JPH04110663A - 尿中銅イオン検出用試薬組成物及び検出要素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野コ 先天性代謝異常疾患であるウィルソン症は、臓器特に肝
臓や脳に銅が過剰に沈着し、その障害を招来する重大な
疾患である。本疾患では尿中銅量が増加し、これをスク
リーニング検査等で早期に発見して銅キレート剤のＤ−
ペニシラミン等の投与により治療が可能である。本発明
は尿中銅イオンの存在を多数の検体について短時間に簡
便な操作で検出できる試薬組成物及びその試薬組成物を
含む乾式の検出要素に関する。

［従来の技術］ 生体成分中の銅イオンの測定には原子吸光法が用いられ
るが、この測定法は感度は高いものの、特別な測定機を
必要とし、その操作が煩雑であり多数の検体を短時間内
に処理するスクリーニングには適していない。

銅の比色定量にはバンクプロインがよく知られているが
、測定感度が低い。最近いくつかの高感度比色試薬が開
発されている。尿中銅イオンの比色定量試薬としてｒＪ
、　Ｃ１１ｎ、　Ｃｈｅｍ、　ＣＩ　ｉｎ、　Ｂｉｏｃ
ｈｅｍＪ１９巻５４１頁（１９８１年）には６−メチル
ピコリン酸チオアミドが記載されているが、測定に際し
て溶媒抽出後分光光度計を用いて測定する必要があるの
で、スクリーニング検査には適していない。特開昭６ｌ
−８７Ｈ４には、３５−ジブロモピリジルアゾ−Ｎ、Ｉ
ｔ−ジアルキルアニリン銹導体が銅の定量分析用試薬と
して開示されている。ｒｃｌｉｎ、ｃｈｅｍ、Ｊ３５巻
（４号）５２２頁（１９８９年）にはこの化合物を用い
る血清中の銅イオンの比色定量法が記載されている。し
かし、尿に関しては述べられていないし、また、測定に
分光光度計が必要である。「臨床化学」８巻２６６頁（
１９７９年）には吸光係数の極めて高い水溶性ポルフィ
ンを用いた血清銅の微量比色定量法が記載されているが
、この化合物を用いる方法は除蛋白を必要とするため、
多数の検体のスクリーニングに適した分析法ではない。

尿中の銅イオンスクリーニングには簡単な操作で発色し
、その色変化を目視で確実に判定できるような簡便なも
のが望まれている。

しかし、このようなスクリーニングに適した検出用試薬
組成物あるいは検出要素（試験片）はこれまで開発され
ていない。

検出感度に最も寄与度の大きいのは発色剤の吸光係数で
あり、銅イオンと反応して最も大きな吸光係数をもつも
のとして、ポルフィン化合物があるが、除蛋白操作を要
する点てスクリーニングテストには適当ではない。４−
（３，Ｓ−ジブロモ−２−ピリジルアゾ）−Ｎ、　Ｎ−
ジエチルアニリン銹導体はｒｃｌｉｎＣｈｅｍ、ｊ　３
５巻５２２頁（１９８９年）に述べられているごとく、
ポルフィンに次いで銅イオンと結合したときの吸光係数
が高い。

血清中の銅イオンの検出でアスコルビン酸を用いること
は　ｒｃｌｉｎ、　Ｃｈｅｍ、　Ｊ３５巻５２２頁（１
９１１９年）に記載されているが、尿検体ではフリーの
アスコルビン酸が存在して、ｐｌ（が低い場合、生成し
た色素の退色が極めて早く、３０分前後で判別困難とな
る。

多数の検体を検査するスクリーニング検査では反応させ
てから判定までに時間がかかる場合があってフリーの７
スコルビン酸を低いｐ＋＋で用いることはできない。

検体が血清の場合、陰イオン性界面活性剤は発色濃度を
高めるために極めて重要であることがｒＡｎａｌ、　Ｃ
ｈｉｍ＾ｃｔａＪ　１７６巻４１頁＜１９８５年）に記
載されている。

本発明者らは尿中銅イオンのスクリーニングに適した検
出用試薬組成物及び検出要素として、発色試薬の色変化
のみで、尿中銅イオンの有無或いは半定量ができる試薬
組成物及び検出要素を開発すべく、試薬を構成する成分
の組み合せを検討した結果、本発明をなすに至った。

［発明が解決しようとする課題］ 本発明の目的は、尿中成分をスクリーニング検査するに
適した、操作が簡便で、微量の銅イオン濃度を色変化に
より目視などで即時に確実に判定又は半定量できる試薬
組成物及びその試薬組成物を含む乾式の検出要素を提供
することにある。

［課題を解決するための手段］ 前記の課題は、尿中銅イオンの検出を色変化により判定
するに適する試薬組成物の成分として、４−（３，５−
ジブロモ−２−ピリジルアゾ）−Ｎ、　Ｎヘジエチルア
ニリン誘４体、アスコルビン酸塩、界面活性剤、及び、
使用時にｐｕを４．５から７．５の範囲とするｐＨ調節
剤又はｐｌ！緩衝剤を含む尿中銅イオン検出用試薬組成
物及びその試薬組成物を含む乾式の検出要素により解決
された。

［課題を解決するための手段の詳細な説明］銅イオンと
結合して発色する化合物（発色剤）である４−＜３．５
−ジブロモ−２−ピリジルアゾ）−Ｎ　Ｎ−ジュー１−
ＪＬフアニリン誘導体として、４−（３５−ジブロモ−
２ピリジルアゾ）−Ｎ、Ｎ−ジェチルアニリ：／　（Ｃ
ｈｅｍｉｃａｌＡｂｓｔｒａｃｔｓ登録番号（ＣＡＳＲ
Ｎと略記）１００７４３−６６−６）、４−＜３．５−
ジブロモ−２−ピリジルアゾ）−Ｎ−エチル−Ｎ−スル
ホブロビルアニリ：／　（ＣＡＳＲＮ１００７４３−６
５−５）がある。

フリーのアスコルビン酸にアルカリを加えたりアスコル
ビン酸ナトリウムのようなアスコルビン酸塩を用い、ｐ
Ｈを４．５から７．５の範囲とすることにより、銅イオ
ンと発色剤とが結合による発色の逮色を実質的に排除す
ることができる（退色に至る時間を大幅に伸ばすことが
できる）ことを見出した。この場合には、１２時間後で
も判別が可能である。フリーのアスコルビン酸に加える
アルカリとしては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム
などが一般的である。アスコルビン酸塩としては、ナト
リウム、カリウム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マ
グネシウム等のアルカリ土類金属塩を用いることができ
る。

ｐＨの調整は酸性の場合は水酸化ナトリウムのようなア
ルカリ剤で、アルカリ性の場合は酢酸、燐酸酸、拘擺酸
などの酸剤で、使用時のｐｌ＋を４．５がら７５の範囲
とする。ｐＨが４．５未満の酸性側では前記発色剤と銅
イオンの結合により生成した色素の色が消失する。ｐｉ
（７，５を越えるアルカリ性側では、尿検体の場合前記
発色剤と銅との結合により生成した色素の色安定性が悪
い。ｐＨ緩衝剤を用いてｐ）ｌを４，５から７，５の範
囲とすることもできる。ｐＨ緩衝剤としては酢酸、燐酸
、琥珀酸、拘湘酸、フタル酸Ｇ　ｏｏｄの緩衝剤（ｒＢ
ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＪ　５巻（２号）、４６７−４
７７頁＜１９６６年）、ｒＡｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＪ１０４＠３０（１−３１０頁（
１９８０年）に記載）のうちのＭＥＳ、　Ｂ１５−Ｔｒ
ｉｓ、　ＡＤＡ、ＰＩＰＥＳ、　ＡＣＥＳ、ＭＯＰＳＯ
，ＢＥＳなどを用いることができる。

尿検体でも陰イオン性界面活性剤は発色濃度を高めるの
に有効であるが、さらに非イオン性界面活性剤が発色濃
度を高めるのに極めて有効であることを見出した。用い
られる陰イオン生界面活性剤として、アルキル硫酸エス
テル塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸エス
テル塩、ポリオ牛ジエチレンフェニルエーテル硫酸エス
テル塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、アルカンスル
ホン酸塩等がある。代表的なものとして、ドデシル硫酸
ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、
ポリオ牛／エチレンアルキルフェニルエーテル硫酸エス
テルナトリウム等がある。非イオン性界面活性剤として
はソルビタン脂肪酸エステル、ペンタエリスリトール脂
肪酸部分エステル、プロピレングリコールモノ脂肪酸エ
ステル、グリセリン脂肪酸モノエステル、ポリオキシエ
チレンアルキルエーテル、ポリオキンエチレンアルキル
フェニルエーテル、ボッオキシエチレンポリオキ／プロ
ピレングリコール、ポリオキシエチレン脂肪酸部分エス
テル、ポリオキシエチレンソルビト−ル脂肪酸部分エス
テル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、脂肪酸ンエ
タノールアミド、脂肪酸モノエタノールアミド、ポリオ
キシエチレン脂肪酸アミドなどを用いることができる。

好ましい非イオン性界面活性剤の具体例として、ポリオ
キシエチレンオクチルフェニルエーテル（Ｔｒｉｔｏｎ
　Ｘ−１００など）、ｐ−ノニルフェノキンポリグリシ
ドールなどがある。

本発明の試薬組成物は水溶液の形にして、多数並べた試
験管列或いはマイクロプレートの穴に分注される。これ
ら試験液群に被験尿検体を）叫次分注することにより、
各試験液の色が赤色から紫色に変色することにより銅イ
オン存在の有無を検出することができる。標準液の呈色
或いは標準色票との比較により半定量が可能である。ま
た、マイクロプレートを用いた場合、マイクロプレート
各式の反応液の着色をその吸収スペクトルの５７５ｎｍ
付近の吸収極大波長の光によりマイクロリーダーで読よ
みとることにより、吸光度分析を行うことも可能である
。

本発明の１態様として、本発明の試薬組成物を含有する
吸水性多孔性材料からなる銅イオン検出要素がある。吸
水性多孔性材料としては濾紙、硫酸紙、不織布、ミクロ
フィルター等を用いることができる。用いる材料の厚さ
は約０．３＋ｖｍから約２ｍｍ、好ましくは約０．５＋
ｎｎ＋から約１．２）の範囲である。厚さが薄い場合、
検体の吸い込み量が少ないため１、反応による色変化が
小さく、目視による判定が困難となる。一方、厚すぎる
場合、検体の吸い込みにむらを生じ易く、判定を誤る恐
れがある。

試薬組成物を吸水性多孔性材料へ含有させる方法として
は、試薬組成物の溶液に吸水性多孔性材料を浸漬し乾燥
することにより行うことができる。

また、多孔性材料作成段階で試薬組成物を含有すル４ｆ
ｌ成液とし、これを用いて多孔性材料を作成することに
より行うことがてきる。具体的には、濾紙作成段階で、
抄紙液に試薬組成物を溶かし込み、抄紙することにより
作成することがてきる。

本発明の別の１態様として、水不透過性支持体の上に親
水性の天然高分子あるいは合成高分子の水溶液を塗布し
吸水層を作成し、その上に多孔性材料層を積層した一体
型多層分析要素で、多孔性層に銅イオン検出試薬組成物
を含有させた尿中銅イオン検出用一体型多層要素がある
。

水不透過性支持体としてはポリエチレンテレフタレート
、セルロースエステル（セルロースジアセテート、セル
ローストリアセテート、七ロースアセテートプロピオネ
ートなど）、ポリカルボネート、ポリスチレン、ポリメ
チルメタアクリレートなどの透明な有機ポリマーフィル
ムを用いることができる。白色不透明の支持体を用いる
こともできる。この場合、二酸化チタン微粒子などを上
記有機ポリマーフィルム作成時に分散含有させて作成す
ることができる。

吸水層は水を吸収して膨潤する親水性ポリマーを主成分
とする石である。用いることができる親水性ポリマーと
しては、ゼラチン、ゼラチン誘導体、アガロース、プル
ラン、プルラン誘導体、ポリアクリルアミド、ポリビニ
ルアルコール、ポリビニルピロリドン等がある。吸水層
の乾燥時の被覆量は、約３ｇ／ｍから約１００ｇ／ｍ、
好ましくは約５ｇ／ｄから約３０ｇ／ｎ？の範囲である
。

多孔性材料層には非繊維質多孔性材料、繊維質多孔性材
料が用いられる。非繊維質多孔性材料としては、メンブ
ランフィルタ−１不織布等が用いられる。繊維質多孔性
材料としては、濾紙、織物布地、編物布地等が用いられ
る。

尿中銅イオン検出試薬組成物の試薬成分は次の濃度範囲
にあることが好ましい。

（１）発色剤 ４〜（３，５−ジブロモ−２−ピリジルアゾ）−Ｎ、　
Ｎ−ジアルキ゛ルアニリン誘導体は溶液１ｍｌ、中に４
０ナノモルから１４０ナノモルの範囲、 ４−（３，５−ジブロモ−２−ピリジルアゾ）−Ｎ−エ
チル−Ｎ−スルホプロピルアニリンの場合、　溶液１ｍ
Ｌ中に２０Ｂｇから７０Ｂｇの範囲、 これより少ない濃度では、銅イオン結合による色変化が
少な（目視判定が困難となる。この範囲を越える濃度で
は、発色剤そのものの着色濃度が高く、微量の銅イオン
結合による色変化が判りにくく、目視判定が困難となる
。

（２）アスコルビン酸塩は用時溶解し、溶液１ｎ＋Ｌ中
にｏ、ｏｏｓミリモルから０．２５ミリモルの範囲を含
有することが好マしい。アスコルビン酸ナトリウムを用
いる場合、溶液１社中に１＋ｌＩｇから５０Ｉｌ１ｇの
範囲を含有することが好ましい。

アスコルビン酸の濃度が低い場合、発色剤に銅イオンが
結合して生成した色の安定性が低く、短時間内に退色す
る。濃度の上限は特にないが、溶解性から限られる。

（３）　ｐＩ（調節剤又はｐＨ緩衝剤 ｐＨ調節剤又はｐＨ緩衝剤は、溶液１ｍＬ中に０．０４
ミｌ［から０．８ミｌＩモルの範囲を含有することが好
ましい。

この濃度以下では生成した色の安定性が悪い。濃度の上
限は特にないが、高い場合溶解時間がかかるので自ずか
ら限界がある。

（４）界面活性剤は溶液１ｍＬ中に０．０ＮＩＪモルか
らｏ、ｔｏｓリモルの範囲、 ドデシルスルホン酸ナトリウムの場合、溶液１−Ｌ中に
３ｍｇから６０Ｂの範囲 界面活性剤濃度が低い場合発色剤への銅イオン結合によ
る色変化が少ない。濃度の上限は特にないが、溶液を保
存中に内容物が析出しない範囲に限られる。

これらの試薬成分の相互の量比はつぎのとおりである。

４−（３，５−ジブロモ−２−ピリジルアゾ）−Ｎ、　
Ｎ−ジアルキルアニリンｌＩ導体１に対しモル比で、ア
スコルビン酸塩は０．０５Ｘ　１０３から６Ｘ　１０３
の範囲、界面活性剤は０．ｌＸ１０’から２．５Ｘ１０
’の範囲、ｐ）ｌ調節剤又はｐ）Ｉ緩衝剤を用いる場合
は０．３Ｘ１０３から２０ｘ　１０３の範囲である。

本発明の検出用試薬組成物を吸水性多孔性材料、又は一
体型多層要素に含有せしめる場合、１ｒｒｒ当り４−（
３，５−ジブロモ−２−ピリジルアゾ）−Ｎ、Ｎ−ジア
ルキルアニ　リ　ン誘導体は　２５マイクロモルから１
８０マイクロモルの範囲が好ましい。この量より少ない
場合、銅イオンの結合による色変化が少なく目視による
判定は困難となり、多い場合は発色剤自身の着色濃度が
高（銅イオン結合による色変化を目視によっては判定し
にくくなる。アスコルビン酸塩は３ミリモルから１８０
ミリモルの範囲、　界面活性剤は５ミリモルか　ら２５
ミリモルの範囲、ｐＨｇ節剤又はｐｉ（緩衝剤を用いる
場合は２４ミリモルから３００ミリそルの範囲を含有す
ることが好ましい。

これらの試薬成分の相互の量比は、発色剤１に対しモル
比で、それぞれ、界面活性剤は０．ｌＸ１０３からｌＸ
ＩＯ３の範囲、アスコルビン酸塩は０．０５Ｘ　１０３
から６Ｘ１０３の範囲、ｐＨ調節剤又はｐＩ（緩衝剤を
用いる場合０．３Ｘ　１０３から１２Ｘ　１０３の範囲
内である。

吸水性多孔性材料に本発明の検出試薬組成物を含有せし
める１例として、酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液にドデシ
ル硫酸ナトリウム及びアスコルビン酸ナトリウムを溶解
し、濾紙１５ｃ’当たりこの液１ｍＬの割合で含浸せし
め、乾燥した後、４−（３，５−ジブロモ−２−ピリジ
ルアゾ）−Ｎ、Ｎ−ジアルキルアニリンのメタノール溶
液に含浸乾燥して作成することができる。また、酢酸−
酢酸ナトリウム緩衝液に水溶性の４−（３，５−ジブロ
モ−２−ピリジルアゾ）−Ｎエチル−Ｎ−スルホプロピ
ルアニリン及び　ドデシル硫酸ナトリウム及びアスコル
ビン酸ナトリウムを溶解し、濾紙１５ｃｍ２当たりこの
液１ｍＬの割合で含浸せしめ乾燥して作成することがで
きる。

一体型多層要素に本発明の検出試薬組成物を含有せしめ
る１例として、二酸化チタン微粒子を分散した白色セル
ローストリアセテートフィルム（支持体）にゼラチン水
溶液に酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液にドデシル硫酸ナト
リウム及びアスコルビン酸ナトリウムを溶解した液を混
合した液を塗布乾燥し、その上にトリコツＩＪｉ敷地を
ラミネートし、その上に４−（３，５−ジブロモ−２−
ピリジルアゾ）Ｎ、Ｎ−ジアルキルアニリンのメタノー
ル溶液を塗布乾燥し作成することができる。吸水層の乾
燥時の被覆量は、約３ｇ／ｍから約１００ｇ／ｍ′、好
ましくは約５ｇ／ｒｒｒから約３０ｇ／ｎ（の範囲で、
厚さは約３μｍから約１００μｍの範囲、好ましくは約
５μｍから約３０μｍの範囲である。

［発明の効果］ 本発明の尿中銅イオン検出用試薬組成物及びそれを含む
検出要素は、尿検体の銅イオンの存否のスクリーニング
検査に用い、簡単な操作で、短時間で多数の検体につい
て目視による判定を確実に実施することができる、とい
う優れた効果を有する。

畷酉直 ［実施例１コ ■試薬組成物溶液の調製 （組成物Ａ）（本発明）４−（３，５−ジブロモ−２−
ピリジルアゾ）−Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピルアニ
リン２５μｇ１ドデシル硫酸ナトリウム３０ｍｇ、アス
コルビン酸ナトリウム２５ｍｇを１ｍＬの［］、４４Ｍ
酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液ｐＨ５，０）に溶解した。

（組成物Ｂ）（本発明）４−（３５−ジブロモ−２〜ピ
リジルアゾ）−Ｎ−エチル−１１−スルホプロピルアニ
リン２５μｇ１ｐ−ノニルフェノキンポリグリンドール
５０ｍｇ、アスコルビン酸ナトリウム２５Ｂを１ｍＬの
０．２ＭＭＥＳ−水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＨ６，０
）に溶解した。

（組成物Ｃ）（比較例）組成物Ａでアスコビン酸ナトリ
ウムをアスコビン酸２５ｍｇに置き変えた組成物。

溶液のｐＨ測定値は３２であった。

（組成物Ｄ）（比較例）組成物Ａでアスコビン酸ナトリ
ウムを除いた組成物。

■硫酸銅水溶液についての色変化の観察■で調製した組
成物Ａ−Ｄ各４０μＬを平底のマイクロプレートに分注
し、下表の既知濃度の硫酸銅水溶液各４０μＬを加え、
色変化を観察した。色変化は数秒以内に起こった。結果
を次の表に示す。

硫酸銅水溶液では、銅ｌｐｐｍ以上の濃度で明瞭な色変
化が観察された。１　ｐｐｍ未満の濃度では色変化は余
り明瞭ではなかった。

■尿検体による色変化の観察 ■と同様な操作で、硫酸銅水溶液の代わりに、尿検体Ｓ
１、Ｓ２、Ｓ３、Ｓ４を用いて色変化を観察した。

被検者Ｓ１は健常人で、原子吸光法により測定した尿中
の銅量は０．　ｌｐｐｍ以下であった。Ｓ２はウィルソ
ン症で治療中で銅排泄量の低い患者で、尿中の銅量は０
．６ｐｐｍＳＳ３、Ｓ４はウィルソン症患者の尿で、尿
中の銅量はそれぞれ１．　ｌｐｐｍ、　２．　ｌｐｐｍ
であった。

結果を次の表に示す。

試薬組成物Ａ、Ｂ、Ｃでは被験者Ｓ３、Ｓ４で明瞭な色
変化が観察され、健常人或いは治療中の患者と明確に区
別できた。

試薬組成物Ａ及びＢは１２時間以上経過して色変化を観
察しても明瞭に識別可能であったが、試薬組成物Ｃは色
変化を明瞭に識別可能である時間は３０分前後であった
。

従って本発明の試薬組成物ＡＳＢは患者の尿検体を明瞭
な色変化で目視により識別可能であり、本発明が目的と
するスクリーニング検査に適していることが明らかであ
る。一方、フリーのアスコルビン酸を含みｐ＋（が４．
５未満の試薬組成物Ｃは多数の検体を取り扱うスクリー
ニング検査には不適当であることが明らかである。

試薬組成物りは尿検体を加えてからの色変化が淡く、明
瞭な色変化が観察できなかった。アスコルビン酸或いは
その塩を含まない組成物りは多数の検体を取り扱うスク
リーニング検査には不適当であることが明らかである。

［実施例２コ ■試薬組成物溶液の調製 （組成物Ｅ）（本発明）４−（３，５−’；ブロモー２
−ピリジルアゾ）−Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピルア
ニリン６５μｇ１ドデシル硫酸ナトリウム１５ｍｇ５ア
スフルビン酸ナトリウム２５ｍｇを　１ｍＬの０．２Ｍ
酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液（ｐ）１５．０＞に溶解し
た。

（組成物Ｆ）（本発明）４−（３，５−ジブロモ−２−
ビリジルアソ）−Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピルアニ
リン１００μｇＳｐ−ノニルフェノキシポリグリシドー
ル５０ｍｇ。

アスコルビン酸ナトリウム２５ｍｇを１ｍＬの０．２Ｍ
　ＭＥＳ−水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＨ６，０＞に溶
解した。

■組成物を濾紙に含浸した試験片の作製アトバンチツク
社製の採血用濾紙を組成物Ｅ、組成物Ｆにそれぞれ浸漬
し、濾紙１５ｃｍ２あたり組成物１ｍＬの割合で含浸し
た。これを乾燥した後、２ＨＸ５ｍｍに細断し、ポリエ
チレンテレフタレート製の白色スティックに画面テープ
で貼り着け、試験片を作製した。

■硫酸銅水溶液についての試験片の色変化■て作製した
試験片を硫酸銅水溶液に挿入して、銅を含ませた後引き
出し、色変化を観察した。色変化は１０秒以内に起こっ
た。観察した結果を次の表に示す。

実施例１と同じく、銅ｔｐｐｍ以上を含む水溶液で明瞭
な色変化が目視により観察された。

■尿検体による試験片の色変化 ■と同様な操作で硫酸銅水溶液の代わりに尿検体Ｓ１、
Ｓ２、＄３、＄４を試験片に含ませ、色変化を観察した
。結果を次の表に示す。

胃コＩ 検体Ｓ３、Ｓ４では色変化が明瞭に観察された。

尿検体に試験片を挿入して尿を含ませた後、色変化を観
察するという簡単な操作だけで、更に精密検査を必要と
するか否かのスクリーニングを容易に行うことができる
ことが明らかである。

［実施例３］ ■一体型多層要素を用いた試験片の作製（試験片α）水
不透過性の透明ポリエチレンテレフタレートフィルム（
透明支持体）に１０重量％のゼラチン水溶液を下塗り層
として塗布し、この層に多孔性材料として編物布地（５
０デニール相当のポリエチレンテレフタレート紡績糸を
３６ゲージ編みした厚さ約２５０μｍのトリコット編物
布地）を貼り、乾燥した。この上に実施例２の試薬組成
物Ｅ、Ｆを、それぞれ編物布地１５ｃｍ２あたり組成物
１ｍＬの割合で塗布し乾燥した。これを４ｎ＋ｍＸ　４
ｍｍに細断し、ポリエチレンテレフタレート製白色ステ
ィ／りに画面テープで支持体側を貼り試験片を作製した
。

（試験片β）試験片αと同様にして、多孔性材料として
編物敷地の代わりにアトバンチ、り社製ノ採血用濾紙を
貼って作製した。

■尿検体による色変化の観察 試験片を尿検体に入れて、尿検体を含ませた後、引き出
し、色変化を観察した。色変化は１０秒以内に起こった
。結果を次の表に示す。

試験片α及び試験片βを用いた場合の結果検体Ｓ３、Ｓ
４では色変化が明瞭に観察された。

尿検体に多層一体型試験片を挿入して尿を含ませた後、
色変化を観察するという簡単な操作だけで、更に精密検
査を必要とするか否かのスクリーニングを容易に行うこ
とができることが明らかである。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）４−（３，５−ジブロモ−２−ピリジルアゾ）−
   Ｎ，Ｎ−ジアルキルアニリン誘導体、アスコルビン酸塩
   、界面活性剤、ｐＨを４．５から７．５の範囲とするｐ
   Ｈ調節剤を含む尿中銅イオン検出用試薬組成物。
2. （２）４−（３，５−ジブロモ−２−ピリジルアゾ）−
   Ｎ，Ｎ−ジアルキルアニリン誘導体の１に対しモル比で
   、アスコルビン酸塩が０．０５×１０＾３から６×１０
   ＾３の範囲、界面活性剤が０．１×１０＾３から２．５
   ×１０＾３の範囲である請求項１に記載の試薬組成物。
3. （３）請求項１に記載の組成物を含有する吸水性多孔性
   材料からなる尿中銅イオン検出要素。
4. （４）水不透過性支持体の上に、親水性高分子層、請求
   項１に記載の組成物を含有する多孔性材料層がこの順に
   積層されてなる尿中銅イオン検出用一体型多層要素。