JPH04351960A

JPH04351960A - 蛍光標識用色素、蛍光標識用色素で標識された生物由来物質、及びそれらを含有する試薬

Info

Publication number: JPH04351960A
Application number: JP12437191A
Authority: JP
Inventors: Seiji Tai; 誠司田井; Mitsuo Katayose; 光雄片寄; Hiroo Watanabe; 渡辺　博夫
Original assignee: Hitachi Chemical Co Ltd
Current assignee: Resonac Corp
Priority date: 1991-05-29
Filing date: 1991-05-29
Publication date: 1992-12-07

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、蛍光標識用色素、蛍光
標識用色素で標識された生物由来物質、及びそれらを含
有する試薬に関する。

【０００２】

【従来の技術】フタロシアニン系顔料は、環状共役鎖を
構成する４つの窒素原子によって結合された４個のイソ
インドール部分を有する有機顔料である。これらの顔料
に用いられている化合物としては、フタロシアニン（青
緑）、銅フタロシアニン（青）、塩素置換銅フタロシア
ニン（緑）、スルホン化銅フタロシアニン（緑）等があ
る。フタロシアニン系顔料は、一般に、エナメル、プラ
スチック、リノリウム、インク、壁紙、織物、紙、ゴム
製品などに使用されている。いっぽう、フリーベースフ
タロシアニン、アルミニウム、カドミウム、マグネシウ
ム、シリコン、すず及び亜鉛フタロシアニンが螢光を示
すことが報告された（ＴｈｅＰｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉ
ｎｅｓ　　１：１２７、１９８３）。

【０００３】また、フタロシアニン類は種々の免疫分析
に使用できることが種々報告されている（ＵＳ特許第４
，１６０，６４５号公報、ＵＳ特許第４，１９３，９８
３号公報、ＵＳ特許第４，２２０，４５０号公報、ＵＳ
特許第４，２３３，４０２号公報、ＵＳ特許第４，２３
５，８６９号公報、ＵＳ特許第４，２５６，８３４号公
報、ＵＳ特許第４，２７７，４３７号公報、ＵＳ特許第
４，３１８，７０７号公報、ＵＳ特許第４，４８３，９
２９号公報、ＵＳ特許第４，５４０，６６０号公報、Ｕ
Ｓ特許第４，５４０，６７０号公報、ＵＳ特許第４，５
６０，５３４号公報、ＵＳ特許第４，６５０，７７０号
公報、ＵＳ特許第４，６５６，１２９号公報、ＵＳ特許
第４，６５９，６７６号公報）。

【０００４】更に、フタロシアニン類は、化学発光免疫
分析系で触媒として使用されている〔Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅ
ｍ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．第５６巻、２９６５−２９６８頁
（１９８３）、同第５６巻、２２６７−２２７１頁（１
９８３）、同第５７巻、５８７−５８８頁（１９８４）
、同第５７巻、３００９−３０１０頁（１９８４）、同
第５８巻、１２９９−１３０３頁（１９８５）〕。原ら
は、ルミノールと過酸化水素とのあいだの化学発光反応
の触媒として鉄フタロシアニンを用いて、化学発光のシ
グナル量から、テストサンプル中の分析対象を定量して
いる。彼らは鉄及びコバルトのフタロシアニン並びに鉄
、パラジウム、白金、マンガン及びスズのポルフィリン
錯体について検討し、鉄フタロシアニンが最も優れた触
媒作用を示し、かつ高感度であることを報告した。

【０００５】免疫分析で着色物質のほかに螢光物質が広
く利用されているが、さらに、酵素免疫分析においても
、螢光物質は感度を上げることができるので着色物質よ
りも好んで使用されるようになってきている。よく知ら
れた螢光物質−酵素対はアルカリホスファターゼ（ａｌ
ｋａｌｉｎｅ　　ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ）と４−メチ
ルウムベリフェリルホスフェート（４−ｍｅｔｈｙｌｕ
ｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、β−ガ
ラクトシダーゼ（β−ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ）と
４−メチルウムベリフェリル−Ｄ−ガラクトピラノシド
（４−ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ−Ｄ−ｇ
ａｌａｃｔｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ）、西洋ワサビのパ
ーオキシダーゼ（ｈｏｒｓｅ　　ｒａｄｉｓｈ　　ｐｅ
ｒｏｘｉｄａｓｅ）とｐ−ヒドロキシフェニル酢酸（ｐ
−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ　　ａｃｅｔｉｃ　　ａ
ｃｉｄ）等があり、これらの系の検出感度は１０−１５
　Ｍである。しかし検出感度をさらに上げようとしても生成する螢光
体の分析特性には限界がある。

【０００６】最近、螢光量子収率が高く、水に対して高
い溶解性を示すフタロシアニン類を用いた試薬が提案さ
れた（ＷＯ特許第８８／０４７７７号公報、ＷＯ特許第
９０／０２７４７号公報、特開平１−２３３２２２号公
報）。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】しかし、フタロシアニ
ン類は吸光係数の特に大きなＱ（０，０）吸収帯が６５
５〜７００ｎｍの領域にあって、６５０ｎｍ以下の波長
域では吸収は比較的に小さい。そのため、最近開発され
た６３０ｎｍ付近に発振波長をもつ、安価で小型の半導
体レーザを搭載した測定装置を使用した場合には、検出
薬としての優れた役目を期待できない。

【０００８】本発明は、６３０ｎｍ付近に発振波長をも
つ小型で安価な半導体レーザを用いて測定するための、
種々の抗原、薬物の分析やあるいはＤＮＡの塩基配列の
分析等に有用な試薬又は臨床検査試薬を提供することを
目的とする。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明は下記（１）〜（
９）に関するものである。すなわち、（１）化２

【化２】〔化２中、Ｍは、Ｈ２　、Ａｌ、Ｓｉ、Ｐ、Ｇａ、Ｇｅ
、Ｃｄ、Ｓｃ、Ｍｇ、Ｓｎ又はＺｎを示し、Ｒ１　及び
Ｒ２　は、それぞれ独立に、−ＸＱＷ、−ＱＷ、−Ｗ又
は水素原子を示し、Ｘは、酸素原子、窒素原子、イオウ
原子、リン原子、ケイ素原子、セレン原子、ＣＲ３　Ｒ
４　（ただし、Ｒ３　及びＲ４　は、それぞれ独立に、
水素原子、アルキル基、アリール基又はアラルキル基で
あり、Ｒ３　Ｒ４　としてカルボニル酸素でもよい。）
、又はフェニレン基を示し、Ｑは、ＸとＷの結合基（リ
ンカー）を示し、Ｗは−ＯＨ、−Ｏ−　、−ＳＨ、−Ｓ
−　、−ＣＯ２　Ｈ、−ＣＯ２　−　、−ＯＣＨ２　Ｃ
Ｏ２　Ｈ、−ＯＣＨ２　ＣＯ２　−　、−ＰＯ４２　−
　、−ＰＯ３−　、−ＳＯ３−、−ＳＯ２−　、−ＳＯ
２　Ｃｌ、−ＳＯ４　２　−　、−ＮＨ２　、−ＮＨＲ
５　、−ＮＲ６Ｒ７　又は−Ｎ（＋）Ｒ８Ｒ９Ｒ１０（
ただし、Ｒ５　〜Ｒ１０は、それぞれ独立にＣ１　〜Ｃ
１０のアルキル基、Ｃ６　〜Ｃ１２のアリール基又はＣ
６　〜Ｃ１２のアラルキル基である。）であり、ｎは、
それぞれ独立に０〜４の整数を示し、Ｙは、ハロゲン原
子、−ＯＲ１１又は−ＮＲ１２２　（ただし、Ｒ１１及
びＲ１２は、それぞれ独立に、水素原子、親水性置換基
を有するものであってもよいアルキル基、親水性置換基
を有するものであってもよいアシル基、親水性置換基を
有するものであってもよいシリル基又は親水性置換基を
有するものであってもよいリン原子含有基である。）を
示し、ｍは、ＹのＭへの結合数を表わす０〜２の整数を
示す。〕で表される蛍光標識用色素。（２）上記（１）の蛍光標識用色素を含有する試薬。（３）上記（１）の蛍光標識用色素で標識された生物由
来物質。（４）上記（３）の標識された生物由来物質を含有する
試薬。（５）生物由来物質が抗原、抗体又はヌクレオチドであ
る上記（３）又は（４）の試薬。（６）抗原が薬物である上記（５）の試薬。（７）抗体がモノクローナル抗体である上記（５）の試
薬。（８）ヌクレオチドがオリゴヌクレオチド又はポリヌク
レオチドである（５）の試薬。（９）ヌクレオチドがＡＴＰ、ＣＴＰ、ＧＴＰ、ＴＴＰ
、ＵＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ、
ｄＵＴＰ、ｄｄＡＴＰ、ｄｄＣＴＰ、ｄｄＧＴＰ、ｄｄ
ＴＴＰ、ｄｄＵＴＰ又はこれらの誘導体である上記（５
）の試薬。

【００１０】本発明の化２の化合物において、Ｒ１及び
Ｒ２のＸ中のＲ３　及びＲ４　のアルキル基の具体例と
しては、メチル基、エチル基、プロピル基、ｓｅｃ−プ
ロピル基、ｎ−ブチル基、ｉｓｏ−ブチル基、ｔ−ブチ
ル基、ペンチル基、ヘキシル基等があり、アリール基の
例としては、フェニル基、チエニル基、フリル基、ピロ
リル基、トリル基、アニシル基、４−アミノフェニル基
等があり、アラルキル基としては、ベンジル基、２−フ
ェニルエチル基、１−フェニルエチル基、３−フェニル
プロピル基、２−フェニルプロピル基、１−フェニルプ
ロピル基等がある。また、Ｙ中のＲ１１及びＲ１２の親
水性置換基を有するものであってもよいアルキル基の具
体例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチ
ル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル
基、ノニル基、デシル基、ドデシル基、テトラデシル基
、ヘキサデシル基、オクタデシル基、エイコシル基、ド
コシル基等の直鎖、分枝及び脂環状の基があり、親水性
置換基を有するものであってもよいアシル基の例として
は、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基、ブチリ
ル基、バレリル基、ピバロイル基、ヘキサノイル基、オ
クタノイル基、ラウリル基、パルミチル基、ステアリル
基等があり、親水性置換基を有するものであってもよい
シリル基としては、トリメチルシリル基、トリエチルシ
リル基、トリプロピルシリル基、トリブチルシリル基、
トリアミルシリル基、トリヘキシルシリル基、ｔ−ブチ
ルジメチルシリル基、ジ（ｔ−ブチル）メチルシリル基
、ジメチルフェニルシリル基、ジフェニルメチルシリル
基、トリフェニルシリル基等がある。

【００１１】ＱはＸとＷを結合する基で、Ｃ１〜Ｃ８の
飽和又は不飽和の直鎖状、分枝状又は脂環状の結合基、
例えば、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基、テ
トラメチレン基、プロピレン基、ビニレン基、プロペニ
レン基、シクロプロピレン基、シクロペンチレン基、シ
クロヘキシレン基等のほか、ポリエーテル、ポリアミン
、ポリアルコール等の基がある。

【００１２】Ｗ中、Ｒ５　〜Ｒ１０のＣ１〜Ｃ１０のア
ルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、
ブチル基、アミル基、ヘキシル基、ヘプチル基、ノニル
基、デシル基の直鎖状、分枝状及び環状の基があり、Ｃ
６〜Ｃ１２のアリール基としては、フェニル基、トリル
基、アニシル基、ナフチル基、ビフェニル基等があり、
Ｃ６〜Ｃ１２のアラルキル基としては、ベンジル基、２
−フェニルエチル基、１−フェニルエチル基、３−フェ
ニルプロピル基、２−フェニルプロピル基、１−フェニ
ルプロピル基等がある。

【００１３】また、Ｒ１１及びＲ１２で表されるリン原
子を含む置換基としては、−Ｐ（＝Ｏ）Ｒ１３Ｒ１４，
　　−Ｐ（＝Ｏ）（ＮＲ１５Ｒ１６）２　，　　−ＰＲ
１７２（Ｒ１３〜Ｒ１７は、それぞれ独立に、アルキル
基、アリール基、アシル基、シクロアルキル基、アルコ
キシル基、アリールオキシル基、ポリエーテル基、ヒド
ロキシル基又はハロゲン原子を示し、それらは種々の置
換基を持っていてもよい。）がある。

【００１４】化２中、Ｙが−ＯＲ１１又は−ＮＲ１２２
（Ｒ１１及びＲ１２は、アルキル基、アシル基及びシリ
ル基を示す）であり、ｍが１又は２を表わす化合物は、
化２中、Ｙが−ＯＨ又は−ＮＨ２　である化合物を、相
当するアルコール、アシルクロリド、シラノール、クロ
ロシラン、クロロホスフィン、クロロホスファイト又は
ホスフォリルクロリドなどと反応させることによって合
成できる。化２中、Ｙが−ＯＨ又は−ＮＨ２　であり、ｍが１又は
２である化合物は、化２中、Ｙがハロゲン原子であり、
ｍが１又は２で表される化合物を加水分解又は加アンモ
ニア分解することによって得ることができる。化２中、
Ｙがハロゲン原子であり、ｍが１又は２で表される化合
物、及びｍがゼロでＹをもたない化合物は、次の２つの
経路により合成することができる。

【００１５】第１の経路は文献〔Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏ
ｎ　　Ｌｅｔｔ．，第２４巻、１４５１頁（１９８３年
）；Ｊ．　Ａｍ．　Ｃｈｅｍ．　Ｓｏｃ．，第９８巻、
７６３８頁（１９７６年）；Ａｎｇｅｗ．　Ｃｈｅｍ．
　Ｉｎｔ．　Ｅｄ．　Ｅｎｇｌ．，　第２２巻、７２４
頁（１９８３年）；Ｊ．　Ａｍ．　Ｃｈｅｍ．　Ｓｏｃ
．，第１０７巻、６１２７頁（１９８５年）〕記載等の
方法により、化３

【化３】（式中、ＭはＨ２　、Ａｌ、Ｓｉ、Ｐ、Ｇａ、Ｇｅ、Ｃ
ｄ、Ｓｃ、Ｍｇ、Ｓｎ又はＺｎを示し、Ｙはハロゲン原
子を示し、ｍはＹのＭへの結合数を表わす０〜２の整数
を示す。）で表される化合物を得、次にこれに、化２に
おいて、置換基Ｒ１又はＲ２　を形成しうるＲ１　又は
Ｒ２　部位を有する化学種を反応させることにより化２
で表される化合物を得る方法である。

【００１６】第２の経路は、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　
　Ｌｅｔｔ．，第２４巻、１４５１頁（１９８３年）；
Ｊ．　Ａｍ．　Ｃｈｅｍ．　Ｓｏｃ．，第９８巻、７６
３８頁（１９７６年）；Ａｎｇｅｗ．　Ｃｈｅｍ．　Ｉ
ｎｔ．　Ｅｄ．　Ｅｎｇｌ．，　第２２巻、７２４頁（
１９８３年）；Ｊ．　Ａｍ．　Ｃｈｅｍ．　Ｓｏｃ．，
第１０７巻、６１２７頁（１９８５年）等の文献を参考
にして、化４

【化４】（化４中、Ｒ１　、Ｒ２　及びｎは、化２中と同じ意味
）で表される化合物を、相当する金属又は金属塩と反応
させて得ることができる。いっぽう、化２中、ＭがＨ２
　の場合は、化２中、ＭがＭｇ又はＺｎで表される化合
物を酸で分解することにより得ることができる。

【００１７】本発明において用いられる生物由来物質と
しては、動物、植物、微生物（ウイルスを含む）等の生
物から得られるタンパク質・ペプチド、ヌクレオチド、
糖類、脂質、ホルモン、ビタミン、アルカロイド、抗生
物質、それらの複合物等があり、これらは、天然から抽
出したもの、人工的に完全合成したもの、あるい人工的
に半合成したもののいずれであってもよい。タンパク質
・ペプチドの具体例としては、血清アルブミン、ＩｇＧ
・ＩｇＡ・ＩｇＭ・ＩｇＤ・ＩｇＥ等の免疫グロブリン
、種々のタンパク質や白血球の膜抗原に対するモノクロ
ーナル抗体、パーオキシダーゼ、グルコースオキシダー
ゼ、アルカリホスファターゼ等の酵素等が挙げられ、ヌ
クレオチドの具体例としてはＤＮＡ、ＲＮＡ、合成オリ
ゴヌクレオチド、合成ポリヌクレオチド、ＡＴＰ、ＣＴ
Ｐ、ＧＴＰ、ＴＴＰ、ＵＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄ
ＧＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＵＴＰ、ｄｄＡＴＰ、ｄｄＣＴＰ
、ｄｄＧＴＰ、ｄｄＴＴＰ、ｄｄＵＴＰ、あるいはそれ
らの誘導体等が挙げられ、糖類の具体例としては、グリ
コーゲン、デンプン、マンナン等の多糖類のほかオリゴ
糖やグルコース、マンノース等の単糖類が挙げられ、脂
質としては、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエ
タノラミン、脂肪、脂肪酸等が挙げられ、ホルモンとし
てはインシュリン、成長ホルモン、オキシトシン、バソ
プレッシン、セクレチン、上皮細胞成長因子、ガストリ
ン、グルカゴン、カルシトニン等のペプチド性ホルモン
、アンドロゲン、エストロゲン、ハイドロコーチゾン等
のステロイドホルモン、アドレナリン、ノルアドレナリ
ン等のカテコラミン類等が挙げられ、ビタミンとしては
ビタミンＡ、ビタミンＢ１、Ｂ２、Ｂ６、Ｂ１２、ビオ
チン、葉酸、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ等の
各種ビタミンが挙げられ、アルカロイドとしてはモルフ
ィン等のアヘンアルカロイド、アトロピン、スコポラミ
ン等のトロパンアルカロイド、ビンブラスチン、ビンク
リスチン等のインドールアルカロイド、オウレン等のイ
ソキノリンアルカロイド等が挙げられ、抗生物質として
は、ペニシリン、セファロスポリン、カナマイシン、エ
リスロマイシン、クロラムフェニコール等が挙げられる
。

【００１８】生物由来物質に蛍光標識用色素を結合させ
るためには、生物由来物質中のアミノ基、水酸基等の官
能基と蛍光標識用色素中のカルボキシル基、スルフォン
基等の官能基を利用して直接、イオン結合的又は共有結
合的に直接結合させるか、あるいは蛍光標識用色素が反
応できるように、生物由来物質の一部に結合基（リンカ
ー）を付加する等の化学修飾を施したのち、反応させれ
ばよい。蛍光標識用色素で標識された生物由来物質はク
ロマトグラフィー、再結晶等の慣用の分離手段により精
製することができる。

【００１９】化２で表される化合物は、フタロシアニン
類に比べて短波長域（約６３０ｎｍ）付近にモル吸光係
数が約１０万の大きな吸収極大を有することから、６３
０ｎｍ付近に発振波長をもつ安価で小型の半導体レーザ
を用いて、種々の抗原、薬物の分析やあるいはＤＮＡの
塩基配列の分析等に有用な、精度の高い試薬又は臨床検
査試薬として利用できる。

【００２０】

【実施例】以下、実施例により更に具体的に本発明を説
明する。実施例　　１（１）化２中、ＭがＺｎ、Ｒ１がＨ、Ｒ２が４−ヒドロ
キシカルボニルフェニル基、ｎが１、ｍが０でＹのない
化合物の合成文献〔Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　　Ｌｅｔｔ．，第２４
巻、１４５１頁（１９８３年）〕記載の方法を参考にし
て、化２中、ＭがＺｎ、Ｒ１がＨ、Ｒ２が４−ヒドロキ
シカルボニルフェニル基、ｎが１、ｍが０でＹのない化
合物を合成した。

【００２１】（２）リンカーが結合したオリゴヌクレオ
チド・プライマーの合成固相ＣＥＤ−フォスフォラミド法を用いた自動ＤＮＡ合
成装置によりプライマー（５’−ＧＴＴＴＣＣＣＡＧＴ
ＣＡＣＧＡＣ−３’）を合成した。合成したプライマー
のリン酸化は、５０ｍＭトリス−塩酸（ｐＨ７．６）、
１０ｍＭ塩化マグネシウム、１０ｍＭジチオスレイトー
ル、３ｍＭ　ＡＴＰ、Ｔ４−ヌクレオチドカイネースを
含む１００μｌの反応液中で３７℃、１時間保温して行
った。リン酸化されたプライマーは、ゲル濾過用カラム
を使用して高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で
分離し、リン酸化されたプライマーのピークを集め、凍
結乾燥で溶媒を除いた。次に、これを２５０ｍＭの１，
２−ジアミノエタン（ｐＨ６．０），２００ｍＭのエチ
ル−３（３−ジエチルアミノプロピル）カルボジイミド
及び１００ｍＭのＮ−メチルイミダゾール（ｐＨ６．０
）を含む反応液１００μｌ中、２５℃で一晩保温して５
’末端のグアノシンのリン酸部にリンカー〔ＮＨ２−（
ＣＨ２）２−ＮＨ−〕を結合させた。

【００２２】（３）化２中、ＭがＺｎ、Ｒ１がＨ、Ｒ２
が４−ヒドロキシカルボニルフェニル基、ｎが１、ｍが
０でＹのない化合物によって標識されたオリゴヌクレオ
チド・プライマーの合成上記（１）で合成した化合物と上記（２）で合成した５
’末端グアノシンのリン酸部にリンカーが結合したオリ
ゴヌクレオチド・プライマーを、０．２Ｍ炭酸ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ９．３）中で混合し、２５℃で一晩、暗
所に保温したのち、ＨＰＬＣで精製することにより、リ
ンカーを介して化２中、ＭがＺｎ、Ｒ１がＨ、Ｒ２が４
−ヒドロキシカルボニルフェニル基、ｎが１、ｍが０で
Ｙのない化合物の結合したプライマーを得た。

【００２３】（４）ＤＮＡの塩基配列の分析既知の塩基
配列のＤＮＡをサンプルとし、リンカーを介して化２中
、ＭがＺｎ、Ｒ１がＨ、Ｒ２が４−ヒドロキシカルボニ
ルフェニル基、ｎが１、ｍが０でＹのない化合物の結合
したプライマーを用いて、それぞれ４種の塩基でサンガ
ー反応を行ったのち、それぞれ別々のレーンで電気泳動
分離し、６３８ｎｍの発振波長の半導体レーザーを搭載
したＤＮＡシークエンサーで分析した。その結果、ＤＮ
Ａの３５０塩基までを９９％の精度で決定できた。

【００２４】実施例２文献〔Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　　Ｌｅｔｔ．，第２４
巻、１４５１頁（１９８３年）〕記載の方法を参考にし
て、化２中、ＭがＨ２、Ｒ１がＨ、Ｒ２が４−スルフォ
フェニル基、ｎが１、ｍが０でＹのない化合物を合成し
た。以下、実施例１と同様に操作して、リンカーを介し
てこの化合物が結合したプライマーを得、これを用いて
、既知の塩基配列のＤＮＡを分析した結果、ＤＮＡの４
１０塩基までを９９％の精度で決定できた。

【００２５】実施例３文献〔Ｊ．　Ａｍ．　Ｃｈｅｍ．　Ｓｏｃ．，第１０７
巻、６１２７頁（１９８５年）〕記載の方法を参考にし
て、化２中、ＭがＺｎ、Ｒ１が−ＣＯＯＨ、Ｒ２がＨ、
ｎが１、ｍが０でＹのない化合物を合成した。以下、実
施例１と同様に操作して、リンカーを介してこの化合物
が結合したプライマーを得、これを用いて、既知の塩基
配列のＤＮＡを分析した結果、ＤＮＡの３６０塩基まで
を９９％の精度で決定できた。

【００２６】実施例４文献〔Ｊ．　Ａｍ．　Ｃｈｅｍ．　Ｓｏｃ．，第１０７
巻、６１２７頁（１９８５年）〕記載の方法を参考にし
て、化２中、ＭがＡｌ、Ｒ１が−ＣＯＯＨ、Ｒ２がＨ、
ｎが１、ｍが０でＹのない化合物を合成した。以下、実
施例１と同様に操作して、リンカーを介してこの化合物
が結合したプライマーを得、これを用いて、既知の塩基
配列のＤＮＡを分析した結果、ＤＮＡの３３０塩基まで
を９９％の精度で決定できた。

【００２７】

【発明の効果】本発明により、６３０ｎｍ付近に発振波
長をもつ半導体レーザを用いて測定するための、種々の
抗原、薬物あるいはＤＮＡの塩基配列等の分析に有用な
試薬又は臨床検査試薬を提供できた。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】化１【化１】〔化１中、Ｍは、Ｈ２　、Ａｌ、Ｓｉ、Ｐ、Ｇａ、Ｇｅ
、Ｃｄ、Ｓｃ、Ｍｇ、Ｓｎ又はＺｎを示し、Ｒ１　及び
Ｒ２　は、それぞれ独立に、−ＸＱＷ、−ＱＷ、−Ｗ又
は水素原子を示し、Ｘは、酸素原子、窒素原子、イオウ
原子、リン原子、ケイ素原子、セレン原子、ＣＲ３　Ｒ
４　（ただし、Ｒ３　及びＲ４　は、それぞれ独立に、
水素原子、アルキル基、アリール基又はアラルキル基で
あり、Ｒ３　Ｒ４　としてカルボニル酸素でもよい。）
、又はフェニレン基を示し、Ｑは、ＸとＷの結合基（リ
ンカー）を示し、Ｗは−ＯＨ、−Ｏ−　、−ＳＨ、−Ｓ
−　、−ＣＯ２　Ｈ、−ＣＯ２　−　、−ＯＣＨ２　Ｃ
Ｏ２　Ｈ、−ＯＣＨ２　ＣＯ２　−　、−ＰＯ４２　−
　、−ＰＯ３−　、−ＳＯ３−、　　　　−ＳＯ２−　
、−ＳＯ２　Ｃｌ、−ＳＯ４　２　−、−ＮＨ２　、−
ＮＨＲ５　、−ＮＲ６　　　　Ｒ７　又は−Ｎ（＋）Ｒ
８Ｒ９Ｒ１０（ただし、Ｒ５　〜Ｒ１０は、それぞれ独
立に　　　　　　Ｃ１　〜Ｃ１０のアルキル基、Ｃ６　
〜Ｃ１２のアリール基又はＣ６　〜Ｃ１２のアラル　　
　　キル基である。）であり、ｎは、それぞれ独立に０
〜４の整数を示し、Ｙは、ハロゲン原子、−ＯＲ１１又
は−ＮＲ１２２　（ただし、Ｒ１１及びＲ１２は、それ
ぞれ独立に、水素原子、親水性置換基を有するものであ
ってもよいアルキル基、親水性置換基を有するものであ
ってもよいアシル基、親水性置換基を有するものであっ
てもよいシリル基又は親水性置換基を有するものであっ
てもよいリン原子含有基である。）を示し、ｍは、Ｙの
Ｍへの結合数を表わす０〜２の整数を示す。〕で表され
る蛍光標識用色素。
【請求項２】請求項１記載の蛍光標識用色素を含有する
試薬。
【請求項３】請求項１記載の蛍光標識用色素で標識され
た生物由来物質。
【請求項４】請求項３記載の標識された生物由来物質を
含有する試薬。
【請求項５】生物由来物質が抗原、抗体又はヌクレオチ
ドである請求項３又は請求項４記載の試薬。
【請求項６】抗原が薬物である請求項５記載の試薬。
【請求項７】抗体がモノクローナル抗体である請求項５
記載の試薬。
【請求項８】ヌクレオチドがオリゴヌクレオチド又はポ
リヌクレオチドである請求項５記載の試薬。
【請求項９】ヌクレオチドがＡＴＰ、ＣＴＰ、ＧＴＰ、
ＴＴＰ、ＵＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴ
ＴＰ、ｄＵＴＰ、ｄｄＡＴＰ、ｄｄＣＴＰ、ｄｄＧＴＰ
、ｄｄＴＴＰ、ｄｄＵＴＰ又はこれらの誘導体である請
求項５記載の試薬。