法に左右されるものでは
ないことは理解されよう。たとえば、試料溜めが無い場
合には、試料を使い捨ての試験管に収め、それを試料ポ
ートに取付けて各試料を流した後に除去するＦＡＣＳca
nTMフローサイトメーター（Becton Dickinson Immunocy
tometry Systems）に用いられているような試料ポート
がありさえすればよい。試料ポートはさらに試料供給管
路に接続する。いずれにしても、系をいかに構成するか
は、試料流体に接触する各成分を本発明の方法によって
確実に洗浄することほど重要なことではない。
め、米国特許第３，８２６，３６４号のＦｉｇ１に示す
流体系をモデル系として示す。この米国特許で示されて
いる流体系（Ｆｉｇ１）を図５として示す。以後使用す
る参照番号は図５の番号を指す。本発明の実施が流体系
の特定の構成、その個々の成分、流体の流動方向または
フローサイトメーターの使用方法に左右されるものでは
ないことは理解されよう。たとえば、試料溜めが無い場
合には、試料を使い捨ての試験管に収め、それを試料ポ
ートに取付けて各試料を流した後に除去するＦＡＣＳca
nTMフローサイトメーター（Becton Dickinson Immunocy
tometry Systems）に用いられているような試料ポート
がありさえすればよい。試料ポートはさらに試料供給管
路に接続する。いずれにしても、系をいかに構成するか
は、試料流体に接触する各成分を本発明の方法によって
確実に洗浄することほど重要なことではない。
【００１１】フローサイトメーターの流体系は試料流体
溜め１４、試料供給管路１８、被包流体溜め１６、被包
流体管路２０、圧力調整器２４および２６ならびにノズ
ルアセンブリー１０より成る。ノズルアセンブリー１０
は、さらに、流体を供給路１８および２０からそれぞれ
供給する内側および外側に同軸状に設置されたノズル２
３および３０より成る。同軸状の流体のストリーム１２
は内側細胞含有部分１２Ａおよび外側無細胞被包流体含
有部分１２Ｂより成る。細胞を集める受器は、細胞選別
器（すなわち分離器）の場合には、通常６８Ａないし６
８Ｃとして示す通りである。選別を必要としない分析器
の場合には、廃棄物排出管路または収集受器（図示せ
ず）があればよい。
溜め１４、試料供給管路１８、被包流体溜め１６、被包
流体管路２０、圧力調整器２４および２６ならびにノズ
ルアセンブリー１０より成る。ノズルアセンブリー１０
は、さらに、流体を供給路１８および２０からそれぞれ
供給する内側および外側に同軸状に設置されたノズル２
３および３０より成る。同軸状の流体のストリーム１２
は内側細胞含有部分１２Ａおよび外側無細胞被包流体含
有部分１２Ｂより成る。細胞を集める受器は、細胞選別
器（すなわち分離器）の場合には、通常６８Ａないし６
８Ｃとして示す通りである。選別を必要としない分析器
の場合には、廃棄物排出管路または収集受器（図示せ
ず）があればよい。
【００１２】フローサイトメーターを洗浄するには、強
酸化性溶液を溜め１４および１６に入れる。本発明の実
施に有用な強酸化性溶液は０．７Ｖを上回る酸化電位で
あるべきである。該溶液の例にはＮａＯＨとＮａＯＣｌ
との混合物およびＫＯＨとＫＯＣｌとの混合物がある。
ＮａＯＨとＮａＯＣｌとの混合物が好ましい。調整器２
４および２６によって圧力を加えることなく、該溶液を
流体系全体に満たす。１０秒ないし１０分間系内に該液
をとどめるが、３０秒が最適である。
酸化性溶液を溜め１４および１６に入れる。本発明の実
施に有用な強酸化性溶液は０．７Ｖを上回る酸化電位で
あるべきである。該溶液の例にはＮａＯＨとＮａＯＣｌ
との混合物およびＫＯＨとＫＯＣｌとの混合物がある。
ＮａＯＨとＮａＯＣｌとの混合物が好ましい。調整器２
４および２６によって圧力を加えることなく、該溶液を
流体系全体に満たす。１０秒ないし１０分間系内に該液
をとどめるが、３０秒が最適である。
【００１３】この時間経過後、試料溜め１４から系内の
該液を抜き取り、試料溜め１４を経て空気を導入する。
空気を導入しながら、酸化性溶液を加圧して空になるま
で被包溜め１６から流す。溜めは次に中性ｐＨ流体を満
たす。この流体は無粒子でなければならない。流体は脱
イオン水であるのが好ましい。アジ化ナトリウムのよう
な防腐剤を添加することができる。防腐剤の目的は微生
物の成長を阻止することである。次に中性ｐＨ流体を加
圧して空になるまで流体系に流す。
該液を抜き取り、試料溜め１４を経て空気を導入する。
空気を導入しながら、酸化性溶液を加圧して空になるま
で被包溜め１６から流す。溜めは次に中性ｐＨ流体を満
たす。この流体は無粒子でなければならない。流体は脱
イオン水であるのが好ましい。アジ化ナトリウムのよう
な防腐剤を添加することができる。防腐剤の目的は微生
物の成長を阻止することである。次に中性ｐＨ流体を加
圧して空になるまで流体系に流す。
【００１４】次に、溜め１４および１６にＰk値がほぼ
３の弱酸を満たす。本発明の実施に有用な弱酸には０．
０１Ｍ酢酸および０．０１Ｍ Ｎ−トリクロロ酢酸があ
る。酢酸が好ましい。再び溜めが空になるまで加圧して
流体系に流す。
３の弱酸を満たす。本発明の実施に有用な弱酸には０．
０１Ｍ酢酸および０．０１Ｍ Ｎ−トリクロロ酢酸があ
る。酢酸が好ましい。再び溜めが空になるまで加圧して
流体系に流す。
【００１５】最後に、被包流体溜め１６に被包流体を再
充填し、約２分間加圧して流して少しの残留酸をも洗い
去る。こうして、流体系には試料を汚染すると思われる
細胞は実質的になくなっている。
充填し、約２分間加圧して流して少しの残留酸をも洗い
去る。こうして、流体系には試料を汚染すると思われる
細胞は実質的になくなっている。
【００１６】本系の別の態様では、流体系に３つの溜め
を加えることができる。たとえば図４参照。１つの溜め
８０は強酸化性溶液を含有し、１つの溜め８１は中性ｐ
Ｈ流体を含有し、他の溜め８２は弱酸を含有する。溜め
を加圧する空気はフィルター８４を備えた管路中にある
ポンプ８３によって供給される。空気の流れをそれぞれ
の溜めに向けるように回転弁８５が設けられている。別
の回転弁８６によりメーターで計量される共通供給路に
よって、細胞が系に最初に接触する点（たとえば試料ポ
ート８８）において溜めは流体系に接続される。図示態
様においては、共通供給路は被包流体流入路８７と接続
している。この流入路には２個所の入口があり、１つは
フローセル８９に入る入口で、他は試料ポート８８に入
る入口である。被包流体の流れはピンチ弁９１，９２お
よび９３によって制御される。試料ポート８８からフロ
ーセル（図示せず）への試料注入管をおおまかに９４で
示す。試料ポートを加圧する別の計量空気供給源をおお
まかに９５で示す。
を加えることができる。たとえば図４参照。１つの溜め
８０は強酸化性溶液を含有し、１つの溜め８１は中性ｐ
Ｈ流体を含有し、他の溜め８２は弱酸を含有する。溜め
を加圧する空気はフィルター８４を備えた管路中にある
ポンプ８３によって供給される。空気の流れをそれぞれ
の溜めに向けるように回転弁８５が設けられている。別
の回転弁８６によりメーターで計量される共通供給路に
よって、細胞が系に最初に接触する点（たとえば試料ポ
ート８８）において溜めは流体系に接続される。図示態
様においては、共通供給路は被包流体流入路８７と接続
している。この流入路には２個所の入口があり、１つは
フローセル８９に入る入口で、他は試料ポート８８に入
る入口である。被包流体の流れはピンチ弁９１，９２お
よび９３によって制御される。試料ポート８８からフロ
ーセル（図示せず）への試料注入管をおおまかに９４で
示す。試料ポートを加圧する別の計量空気供給源をおお
まかに９５で示す。
【００１７】別の態様では、試料のプログラム可能な染
色に続いて試料をフローサイトメーターに導入させるＦ
ＡＣＳＰrepTM（ＢＤＩＳ）のような試料調製部を本発
明によって洗浄するように修正することもできる。この
態様では、上記溜めシステムを単独または系と組合せて
フローサイトメーターに組込むことができる。
色に続いて試料をフローサイトメーターに導入させるＦ
ＡＣＳＰrepTM（ＢＤＩＳ）のような試料調製部を本発
明によって洗浄するように修正することもできる。この
態様では、上記溜めシステムを単独または系と組合せて
フローサイトメーターに組込むことができる。
【００１８】本方法の有効性を示すために、種々の細胞
試料を流すのに使用したＦＡＣＳcanTMフローサイトメ
ーターをメーカーの指示に従って（たとえば、流体系を
家庭用漂白剤溶液を流し、次いで被包流体で洗い流すこ
とによって）洗浄した。次に「サンプル（sample）」と
してリン酸塩緩衝食塩水（無粒子）をフローサイトメー
ターの中に流した。散乱の２つの測定値を記録し、蛍光
の３つの測定結果を記録した（ゲートで制御せず）。試
験結果を図１に示す。見てわかるように、通常の洗浄法
を用いると散乱および蛍光に著しいバックグラウンドレ
ベルが検知された。
試料を流すのに使用したＦＡＣＳcanTMフローサイトメ
ーターをメーカーの指示に従って（たとえば、流体系を
家庭用漂白剤溶液を流し、次いで被包流体で洗い流すこ
とによって）洗浄した。次に「サンプル（sample）」と
してリン酸塩緩衝食塩水（無粒子）をフローサイトメー
ターの中に流した。散乱の２つの測定値を記録し、蛍光
の３つの測定結果を記録した（ゲートで制御せず）。試
験結果を図１に示す。見てわかるように、通常の洗浄法
を用いると散乱および蛍光に著しいバックグラウンドレ
ベルが検知された。
【００１９】本発明により、０．０５Ｍ ＮａＯＨ と
０．０７Ｍ ＮａＯＣｌとの混合物より成る強酸化性溶
液、無粒子脱イオン水、および０．０１Ｍ酢酸を逐次フ
ローサイトメーター中に流した。次に「サンプル」とし
てフローサイトメーターの中にＰＢＳを流した。再び、
散乱の２つの測定結果および蛍光の３つの測定結果を記
録した。図２および３からわかるように、９時間のＰＢ
Ｓ「サンプル」後に、ゲート内では散乱によって僅か６
つの事象のみ記録され、蛍光では全く記録されなかっ
た。このように、フローサイトメーターの流体系の汚染
は実質的にゼロに減少した。
０．０７Ｍ ＮａＯＣｌとの混合物より成る強酸化性溶
液、無粒子脱イオン水、および０．０１Ｍ酢酸を逐次フ
ローサイトメーター中に流した。次に「サンプル」とし
てフローサイトメーターの中にＰＢＳを流した。再び、
散乱の２つの測定結果および蛍光の３つの測定結果を記
録した。図２および３からわかるように、９時間のＰＢ
Ｓ「サンプル」後に、ゲート内では散乱によって僅か６
つの事象のみ記録され、蛍光では全く記録されなかっ
た。このように、フローサイトメーターの流体系の汚染
は実質的にゼロに減少した。
【００２０】本明細書に挙げた出版物および特許出願は
すべて本発明が関係する当業者の水準を示すものであ
る。すべての出版物および特許出願は、具体的かつ個別
的に個々の出版物または特許出願を参考資料として収録
すると示した場合には、その範囲で参考資料として本明
細書に収録する。
すべて本発明が関係する当業者の水準を示すものであ
る。すべての出版物および特許出願は、具体的かつ個別
的に個々の出版物または特許出願を参考資料として収録
すると示した場合には、その範囲で参考資料として本明
細書に収録する。
【００２１】添付クレームの精神または範囲から逸脱せ
ずに本発明に多くの変更および修正をなし得ることは当
業者には明らかであろう。
ずに本発明に多くの変更および修正をなし得ることは当
業者には明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【図１】製造業者の指示に従って通常のように維持さ
れ、洗浄されたフローサイトメーターについて、無粒子
リン酸塩緩衝食塩水をフローサイトメーターに流した場
合の（Ａ）前方光散乱（ＦＳＣ）対側方光散乱（ＳＳ
Ｃ）、（Ｂ）蛍光１（ＦＬ１）対蛍光３（ＦＬ３）、
（Ｃ）蛍光２（ＦＬ２）対蛍光１（ＦＬＩ）、および
（Ｄ）蛍光２（ＦＬ２）対蛍光３（ＦＬ３）の４つのド
ット・プロット・パターンである。
れ、洗浄されたフローサイトメーターについて、無粒子
リン酸塩緩衝食塩水をフローサイトメーターに流した場
合の（Ａ）前方光散乱（ＦＳＣ）対側方光散乱（ＳＳ
Ｃ）、（Ｂ）蛍光１（ＦＬ１）対蛍光３（ＦＬ３）、
（Ｃ）蛍光２（ＦＬ２）対蛍光１（ＦＬＩ）、および
（Ｄ）蛍光２（ＦＬ２）対蛍光３（ＦＬ３）の４つのド
ット・プロット・パターンである。
【図２】ゲートで無制御の事象について、本発明の方法
を用いてフローサイトメーターを洗浄した後の図１と同
じドット・プロット・パターンである。
を用いてフローサイトメーターを洗浄した後の図１と同
じドット・プロット・パターンである。
【図３】ゲートで制御した事象について本発明の方法を
用いてフローサイトメーターを洗浄した後の図２と同じ
ドット・プロット・パターンである。
用いてフローサイトメーターを洗浄した後の図２と同じ
ドット・プロット・パターンである。
【図４】本発明によって系を洗浄するように設備された
フローサイトメーター流体系の１つの態様の略図であ
る。
フローサイトメーター流体系の１つの態様の略図であ
る。
【図５】米国特許第３，８２６，３６４号で示されてい
る流体系を示す概略図である。
る流体系を示す概略図である。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成４年１０月２日
【手続補正１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正内容】
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ロバート・エー・ホフマン アメリカ合衆国カリフオルニア州94550， リバーモア，マーズ・ロード 2129
Claims (10)
- 【請求項１】 強酸化性溶液、無粒子中性ｐＨ流体およ
び弱酸を逐次流体系に添加することを含むフローサイト
メーターを洗浄する方法。 - 【請求項２】 強酸化性溶液の酸化価が０．７Ｖよりも
大きい請求項１の方法。 - 【請求項３】 強酸化性溶液がＮａＯＨとＮａＯＣｌと
の混合物およびＫＯＨとＫＯＣｌとの混合物よりなる群
から選ばれる請求項２の方法。 - 【請求項４】 強酸化性溶液がＮａＯＨとＮａＯＣｌと
の混合物である請求項３の方法。 - 【請求項５】 弱酸のＰk値がほぼ３である請求項１の
方法。 - 【請求項６】 弱酸が酢酸およびＮ−トリクロロ酢酸よ
り成る群から選ばれる請求項５の方法。 - 【請求項７】 弱酸が酢酸である請求項６の方法。
- 【請求項８】 フローサイトメーターから細胞汚染物質
を除去する方法において、流体系にＮａＯＨとＮａＯＣ
ｌとの混合物を数分間添加し、空気および被包流体とし
てのＮａＯＨとＮａＯＣｌとの混合物で系を洗い流し、
アジ化ナトリウムを含む無粒子脱イオン水で系を洗い流
し、酢酸で系を洗い流し、さらに被包流体で系を平衡さ
せる逐次工程を含む方法。 - 【請求項９】 混合物が０．０５Ｍ ＮａＯＨおよび
０．０７ＮａＯＣｌを含む請求項８の方法。 - 【請求項１０】 自己洗浄能力を有するフローサイトメ
ーターにおいて、強酸化性溶液、無粒子中性ｐＨ流体お
よび弱酸を個別的に含む複数の溜めを含み、各溜めは供
給管路によって流体系の導入部に接続され、さらに溜め
からの流体の流れを個別に制御する弁を各溜めに含むサ
イトメーター。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US537858 | 1990-06-13 | ||
| US07/537,858 US5087295A (en) | 1990-06-13 | 1990-06-13 | Cleaning cycle for flow cytometers |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05113396A true JPH05113396A (ja) | 1993-05-07 |
| JPH0769260B2 JPH0769260B2 (ja) | 1995-07-26 |
Family
ID=24144406
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3137552A Expired - Lifetime JPH0769260B2 (ja) | 1990-06-13 | 1991-06-10 | フローサイトメーターの洗浄サイクル |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5087295A (ja) |
| EP (1) | EP0461618A3 (ja) |
| JP (1) | JPH0769260B2 (ja) |
| IE (1) | IE911550A1 (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6473177B2 (en) | 2000-07-07 | 2002-10-29 | Horiba, Ltd. | Particle-size distribution measuring apparatus |
| US6864979B2 (en) | 2000-12-08 | 2005-03-08 | Horiba, Ltd | Particle size distribution measuring apparatus |
| US6970243B2 (en) | 2001-02-19 | 2005-11-29 | Horiba, Ltd. | Particle size distribution measuring apparatus |
| JP2010230629A (ja) * | 2009-03-30 | 2010-10-14 | Mitsui Eng & Shipbuild Co Ltd | フローサイトメータおよびサンプル液供給装置 |
| CN105251740A (zh) * | 2015-09-30 | 2016-01-20 | 太仓创造电子有限公司 | 一种消除水质在线分析仪记忆效应的装置及方法 |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4323571B2 (ja) | 1997-01-31 | 2009-09-02 | エックスワイ， インコーポレイテッド | 光学装置 |
| US6071689A (en) * | 1997-12-31 | 2000-06-06 | Xy, Inc. | System for improving yield of sexed embryos in mammals |
| US6149867A (en) * | 1997-12-31 | 2000-11-21 | Xy, Inc. | Sheath fluids and collection systems for sex-specific cytometer sorting of sperm |
| US6746873B1 (en) * | 1998-02-20 | 2004-06-08 | Xy, Inc. | Vibratory system for a sorting flow cytometer |
| US6085762A (en) * | 1998-03-30 | 2000-07-11 | The Regents Of The University Of California | Apparatus and method for providing pulsed fluids |
| BR9912539A (pt) | 1998-07-30 | 2001-05-02 | Xy Inc | Sistema equino para inseminação artificial não-cirúrgica |
| US7208265B1 (en) * | 1999-11-24 | 2007-04-24 | Xy, Inc. | Method of cryopreserving selected sperm cells |
| EP2258172B1 (en) | 2000-05-09 | 2017-04-19 | Xy, Llc | Flow cytometer for diffentiating x-chromosome bearing and y-chromosome bearing populations of spermatozoa |
| US20040031071A1 (en) * | 2000-10-05 | 2004-02-12 | Xy, Inc. | System of hysteroscopic insemination of mares |
| CA2822983C (en) * | 2000-11-29 | 2017-05-09 | Xy, Llc | System to separate frozen-thawed spermatozoa into x-chromosome bearing and y-chromosome bearing populations |
| US7713687B2 (en) | 2000-11-29 | 2010-05-11 | Xy, Inc. | System to separate frozen-thawed spermatozoa into x-chromosome bearing and y-chromosome bearing populations |
| US6523556B2 (en) * | 2001-01-12 | 2003-02-25 | Northrop Grumman Corporation | Portable cleaning apparatus for gas distribution tube |
| MXPA05000865A (es) * | 2002-07-22 | 2005-04-28 | Xy Inc | Sistema para el proceso de celulas espermaticas. |
| US8486618B2 (en) | 2002-08-01 | 2013-07-16 | Xy, Llc | Heterogeneous inseminate system |
| JP4595067B2 (ja) * | 2002-08-01 | 2010-12-08 | エックスワイ，エルエルシー | 低圧精子細胞分離システム |
| CN100570360C (zh) * | 2002-08-15 | 2009-12-16 | Xy公司 | 一种流式细胞仪及流式细胞计数方法 |
| US7169548B2 (en) | 2002-09-13 | 2007-01-30 | Xy, Inc. | Sperm cell processing and preservation systems |
| DK2305171T3 (da) | 2003-03-28 | 2022-03-21 | Inguran Llc | Apparat og fremgangsmåder til tilvejebringelse af kønssorteret dyresæd |
| ES2541121T3 (es) * | 2003-05-15 | 2015-07-16 | Xy, Llc | Clasificación eficiente de células haploides por sistemas de citometría de flujo |
| US7892725B2 (en) | 2004-03-29 | 2011-02-22 | Inguran, Llc | Process for storing a sperm dispersion |
| AU2005266930B2 (en) | 2004-07-22 | 2010-09-16 | Inguran, Llc | Process for enriching a population of sperm cells |
| US8589851B2 (en) * | 2009-12-15 | 2013-11-19 | Memoir Systems, Inc. | Intelligent memory system compiler |
| CN111527395B (zh) * | 2018-12-01 | 2024-01-26 | 铭道创新（北京）医疗技术有限公司 | 一种免疫细胞中淋巴细胞的流式细胞仪检测方法 |
| CN112370853B (zh) * | 2020-10-29 | 2022-04-19 | 中国航发南方工业有限公司 | 油清洁度改善系统及其控制方法 |
| CN116858783B (zh) * | 2023-09-04 | 2023-11-14 | 四川格林泰科生物科技有限公司 | 一种全自动血液分析仪 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3826364A (en) * | 1972-05-22 | 1974-07-30 | Univ Leland Stanford Junior | Particle sorting method and apparatus |
| US4248642A (en) * | 1979-03-08 | 1981-02-03 | Kiyasu John Y | Wash cycle process |
| US4284412A (en) * | 1979-07-13 | 1981-08-18 | Ortho Diagnostics, Inc. | Method and apparatus for automated identification and enumeration of specified blood cell subclasses |
| US4607007A (en) * | 1983-04-07 | 1986-08-19 | Becton, Dickinson And Company | Differentiation of natural killer cell subpopulations of cells |
| US4559307A (en) * | 1983-10-17 | 1985-12-17 | Phillips Petroleum Company | Treatment of yeast cells with proteolytic enzymes |
| JPH0718785B2 (ja) * | 1988-09-19 | 1995-03-06 | 株式会社日立製作所 | フローセル装置 |
| FR2637805A1 (fr) * | 1988-10-13 | 1990-04-20 | Dibios Sa | Procede pour nettoyer et/ou desinfecter et steriliser des appareils d'hemodyalise |
-
1990
- 1990-06-13 US US07/537,858 patent/US5087295A/en not_active Expired - Fee Related
-
1991
- 1991-05-07 IE IE155091A patent/IE911550A1/en unknown
- 1991-06-10 JP JP3137552A patent/JPH0769260B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1991-06-11 EP EP19910109583 patent/EP0461618A3/en not_active Withdrawn
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6473177B2 (en) | 2000-07-07 | 2002-10-29 | Horiba, Ltd. | Particle-size distribution measuring apparatus |
| US6864979B2 (en) | 2000-12-08 | 2005-03-08 | Horiba, Ltd | Particle size distribution measuring apparatus |
| US6970243B2 (en) | 2001-02-19 | 2005-11-29 | Horiba, Ltd. | Particle size distribution measuring apparatus |
| JP2010230629A (ja) * | 2009-03-30 | 2010-10-14 | Mitsui Eng & Shipbuild Co Ltd | フローサイトメータおよびサンプル液供給装置 |
| CN105251740A (zh) * | 2015-09-30 | 2016-01-20 | 太仓创造电子有限公司 | 一种消除水质在线分析仪记忆效应的装置及方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0461618A2 (en) | 1991-12-18 |
| IE911550A1 (en) | 1991-12-18 |
| JPH0769260B2 (ja) | 1995-07-26 |
| US5087295A (en) | 1992-02-11 |
| EP0461618A3 (en) | 1992-11-25 |
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