JPH04502923A - 傷の治癒 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 傷の治癒 １豆立１１ この発明は傷の治癒に関係する。成長因子は標的細胞の限定的集団を刺激するポ リペプチドホルモンである。

成長因子の例は、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）　、インシェリン様成長因子 （ＩＧＦ−Ｉ）、）ランスホーミング成長因子β（ＴＧＦ−β）、トランスホー ミング成長因子α（ＴＧＦ−α）、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）及び繊維芽細胞 成長因子（ＦＧＦ）、そしてインターロイキン１　（ＩＬ−１）を含む、ＰＤＧ Ｆは、循環性血小板中の顆粒中に見出される陽イオン性の熱安定性蛋白質であり 、１ユ旦上！での蛋白質合成及び繊維芽細胞によるコラーゲンの産生を刺激する ことが知られている。

それは又−（＞−Ｙ上！で繊維芽細胞及び平滑筋細胞に対する分裂促進剤及び走 化性物質としても作用することが知られている。

Ｌ二二Ｘ１での傷の治癒促進にＰＤＧＦを用いることは提案されている０例えば 、Ｇｒｏｔｅｎｄｏｓｔ（１９８４）　Ｊ、Ｔｒａｕｍａ　２４巻、　５４９− ５２頁には、コラーゲンゲルをしみ込ませてラットの背中に移植したＨｕｎｔ− ＳｃｈｉｌｌｉｎｇワイヤーメツシュチャンバーにＰＤＧＦを加えるとＰＤＧＦ が新しいコラーゲンの合成を増加させることを見出したと記載しである。しかし ながら、Ｌｅｉｔｚｅｌら（１９８５）　Ｊ、Ｄｅｒｍａｔｏｌ、Ｓｕｒｇ、０ ｎｃｏ１゜１１巻、６１７−２２頁では、ハムスターでは、ＰＤＧＦを単独で用 いても又はＦＧＦ及びＥＧＦと組み合わせても通常の傷の治癒を加速出来なかっ た。

Ｍｉｃｈａｅｌｉら（１９８４）は、５ｏｆｔ　ａｎｄ　ＨａｒｄＴｉｓｓｕｅ 　Ｒｅ　ａｉｒ　（Ｈｕｎｔ、Ｔ、に、ら　［１，Ｐｒａｅｇｅｒ　Ｐｕｂｌｉ ｓｈｅｒｓ。

Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、３８０−３９４頁で、血小板に富む血漿から得られたＰＤＧ Ｆの部分的精製標品の投与がウサギの角膜への移植に際して血管形成を刺激する ことを報告している。

ＰＤＧＦは血管成長因子ではないので、この研究者は、彼らの部分精製ＰＤＧＦ 標品中の未知の因子がこの血管形成効果の原因であると示唆している。Ｌ、ｙｎ ｃｈらは、傷の治癒における血小板由来成長因子の役割：他の成長因子との共力 効果、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ。

Ｕ、Ｓ、Ａ、、８４巻、　７６９６−７７００頁及び傷の治癒における成長因子 （１９８９）、　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、、８４巻、　６４０−６４ ６頁で、組換えＰＤＧＦを含む精製したＰＤＧＦ標品が傷の治癒の研究において 結合組織及び上皮層の再生に有意の効果を生じさせないということを示した。対 照的に、精製したＰＤＧＦをＩＧＦ−１、ＩＧＦ−ＩＩ又はＴＧＦのいずれかと 組み合わせた場合には、結合組織再生及び上皮再生の両方において劇的な共力効 果が見られた。ＩＧＦ−■又はＩＩ或はＴＧＦ−α単独での投与は結合組織及び 上皮層の再生において何ら有意の効果を生じなかった。　インターロイキン１は 、リンパ球及びマクロファージを含む幾つかの種類の細胞により普通に産生され る成長因子（又はサイトカイン）である（Ｋａｐｌａｎら、インターロイキン１ と傷害への応答、　（１９ｇ９）Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｒｅｓ、、８巻、　１１８ −１２９頁）。精製した生物学的に活性なＩＬ−１は約１７．５Ｋｄの分子量を 有する。それは同じ生物活性を有するがアミノ酸配列において有意に異なる二つ の形態（α及びβ）で生じる。ここでは、“ＩＬ−１”という用語はＩＬ−１α 及びＩＬ−１β並びに両イソ型（ｉｓｏｆｏｒｍ　）の大きい前駆体型を含む。

ＩＬ−１は好中球及び単核細胞に特徴的であり、組織培養において繊維芽細胞及 び角化細胞のイン・ビトロでの増殖を刺激する（Ｋａｐｌａｎら）、それは上皮 細胞のイン・ビトロでの培養において化学誘因物質でもあり（Ｍａｒｔｉｎｅｔ ら、上皮細胞の化学誘引物質の同定と特徴付け、Ｊ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　Ｄｅｒ ｍａｔｏｌ、、９０巻、１２２−１２６頁、１９８８年）、細胞外のグリコサミ ノグリカン組成の変化を誘導する（Ｂ　ｒ　ｏ　ｎ　ｓ　ｏ　ｎら、皮膚の廠痕 由来の培養繊維芽細胞におけるインターロイキンｌに誘導されたグリコサミノグ リカン組成の変化、（：ｏｌｌａｇｅｎ　Ｒｅｓ、、８巻、　１９８８年、　１ ９９−２０８頁）。

［口ｊ■ 一般的に、この発明は哨乳類、例えばヒトの患者の外傷の効果的な量の精製した ＰＤＧＦ及び精製したＩＬ−１、又は精製したＩ　ＧＦ−１及び精製したＩＬ− １の組み合わせを含む配合物による治硝を記載する。ＩＬ−１は天然の源から単 離出来るが、或はより好ましくは組換え技術により生産出来る。この発明の配合 物は、上皮及び結合組織の成長及び全蛋白質及びコラーゲンの合成を促進するこ とにより傷の治癒を少なくとも部分的に助成する。この発明の配合物を用いる傷 の治癒は、この処理をしない（即ち外因性因子を投与しない）場合又は精製した ＰＤＧＦ単独、精製したＩ　ＧＦ−１単独又は精製したＩＬ−１単独で処理した 場合に達成されるものよりも効果的である。この発明の好ましい配合物は、製薬 上容認出来るキャリアー物質、例えば市販の不活性のゲル又は膜又は液体中での 、精製したＰＤＧＦ及びＩＬ−１（両方とも市販されている）の組み合わせによ り調製される。傷の治癒を促進するための第二の配合物は精製したＩ　ＧＦ−１ 及びＩＬ−１の製薬上容認出来るキャリアー中での組み合わせにより調製される 。最も好ましくは精製したＰＤＧＦ及びＩＬ−１又はＩ　ＧＦ−１及びＩＬ−１ を重量比１：２５〜２５：１．好ましくは１：１０〜１０：１で組み合わせる。

精製したＰＤＧＦはヒト血小板から或は組換えＤＮＡ技術により得られる。従っ て、“ＰＤＧＦ″という用語により、我々は血小板由来の及び嗜乳類、好ましく は霊長類起源の組換えによる物質の両方を意味し、霊長類は好ましくはヒトであ るがチンパンジーその他の霊長類でも良い０組換えＰＤＧＦは組換えへテロ２量 体であって良く、培養原核又は真核細胞に両サブユニットをコードするＤＮＡ配 列を挿入し、次いで翻訳されたサブユニットに細胞によるプロセッシングを受け させてヘテロ２量体を形成することにより作られる。或は、一方のサブユニット をコードするＤＮＡ（好ましくはβ又は“２“鎖）を細胞に挿入することも出来 、その場合は培養によりホモ２量体ＰＤＧＦ（ＰＤＧＦ−１又はＰＤＧＦ−２の ホモ２量体）が作られる。

ここでのＰＤＧＦ、ＩＧＦ−１又はＩＬ−１についての“精製した”という用語 は、他のものに混ぜる前において、９０重量％以上ということであり、即ち、そ れが天然において結合している他の蛋白質、脂質及び炭水化物を実質的に含まな いということである。

精製した蛋白質標品は、一般に、各ＰＤＧＦ、ＩＧＦ−１又はＩＬ−１成分につ いて、ポリアクリルアミドゲル上に主要な単一バンドを生じる。最も好ましくは 、この発明の配合物中で用いる精製したＰＤＧＦ、ＩＧＦ−１又はＩＬ−１は、 アミノ末端のアミノ酸配列分析により純粋であることが判定されたものが良い。

この発明の配合物は晴乳類の外傷、例えば床ずれ、裂傷及び火傷の治癒のための 早くて効果的な方法を与える。この配合物は自然の（即ち、外因性因子を加えな い）治洒に比べて、或は精製したＰＤＧＦ、Ｉ　ＧＦ−１又はＩＬ−１を単独で 加えた場合と比べて結合組織の形成を増進する。精製したＰＤＧＦ、Ｉ　ＧＦ− １又はＩＬ−１を単独で加えた場合と異なり、ＰＤＧＦ画分　Ｌ−１又はＩ　Ｇ Ｆ−１／Ｉ　Ｌ−１の配合物は新しい結合組織及び上皮組織の両方で有意の増加 を促進し、得られる上皮層は自然治癒又はＩＬ−１単独使用により作られるもの より厚く、かつ又それを新しい結合組織に結合させ、よりしっかりと結合させて 保護する、より多くの上皮突起（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ 　）を含む。

この発明の他の特徴及び利点は下記の好ましい具体例の説明及び請求の範囲から 明らかとなろう。

い　のｆ　日 我々は今この発明の好ましい具体例を述べる。

外傷、例えば床ずれ及び火傷は、この発明により、精製したＰＤＧＦ及びＩＬ− １又は精製したＩ　ＧＦ−１及びＩＬ−１を組み合わせることにより調製される ＰＤＧＦ画分Ｌ−１又はＩ　ＧＦ−１／Ｉ　Ｌ−１混合物で処置する。天然の又 は組換えＩＬ−１はＲ＆Ｄ　Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、　Ｍｉ ｎｎｅｓｏｔａｌ　、　Ｇｅｎｚｙｍｅ　（Ｂｏｓｔｏｎ、　Ｍａｓｓａｃｈｕ ｓｅｔｔｓ）及びＣｏ１１ａｂｏｒａｔｉｖｅ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｗａｌｔｈ ａｍ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）から市販されている。精製した組換えＰＤ ＧＦ及びヒト血小板由来の精製したＰＤＧＦはＰＤＧＦ　Ｉｎｃ、　（Ｂｏｓｔ ｏｎ、ＭＡ）、Ｃｏ１１ａｂｏｒａｔｉｖｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ（Ｗａｌｔｈａ ａ＋、ＭＡ）、Ｇｅｎｚｙｍｅ（Ｂｏｓｔｏｎ。

ＭＡ＞及びＡｍｇｅｎ（Ｔｈｏｕｓａｎｄ　０ａｋｓ、（：Ａｌから市販されて いる。精製したＰＤＧＦは又下記のようにしても調製出来る。　洗浄したヒト血 小板ベレット５００〜１０００単位をＩＭ　ＮａＣ１に懸濁（２ｍｌ／血小板単 位）し、１００℃で１５分間加熱する。次いで、その上清を遠心分離し、沈殿を ＩＭ　ＮａＣ１で２回抽出する。

抽出物を合わせ、０．０８Ｍ　ＮａＣ１−０，０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ ｐＨ７，４）に対して透析し、その緩衝液で平衡化したＣＭ−セファデックスＣ −５０と４℃で一晩混合する。次に、この混合物をカラム（５Ｘ１００ｃｍ）に 注ぎ、０．０８Ｍ　ＮａＣ１−０，０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，４ ）で十分洗い、ＬＭ　ＮａＣ１で溶出して１０ｍ１ずつの画分を集める。

活性な画分をプールし、０．３ＭＮａＣ１−０，０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液 （ｐＨ７，４）に対して透析し、遠心分離して、０．３ＭＮａＣ１−０，０１Ｍ リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，４）で平衡化した４℃の２．５Ｘ２５ｃｍの ブルーセファロース（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　）のカラムに通す。次いで、そのカ ラムをこの緩衝液で洗い部分精製されたＰＤＧＦをＩＭＮａＣｌとエチレングリ コールの１：ｌ溶液で溶出する。

部分精製したＰＤＧＦ画分をＩＭＮａＣｌで希釈（１：　１）　ｌ、、ＩＭ　酢 酸に対して透析し、凍結乾燥する。凍結乾燥試料を０．８Ｍ　ＮａＣ１−０，０ １Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，４）に再懸濁し、この緩衝液で平衡化し たＣＭ−セファデックスＣ−５０の１．２Ｘ４０ｃｍカラムに通す。次いで、Ｐ ＤＧＦをＮａＣ１勾配（０，０８〜ＩＭ）で溶出する。

活性な画分な合わせ、１Ｍ酢酸に対して透析し、凍結乾燥し、そして少量の１Ｍ 酢酸に溶かす。０．５ｍｌを取り、１Ｍ酢酸で平衡化したバイオゲルＰ−１５０ （１００〜２００メツシュ）の１−２Ｘ１００ｃｍカラムにかける０次いで、Ｐ ＤＧＦを１Ｍ酢酸で溶出し、２ｍｌずつの画分を集める。

１００〜２００ｍｇの蛋白質を含む各活性画分を凍結乾燥し、１００ｍ１の０． ４％トリフルオロ酢酸に溶かし、フェニルボンダバック（Ｂｏｎｄａｐａｋ）カ ラム（Ｗａｔｅｒｓ）上での高性能液体クロマトグラフィーにかける。線形アセ トニトリル勾配（０〜６０％）での溶出は純粋ＰＤＧＦを生じる。

組換えＤＮＡ技術により作られるＰＤＧＦは下記のようにして調製出来る： ヒト血小板に由来する血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）は、二つのポリペプチド 配列を含む（ＰＤＧＦ−１及びＰＤＧＦ−２ポリペプチド、Ａｎｔｏｎｉａｄｅ ｓ、Ｈ，Ｎ、とＨｕｎｋａｐｉ　１１ｅｒ、　Ｍ　（１９８３）　５Ｃｆｅｎｃ ｅ、２２０巻、　９６３−９６５頁）、ＰＤＧＦ−１は第７染色体上に局在する 遺伝子によりコードされ（Ｂｅｔｓｈｏｌｔｚ、Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ、　３２０ 巻、　６９５−６９９頁）、ＰＤＧＦ−２は第２２染色体上に局在する（Ｄａｌ 　１　ａ−Ｆａｖｅｒａ　、　Ｒ（１９８２）、５ｃｉｅｎｃｅ　２１８巻、６ ８Ｂ−６量頁）ｓｉｓオンコジーンによりコードされる（Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ、 Ｒら（１９８３）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２１巻、　２７５−２７７頁）、ｓｉｓ遺 伝子は、ＰＤＧＦ−２ポリペプチドに密接に関係しているサル肉腫ウィルス（Ｓ ＳＶ）のトランスホーミング蛋白質をコードしている。ヒトの細胞性ｃ−ｓｉｓ は又ＰＤＧＦ−２鎖をもコードしている（Ｒａｏ、Ｃ，Ｄ、ら、（１９８６）Ｐ ｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ、８３巻、　２３９２−２３９ ６頁）。

ＰＤＧＦの二つのポリペプチド鎖が離れた染色体上に局在化した二つの異なる遺 伝子によりコードされているので、ヒトＰＤＧＦは、ＰＤＧＦ−１及びＰＤＧＦ −２のジスルフィド結合されたヘテロ２量体、又は二種のホモ２量体（ＰＤＧＦ −１の２量体及びＰＤＧＦ−２の２量体）或はへテロ２量体と二種のホモ２量体 との混合物からなる可能性がある。

ＰＤＧＦ−２鎖をコードする遺伝子を含むサル肉腫ウィルスに感染した哺乳類の 培養細胞は、ＰＤＧＦ−２ポリペプチドを合成し、そのプロセッシングを行って ジスルフィド結合されたホモ２量体を生じることが示された（Ｒｏｂｂｉｎｓ、 Ｋ、ら、ｆ１９８３）Ｎａｔｕｒｅ、３０５巻、　６０５−６０８頁）。更に、 ＰＤＧＦ−２ホモ２量体はヒトＰＤＧＦに対する抗血清と反応する。更に、分泌 されたＰＤＧＦ−２ホモ２量体の機能的特性は、培養繊維芽細胞におけるＤＮＡ 合成を刺激する点、１８５ｋｄの細胞膜蛋白質のチロシン残基のリン酸化を誘導 する点、及びヒト（”’Ｉ）−ＰＤＧＦと特異的な細胞表面のＰＤＧＦレセプタ ーを競合出来る点で血小板由来ＰＤＧＦの機能特性と似ている（Ｏｗｅｎ、Ａ、 ら、（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ　、２２５巻、　５４−５６頁）６正常ヒト培 養細胞（例えば、ヒト動脈内皮細胞）に由来する。又はｓｉｓ／ＰＤＧＦ−２遺 伝子を発現しているヒト悪性細胞に由来するｓｉｓ／ＰＤＧＦ−２遺伝子産物に 類似の特性が見られた（Ａｎｔｏｎｉａｄｅｓ、Ｈ，ら、（１９８５）Ｃａｎｃ ｅｒ　Ｃｅ１ｌｓ、３巻、１４５−１５１頁）。

組換えＰＤＧＦ−２ホモ２量体（ここでは１組換えＰＤＧＦとして参照する）は ｃ−ｓ　ｉ　ｓ／ＰＤＧＦ−２遺伝子のｃＤＮＡクローンを発現ベクターを用い てマウス細胞へ導入することにより得られる８発現用に用いるｃ−ｓ　ｉ　ｓ／ ＰＤＧＦ−２クローンは正常ヒト培養内皮細胞から得られた（Ｃｏ　１１　ｉ　 ｎｓ、　Ｔ、ら、（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ、２１６巻、　７４Ｂ−７５０頁〕 。

ｌユニＩ ＰＤＧＦ／ＩＬ−１及びＩＧＦ−１／ＩＬ−１混合物の傷の治癒の促進効果を決 定するために、下記の実験を行った。

若い白い体重１０〜１５ｋｇのヨークシャー豚（Ｐａｒｓｏｎ’ｓ　Ｆａｒｍ、 Ｈａｄｌｅｙ、ＭＡ　）を手術の少なくとも６時間前に絶食させ、それから麻酔 をかけた。無菌条件下で、背中と胸部の毛を刈り、剃り、そして温和な石けんと 水で洗った。傷をつける部位をそれから７０％アルコールで消毒した。

１ｃｍＸ１．５ｃｍの傷を、改変Ｃａ５ｔｒｏｖｉｅｊｏ電気槍状刀（ｅｌｅｃ ｔｒｏｋｅｒａｔｏｍｅ　）　（Ｓｔｏｒｚ、Ｓｔ、Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ，Ｂｒｏ ｗｎｅｌｌｓ、Ｉｎｃ、Ｉ：より改変）を用いて深さ０．７ｍｍにつけた。

この傷により上皮並びにその下の真皮の一部は完全に除去された（第二度の火傷 に匹敵）０個々の傷は少なくとも１５ｍｍの傷を受けていない皮膚により離され た。同じ処理を受ける傷は一つのグループとして編成され他のグループから少な くとも２ｃｍ離された。成長因子処理を受けない傷は、その処理を受ける傷から 少なくとも５ｃｍ離された。傷を直に生体適合性のゲルに懸濁された下記の成長 因子の単一投与により処理した：　（１）５００ｎｇ−１，０μｇの純粋な組換 えＰＤＧＦ　（高性能液体クロマトグラフィーにより精製）、（２）５００ｎｇ −１，０μｇの組換えＩＬ−１αと組み合わせた５００ｎｇ−１，Ｏｕｔの純粋 な組換えＰＤＧＦ、（３）５００ｎｇ−１，Ｏｕｇの組換えＩＬ−１ａ単独、（ ４）５００ｎｇ−１，ＯｕｇのＩ　ＧＦ−１と組み合わせた５００ｎｇ−１，０ μｇのＩ　Ｌ　−１ａ、（５）５００ｎｇ−１，ＯｕｇのＩ　ＧＦ−１単独。

バイオプシー検体を傷を付けてから７日後に採取した。

狙１しも見」Ｌ価 組織学的検体は標準パラフィン含浸・包埋技術を用いて調製した。４μの切片を 作り、ｉ濾過したハリスヘモトキシリン及びアルコール性エオシンで染色した。

次いで、それらを顕微鏡下で観察した。すべての検体を二人の研究者が切片中に 等しく分布した点を盲目的に記録した。上皮及び結合組織層の広さを計数用パッ ドと作図用チューブ（ｄｒａｗｉｎｇ　ｔｕｂｅ）を用いて記録した。

■ 組織学的評価からの結果は、精製した組換えＰＤＧＦと精製した組換えＩＬ−１ を組み合わせて処理した傷は、処理されない傷、ヒトＩＬ−１単独で又は純粋な ＰＤＧＦ単独で処理された傷よりも厚い結合組織及び上皮層及びこれらの層を結 合させるより広い上皮突起を有し、細胞性を増すということを示した。精製した ＩＧＦ−１と精製したＩＬ−１を組み合わせて処理した傷は、Ｉ　ＧＦ−１単独 又はＩＬ−１単独で処理した傷より、厚い結合組織を有し、コラーゲン繊維を増 した。新しく合成された傷を付けた組織の全体の厚さは、図１及び図２に示しで ある。棒の“中空“部分により付加的効果が示されており、上記への付加的効果 、即ち共力効果は棒の平行斜線を付けた部分で示される。ＰＤＧＦ／ＩＬ−１又 はＩＧＦ−１／ＩＬ−１のいずれかで処理した傷における新しく合成された組織 の全体の厚さ及び細胞性の増加は、これらの処理がこれらの因子の個々の効果か ら予想されるよりも大きな組織成長及び急速な傷の治癒を促進するということを 示す。

他の具体例は下記の請求の範囲に含まれる。

国際調査報告 １１１．ＡＭ＆ａｍｔｍｍ、　ＰＣＴ／１１５９０１０５０６２

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．哺乳類の外傷を治癒させる方法であって、上記の傷に傷を治癒させるのに足 りる量の精製した血小板由来成長因子及び精製したインターロイキン１を含む配 合物を投与することを含む、方法。
2. ２．哺乳類の外傷を治癒させる方法であって、上記の傷に傷を治癒させるのに足 りる量の精製したインシュリン様成長因子Ｉ及び精製したインターロイキン１を 含む配合物を投与することを含む、方法。
3. ３．上記の配合物中の上記の血小板由来成長因子又はインシュリン様成長因子の 上記のインターロイキン１に対する重量比が１：２５〜２５：１である、請求項 １及び２に記載の方法。
4. ４．上記の比が１：１０〜１０：１である、請求項３に記載の方法。
5. ５．精製した血小板由来成長因子及び精製したインターロイキン１を重量比１： ２５〜２５：１で含む傷の治癒のための配合物。
6. ６．上記の比が１：１０〜１０：１である、請求項５に記載の配合物。
7. ７．精製したインシュリン様成長因子Ｉ及び精製したインターロイキン１を重量 比１：２５〜２５：１で含む傷の治癒のための配合物。
8. ８．上記の比が１：１０〜１０：１である、請求項７に記載の配合物。
9. ９．傷の治癒のための配合物の製造方法であって、精製した血小板由来成長因子 及び精製したインターロイキン１を重量比１：２５〜２５：１で混ぜることを含 む製造方法。
10. １０．傷の治療のための配合物の製造方法であって、精製したインシュリン様成 長因子Ｉ又はＩＩ及び精製したインターロイキン１を重量比１：２５〜２５：１ で混ぜることを含む製造方法。