JPH04234325A - 脳および神経障害治療予防剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、サイモシンβ族ペプチ
ドまたはそれらのＮ末端１４個以上のアミノ酸残基のア
ミノ酸配列に相当する構造を分子内に含むサイモシンβ
族ペプチドのペプチド断片を有効成分とする脳・神経障
害治療・予防剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】周知のごとく、脳・神経系はヒトの様々
な生理・知的機能の制御・統括を行なっている。その一
つの構成単位である神経細胞は、他の細胞と性質を異に
し、幼児期にその分裂活動を終止する。このため一旦、
神経細胞の喪失に陥れば、生涯回復することはなく、様
々な障害を引き起す。但し、神経細胞は部分的に損傷を
受けた場合、修復・再生機能を有することが知られてい
る。

【０００３】神経細胞のこれら特徴に依存して、その生
存、神経回路網の維持、分化、発育、再生過程に神経栄
養因子と呼ばれる生体内生理活性物質が必要であると考
えられ、現在に至るまでいくつかの蛋白質またはペプチ
ドが、神経栄養作用を有することが明らかにされている
。

【０００４】神経栄養因子或いは神経栄養作用を有する
物質が神経障害時の治癒の促進、または神経退行性疾患
の進行防止および治療に有用であることは、多く研究者
が指摘するところである。一例を上げれば、各種の神経
疾患のモデルとなり得るラットなどの動物で神経成長因
子の効果が研究され、ラットでは神経細胞の変性が顕著
になる以前に神経成長因子を投与すれば、変性を阻止で
きることが報告されている。

【０００５】一方、サイモシンβ族ペプチドは、その研
究の頭初、胸線抽出物よりその単離・構造決定が成され
、免疫系の調節因子として注目されたが、その後、脳を
含む様々な組織中における存在が確認されるに至り、脳
・神経系におけるその生理的役割は不明であった。した
がって、本発明前、サイモシンβ族ペプチドの神経栄養
作用に関する報告はなく、これらを神経障害治療・予防
剤として用いることはなかった。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】従来これらの脳・神経
障害に対する適切な医薬は少なく現に使用されているも
のについてもその効果は極めて不満足なものであった。 特にアルツハイマー病或いはアルツハイマー型老年痴呆
は、近年の高齢人口の増加に伴い、患者数の増加が、将
来において予測されるにもかかわらず、これといった症
状の改善法・治療法は見つかっておらず、医学的のみな
らず社会的に重大な関心が払われている。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者等は、かかる観
点に基づき鋭意検討した結果、サイモシンβ族ペプチド
またはそれらのＮ末端１４アミノ酸残基のアミノ酸配列
に相当する構造をその分子内に含むサイモシンβ族ペプ
チドのペプチド断片に神経栄養作用があることを見い出
すに至り、本発明を完成した。

【０００８】本発明はサイモシンβ４，サイモシンβ８
，サイモシンβ９，サイモシンβ１０およびサイモンβ
１１より成るサイモシンβ族ペプチドおよび／または少
なくともそのＮ末端１４個のアミノ酸配列を含有するペ
プチドを有効成分とする脳および神経障害治療剤である
。特に脳・神経退行性疾患の進行防止または治療剤であ
る。

【０００９】サイモシンβ族ペプチドは、哺乳動物組織
より抽出・精製することができる（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ１
．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　　７９，１７０８（１９
８２），Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．
２２６，３８８（１９８３），Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２３３，８１５（１９８４）。本
発明で用いられるサイモシンβ４，サイモシンβ８，サ
イモシンβ９およびサイモシンβ１１のアミノ酸配列は
、ＦＥＢＳ　　Ｌｅｔｔｅｒｓ　　２１８，１０７（１
９８７）に記載されている。サイモシンβ１０のアミノ
酸配列はＡｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．
２２６，３８８（１９８３）に記載されている。尚、本
発明で用いられるサイモシンβ４，β８，β９，β１０
およびβ１１のアミノ酸配列は後記表の配列番号１〜５
で示される。さらにそれらのＮ末端１４アミノ酸残基の
アミノ酸配列に相当する構造を分子内に含むペプチド断
片はサイモシンβ族ペプチドのトリプシン処理または通
常の固相または液相法による化学合成により調製するこ
とが可能である。本発明に用いられるペプチドは、勿論
上記の調製法のみより得られたものではなく、応用可能
な他の方法に従って調製されたペプチドであってもよい
。

【００１０】本発明にいう脳・神経障害とは内的もしく
は外的の要因によって起る脳・神経系の障害をいい、即
ちまず内的要因による障害についていえば、脳梗塞・脳
出血・末梢血行障害等によって起る血管障害性の神経障
害、糖尿病等の種々の内科的疾患に伴う末梢性神経障害
、さらにはアルツハイマー病或いはアルツハイマー型老
年痴呆、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチ
ントン舞踏症等の原因不明の神経退行性疾患を上げるこ
とができる。また、外的要因による障害について言えば
、物理的外力による人体各部神経の挫傷、麻酔薬・抗ガ
ン剤の投与、飲酒過多による神経障害を上げることがで
きる。

【００１１】

【実施例】次にこれらペプチドの神経栄養作用を確認す
るために行なった実験の方法ならびにその結果を示す。 （Ｉ）薬理作用 下記の例は、本発明を例示するものであって、これを限
定するものではない。

【００１２】実験例１　　培養下中隔野神経細胞に対す
る神経栄養効果 畠中と津久井の方法（Ｄｅｖ．Ｂｒａｉｎ．Ｒｅｓ．３
０　　４７（１９８６）に準じて中隔野神経細胞の培養
を行なった。すなわち、１６日齢のラット胎仔脳より中
隔野を摘出し、細断した後トリプシン処理を行ない、さ
らに小細管内を出し入れする操作により組織を分散する
ことにより細胞懸濁液とした。これらの細胞をポリ−Ｌ
−リジンでコートした３５ｍｍプラスティック培養皿（
ベクトン・ベェッキントン社製）に６×１０４細胞／ｃ
ｍ２となるように均一にまき、ボッテンシュタイン（Ｂ
ｏｔｔｅｎｓｔｅｉｎ）とサトウ（Ｓａｔｏ）による完
全合成培養液（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．ＵＳＡ　　７６，５１４（１９７９））中で２４時間
培養し、細胞を培養皿表面に接着させた。

【００１３】その後、オジカ（Ｏｊｉｋａ）とアッペル
（Ａｐｐｅｌ）らの方法（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　　８１，２５６７（１９８４））
に準じて調製したラット海馬組織抽出液の分子量１万以
上の限外濾過成分５０μｌ（４ｍｇタンパク質／ｍｌ）
および生理的リン酸緩衝液（以下、ＰＢＳと省す）に被
験ペプチドを所定の濃度に溶解した溶液５０μｌを添加
、以後５日間培養した。なお、培養液、海馬抽出液、被
験ペフチド溶液は培養２日目および４日目に交換した。

【００１４】培養６日目の細胞をＰＢＳにより洗浄後、
風乾し、さらに４％ポラホルムアルデヒド溶液で固定し
た後、アセチルコリンエステラーゼ（以下、ＡＣｈＥと
省す）に対する染色をタゴ（Ｔａｇｏ）らの酵素組織化
学的方法（Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ
．３４，１４３１（１９８６））によって行なった。 本染色方法により、顕微鏡下において培養された神経細
胞上に紫色の反応生成物の顆粒上の沈着が認められる。

【００１５】ＡＣｈＥに対して染色された培養標本を蒸
留水３ｍｌで満し、その沈着面積を一定光源強度下にお
いて自動画像解析装置（ニコン社製、ルーゼックス３Ｕ
）を用いて測定した。測定された全視野（約５０ｍｍ２
）に対するＡＣｈＥ陽性面積の割合（パーセント）をそ
れぞれの培養検体に対して算出し、被験ペプチドを含ま
ない培養検体のＡＣｈＥ陽性面積の割合に対する倍率と
して表わした。測定値は独立した３回または４回の実験
からの平均±標準誤差として算定した。

【００１６】被験ペプチドとしてサイモシンβ４，サイ
モシンβ１０，サイモシンβ１０（１−１４）およびサ
イモシンβ１０（１−１６）を用いてＡＣｈＥ陽性面積
の増加倍率を測定した結果は図１の通りであって、サイ
モシンβ４（ａ）を用いた場合、３〜２５ｐｍｏｌ／ｍ
ｌの濃度で１．５〜１．７倍、サイモシンβ１０（ｂ）
を用いた場合０．８〜１２．５ｐｍｏｌ／ｍｌの濃度で
１．５〜２．０倍のＡＣｈＥ陽性面積の増加を示した。 またサイモシンβ１０（１−１４）（ｃ）およびサイモ
シンβ１０（１−１６）（ｄ）は、それぞれ１５ｐｍｏ
ｌ／ｍｌおよび２２ｐｍｏｌ／ｍｌの濃度で１．４倍の
その増加を示した。 （ＩＩ）毒性 本発明からなるサイモシンβ族ペプチドは、ヒトとその
他の哺乳類においてそのアミノ酸配列に種差が認められ
ない生体内ペプチドであり、たとえヒト以外の組織より
調製されたとしてもその純度が確保される限り、抗原性
・ガン原性等の問題はない。したがってそれらのペプチ
ド断片についても同様のことが言える。 （ＩＩＩ）投与方法および投与量 本発明からなるペプチドを脳・神経障害治療・予防剤と
して用いる場合には、薬剤として許容しうる担体と共に
含有してなる組成物として投与される。投与経路は、末
梢系神経障害に対しては、例えば静脈内注射、点滴によ
る静脈内注射、皮下注射、鼻腔内投与、口腔内投与、坐
剤による投与が好ましい。したがって本発明からなるペ
プチドの製剤学的配合物は、多種多様の溶媒または担体
を含む注射剤、スプレー剤、口腔内適用製剤、または坐
剤の形をとることが好ましい。またマイクロカプセル等
の局所に適用可能な持続的放出機構を持つ製剤であって
もよい。注射剤として使用する時は、例えば用時に於い
て注射用蒸留水等に溶解して使用されうる。さらにスプ
レー剤、口腔内適用製剤、坐剤、マイクロカプセル剤と
して使用する場合、一般に当該業者に周知の方法に従っ
て作られる。サイモシンは血液脳関門を通過しない。こ
のため中枢性障害に対しては、脊髄腔内投与、脳室内投
与又は脳内埋込み等の外科的手段による脳内投与を行う
。ただし、サイモシンの部分配列を含むフラグメントで
血液脳関門を通過するものは、全循環系への投与方法で
投与しうる。

【００１７】本発明からなるペプチドは比較的少量（ミ
リグラム以下程度の少量でさえも）が患者に投与する際
に用いられる。サイモシンβ族ペプチドの有効量は、数
〜数十ナログラムが標的神経組織に到達できるような程
度であるべきである。またそれらのＮ末端１４アミノ酸
残基のアミノ酸配列に相当する構造を有するペプチドの
場合、数十〜数百ナログラムが標的神経組織に到達でき
るような程度であるべきである。特許請求の範囲のその
他のペプチドはそれらの活性に応じ、数十〜数百ナログ
ラムが極的神経組織に到達できるように適宜投与量を設
定すべきである。したがって投与量は、患者の障害の部
位、障害の種類、症状、体重、投与経路等によって決定
されるべきであるが、６０ｋｇ患者に静脈内投与を行な
うことを想定した場合、一般に０．０１〜１ｍｇ／日で
ある。

【００１８】次に本発明の製剤の実施例を説明する。 実施例Ｉ（静脈内注射剤） （１）サイモシンβ１０　　　　１０ｍｇ（２）ブドウ
糖　　　　　　　　　　１１ｇ（３）生理食塩水　　　
　　　１００ｍｌ（３）に（１）と（２）を上記の重合
割合で加えて撹拌し、完全に溶解させる。この溶解液を
孔径０．４５μｍのメンブランフィルターを用いて濾過
した後、再び孔径０．２０μｍのメンブランフィルター
を用いて除菌濾過を行なう。濾過液を１０ｍｌずつ無菌
的にバイアルに分注し、窒素ガスを充填した後密封して
静脈内注射剤とする。

【配列表】 【図面の簡単な説明】

【図１】ラット胎仔脳の中隔野組織から調整された初代
分散培養中のＡＣｈＥ陽性神経細胞の発育に対するサイ
モシンβ族ペプチドまたはそれらのＮ末端１４アミノ酸
残基のアミノ酸配列を分子内に含むペプチドの効果を示
すグラフである。図１において値は平均±標準誤差を示
している。

【符号の説明】

ａ　　サイモシンβ４ 　　ｂ　　サイモシンβ１０ 　　ｃ　　サイモシンβ１０（１−１４）ｄ　　サイモ
シンβ１０（１−１６）

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　サイモシンβ４、サイモシンβ８、サ
   イモシンβ９、サイモシンβ１０およびサイモシンβ１
   １より成るサイモシンβ族ペプチドおよび／または少な
   くともそのＮ末端１４個のアミノ酸配列を含むペプチド
   を有効成分とする脳および神経障害治療剤。
2. 【請求項２】　　脳・神経退行性疾患の進行防止または
   治療剤である請求項１記載の脳および神経障害治療剤。