JPH051098A - 新規ペプチド - Google Patents
新規ペプチドInfo
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- JPH051098A JPH051098A JP3175795A JP17579591A JPH051098A JP H051098 A JPH051098 A JP H051098A JP 3175795 A JP3175795 A JP 3175795A JP 17579591 A JP17579591 A JP 17579591A JP H051098 A JPH051098 A JP H051098A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 下記の式（１）で表されるアミノ酸配列を有
する新規なペプチド。 【化１】 【効果】 本ペプチドは、培養下でのコリナ−ジックニ
ュ−ロンのＣｈＡＴ活性及びカテコ−ルアミンニュ−ロ
ンのカテコ−ルアミン量を高いレベルに維持する作用が
ある。このため、老人性痴呆症、アルツハイマ−痴呆
症、脳神経傷害等の脳神経機能疾病の治療薬としての用
途が期待される。
する新規なペプチド。 【化１】 【効果】 本ペプチドは、培養下でのコリナ−ジックニ
ュ−ロンのＣｈＡＴ活性及びカテコ−ルアミンニュ−ロ
ンのカテコ−ルアミン量を高いレベルに維持する作用が
ある。このため、老人性痴呆症、アルツハイマ−痴呆
症、脳神経傷害等の脳神経機能疾病の治療薬としての用
途が期待される。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は新規なペプチドに関する
ものである。詳しくは、神経栄養因子様の活性を示す新
規なペプチドに関するものである。
ものである。詳しくは、神経栄養因子様の活性を示す新
規なペプチドに関するものである。
【０００２】
【従来の技術】脳は多くのニュ−ロンやグリア細胞から
構成され、これらが相互に作用して複雑な機能を発現・
維持している。このようなニュ−ロンの分化及びその機
能と生存維持に関わる重要な因子の一つに神経栄養因子
(neurotrophic factor)と総称される蛋白性の因子があ
る。近年、中枢神経系において、神経成長因子(ＮＧＦ)
やそのファミリ−を構成するいくつかの神経栄養因子が
発見されている(神経進歩・３４巻４号、５１５〜５２
３頁、１９９０年８月)。しかしながら、未だそれらの
作用するニュ−ロンは限られており、多種類のニュ−ロ
ンから構成される脳の機能を考慮するとき多くの未知の
因子が存在し作用していることが予想される。
構成され、これらが相互に作用して複雑な機能を発現・
維持している。このようなニュ−ロンの分化及びその機
能と生存維持に関わる重要な因子の一つに神経栄養因子
(neurotrophic factor)と総称される蛋白性の因子があ
る。近年、中枢神経系において、神経成長因子(ＮＧＦ)
やそのファミリ−を構成するいくつかの神経栄養因子が
発見されている(神経進歩・３４巻４号、５１５〜５２
３頁、１９９０年８月)。しかしながら、未だそれらの
作用するニュ−ロンは限られており、多種類のニュ−ロ
ンから構成される脳の機能を考慮するとき多くの未知の
因子が存在し作用していることが予想される。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、脳の機能発
現、維持及びその修復のメカニズムを明らかにすること
を目的とし、その一環として新しい神経栄養因子を探索
してその構造及び生理的役割を解明し、さらに脳神経疾
患の治療用として期待される新規な物質を提供しようと
するものである。
現、維持及びその修復のメカニズムを明らかにすること
を目的とし、その一環として新しい神経栄養因子を探索
してその構造及び生理的役割を解明し、さらに脳神経疾
患の治療用として期待される新規な物質を提供しようと
するものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者等は上記の課題
を解決するため、ラット脳の損傷部位から神経栄養因子
様の活性を示す蛋白質を採取し、更にこの蛋白質を分解
して強い神経栄養因子様の活性を有する新規なペプチド
を見出し本発明を達成した。即ち、本発明の要旨は、請
求項１における式（１）で表されるアミノ酸配列を有す
る新規なペプチドに存する。
を解決するため、ラット脳の損傷部位から神経栄養因子
様の活性を示す蛋白質を採取し、更にこの蛋白質を分解
して強い神経栄養因子様の活性を有する新規なペプチド
を見出し本発明を達成した。即ち、本発明の要旨は、請
求項１における式（１）で表されるアミノ酸配列を有す
る新規なペプチドに存する。
【０００５】以下、本発明を詳細に説明する。本発明の
新規なペプチドは、請求項１における式（１）で示され
る１３のアミノ酸配列からなり、以下に述べる方法によ
り得ることができる。例えば、生後間もないラット前頭
部皮質の損傷部位から浸出する分泌物を採取し、これに
ＤＦ培地(組織培養培地)を加えてホモジナイズしたのち
遠心処理し、上清を硫安分画して神経栄養因子様の活性
を示す活性画分を集める。この活性画分をゲル濾過し、
次いでイオン交換樹脂で精製処理することにより、ドデ
シル硫酸ナトリウム(ＳＤＳ)−ポリアクリルアミドのス
ラブゲル電気泳動により単一バンドを示す分子量約１．
５万の神経栄養因子様の活性をもつ蛋白質を得る。
新規なペプチドは、請求項１における式（１）で示され
る１３のアミノ酸配列からなり、以下に述べる方法によ
り得ることができる。例えば、生後間もないラット前頭
部皮質の損傷部位から浸出する分泌物を採取し、これに
ＤＦ培地(組織培養培地)を加えてホモジナイズしたのち
遠心処理し、上清を硫安分画して神経栄養因子様の活性
を示す活性画分を集める。この活性画分をゲル濾過し、
次いでイオン交換樹脂で精製処理することにより、ドデ
シル硫酸ナトリウム(ＳＤＳ)−ポリアクリルアミドのス
ラブゲル電気泳動により単一バンドを示す分子量約１．
５万の神経栄養因子様の活性をもつ蛋白質を得る。
【０００６】上記の方法により得られる蛋白質をプロテ
ア−ゼで分解し、逆相高速液体クロマトグラフィ−(Ｈ
ＰＬＣ)により分離して２１５ｎｍで高い吸光度を示す
ペプチドのピ−クをプロテインシ−クエンサ−を用いて
そのアミノ酸配列を解析する。こうして得られるペプチ
ドから強い神経栄養因子様の活性を示す式（１）
ア−ゼで分解し、逆相高速液体クロマトグラフィ−(Ｈ
ＰＬＣ)により分離して２１５ｎｍで高い吸光度を示す
ペプチドのピ−クをプロテインシ−クエンサ−を用いて
そのアミノ酸配列を解析する。こうして得られるペプチ
ドから強い神経栄養因子様の活性を示す式（１）
【０００７】
【化２】
【０００８】で表されるアミノ酸配列をもつ本発明のペ
プチドを取得する。上記のペプチドは、次に述べる方法
により容易に製造することができる。なお、以下の説明
で用いる記号は夫々次のものを示す。MBHA樹脂:p-メチ
ルベンツヒドリルアミン樹脂；Boc:t-ブチルオキシカル
ボニル基；Bzl:ベンジル基；Tos:p-トルエンスルホニル
基。
プチドを取得する。上記のペプチドは、次に述べる方法
により容易に製造することができる。なお、以下の説明
で用いる記号は夫々次のものを示す。MBHA樹脂:p-メチ
ルベンツヒドリルアミン樹脂；Boc:t-ブチルオキシカル
ボニル基；Bzl:ベンジル基；Tos:p-トルエンスルホニル
基。
【０００９】本発明のペプチドを製造するには周知の固
相法によるペプチド合成法が適用される。例えば、MBHA
樹脂を自動ペプチド合成機にセットし、これに予め製造
されたBoc-Ala-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-
OH, Boc-Ala-OH, Boc-Gly-OH,Boc-Arg(Tos)-OH、Boc-Al
a-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Glu(OBzl)-OH, Boc-Leu-OH,Boc
-Ala-OH, Boc-Glu(OBzl)-OHを供給して順次縮合させ
る。次いで、得られる側鎖が保護されているH-Glu(OBz
l)-Ala-Leu-Glu(OBzl)-Leu-Ala-Arg(Tos)-Gly-Ala-Ile-
Phe-Gln-Ala-MBHA樹脂を、フツ化素と反応させてすべて
の側鎖保護基を除去すると共にペプチドをMBHA樹脂と切
り離せばよい。
相法によるペプチド合成法が適用される。例えば、MBHA
樹脂を自動ペプチド合成機にセットし、これに予め製造
されたBoc-Ala-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Ile-
OH, Boc-Ala-OH, Boc-Gly-OH,Boc-Arg(Tos)-OH、Boc-Al
a-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Glu(OBzl)-OH, Boc-Leu-OH,Boc
-Ala-OH, Boc-Glu(OBzl)-OHを供給して順次縮合させ
る。次いで、得られる側鎖が保護されているH-Glu(OBz
l)-Ala-Leu-Glu(OBzl)-Leu-Ala-Arg(Tos)-Gly-Ala-Ile-
Phe-Gln-Ala-MBHA樹脂を、フツ化素と反応させてすべて
の側鎖保護基を除去すると共にペプチドをMBHA樹脂と切
り離せばよい。
【００１０】本発明のペプチドは、後記実施例に具体的
に記載するように、極めて優れた神経栄養因子様活性を
示す。例えば、生後ラット脳の中隔野コリナ−ジックニ
ュ−ロン(cholinergic neuron)の初代培養系を用い、本
発明のペプチド添加によるニュ−ロンの生存維持作用
を、コリンアセチル基移転酵素(ＣｈＡＴ)活性を指標と
して測定したところ、ペプチドを添加しない場合に比べ
て著しく高い活性を示し、多くのコリナ−ジックニュ−
ロンが存在していることが確認される。なお、コリナ−
ジックニュ−ロンはアセチルコリンを神経伝達物質とす
るニュ−ロンであり、ＣｈＡＴ活性はコリナ−ジックニ
ュ−ロン固有のものである。
に記載するように、極めて優れた神経栄養因子様活性を
示す。例えば、生後ラット脳の中隔野コリナ−ジックニ
ュ−ロン(cholinergic neuron)の初代培養系を用い、本
発明のペプチド添加によるニュ−ロンの生存維持作用
を、コリンアセチル基移転酵素(ＣｈＡＴ)活性を指標と
して測定したところ、ペプチドを添加しない場合に比べ
て著しく高い活性を示し、多くのコリナ−ジックニュ−
ロンが存在していることが確認される。なお、コリナ−
ジックニュ−ロンはアセチルコリンを神経伝達物質とす
るニュ−ロンであり、ＣｈＡＴ活性はコリナ−ジックニ
ュ−ロン固有のものである。
【００１１】また、生後ラットの中脳カテコ−ルアミン
ニュ−ロン(catecholamine neuron)の初代培養系を用
い、本発明のペプチド添加によるニュ−ロンの生存維持
作用を、カテコ−ルアミンの含量を指標として測定した
結果、ペプチドを添加しない場合に比べて遥かに多量の
カテコ−ルアミンが測定され、多くのカテコ−ルアミン
ニュ−ロンが生存していることが確認される。なお、カ
テコ−ルアミンニュ−ロンはカテコ−ルアミンを神経伝
達物質とするニュ−ロンである。
ニュ−ロン(catecholamine neuron)の初代培養系を用
い、本発明のペプチド添加によるニュ−ロンの生存維持
作用を、カテコ−ルアミンの含量を指標として測定した
結果、ペプチドを添加しない場合に比べて遥かに多量の
カテコ−ルアミンが測定され、多くのカテコ−ルアミン
ニュ−ロンが生存していることが確認される。なお、カ
テコ−ルアミンニュ−ロンはカテコ−ルアミンを神経伝
達物質とするニュ−ロンである。
【００１２】
【実施例】次に本発明を実施例について更に詳細に説明
するが、本発明はその要旨を超えない限り以下の実施例
に限定されるものではない。
するが、本発明はその要旨を超えない限り以下の実施例
に限定されるものではない。
【００１３】実施例１ ［ペプチドの分離］生後３日目のラットの前頭部皮質に
２ ｍｍ角の穴を開け、ジェルフォ−ム(不溶性ゼラチン
のスポンジェル、山之内製薬社製)を埋め込み、一週間
後に周辺部の組織と共にジェルフォ−ムを取り出し、直
ちにドライアイスで凍結させて−８０℃で保存した。次
いでジェルフォ−ムに、その１０倍量(重量)の氷冷した
ＤＦ培地[ＤＭＥ：Ｆ１２＝１：１ギブコ(Gibco)社製]
を加えてホモジナイズした後、４℃において３５万ｒｐ
ｍで６０分間超遠心処理し、その上清を３０〜６０％飽
和の硫安分画にかけた。
２ ｍｍ角の穴を開け、ジェルフォ−ム(不溶性ゼラチン
のスポンジェル、山之内製薬社製)を埋め込み、一週間
後に周辺部の組織と共にジェルフォ−ムを取り出し、直
ちにドライアイスで凍結させて−８０℃で保存した。次
いでジェルフォ−ムに、その１０倍量(重量)の氷冷した
ＤＦ培地[ＤＭＥ：Ｆ１２＝１：１ギブコ(Gibco)社製]
を加えてホモジナイズした後、４℃において３５万ｒｐ
ｍで６０分間超遠心処理し、その上清を３０〜６０％飽
和の硫安分画にかけた。
【００１４】最も活性の高い画分である３０〜６０％飽
和の沈澱物をリン酸ナトリウム緩衝液に溶解し、ス−パ
−ロ−ズ(Superrose)１２カラムを用いたＦＰＬＣシス
テム(ファルマシア社製)でゲル濾過し、得られた活性画
分を酢酸塩緩衝液(ｐＨ５．０)で平衡化されたイオン交
換樹脂(ファルマシア社製Ｍｏｎｏ Ｓ)にかけて非吸着
画分を集め、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動
による分子量が約１．５万の神経栄養因子様の活性を示
す蛋白質を得た。この蛋白質をトリプシンで分解し、Ｈ
ＰＬＣにより分離し、２１５ｎｍで高い吸光度を示すペ
プチドのピ−クを、アプライドバイオシステム社製 ４
７０Ａ型気相プロテインシ−クエンサ−を用いてそのア
ミノ酸配列を解析した。こうして得られたペプチドから
強い神経栄養因子様の活性を示す前記の式（１）で表さ
れるアミノ酸配列を有する本発明のペプチドを得た。
和の沈澱物をリン酸ナトリウム緩衝液に溶解し、ス−パ
−ロ−ズ(Superrose)１２カラムを用いたＦＰＬＣシス
テム(ファルマシア社製)でゲル濾過し、得られた活性画
分を酢酸塩緩衝液(ｐＨ５．０)で平衡化されたイオン交
換樹脂(ファルマシア社製Ｍｏｎｏ Ｓ)にかけて非吸着
画分を集め、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動
による分子量が約１．５万の神経栄養因子様の活性を示
す蛋白質を得た。この蛋白質をトリプシンで分解し、Ｈ
ＰＬＣにより分離し、２１５ｎｍで高い吸光度を示すペ
プチドのピ−クを、アプライドバイオシステム社製 ４
７０Ａ型気相プロテインシ−クエンサ−を用いてそのア
ミノ酸配列を解析した。こうして得られたペプチドから
強い神経栄養因子様の活性を示す前記の式（１）で表さ
れるアミノ酸配列を有する本発明のペプチドを得た。
【００１５】［ペプチドの製造］ (イ) H-Glu(OBzl)-Ala-Leu-Glu(OBzl)-Leu-Ala-Arg(To
s)-Gly-Ala-Ile-Phe-Gln-Ala-MBHA樹脂の製造：MBHA樹
脂０．９４ｇ(アミン含量０．６４ｍｍｏｌ／ｇ樹脂)を
バイオサ−チ社製９５００型自動ペプチド合成機にセッ
トし、これにBoc-Ala-OH, Boc-Gln-OH,Boc-Phe-OH, Boc
-Ile-OH, Boc-Ala, Boc-Gly-OH, Boc-Arg(Tos)-OH、Boc
-Ala-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Glu(OBzl)-OH, Boc-Leu-OH,
Boc-Ala-OH, Boc-Glu(OBzl)-OHを供給し、順次縮合さ
せて上記の側鎖保護ペプチド-MBHA樹脂２．１５ｇを得
た。
s)-Gly-Ala-Ile-Phe-Gln-Ala-MBHA樹脂の製造：MBHA樹
脂０．９４ｇ(アミン含量０．６４ｍｍｏｌ／ｇ樹脂)を
バイオサ−チ社製９５００型自動ペプチド合成機にセッ
トし、これにBoc-Ala-OH, Boc-Gln-OH,Boc-Phe-OH, Boc
-Ile-OH, Boc-Ala, Boc-Gly-OH, Boc-Arg(Tos)-OH、Boc
-Ala-OH, Boc-Leu-OH, Boc-Glu(OBzl)-OH, Boc-Leu-OH,
Boc-Ala-OH, Boc-Glu(OBzl)-OHを供給し、順次縮合さ
せて上記の側鎖保護ペプチド-MBHA樹脂２．１５ｇを得
た。
【００１６】(ロ) フツ化素処理:上記(イ)で得た側鎖保
護ペプチド-MBHA樹脂中の１．０７ｇを採取し、これを
蛋白質研究奨励会ペプチド研究所製のフツ化素反応装置
にセットし、１．６ｍｌのアニソ−ルの存在下で１１ｍ
ｌのフツ化素と０℃で１時間反応させた。反応終了後、
フツ化素を減圧下留去し、残留物を酢酸エチルで洗浄し
た後、２Ｍ酢酸２００ｍｌで抽出処理して、H-Glu-Ala-
Leu-Glu-Leu-Ala-Arg-Gly-Ala-Ile-Phe-Gln-Ala-NH2で
表される粗ペプチド３６６ｍｇを得た。
護ペプチド-MBHA樹脂中の１．０７ｇを採取し、これを
蛋白質研究奨励会ペプチド研究所製のフツ化素反応装置
にセットし、１．６ｍｌのアニソ−ルの存在下で１１ｍ
ｌのフツ化素と０℃で１時間反応させた。反応終了後、
フツ化素を減圧下留去し、残留物を酢酸エチルで洗浄し
た後、２Ｍ酢酸２００ｍｌで抽出処理して、H-Glu-Ala-
Leu-Glu-Leu-Ala-Arg-Gly-Ala-Ile-Phe-Gln-Ala-NH2で
表される粗ペプチド３６６ｍｇを得た。
【００１７】(ハ) ペプチドの精製:これを３０％酢酸２
０ｍｌに溶解してセファデックスＧ−２５のカラム(内
径５ｃｍ、長さ１００ｃｍ)にかけ、同じ溶媒を用いて
溶出して目的物を含む画分を集めた。この部分精製物の
収量は１９４ｍｇであった。その中の７２ｍｇを５ｍｌ
の１０％酢酸に溶解し、ＯＤＳ(オクタデシルシラン)を
シリカに結合した逆相系のカラム(内径２ｃｍ、長さ２
５ｃｍ)を用いたＨＰＬＣにより精製した。溶出は０．
１％トリフルオロ酢酸中２６％のアセトニトリルにより
行った。精製物の収量は３９ｍｇであった。
０ｍｌに溶解してセファデックスＧ−２５のカラム(内
径５ｃｍ、長さ１００ｃｍ)にかけ、同じ溶媒を用いて
溶出して目的物を含む画分を集めた。この部分精製物の
収量は１９４ｍｇであった。その中の７２ｍｇを５ｍｌ
の１０％酢酸に溶解し、ＯＤＳ(オクタデシルシラン)を
シリカに結合した逆相系のカラム(内径２ｃｍ、長さ２
５ｃｍ)を用いたＨＰＬＣにより精製した。溶出は０．
１％トリフルオロ酢酸中２６％のアセトニトリルにより
行った。精製物の収量は３９ｍｇであった。
【００１８】次に本生成物中のトリフルオロ酢酸を除く
ためその全量を小量の2M 酢酸に溶解してセファデック
スＧ−１０のカラム(内径１．８ｃｍ、長さ１００ｃｍ)
にかけ同じ溶媒を用いて溶出し、ペプチドを含む画分を
集め最終目的物であるH-Glu-Ala-Leu-Glu-Leu-Ala-Arg-
Gly-Ala-Ile-Phe-Gln-Ala-NH2で表されるペプチド２９
ｍｇを得た。本物質の構造は、ＦＡＢ−ＭＳ及びアミノ
酸分析等により確認された。ＦＡＢ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］+
１３８７,計算値(Ｃ62Ｈ102Ｎ18Ｏ18＋Ｈ) １３８７；G
lu ３．０３ (３), Arg ０．９８ (１), Gly １．０２
(１), Ala ３．９４ (４), Ile ０．９８ (１), Leu
２．０２ (２), Phe １．０３ (１)
ためその全量を小量の2M 酢酸に溶解してセファデック
スＧ−１０のカラム(内径１．８ｃｍ、長さ１００ｃｍ)
にかけ同じ溶媒を用いて溶出し、ペプチドを含む画分を
集め最終目的物であるH-Glu-Ala-Leu-Glu-Leu-Ala-Arg-
Gly-Ala-Ile-Phe-Gln-Ala-NH2で表されるペプチド２９
ｍｇを得た。本物質の構造は、ＦＡＢ−ＭＳ及びアミノ
酸分析等により確認された。ＦＡＢ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］+
１３８７,計算値(Ｃ62Ｈ102Ｎ18Ｏ18＋Ｈ) １３８７；G
lu ３．０３ (３), Arg ０．９８ (１), Gly １．０２
(１), Ala ３．９４ (４), Ile ０．９８ (１), Leu
２．０２ (２), Phe １．０３ (１)
【００１９】［神経栄養因子様活性の測定］上記の方法
で得た式（１）で表されるペプチドの神経栄養因子様活
性を以下の２つの方法により測定した。 (1)中隔野を用いる方法：生後約２週間のラット脳の中
隔野を用いた初代培養系を使用して、次に述べる方法に
より、培養下のコリナ−ジックニュ−ロンの生存の指標
として、細胞抽出液のコリンアセチル基移転酵素(Ｃｈ
ＡＴ)活性の変動を測定した。
で得た式（１）で表されるペプチドの神経栄養因子様活
性を以下の２つの方法により測定した。 (1)中隔野を用いる方法：生後約２週間のラット脳の中
隔野を用いた初代培養系を使用して、次に述べる方法に
より、培養下のコリナ−ジックニュ−ロンの生存の指標
として、細胞抽出液のコリンアセチル基移転酵素(Ｃｈ
ＡＴ)活性の変動を測定した。
【００２０】中隔野を実体顕微鏡下で摘出してパパイン
(プロテア−ゼ)で消化し、これを５％の準胎児牛血清、
５％の馬血清、１％のラット血清及び８９％のＤＦ培地
からなる培地上に約２×１０5細胞／ｃｍ2になるように
播いて培養した。一日後この培地に、前記の本発明のペ
プチドを、次の表１に示す量で夫々別個に添加して７日
間培養した後、０．１％トリトンＸ−１００を含む５ｍ
Ｍのトリス塩酸緩衝液(ｐＨ７．５)を添加して細胞を破
壊し、得られた細胞抽出液のＣｈＡＴ活性をフォンナム
(Fonnum)法により測定した。なお比較のために、ペプチ
ドを添加せず、血清のみを用いて培養し、同様に処理し
て得た細胞抽出液のＣｈＡＴ活性を測定した。夫々のＣ
ｈＡＴ活性は表１の通りであった。
(プロテア−ゼ)で消化し、これを５％の準胎児牛血清、
５％の馬血清、１％のラット血清及び８９％のＤＦ培地
からなる培地上に約２×１０5細胞／ｃｍ2になるように
播いて培養した。一日後この培地に、前記の本発明のペ
プチドを、次の表１に示す量で夫々別個に添加して７日
間培養した後、０．１％トリトンＸ−１００を含む５ｍ
Ｍのトリス塩酸緩衝液(ｐＨ７．５)を添加して細胞を破
壊し、得られた細胞抽出液のＣｈＡＴ活性をフォンナム
(Fonnum)法により測定した。なお比較のために、ペプチ
ドを添加せず、血清のみを用いて培養し、同様に処理し
て得た細胞抽出液のＣｈＡＴ活性を測定した。夫々のＣ
ｈＡＴ活性は表１の通りであった。
【００２１】
【表１】
【００２２】なお、培養には４８ウエルプレ−ト(コス
タ−社製)を使用した。表１から明かなように、本発明
のペプチドの存在下で培養した場合のＣｈＡＴ活性は、
ペプチドの不在下で培養した場合のそれに比べてほぼ用
量依存的に増大し、より多くのコリナ−ジックニュ−ロ
ンが生存していることを示している。
タ−社製)を使用した。表１から明かなように、本発明
のペプチドの存在下で培養した場合のＣｈＡＴ活性は、
ペプチドの不在下で培養した場合のそれに比べてほぼ用
量依存的に増大し、より多くのコリナ−ジックニュ−ロ
ンが生存していることを示している。
【００２３】また、培養ウエル中のコリナ−ジックニュ
−ロンの数をアセチルコリンエステラ−ゼ(ＡｃｈＥ)染
色により数えた結果でも、本発明ペプチドの存在下で培
養した場合のコリナ−ジックニュ−ロン数(ＡｃｈＥ活
性ニュ−ロン数)は、表２に示すように、ペプチドの不
在下で培養した場合のそれよりも遥かに多かった。
−ロンの数をアセチルコリンエステラ−ゼ(ＡｃｈＥ)染
色により数えた結果でも、本発明ペプチドの存在下で培
養した場合のコリナ−ジックニュ−ロン数(ＡｃｈＥ活
性ニュ−ロン数)は、表２に示すように、ペプチドの不
在下で培養した場合のそれよりも遥かに多かった。
【００２４】
【表２】
【００２５】(2) 中脳を用いた測定：生後約２週間のラ
ット脳の中脳下部を用いた初代培養系を用い、次に述べ
る方法により、培養下のカテコ−ルアミンニュ−ロンの
生存の指標として、細胞抽出液中のカテコ−ルアミン量
を測定した。
ット脳の中脳下部を用いた初代培養系を用い、次に述べ
る方法により、培養下のカテコ−ルアミンニュ−ロンの
生存の指標として、細胞抽出液中のカテコ−ルアミン量
を測定した。
【００２６】中脳下部を上記(1)と同様にパパインで消
化し、次いで(1)と同一の血清培地を用い、本発明のペ
プチドを、次の表３に示す量で夫々別個に７日間培養
し、次いで０．２Ｍ過塩素酸溶液で細胞を破壊して蛋白
質を遠心処理により除去した。こうして得られた細胞抽
出液中のカテコ−ルアミン量をＨＰＬＣ−ＥＣＤ(電気
化学検出器)を用いて測定したところド−パミン量に特
に顕著な相違が見られた。夫々のド−パミン量は表３の
通りであった。
化し、次いで(1)と同一の血清培地を用い、本発明のペ
プチドを、次の表３に示す量で夫々別個に７日間培養
し、次いで０．２Ｍ過塩素酸溶液で細胞を破壊して蛋白
質を遠心処理により除去した。こうして得られた細胞抽
出液中のカテコ−ルアミン量をＨＰＬＣ−ＥＣＤ(電気
化学検出器)を用いて測定したところド−パミン量に特
に顕著な相違が見られた。夫々のド−パミン量は表３の
通りであった。
【００２７】
【表３】
【００２８】また、培養ウエル中のド−パミンニュ−ロ
ン数を、抗チロシン水酸化酵素(ＴＨ)抗体による染色で
測定した結果でも、ペプチドの存在下で培養した場合の
カテコ−ルアミンニュ−ロン数(ＴＨ陽性ニュ−ロン数)
は、表４に示すように、ペプチドの不在下で培養した場
合のそれよりも明らかに多かった。
ン数を、抗チロシン水酸化酵素(ＴＨ)抗体による染色で
測定した結果でも、ペプチドの存在下で培養した場合の
カテコ−ルアミンニュ−ロン数(ＴＨ陽性ニュ−ロン数)
は、表４に示すように、ペプチドの不在下で培養した場
合のそれよりも明らかに多かった。
【００２９】
【表４】
【００３０】
【発明の効果】本発明の新規ペプチドは、以上に述べた
ように、コリナ−ジックニュ−ロンの生存維持に対して
ほぼ用量依存的に作用し、培養下のコリナ−ジックニュ
−ロンのＣｈＡＴ活性を有意に高いレベルに維持する。
また、カテコ−ルアミンニュ−ロンの生存維持に対して
もほぼ用量依存的に作用し、培養下のカテコ−ルアミン
ニュ−ロンのカテコ−ルアミン量を高いレベルに維持す
る。以上の事項から、本発明の新規なペプチドは、例え
ば老人性痴呆症、アルツハイマ−痴呆症、脳神経傷害等
の脳神経機能疾病の治療薬としての用途が期待される。
ように、コリナ−ジックニュ−ロンの生存維持に対して
ほぼ用量依存的に作用し、培養下のコリナ−ジックニュ
−ロンのＣｈＡＴ活性を有意に高いレベルに維持する。
また、カテコ−ルアミンニュ−ロンの生存維持に対して
もほぼ用量依存的に作用し、培養下のカテコ−ルアミン
ニュ−ロンのカテコ−ルアミン量を高いレベルに維持す
る。以上の事項から、本発明の新規なペプチドは、例え
ば老人性痴呆症、アルツハイマ−痴呆症、脳神経傷害等
の脳神経機能疾病の治療薬としての用途が期待される。
配列番号：１ 配列の長さ：１３ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列： Ｇｌｕ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ａｌａ
Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ａｌａ １ ５
１０
Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ａｌａ １ ５
１０
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 【請求項１】 下記の式（１） 【化１】 で表されるアミノ酸配列を有する新規ペプチド。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17579591A JP3160013B2 (ja) | 1991-06-21 | 1991-06-21 | 新規ペプチド |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17579591A JP3160013B2 (ja) | 1991-06-21 | 1991-06-21 | 新規ペプチド |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH051098A true JPH051098A (ja) | 1993-01-08 |
| JP3160013B2 JP3160013B2 (ja) | 2001-04-23 |
Family
ID=16002386
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17579591A Expired - Fee Related JP3160013B2 (ja) | 1991-06-21 | 1991-06-21 | 新規ペプチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3160013B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009033791A3 (en) * | 2007-09-11 | 2009-10-01 | Mondobiotech Laboratories Ag | Use of a peptide as a therapeutic agent |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TW311923B (ja) | 1992-01-27 | 1997-08-01 | Ciba Sc Holding Ag |
-
1991
- 1991-06-21 JP JP17579591A patent/JP3160013B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009033791A3 (en) * | 2007-09-11 | 2009-10-01 | Mondobiotech Laboratories Ag | Use of a peptide as a therapeutic agent |
| WO2009033790A3 (en) * | 2007-09-11 | 2009-10-15 | Mondobiotech Laboratories Ag | Use of a peptide as a therapeutic agent |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3160013B2 (ja) | 2001-04-23 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |