JPH04126073A - キラー細胞の誘導方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、癌などの治療に用いられるキラー細胞の製造
方法に関する。

（従来の技術） 活性化マクロファージやリンホカイン活性化キラー細胞
（ＬＡＮ細胞；　Ｓ、　Ａ、　Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇぼか
ザ・ニューイングランド・ジャーナル争オブ・メディシ
ン　３１６　８８９、（１９８７））なとの活性化され
た白血球は生体内で癌細胞、ウィルス感染細胞、病原菌
などの駆除に役立っている。

近年、生体から取り出した白血球をインターロイキン−
２と共に培養してＬＡＮ細胞を誘導して、再び、生体に
戻す癌治療法が試みられるようになったが、まだ、十分
な効果を出していない。大量の高価なインターロイキン
−２が必要であるという問題点がある。

また、ボークウィドマイトジェンなどのレクチンをメチ
ルメタアクリレート会ジビニルベンゼン共重合体ビーズ
に固定化したものでＬＡＮ細胞を誘導する方法も提案さ
れている（須賀原はか、人工臓器１８　　（３）　　１
４０１　（１９８９））が、これは化学構造が不明確で
、且つ、毒性の強い天然高分子を用いたものであるので
、それ等の使用時にこれ等リガンドの溶出が起る可能性
を否定できないという問題点がある。

また、ダラム陰性菌の細胞壁の構成成分であるリポ多糖
体を繊維状アミノ化ポリスチレンに固定化したものを体
外循環材料として用いて癌の治療をする方法も提案され
ている（特開昭５９−２１１４５）が、これは化学構造
゛が不明確で、且つ、毒性の強い天然高分子を用いたも
のであるので、それ等の使用時にこれ等リガンドの溶出
が起る可能性を否定できないという問題点があり、また
、使用方法として接触時間に限りがあるため、キラー細
胞の誘導が十分でないという問題点がある。

（発明が解決しようとする課題） 本発明者らは、かかる従来技術の問題点に鑑み、構造の
明確な低分子化合物を不溶性担体に共有結合で固定化し
、これを白血球と接触させることによってキラー細胞を
誘導したり、有用なサイト力イン等を産生させられない
か検討した結果、リボ多糖体の構成成分として知られて
いる３−デオキシ−〇−マンノー２−オクチュロソン酸
のリピッドＡグリコシドを固定化したものが単核球系細
胞にインターロイキン−１、インターロイキン−６、Ｔ
ＮＦ、Ｇ−Ｃ８ＦおよびＧＭ−Ｃ８Ｆ等を産生させ、ま
た、ラット牌細胞からキラー細胞を誘導できることを見
出だし、本発明に到達した。

（課題を解決するための手段）゛ 本発明は、以下の技術的手段から構成される。

体外に取り出したリンパ球を、不溶性担体の表面にアミ
ド結合で固定化した３−デオキンーＤ−マンノー２−オ
クチュロソン酸（以下ＫＤＯと略称する）のリピッドＡ
グリコシドに接触させながら、培養することを特徴とす
るキラー細胞の誘導方法。

本発明でいう不溶性担体とは、実質上不溶性で、第１級
または第２級アミノ基を有し、かつ、３−デオキシ−Ｄ
−マンノ−２−オクチュロソン酸のリピッドＡグリコシ
ド（以下ＫＤＯ−ＬＡグリコシドと略称する）をアミド
結合で固定することのできる担体を意味する。該不溶性
担体の形状はシャーレ、瓶、管、膜、繊維、中空糸、粒
状物またはこれ等を用いた組み立て品のいずれでもよい
が、とりわけ、これ等に光透過性があると細胞の観察が
容易にでき、細胞の管理がしやすいので好ましい。

本発明でいう不溶性担体の具体例をあげると、■スチレ
ンまたはα−メチルスチレンの単独重合体もしくはこれ
らを主成分とする芳香族ビニル系共重合体をシャーレ、
試験管、管、繊維、中空糸、フィルム、瓶、注射筒、カ
テーテルなどに成型したものの表面にアミノメチル基を
導入したもの、■スチレン／エチレン中ブチレンのＡＢ
Ａブロックコポリマの膜または中空糸にアミノメチル基
を導入したもの、■ポリプロピレン補強ポリスチレン繊
維の表面にアミノメチル基を導入したもの、■ポリスチ
レンまたはスチレン・ジビニルベンゼン共重合体ビーズ
に、アミノメチル基を芳香核置換基として導入したもの
、■アミノプロピル化ガラスピーズなどがあげられるが
、これ等に限定されるものではない。また、これらのな
かでも、■と■が光透過性が高く、且つ、取り扱いやす
いので、特に、好ましく用いられる。■は表面積が大き
い特徴があり、また、■は流動性が良いので、工学的に
取り扱いやすい特徴がある。

■の場合、成型品の厚みには特に制限はないが、実用に
耐える強度を維持するためには、通常、１００ミクロン
以上の厚みを持つものが好ましく用いられる。また、そ
の光透過性に関しては該成型品の底面または側面の反対
側に存在する物質の形を確認可能にするに十分な光透過
性を有することが望ましい。該成型品の光透過性は主と
して表面での散乱によって決まるので、表面が完全に平
滑でなければならない。該成型品の場合、５００〜７０
０ナノメーターの波長の光に対する吸光度が１以下であ
ることが必要である。この吸光度が小さいほど該成型品
の光透過性が良く、吸光度が０．１以下であればさらに
好ましい。

本発明血液細胞処理剤の製造は、不溶性担体をＫＤＯ−
ＬＡグリコシドとカルボジイミドの混合溶液に加えるか
、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルで代表される
ＫＤＯ−ＬＡグリコシドの活性エステルの溶液中に浸漬
することにより容易に達成される。ＫＤＯ−ＬＡグリコ
シドの不溶性担体への結合密度は、担体のポリマー層の
厚みが１μｍの厚みの場合、１０ｎｇ　〜１００μｇ／
ｃｊ、とりわけ、０．　１〜１０μｇ　／　ｃｔｌが好
ましい。

本発明で用いるＫＤＯ−ＬＡグリコシドはグラム陰性菌
細胞壁由来のリボ多糖体の構成成分として知られている
が、有機合成の手段でも得ることができる。通常、サル
モネラ・ミネソタＲｅ　５９５変成菌（ザ・ジャーナル
・オブ・バイオロジカル・ケミストリー２６０．５２７
１　（１９８５））あるいは大腸菌Ｄ３１ｍ４　ｆザ・
ジャーナル・オブφバイオロジカル・ケミストリー２６
３．１１９７１　（１９８８））から抽出して得られる
。ＫＤＯは不溶性担体との結合に必要なカルボキシル基
を持つ。ＫＤＯはモノマーのほかダイマーやトリマー等
の数量体の形で用いられる。ＫＤＯグリコシドのアグリ
コンであるリビッドＡはグルコサミンのダイサツカライ
ドで、１および４′　くらいに１〜２個のリン酸基、お
よび、２．３．２’　。

３′位エステルおよびアミド結合で２〜８個の長鎖脂肪
酸（炭素数１０〜１８）から成っている。

の長鎖カルボン酸部分には炭素数１０から１８の脂肪酸
が用いられる。

本発明におけるキラー細胞の誘導には、白血球をＫＤＯ
−ＬＡグリコシド固定化物と接触させて刺激した後、Ｋ
ＤＯ−ＬＡグリコシド固定化物の存在下、あるいは、不
存下で５〜１００時間、より好ましくは、２４〜７２時
間培養する方法が採用される。また、白血球の組成とし
ては、リンパ球の存在は必須であるほか、単核球の存在
が好ましい。

本発明における白血球の培養において、培養液には通常
の培養液、例えば、ＲＰＭｌ　１６４０などを用いるこ
とができる。この培養液にはさらに血清を５％以上加え
て用いることが望ましい。作用機構としては固定化ＫＤ
Ｏ−ＬＡグリコシドが、まず、マクロファージを活性化
してインターロイキン−１液性因子等を出させ、液性因
子がリンパ球を刺激してキラー細胞を誘導すると考えら
れる。

本発明の方法の利用としては癌の治〜療への利用があげ
られる。

（発明の効果） 本発明の方法は、■白血球を体外で培養する方法なので
体外循環に比較して血小板、血液凝固因子等の損傷を防
ぐことができること、■化学的に安定なアミド結合で固
定化されているので、溶出の心配がないこと、■インタ
ーロイキンー２を用いる必要がないこと等の利点を有す
る。

以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明する。

なお、実施例中の評価方法は、以下に従った。

１、芳香族ビニル系重合体成型品の化学的解析成型品を
塩化メチレンでソックスレー抽出すると不溶性の膜状物
が得られるので、これを真空乾燥し、重量を量り、赤外
線吸収スペクトル測定等を行った。

２６赤外線吸収スペクトル 高滓フーリエ変換赤外分光光度計ＦＴ　Ｉ　Ｒ−４３０
０を用いＫＢｒ錠剤法で測定した。

３、成型品の光透過性の測定 高滓分光光度計ＵＶ２１００を用い、５００ナノメータ
ーで板状成型品に垂直方向の吸光度を測定した。対照と
して同じ厚さのポリスチレン板状成型品の吸光度を測定
し、両者の差をＡ３００とした。従って、その値が小さ
いほど成型品の光透過性が高いことになる。

４、ＫＤＯ−ＬＡグリコシドの定量 溶液中のＫＤＯ−ＬＡグリコシドの定量はフェノール嗜
硫酸法によった。ビーズ中のＫＤＯ−ＬＡグリコシドの
固定化量は塩酸加水分解後、アミノ酸分析計にかけて、
グルコサミン量から求めた。

５、サイト力インの定量 ＧＭ−Ｃ８ＦＳＧ−Ｃ５Ｆ、インターロイキン−１はＭ
ＴＴ法（Ｔ、　Ｍｏｓｍａｎ、ジャーナル　オブザ　イ
ミュノロジカル　メソッズ　６５５５〜６３　（１９８
３））により分析した。

インターロイキン−６はインターロイキン−６依存性細
胞の増殖率により分析した。

ＴＮＦはＬ９２９をインジケーターセルとした殺細胞能
により定量した。

６、細胞障害性試験 クロミウム（Ｎａ２５１ＣｒＯ４、日本アイソトープ協
会）をリン酸緩衝生理食塩水（以下ＰＢＳと略称する）
で希釈し、１ｒｎＣｉ／ｍｌ　（３７ＭＢｑ／ｍｌ）の
ストック液を作った。１０％ウシ胎児血清（以下ＦＣ８
と略称する）添加ＲＰＭＩ−１６４０を培養液としてＹ
ＡＣ−１またはＭＲＭＴ−１細胞をＩ×１０７個／　ｍ
　１に調整し、標的細胞とした。実験は３重に行い、９
６大のマイクロプレートに標的細胞浮遊液１００μｍと
エフェクター細胞浮遊液１００μｍを分注した。エフェ
クター細胞／標的細胞数比（Ｅ／Ｔ比）５０：１．２５
：１とし、４時間の反応時間で放出した培養上清中のク
ロミウムをガンマ−カウンター（パラカード　オートガ
ンマ−５６５０）で測定した。最大放出量（ＭＲ）は、
エフェクター細胞の代わりにＩＮ−ＭＣＩを１００μｌ
、また、自然放出量としては、１０％ＦＣ８添加ＲＰＭ
Ｉ−１６４０を１００μｍ加えることにより求めた。

細胞障害活性は次の式で計算した。

細胞障害活性（％）−（（実験測定値）−３Ｒ）Ｘ１０
０／　（ＭＲ−８Ｒ） 実施例１ １−ニトロプロパン５００ｍ１と、硫酸２７２ｍ１の混
合溶液を０℃に冷却し、２０．４ｇのＮ−メチロール−
α−クロルアセトアミドを加え、０〜１０℃で溶解した
。

この溶液を１０℃に昇温したのち、φ３．５ｃｍＸ１．
２ｍｍＨのポリスチレン製培養皿（厚み１ｍｍ）に１１
ｍ１ずつ入れ、室温でｌｈｒ反応させた。反応液を捨て
、培養皿を零下２０℃のメタノールに浸し、さらにメタ
ノ−および水で洗った後、真空乾燥して、内部表面だけ
クロルアセトアミドメチル化された成型品Ａを得た。こ
の成型品のＡ３００は０．０５０であった。

上記で得た成型品Ａ１個を、塩化メチレンでソックスレ
ー抽出したところ、薄膜状の不溶物３．１ｍｇが得られ
た。培養皿の反応面の表面積は２１ｃｄであるので、反
応部の厚みは大体１．２μと考えられる。また、この不
溶物の赤外線吸収スペクトルでは、１６５９ｃｍ−１（
アミド−Ｉ）　、１５２９ｃｍ−１（アミド−■）およ
び３２９７ｃｒｎ−’（Ｎ−Ｈ）にアミド基の強い吸収
が認められたことからその構造を確認した。

上記で得た成型品Ａ４０個を、２０００ｍ１の１０％ジ
メチルアミノエタノールＯジメチルスルホキサイド溶液
中に浸し、室温で１８ｈｒ静置した後、２０００ｍ１の
１０％ジメチルアミノエタノール水溶液中、７０℃で２
ｈｒ加熱した。成型品を水洗後、乾燥して、アミノメチ
ル化成型品Ｂを得た。

この成型品のＡ、。０は０．０５であった。

上記本発明の成型品８１個を、塩化メチレンでソックス
レー抽出したところ、薄膜状の不溶物２．３ｍｇが得ら
れた。この不溶物の赤外線吸収スペクトルでは、成型品
Ａで認められた１６５９ａｍ−’（アミド−■）および
１５２９ｃｍ−’（アミド−■）の第一級アミド基の強
い吸収が完全に消失していたことからその構造を確認し
た。

上記本発明の成型品Ｂ１０個を５００ｍ１の水に浸し、
Ｎ／１００−塩酸でｐＨ５〜６に調整した後、成型品Ｂ
の内部に０．０２層ｇ／ｍｌのＫＤＯ−ＬＡグリコシド
（サルモネラやミネソタＲｅ５９５　Ｌ　Ｐ　Ｓ　：　
Ｌｉ５ｔ、　Ｂｌｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｌｅｓ、ＩＮＣ。

）水溶液４ｍｌと１−エチル−３−（３−ジメチルアミ
ノプロピル）カルボジイミド塩酸塩４■ｇを加え、室温
で４８ｈ　ｒ静置した。反応液を捨て、０．５％トリエ
チルアミン水溶液、および、水で洗浄して、ＫＤＯ−Ｌ
Ａグリコシド固定化成型品Ｃを得た。母液中のＫＤＯ−
ＬＡグリコシドの濃度から０．　０３４ｍｇ　（２，５
μｍ　／　ｃｊ　）固定化されたことが確認された。

実施例２゜ マウスマクロファージ株ＴＭＥ９　（小川恭喜ほか、日
本免疫学会総会・学術集会記録、１７５９９　（１９８
７））を３Ｘ１０−’Ｍの２−メルカプトエタノール、
５０Ｕ／ｍｌのペニシリン（万有社製）、５０μｇ　／
　ｍｌのストレプトマイシン（明治製菓社製）およびウ
シ胎児血清を１０％含むＲＰＭＩ　１６４０　（Ｇｉｂ
ｃｏ）に３Ｘ１０’個／ｍ１浮遊したものを、実施例１
で得られた成型品０２個（紫外線照射滅菌）、および、
ＫＤＯ−ＬＡグリコシドを固、定化していない成型品０
２個（紫外線照射滅菌）とに２ｍｌずつ入れ、インキュ
ベーター中（３７℃、５％Ｃ０２）で２０ｈｒ培養した
。

培養上清を取ってその中のサイトカインを凋べたところ
、ＫＤＯ−ＬＡグリコシドを固定化したものではＧＭ−
Ｃ５Ｆは６．４Ｕ／ｍｌ、Ｇ−Ｃ８Ｆは２１．ＩＵ／ｍ
ｌ、ＩＬ−１は１１．２Ｕ／ｍｌ。

ＴＮＦは６．５Ｕ／ｍｌといずれも高い活性が認められ
た。一方、ＫＤＯ−ＬＡグリコシドを固定化しなかった
ものではＧＭ−Ｃ８Ｆは１．６Ｕ１０１１以下、Ｇ−Ｃ
８Ｆは１．２Ｕ／ｍｌ以下、ＩＬ−１はＩＵ／ｍｌ以下
、ＴＮＦは２Ｕ／ｍｌ以下といずれも活性が認められ無
かった。　また、市販の培養用シャーレ（ＦＡＬＣＯＮ
　　１００８）を用い、ＫＤＯ−ＬＡグリコシドを６μ
ｇ／ｍｌを加えて、上記と同様に培養した系ではＧＭ−
Ｃ５Ｆは１゜３Ｕ／ｍｌ、Ｇ−Ｃ８Ｆは３．３Ｕ１０１
１以下、ＩＬ−１は４．８Ｕ／ｍｌ、ＴＮＦは１．ＯＵ
／ｍ１以下であった。

実施例３ 多孔性スチレン争ジビニルベンゼン共重合体ビーズ（ロ
ーム・アンド・ハース社アンバーライトＸＡＤ−２）を
メタノール及びクロロホルムで８ｈｒずつソックスレー
抽出した後、６０℃で真空乾燥した。このビーズ５５．
６ｇを１７０ｍ１の１−二トロブロバンに室温で２４ｈ
ｒ浸漬した。

硫酸２１９ｇと１−二トロブロバン５０ｍ１の混合溶液
に、０℃でＮ−メチロール−２−クロルアセトアミド３
３ｇをいれ、５〜１０℃で拡販して、均一溶液とし、上
記共重合体ビーズ・１−ニトロプロパン混合物に加えた
。これを室温で４８ｈｒ振とう後、ビーズをろ取した。

ガラスフィルター上で一２０℃のメタノール１１、氷水
２１゜およびメタノール２１で順次、洗浄し、真空乾燥
して、６３．６ｇ（重量増加率１４．５％）のクロルア
セトアミドメチル化ポリスチレンビーズ（成型品Ｄ）を
得た。

成型品Ｄ６０ｇを１１の６Ｎ−塩酸中１５ｈｒ還流加熱
した後、水洗して、アミノメチル化ポリスチレンビーズ
（成型品Ｅ）を得た。イオン交換容量は０．７３ｍｅｑ
／ｇ　（Ｏ）ｉ型）であツタ。

ＫＤＯ−ＬＡグリコシド（サルモネラ・ミネソタＲｅ　
５９５　Ｌ　Ｐ　Ｓ　：　Ｌｉ５ｔ、　Ｂｉｏｌｏｇｉ
ｃａｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、　ＩＮｃ、）　２
０　ｍ　ｇを９０ｍ１の水Ｇ：　’／　、：、　’７−
ジョンして溶かした溶液に、ｐＨ５，Ｏに調整したアミ
ノメチル化ポリスチレンビーズ１０１０ｍ１（４を加え
、３０分間振とうした。この溶液にＷＳＤ３７ｍｇを加
え、４８ｈ　ｒ振とうした。

この間、溶液のｐＨをＩＮ−塩酸とＩＮ−カセイソーダ
で４．５〜６．０に調整した。

ビーズを取り出し、カラムに詰めて、０．５％トリエチ
ルアミン水溶液１００ｍ１と水１１で洗浄して、ＫＤＯ
−ＬＡグリコシド固定化物（成型品Ｆ）を得た。反応母
液のＫＤＯ−ＬＡグリコシド濃度から１．５１ｍｇ固定
化されたことがわかった。また、ビーズのアミノ酸分析
を行なった結果、グルコサミン含有量からビーズ１ｍｇ
あたり０．５μｇのＬＰＳが固定化されていることがわ
かった。細胞評価には高圧蒸気滅菌して用いた。

実施例４ ＳＤラットより採取した牌細胞を１０％ＦＣ５添加ＲＰ
ＭＩ−１６４０培養液に浮遊し、　５Ｘ１０６個／ｍｌ
の濃度に調整した。この浮遊液１ｍｌに対し、５０μｌ
のビーズを加え、８００ｒｐｍで５分間遠心して稗細胞
を効果的にビーズと接触させた。さらに、５％炭酸ガス
培養器中３７℃で５５分間静置後、ピペッティングで牌
細胞をビーズより分離回収し、ＰＢＳで洗浄した。再び
、１０％ＦＣ３添加ＲＰＭＩ−１６４０培養液に浮遊し
、炭酸ガス培養器中（５％ＣＯ２，３７℃）で４８時間
培養した。さらに、比較として、リコンビナントＩ　Ｌ
−２（ＴＣＰ−３，式日薬品社製）を無処理の稗細胞浮
遊液に１単位／ｍｌ添加してＬＡＮ細胞を調整した。こ
れらの細胞をエフェクター細胞として用いた。

上記エフェクター細胞の細胞障害活性を調べた結果、表
１の結果が得られた。

表から、ＫＤＯ−ＬＡグリコシドが固定化されていない
成型品Ｅでは、キラー細胞の誘導能がないこと、および
、ＫＤＯ−ＬＡグリコシドが固定化されている本発明成
型品Ｆでは、Ｉ　Ｌ−２を用いた場合（ＬＡＮ細胞）よ
りも効果があることが分かる。なお、対照は牌細胞をビ
ーズと接触させずに培養のみした系を示す。また、ＹＡ
Ｃ−１細胞はＮＫ細胞感受性でＭＲＭＴ−１細胞はＮＫ
細胞非感受性である。

表１ Ａ（ＹＡＣ−１細胞に対して） 細胞障害活性（％） 活性化材料　　　　　　Ｅ／Ｔ比 ５０：１　　　２５：１ 対照　　　　　　　９．９４±３．８１　　６．５２±
０．７７成型品Ｅ　　　　　　１６．５１±０．８４　
１０．７３±１．５９本発明成型品Ｆ　　Ｂ５．３８±
２．５５　５２．５５±０．３０ＩＬ−２３３Ｊ９±１
゜９８　１９．８８±３．９３８　（ＭＲＭＴ−１細胞
に対して） 細胞障害活性（％） 活性化材料　　　　　　Ｅ／Ｔ比 ５０：１　　　２５：１ 対照　　　　　　　２．６６±０．１８　　１．０８±
１．４１成型品Ｅ　　　　　　６．４０±１．５４　　
１．３８±１．０５本発明成型品Ｆ　　２５．５６±２
．６３　２３．２８±１．１２ＩＬ−２１１，８３±４
．３９　　６．７３±３．２９実施例５ ＳＤラットより採取した牌細胞を１ｏ％ＦＣ５添加ＲＰ
ＭＩ−１６４０培養液に浮遊し、　５×１０６個／ｒｎ
ｌの濃度に調整した。この浮＃液１ｍｌに対し、５０μ
ｍの本発明成型品Ｆを加え、８００ｒｐｍで５分間遠心
して牌細胞を効果的にビーズと接触させた。さらに、５
％炭酸ガス培養器中３７℃で５５分間静置後、ピペッテ
ィングで牌細胞をビーズより分離回収し、ＰＢＳで洗浄
した。

再び、１０％ＦＣ５添加ＲＰＭＩ−１６４０培養液に浮
遊し、炭酸ガス培養器中（５％ｃｏ２．３７℃）で０．
２４．４８，７２．９６時間培養した後、細胞障害性を
調べ、表２の結果を得た。

表２ 表から培養時間４８時間で最大活性の出ることが分かる
。

実施例６ １　Ｘ　１０６個のＭＲＭＴ−１を０．５ｍｌのＲＰＭ
Ｉ−１６４０に浮遊し、ＳＤラット尾静脈内へ注入移植
して肺転移モデルを作製した。本発明成型品Ｆで接触刺
激し、４８時間培養したＳＤラット牌細胞２Ｘ１０’個
を０．５ｍｌのＲＰＭ　１−１６４０に浮遊し、注入移
植後、３日目、７日目、１０日目、の計３回尾静脈より
注入した。対照群としてＲＰＭＴ−１を０．５ｍｌ、ま
たは、無刺激培養牌細胞を同数側地静脈に注入した。肺
転移抑制効果の評価として生存日数、および、注入移植
後、２１日目に層殺し、Ｗｅｘｌｅｒ法により転移結節
数を求めた。肺転移増殖抑制率（ＩＲ）は次の式で計算
した。

ＩＲ−（ＣＮＴ−ＥＸＰ）ｘ１００／ＣＮＴＣＮＴ：対
照群の平均肺転移数 ＥＸＰ　：実験群の平均肺転移数 得られた結果を表３および表４に示す。

表３ 生存　　ラット数 注入移植後　日数 刺激群　　１０　１０　１０　１０　１０　９　９　９
無刺激群　９９９５４３１１ 対照群　　１０　１０　３　１　０　０　０　０表４ 転移　　　肺転移率　　　ＩＲ 結節数 刺激群　　０〜２　　２／１０（２０％）　　　９８．
１無刺激群　０〜２４　８／１０（８０％）　　　５４
．１対照群　　８〜４５　１０／１０（１００％）表か
ら対照群（無処置）では肺転移率が１００％で、４０日
までに全数死亡したのに対し、本発明成型品Ｆで誘導し
たキラー細胞で処置したラット（刺激群）では肺転移率
がわずか２０％で、８０日後も殆どが生き残ることが分
かる。本発明成型品Ｆで活性化しなかった牌細胞で処置
した場合（無刺激群）は肺転移率が８０％で、６０日で
１匹になった。

特に、 転移抑制に治療効果が小さい。

代 理 人

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 　体外に取り出した白血球を、不溶性担体の表面にアミ
   ド結合で固定化した３−デオキシ−Ｄ−マンノ−２−オ
   クチュロソン酸のリピッドＡグリコシドに接触させなが
   ら、培養することを特徴とするキラー細胞の誘導方法。