JPH044891A - 醗酵法によるオロチン酸および／またはオロチジンの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、肝臓薬、生化学試薬、あるいは各種ピリミジ
ン系化合物製造の原料物質として有用なオロチン酸およ
びオロチジンの醗酵法による製造法およびその製造法に
用いるバチルス属細菌に関する。

従来の技術 これまで、様々な微生物においてピリミジン要求性変異
株を誘導した場合、ある種の変異株がオロチン酸および
／またはオロチジンを生成蓄積することが報告されてい
る（アミノ酸、核酸集談会編、核酸醗酵、９１７８、講
談社すイエンティフィク（１９７６））。また、バチル
ス属細菌については、バチルス・ズブチリスのウラシル
要求株がオロチン酸およびオロチジンを蓄積すること（
日本農芸化学会誌、第３９巻、ｐｌ！８、（＋９６５）
）ならびにバチルス・ズブチリス、バチルス・プミルス
、バチルス・リケニフＡルミスのウラシル要求株が第１
−１ヂン酸およびオロチジンを蓄積すること［アグリ力
ルチコラル・アンド・バイオロジカル・ケミストリー（
Ａｇｒｉｃ、　Ｂ　ｉｏｌ、　　Ｃｈｅｍ、）５２．１
４７９（１９８８）］が報告されている。

（、かじながら、これらの報告によると、蓄積するオロ
チン酸およびオロチジンの量は僅かであり、改善の余地
が残されている。また、一般に醗酵法でオロチン酸およ
び／またはオロチジンを蓄積させる場合は、供試菌とし
てウラシル要求株が用いられるため、ウラシル等のピリ
ミジン系化合物またはそれを含有する酵母エギス、酵母
菌体、リボ核酸などを培地に添加する必要があるが、こ
の際に問題となるのは、それらの添加量によってオロチ
ン酸および／またはオロチジンの生産量が大きく変動す
るために、培地に添加するウラシル類の濃度を特定の範
囲に厳密にコントロールする必要があることである。

発明が解決しようとする課題 本発明は、バチルス属細菌を用い、オロチン酸および／
またはオロチジンを収率高く、（７かも、菌株の要求物
質であるウラノル等ピリミジン系化合物およびそれを含
有する物質の培地への添加量を制限する必要がない製造
法を提供しようとするものである。

課題を解決するための手段 本発明者らは、バチルス属に属し、ウリジン５゛モノフ
オスフエート生合成にかかわる代謝制御が解除され、か
つ、オロヂン酸〕埼スフ］リポノルトランスフＪラーゼ
を欠損する微生物が培地中に著量のオロチン酸を生成蓄
積すること、ならびにバチルス属に属し、ウリジン５゛
−モノフォスフェート生合成にかかわる代謝制御が解除
され、かつ、オ［１デシン５°−モノフォスフェートデ
力ルポギシラーゼを欠損する微生物が培地中に著量のオ
ロチン酸およびオロチジンを生成蓄積すること、さらに
、これらの菌株を培養するに当たって菌株の要求物質で
あるウラシル等ピリミジン系化合物おにびそれを含有す
る物質の培地への添加量を制限する必要がないことを見
いだＩ７、この知見に基づきさらに研究を続１１１本発
明を完成した。

すなわち、本発明は、（１）バチルス属に属し、ウリジ
ン５′−モノフォスフェート生合成にかかわる代謝制御
が解除され、かつ、オロヂン酸フ４スフォリボシルトラ
ンスフェラーゼを欠損する微生物を培養し、培養物中に
オロチン酸を生成蓄積させ、これを採取することを特徴
とするオロチン酸の製造法、（２）バチルス属に属し、
ウリジン５モノフオスフエート生合成にかかわる代謝制
御が解除され、かつ、オロチジン５“−モノフォスフ、
−−トデカルボキシラーゼを欠損する微生物を培養し、
培養物中にオロチン酸およびオロチジンを生成蓄積させ
、これを採取することを特徴とするオロチン酸およびオ
ロチジンの製造法、（３）ウリジン５′−モノフォスフ
ェート生合成にかかわる代謝制御が解除され、かつ、オ
ロチン酸フオスフオリボシルトランスフエラーゼを欠損
するバチルス・ズブチリスおよび（４）ウリノン５−・
モノフォスフェート生合成にかかわる代謝制御が解除さ
れ、かつ、オロチジン５−モノフオスフゴートデ力ルポ
ギシラーゼを欠損するバチルス・ズブチリスである。

本発明における「オロチン酸フ］スフ１リボシルトラン
スフＪラーゼ欠損株」ならびに「オ【１チンン５°−モ
ノフォスフェートデカルボキシラーゼ欠損株」とは、す
でに報告されている方法「アグリ力ルヂコラル・アンド
・バイオロンカル・ケミストリー（Ａｇｒｉｃ、　Ｂｉ
ｏｌ、　　Ｃｈｅｍ、）、　　５３　、　９７（１９８
９）］において、当当該酵素性が００１ユニット／ｗｔ
９・タンパク以下の微生物をいう。これらの欠損株を誘
導するには、例えば、紫外線照射、Ｎ−メヂルーＮ′−
二トローＮ　、−二トロソグアニジン（ＮＴＧ）処理な
どの公知の変異操作を施１７た後、レプリカ操作によっ
てウラシル要求菌を選別することにより、目的とする菌
株を得ることができる。あるいは、ノエイ・デイ・ベー
ケ（Ｊ、Ｉ）Ｂ　ｏｅｋｅ）らがサツカロマイセス・セ
レビセー（Ｓ　ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　　ｃｅｒｅ
ｖｉｓｉａｅ）で示した［モレキュラー・アンド・ジェ
ネラル・ジエネティックス（Ｍｏ１．Ｇｅｎ、Ｇｅｎｅ
ｔ、）、　１９７．３４５（１９８４）］方法により５
−フルオロオロチン酸耐性株として選択することもでき
る。この方法でジェイ・デイ・ベーケらはオロチジン５
°−モノフォスフェートデカルボキシラーゼ欠損株を直
接的に選択できるとしているが、本発明者らは、この方
法でオロチン酸フォスフォリボシルトランスフェラーゼ
欠損株も直接的に選択できることをはじめて見いだした
。

オロチン酸はウリジン５°−モノフォスフェート生合成
の中間体であり、また、オロチジンは同じくウリジン５
゛−モノフォスフェート生合成の中間体であるオロチジ
ン５°−モノフォスフェートより脱リン酸反応によって
生じたものである。

これらの物質は前記のごとくウリジン５°−モノフォス
フェート生合成酵素の欠損株、具体的には、オロチン酸
フォスフォリボシルトランスフエラーゼ欠損株や、オロ
チジン５°−モノフォスフェートデカルボキシラーゼ欠
損株の培養物中に蓄積される。従って、オロチン酸およ
び／またはオロチジンの醗酵生産を行う場合は、それら
の菌株の生育を支えるための物質としてウラシル等のピ
リミジン系化合物あるいは、これらを含む物質を培地に
添加しなくてはならない。この場合、その添加濃度は厳
密に制御されていなければならず、ある濃度以上の添加
を行うとオロチン酸および／またはオロチジンの蓄積は
、強く抑制されてしまう［日本農芸化学会誌、第３９巻
、１１８（１９６５）あるいは、［アグリカルチュラル
・アンド・バイオロジカル・ケミストリー（Ａｇｒｉｃ
、Ｂ　ｉｏｌ、ｃｈｅｍ、）５２．１４７９（１９８８
）］。これは、ウラシルなどのピリミジン系物質あるい
は、その代謝産物がウリジン５゛−モノフォスフェート
生合成酵素のフィードバック阻害あるいは、フィードバ
ックリプレッションなどの代謝制御を行う物質として機
能するためである［バクテリオロジカル・レビューズ（
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　Ｒｅｖ、）、　３４　、２７８
（１９７０）］。バチルス・ズブチリスのウリジン５−
モノフォスフェート生合成にかかわる代謝制御としては
、ウリジン５°−モノフォスフェート生合成系の初発酵
素であるカルバミルリン酸合成酵素がウリジン５°−モ
ノフォスフェートによってフィードバック阻害を受ける
こと、ならびに、ウリジン５°−モノフォスフェート生
合成にかかわる６つの酵素の生成が、ウラシルに由来す
る物質によってフィードバックリブレッンヨンを受ける
ことなどが知られている［アグリカルチュラル・アンド
・バイオロジカル・ケミストリー（Ａｇｒｉｃ。

Ｂｉｏｌ、　　Ｃｈｅｍ、）、　　５３．　９７（１９
８９）］。従って、既知の方法でオロチン酸および／ま
たはオロチジンの醗酵生産を行う場合は、ウラシル等の
ピリミジン系化合物あるいは、これらを含む物質の添加
濃度を制御することが不可欠であり、特に酵母エキスな
どのように、ウラシル等のピリミジン系化合物の含有量
が一定でない物質をピリミジン源として用いる場合は、
生産管理が非常に困難となる。これに対し、ウリジン５
°−モノフォスフェート生合成にかかわる代謝制御の解
除された菌株においては、菌株の要求する量を満たしさ
えすれば、いかなる量のウラシル等のピリミジン系化合
物あるいは、これらを含む物質を添加してもオロチン酸
および／またはオロチジンの蓄積量は影響を受けず、生
産管理は極めて簡潔なものとなる。

さらに、このような菌株ではウリジン５°−モノフォス
フェート生合成にかかわる代謝制御が解除されているこ
とにより、オロチン酸および／またはオロチジンの生産
を制御する機構がなくなり、きわめて著量のオロチン酸
および／またはオロチジンが蓄積することになる。ウリ
ジン５゛−モノフォスフェート生合成にかかわる代謝制
御を解除する方法としてはピリミジンアナログ耐性株を
誘導する方法［アプライド・マイクロバイオロジー・ア
ンド・バイオテクノロジー（Ａ　ｐｐｌ　、　Ｍ　１ｃ
ｒｏｂｉｏｌ　。

Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、）、　３０　、２３４　（１９
８９））があげられる。ここでいうピリミジンアナログ
とは、ウラシルやシトシン等のピリミジン塩基と類似の
構造を有する物質、例えば、６−アザウラシル、２ヂオ
ウラシル、５−フルオロノドンル、３−デアザウランル
、５−フルオロノドノンなどやこれらのりボサイドおよ
びリボタイトなとをいう、。

本発明で用いる微生物の具体例と１−では、ノくチルス
・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　　５ｕｂｔｉｌｉｓ
）ＳＴＡ１７Ｅ株（ＩＦＯＩ　５０２４．ＦＥＲＭ　Ｐ
１１４０２）、バチルス・ズブチリスＱ３ａｃｉｌｌｕ
ｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）Ｓ　ＴΔ−１７Ｆ株（ＩＦＯ１５
０２５゜ＦＥＲＭ　Ｐ−１１４０３）があげられる。Ｓ
　Ｔ　Ａ−１７Ｅ株、ならびに５ＴＡ−１７Ｆ株はノく
チルス・ズブチリスＳ　Ｔ　Ａ−１７株（ｌ　Ｆ’０１
４３８８　　ＦＥＲＭ　　Ｐ−７９０５）を親株として
誘導されたものである。５ＴＡ−１７Ｅ株は５ＴＡ−１
７株のオロチン酸フオスフオリボソルトランスフエラー
ゼ欠損株であり、また５ＴＡ１７Ｆ株は５ＴＡ−１７株
のオロチジン５−モノフ］スフゴートデカルボキンラー
ゼ欠損体である。これらの酵素の欠損を除けば５ＴＡ−
１７Ｅ株および５ＴＡ−１７Ｆ株の菌学的性質は５ＴＡ
１７株のそれと同じである。５ＴＡ−１７株はバチルス
・ズブチリスＮｏ、１２２株（ＩＦＯ１４３８６に’Ｅ
ＲＭ　　ｒ’−７９０８）力＼ら公知１の変異処理によ
りウリジンヌクレオシ・ドフオスフ、＋−リラーゼを欠
損しかつビリミンンアナログ耐性を示しウリジン生産能
を有する微生物と（７て誘導されたものである（特開昭
６ｌ−１０４７９１）。

５ＴＡ−１７株はビリミジンアナＣ１グ耐性変−間を有
するためにウリジン５゛−モノフオスフゴー１−生合成
にかかわる代謝制御が解除された状態に〃）る。

本発明においては、前記した微生物以外にも、種々のバ
チルス属細菌を親株として公知の変異処理を施すことに
よりウリノン５゛−モノフＡスフＪ−ト生合成にかかわ
る代謝制御が解除され、力１つ、オロチン酸フオスフオ
リポノルトランスフＪラーゼあるいはオロチジン５′−
モノフォスフｊ、　　ｌ・デカルボキシラーゼを欠損し
オロチン酸お、及び／またはオロチジン生産能を有する
微生物を容易ζ、二誘導することができる。

なお、本明細書におけるＩＦＯ番号は財団法人発酵研究
所（Ｉ　ＦＯ１大阪府大阪市淀川区十三本町２丁目１７
番８５号）への寄託名号であり、また、Ｆ　Ｅ　ＲＭ　
　Ｐ一番号は工業技術院微生物工業技術研究所（ＦＲＩ
、茨城県つくば電束１丁目１番３号）への寄託番号であ
る。

かくして、得られたオロチン酸および／またはオロチジ
ン生産能の培養には、通常の微生物の培養と同様の方法
が用いられる。すなわち、培地としては炭素源、窒素源
、無機物、金属塩、ウラシル等のピリミジン系化合物あ
るいは、それを含む酵母エキス、酵母菌体、リボ核酸な
どの物質などのほかに、必要に応じてアミノ酸、ビタミ
ン類なとの栄養源を含有する培地が用いられる。例えば
、炭素源としては、グルコース、ソコークロース、マル
トース、ソルビトール、でんぷん、でんぷん糖化液、糖
蜜などが用いられる。窒素源と１．では、ヘプトン、コ
ーン・スヂーブ・リカー、大豆粉、尿素などの有機窒素
源のほかに、硫酸、硝酸、塩酸、炭酸などのアンモニウ
ム塩や、アンモニアガス、アンモニア水などの無機窒素
源が、それぞれ単独も（７くは混合して用いられる。そ
の他の栄養源としては、菌の生育に必要なウラシル等の
ピリミジン系化合物あるいは、それを含む酵母エキス、
酵Ｉす菌体、リボ核酸などの物質などのほかに、各種の
無機塩類、アミノ酸類、ビタミン類、などが適宜選択の
上、それぞれ単独もしくは混合（−で用いられる。さら
に、培地には、必要に応じてノリクンオイル、ポリアル
ギレングリコールエーテルなどの消泡剤や界面活性剤な
どを添加することかできる。培養は通常、振盪あるいは
通気撹拌深部培養等の好気的条件下に行われる。

培地のｐＨは通常４〜９の範囲が好ましい。培養中にｐ
　Ｉ（の変動が観察される場合には、こねを好ましい範
囲に修正するために、硫酸、炭酸カルシウム、水酸化ナ
トリウム、アンモニアガス、アンモニア水等を適宜添加
【２てもよい。培養温度は、通常、２０°Ｃ〜４５℃の
範囲から使用される微生物の生育およびオロチン酸およ
び／またはオロチジンの蓄積に好適な温度が選択される
。培養は実質的にオロチン酸および／またはオロチジン
蓄積量が最大になるまで行われるが、通常、２日間〜６
日間の培養で目的を達することができる。

培養物からオロチン酸および／またはオロチジンを分離
、採取するにはすでに公知にされている通常の精製手段
、例えば、沈澱法、イオン交換樹脂や活性炭などによる
クロマトグラフィー法などの分離精製法が用いられる。

Ｋ夜匹 以下に、実施例をもって本発明をさらに具体的に説明す
る。

野生株バチルス・ズブチリスＮｏ、１２２株（ＩＦＯ１
４３８６，ＦＥＲＭ　　Ｐ−７９０８）から変異処理に
より、ウリジンヌクレオシドフォスフォリラーゼを欠損
し、かつ、ピリミジンアナログ耐性を示し、ウリジン生
産能を有する微生物として誘導されたバチルス・ズブチ
リス５ＴＡ１７株（ＩＦＯ１４３８８ＦＥＲＭ　　Ｐ７
９０５Ｘ特開昭６ｉ１０４７９５号）を５０μ９／酎の
ＮＴＧで３７℃で２０分間処理した後、以下に示す基本
培地（Ａ）に、０．１％の５−フルオロオロチン酸と０
．００５％のウラシルとを加えた培地に塗抹し３７°Ｃ
で５日間培養した。

基本培地（Ａ） グルコース　　　　　　　０．５％ 硫酸マグネシウム　　　　０．０２％ 硫酸マンガン　　　　　　　０．００５％硫酸亜鉛　　
　　　　　　０．００５％ビオチン　　　　　　　　０
．００１％チアミン　　　　　　　　０．０１％ リン酸ｌカリウム　　　　０．６％ リン酸２カリウム　　　　１．４％ 硫酸アンモニウム　　　　０．２％ こはく酸ナトリウム　　　０１％ 寒天　　　　　　　　　　２．０％ （ｐＨ７，０） 出現したコロニー（５−フルオロオロチン酸耐性株）の
中から、レプリカ法によって菌株のウラシル要求性を調
べたところ、得られた２３株のうち１８株がウラシル要
求性変異株であった。一方、対照としてバチルス・ズブ
チリスＮｏ、　１２２株より５ＴＡ−１７株に施したも
のと同様の処理を行い、５−フルオロオロチン酸耐性株
８株を得た。

この８株をレプリカ法によって菌株のウラシル要求性を
調べたところ、得られた８株のうち６株がウラシル要求
性変異株であった。これらのウラシル要求株を以下に示
す種培養培地５ｉ（を入れた試験管に植菌し、３７℃で
８時間培養した。その培養液を以下に示す生産培地２０
酎を含む２００ｘρ容フラスコにＩｘＱを植菌し、３７
℃で３日間培養した。培養したウラシル要求株は、いず
れもオロチン酸および／またはオロチジンを蓄積した。

その中から代表株としてバチルス・ズブチリス１２２Ｅ
株、バチルス・ズブチリス１２２Ｆ’株、バチルス・ズ
ブチリス５ＴＡ−１７Ｅ株、バチルス・ズブチリス５Ｔ
Ａ−１７Ｆ株の４株を選択した。これら４株の培養結果
を表１に示す。

種培養培地 マルトース　　　　　　　　２．０％ ペプトン　　　　　　　　　１．０％ 肉エキス １．０％ ｐＨ７、０ 生産培地 グルコース コーン・スチープ・ 尿素 炭酸カルシウム ウラシル １６０％ リカー　４０％ ２．０％ ０．５％ ０００５％ ｐＨ７、０ 表１ 菌株名 ハ゛チルス・ス゛）゛チリス ハ゛チルス・λ゛７゛ｆ７ ゛ｆリスルス・ス＃７＃ｆリス へ〇チルλ・λ′アリリス ２２Ｅ ２２Ｆ ＳＴＡ−１７Ｅ ＳＴＡ−１７Ｆ オロチン酸　　　　　オＯｆシ゛ン （ｉｇ／＊１２） 酵母エキス　　　　　　　　０．３％ バチルス・ズブチリス１２２Ｅ株およびバチルス・ズブ
チリス１２２Ｆ株は、バチルス・ズブチリス１２２株よ
り得られた株である。バチルス・ズブチリス５ＴＡ−１
７Ｅ株およびバチルス・ズブチリス５ＴＡ−１フＰ株は
バチルス・ズブチリス５ＴＡ−１７株より得られた株で
ある。

つぎに、これら４株のＡロチン酸フォスフォリボシルト
ランスフェラーセ活性ならびにオロチジン５′−モノフ
オスフエートデカルボキシラーゼ活性を調べたところ［
アグリカルチコラル・アンド・バイオロジカル・ケミス
トリー（ＡｇｒｉｅＲｉｏｔ、　Ｃｈｅｍ、）、５３．
９７（＋９８９）の方法による］表２に示す結果が得ら
れた。

表２ 菌株名 ＊ ０ＰＲＴアーゼ　ＯＭＰ−ＤＣアーゼ＊（」ニブト／ｊ
１９・　タンハリ） ハ゛チルス・ス゛フ゛ヂリ１　１２２Ｅ　　　　　　　
Ｏ，０１以下　　　　０．３１ビチル訃ス゛フ゛チリス
　１２２Ｆ　　　　　　　８．０　　　　　　　　０．
０１以下ハ゛ｆルス・ス゛ノ゛チリス　５ＴＡ−１７Ｅ
　　　　Ｏ，０１以下　　　　６．２八゛チル１−１゛
７’チリス　５ＴＡ−１７Ｆ　　　９８．３　　　　　
　　　０．０１以下＊０ＰＲＴアーゼ、オロヂン酸フォ
スフイーリボシルトランスフェラーゼ ＊ＯＭＰ−ＤＣアーゼ、オロチジン５゛−モノフォスフ
ェートデカルボキンラーゼ バチルス・ズブチリス１２２Ｅ株およびバチルス・ズブ
チリス５ＴＡ−１７Ｉε株はオロヂン酸フォスフォリボ
ノルトランスフゴラーゼ欠損株であり、バチルス・ズブ
チリス１２２　Ｐ株およびバチルス・ズブチリス５ＴＡ
−１フＦ株はオロヂンン５モノフォスフェートデカルボ
キシラーゼ欠損株である。

つぎに、これら４株のウリジン５′−モノフ嗜スフエー
ト生合成にかかわる代謝制御について調べた［アグリ力
ルヂコラル・アンド・バイオロジカル・ケミストリー（
Ａｇｒｉｃ、　Ｂ　ｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、）。

５３．９７（１９８９）の方法による」。まず、初発酵
素カルバミルリン酸合成酵素のウリジン５モノフオスフ
エート（５ｍＭ）による阻害率を調べた。その結果を表
３に示す。

表３ ノルを添加した場合の酵素活性の、無添加時に対する相
対値である。

菌株名 阻害率（％） ハ゛チルス・ス゛フ゛チリス ハ゛チルス・ス゛フ゛チリス へ′チルス・ス゛７”ｆリス ハ′チルス・ス゛７゛チリス １２２Ｅ　　　　　　　　　９５ １２２Ｆ　　　　　　　　　９６ ＳＴ＾−１７Ｅ　　　　＜　ｌ ５ＴＡ−１７Ｆ　　　　＜　１ ついで、ウリジン５゛−モノフォスフ、、−ト生合成に
かかわる６つの酵素の培地中へのウラシルの添加による
リプレッションについて調べた。その結果を表４に示す
。表中の値は、培地中にウラ表１．２．３および４から
明らかなごとく、バチルス・ズブチリス５ＴＡ−１７Ｅ
株はオロチン酸フォスフォリボノルトランスフェラーゼ
を欠損し、ウリノン５°−モノフオスフエート生合成に
かかわる代謝制御の解除された株であり、オロチン酸フ
ォスフォリホンルトランスフエラーゼを欠損しているが
、ウリジン５−モノフォスフェート生合成にかかわる代
謝制御の解除されていない株であるバチルス・ズブチリ
ス１２２Ｆ株と比べて表１に見られるようにオロチン酸
の蓄積量が大幅に増大している。一方、バチルス・ズブ
チリス５ＴＡ−１７Ｅ株はオロチジン５°−モノフオス
フエートデカルボキシラーゼを欠損し、ウリジン５′−
モノフォスフェート生合成にかかわる代謝制御の解除さ
れた株であり、オロチジン５°−モノフォスフェートデ
カルボキシラーゼを欠損しているが、ウリジン５゛−モ
ノフォスフェート生合成にかかわる代謝制御の解除され
ていない株であるバチルス・ズブチリス１２２Ｆ株に比
べて表１に見られるようにオロチン酸およびオロチジン
の蓄積量が大幅に増大している。

つぎに、オロチン酸および／またはオロチジン生産菌の
要求物質であるところのウラノル等のピリミジン系化合
物あるいは、それを含む物質の培地中の濃度のオロチン
酸および／またはオロチジン蓄積に対する影響について
調べた。先に得られた４株のオロチン酸および／または
オロチジン生産菌を前記した方法で培養した。この際、
培地中にウラノルをさまざまな濃度で添加した。結果を
表５に示す。

表５にあるようにオロヂン酸フオスフオリボノルトラン
スフェラーゼを欠損（７、ウリジン５゛モノフォスフェ
−１・生合成にかかわる代謝制御の解除された株である
バチルス・ズブチリス５ＴＡ１７Ｅ株は菌株の要求する
量を満たせば、いかなる量のウラシルを添加しても著量
のオロチン酸を蓄積する。一方、オロヂン酸フオスフオ
リポシルトランスフェラーゼを欠損しているが、ウリノ
ン５゛−モノフオスフエート生合成にかかわる代謝制御
の解除されていない株であるバチルス・ズブチリス１２
２Ｅ株は、オロチン酸の生産に適したウラシルの添加濃
度は５０ｔｔｇ／ｍＱ付近に限定されており、それ以上
添加すると、オロチン酸の生産は強く抑制される。また
、オロチジン５モノフオスフエートデカルボキシラーゼ
を欠損しウリジン５゛−モノフォスフェート生合成にか
かわる代謝制御の解除されたバチルス・ズブチリスＳ　
Ｔ　Ａ　−１７Ｆ株は、菌株の要求する量を満たせば、
いかなる量のウラシルを添加しても著量のオロチン酸お
よびオロチジンが蓄積される。しかしながら、オ［１チ
ノン５°−モノフォスフエートデカルボギノラーゼを欠
損しているが、ウリジン５゛−モノフオスフエ−１・生
合成にかかわる代謝制御の解除さねていない株であるバ
チルス・ズブチリス１２２Ｆ株では、オ［ｌチン酸およ
びオ「１チジンの生産に適したウラシルの添加濃度は５
０μ９／ｍ（ｌ付近に限定されており、それ以上添加す
ると、オロチン酸およびオロチジンの生産は強く抑制さ
れる。

灸団ｐ涜米 本発明方法によりオロチン酸および／または１０手ジン
を高い収率で、しかも、菌株の要求物質であるウラシル
等のピリミジン系化合物およびそれを含有する物質の培
地への添加量を制限する必要がなく製造することができ
る。

特許出願人武田薬品工業株式会社

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）バチルス属に属し、ウリジン５′−モノフォスフ
   ェート生合成にかかわる代謝制御が解除され、かつ、オ
   ロチン酸フォスフォリボシルトランスフェラーゼを欠損
   する微生物を培養し、培養物中にオロチン酸を生成蓄積
   させ、これを採取することを特徴とするオロチン酸の製
   造法。
2. （２）バチルス属に属し、ウリジン５′−モノフォスフ
   ェート生合成にかかわる代謝制御が解除され、かつ、オ
   ロチジン５′−モノフォスフェートデカルボキシラーゼ
   を欠損する微生物を培養し、培養物中にオロチン酸およ
   びオロチジンを生成蓄積させ、これを採取することを特
   徴とするオロチン酸およびオロチジンの製造法。
3. （３）ウリジン５′−モノフォスフェート生合成にかか
   わる代謝制御が解除され、かつ、オロチン酸フォスフォ
   リボシルトランスフェラーゼを欠損するバチルス・ズブ
   チリス。
4. （４）ウリジン５′−モノフォスフェート生合成にかか
   わる代謝制御が解除され、かつ、オロチジン５′−モノ
   フォスフェートデカルボキシラーゼを欠損するバチルス
   ・ズブチリス。