JPH04270295A - モノ−Ｎ、Ｎ−ジアルキル−４−アミノピリジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェートの製法及びホスファチジン酸類の調製におけるその使用 - Google Patents
モノ−Ｎ、Ｎ−ジアルキル−４−アミノピリジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェートの製法及びホスファチジン酸類の調製におけるその使用Info
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- JPH04270295A JPH04270295A JP3220303A JP22030391A JPH04270295A JP H04270295 A JPH04270295 A JP H04270295A JP 3220303 A JP3220303 A JP 3220303A JP 22030391 A JP22030391 A JP 22030391A JP H04270295 A JPH04270295 A JP H04270295A
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- C07F9/09—Esters of phosphoric acids
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】
【発明の背景】本発明は、ｓｎ−グリセロール−３−ホ
スフェートの結晶性塩の製造およびジアシルホスファチ
ジン酸類の直接的製造におけるその後のそれの使用に関
するものである。より特に、本発明は独特な結晶性で且
つ無水形のホスフェートであるｓｎ−グリセロール−３
−ホスフェートのモノ−Ｎ，Ｎ−ジアルキル−４−アミ
ノピリジニウム塩（Ｇ−３−Ｐ（ＤＭＡＰ）１）の製造
に関するものである。さらに、本発明はジアシルホスフ
ァチジン酸類の新規な製造方法を提供するための無水脂
肪酸を用いる上記のＮ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピ
リジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェート塩の
直接的アシル化方法にも関するものである。
スフェートの結晶性塩の製造およびジアシルホスファチ
ジン酸類の直接的製造におけるその後のそれの使用に関
するものである。より特に、本発明は独特な結晶性で且
つ無水形のホスフェートであるｓｎ−グリセロール−３
−ホスフェートのモノ−Ｎ，Ｎ−ジアルキル−４−アミ
ノピリジニウム塩（Ｇ−３−Ｐ（ＤＭＡＰ）１）の製造
に関するものである。さらに、本発明はジアシルホスフ
ァチジン酸類の新規な製造方法を提供するための無水脂
肪酸を用いる上記のＮ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピ
リジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェート塩の
直接的アシル化方法にも関するものである。
【０００２】ジアシルホスファチジン酸類は、細胞膜の
主成分である燐脂質を合成するために有用な先駆体であ
る。ジアシルホスファチジン酸類は、種々の塩形のｓｎ
−グリセロール−３−ホスフェートのアシル化により製
造することができる。例えば、Ｙ．ラピドット（Ｌａｐ
ｉｄｏｔ）およびＺ．セリンガー（Ｓｅｌｉｎｇｅｒ）
、ザ・ジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・ケミカル・
ソサイエテイ（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）、８７
巻、５５２２−５５２３（１９６５）はピリジニウムｓ
ｎ−グリセロール−３−ホスフェートのアシル化による
ジアシルホスファチジン酸類の合成を記載している。ラ
ピドット他の方法は副生物をあまり生成せずに希望する
ジアシルホスファチジン酸類の許容可能な収率（７０％
−８０％）を与えるが、小規模（０．４ミリモル）であ
る。グプタ（Ｇｕｐｔａ）他は（プロセッシング・オブ
・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・オ
ブ・ザ・ユナイテッド・ステーツ・オブ・アメリカ（Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．）、７４巻、４３
１５−４３１９（１９７７）中でラピドット他の方法に
対する改良法を記載しており、そこでは塩基性触媒であ
るＮ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピリジンを加えてピ
リジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェートによ
る親核性基への攻撃に対する無水脂肪酸の反応性を促進
させている。グプタ他の方法に従うと、ピリジニウムｓ
ｎ−グリセロール−３−ホスフェートを無水脂肪酸（３
当量）およびＮ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピリジン
（４当量）と反応させた時には、優れた収率（８７％）
のジアシルホスファチジン酸を与える。グプタ他の方法
はミリモル規模でのジアシルホスファチジン酸類の製造
には適用できるが、この方法を用いるジアシルホスファ
チジン酸類の大規模合成には大きな制限がある。
主成分である燐脂質を合成するために有用な先駆体であ
る。ジアシルホスファチジン酸類は、種々の塩形のｓｎ
−グリセロール−３−ホスフェートのアシル化により製
造することができる。例えば、Ｙ．ラピドット（Ｌａｐ
ｉｄｏｔ）およびＺ．セリンガー（Ｓｅｌｉｎｇｅｒ）
、ザ・ジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・ケミカル・
ソサイエテイ（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）、８７
巻、５５２２−５５２３（１９６５）はピリジニウムｓ
ｎ−グリセロール−３−ホスフェートのアシル化による
ジアシルホスファチジン酸類の合成を記載している。ラ
ピドット他の方法は副生物をあまり生成せずに希望する
ジアシルホスファチジン酸類の許容可能な収率（７０％
−８０％）を与えるが、小規模（０．４ミリモル）であ
る。グプタ（Ｇｕｐｔａ）他は（プロセッシング・オブ
・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・オ
ブ・ザ・ユナイテッド・ステーツ・オブ・アメリカ（Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．）、７４巻、４３
１５−４３１９（１９７７）中でラピドット他の方法に
対する改良法を記載しており、そこでは塩基性触媒であ
るＮ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピリジンを加えてピ
リジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェートによ
る親核性基への攻撃に対する無水脂肪酸の反応性を促進
させている。グプタ他の方法に従うと、ピリジニウムｓ
ｎ−グリセロール−３−ホスフェートを無水脂肪酸（３
当量）およびＮ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピリジン
（４当量）と反応させた時には、優れた収率（８７％）
のジアシルホスファチジン酸を与える。グプタ他の方法
はミリモル規模でのジアシルホスファチジン酸類の製造
には適用できるが、この方法を用いるジアシルホスファ
チジン酸類の大規模合成には大きな制限がある。
【０００３】本発明の一面は、大規模適用に有用なジア
シルホスファチジン酸類の新規な合成方法を提供するこ
とである。
シルホスファチジン酸類の新規な合成方法を提供するこ
とである。
【０００４】ジアシルホスファチジン酸のこれらの従来
の製造方法に関する他の制限は、ピリジニウムｓｎ−グ
リセロール−３−ホスフェートの使用が必要なことであ
る。グプタ他により記載されている如く、ピリジニウム
ｓｎ−グリセロール−３−ホスフェートは吸湿性で且つ
ゴム状の油であり、従ってそれは大規模なアシル化反応
ではいくつかの欠点をもたらす。扱いにくい吸湿性油の
ためにピリジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェ
ートは正確に重量測定することが難しく、それにより反
応化学量論の定量化が問題となる。ピリジニウムｓｎ−
グリセロール−３−ホスフェートからの水およびアルコ
ール類の完全除去が難しいことが他の重要な欠点となっ
ている。ジアシルホスファチジン酸製造に関する条件は
水およびアルコールを含んでいてはならないため、ピリ
ジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェートを用い
る大規模なジアシルホスファチジン酸合成では塩を無水
且つ無溶媒にさせる際の重要な欠点となっている。ラピ
ドット他およびグプタ他の両方法は労力がかかりしかも
繰り返される乾燥ピリジンの添加およびその後のピリジ
ニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェート塩を無水
にさせるための溶媒の蒸発が必要である。
の製造方法に関する他の制限は、ピリジニウムｓｎ−グ
リセロール−３−ホスフェートの使用が必要なことであ
る。グプタ他により記載されている如く、ピリジニウム
ｓｎ−グリセロール−３−ホスフェートは吸湿性で且つ
ゴム状の油であり、従ってそれは大規模なアシル化反応
ではいくつかの欠点をもたらす。扱いにくい吸湿性油の
ためにピリジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェ
ートは正確に重量測定することが難しく、それにより反
応化学量論の定量化が問題となる。ピリジニウムｓｎ−
グリセロール−３−ホスフェートからの水およびアルコ
ール類の完全除去が難しいことが他の重要な欠点となっ
ている。ジアシルホスファチジン酸製造に関する条件は
水およびアルコールを含んでいてはならないため、ピリ
ジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェートを用い
る大規模なジアシルホスファチジン酸合成では塩を無水
且つ無溶媒にさせる際の重要な欠点となっている。ラピ
ドット他およびグプタ他の両方法は労力がかかりしかも
繰り返される乾燥ピリジンの添加およびその後のピリジ
ニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェート塩を無水
にさせるための溶媒の蒸発が必要である。
【０００５】本発明の別の面は、ジアシルホスファチジ
ン酸の合成においてピリジニウムｓｎ−グリセロール−
３−ホスフェートの使用を避けることである。
ン酸の合成においてピリジニウムｓｎ−グリセロール−
３−ホスフェートの使用を避けることである。
【０００６】ラピドット他およびグプタ他の方法に関す
る別の重大な欠点は、ピリジニウムｓｎ−グリセロール
−３−ホスフェート自身の間接的生成である。現在まで
に知られている従来方法は、別のピリジニウムｓｎ−グ
リセロール−３−ホスフェート形からｓｎ−グリセロー
ル−３−ホスフェートへの誘導を与えるものである。ｓ
ｎ−グリセロール−３−ホスフェートの他の周知の結晶
性塩は、バリウム、カルシウム、ナトリウム、モノシク
ロヘキシルアンモニウムおよびジシクロヘキシルアンモ
ニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェート類である
。バリウムおよびジシクロヘキシルアンモニウム塩類の
両者は一般的にはｓｎ−グリセロール−３−ホスフェー
トを単離するための手段としてのみ製造される（Ｃ．Ｆ
．クランス（Ｃｒａｎｓ）他、ザ・ジャーナル・オブ・
ザ・アメリカン・ケミカル・ソサイエテイ（Ｊ．Ａｍ．
Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）、１０７巻、７０１９（１９８６
））。しかしながら、バリウム塩は必要な有機反応媒体
中に不溶性でありそしてジアシルヘキシルアンモニウム
塩は共反応物である無水脂肪酸と相容性でないため、ど
ちらの塩もジアシルホスファチジン酸の製造用には直接
使用することはできない。バリウムまたはシクロヘキシ
ルアンモニウム塩類のいずれかを相容性にするためには
、アシル化反応を行おうとする場合にはそれらをｓｎ−
グリセロール−３−ホスフェートのピリジニウム塩に転
化させることが必要である。そのような転化は、イオン
−交換樹脂を使用するピリジン用の対イオンの交換を必
要とするめんどうな方法である。塩をピリジニウムｓｎ
−グリセロール−３−ホスフェートに転化させるために
使用される溶媒はピリジン水溶液でなければならない。 しかしながら、水溶液からのピリジニウムｓｎ−グリセ
ロール−３−ホスフェートの単離および塩の乾燥には時
間および労力が非常にかかるため、この工程をキログラ
ム規模で実施することはできない。
る別の重大な欠点は、ピリジニウムｓｎ−グリセロール
−３−ホスフェート自身の間接的生成である。現在まで
に知られている従来方法は、別のピリジニウムｓｎ−グ
リセロール−３−ホスフェート形からｓｎ−グリセロー
ル−３−ホスフェートへの誘導を与えるものである。ｓ
ｎ−グリセロール−３−ホスフェートの他の周知の結晶
性塩は、バリウム、カルシウム、ナトリウム、モノシク
ロヘキシルアンモニウムおよびジシクロヘキシルアンモ
ニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェート類である
。バリウムおよびジシクロヘキシルアンモニウム塩類の
両者は一般的にはｓｎ−グリセロール−３−ホスフェー
トを単離するための手段としてのみ製造される（Ｃ．Ｆ
．クランス（Ｃｒａｎｓ）他、ザ・ジャーナル・オブ・
ザ・アメリカン・ケミカル・ソサイエテイ（Ｊ．Ａｍ．
Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）、１０７巻、７０１９（１９８６
））。しかしながら、バリウム塩は必要な有機反応媒体
中に不溶性でありそしてジアシルヘキシルアンモニウム
塩は共反応物である無水脂肪酸と相容性でないため、ど
ちらの塩もジアシルホスファチジン酸の製造用には直接
使用することはできない。バリウムまたはシクロヘキシ
ルアンモニウム塩類のいずれかを相容性にするためには
、アシル化反応を行おうとする場合にはそれらをｓｎ−
グリセロール−３−ホスフェートのピリジニウム塩に転
化させることが必要である。そのような転化は、イオン
−交換樹脂を使用するピリジン用の対イオンの交換を必
要とするめんどうな方法である。塩をピリジニウムｓｎ
−グリセロール−３−ホスフェートに転化させるために
使用される溶媒はピリジン水溶液でなければならない。 しかしながら、水溶液からのピリジニウムｓｎ−グリセ
ロール−３−ホスフェートの単離および塩の乾燥には時
間および労力が非常にかかるため、この工程をキログラ
ム規模で実施することはできない。
【０００７】本発明のさらに別の面は、ジアシルホスフ
ァチジン酸の製造におけるバリウムおよびジシクロヘキ
シルアンモニウム塩類の使用を避けることである。
ァチジン酸の製造におけるバリウムおよびジシクロヘキ
シルアンモニウム塩類の使用を避けることである。
【０００８】本発明のさらに別の面は、その後にホスフ
ァチジン酸類から経済的に直接アシル化することのでき
る結晶性で且つ無水形のｓｎ−グリセロール−３−ホス
フェートの塩を容易に単離する方法を提供すること、並
びにｓｎ−グリセロール−３−ホスフェートからのジア
シルホスファチジン酸類および他の燐脂質類の合成方法
を提供することである。
ァチジン酸類から経済的に直接アシル化することのでき
る結晶性で且つ無水形のｓｎ−グリセロール−３−ホス
フェートの塩を容易に単離する方法を提供すること、並
びにｓｎ−グリセロール−３−ホスフェートからのジア
シルホスファチジン酸類および他の燐脂質類の合成方法
を提供することである。
【０００９】
【発明の要旨】本発明の種々の原則および面に従うと、
Ｎ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピリジニウムｓｎ−グ
リセロール−３−ホスフェートの簡便で且つ実用的な大
規模製造およびジアシルホスファチジン酸類を製造する
ためのこの塩の直接的使用が記載されている。一般的に
は、本発明の一面における特徴はｓｎ−グリセロール−
３−ホスフェートの結晶性で且つ無水の塩の製造である
。他の面では、本発明の特徴は他の燐脂質類、最も特別
にはジアシルホスファチジルエステル類、の合成におけ
る中間生成物としてそれ自身で有用なジアシルホスファ
チジン酸類の直接的製造における図面に示されている結
晶性無水塩であるＮ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピリ
ジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェートの使用
である。前記のものを用いるそのような燐脂質類の製造
も本発明に包括される。
Ｎ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピリジニウムｓｎ−グ
リセロール−３−ホスフェートの簡便で且つ実用的な大
規模製造およびジアシルホスファチジン酸類を製造する
ためのこの塩の直接的使用が記載されている。一般的に
は、本発明の一面における特徴はｓｎ−グリセロール−
３−ホスフェートの結晶性で且つ無水の塩の製造である
。他の面では、本発明の特徴は他の燐脂質類、最も特別
にはジアシルホスファチジルエステル類、の合成におけ
る中間生成物としてそれ自身で有用なジアシルホスファ
チジン酸類の直接的製造における図面に示されている結
晶性無水塩であるＮ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピリ
ジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェートの使用
である。前記のものを用いるそのような燐脂質類の製造
も本発明に包括される。
【００１０】本発明のＮ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノ
ピリジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェート塩
は、従来のピリジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホス
フェートとの比較時に、例えば塩化メチレンおよびクロ
ロホルムの如き有機溶媒中での増加された溶解性および
反応性を示す。増加された溶解性および反応性はジアシ
ルホスファチジン酸類およびそれらの誘導体類の大規模
製造を非常に促進させしかもそれらを初めて実用化させ
ることとなる。
ピリジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェート塩
は、従来のピリジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホス
フェートとの比較時に、例えば塩化メチレンおよびクロ
ロホルムの如き有機溶媒中での増加された溶解性および
反応性を示す。増加された溶解性および反応性はジアシ
ルホスファチジン酸類およびそれらの誘導体類の大規模
製造を非常に促進させしかもそれらを初めて実用化させ
ることとなる。
【００１１】
【実施例】結晶性の無水Ｎ，Ｎ−ジアルキル−４−アミ
ノピリジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェート
は下記の如くして理想的に得られる。遊離酸形のｓｎ−
グリセロール−３−ホスフェートを好適には等モル量の
塩基であるＮ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピリジンと
アルコール系溶媒中で両方の反応物が溶液中に溶解する
まで混合する。最も好適な溶媒はメタノールである。他
の使用することのできる溶媒には、エタノールまたはｎ
−プロパノールが包含される。ｓｎ−グリセロール−３
−ホスフェートを例えばＣ１ヒドロキシルが−Ｃｌ、−
Ｂｒ、−ＳＨ、−ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨおよび−ＣＨ
２ＣＨ３により置換されていてもよいそれの同族体と置
換することもできる。
ノピリジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェート
は下記の如くして理想的に得られる。遊離酸形のｓｎ−
グリセロール−３−ホスフェートを好適には等モル量の
塩基であるＮ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピリジンと
アルコール系溶媒中で両方の反応物が溶液中に溶解する
まで混合する。最も好適な溶媒はメタノールである。他
の使用することのできる溶媒には、エタノールまたはｎ
−プロパノールが包含される。ｓｎ−グリセロール−３
−ホスフェートを例えばＣ１ヒドロキシルが−Ｃｌ、−
Ｂｒ、−ＳＨ、−ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨおよび−ＣＨ
２ＣＨ３により置換されていてもよいそれの同族体と置
換することもできる。
【００１２】粗製Ｎ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピリ
ジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェートを単離
するための好適方法は、真空濃縮によるメタノールの除
去からなっている。生成した油は残存メタノールおよび
主要不純物としてのＮ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピ
リジニウム塩酸塩を含有している。
ジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェートを単離
するための好適方法は、真空濃縮によるメタノールの除
去からなっている。生成した油は残存メタノールおよび
主要不純物としてのＮ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピ
リジニウム塩酸塩を含有している。
【００１３】主要不純物を除去するための好適方法は、
イソプロピルアルコール中への油の溶解およびその後の
有機溶媒の添加、灰白色の結晶性固体としてのＮ，Ｎ−
ジアルキル−４−アミノピリジニウムｓｎ−グリセロー
ル−３−ホスフェートの沈澱からなっている。Ｎ，Ｎ−
ジアルキル−４−アミノピリジニウムｓｎ−グリセロー
ル−３−ホスフェートの沈澱を行うために使用される好
適な有機溶媒はアセトンである。アセトン対イソプロピ
ルアルコールの好適な比は、決定的なものではないが、
それぞれ１０容量対１容量でなければならない。アセト
ン対イソプロピルアルコール容量の範囲はそれぞれ約５
対１−約１００対１までで変えることができる。
イソプロピルアルコール中への油の溶解およびその後の
有機溶媒の添加、灰白色の結晶性固体としてのＮ，Ｎ−
ジアルキル−４−アミノピリジニウムｓｎ−グリセロー
ル−３−ホスフェートの沈澱からなっている。Ｎ，Ｎ−
ジアルキル−４−アミノピリジニウムｓｎ−グリセロー
ル−３−ホスフェートの沈澱を行うために使用される好
適な有機溶媒はアセトンである。アセトン対イソプロピ
ルアルコールの好適な比は、決定的なものではないが、
それぞれ１０容量対１容量でなければならない。アセト
ン対イソプロピルアルコール容量の範囲はそれぞれ約５
対１−約１００対１までで変えることができる。
【００１４】生じた沈澱した塩の懸濁液を次に激しく撹
拌して油状残渣が確実に生成しないようにする。ｓｎ−
グリセロール−３−ホスフェート塩の単離は理想的には
濾過により行われる。
拌して油状残渣が確実に生成しないようにする。ｓｎ−
グリセロール−３−ホスフェート塩の単離は理想的には
濾過により行われる。
【００１５】揮発性溶媒不純物の完全な除去を確実にす
るためには、二種類の分析前に結晶性塩を真空中で乾燥
することが好ましい。生じたＮ，Ｎ−ジアルキル−４−
アミノピリジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェ
ートの分析は二種類の下記工程の一種または最も好適に
は二種を使用することにより最良に行われる。
るためには、二種類の分析前に結晶性塩を真空中で乾燥
することが好ましい。生じたＮ，Ｎ−ジアルキル−４−
アミノピリジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェ
ートの分析は二種類の下記工程の一種または最も好適に
は二種を使用することにより最良に行われる。
【００１６】第一の好適な分析工程は、ｓｎ−グリセロ
ール−３−ホスフェートに関する酵素検定である。ベル
グマイヤー（Ｂｅｒｇｍｅｙｅｒ）他、バイオヘミッシ
ェ・ツァイトシュリフト（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｚ）、３３
巻、４７１（１９６１）に従う酵素検定は、ＮＡＤＨ−
要求デヒドロゲナーゼ、好適にはｓｎ−グリセロール−
３−ホスフェートデヒドロゲナーゼ、によるｓｎ−グリ
セロール−３−ホスフェートから１−ホスホ−３−ヒド
ロキシアセトンへの定量的転化に基づいている。Ｎ，Ｎ
−ジアルキル−４−アミノピリジニウムｓｎ−グリセロ
ール−３−ホスフェート用の第二の好適な分析工程は、
塩の高分解能プロトン磁気共鳴スペクトルである。この
分析試験により、塩中の１当量のジメチルアミノピリジ
ンの正確な定量化が可能になる。Ｎ，Ｎ−ジアルキル−
４−アミノピリジン対ｓｎ−グリセロール−３−ホスフ
ェートの好適な比は１：１である。二種類の分析により
測定されたＮ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピリジニウ
ムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェート塩の純度が９
８％より高いことが好ましい。
ール−３−ホスフェートに関する酵素検定である。ベル
グマイヤー（Ｂｅｒｇｍｅｙｅｒ）他、バイオヘミッシ
ェ・ツァイトシュリフト（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｚ）、３３
巻、４７１（１９６１）に従う酵素検定は、ＮＡＤＨ−
要求デヒドロゲナーゼ、好適にはｓｎ−グリセロール−
３−ホスフェートデヒドロゲナーゼ、によるｓｎ−グリ
セロール−３−ホスフェートから１−ホスホ−３−ヒド
ロキシアセトンへの定量的転化に基づいている。Ｎ，Ｎ
−ジアルキル−４−アミノピリジニウムｓｎ−グリセロ
ール−３−ホスフェート用の第二の好適な分析工程は、
塩の高分解能プロトン磁気共鳴スペクトルである。この
分析試験により、塩中の１当量のジメチルアミノピリジ
ンの正確な定量化が可能になる。Ｎ，Ｎ−ジアルキル−
４−アミノピリジン対ｓｎ−グリセロール−３−ホスフ
ェートの好適な比は１：１である。二種類の分析により
測定されたＮ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピリジニウ
ムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェート塩の純度が９
８％より高いことが好ましい。
【００１７】上記の分析で塩が好適な純度基準に合致し
ていないことが示された場合には、第二の精製工程を行
わなければならない。好適な方法は、結晶性塩をイソプ
ロピルアルコール中に再懸濁させそして懸濁液を激しく
一夜撹拌する方法である。イソプロピルアルコールの量
は厳密なものではないが、好ましい量は１ｇの塩当たり
約２０ｍｌであろう。長期間にわたり撹拌した後の懸濁
液の濾過により、二種類の上記分析工程を使用して再検
定した時に９８％より高い純度の物質が得られる。主要
不純物であるＮ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピリジニ
ウム塩酸塩はイソプロピルアルコール中に完全に可溶性
であるが、ｓｎ−グリセロール−３−ホスフェート塩は
微量しか可溶性でない。
ていないことが示された場合には、第二の精製工程を行
わなければならない。好適な方法は、結晶性塩をイソプ
ロピルアルコール中に再懸濁させそして懸濁液を激しく
一夜撹拌する方法である。イソプロピルアルコールの量
は厳密なものではないが、好ましい量は１ｇの塩当たり
約２０ｍｌであろう。長期間にわたり撹拌した後の懸濁
液の濾過により、二種類の上記分析工程を使用して再検
定した時に９８％より高い純度の物質が得られる。主要
不純物であるＮ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピリジニ
ウム塩酸塩はイソプロピルアルコール中に完全に可溶性
であるが、ｓｎ−グリセロール−３−ホスフェート塩は
微量しか可溶性でない。
【００１８】結晶性の無水Ｎ，Ｎ−ジアルキル−４−ア
ミノピリジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェー
トのアシル化は下記の如くして実施される。
ミノピリジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェー
トのアシル化は下記の如くして実施される。
【００１９】Ｎ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピリジニ
ウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェート塩を有機溶
媒中に溶解させ、そして塩基であるＮ，Ｎ−ジアルキル
−４−アミノピリジンおよび無水脂肪酸を溶液に加える
。使用される有機溶媒はジクロロメタン、クロロホルム
、または四塩化炭素であることができ、クロロホルムが
最も好適である。ｓｎ−グリセロール−３−ホスフェー
ト塩対塩基の比およびｓｎ−グリセロール−３−ホスフ
ェート塩対無水脂肪酸の比は決定的なものではないが、
好ましい比は１モル当量のｓｎ−グリセロール−３−ホ
スフェート塩対９モル当量のＮ，Ｎ−ジアルキル−４−
アミノピリジンおよび１モル当量のｓｎ−グリセロール
−３−ホスフェート塩対５モル当量の無水脂肪酸である
。
ウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェート塩を有機溶
媒中に溶解させ、そして塩基であるＮ，Ｎ−ジアルキル
−４−アミノピリジンおよび無水脂肪酸を溶液に加える
。使用される有機溶媒はジクロロメタン、クロロホルム
、または四塩化炭素であることができ、クロロホルムが
最も好適である。ｓｎ−グリセロール−３−ホスフェー
ト塩対塩基の比およびｓｎ−グリセロール−３−ホスフ
ェート塩対無水脂肪酸の比は決定的なものではないが、
好ましい比は１モル当量のｓｎ−グリセロール−３−ホ
スフェート塩対９モル当量のＮ，Ｎ−ジアルキル−４−
アミノピリジンおよび１モル当量のｓｎ−グリセロール
−３−ホスフェート塩対５モル当量の無水脂肪酸である
。
【００２０】反応時間も決定的なものではないが、約７
２時間の反応時間を使用することが好ましいと見いださ
れている。反応温度は室温（２５℃）から溶媒の還流温
度までで変えることができるが、それは決定的なもので
はない。無水ミリスチン酸（Ｃ＝１４）および無水パル
ミチン酸（Ｃ＝１６）を含有している反応に関しては好
適な反応温度は２５℃であるが、例えば無水ステアリン
酸（Ｃ＝１８）の如き比較的可溶性でない傾向のある長
鎖無水脂肪酸類に関しては好適な反応温度は無水脂肪酸
の溶解を助けるためには６０℃程度である。
２時間の反応時間を使用することが好ましいと見いださ
れている。反応温度は室温（２５℃）から溶媒の還流温
度までで変えることができるが、それは決定的なもので
はない。無水ミリスチン酸（Ｃ＝１４）および無水パル
ミチン酸（Ｃ＝１６）を含有している反応に関しては好
適な反応温度は２５℃であるが、例えば無水ステアリン
酸（Ｃ＝１８）の如き比較的可溶性でない傾向のある長
鎖無水脂肪酸類に関しては好適な反応温度は無水脂肪酸
の溶解を助けるためには６０℃程度である。
【００２１】反応は一般的にはメタノール：Ｈ２Ｏ混合
物を用いる急冷により、終結させることができる。メタ
ノール対水の比は１−１０部のメタノール対１部の水で
変えることができる。１部のメタノール対４部の水の比
を使用することが最も好適であるが、この比はアシル化
反応を急却するために決定的なものではない。生じたジ
アシルホスファチジン酸生成物は、１）残存ジメチルア
ミノピリジンを除去するための酸洗浄および２）脂肪酸
加水分解副生物を除去するためのクロマトグラフィーと
いう好適な順序により、反応混合物から精製することが
できる。加水分解された反応混合物の有機溶液を酸性の
水溶液、最も好適には１Ｎ ＨＣｌ、を用いて洗浄して
過剰の塩基を除去することが好適である。その後、生成
物であるホスファチジン酸および残存脂肪酸類を含有し
ている有機層を次に有利には例えばシリカゲルを使用す
るもの（グプタ他）の如き種々のクロマトグラフィー技
術により分別することができる。
物を用いる急冷により、終結させることができる。メタ
ノール対水の比は１−１０部のメタノール対１部の水で
変えることができる。１部のメタノール対４部の水の比
を使用することが最も好適であるが、この比はアシル化
反応を急却するために決定的なものではない。生じたジ
アシルホスファチジン酸生成物は、１）残存ジメチルア
ミノピリジンを除去するための酸洗浄および２）脂肪酸
加水分解副生物を除去するためのクロマトグラフィーと
いう好適な順序により、反応混合物から精製することが
できる。加水分解された反応混合物の有機溶液を酸性の
水溶液、最も好適には１Ｎ ＨＣｌ、を用いて洗浄して
過剰の塩基を除去することが好適である。その後、生成
物であるホスファチジン酸および残存脂肪酸類を含有し
ている有機層を次に有利には例えばシリカゲルを使用す
るもの（グプタ他）の如き種々のクロマトグラフィー技
術により分別することができる。
【００２２】単離された後に、ジアシルホスファチジン
酸を有機溶媒からの再結晶化によりさらに精製すること
ができ、ここで好適な溶媒はメタノールおよびエタノー
ルである。
酸を有機溶媒からの再結晶化によりさらに精製すること
ができ、ここで好適な溶媒はメタノールおよびエタノー
ルである。
【００２３】下記の実施例の詳細な研究により本発明は
さらに理解されるであろう。これらの実施例は説明用に
示されているものであり、本発明を限定しようとするも
のではない。
さらに理解されるであろう。これらの実施例は説明用に
示されているものであり、本発明を限定しようとするも
のではない。
【００２４】実施例１：Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−アミノ
ピリジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェート（
Ｇ−３−Ｐ（ＤＭＡＰ）１）の製造 ホワイトサイデス（Ｗｈｉｔｅｓｉｄｅｓ）他、ザ・ジ
ャーナル・オブ・ザ・アメリカン・ケミカル・ソサイエ
テイ（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）、１０７巻、７
０１９−７０２３（１９８５）に従いｓｎ−グリセロー
ルおよびＡＴＰから酵素的に製造されておりそして５０
０ｍｌのメタノール中に溶解されている１００ｇのｓｎ
−グリセロール−３−ホスフェートに、レイリー・ター
ル・カンパニーから得られた６６ｇのＮ，Ｎ−ジアルキ
ル−４−アミノピリジン（ＤＭＡＰ）を加えた。メタノ
ール性反応混合物を室温において、全てのＤＭＡＰが溶
液になるまで、激しく撹拌した。
ピリジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェート（
Ｇ−３−Ｐ（ＤＭＡＰ）１）の製造 ホワイトサイデス（Ｗｈｉｔｅｓｉｄｅｓ）他、ザ・ジ
ャーナル・オブ・ザ・アメリカン・ケミカル・ソサイエ
テイ（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）、１０７巻、７
０１９−７０２３（１９８５）に従いｓｎ−グリセロー
ルおよびＡＴＰから酵素的に製造されておりそして５０
０ｍｌのメタノール中に溶解されている１００ｇのｓｎ
−グリセロール−３−ホスフェートに、レイリー・ター
ル・カンパニーから得られた６６ｇのＮ，Ｎ−ジアルキ
ル−４−アミノピリジン（ＤＭＡＰ）を加えた。メタノ
ール性反応混合物を室温において、全てのＤＭＡＰが溶
液になるまで、激しく撹拌した。
【００２５】メタノールを真空中で除去して、重質油を
生成した。この油を１５０ｍｌのイソプロピルアルコー
ル中に溶解させ、そして１．５リットルのアセトンを溶
液に加えた。アセトンの添加で油状沈澱が生成した。沈
澱を１８時間にわたり激しく撹拌することにより溶液中
に分散させた。沈澱の濾過および真空乾燥により、微細
結晶性の灰白色固体が生成した（４４ｇ、６０モル％収
率）。
生成した。この油を１５０ｍｌのイソプロピルアルコー
ル中に溶解させ、そして１．５リットルのアセトンを溶
液に加えた。アセトンの添加で油状沈澱が生成した。沈
澱を１８時間にわたり激しく撹拌することにより溶液中
に分散させた。沈澱の濾過および真空乾燥により、微細
結晶性の灰白色固体が生成した（４４ｇ、６０モル％収
率）。
【００２６】このようにして製造された結晶性Ｇ−３−
Ｐ（ＤＭＡＰ）１を酵素検定により分析すると、８８重
量％のＧ−３−Ｐであることが見いだされた。１Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトルは、不純物質がＤＭＡＰ−ＨＣｌ塩であ
ることを示していた。不純物質を５００ｍｌのイソプロ
ピルアルコール中に再懸濁させそして室温で一夜撹拌し
た。懸濁された物質を一般的な紙濾過により集め、そし
て真空中で乾燥すると、Ｇ−３−Ｐ（ＤＭＡＰ）１（融
点１２８−１３０℃）が生成し、それは酵素検定により
判定すると１００％純度であった。１Ｈ−ＮＭＲにより
塩の構造を確認した：（Ｄ２Ｏ）ｐｐｍ ７．９（ｄ
）２Ｈ、６．８（ｄ）２Ｈ、３．８２（ｍ）および３．
６４（ｍ）５Ｈ、３．１（ｓ）６Ｈ。
Ｐ（ＤＭＡＰ）１を酵素検定により分析すると、８８重
量％のＧ−３−Ｐであることが見いだされた。１Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトルは、不純物質がＤＭＡＰ−ＨＣｌ塩であ
ることを示していた。不純物質を５００ｍｌのイソプロ
ピルアルコール中に再懸濁させそして室温で一夜撹拌し
た。懸濁された物質を一般的な紙濾過により集め、そし
て真空中で乾燥すると、Ｇ−３−Ｐ（ＤＭＡＰ）１（融
点１２８−１３０℃）が生成し、それは酵素検定により
判定すると１００％純度であった。１Ｈ−ＮＭＲにより
塩の構造を確認した：（Ｄ２Ｏ）ｐｐｍ ７．９（ｄ
）２Ｈ、６．８（ｄ）２Ｈ、３．８２（ｍ）および３．
６４（ｍ）５Ｈ、３．１（ｓ）６Ｈ。
【００２７】実施例２：Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−アミノ
ピリジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェート（
Ｇ−３−Ｐ（ＤＭＡＰ）１）のアシル化によるジパルミ
トイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）の製造この実施例
では、Ｇ−３−Ｐ（ＤＭＡＰ）１のアシル化は高温（６
０℃）において行われた。実施例１からのＧ−３−Ｐ（
ＤＭＡＰ）１（５ｇ、１５．２ミリモル）およびＤＭＡ
Ｐ（１６．７ｇ、１３７ミリモル）（レイリー・タール
・カンパニー）を１５０ｍｌの乾燥クロロホルム中に懸
濁させた。反応混合物を激しく撹拌しながら２時間にわ
たり加熱還流させた。この時点で、全ての反応物が溶液
状になった。次に反応混合物を室温において１８時間に
わたり撹拌した。次に等量のＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ（４：１
）の添加により反応混合物を加水分解した。生じた水相
を濃ＨＣｌの添加によりｐＨ１とした。
ピリジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェート（
Ｇ−３−Ｐ（ＤＭＡＰ）１）のアシル化によるジパルミ
トイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）の製造この実施例
では、Ｇ−３−Ｐ（ＤＭＡＰ）１のアシル化は高温（６
０℃）において行われた。実施例１からのＧ−３−Ｐ（
ＤＭＡＰ）１（５ｇ、１５．２ミリモル）およびＤＭＡ
Ｐ（１６．７ｇ、１３７ミリモル）（レイリー・タール
・カンパニー）を１５０ｍｌの乾燥クロロホルム中に懸
濁させた。反応混合物を激しく撹拌しながら２時間にわ
たり加熱還流させた。この時点で、全ての反応物が溶液
状になった。次に反応混合物を室温において１８時間に
わたり撹拌した。次に等量のＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ（４：１
）の添加により反応混合物を加水分解した。生じた水相
を濃ＨＣｌの添加によりｐＨ１とした。
【００２８】有機層を分離しそして等量のＭｅＯＨ：Ｈ
２Ｏ：ＣＨＣｌ３（４８：４７：３）で３回洗浄した。 有機層を集めそして真空中でそれの元の量の半分に減少
させた。この量は希望するジパルミトイルホスファチジ
ン酸および脂肪酸加水分解副生物を含有していた。その
ような副生物は有利にはグプタ他により記載されている
ようなシリカゲルクロマトグラフィー技術を使用して除
去することができる。次にジパルミトイルホスファチジ
ン酸を含有している留分類を理想的には一緒にし、そし
て次に真空中で濃縮してクロマトグラフィー溶媒を除去
した。生じた固体を次にアセトン沈澱またはメタノール
再結晶化によりさらに精製することができる。生じた生
成物の同定では、１５５−１５６℃の融点を有する約９
８％の化学的純度が生じたことが予測できた。このよう
にして製造されたジパルミトイルホスファチジン酸は理
想的には下記により同定されるであろう：Ｒｆ＝０．３
９、シリカゲル６０Ｆ２５４（メルク）、ＣＨＣｌ３−
ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ（６５：２５：４）；４００ＭＨＺ
′Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）ｐｐｍ ５．２（ｄ）１Ｈ、
４．３８（ｄ）１Ｈ、４．１６（ｄｄ）１Ｈ、３．９２
（ｍ）２Ｈ、２．２９（ｄｄ）４Ｈ、１．２０（ｍ）５
６Ｈ、０．８７（ｔ）６Ｈ。
２Ｏ：ＣＨＣｌ３（４８：４７：３）で３回洗浄した。 有機層を集めそして真空中でそれの元の量の半分に減少
させた。この量は希望するジパルミトイルホスファチジ
ン酸および脂肪酸加水分解副生物を含有していた。その
ような副生物は有利にはグプタ他により記載されている
ようなシリカゲルクロマトグラフィー技術を使用して除
去することができる。次にジパルミトイルホスファチジ
ン酸を含有している留分類を理想的には一緒にし、そし
て次に真空中で濃縮してクロマトグラフィー溶媒を除去
した。生じた固体を次にアセトン沈澱またはメタノール
再結晶化によりさらに精製することができる。生じた生
成物の同定では、１５５−１５６℃の融点を有する約９
８％の化学的純度が生じたことが予測できた。このよう
にして製造されたジパルミトイルホスファチジン酸は理
想的には下記により同定されるであろう：Ｒｆ＝０．３
９、シリカゲル６０Ｆ２５４（メルク）、ＣＨＣｌ３−
ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ（６５：２５：４）；４００ＭＨＺ
′Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）ｐｐｍ ５．２（ｄ）１Ｈ、
４．３８（ｄ）１Ｈ、４．１６（ｄｄ）１Ｈ、３．９２
（ｍ）２Ｈ、２．２９（ｄｄ）４Ｈ、１．２０（ｍ）５
６Ｈ、０．８７（ｔ）６Ｈ。
【００２９】前記の詳細な研究により、当技術の専門家
は本発明の物質、精神または範囲から逸脱しない限り反
応条件（例えば、緩衝液、温度、反応時間）に関して多
数の改変を行えることを容易に認識するであろう。
は本発明の物質、精神または範囲から逸脱しない限り反
応条件（例えば、緩衝液、温度、反応時間）に関して多
数の改変を行えることを容易に認識するであろう。
【図１】本発明の新規な合成物であるＮ，Ｎ−ジアルキ
ル−４−アミノピリジニウムｓｎ−グリセロール−３−
ホスフェートの構造を示す。
ル−４−アミノピリジニウムｓｎ−グリセロール−３−
ホスフェートの構造を示す。
Claims (13)
- 【請求項１】 ａ）遊離酸形のｓｎ−グリセロール−
３−ホスフェートまたはそれの同族体をＮ，Ｎ−ジアル
キル−４−アミノピリジンと反応させて塩溶液を製造し
、ｂ）工程ａ）の塩溶液から有機溶媒を用いる沈澱によ
りＮ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピリジニウムｓｎ−
グリセロール−３−ホスフェート塩を得て、そして任意
にｃ）あらかじめ決められた純度を得るために必要に応
じて工程ｂ）を繰り返す工程からなる、ｓｎ−グリセロ
ール−３−ホスフェートまたはそれの同族体から結晶性
Ｎ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピリジニウム塩類を製
造する方法。 - 【請求項２】 工程ａ）において反応するｓｎ−グリ
セロール−３−ホスフェートの該同族体が構造式【化１
】 ［式中、Ｘは−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＳＨ、−ＯＣＨ３、−
ＣＨ２ＯＨおよび−ＣＨ２ＣＨ３からなる群から選択さ
れる］を有する、請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 ｓｎ−グリセロール−３−ホスフェー
トを工程ａ）において反応させる、請求項１に記載の方
法。 - 【請求項４】 工程ａ）において反応するＮ，Ｎ−ジ
アルキル−４−アミノピリジンがＮ，Ｎ−ジメチル−４
−アミノピリジンである、請求項２に記載の方法。 - 【請求項５】 工程ａ）において反応するＮ，Ｎ−ジ
アルキル−４−アミノピリジンがＮ，Ｎ−ジメチル−４
−アミノピリジンである、請求項３に記載の方法。 - 【請求項６】 工程ａ）において反応するＮ，Ｎ−ジ
アルキル−４−アミノピリジンが構造式 【化２】 ［式中、Ｙは（ｉ） 【化３】 （ここでＲ１およびＲ２はそれぞれ炭素数が１−６の炭
化水素基を表す）であるか、または（ｉｉ）【化４】 （ここでｍは２−６）である］を有する、請求項２に記
載の方法。 - 【請求項７】 工程ａ）において反応するＮ，Ｎ−ジ
アルキル−４−アミノピリジンが構造式 【化５】 ［式中、Ｙは（ｉ） 【化６】 （ここでＲ１およびＲ２はそれぞれ炭素数が１−６の炭
化水素基を表す）であるか、または（ｉｉ）【化７】 （ここでｍは２−６）である］を有する、請求項３に記
載の方法。 - 【請求項８】 請求項２に記載の方法により製造され
たＮ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピリジニウム塩。 - 【請求項９】 請求項３に記載の方法により製造され
たＮ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピリジニウム塩。 - 【請求項１０】 ａ）下記式： 【化８】 ［式中、Ｘは−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＳＨ、−ＯＣＨ３、−
ＣＨ２ＯＨおよび−ＣＨ２ＣＨ３からなる群から選択さ
れ；そしてＹは（ｉ） 【化９】 （ここでＲ１およびＲ２はそれぞれ炭素数が１−６の炭
化水素基を表す）であるか、または（ｉｉ）【化１０】 （ここでｍは２−６）である；ｎは１または２である］
により表される化合物を、 ｂ）下記式 【化１１】 により表される無水脂肪酸と、 ｃ）Ｎ，Ｎ−ジアルキル−４−アミノピリジンからなる
塩基性触媒の存在下で、反応させる工程からなる、ホス
ファチジン酸類の製造方法。 - 【請求項１１】 Ｘが−ＯＨである、請求項１０に記
載の方法。 - 【請求項１２】 ｎが１である、請求項１１に記載の
方法。 - 【請求項１３】 Ｙが構造式（ｉ）でありそしてそこ
でＲ１が−ＣＨ３であり且つＲ２が−ＣＨ３である、請
求項１２に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/577,351 US5166351A (en) | 1989-08-18 | 1990-08-31 | Mono-N,N-dimethyl-4-aminopyridinium sn-glycerol-3-phosphate derivatives |
| US07/577351 | 1990-08-31 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04270295A true JPH04270295A (ja) | 1992-09-25 |
Family
ID=24308339
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3220303A Pending JPH04270295A (ja) | 1990-08-31 | 1991-08-30 | モノ−Ｎ、Ｎ−ジアルキル−４−アミノピリジニウムｓｎ−グリセロール−３−ホスフェートの製法及びホスファチジン酸類の調製におけるその使用 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5166351A (ja) |
| EP (1) | EP0473435B1 (ja) |
| JP (1) | JPH04270295A (ja) |
| AT (1) | ATE125258T1 (ja) |
| DE (1) | DE69111340T2 (ja) |
| DK (1) | DK0473435T3 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2012140330A (ja) * | 2010-12-28 | 2012-07-26 | Tosoh Corp | 水溶性リン酸エステルの精製方法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7299805B2 (en) * | 2002-06-07 | 2007-11-27 | Marctec, Llc | Scaffold and method for implanting cells |
-
1990
- 1990-08-31 US US07/577,351 patent/US5166351A/en not_active Expired - Fee Related
-
1991
- 1991-08-29 DK DK91307922.4T patent/DK0473435T3/da active
- 1991-08-29 AT AT91307922T patent/ATE125258T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-08-29 DE DE69111340T patent/DE69111340T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-08-29 EP EP91307922A patent/EP0473435B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-08-30 JP JP3220303A patent/JPH04270295A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2012140330A (ja) * | 2010-12-28 | 2012-07-26 | Tosoh Corp | 水溶性リン酸エステルの精製方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE69111340D1 (de) | 1995-08-24 |
| EP0473435A1 (en) | 1992-03-04 |
| ATE125258T1 (de) | 1995-08-15 |
| EP0473435B1 (en) | 1995-07-19 |
| DE69111340T2 (de) | 1996-01-18 |
| US5166351A (en) | 1992-11-24 |
| DK0473435T3 (da) | 1995-09-11 |
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