JPH04120460A

JPH04120460A - ビタミンｂ↓６の分析方法

Info

Publication number: JPH04120460A
Application number: JP2240004A
Authority: JP
Inventors: Takashi Obayashi; 大林　隆; Makiko Ozawa; 小澤　真樹子; Taichiro Kawase; 川瀬　太一郎
Original assignee: Tonen Corp
Current assignee: Tonen General Sekiyu KK
Priority date: 1990-09-12
Filing date: 1990-09-12
Publication date: 1992-04-21

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明は、充填剤として炭素系粒子を含む液体クロマト
グラフィーカラムを用いるビタミンＢ６の分析方法に関
する。

［従来の技術］ビタミンＢ、はピリドキシン、ピリドキサール、ピリド
キサミン等の数種類の化合物の総称であり、生理的に重
要な働きをするものである。ビタミンＢ６を分析するこ
とは、診断やビタミン製剤の製造、開発等において重要
である。

従来、ビタミンＢ６の分離、定量法としては、イオン交
換クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー及びバ
イオアッセイが行なわれている。イオン交換クロマトグ
ラフィーに用いられる充填剤としてはシリカ系のものと
有機ポリマー系のものがある。これらのうち、シリカ系
の充填剤は、使用可能ｐＨが２〜８と比較的狭く、これ
よりも酸性又はアルカリ側で使用するとシリカの湧出が
起き、従って、カラム性能が低下した際にもアルカリ洗
浄による再生を行なうことができない。

また、有機ポリマー系の充填剤は、耐圧性、耐熱性が悪
く、また、溶媒により膨潤する性質を有している。また
、薄層クロマトグラフィーは、感度が低（、分離があま
り良好ではない、また、バイオアッセイは細菌を用いる
ので、細菌の管理、１養等の手間がかかる。

［発明が解決しようとする問題点］従って、本発明の目的は、使用可能なｐＨ＠１広（、従
って、酸又はアルカリによる再生が可自であり、かつ、
耐圧性、耐熱性及び耐溶媒性に６れた充填剤を用い、ビ
タミンＢ６を高感度にか゛簡便に分析することができる
ビタミンＢ６の公事方法を提供することである。

［問題点を解決するための手段］本発明者らは、鋭意研究の結果、炭素果粒：を充填剤と
して含む液体クロマトグラフィーカラムを用いるとき、
分離能が高（ビタミンＢ６を１感度に分析でき、かつ、
該充填剤は使用可能なｐ域が広く、従って、酸又はアル
カリによる再生ｆ可能であり、かつ、耐圧性、耐熱性及
び耐溶媒中に優れていることを見出し本発明を完成した
。

すなわち、本発明は、炭素系粒子を充填剤遇して含む液
体クロマトグラフィーカラムを用いシことを特徴とする
ビタミンＢ６の分析方法を［する。

［発明の効果１本発明により充填剤として炭素系粒子を含む液体クロマ
トグラフィーによるビタミンＢ６の分析法が提供された
。本発明の分析法によると、ビタミンＢ６を高感度に分
析することができる。また、本発明の方法に用いる炭素
系粒子は、使用可能なｐｎ域が１−１４と広く、従って
、酸又はアルカリによる再生が可能であり、かつ、耐圧
性、耐熱性及び耐溶媒性に優れている。

［発明の詳細な説明］本発明の分析法は、充填剤として炭素系粒子を用いるこ
とを特徴とする。

本発明に用いる炭素系粒子の細孔容積指数（１０−５０
１／（１−５０１は好ましくは５０％以上、より好まし
くは６０％以上、最も好ましくは８０％以上である。こ
こで、細孔容積指数ｆｌＯ−５０＋　／　１１−５０１
とは、半径が１０ｎｍないし５０ｎｍの細孔の容積の和
と半径がｌｎｍないし５０口■の細孔の容積の和との比
を意味する。細孔容積指数＋１０−５０１／１１−５０
１が５０％未満であると液体クロマトグラフィーカラム
の充填剤として用いた場合のクロマトグラフィーの分離
能が低下する。

本発明に用いる炭素系粒子の総組孔容積は好ましくは０
，１５■Ｌ／ｇ以上、より好ましくは０゜ｍ１７ｇ以上
である。炭素系粒子の総組孔容積がｏ、１ｍｌ／ｇより
も少ないと、溶質を適度に保持することが困難になりク
ロマトグラフィー充填剤として用いた場合の分離能が低
下する。

本発明に用いる炭素系粒子の半径５０ｎ１以上の細孔の
容積は好ましくは０．１−１／ｇ以下、より好ましくは
０．０５　ｍｌ／ｇ以下である。半径５ｏｎｌ１以上の
細孔の容積が０．１ｍｌ／ｇを越えると粒子の強度が弱
（なり、高圧下で行なう高速液体クロマトグラフィーの
充填剤として用いると粒子が破壊されて再現性良くクロ
マトグラフィー分離を行なうことができなくなるおそれ
がある。

なお、以上述べた炭素系粒子中の細孔容積は以下のよう
にして測定されるものである。

測定は窒素ガス吸着法による。装置はＯＭＩＣＲＯＮ　
　ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ社製ＯＭＮ　Ｉ　５ＯＲＰ　　
３６０　　ａｎｄ　　１００型を用い、計算はＢＪＨ法
（Ｂａｒｒｅｔ　−Ｊｏｙｎｅｒ−Ｈａｌｅｎｄａ等に
より提出された方法）によった。

本発明の分析法に用いる炭素系粒子は、その炭素原子の
含有量が好ましくは９７重量％以上、より好ましくは９
９％以上である。炭素含有率が９７％未満であると炭素
以外の不純物であるＳ、０、Ｈ，Ｎ、メタル等が非特異
吸着点となり、分離能を低下させる。

また、本発明に用いる炭素系粒子の粒径は、特に限定さ
れないが、通常１μ園ないし３０ｇｍ程度がクロマトグ
ラフィーカラムの充填剤として好ましい。

本発明に用いる炭素系粒子は、以下のようにして製造す
ることができる。

先ず、平均分子量３００以上のピッチと、有機ポリマー
のモノマーと重合開始剤を含む混合物を懸濁重合反応さ
せ、生成したビーズを回収する。

ここで採用される有機ポリマーとしては実質的に球状の
網状ゲルを形成することができるものであればいずれの
有機ポリマーをも採用することができるが、好ましい有
機ポリマーの例としてポリジビニルベンゼン、ポリトリ
ビニルベンゼン等の芳香族ビニルポリマーやポリエチレ
ンジメタクリレートを挙げることができる。

また、用いられる原料ピッチの平均分子量は好ましくは
３００以上、より好ましくは４００以上である。平均分
子量が３００未満であると、上記した細孔分布特性を有
する粒子を形成することが困難になる。平均分子量はク
ロロホルムを溶媒として一般的な手法である蒸気圧平衡
法を用いて測定する。また、原料としては石油処理工程
中で得られるピッチ、石炭の乾留工程で得られるピッチ
、ナフタリン、ポリ塩化ビニル等から得られる合成ピッ
チを使用できる。

懸濁重合の条件は基本的に従来の合成樹脂製造の場合と
同様である。出発時における溶媒中の有機モノマーの濃
度は通常２ないし２０重量％、好ましくは４ないし１０
重量％であり、原料ピッチの濃度は通常２ないし２０重
量％であり、好ましくは４ないし１０重量％である。重
合開始剤としては従来と同様、例えばａ、α−アゾビス
イソブチロニトリル、過酸化ベンゾイル及び２．２−ア
ゾビス−（２，４−ジメチルバレロニトリル）等を用い
ることができる。好ましい溶媒は水である。また、従来
と同様、必要に応じてトルエン、キシレン、ベンゼン及
びベンゾニトリルのような有機溶媒を希釈剤として用い
ることができる。さらに、必要に応じ、例えばポリビニ
ルアルコール、メチルセルロースのような懸濁安定剤を
加えることもできる。

有機モノマー、ピッチ及び重合開始剤並びに必要に応じ
て希釈剤及び懸濁剤を溶媒中で撹拌して均一な懸濁物を
生ぜしめた後（２０℃以下で高速撹拌することが好まし
い）、通常５０℃ないし９０℃で４時間ないし１０時間
、好ましくは６０℃ないし８０℃で５時間ないし８時間
重合させるる。

上記操作により、有機モノマーが重合し、かつ架橋して
実質的に球状の有機ポリマーの網状ゲルが形成され、こ
の網状ゲルの中にピッチが包み込まれた粒子が得られる
のでこれを回収する０回収は、ろ過により行なうことが
できる。

次いで、このようにして得られたビーズを不融化する。

不融化はビーズを空気中で２５０℃ないし３８０℃程度
に数時間加熱することにより行なうことができる。

次いで、このようにして不融化したビーズを、１１００
℃以上の温度下で、通常、１１００℃ないし３０００℃
の温度下で、真空中又は、アルゴンや窒素等のような不
活性雰囲気下で焼成する。焼成温度が１１００℃未満で
あると、粒子の炭素含量が本発明で規定する９７重量％
に到達しないおそれがある。

上記のようにして得られた炭素系粒子は、従来のものと
同様の態様で液体クロマトグラフィーカラム、特に高速
液体クロマトグラフィーカラムの充填剤として用いてビ
タミンＢ６を分析することができる。

炭素系粒子はカラムに充填した後液体クロマトグラフィ
ー装置に接続し、高速液体クロマトグラフィーを行なう
。ビタミンＢ６を含む試料液をカラムにかけ、水に可溶
で極性を有する適当な展開温媒、例えばアセトニトリル
、メタノールのようなアルコール類、テトラヒドルフラ
ンのようなエーテル類、ジメチルスルホキシド等で展開
することにより、ビタミンＢ６を分離することができる
。

［実施例］・以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明する
。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものでは
ない。

Ｋ立見ユ平均分子量６００の減圧蒸留残渣油５体積％、ジビニル
ベンゼン５体積％、ポリビニルアルコール１重量％、ア
ゾビスイソブチロニトリル０．２５重量％、トルエン５
体積％及びイオン交換水（残部）からなる混合物を２０
℃以下の温度下でラボラトリ−デイパーザ−を用いて高
速撹拌した。次いで該混合物を撹拌しながら８０℃に６
時間加熱した。次いで生成したビーズをろ過により回収
し、１００℃で乾燥させた。次いでビーズを３５０℃で
３時間空気中で加熱して不融化した。

これを窒素ガス雰囲気下、２５００℃で焼成した。焼成
後、ベンゼン中で超音波処理し、メタノール／エーテル
で洗浄し、１００℃で乾燥し、分級し、炭素系粒子を得
た。

得られた粒子の元素分析結果は、炭素ｌＯＯ％であり、
水素、酸素、窒素及びイオウは検出されなかった。また
、総組孔容積は０．４４４２■ｌ／ｇであり、細孔半径
が１〜１０ｎｍの細孔の容積が０．０７６８　ｍ１７ｇ
　％１０〜５０　ｎｍの細孔の容積が０．３５６９　ｍ
１７ｇ　、５０　ｎｍ以上の細孔の容積が０．０１０５
　ｍ１７ｇであり、従って、細孔容積指数ｆ１０−５０
１／＋１−５０１は８２．３％であった。

得られた炭素系粒子を内径４．６ｍｍ　、長さ１０口ｍ
ｍのステンレススチール製カラムに平衡スラリー法で充
填し、充填カラムを作製した。

本カラムを高速液体クロマトグラフに接続し、ピリドキ
サミン（ＰＡＭ）、ピリドキサミン５°−リン酸、ピリ
ドキシン、ピリドキサール、ピリドキシン５゛　−リン
酸及びピリドキサミン５°−リン酸を含む標ｒＰ−混合
物を、アセトニトリルを展開媒体として、０容量％（０
，１容量％のＴＦＡを含む）から１０容量％（０，１容
量％のＴＦＡを含む）の直線濃度勾配、１　ｍｌ／ｍｉ
ｎの流速で３５分間溶出させ、ＵＶ２７５ｎｍで検出し
クロマトグラムを得た。その結果を図１に示す。

図１から明らかなように本発明の分析法を用いると６つ
の試料成分が明確に分離されている。

また、保持時間も短（、ビタミンＢ６の検出が迅速に行
なえることが分かる。

【図面の簡単な説明】

図１は、本発明の分析法によるビタミンＢ６の高速液体
クロマトグラフィーの結果を示すクロマトグラムである
。手糸売ネ由上書（方式）％式％事件の表示平成２年特許願第２４０００４号発明の名称ビタミンＢ６の分析方法補正をする者復代理人（１＋明細書の発明の名称を「ビタミンＢ６の分析方法」に訂
正する

Claims

【特許請求の範囲】

（１）炭素系粒子を充填剤として含む液体クロマトグラ
フィーカラムを用いることを特徴とするビタミンＢ＿６
の分析方法。
（２）炭素系粒子の細孔容積指数（１０−５０）／（１
−５０）が５０％以上、総細孔容積が０．１５ｍｌ／ｇ
以上、半径５０ｎｍ以上の細孔の容積が０．１ｍｌ／ｇ
以下であり、炭素の含量が９７重量％以上であることを
特徴とする請求項１記載のビタミンＢ＿６の分析方法。
（３）細孔容積指数（１０−５０）／（１−５０）が８
０％以上であることを特徴とする請求項２記載のビタミ
ンＢ＿６の分析方法。