JPH0244256A - 微量の蛋白質を試験するための組成物及び方法 - Google Patents
微量の蛋白質を試験するための組成物及び方法Info
- Publication number
- JPH0244256A JPH0244256A JP1141291A JP14129189A JPH0244256A JP H0244256 A JPH0244256 A JP H0244256A JP 1141291 A JP1141291 A JP 1141291A JP 14129189 A JP14129189 A JP 14129189A JP H0244256 A JPH0244256 A JP H0244256A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- tungstate
- test
- composition
- color
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 284
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 284
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 164
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims description 317
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 95
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 138
- PBYZMCDFOULPGH-UHFFFAOYSA-N tungstate Chemical compound [O-][W]([O-])(=O)=O PBYZMCDFOULPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 133
- 230000008859 change Effects 0.000 claims abstract description 73
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 31
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 23
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 21
- WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N tungsten Chemical compound [W] WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- HGPSVOAVAYJEIJ-XDHOZWIPSA-N 2-[(e)-(3,4-dihydroxyphenyl)-(3-hydroxy-4-oxoniumylidenecyclohexa-2,5-dien-1-ylidene)methyl]benzenesulfonate Chemical group C1=CC(=O)C(O)=C\C1=C(C=1C(=CC=CC=1)S(O)(=O)=O)/C1=CC=C(O)C(O)=C1 HGPSVOAVAYJEIJ-XDHOZWIPSA-N 0.000 claims description 19
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 14
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims description 14
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 13
- -1 p-ammonium tungstate Chemical compound 0.000 claims description 10
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 7
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L phthalate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C([O-])=O XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000010937 tungsten Substances 0.000 claims description 4
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 3
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000005131 dialkylammonium group Chemical group 0.000 claims description 3
- AAQNGTNRWPXMPB-UHFFFAOYSA-N dipotassium;dioxido(dioxo)tungsten Chemical compound [K+].[K+].[O-][W]([O-])(=O)=O AAQNGTNRWPXMPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- PHLYOKFVXIVOJC-UHFFFAOYSA-N gallein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C(O)=C1OC1=C(O)C(O)=CC=C21 PHLYOKFVXIVOJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 3
- 229910052712 strontium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- CIOAGBVUUVVLOB-UHFFFAOYSA-N strontium atom Chemical compound [Sr] CIOAGBVUUVVLOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000005208 trialkylammonium group Chemical group 0.000 claims description 3
- RUDINRUXCKIXAJ-UHFFFAOYSA-N 2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,9,9,10,10,11,11,12,12,13,13,14,14,14-heptacosafluorotetradecanoic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F RUDINRUXCKIXAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- RZQXOGQSPBYUKH-UHFFFAOYSA-N 3-[[1,3-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)propan-2-yl]azaniumyl]-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound OCC(CO)(CO)NCC(O)CS(O)(=O)=O RZQXOGQSPBYUKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108700016232 Arg(2)-Sar(4)- dermorphin (1-4) Proteins 0.000 claims description 2
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 2
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 2
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000005210 alkyl ammonium group Chemical group 0.000 claims description 2
- 229910052797 bismuth Inorganic materials 0.000 claims description 2
- JCXGWMGPZLAOME-UHFFFAOYSA-N bismuth atom Chemical compound [Bi] JCXGWMGPZLAOME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052793 cadmium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N cadmium atom Chemical compound [Cd] BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 2
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 125000002768 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- DJZHPOJZOWHJPP-UHFFFAOYSA-N magnesium;dioxido(dioxo)tungsten Chemical compound [Mg+2].[O-][W]([O-])(=O)=O DJZHPOJZOWHJPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 claims description 2
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 2
- MOODSJOROWROTO-UHFFFAOYSA-N salicylsulfuric acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1OS(O)(=O)=O MOODSJOROWROTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229940071103 sulfosalicylate Drugs 0.000 claims description 2
- 229940066528 trichloroacetate Drugs 0.000 claims description 2
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- NOEDKKNPNZIYTI-UHFFFAOYSA-N 2',3',6',7'-tetrahydroxyspiro[2-benzofuran-3,9'-xanthene]-1-one Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(O)=C(O)C=C1OC1=C2C=C(O)C(O)=C1 NOEDKKNPNZIYTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 claims 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims 1
- ORZHVTYKPFFVMG-UHFFFAOYSA-N xylenol orange Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CC1=C(O)C(C)=CC(C2(C3=CC=CC=C3S(=O)(=O)O2)C=2C=C(CN(CC(O)=O)CC(O)=O)C(O)=C(C)C=2)=C1 ORZHVTYKPFFVMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 abstract description 28
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 12
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 4
- 239000000049 pigment Substances 0.000 abstract 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 269
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 155
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 104
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 97
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 48
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 48
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 33
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 33
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 24
- MEFBJEMVZONFCJ-UHFFFAOYSA-N molybdate Chemical compound [O-][Mo]([O-])(=O)=O MEFBJEMVZONFCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 15
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 13
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 10
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 10
- 235000019646 color tone Nutrition 0.000 description 9
- 238000011161 development Methods 0.000 description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 description 9
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 8
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 8
- 239000007793 ph indicator Substances 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 7
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 7
- 238000012113 quantitative test Methods 0.000 description 7
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 7
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- QPMIVFWZGPTDPN-UHFFFAOYSA-N Tetrabromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C(C(Br)=C(Br)C(Br)=C2Br)=C2S(=O)(=O)O1 QPMIVFWZGPTDPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 5
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 5
- 201000001474 proteinuria Diseases 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 4
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 4
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 4
- KUQNCHZOCSYKOR-UHFFFAOYSA-N 1,1-dioxospiro[2,1$l^{6}-benzoxathiole-3,9'-xanthene]-3',4',5',6'-tetrol Chemical compound O1S(=O)(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C(O)=C1OC1=C(O)C(O)=CC=C21 KUQNCHZOCSYKOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 3
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 238000009535 clinical urine test Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 3
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- APUPEJJSWDHEBO-UHFFFAOYSA-P ammonium molybdate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-][Mo]([O-])(=O)=O APUPEJJSWDHEBO-UHFFFAOYSA-P 0.000 description 2
- 235000018660 ammonium molybdate Nutrition 0.000 description 2
- 239000011609 ammonium molybdate Substances 0.000 description 2
- 229940010552 ammonium molybdate Drugs 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 2
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229910044991 metal oxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000004706 metal oxides Chemical class 0.000 description 2
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N monobenzene Natural products C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 2
- WQGWDDDVZFFDIG-UHFFFAOYSA-N pyrogallol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1O WQGWDDDVZFFDIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009834 selective interaction Effects 0.000 description 2
- XMVONEAAOPAGAO-UHFFFAOYSA-N sodium tungstate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][W]([O-])(=O)=O XMVONEAAOPAGAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 2
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N D-thyroxine Chemical compound IC1=CC(C[C@@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 239000003109 Disodium ethylene diamine tetraacetate Substances 0.000 description 1
- 101100001676 Emericella variicolor andK gene Proteins 0.000 description 1
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N Ozone Chemical compound [O-][O+]=O CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 208000008425 Protein deficiency Diseases 0.000 description 1
- 239000011358 absorbing material Substances 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 239000000981 basic dye Substances 0.000 description 1
- 150000001555 benzenes Chemical class 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 238000007705 chemical test Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- XAYGUHUYDMLJJV-UHFFFAOYSA-Z decaazanium;dioxido(dioxo)tungsten;hydron;trioxotungsten Chemical compound [H+].[H+].[NH4+].[NH4+].[NH4+].[NH4+].[NH4+].[NH4+].[NH4+].[NH4+].[NH4+].[NH4+].O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.[O-][W]([O-])(=O)=O.[O-][W]([O-])(=O)=O.[O-][W]([O-])(=O)=O.[O-][W]([O-])(=O)=O.[O-][W]([O-])(=O)=O.[O-][W]([O-])(=O)=O XAYGUHUYDMLJJV-UHFFFAOYSA-Z 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000003370 dye binding method Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 230000001434 glomerular Effects 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004745 nonwoven fabric Substances 0.000 description 1
- 238000000643 oven drying Methods 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000004014 plasticizer Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920006254 polymer film Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 description 1
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 230000006916 protein interaction Effects 0.000 description 1
- 229940079877 pyrogallol Drugs 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000009877 rendering Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 1
- 150000003456 sulfonamides Chemical class 0.000 description 1
- 150000003457 sulfones Chemical class 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 229940034208 thyroxine Drugs 0.000 description 1
- XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N thyroxine-binding globulin Natural products IC1=CC(CC([NH3+])C([O-])=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- CMPGARWFYBADJI-UHFFFAOYSA-L tungstic acid Chemical compound O[W](O)(=O)=O CMPGARWFYBADJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
- 239000002759 woven fabric Substances 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
- G01N33/6827—Total protein determination, e.g. albumin in urine
- G01N33/683—Total protein determination, e.g. albumin in urine involving metal ions
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
- G01N33/6827—Total protein determination, e.g. albumin in urine
- G01N33/6839—Total protein determination, e.g. albumin in urine involving dyes, e.g. Coomassie blue, bromcresol green
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
ｌ且立皿屓
本発明は、試験試料を、低濃度〜微量の蛋白の存在およ
び濃度に関して試験する組成物及び方法に関係する。更
に詳しくは、本発明は反応指示薬としてタングステン酸
塩／色素コンプレックスを含む試薬組成物を用いること
により、低濃度から微量の蛋白に関して、尿のような液
体を試験するための新規なかつ改良された方法及び組成
物に関する。検出及び／又は測定可能な応答が試薬組成
物と低濃度から微量の蛋白を含む試験試料との接触によ
り起こるように、試薬組成物はキャリヤーマトリクスの
中に取り込まれている。試験試料液の蛋白量を視覚的に
または機械によるどちらかで正確に検出および測定する
ために、試薬組成物は、異なる蛋白潤度で蛋白に対する
十分な感度と、十分な色分解を供給する。さらに本発明
は、乾燥した状態の試験片で評価する手順または、湿っ
た状態の溶液で評価する手順により、試験試料中の低濃
度から微量の蛋白の存在および濃度を決定する方法に関
して、指示薬としてタングステン酸塩／色素コンプレッ
クスを含む試薬混合物を用いることに関係する。
び濃度に関して試験する組成物及び方法に関係する。更
に詳しくは、本発明は反応指示薬としてタングステン酸
塩／色素コンプレックスを含む試薬組成物を用いること
により、低濃度から微量の蛋白に関して、尿のような液
体を試験するための新規なかつ改良された方法及び組成
物に関する。検出及び／又は測定可能な応答が試薬組成
物と低濃度から微量の蛋白を含む試験試料との接触によ
り起こるように、試薬組成物はキャリヤーマトリクスの
中に取り込まれている。試験試料液の蛋白量を視覚的に
または機械によるどちらかで正確に検出および測定する
ために、試薬組成物は、異なる蛋白潤度で蛋白に対する
十分な感度と、十分な色分解を供給する。さらに本発明
は、乾燥した状態の試験片で評価する手順または、湿っ
た状態の溶液で評価する手順により、試験試料中の低濃
度から微量の蛋白の存在および濃度を決定する方法に関
して、指示薬としてタングステン酸塩／色素コンプレッ
クスを含む試薬混合物を用いることに関係する。
口と の５
アルブミンは最も豊富な血漿蛋白であり、一般に哨乳類
の血漿では総蛋白の局をわずかに越える構成成分である
。ヒトの体で、アルブミンは血液と組織との間の水分バ
ランスを調節する重要な役割をはたしており、水に対し
て極微量可溶性のビＪルピン、脂肪酸、コルチゾル、チ
ロキシンのようなものやスルホンアミド、バルビッル酸
塩のような薬物などの多くの化合物の輸送分子として機
能している。アルブミン不足は、体内で、水に微量可溶
性の物質の輸送を制限し、血清流動体の異常な蓄積や、
浮腫によりヒトにアルブミン不足を知らせる。それゆえ
にヒトの血清アルブミンが不足しているかどうかを判定
することは臨床的に重要である。
の血漿では総蛋白の局をわずかに越える構成成分である
。ヒトの体で、アルブミンは血液と組織との間の水分バ
ランスを調節する重要な役割をはたしており、水に対し
て極微量可溶性のビＪルピン、脂肪酸、コルチゾル、チ
ロキシンのようなものやスルホンアミド、バルビッル酸
塩のような薬物などの多くの化合物の輸送分子として機
能している。アルブミン不足は、体内で、水に微量可溶
性の物質の輸送を制限し、血清流動体の異常な蓄積や、
浮腫によりヒトにアルブミン不足を知らせる。それゆえ
にヒトの血清アルブミンが不足しているかどうかを判定
することは臨床的に重要である。
同様にヒトが過剰量の蛋白を排泄しているかどうかを判
定することも臨床的に重要である。正常に機能している
腎臓は本来、２段階の過程で尿を作成する。血液は腎臓
の糸球体や糸球体領域を通って流れる。糸球体の毛管壁
は水や血漿中の低分子量の成分に対して高透過性である
。アルブミンや伯の高分子量蛋白は、これらの毛管壁を
通過できず、体内で利用できるようにするために尿から
濾過する必要がある。低分子量成分を含むその液体は低
分子蛋白のような尿成分や尿成分の分泌物を再吸収する
腎臓の尿細管や尿細管領域を通過する。そして尿の濃縮
が行われる。結果として糸球体と尿細管の連結した過程
を通して、尿中の蛋白は最小もしくは全く存在しない、
それゆえに尿中のアルブミンや低分子量蛋白の異常に高
い値は、検出されなければならず、生理機能不良に関係
している。
定することも臨床的に重要である。正常に機能している
腎臓は本来、２段階の過程で尿を作成する。血液は腎臓
の糸球体や糸球体領域を通って流れる。糸球体の毛管壁
は水や血漿中の低分子量の成分に対して高透過性である
。アルブミンや伯の高分子量蛋白は、これらの毛管壁を
通過できず、体内で利用できるようにするために尿から
濾過する必要がある。低分子量成分を含むその液体は低
分子蛋白のような尿成分や尿成分の分泌物を再吸収する
腎臓の尿細管や尿細管領域を通過する。そして尿の濃縮
が行われる。結果として糸球体と尿細管の連結した過程
を通して、尿中の蛋白は最小もしくは全く存在しない、
それゆえに尿中のアルブミンや低分子量蛋白の異常に高
い値は、検出されなければならず、生理機能不良に関係
している。
ヒトの尿中のアルブミン濃度が比較的高いということは
、通常、病的状態を暗示する０例えば、尿中の正常な蛋
白濃度の平均は、血清アルブミンの存在する検尿中蛋白
の約届に当たる約２ｍｇ／ｌｌｌから８ｍｇ／ａの間を
変化する。しかしながら、病的状態の多くの場合、アル
ブミンが排泄蛋白の約６０％から９０％の割合を占める
ような尿中蛋白が、かなり増加する。蛋白尿として知ら
れている尿中蛋白の異常増加は、腎臓病の最も顕著な示
標のひとつであり、腎臓以外と関係のあるあらゆる病気
のｔ旨を票となるかもしれない。
、通常、病的状態を暗示する０例えば、尿中の正常な蛋
白濃度の平均は、血清アルブミンの存在する検尿中蛋白
の約届に当たる約２ｍｇ／ｌｌｌから８ｍｇ／ａの間を
変化する。しかしながら、病的状態の多くの場合、アル
ブミンが排泄蛋白の約６０％から９０％の割合を占める
ような尿中蛋白が、かなり増加する。蛋白尿として知ら
れている尿中蛋白の異常増加は、腎臓病の最も顕著な示
標のひとつであり、腎臓以外と関係のあるあらゆる病気
のｔ旨を票となるかもしれない。
したがって、ヒトがアルブミン不足であるかどうか、お
よび過剰蛋白を排泄しているかどうかを判定するために
、また薬物療法の効果を判定するのに必要な経過を監視
するために、簡便で正確、そして高価でない蛋白を検出
する評価を開発してきた。さらに、尿中や血清中蛋白の
検出および測定のために開発した数種の異なる評価方法
の中で、色素と結合する技術に基づく方法が特に役立つ
ことを立証した。なぜならば、色素と結合する方法は容
易に自動化され再現性のある正確な結果を供給するから
である。
よび過剰蛋白を排泄しているかどうかを判定するために
、また薬物療法の効果を判定するのに必要な経過を監視
するために、簡便で正確、そして高価でない蛋白を検出
する評価を開発してきた。さらに、尿中や血清中蛋白の
検出および測定のために開発した数種の異なる評価方法
の中で、色素と結合する技術に基づく方法が特に役立つ
ことを立証した。なぜならば、色素と結合する方法は容
易に自動化され再現性のある正確な結果を供給するから
である。
般に色素と結合する技術はアルブミンのような蛋白と相
互作用を占めすｐＨ指示薬を用いる。
互作用を占めすｐＨ指示薬を用いる。
そして、そのｐＨ指示薬はｐＨによる変化はなく蛋白と
の相互作用で色調変化を起こすことが可能なものである
。ｐＨ指示薬が蛋白と相互作用を示し、結合する時、そ
の指示薬の見かけ上のｐＫａ（酸解離定数）が変化し、
その指示薬は色調変化を起こし、いわゆる蛋白誤差現象
が生じる１色素と結合する技術を利用する方法ではｐＨ
本来の変化による色調変化を防ぐために、適当な緩衝液
が、ｐＨ指示薬を一定のｐＨに維持する。蛋白との相互
作用での蛋白誤差現象により、ｐｌ（指示薬は、ｐＨの
変化より起こる色調変化と一致する変化を起こす、ｐＨ
指示薬の実例は、蛋白と相互作用を示し、結合し、そし
てテトラブロモフェノールブルーおよびテトラクロロフ
ェノール−３，４，５，６−チトラブロモスルホフクレ
インを含む蛋白誤差による色調変化を示す乾燥状態での
蛋白試験を用いた。
の相互作用で色調変化を起こすことが可能なものである
。ｐＨ指示薬が蛋白と相互作用を示し、結合する時、そ
の指示薬の見かけ上のｐＫａ（酸解離定数）が変化し、
その指示薬は色調変化を起こし、いわゆる蛋白誤差現象
が生じる１色素と結合する技術を利用する方法ではｐＨ
本来の変化による色調変化を防ぐために、適当な緩衝液
が、ｐＨ指示薬を一定のｐＨに維持する。蛋白との相互
作用での蛋白誤差現象により、ｐｌ（指示薬は、ｐＨの
変化より起こる色調変化と一致する変化を起こす、ｐＨ
指示薬の実例は、蛋白と相互作用を示し、結合し、そし
てテトラブロモフェノールブルーおよびテトラクロロフ
ェノール−３，４，５，６−チトラブロモスルホフクレ
インを含む蛋白誤差による色調変化を示す乾燥状態での
蛋白試験を用いた。
ｐＨ指示薬は、蛋白試験で広く用いられてきたけれども
、指示薬を利用する蛋白試験方法には、い（つかの問題
と欠点が依然存在している０例えばｐＨ指示薬に基づ（
方法は、約１５ｍｇ／ｄ１以下の濃度の蛋白を検出する
ことも、量的に識別することもできない、さらに数種の
簡単な半定量的試験と、数種の複雑な定量試験が試験試
料中の総蛋白量を決定するために利用できるけれども、
これらの試験方法の大部分は簡便な比色試薬試験片とい
う特例を除き、蛋白を定量するために蛋白の沈殿が必要
である。
、指示薬を利用する蛋白試験方法には、い（つかの問題
と欠点が依然存在している０例えばｐＨ指示薬に基づ（
方法は、約１５ｍｇ／ｄ１以下の濃度の蛋白を検出する
ことも、量的に識別することもできない、さらに数種の
簡単な半定量的試験と、数種の複雑な定量試験が試験試
料中の総蛋白量を決定するために利用できるけれども、
これらの試験方法の大部分は簡便な比色試薬試験片とい
う特例を除き、蛋白を定量するために蛋白の沈殿が必要
である。
比色試薬試験片は、前に述べた酸、塩基指示薬と確実に
相互作用を示し、ｐＨは変化せずに指示薬の色調を変え
る蛋白の能力を利用している６例えば、指示薬テトラブ
ロモフェノールブルーがｐＨ約３で一定に保つよう緩衝
化されている時、その指示薬は蛋白を含まない溶液で黄
色を示す。
相互作用を示し、ｐＨは変化せずに指示薬の色調を変え
る蛋白の能力を利用している６例えば、指示薬テトラブ
ロモフェノールブルーがｐＨ約３で一定に保つよう緩衝
化されている時、その指示薬は蛋白を含まない溶液で黄
色を示す。
しかしながら、蛋白を含む溶液に対して緩衝化されてい
る指示薬は、蛋白の存在により、水溶液中の蛋白濃度に
依存して縁又は青を示す。
る指示薬は、蛋白の存在により、水溶液中の蛋白濃度に
依存して縁又は青を示す。
蛋白試験に用いられるいくつかの比色試験片は、緩衝化
されたｐＨ指示薬例えばテトラブロモフェノールブルー
を、浸み込ませであるキャリヤーマトリクスの小さな正
方形パッドでできている１ケ所の試験部分をもっている
。他の比色試験片は、上記に述べたような１ケ所の蛋白
試験する試験部分があり、さらに同じ試験片に他の尿成
分を同時に試験するために、数種の試験部分を追加した
、複数の判定ができる試験片である。比色試験片のどち
らのタイプも尿中蛋白の試験は比色試験片をよく混ぜ、
遠心分離しない尿試料の中にちょっと浸し、試験片の試
験部分の色の結果を、比色試験片容器に用意しである標
準色調表と比較することにより、簡単に行なわれる。
されたｐＨ指示薬例えばテトラブロモフェノールブルー
を、浸み込ませであるキャリヤーマトリクスの小さな正
方形パッドでできている１ケ所の試験部分をもっている
。他の比色試験片は、上記に述べたような１ケ所の蛋白
試験する試験部分があり、さらに同じ試験片に他の尿成
分を同時に試験するために、数種の試験部分を追加した
、複数の判定ができる試験片である。比色試験片のどち
らのタイプも尿中蛋白の試験は比色試験片をよく混ぜ、
遠心分離しない尿試料の中にちょっと浸し、試験片の試
験部分の色の結果を、比色試験片容器に用意しである標
準色調表と比較することにより、簡単に行なわれる。
指示薬としてｐＨ３でｋＪｆｌｊ化されたテトラブロモ
フェノールブルーな用いる試験片で蛋白の半定量的試験
を行い、その試験を陰性、微量または、ｌプラスから４
プラスとして表わすことができる。陰性および黄色の判
定は指示薬の色調変化がないことにより示され、尿が蛋
白を含まないということを、意味している。ｉａ量の判
定は、尿中の蛋白が約５〜２０ｍｇ／ｄＩ！であること
を、意味している。緑から段々暗い青い色合いへの変化
を示すｌプラスから４プラスの判定は、それぞれ３０゜
１００．３００、そして２０００ｍｇ／ｄ１以上の尿の
蛋白濃度とほぼ同等であり、重篤な蛋白尿を段階的に示
す信頼性のある指標として役立つ。
フェノールブルーな用いる試験片で蛋白の半定量的試験
を行い、その試験を陰性、微量または、ｌプラスから４
プラスとして表わすことができる。陰性および黄色の判
定は指示薬の色調変化がないことにより示され、尿が蛋
白を含まないということを、意味している。ｉａ量の判
定は、尿中の蛋白が約５〜２０ｍｇ／ｄＩ！であること
を、意味している。緑から段々暗い青い色合いへの変化
を示すｌプラスから４プラスの判定は、それぞれ３０゜
１００．３００、そして２０００ｍｇ／ｄ１以上の尿の
蛋白濃度とほぼ同等であり、重篤な蛋白尿を段階的に示
す信頼性のある指標として役立つ。
上記に述べた方法に従ってヒトは、尿試料の蛋白量がＯ
から約３０ｍｇ１ｄｌの範囲にあるということを容易に
視覚的に判定することができる。しかしながら、現在市
販されている試験片を利用することにより可能な色調の
識別はＯｍｇ／ｄ１と１、５ ｍｇ／ ｄｆ！の間で、
尿中の蛋白量を正確に判定するには不十分である。低い
蛋白濃度の間で、検出や識別が不可能なことは、臨床的
に重大である。
から約３０ｍｇ１ｄｌの範囲にあるということを容易に
視覚的に判定することができる。しかしながら、現在市
販されている試験片を利用することにより可能な色調の
識別はＯｍｇ／ｄ１と１、５ ｍｇ／ ｄｆ！の間で、
尿中の蛋白量を正確に判定するには不十分である。低い
蛋白濃度の間で、検出や識別が不可能なことは、臨床的
に重大である。
なぜならば、健康人の尿蛋白レベルが、ふつう約１０ｍ
ｇ／ｄＩから約２Ｃ１ｎｇ／ｄｆ！の範囲だからである
。したがって、ヒトの尿蛋白量を約３０ｍｇ／ｄ１以下
の試験で単に蛋白量の推定でなくもっと正確に知ること
は臨床的に重要であろう。
ｇ／ｄＩから約２Ｃ１ｎｇ／ｄｆ！の範囲だからである
。したがって、ヒトの尿蛋白量を約３０ｍｇ／ｄ１以下
の試験で単に蛋白量の推定でなくもっと正確に知ること
は臨床的に重要であろう。
もちろん、尿試料中の蛋白量を半定量的な蛋白沈殿によ
る手法や、定量的だが２４時間かかる蛋白沈殿による手
法によってさらに正確に決定することができる。しかし
ながらこれらの試験は時間がかかり比較的高価である。
る手法や、定量的だが２４時間かかる蛋白沈殿による手
法によってさらに正確に決定することができる。しかし
ながらこれらの試験は時間がかかり比較的高価である。
さらに沈殿試験は熟練した人により実験室で行なわれな
ければならない、そして患者が尿蛋白量を早急に判定す
るために、家庭で行ったり、ある特定の薬物療法がうま
くいっているか否かを監視するために、利用することは
できない。
ければならない、そして患者が尿蛋白量を早急に判定す
るために、家庭で行ったり、ある特定の薬物療法がうま
くいっているか否かを監視するために、利用することは
できない。
したがって、低濃度から微量の蛋白量の尿を試験する簡
便で正確、信頼性のある方法、Ｏｍｇ／ｄｉから約５ｍ
ｇ／ｄＩ、約５ｍｇ／ｄＩから約１０ｍｇ／＃、約１０
ｍｇ／ｄｌから約２Ｏｎ＋ｇ／ｄｆ！、約２０ｍｇ／ｄ
Ｉ！から約３Ｏｎ＋ｇ／＃、およびそれ以上から約１０
０ｍｇ１ｄｌと約３００ ｍｇ／ ｄＩの間の範囲で、
蛋白レベルを視覚的に識別できる方法を用いることが非
常に好都合であろう。試験片を浸して、判定するような
方式を用いて容易に低濃度から微量の尿蛋白濃度を決定
するこのような正確な方法を供給することにより、１日
も待たずに下される診断のような試験結果を直ちに供給
するために、低濃度から微量の蛋白１度の尿試験を、実
験者が行うことができる。そして、薬物療法を直ちに開
始することができる。さらに試験片による方法は、より
正確に低レベルから微量の尿中蛋白レベルおよび患者が
受けている薬物療法の効果を、監視するために、家庭で
患者が行うことができる。
便で正確、信頼性のある方法、Ｏｍｇ／ｄｉから約５ｍ
ｇ／ｄＩ、約５ｍｇ／ｄＩから約１０ｍｇ／＃、約１０
ｍｇ／ｄｌから約２Ｏｎ＋ｇ／ｄｆ！、約２０ｍｇ／ｄ
Ｉ！から約３Ｏｎ＋ｇ／＃、およびそれ以上から約１０
０ｍｇ１ｄｌと約３００ ｍｇ／ ｄＩの間の範囲で、
蛋白レベルを視覚的に識別できる方法を用いることが非
常に好都合であろう。試験片を浸して、判定するような
方式を用いて容易に低濃度から微量の尿蛋白濃度を決定
するこのような正確な方法を供給することにより、１日
も待たずに下される診断のような試験結果を直ちに供給
するために、低濃度から微量の蛋白１度の尿試験を、実
験者が行うことができる。そして、薬物療法を直ちに開
始することができる。さらに試験片による方法は、より
正確に低レベルから微量の尿中蛋白レベルおよび患者が
受けている薬物療法の効果を、監視するために、家庭で
患者が行うことができる。
後で、さらに詳しく記述するけれども本発明の方法はタ
ングステン酸塩／色素コンプレックスを混入した試薬混
合物を含む試験片を利用することにより、低レベルから
微量の尿中蛋白に対して早く正確で信頼性のある試験を
下すことができる。
ングステン酸塩／色素コンプレックスを混入した試薬混
合物を含む試験片を利用することにより、低レベルから
微量の尿中蛋白に対して早く正確で信頼性のある試験を
下すことができる。
タングステン酸塩／色素コンプレックス試薬混合物は、
試験の感度を改良し、異なる蛋白濃度の間で、視覚的に
十分判定可能な色調変化を供給するので約３０ｍｇ／ａ
またはそれより低いレベルで尿の蛋白濃度を、正確に決
定することができる。さらに、本発明の方法を、約１０
０ｍｇ／ｄＩから約２０００ｍｇ／ｄｉのような試験試
料中のより高い蛋白の存在および濃度を決定するために
も用いることができる。
試験の感度を改良し、異なる蛋白濃度の間で、視覚的に
十分判定可能な色調変化を供給するので約３０ｍｇ／ａ
またはそれより低いレベルで尿の蛋白濃度を、正確に決
定することができる。さらに、本発明の方法を、約１０
０ｍｇ／ｄＩから約２０００ｍｇ／ｄｉのような試験試
料中のより高い蛋白の存在および濃度を決定するために
も用いることができる。
ヒトに表われる蛋白尿のレベルは臨床的病理学的な病気
の本質に、および特定の病気の重篤さに確実に依存する
。蛋白尿は、−時的に中断したり、継続したりする。そ
の蛋白尿の中断は、通常腎臓の病気によるよりもむしろ
生理的、機能的な状態により引き起こされる。それゆえ
に尿または他の試験試料中の蛋白の正確で確実な試験が
実験室用と家庭用の両方で利用できなければならない、
この試験により、正しい診断を下し正しい薬物療法を施
し監視し、維持するために低濃度から１Ｊｆｆｉの蛋白
ですら検出し測定できなければならない、さらに低濃度
から微量蛋白の蛋白試験方法が、容易に経済的に尿中ま
たは他の試験試料液中の蛋白を、定性的および定量的に
決定できる浸漬読取り法により利用できるならば、好都
合であろう。
の本質に、および特定の病気の重篤さに確実に依存する
。蛋白尿は、−時的に中断したり、継続したりする。そ
の蛋白尿の中断は、通常腎臓の病気によるよりもむしろ
生理的、機能的な状態により引き起こされる。それゆえ
に尿または他の試験試料中の蛋白の正確で確実な試験が
実験室用と家庭用の両方で利用できなければならない、
この試験により、正しい診断を下し正しい薬物療法を施
し監視し、維持するために低濃度から１Ｊｆｆｉの蛋白
ですら検出し測定できなければならない、さらに低濃度
から微量蛋白の蛋白試験方法が、容易に経済的に尿中ま
たは他の試験試料液中の蛋白を、定性的および定量的に
決定できる浸漬読取り法により利用できるならば、好都
合であろう。
さらに尿中または他の試験試料液中の蛋白を試験するい
かなる方法でもｐＨ変化あるいは蛋白以外の試験試料成
分との選択的な相互作用のような化学的あるいは物理的
な競合作用の結果としてではなく、蛋白との相互作用の
結果として色調変化を起こす試薬組成物を利用すること
により、正確で信頼性・再現性のある結果を与えなけれ
ばならない。さらに、その蛋白試験方法が湿潤状態で試
験する場合と尿中または他の試験試料中の蛋白を早く、
経済的および正確に決定する乾燥した試薬仮を用いる場
合との両方に適しているならば、より好都合であろう、
その上、蛋白の試験に用いられる方法及び組成物が逆に
複数の試験パッド紙上にある他の試験試薬パッドに影響
を及ぼし妨害するべきではない。
かなる方法でもｐＨ変化あるいは蛋白以外の試験試料成
分との選択的な相互作用のような化学的あるいは物理的
な競合作用の結果としてではなく、蛋白との相互作用の
結果として色調変化を起こす試薬組成物を利用すること
により、正確で信頼性・再現性のある結果を与えなけれ
ばならない。さらに、その蛋白試験方法が湿潤状態で試
験する場合と尿中または他の試験試料中の蛋白を早く、
経済的および正確に決定する乾燥した試薬仮を用いる場
合との両方に適しているならば、より好都合であろう、
その上、蛋白の試験に用いられる方法及び組成物が逆に
複数の試験パッド紙上にある他の試験試薬パッドに影響
を及ぼし妨害するべきではない。
本発明までに、尿または他の試験試料の蛋白を試験する
ための概知の方法では、低濃度から微量の蛋白レベルに
おいて十分な感度と試験の色分解を供給し、約３０ｍｇ
／＃以下の蛋白濃度で正確かつ信頼のある蛋白試験がで
きるような試薬組成物を含まなかった。さらにテトラブ
ロモフェノールブルーまたはテトラクロロフェノール−
３，４，５，６−チトラブロモスルホフタレインのよう
なひとつの指示薬を利用した乾燥状態にある化学試験片
が数年間広く用いられてきたけれども、乾燥状態にある
試験片は、十分な感度を供給し、それゆえに低濃度から
微量の蛋白レベル間で、十分に視認可能な色分解を与え
るタングステン酸塩／色素のコンプレックスを混入して
いなかった。
ための概知の方法では、低濃度から微量の蛋白レベルに
おいて十分な感度と試験の色分解を供給し、約３０ｍｇ
／＃以下の蛋白濃度で正確かつ信頼のある蛋白試験がで
きるような試薬組成物を含まなかった。さらにテトラブ
ロモフェノールブルーまたはテトラクロロフェノール−
３，４，５，６−チトラブロモスルホフタレインのよう
なひとつの指示薬を利用した乾燥状態にある化学試験片
が数年間広く用いられてきたけれども、乾燥状態にある
試験片は、十分な感度を供給し、それゆえに低濃度から
微量の蛋白レベル間で、十分に視認可能な色分解を与え
るタングステン酸塩／色素のコンプレックスを混入して
いなかった。
従来技術においては、尿の蛋白を試験するためにｐＨ指
示薬により染色する方法を用いた湿潤状態と乾燥した状
態の化学に関する多数の参考文献が含まれる。例えばＫ
ｅｓｔｏｎの米国特許番号３．４８５，５８７では、一
定のｐＨで蛋白を試験するために利用する基本的な色素
と結合する技術を発表している。 Ｋｅｓｔｏｎは指示
薬の色調変化を監視することにより、アルブミンの存在
および濃度を測定するために、ひとつの指示薬を用い、
その指示薬を、ｐＫａ（酸解離定数）よりわずかに低い
一定のｐｌ（に維持することを教示している。
示薬により染色する方法を用いた湿潤状態と乾燥した状
態の化学に関する多数の参考文献が含まれる。例えばＫ
ｅｓｔｏｎの米国特許番号３．４８５，５８７では、一
定のｐＨで蛋白を試験するために利用する基本的な色素
と結合する技術を発表している。 Ｋｅｓｔｏｎは指示
薬の色調変化を監視することにより、アルブミンの存在
および濃度を測定するために、ひとつの指示薬を用い、
その指示薬を、ｐＫａ（酸解離定数）よりわずかに低い
一定のｐｌ（に維持することを教示している。
出版物″（：ｏｌｏｒ Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｂｅｔｗｅ
ｅｎ ＰｙｒｏｇａｌｌｏｌＲｅｄ−１ｌｏｌｙｂｄｅ
ｎｕｍ （Ｖｌｌ Ｃｏｍｐｌｅｘ ａｎｄ Ｐｒ
ｏｔｅｉｎ 、Ｙ、フジタ、■、モリ及びＳ、キクノ
、分析化学、３２、ｐｐ、Ｅ３７９−Ｅ３８６ （１９
８３）に、蛋白濃度を測定するためにキレート剤または
金属イオンの取り込みが必要である蛋白とピロガロール
・赤色モリブデンコンプレックスとの相互作用について
記載されている。
ｅｎ ＰｙｒｏｇａｌｌｏｌＲｅｄ−１ｌｏｌｙｂｄｅ
ｎｕｍ （Ｖｌｌ Ｃｏｍｐｌｅｘ ａｎｄ Ｐｒ
ｏｔｅｉｎ 、Ｙ、フジタ、■、モリ及びＳ、キクノ
、分析化学、３２、ｐｐ、Ｅ３７９−Ｅ３８６ （１９
８３）に、蛋白濃度を測定するためにキレート剤または
金属イオンの取り込みが必要である蛋白とピロガロール
・赤色モリブデンコンプレックスとの相互作用について
記載されている。
同様に特開昭６１−１５５７５７号（１９８８年）に、
モリブデンコンプレックスとキレート剤またはある決め
られた金属イオンのどちらかを含む混合物を用いること
により、試験試料中の微量蛋白を試験する比色法を発表
している。しかしながら、特開昭６１−１５５７５７に
発表された方法では、モリブデン酸塩／色素が蛋白と結
合するまでの強烈なイオン強度および比重による障害を
受ける。ゆえに、色調変化の程度は逆に試料のイオン強
度に関係している。それゆえに同じ蛋白量を含むイオン
強度の高い（比重の大きい）尿試料の試験よりもイオン
強度の低い（比重の低い）尿試料の試験の方が、試験片
でより大きな色調変化が生じる（ゆえにより多くの蛋白
量を示す）０本発明で用いたタングステンｌ！Ｓ ｔＭ
／色素のコンプレックスは、意外にもイオン強度およ
び比重による障害を受けず、試験試料のイオン強度にか
かわらず、正確な蛋白試験を与える。さらに、この反応
を抑えるために日本特許出願で発表した組成物にキレー
ト剤を加えることは不必要であり、実際に本発明の方法
に有害であるということがわかった。
モリブデンコンプレックスとキレート剤またはある決め
られた金属イオンのどちらかを含む混合物を用いること
により、試験試料中の微量蛋白を試験する比色法を発表
している。しかしながら、特開昭６１−１５５７５７に
発表された方法では、モリブデン酸塩／色素が蛋白と結
合するまでの強烈なイオン強度および比重による障害を
受ける。ゆえに、色調変化の程度は逆に試料のイオン強
度に関係している。それゆえに同じ蛋白量を含むイオン
強度の高い（比重の大きい）尿試料の試験よりもイオン
強度の低い（比重の低い）尿試料の試験の方が、試験片
でより大きな色調変化が生じる（ゆえにより多くの蛋白
量を示す）０本発明で用いたタングステンｌ！Ｓ ｔＭ
／色素のコンプレックスは、意外にもイオン強度およ
び比重による障害を受けず、試験試料のイオン強度にか
かわらず、正確な蛋白試験を与える。さらに、この反応
を抑えるために日本特許出願で発表した組成物にキレー
ト剤を加えることは不必要であり、実際に本発明の方法
に有害であるということがわかった。
特開昭６１−１５５７５７において記載されている方法
は、また、出版物”Ｕｒｉｎａｒｙ Ｐｒｏｔｅｉｎ
ａｓＭｅａｓｕｒｅｄ ｗｉｔｈ ａ Ｐｙｒｏｇａｌ
ｌｏｌ Ｒｅｄ−ＩＪｏｌｙｂｄａｔ。
は、また、出版物”Ｕｒｉｎａｒｙ Ｐｒｏｔｅｉｎ
ａｓＭｅａｓｕｒｅｄ ｗｉｔｈ ａ Ｐｙｒｏｇａｌ
ｌｏｌ Ｒｅｄ−ＩＪｏｌｙｂｄａｔ。
Ｃ，ｏｍｐｌｅｘ、 Ｍａｎｕａｌｌｙ ａｎｄ ｉｎ
ａ Ｈｉｔａｃｈｉ ７２６ Ａｕｔ。
ａ Ｈｉｔａｃｈｉ ７２６ Ａｕｔ。
ｍａｔｅｄ Ａｎａｌｙｚｅｒ 、 Ｎ、ワタナベ、
Ｓ、カメイ、Ａ２オオクボ、Ｍ、ヤマナカ、Ｓ１オオサ
ワ、Ｋ、マキノ、ａｎｄＫ、）タダ、Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈ
ｅｍ、。
Ｓ、カメイ、Ａ２オオクボ、Ｍ、ヤマナカ、Ｓ１オオサ
ワ、Ｋ、マキノ、ａｎｄＫ、）タダ、Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈ
ｅｍ、。
３２／８． ｐ、１５５１〜１５５４ （１９８６）で
述べられた。この出版物はモリブデン酸塩／色素のコン
プレックスを用いる尿中蛋白の自動検出または手動検出
について述べている。この文献においては、更に、上記
記載の欠点に加えて、蛋白とモリブデン酸塩／色素のコ
ンプレックスとの間の興味深い相互作用は自動試験では
３７℃で少なくとも８分継続し、１０分以内には完了す
るが、手動試験では反応を試験する前に、その相互作用
を２０分間継続させたことが報告されている。このよう
な完全に色調変化が起こるまでの長い相互作用時間は不
便でもあり、また色調変化の程度（蛋白ｆｌｔ）を直ち
に判定したならば、誤った試験を導く可能性がある。し
かしながら本発明の方法に従うと、蛋白とタングステン
酸塩／色素のコンプレックスとの相互作用は２分未満で
完了する。それゆえに誤った試験の可能性を大きく減縮
し、より早く結果を供給することができる。
述べられた。この出版物はモリブデン酸塩／色素のコン
プレックスを用いる尿中蛋白の自動検出または手動検出
について述べている。この文献においては、更に、上記
記載の欠点に加えて、蛋白とモリブデン酸塩／色素のコ
ンプレックスとの間の興味深い相互作用は自動試験では
３７℃で少なくとも８分継続し、１０分以内には完了す
るが、手動試験では反応を試験する前に、その相互作用
を２０分間継続させたことが報告されている。このよう
な完全に色調変化が起こるまでの長い相互作用時間は不
便でもあり、また色調変化の程度（蛋白ｆｌｔ）を直ち
に判定したならば、誤った試験を導く可能性がある。し
かしながら本発明の方法に従うと、蛋白とタングステン
酸塩／色素のコンプレックスとの相互作用は２分未満で
完了する。それゆえに誤った試験の可能性を大きく減縮
し、より早く結果を供給することができる。
従来技術、および現在利用している市販の試験片と比較
して、本発明の方法で検出感度が増し、タングステン酸
塩／色素のコンプレックスを含む試薬混合物を用いるこ
とにより、特に低濃度から微量の尿中蛋白が測定できる
。つまり約３０ＩＩＩｇ／ｄ１以下の蛋白レベルで、正
確な試験が成しとげられた。意外にも従来技術と異なる
本発明の方法では、試験試料液中の低レベルから微量の
蛋白を簡単に早く検出および測定できる。ゆえに本発明
の方法に従うと、尿または他の試料の蛋白、特に低濃度
から微量の蛋白を、タングステン酸塩／色素のコンプレ
ックスを含む試薬混合物を用いることにより、乾燥状態
の試薬紙による試験と湿潤状態で試験することによって
新しい予想外の結果が得られる。
して、本発明の方法で検出感度が増し、タングステン酸
塩／色素のコンプレックスを含む試薬混合物を用いるこ
とにより、特に低濃度から微量の尿中蛋白が測定できる
。つまり約３０ＩＩＩｇ／ｄ１以下の蛋白レベルで、正
確な試験が成しとげられた。意外にも従来技術と異なる
本発明の方法では、試験試料液中の低レベルから微量の
蛋白を簡単に早く検出および測定できる。ゆえに本発明
の方法に従うと、尿または他の試料の蛋白、特に低濃度
から微量の蛋白を、タングステン酸塩／色素のコンプレ
ックスを含む試薬混合物を用いることにより、乾燥状態
の試薬紙による試験と湿潤状態で試験することによって
新しい予想外の結果が得られる。
兄皿勿且Ｉ
端的に言うと、本発明は、新しく改良された方法および
試験試料中の成分、特に少量から微量の成分の存在およ
び濃度を決定するための組成物に関するものである。こ
の方法は、試験試料の成分と相互作用して検出可能な応
答を生成しつる試薬組成物を用いるものである。家庭用
に関しては、試薬組成物は視覚的に検出可能な反応を示
す、実験室用に関しては、試薬組成物は視覚的にまたは
機械により検出可能な反応を示す、この方法は温潤状態
での試験または試薬組成物が分析物検出体であるキャリ
ヤーマトリクスに取り込まれている乾燥状態での試験に
適している０分析対象物検出具のキャリヤーマトリクス
は、１戸紙のような吸水性多孔質材料、または、浸透性
のある重合物質でできている片１層、膜のような非吸水
性の物質から成っている。試薬組成物はキャリヤーマト
リクスに均等に取り込まれ、そしてキャリヤーマトリク
スに液体の試験試料が入り込むことができるような＋ａ
知の濃度でキャリヤーマトリクスは試薬組成物をキャリ
ヤーマトリクス全体に均等に保持する。
試験試料中の成分、特に少量から微量の成分の存在およ
び濃度を決定するための組成物に関するものである。こ
の方法は、試験試料の成分と相互作用して検出可能な応
答を生成しつる試薬組成物を用いるものである。家庭用
に関しては、試薬組成物は視覚的に検出可能な反応を示
す、実験室用に関しては、試薬組成物は視覚的にまたは
機械により検出可能な反応を示す、この方法は温潤状態
での試験または試薬組成物が分析物検出体であるキャリ
ヤーマトリクスに取り込まれている乾燥状態での試験に
適している０分析対象物検出具のキャリヤーマトリクス
は、１戸紙のような吸水性多孔質材料、または、浸透性
のある重合物質でできている片１層、膜のような非吸水
性の物質から成っている。試薬組成物はキャリヤーマト
リクスに均等に取り込まれ、そしてキャリヤーマトリク
スに液体の試験試料が入り込むことができるような＋ａ
知の濃度でキャリヤーマトリクスは試薬組成物をキャリ
ヤーマトリクス全体に均等に保持する。
さらに、本発明は、新しく改良された試薬組成物を用い
ることにより、尿または他の試験試料を、蛋白、特に少
量から微量の蛋白を試験する方法に関する。試験試料液
中の低濃度から微量の蛋白の検出および測定を可能にす
るために、低い蛋白濃度で、十分に増加した感度および
十分な色調変化を与えるタングステン酸塩／色素のコン
プレックスを含む試薬組成物を用いることを説明してき
た８本発明の重要な特徴に従うと尿中および他の試験試
料中のＯｍｇ／ｄＩから約２０００ｍｇ／ａ、特にＯｍ
ｇ／ ａから約３０ｍｇ／＃の間の蛋白レベルを定性的
および半定量的に測定することができる。臨床的な試験
方法では、本発明のタングステン酸塩／色素のコンプレ
ックス試薬組成物を用いることにより、定性的および半
定量的に尿または他の試験試料中のアルブミンのような
蛋白の濃度をさらに正確に測定することができる。なぜ
ならばタングステン酸塩／色素のコンプレックス試薬組
成物により低濃度から微量の蛋白濃度でこの方法の感度
および色調変化が改良されたからである。さらに意外に
も分析対象物検出具に取り込まれたタグステン酸塩／色
素のコンプレックス試薬組成物により尿中また他の試験
試料中の蛋白濃度がＯｍｇ／ ｄｆ！から約３０ ｍｇ
／ ｄｆ！の間またＯｍｇ／ｄＩから約５ ｒｎｇｌ
ｄｌの間、約５ｍｇ／ｄｆ！から約１０ ｍｇ／ ｄｉ
の間のような低濃度から微量の蛋白の検出およびポ１１
定が可能である。
ることにより、尿または他の試験試料を、蛋白、特に少
量から微量の蛋白を試験する方法に関する。試験試料液
中の低濃度から微量の蛋白の検出および測定を可能にす
るために、低い蛋白濃度で、十分に増加した感度および
十分な色調変化を与えるタングステン酸塩／色素のコン
プレックスを含む試薬組成物を用いることを説明してき
た８本発明の重要な特徴に従うと尿中および他の試験試
料中のＯｍｇ／ｄＩから約２０００ｍｇ／ａ、特にＯｍ
ｇ／ ａから約３０ｍｇ／＃の間の蛋白レベルを定性的
および半定量的に測定することができる。臨床的な試験
方法では、本発明のタングステン酸塩／色素のコンプレ
ックス試薬組成物を用いることにより、定性的および半
定量的に尿または他の試験試料中のアルブミンのような
蛋白の濃度をさらに正確に測定することができる。なぜ
ならばタングステン酸塩／色素のコンプレックス試薬組
成物により低濃度から微量の蛋白濃度でこの方法の感度
および色調変化が改良されたからである。さらに意外に
も分析対象物検出具に取り込まれたタグステン酸塩／色
素のコンプレックス試薬組成物により尿中また他の試験
試料中の蛋白濃度がＯｍｇ／ ｄｆ！から約３０ ｍｇ
／ ｄｆ！の間またＯｍｇ／ｄＩから約５ ｒｎｇｌ
ｄｌの間、約５ｍｇ／ｄｆ！から約１０ ｍｇ／ ｄｉ
の間のような低濃度から微量の蛋白の検出およびポ１１
定が可能である。
それゆえに、本発明の目的は、液体中の化学物質の相対
濃度を測定するための新規なかつ改良された方法及び組
成物を提供することである。
濃度を測定するための新規なかつ改良された方法及び組
成物を提供することである。
本発明の別の目的は、尿または他の試験試料の蛋白を試
験するための、簡便で正確、信頼性、再現性のある方法
を供給することである。
験するための、簡便で正確、信頼性、再現性のある方法
を供給することである。
本発明の別の目的は、尿または他の試験試料の低濃度お
よび微量の蛋白レベルを試験するための、簡便で正確、
信頼性、再現性のある方法を供給することである。
よび微量の蛋白レベルを試験するための、簡便で正確、
信頼性、再現性のある方法を供給することである。
本発明の別の目的は、試験液中の蛋白質と相互作用して
、試験片の色の変化のような視認可能な変化を生成する
新規なかつ改良された蛋白質相互作用試験具を提供する
ことである。
、試験片の色の変化のような視認可能な変化を生成する
新規なかつ改良された蛋白質相互作用試験具を提供する
ことである。
本発明の別の目的は、低濃度から微量の蛋白の検出およ
び測定を可能にするために十分な感度および視覚的に十
分判定可能な色調変化を与える尿または他の試験試料液
中試験方法を提供することである。
び測定を可能にするために十分な感度および視覚的に十
分判定可能な色調変化を与える尿または他の試験試料液
中試験方法を提供することである。
さらに、本発明の別の目的は、約１０ｍｇ／ａ以下の蛋
白濃度に対して感度が良く、ＯＩＩ１ｇ／Ｉｌ／Ｉ！か
ら約２０００ｍｇ／ｄ）、特にＯｍｇ／ ｄｌ！から約
３０ｍｇ／微量の蛋白レベルの間を半定量的に識別する
尿または他の試験試料液の試験方法を提供することであ
る。
白濃度に対して感度が良く、ＯＩＩ１ｇ／Ｉｌ／Ｉ！か
ら約２０００ｍｇ／ｄ）、特にＯｍｇ／ ｄｌ！から約
３０ｍｇ／微量の蛋白レベルの間を半定量的に識別する
尿または他の試験試料液の試験方法を提供することであ
る。
本発明の別の目的は、指示試薬組成物を用いた尿または
他の試験液の試験方法を提供することである。
他の試験液の試験方法を提供することである。
本発明の別の目的は、蛋白と相互作用を示して検出およ
び測定可能な色調変化を起こし、試験試料中の蛋白の存
在および濃度を測定することができる指示試薬組成物を
用いる尿または伯の試験液の試験方法を供給することで
ある。
び測定可能な色調変化を起こし、試験試料中の蛋白の存
在および濃度を測定することができる指示試薬組成物を
用いる尿または伯の試験液の試験方法を供給することで
ある。
本発明の別の目的は、蛋白と相互作用を示して視覚的及
びｉｌｌ械的に識別できる色調変化を起こし、尿中また
は他の試料液中の蛋白濃度を、０ｍｇ１ｄｉから約２０
００ｍｇ／ｄ１の間、特にＯｍｇ／ｄｆ！から約３０ｍ
ｇ／ａ！Ｉ！の間のレベルで半定量的に決定することが
できる指示試薬組成物を供給することである。
びｉｌｌ械的に識別できる色調変化を起こし、尿中また
は他の試料液中の蛋白濃度を、０ｍｇ１ｄｉから約２０
００ｍｇ／ｄ１の間、特にＯｍｇ／ｄｆ！から約３０ｍ
ｇ／ａ！Ｉ！の間のレベルで半定量的に決定することが
できる指示試薬組成物を供給することである。
本発明の別の目的は、タングステン酸塩／色素のコンプ
レックスを含む指示試薬組成物を乾燥した状態の分析対
象物検出具に取り込むことにより蛋白を試験する方法を
供給することである。
レックスを含む指示試薬組成物を乾燥した状態の分析対
象物検出具に取り込むことにより蛋白を試験する方法を
供給することである。
さらに、本発明の別の目的は、試験試料中の蛋白と相互
作用を示すことが可能な試薬組成物を取り込んだキャリ
ヤーマトリクスを含む分析物試験片を用いることにより
新しく改良された蛋白の試験方法を供給することである
。ここで、キャリヤーマトリクスは濾紙のような吸水性
マトリックスまたは、浸透性のある重合物質でできてい
る層、フィルム、膜のような非吸水性マトリックスから
成っている。
作用を示すことが可能な試薬組成物を取り込んだキャリ
ヤーマトリクスを含む分析物試験片を用いることにより
新しく改良された蛋白の試験方法を供給することである
。ここで、キャリヤーマトリクスは濾紙のような吸水性
マトリックスまたは、浸透性のある重合物質でできてい
る層、フィルム、膜のような非吸水性マトリックスから
成っている。
さらに本発明の別の目的は、蛋白反応が行われる新規か
つ予期されなかった正確な試験片を作り上げるためにキ
ャリヤーマトリクスにダンゲステン酸塩／色素のコンプ
レックス試薬組成物を取り込むことが可能な新しく改良
された乾燥した状態の試験片を供給することである。
つ予期されなかった正確な試験片を作り上げるためにキ
ャリヤーマトリクスにダンゲステン酸塩／色素のコンプ
レックス試薬組成物を取り込むことが可能な新しく改良
された乾燥した状態の試験片を供給することである。
本発明の先および残りの目的、有利な点ならびに新しい
特徴は、次の発明の詳細な説明より明らかになるだろう
。
特徴は、次の発明の詳細な説明より明らかになるだろう
。
元旦じぢ笈男
本発明の方法に従うと、尿中および他の試験試料液中の
アルブミンのような蛋白、特に低濃度から微量の蛋白濃
度をタングステン酸塩／色素のコンプレックスを含む指
示試薬組成物を用いることにより、定性的および半定量
的に判断することが可能である。タングステン酸塩／色
素のコンプレックスを含む指示試薬組成物を用いること
により、試験試料液中の低濃度から微量の蛋白レベルを
試験するためにその蛋白レベル間の蛋白に対する十分な
感度と、視覚的に十分判定できる色調変化が可能となる
１本発明の方法により改良された感度と色調変化は低い
蛋白レベルまで可能となり特に尿の試験で有効である６ 現在、市販されている試験は、Ｏｍｇ／ ａから約３０
ｍｇ／ｄｆ！、特にＯｍｇ／ｆＩから約１５ｍｇ／ｄＩ
の範囲の蛋白レベル間を識別することは不可能である。
アルブミンのような蛋白、特に低濃度から微量の蛋白濃
度をタングステン酸塩／色素のコンプレックスを含む指
示試薬組成物を用いることにより、定性的および半定量
的に判断することが可能である。タングステン酸塩／色
素のコンプレックスを含む指示試薬組成物を用いること
により、試験試料液中の低濃度から微量の蛋白レベルを
試験するためにその蛋白レベル間の蛋白に対する十分な
感度と、視覚的に十分判定できる色調変化が可能となる
１本発明の方法により改良された感度と色調変化は低い
蛋白レベルまで可能となり特に尿の試験で有効である６ 現在、市販されている試験は、Ｏｍｇ／ ａから約３０
ｍｇ／ｄｆ！、特にＯｍｇ／ｆＩから約１５ｍｇ／ｄＩ
の範囲の蛋白レベル間を識別することは不可能である。
低い蛋白濃度のレベル間の識別は技術の点で臨床的に重
要である。なぜならば、約１０ｍｇ／ａから約２０ｍｇ
／ａ’の範囲は、健康人の正常な尿蛋白レベルとして用
いられるからである。それゆえに、０から約１０ ｍｇ
／ ＩＰの尿蛋白レベルは生理学的不均衡を引き起こす
可能性のある蛋白不足を示す可能性がある。そして約２
０ｍｇ／（１以上の尿蛋白レベルは、病的状態を意味す
る過剰な蛋白排泄を示す可能性がある。約１００ｍｇ／
ｄＪ！から約２０００ｍｇ／ｄＩのような比較的高い範
囲の尿の蛋白濃度に関して本発明の方法は、尿の蛋白濃
度に対して、改良された感度および色調判定を今まで通
り供給することができるということを注意すべきである
。しかしながら、高い蛋白レベルは確かにそれ以上の検
査が必要な生理学的に異常な状態を示すけれども、臨床
的な利点は、この濃度範囲で、さほど大きいものではな
い。
要である。なぜならば、約１０ｍｇ／ａから約２０ｍｇ
／ａ’の範囲は、健康人の正常な尿蛋白レベルとして用
いられるからである。それゆえに、０から約１０ ｍｇ
／ ＩＰの尿蛋白レベルは生理学的不均衡を引き起こす
可能性のある蛋白不足を示す可能性がある。そして約２
０ｍｇ／（１以上の尿蛋白レベルは、病的状態を意味す
る過剰な蛋白排泄を示す可能性がある。約１００ｍｇ／
ｄＪ！から約２０００ｍｇ／ｄＩのような比較的高い範
囲の尿の蛋白濃度に関して本発明の方法は、尿の蛋白濃
度に対して、改良された感度および色調判定を今まで通
り供給することができるということを注意すべきである
。しかしながら、高い蛋白レベルは確かにそれ以上の検
査が必要な生理学的に異常な状態を示すけれども、臨床
的な利点は、この濃度範囲で、さほど大きいものではな
い。
さらに、尿を試験することのほかに、本発明の方法およ
び組成物により、血漿中または血清中のアルブミンの存
在および半定量的な濃度、ならびにその上さらに一般的
に多くの他のアルブミン含有液のアルブミン量を決定す
るためにも用いることが可能である、ということが明ら
かになるだろう。本発明の別の重要な特徴に従って本発
明の方法及び組成物により、尿中および他の試験試料液
中の蛋白、特に低濃度から微量の蛋白の存在および濃度
を決定するために、水溶性の液体状態での試験ならびに
本発明の利点を、最大限に活用するための乾燥した状態
での試験パッド試験のどちらでも用いることができる。
び組成物により、血漿中または血清中のアルブミンの存
在および半定量的な濃度、ならびにその上さらに一般的
に多くの他のアルブミン含有液のアルブミン量を決定す
るためにも用いることが可能である、ということが明ら
かになるだろう。本発明の別の重要な特徴に従って本発
明の方法及び組成物により、尿中および他の試験試料液
中の蛋白、特に低濃度から微量の蛋白の存在および濃度
を決定するために、水溶性の液体状態での試験ならびに
本発明の利点を、最大限に活用するための乾燥した状態
での試験パッド試験のどちらでも用いることができる。
試験試料中の蛋白の存在および濃度を決定するために、
色素と結合する技術を用いる場合、タングステン酸塩／
色素のコンプレックスを含む試薬組成物により、低濃度
から微量の蛋白濃度に対して、感度が上がるよう改良さ
れ、視覚的に色調を判定するということが、予想外にも
わかった。タングステン酸塩／色素のコンプレックスを
用いる色素と結合する技術により、特に低濃度から微量
の蛋白濃度に対してさらに正確で信頼性があり、臨床的
に意味のある半定量的試験が可能である。
色素と結合する技術を用いる場合、タングステン酸塩／
色素のコンプレックスを含む試薬組成物により、低濃度
から微量の蛋白濃度に対して、感度が上がるよう改良さ
れ、視覚的に色調を判定するということが、予想外にも
わかった。タングステン酸塩／色素のコンプレックスを
用いる色素と結合する技術により、特に低濃度から微量
の蛋白濃度に対してさらに正確で信頼性があり、臨床的
に意味のある半定量的試験が可能である。
現在蛋白試験に用いられている色素は、適当な一定ｐＨ
に維持している時に、蛋白誤差現象が原因の蛋白との相
互作用を示し、色調変化を起こす。蛋白誤差現象は、Ｋ
ｅｓｔｏｎの米国特許番号３．４８５．５８７に詳しく
記載されている。その特許には蛋白誤差現象を観察する
ために必要なあらゆる色素、正確なｐＨ１および緩衝液
が発表されている。 Ｋｅｓｔｏｎの特許に、基本的に
は尿中の総蛋白量を試験するために用いられる現在の乾
燥した状態の試験片が記載されている。これらの総蛋白
試験片は、−射的にｐＨ５以下の強酸で通常色調変化を
起こす発色指示薬および発色指示薬のｐＨを、色素が色
調変化を起こすｐＨよりわずかに低く維持するための緩
衝液を含む０発色指示薬の十分な緩衝作用により、試験
試料と接触して起こるｐＨ変化に帰因するよりむしろ、
蛋白との相互作用に帰因する色素の色調変化が、本質的
に保証される。
に維持している時に、蛋白誤差現象が原因の蛋白との相
互作用を示し、色調変化を起こす。蛋白誤差現象は、Ｋ
ｅｓｔｏｎの米国特許番号３．４８５．５８７に詳しく
記載されている。その特許には蛋白誤差現象を観察する
ために必要なあらゆる色素、正確なｐＨ１および緩衝液
が発表されている。 Ｋｅｓｔｏｎの特許に、基本的に
は尿中の総蛋白量を試験するために用いられる現在の乾
燥した状態の試験片が記載されている。これらの総蛋白
試験片は、−射的にｐＨ５以下の強酸で通常色調変化を
起こす発色指示薬および発色指示薬のｐＨを、色素が色
調変化を起こすｐＨよりわずかに低く維持するための緩
衝液を含む０発色指示薬の十分な緩衝作用により、試験
試料と接触して起こるｐＨ変化に帰因するよりむしろ、
蛋白との相互作用に帰因する色素の色調変化が、本質的
に保証される。
特開昭６１−１５５７５７ （１９８６）には、試料液
中の蛋白を試験するために、モリブデン酸塩／色素のコ
ンプレックスとキレ一ト剤またはある金属イオンのどち
らかとの効果について記載されている。しかしながら、
先に述べたように、日本の方法は試料液には同量の蛋白
を含むが、異なるイオン強度（比重）により、異なる蛋
白試験が行なわれることが予測される強烈なイオン強度
（比重）の障害を受けるものである。しかしながら、本
発明の重要な特徴に従って、イオン強度（比重）による
障害は、試薬組成物中の指示成分としてタングステン酸
塩／色素のコンプレックスを用いることにより弱められ
るということを示してきた。予想外にもタングステン酸
塩／色素のコンプレックスにより、日本特許で発表され
たモリブデン酸塩／色素のコンプレックスによる方法よ
りも試料液中の総蛋白量のより正確で信頼性のある試験
が得られる。より確かな蛋白試験のほかに本発明のタン
グステン酸塩／色素のコンプレックスによる方法はモリ
ブデン酸塩／色素のコンプレックスによる方法よりも４
倍から５倍早く試験結果を与える。それゆえに、低濃度
から微量の蛋白濃度ですら本質的に即座に蛋白試験結果
を与えるために家庭および実験室で行うことのできる、
早く、正確で再現性および信頼性のある蛋白試験の方法
が可能である。
中の蛋白を試験するために、モリブデン酸塩／色素のコ
ンプレックスとキレ一ト剤またはある金属イオンのどち
らかとの効果について記載されている。しかしながら、
先に述べたように、日本の方法は試料液には同量の蛋白
を含むが、異なるイオン強度（比重）により、異なる蛋
白試験が行なわれることが予測される強烈なイオン強度
（比重）の障害を受けるものである。しかしながら、本
発明の重要な特徴に従って、イオン強度（比重）による
障害は、試薬組成物中の指示成分としてタングステン酸
塩／色素のコンプレックスを用いることにより弱められ
るということを示してきた。予想外にもタングステン酸
塩／色素のコンプレックスにより、日本特許で発表され
たモリブデン酸塩／色素のコンプレックスによる方法よ
りも試料液中の総蛋白量のより正確で信頼性のある試験
が得られる。より確かな蛋白試験のほかに本発明のタン
グステン酸塩／色素のコンプレックスによる方法はモリ
ブデン酸塩／色素のコンプレックスによる方法よりも４
倍から５倍早く試験結果を与える。それゆえに、低濃度
から微量の蛋白濃度ですら本質的に即座に蛋白試験結果
を与えるために家庭および実験室で行うことのできる、
早く、正確で再現性および信頼性のある蛋白試験の方法
が可能である。
本発明による利点を達成するために、指示試薬組成物は
、発色指示薬としてタングステン酸塩／色素のコンプレ
ックスを含むということが必要である。従来技術および
現在利用可能な市販されている試験の両方と比べて、試
薬組成物の指示成分として、タングステン酸塩／色素の
コンプレックスを混入することは、視覚的にも、機械的
にも、蛋白と指示薬の相互作用により起こる色調変化の
判定および識別を改良する。それゆえに、特に低濃度か
ら微量の蛋白濃度に対する蛋白試験の感度が増す。
、発色指示薬としてタングステン酸塩／色素のコンプレ
ックスを含むということが必要である。従来技術および
現在利用可能な市販されている試験の両方と比べて、試
薬組成物の指示成分として、タングステン酸塩／色素の
コンプレックスを混入することは、視覚的にも、機械的
にも、蛋白と指示薬の相互作用により起こる色調変化の
判定および識別を改良する。それゆえに、特に低濃度か
ら微量の蛋白濃度に対する蛋白試験の感度が増す。
本発明の方法は前に述べた蛋白誤差現象を利用するもの
である。しかしながら、試薬組成物中の発色指示薬とし
て、タングステン酸塩／色素のコンプレックスを混入す
ることにより低濃度から微量の蛋白を検出および測定す
ることが可能である。前に述べたようにＰＨ指示薬が蛋
白と相互作用を示す時、その指示薬の見かけのｐＫａは
変化し、いわゆる蛋白誤差現象が生じることにより色調
変化が起こる。同様に、本発明の重要な特徴に従ってタ
ングステン酸塩／色素のコンプレックスは同様に試験試
料中の蛋白と相互作用を示し、さらにはっきりした色の
展開が成される。それゆえに、蛋白との相互作用による
試験の感度ならびに色調の変化および識別の改良が成さ
れ、それにより、より低い蛋白濃度の測定および検出が
可能となる。
である。しかしながら、試薬組成物中の発色指示薬とし
て、タングステン酸塩／色素のコンプレックスを混入す
ることにより低濃度から微量の蛋白を検出および測定す
ることが可能である。前に述べたようにＰＨ指示薬が蛋
白と相互作用を示す時、その指示薬の見かけのｐＫａは
変化し、いわゆる蛋白誤差現象が生じることにより色調
変化が起こる。同様に、本発明の重要な特徴に従ってタ
ングステン酸塩／色素のコンプレックスは同様に試験試
料中の蛋白と相互作用を示し、さらにはっきりした色の
展開が成される。それゆえに、蛋白との相互作用による
試験の感度ならびに色調の変化および識別の改良が成さ
れ、それにより、より低い蛋白濃度の測定および検出が
可能となる。
一１ｌｌＱ的に本発明の方法で用いられる試薬組成物中
の指示成分は、タングステン酸塩と色素との間の相互作
用の結果として形成されたコンプレックスである。タン
グステン酸塩／色素のコンプレックスは蛋白と相互作用
を示し、この蛋白との相互作用に応じた色調変化の検出
および測定が可能であることが第一に重要なことである
。指示試薬組成物に用いられるタングステン酸塩／色素
のコンプレックスは、試験試料中の非蛋白成分との化学
的または物理的な競合作用に対立して選択的に蛋白との
相互作用を示さなければならない、感知できる非蛋白成
分との競合作用が試験試料中の蛋白の存在と量に関して
、偽りのおよび誤った試験に導く可能性がある１例えば
適当なｐＨ調整および指示試薬組成物の緩衝化は、試験
試料が緩衝液の影響に打ち勝つ強アルカリである場合を
除き、あらゆる場合でｐＨ変化のために起こる色調変化
の可能性を排除する０本発明の方法に従ってタングステ
ン酸塩／色素のコンプレックスのｐＨは、タングステン
酸塩／色素のコンプレックスが、最大限に色調変化を起
こすために色調を変えるｐＨ範囲よりわずかに低いｐＨ
値に調整され、緩衝化される。ゆ＾に最も重要である評
価感度が増し、最もはっきりとした色調判定に改良する
。それゆえに、試験試料中の低濃度から微量の蛋白濃度
が。
の指示成分は、タングステン酸塩と色素との間の相互作
用の結果として形成されたコンプレックスである。タン
グステン酸塩／色素のコンプレックスは蛋白と相互作用
を示し、この蛋白との相互作用に応じた色調変化の検出
および測定が可能であることが第一に重要なことである
。指示試薬組成物に用いられるタングステン酸塩／色素
のコンプレックスは、試験試料中の非蛋白成分との化学
的または物理的な競合作用に対立して選択的に蛋白との
相互作用を示さなければならない、感知できる非蛋白成
分との競合作用が試験試料中の蛋白の存在と量に関して
、偽りのおよび誤った試験に導く可能性がある１例えば
適当なｐＨ調整および指示試薬組成物の緩衝化は、試験
試料が緩衝液の影響に打ち勝つ強アルカリである場合を
除き、あらゆる場合でｐＨ変化のために起こる色調変化
の可能性を排除する０本発明の方法に従ってタングステ
ン酸塩／色素のコンプレックスのｐＨは、タングステン
酸塩／色素のコンプレックスが、最大限に色調変化を起
こすために色調を変えるｐＨ範囲よりわずかに低いｐＨ
値に調整され、緩衝化される。ゆ＾に最も重要である評
価感度が増し、最もはっきりとした色調判定に改良する
。それゆえに、試験試料中の低濃度から微量の蛋白濃度
が。
さらに早く正確に試験される。
さらに指示試薬組成物中のタングステン酸塩／色素のコ
ンプレックスに用いられている色素は、試験試料中の比
較的低い蛋白濃度を検出でき色調変化を測定できるよう
な十分に強い色調変化を起こさなければならない０例え
ば改良された色調判定および試験感度の増加の利点はも
しタングステン酸塩／色素のコンプレックスが、弱い色
調から強い色調に十分に変化を起こさないならば、意味
がなくなり最小のものとなる。それゆえに本発明を十分
有効なものにするために、指示試薬混合中のタングステ
ン酸塩／色素のコンプレックスに用いられる色素は、そ
の色素が強い色調から弱い色調にまたは弱い色調から強
い色調に十分変化を起こし、そして試験者が視覚的にま
たは機械的に試験試料中の蛋白量を検出し、測定できる
ようなものが選ばれる。
ンプレックスに用いられている色素は、試験試料中の比
較的低い蛋白濃度を検出でき色調変化を測定できるよう
な十分に強い色調変化を起こさなければならない０例え
ば改良された色調判定および試験感度の増加の利点はも
しタングステン酸塩／色素のコンプレックスが、弱い色
調から強い色調に十分に変化を起こさないならば、意味
がなくなり最小のものとなる。それゆえに本発明を十分
有効なものにするために、指示試薬混合中のタングステ
ン酸塩／色素のコンプレックスに用いられる色素は、そ
の色素が強い色調から弱い色調にまたは弱い色調から強
い色調に十分変化を起こし、そして試験者が視覚的にま
たは機械的に試験試料中の蛋白量を検出し、測定できる
ようなものが選ばれる。
本発明の方法で、最も有効に用いられるタングステン酸
塩／色素のコンプレックスの色素は、それぞれ下式■お
よびＩＩで示される色素ピロカテコールバイオレットお
よびピロガロールレッドと同様の構造をもつポリヒドロ
キシベンゼンスルホンフタレイン型のものであることが
見出された。
塩／色素のコンプレックスの色素は、それぞれ下式■お
よびＩＩで示される色素ピロカテコールバイオレットお
よびピロガロールレッドと同様の構造をもつポリヒドロ
キシベンゼンスルホンフタレイン型のものであることが
見出された。
に用いることができる。
ピロカテコールバイオレットとピロガロールレッドのほ
かに、ポリヒドロキシ置換のベンゼンとスルホンフタレ
イン型の構造をもつ色素は、ブロモピロガロールレッド
、キシレンオレンジ、およびピロガロールフタレインな
らびにそれらの混合物がある。同様に、下式ＩＩＩで示
すピロガロールフタレインのようなポリヒドロキシベン
ゼンフタレイン型の指示薬、及び、０−ヒドロキシヒド
ロキノンフタレインもまた本発明の方法及び組成物これ
らのポリヒドロキシベンゼンスルホンフタレイン型の色
素およびポリヒドロキシベンゼンフタレイン型の色素は
、タングステン酸塩のような金属酸化物とコンプレック
スを形成することができ、金属酸化物とコンプレックス
を作ったあと蛋白と結合することができる。そしてコン
プレックスを作り蛋白と結合したあと試料中の低濃度か
ら微量の蛋白量を含む試験試料中の蛋白量を、視覚的お
よび機械的に検出および測定を可能にするのに十分な色
調変化を起こすことができる。蛋白と結合する能力、試
験試料の色、色調変化の強度および化学的適合性のよう
ないくつかの化学的および物理的なパラメーターに依存
して、特にポリヒドロキシベンゼンスルホンフタレイン
型の色素またはポリヒドロキシベンゼンフタレイン型の
色素が、試薬組成物中の指示成分を形成するためにタン
グステン酸塩とコンプレックスを作る目的で選ばれる。
かに、ポリヒドロキシ置換のベンゼンとスルホンフタレ
イン型の構造をもつ色素は、ブロモピロガロールレッド
、キシレンオレンジ、およびピロガロールフタレインな
らびにそれらの混合物がある。同様に、下式ＩＩＩで示
すピロガロールフタレインのようなポリヒドロキシベン
ゼンフタレイン型の指示薬、及び、０−ヒドロキシヒド
ロキノンフタレインもまた本発明の方法及び組成物これ
らのポリヒドロキシベンゼンスルホンフタレイン型の色
素およびポリヒドロキシベンゼンフタレイン型の色素は
、タングステン酸塩のような金属酸化物とコンプレック
スを形成することができ、金属酸化物とコンプレックス
を作ったあと蛋白と結合することができる。そしてコン
プレックスを作り蛋白と結合したあと試料中の低濃度か
ら微量の蛋白量を含む試験試料中の蛋白量を、視覚的お
よび機械的に検出および測定を可能にするのに十分な色
調変化を起こすことができる。蛋白と結合する能力、試
験試料の色、色調変化の強度および化学的適合性のよう
ないくつかの化学的および物理的なパラメーターに依存
して、特にポリヒドロキシベンゼンスルホンフタレイン
型の色素またはポリヒドロキシベンゼンフタレイン型の
色素が、試薬組成物中の指示成分を形成するためにタン
グステン酸塩とコンプレックスを作る目的で選ばれる。
指示試薬組成物のタングステン酸塩／色素のコンプレッ
クスの成分中の発色化合物として遭ばれる実際のポリヒ
ドロキシベンゼンスルホンフタレイン型の色素またはポ
リヒドロキシベンゼンフタレイン型の色素は、最大限の
視覚的な色調判定および最大限の感度をもつ蛋白試験を
行うために、試験キットの設計の当業者により決定する
ことができる６本発明の指示試薬組成物のタングステン
酸塩／色素のコンプレックス成分に用いられるポリヒド
ロキシベンゼンスルホンフタレイン型の色素およびポリ
ヒドロキシベンゼンフタレイン型の色素は、当業者に周
知な方法によって製造することができる。さらに、本発
明の方法で有用な数種の色素化合物は現在市販され利用
可能な１ａ知の指示薬である。
クスの成分中の発色化合物として遭ばれる実際のポリヒ
ドロキシベンゼンスルホンフタレイン型の色素またはポ
リヒドロキシベンゼンフタレイン型の色素は、最大限の
視覚的な色調判定および最大限の感度をもつ蛋白試験を
行うために、試験キットの設計の当業者により決定する
ことができる６本発明の指示試薬組成物のタングステン
酸塩／色素のコンプレックス成分に用いられるポリヒド
ロキシベンゼンスルホンフタレイン型の色素およびポリ
ヒドロキシベンゼンフタレイン型の色素は、当業者に周
知な方法によって製造することができる。さらに、本発
明の方法で有用な数種の色素化合物は現在市販され利用
可能な１ａ知の指示薬である。
本発明の別の重要な特徴によれば、試薬組成物中のタン
グステン酸ｔＭ／色素のコンプレックスを作るために、
ポリヒドロキシベンゼンスルホンフタレイン型の色素ま
たはポリヒドロキシベンゼンフタレイン型の色素をタン
グステン酸塩と結合させなければならない、特開昭６１
−１５５７５７には、モリブデン酸塩／色素のコンプレ
ックスを用いる蛋白試験が記載されている。この試験に
は、ポリヒドロキシベンゼンスルホンフタレイン型の色
素を同様に用いているが、モリブデン酸塩を用いている
ためにブランク反応を抑えるためにキレート剤または金
属イオンを混合物中に存在させる必要がある。さらに、
日本の方法は、試験試料のイオン強度および比重の変化
が原因による妨害が起こるためにその正確さに疑いがか
けられている。また、モリブデン酸塩を用いる方法は、
試験片に十分色が展開するために極めて長い接触時間が
必要である。意外にも、タングステン酸塩を用いること
により、試験試料中のイオン強度および比重による妨害
の問題から逃れ、試験片に十分色が展開するために必要
な時間を劇的に短縮し、実際に見逃すことのできないブ
ランク反応を抑えるためのキレート剤または金属イオン
の存在を必要としない。
グステン酸ｔＭ／色素のコンプレックスを作るために、
ポリヒドロキシベンゼンスルホンフタレイン型の色素ま
たはポリヒドロキシベンゼンフタレイン型の色素をタン
グステン酸塩と結合させなければならない、特開昭６１
−１５５７５７には、モリブデン酸塩／色素のコンプレ
ックスを用いる蛋白試験が記載されている。この試験に
は、ポリヒドロキシベンゼンスルホンフタレイン型の色
素を同様に用いているが、モリブデン酸塩を用いている
ためにブランク反応を抑えるためにキレート剤または金
属イオンを混合物中に存在させる必要がある。さらに、
日本の方法は、試験試料のイオン強度および比重の変化
が原因による妨害が起こるためにその正確さに疑いがか
けられている。また、モリブデン酸塩を用いる方法は、
試験片に十分色が展開するために極めて長い接触時間が
必要である。意外にも、タングステン酸塩を用いること
により、試験試料中のイオン強度および比重による妨害
の問題から逃れ、試験片に十分色が展開するために必要
な時間を劇的に短縮し、実際に見逃すことのできないブ
ランク反応を抑えるためのキレート剤または金属イオン
の存在を必要としない。
タングステン酸塩コンプレックス中において用いるタン
グステン酸塩は、特に制限はされない。
グステン酸塩は、特に制限はされない。
しかしながら、タングステン酸塩は、ポリヒドロキシベ
ンゼンスルホンフタレイン型の色素またはポリヒドロキ
シベンゼンフタレイン型の色素とコンプレックスを作る
ために、十分水に可溶性でなければならない、さらに、
本発明で用いられるタングステン酸塩の陽イオンは着色
度の高い陽イオンによる試験の妨害を避けるために本質
的に着色されいないことが好まれる。ポリヒドロキシベ
ンゼンスルホンフタレイン型の色素またはポリヒドロキ
シベンゼンフタレイン型の色素とコンプレックスを作る
ために、十分水に可溶性であるタングステン酸塩は、タ
ングステン酸アンモニウム、パラタングステン酸アンモ
ニウム、タングステン酸ビスマス、タングステン酸カド
ミウム、タングステン酸カルシウム、タングステン酸リ
チウム、タングステン酸マグネシウム、タングステン酸
カリウム、メタタングステン酸ナトリウム、タングステ
ン酸ナトリウム、タングステン酸ストロンチウム、タン
グステン酸亜鉛、アルカリ金属、アンモニウム、ならび
にアルキル、ジアルキル、トリアルキル、またはテトラ
アルキルアンモニウム陽イオンをもつホスホタングステ
ン酸塩、タングステン酸アルキルアンモニオウムまたは
ヒドロキシアルキルアンモニウム、タングステン酸ジア
ルキルアンモニウムまたはジヒドロキシアルキルアンモ
ニウム、そしてタングステン酸トリアルキルアンモニウ
ムまたはトリヒドロキシアルキルアンモニムまたはそれ
らを組み合わせたものがあるがこれらに制限されない。
ンゼンスルホンフタレイン型の色素またはポリヒドロキ
シベンゼンフタレイン型の色素とコンプレックスを作る
ために、十分水に可溶性でなければならない、さらに、
本発明で用いられるタングステン酸塩の陽イオンは着色
度の高い陽イオンによる試験の妨害を避けるために本質
的に着色されいないことが好まれる。ポリヒドロキシベ
ンゼンスルホンフタレイン型の色素またはポリヒドロキ
シベンゼンフタレイン型の色素とコンプレックスを作る
ために、十分水に可溶性であるタングステン酸塩は、タ
ングステン酸アンモニウム、パラタングステン酸アンモ
ニウム、タングステン酸ビスマス、タングステン酸カド
ミウム、タングステン酸カルシウム、タングステン酸リ
チウム、タングステン酸マグネシウム、タングステン酸
カリウム、メタタングステン酸ナトリウム、タングステ
ン酸ナトリウム、タングステン酸ストロンチウム、タン
グステン酸亜鉛、アルカリ金属、アンモニウム、ならび
にアルキル、ジアルキル、トリアルキル、またはテトラ
アルキルアンモニウム陽イオンをもつホスホタングステ
ン酸塩、タングステン酸アルキルアンモニオウムまたは
ヒドロキシアルキルアンモニウム、タングステン酸ジア
ルキルアンモニウムまたはジヒドロキシアルキルアンモ
ニウム、そしてタングステン酸トリアルキルアンモニウ
ムまたはトリヒドロキシアルキルアンモニムまたはそれ
らを組み合わせたものがあるがこれらに制限されない。
本発明の重要な特徴によれば、ポリヒドロキシベンゼン
スルホンフタレイン型およびポリヒドロキシベンゼンフ
タレイン型の色素とコンプレックスを作るために用いる
好ましいタングステン酸塩は、水に高い溶解性を示すも
のである。そして、これらのタングステン酸塩は、非コ
ンプレックス化及び非障害金属およびアンモニウム陽イ
オンを有する６本発明を完全に有利なものにするために
、タングステン酸アンモニウム、タングステン酸カリウ
ム、タングステン酸ナトリウム、タングステン酸リチウ
ム、タングステン酸ストロンチウムおよびアルキルまた
はヒドロキシアルキル置換のタングステン酸アンモニウ
ムあるいはそれらを組み合わせたものが、本発明のタン
グステン酸塩／色素コンプレックスを作るためのタング
ステン酸塩として用いられる。
スルホンフタレイン型およびポリヒドロキシベンゼンフ
タレイン型の色素とコンプレックスを作るために用いる
好ましいタングステン酸塩は、水に高い溶解性を示すも
のである。そして、これらのタングステン酸塩は、非コ
ンプレックス化及び非障害金属およびアンモニウム陽イ
オンを有する６本発明を完全に有利なものにするために
、タングステン酸アンモニウム、タングステン酸カリウ
ム、タングステン酸ナトリウム、タングステン酸リチウ
ム、タングステン酸ストロンチウムおよびアルキルまた
はヒドロキシアルキル置換のタングステン酸アンモニウ
ムあるいはそれらを組み合わせたものが、本発明のタン
グステン酸塩／色素コンプレックスを作るためのタング
ステン酸塩として用いられる。
ポリヒドロキシベンゼンスルホンツクレイン型またはポ
リヒドロキシベンゼンフタレイン型の色素と適当なタン
グステン酸塩とのコンプレックスは尿中または他の試験
試料液中の蛋白、特に低濃度から微量の蛋白の存在およ
び半定量的に蛋白濃度を決定するために改良された方法
で試薬組成物の指示成分として用いられる１本発明の指
示試薬組成物は蛋白誤差現象が原因の色調変化を、視覚
的および機械的のどちらかで識別および測定できるよう
にするために、蛋白と相互作用を示す、しかしながら、
タングステン酸塩／色素コンプレックスのほかに本発明
の指示試薬組成物は、タングステン酸塩／色素コンプレ
ックスがｐＨ変動の結果として色調を変えるのではなく
、試験試料中の蛋白の存在および半定量的に蛋白濃度を
正確に決定するために、蛋白と接触し、相互作用を示す
ことで色調を変えるような十分量の適当な緩衝液を必要
とする。
リヒドロキシベンゼンフタレイン型の色素と適当なタン
グステン酸塩とのコンプレックスは尿中または他の試験
試料液中の蛋白、特に低濃度から微量の蛋白の存在およ
び半定量的に蛋白濃度を決定するために改良された方法
で試薬組成物の指示成分として用いられる１本発明の指
示試薬組成物は蛋白誤差現象が原因の色調変化を、視覚
的および機械的のどちらかで識別および測定できるよう
にするために、蛋白と相互作用を示す、しかしながら、
タングステン酸塩／色素コンプレックスのほかに本発明
の指示試薬組成物は、タングステン酸塩／色素コンプレ
ックスがｐＨ変動の結果として色調を変えるのではなく
、試験試料中の蛋白の存在および半定量的に蛋白濃度を
正確に決定するために、蛋白と接触し、相互作用を示す
ことで色調を変えるような十分量の適当な緩衝液を必要
とする。
さらに、概知のあらゆる種類の緩衝液を本発明の指示試
薬組成物に用いることができるということを説明してき
た。緩衝液の機能は蛋白の存在により、指示試薬組成物
中で要求される色調変化を起こすために十分な一定ｐＨ
に試薬系を維持すること、および蛋白含有試験試料のｐ
Ｈの変動が原因の色調変化を本質的に除去することであ
る。結果として、試薬組成物中に混入する緩衝液の量は
試験試料の性質に依存する。緩衝液の量は、通常的１０
０ｍＭと約５００ｍＭの間にある。特例で緩衝液の量が
、この範囲を越えたりまた下回ったりすることもある。
薬組成物に用いることができるということを説明してき
た。緩衝液の機能は蛋白の存在により、指示試薬組成物
中で要求される色調変化を起こすために十分な一定ｐＨ
に試薬系を維持すること、および蛋白含有試験試料のｐ
Ｈの変動が原因の色調変化を本質的に除去することであ
る。結果として、試薬組成物中に混入する緩衝液の量は
試験試料の性質に依存する。緩衝液の量は、通常的１０
０ｍＭと約５００ｍＭの間にある。特例で緩衝液の量が
、この範囲を越えたりまた下回ったりすることもある。
用いられる緩衝液の性質は指示試薬組成物に混入したタ
ングステン酸塩／色素コンプレックスに依存し、変化す
る。
ングステン酸塩／色素コンプレックスに依存し、変化す
る。
しかしながら、試薬組成物中のタングステン酸塩／色素
コンプレックスは通常ｐＨ約２から約４の範囲、なるべ
くならば約２から３の範囲で色調変化を起こし、−射的
に、この範囲よりほんのわずかに低いｐＨ値に試薬組成
物のｐＨを維持するべきであるということが最適の結果
としてわかった。試薬組成物中のある特定の指示薬に対
して。
コンプレックスは通常ｐＨ約２から約４の範囲、なるべ
くならば約２から３の範囲で色調変化を起こし、−射的
に、この範囲よりほんのわずかに低いｐＨ値に試薬組成
物のｐＨを維持するべきであるということが最適の結果
としてわかった。試薬組成物中のある特定の指示薬に対
して。
綴衝化された適当なｐＨ値を決定し２つの部分から成る
指示試薬組成物に用いることができるような特定の緩衝
液を決定する方法が、Ｋｅｓｔｏｎの米国特許番号３．
４８５．５８７においてみられる。
指示試薬組成物に用いることができるような特定の緩衝
液を決定する方法が、Ｋｅｓｔｏｎの米国特許番号３．
４８５．５８７においてみられる。
この試薬組成物に緩衝液を用いることは好ましいことだ
けれども、緩衝液はすべての場合で必要なわけではない
０例えば、特例として、試験試料が試薬組成物と接触す
る前に、尿または他の試験試料に緩衝液を加えることが
望ましい場合もある。また、試験試料が試薬組成物を一
定ｐＨで維持するために適当な種類の緩衝液を適量あら
かじめ含んでいるものもあり、また、タングステン酸塩
／色素のコンブレシクス試薬組成物がｐＨ変化に対して
鈍感なものもある。そのような場合にタングステン酸塩
／色素のコンプレックスは、指示試薬組成物中で、唯一
の活発な成分である。しかしながら、指示薬タングステ
ン酸塩／色素のコンプレックスおよび緩衝液の性質およ
び機能を実質的に変えず、蛋白成験の妨害をしない界面
活性剤のような任意の成分もまた指示試薬組成物中に含
まれることがあるということを理解するべきである。同
様に他の重要でない成分には、重合化合物、可塑剤、お
よび活性のないベースになる染料がある。
けれども、緩衝液はすべての場合で必要なわけではない
０例えば、特例として、試験試料が試薬組成物と接触す
る前に、尿または他の試験試料に緩衝液を加えることが
望ましい場合もある。また、試験試料が試薬組成物を一
定ｐＨで維持するために適当な種類の緩衝液を適量あら
かじめ含んでいるものもあり、また、タングステン酸塩
／色素のコンブレシクス試薬組成物がｐＨ変化に対して
鈍感なものもある。そのような場合にタングステン酸塩
／色素のコンプレックスは、指示試薬組成物中で、唯一
の活発な成分である。しかしながら、指示薬タングステ
ン酸塩／色素のコンプレックスおよび緩衝液の性質およ
び機能を実質的に変えず、蛋白成験の妨害をしない界面
活性剤のような任意の成分もまた指示試薬組成物中に含
まれることがあるということを理解するべきである。同
様に他の重要でない成分には、重合化合物、可塑剤、お
よび活性のないベースになる染料がある。
尿または他の試験試料と接触して、タングステン酸塩／
色素のコンプレックス指示試薬組成物の色調変化は、蛋
白の存在を表わす、さらに、試験試料により発した色を
、概知の蛋白濃度の水溶液により発した色と比較し関係
づけることにより、試験試料中の蛋白濃度を半定量的に
測定するために色調変化の強さおよび程度が用いられる
６本発明の重要な特徴に従って、試験試料中の少量から
微量の蛋白量を分光光度計または比色計のような色を測
定する器械を使わずに測定し、正確に決定できるように
、指示試薬組成物は、十分に判定および識別できる色調
変化を供給するということを説明してきた。
色素のコンプレックス指示試薬組成物の色調変化は、蛋
白の存在を表わす、さらに、試験試料により発した色を
、概知の蛋白濃度の水溶液により発した色と比較し関係
づけることにより、試験試料中の蛋白濃度を半定量的に
測定するために色調変化の強さおよび程度が用いられる
６本発明の重要な特徴に従って、試験試料中の少量から
微量の蛋白量を分光光度計または比色計のような色を測
定する器械を使わずに測定し、正確に決定できるように
、指示試薬組成物は、十分に判定および識別できる色調
変化を供給するということを説明してきた。
しかしながら、もし望むならば、このような色を測定す
る器械を試験試料と機知のアルブミン濃度の水溶液との
開の色調の程度および強さの違いを１ｌｆｌ定するため
に用いることができる。
る器械を試験試料と機知のアルブミン濃度の水溶液との
開の色調の程度および強さの違いを１ｌｆｌ定するため
に用いることができる。
それゆえに、タングステン酸塩／色素のコンプレックス
を含む適当に緩衝化された指示試薬組成物を用いる蛋白
試験はその試験の正確さおよび信頼性を改良し、またそ
の試験で医師の信頼を増す、さらに、実験室で熟練した
医師または技術者に対立して訓練されてない患者により
家庭で行われる多くの尿の蛋白試験のため、尿中に低濃
度から微量の蛋白を含むその蛋白量に対する正確で信頼
性のある半定量的な試験方法を供給することが避けられ
ない。
を含む適当に緩衝化された指示試薬組成物を用いる蛋白
試験はその試験の正確さおよび信頼性を改良し、またそ
の試験で医師の信頼を増す、さらに、実験室で熟練した
医師または技術者に対立して訓練されてない患者により
家庭で行われる多くの尿の蛋白試験のため、尿中に低濃
度から微量の蛋白を含むその蛋白量に対する正確で信頼
性のある半定量的な試験方法を供給することが避けられ
ない。
一般に指示薬は、酸性の低いｐＨ値で蛋白とより強い相
互作用を示すので、酸性のｐＨで色調変化を起こす指示
薬を用い、酸性のｐＨで蛋白の試験を行ってきた。陽性
に荷電した陽イオン的な蛋白分子と、陰性に荷電した陰
イオン的な指示薬分子の間の強い引力のため、さらに酸
性状態は、部分的に蛋白を変性させるように動きゆえに
指示薬と相互作用を示す蛋白の能力を増加するために、
低いｐＨ値で、指示薬と蛋白の間の相互作用が増加する
。それゆ＾に、指示試薬組成物のタングステンｒＪ１塩
／色素のコンプレックスは、酸性のｐＨに調整され、維
持される。−射的に、この方式のｐＨは、約２と約４の
間に調整され維持される。
互作用を示すので、酸性のｐＨで色調変化を起こす指示
薬を用い、酸性のｐＨで蛋白の試験を行ってきた。陽性
に荷電した陽イオン的な蛋白分子と、陰性に荷電した陰
イオン的な指示薬分子の間の強い引力のため、さらに酸
性状態は、部分的に蛋白を変性させるように動きゆえに
指示薬と相互作用を示す蛋白の能力を増加するために、
低いｐＨ値で、指示薬と蛋白の間の相互作用が増加する
。それゆ＾に、指示試薬組成物のタングステンｒＪ１塩
／色素のコンプレックスは、酸性のｐＨに調整され、維
持される。−射的に、この方式のｐＨは、約２と約４の
間に調整され維持される。
そして、本発明を、十分有効なものにするために、ｐＨ
は約２．５と３５の間に調整され、維持される。
は約２．５と３５の間に調整され、維持される。
本発明の方法及び組成物により成し遂げられた新しい予
想外の結果を説明するために、タングステン酸アンモニ
ウムとポリヒドロキシベンゼンスルホンフタレイン型の
色素であるピロカテコールバイオレットとの間に形成さ
れるフンブレックスを含む指示試薬組成物が用意され、
そして、試験試１４中の総蛋白に対する水溶性の液体状
態での試験に用いられた。タングステン酸塩・ピロカテ
コールバイオレットのコンプレックスは、蛋白と相互作
用を示し、ｐＨ約２．５で色調変化を起こす、タングス
テン酸塩・ピロカテコールバイオレットのコンプレック
スの水溶液は、蛋白が存在しない場合暗い紫から茶色を
呈している。そして存在する蛋白が増加すると、赤味が
かった茶色から黄色、淡緑色、緑色、濃青色の順で色が
変化する。結果としてタングステン酸アンモニウムのよ
うなタングステン酸塩の正確な量を含む指示試薬組成物
と、ピロカテコールバイオレットは、標準蛋白水溶液と
接触して表１に要約される色調変化を起こす適当な接衝
液で適当なｐＨに調整および維持される０表１に要約さ
れた色調変化は、５ ｍｇ／ ｄｉのアルブミンを含む
試験試料を、ＯＩＴ１ｇ／ｄｌの試験試料および１０ｍ
ｇ／ｄＩの試験試料と識別することができるということ
を示している。これらの色の識別は、指示試薬組成物中
の色素・タングステン酸塩のコンプレックスの濃度が上
がるほど、さらに劇的になる。それゆえに、本発明に従
って、試験試料中の少量から微量の蛋白を測定し、はぼ
等しいアルブミンを含む試験試料と識別する組成物及び
方法が成し遂げられる。
想外の結果を説明するために、タングステン酸アンモニ
ウムとポリヒドロキシベンゼンスルホンフタレイン型の
色素であるピロカテコールバイオレットとの間に形成さ
れるフンブレックスを含む指示試薬組成物が用意され、
そして、試験試１４中の総蛋白に対する水溶性の液体状
態での試験に用いられた。タングステン酸塩・ピロカテ
コールバイオレットのコンプレックスは、蛋白と相互作
用を示し、ｐＨ約２．５で色調変化を起こす、タングス
テン酸塩・ピロカテコールバイオレットのコンプレック
スの水溶液は、蛋白が存在しない場合暗い紫から茶色を
呈している。そして存在する蛋白が増加すると、赤味が
かった茶色から黄色、淡緑色、緑色、濃青色の順で色が
変化する。結果としてタングステン酸アンモニウムのよ
うなタングステン酸塩の正確な量を含む指示試薬組成物
と、ピロカテコールバイオレットは、標準蛋白水溶液と
接触して表１に要約される色調変化を起こす適当な接衝
液で適当なｐＨに調整および維持される０表１に要約さ
れた色調変化は、５ ｍｇ／ ｄｉのアルブミンを含む
試験試料を、ＯＩＴ１ｇ／ｄｌの試験試料および１０ｍ
ｇ／ｄＩの試験試料と識別することができるということ
を示している。これらの色の識別は、指示試薬組成物中
の色素・タングステン酸塩のコンプレックスの濃度が上
がるほど、さらに劇的になる。それゆえに、本発明に従
って、試験試料中の少量から微量の蛋白を測定し、はぼ
等しいアルブミンを含む試験試料と識別する組成物及び
方法が成し遂げられる。
艮−ユ
標準蛋白質溶液（ｐＨ＝２．５）との相互作用によるタ
ングステン酸アンモニウム／ピロカテコールバイオレッ
トコンプレックス指示試薬組成物の本発明の重要な特徴
によれば、タングステン酸塩／ピロカテコールバイオレ
ットコンプレックス指示試薬組成物を用いることによっ
て達成される改良された色分解によって、０．５．１Ｏ
１２０及び３０ｍｇ／ｄ１の蛋白質濃度の間の検出及び
識別を行なうことができる。対照的に、指示色素を用い
る従来方法は全て、０〜約１５ｍｇ／ｄ！！の蛋白質レ
ベルの間の識別を行なうことができず、０〜約３０ｍｇ
／＃の範囲の蛋白質レベルの間の僅かな識別しか与＾な
い、しかしながら、本発明によれば、特に約３０ｍｇ／
ｄＩ及びそれ以下の試験試料の蛋白質レベルにおいて試
験感度が向上し、結果としてより正確で意味のある試験
結果が得られる。
ングステン酸アンモニウム／ピロカテコールバイオレッ
トコンプレックス指示試薬組成物の本発明の重要な特徴
によれば、タングステン酸塩／ピロカテコールバイオレ
ットコンプレックス指示試薬組成物を用いることによっ
て達成される改良された色分解によって、０．５．１Ｏ
１２０及び３０ｍｇ／ｄ１の蛋白質濃度の間の検出及び
識別を行なうことができる。対照的に、指示色素を用い
る従来方法は全て、０〜約１５ｍｇ／ｄ！！の蛋白質レ
ベルの間の識別を行なうことができず、０〜約３０ｍｇ
／＃の範囲の蛋白質レベルの間の僅かな識別しか与＾な
い、しかしながら、本発明によれば、特に約３０ｍｇ／
ｄＩ及びそれ以下の試験試料の蛋白質レベルにおいて試
験感度が向上し、結果としてより正確で意味のある試験
結果が得られる。
水性液相試験を行なうためには、最初にタングステン酸
塩／色素コンプレックス指示試薬組成物を調製する１例
えば、ピロカテコールバイオレット０．０１０ｇ （０
，０２６ミリモル）、タングステン酸アンモニウム０．
０２４ｇ （０，０８５ミリモル）及びグリシン０７５
ｇを、十分量（約７０〜８０＋＋ｔｔ＋）の蒸留水中に
溶解することによってタングステン酸塩／色素コンプレ
ックス指示試藁組成物を調製する。得られた溶液に塩化
水素（ＨＣＩ水溶液を滴定し、そのｐＨを２．５に調節
する。ｐＨ調節された溶液を１００−のメスフラスコに
移し、蒸留水で全容量を１００−に調節する。最終溶液
は、ａ度０．３ｍＭのピロカテコールバイオレット及び
濃度０．８ｍＭのタングステン酸塩を含んでいる。グリ
シン０．７５ｇを指示試薬組成物に加＾てバッファーと
して作用させる０次に、尿１滴（約５０４）をタングス
テン酸ｔＭ／ピロカテコールバイオレットコンプレック
ス指示試薬組成物１−に加えることによって、尿試料中
の蛋白質の存在及び濃度を測定する。
塩／色素コンプレックス指示試薬組成物を調製する１例
えば、ピロカテコールバイオレット０．０１０ｇ （０
，０２６ミリモル）、タングステン酸アンモニウム０．
０２４ｇ （０，０８５ミリモル）及びグリシン０７５
ｇを、十分量（約７０〜８０＋＋ｔｔ＋）の蒸留水中に
溶解することによってタングステン酸塩／色素コンプレ
ックス指示試藁組成物を調製する。得られた溶液に塩化
水素（ＨＣＩ水溶液を滴定し、そのｐＨを２．５に調節
する。ｐＨ調節された溶液を１００−のメスフラスコに
移し、蒸留水で全容量を１００−に調節する。最終溶液
は、ａ度０．３ｍＭのピロカテコールバイオレット及び
濃度０．８ｍＭのタングステン酸塩を含んでいる。グリ
シン０．７５ｇを指示試薬組成物に加＾てバッファーと
して作用させる０次に、尿１滴（約５０４）をタングス
テン酸ｔＭ／ピロカテコールバイオレットコンプレック
ス指示試薬組成物１−に加えることによって、尿試料中
の蛋白質の存在及び濃度を測定する。
得られる水溶液の色は暗紫褐色から黄色を経て緑に変化
し、したがって、尿試料中に蛋白質的１００ｍｇ／ＬＢ
！が存在していることが示される。
し、したがって、尿試料中に蛋白質的１００ｍｇ／ＬＢ
！が存在していることが示される。
酒石酸又はシュウ酸のようなキレート化剤がタングステ
ン酸塩／色素コンプレックス指示試薬組成物中に含まれ
ていないことに注意すべきである。タングステン酸塩／
色素コンプレックス指示試薬組成物中にキレート化剤が
存在すると、試薬組成物がアルブミンを検出する能力が
大きく破壊されることが示されている。しかしながら、
驚くべきかつ予期しなかったことに、キレート化剤の非
存在下において、タングステン酸゛塩／色素コンプレッ
クス指示試薬組成物は、蛋白質と接触し相互作用するこ
とによって顕著な色変化を受ける。モリブデン酸塩試薬
が記載されている特開昭６１ １５５７５７号において
は、モリブデン酸塩／色素コンプレックスと蛋白質との
接触及び相互作用によって色変化を生成させるためにキ
レート剤を必要としている点で、上記の顕著な色展開は
予期しないことである。
ン酸塩／色素コンプレックス指示試薬組成物中に含まれ
ていないことに注意すべきである。タングステン酸塩／
色素コンプレックス指示試薬組成物中にキレート化剤が
存在すると、試薬組成物がアルブミンを検出する能力が
大きく破壊されることが示されている。しかしながら、
驚くべきかつ予期しなかったことに、キレート化剤の非
存在下において、タングステン酸゛塩／色素コンプレッ
クス指示試薬組成物は、蛋白質と接触し相互作用するこ
とによって顕著な色変化を受ける。モリブデン酸塩試薬
が記載されている特開昭６１ １５５７５７号において
は、モリブデン酸塩／色素コンプレックスと蛋白質との
接触及び相互作用によって色変化を生成させるためにキ
レート剤を必要としている点で、上記の顕著な色展開は
予期しないことである。
概して、蛋白質に関する水性液相試験においては、タン
グステン酸塩／色素コンプレックス指示試薬組成物を、
色変化を視覚的及び／又は機械的に検出及び測定するの
に十分な量存在させる。しかしながら、過剰量の一タン
グステン酸塩／色素コンプレックス指示試藁組成物を避
けて、非蛋白質試験試料組成物との全ての非特異相互作
用が実質的排除されるようにしなければならない６通常
、試験試料中の低濃度〜痕跡量の蛋白質に関しても、視
覚的及び／又は装置によって検出及び識別することので
きる色変化を与え、タングステン酸塩／色素コンプレッ
クスの非蛋白質試験試料組成物との相互作用による試験
障害を排除又は最小にするためには、指示試薬組成物中
のタングステン酸塩／色素コンプレックスの全濃度が約
０．２ｍＭ〜約５ｍＭの範囲であれば十分である６本発
明の有利性を十分に達成するためには、指示試薬組成物
中のタングステン酸塩／色素コンプレックスの全濃度が
約１ｍＭ〜約４ｍＭの範囲であることが特に好ましいこ
とが見出された。更に、５ｍｇ／ａのような低濃度〜痕
跡量の蛋白質レベルに対する試験感度は、液相試験にお
いてタングステン酸塩／色素コンプレックス指示試薬組
成物の濃度を約１ｍＭから約４ｍＭに増加させると更に
向上することも見出された。
グステン酸塩／色素コンプレックス指示試薬組成物を、
色変化を視覚的及び／又は機械的に検出及び測定するの
に十分な量存在させる。しかしながら、過剰量の一タン
グステン酸塩／色素コンプレックス指示試藁組成物を避
けて、非蛋白質試験試料組成物との全ての非特異相互作
用が実質的排除されるようにしなければならない６通常
、試験試料中の低濃度〜痕跡量の蛋白質に関しても、視
覚的及び／又は装置によって検出及び識別することので
きる色変化を与え、タングステン酸塩／色素コンプレッ
クスの非蛋白質試験試料組成物との相互作用による試験
障害を排除又は最小にするためには、指示試薬組成物中
のタングステン酸塩／色素コンプレックスの全濃度が約
０．２ｍＭ〜約５ｍＭの範囲であれば十分である６本発
明の有利性を十分に達成するためには、指示試薬組成物
中のタングステン酸塩／色素コンプレックスの全濃度が
約１ｍＭ〜約４ｍＭの範囲であることが特に好ましいこ
とが見出された。更に、５ｍｇ／ａのような低濃度〜痕
跡量の蛋白質レベルに対する試験感度は、液相試験にお
いてタングステン酸塩／色素コンプレックス指示試薬組
成物の濃度を約１ｍＭから約４ｍＭに増加させると更に
向上することも見出された。
更に、上記の例において用いているグリシンバッファー
に加えて、ラクテート、フタレート、トリクロロアセテ
ート、スルホサリチレート、ホスフェート類、アセテー
ト類、塩化ナトリウム／塩酸、ピペラジン−Ｎ、Ｎ’−
ビス（２−ヒドロキシプロパン）スルホン酸（ＰＯ５Ｐ
Ｏ１，Ｎ−２−ヒドロキシエチル−ピペラジン−Ｎｏ−
２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳＩ、３− Ｎ−（ト
リスヒドロキシメチル）メチルアミノ−２−ヒドロキシ
プロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）、２−（［トリス−
（ヒドロキシメチル）メチル１−アミノ）エタンスルホ
ン酸（ＴＥＳ）、あるいは当該技術において周知な他の
好適なバッファーのような、キレート化剤を含まないい
かなる好適なバッファーを用いることによっても、所望
のｐＨを実質的に一定レベルにｆ呆持することができる
。
に加えて、ラクテート、フタレート、トリクロロアセテ
ート、スルホサリチレート、ホスフェート類、アセテー
ト類、塩化ナトリウム／塩酸、ピペラジン−Ｎ、Ｎ’−
ビス（２−ヒドロキシプロパン）スルホン酸（ＰＯ５Ｐ
Ｏ１，Ｎ−２−ヒドロキシエチル−ピペラジン−Ｎｏ−
２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳＩ、３− Ｎ−（ト
リスヒドロキシメチル）メチルアミノ−２−ヒドロキシ
プロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）、２−（［トリス−
（ヒドロキシメチル）メチル１−アミノ）エタンスルホ
ン酸（ＴＥＳ）、あるいは当該技術において周知な他の
好適なバッファーのような、キレート化剤を含まないい
かなる好適なバッファーを用いることによっても、所望
のｐＨを実質的に一定レベルにｆ呆持することができる
。
更に、特定のタングステン酸塩及び特定のポリヒドロキ
シベンゼンスルホンフタレインタイプの色素又はポリヒ
ドロキシベンゼンフタレインタイプの色素を指示試薬組
成物中に含ませる場合には、必ずしも、上記の例のよう
にタングステン酸塩に対する色素のモル比的１〜３．２
５で存在させる必要がない、以下により詳細に説明する
ように、指示試薬組成物中のタングステン酸塩及び特定
のポリヒドロキシベンゼンスルホンフタレインタイプ又
はポリヒドロキシベンゼンフタレインタイプの色素の両
方の１度を増加させることによって、試験試料中の定量
〜痕跡量の蛋白質に対する蛋白質試験をより高感度にす
ることができる。
シベンゼンスルホンフタレインタイプの色素又はポリヒ
ドロキシベンゼンフタレインタイプの色素を指示試薬組
成物中に含ませる場合には、必ずしも、上記の例のよう
にタングステン酸塩に対する色素のモル比的１〜３．２
５で存在させる必要がない、以下により詳細に説明する
ように、指示試薬組成物中のタングステン酸塩及び特定
のポリヒドロキシベンゼンスルホンフタレインタイプ又
はポリヒドロキシベンゼンフタレインタイプの色素の両
方の１度を増加させることによって、試験試料中の定量
〜痕跡量の蛋白質に対する蛋白質試験をより高感度にす
ることができる。
タングステン酸アンモニウムの濃度を０．０３ｇ ／
ｄｌ又は０．０７８ミリモルに増加させ、ピロカテコー
ルバイオレットの濃度を０．０７５ｇ ／ ｄｌ又は０
．２５５ミリモルに増加させるか、あるいはタングステ
ン酸塩に対する色素のモル比を約１〜３．２５にすると
、低濃度〜痕跡量の蛋白質を含む試験試料の間の色識別
が改良されることが見出された。また、タングステン酸
塩に対する色素のモル比を、約１：１〜約１：１０．好
ましくは約ｌ：２〜約１：５の範囲内にすると、本発明
の有利性及び利益が十分に得られることが見出された。
ｄｌ又は０．０７８ミリモルに増加させ、ピロカテコー
ルバイオレットの濃度を０．０７５ｇ ／ ｄｌ又は０
．２５５ミリモルに増加させるか、あるいはタングステ
ン酸塩に対する色素のモル比を約１〜３．２５にすると
、低濃度〜痕跡量の蛋白質を含む試験試料の間の色識別
が改良されることが見出された。また、タングステン酸
塩に対する色素のモル比を、約１：１〜約１：１０．好
ましくは約ｌ：２〜約１：５の範囲内にすると、本発明
の有利性及び利益が十分に得られることが見出された。
更に、モル比を一定に保持した場合には、指示試薬組成
物中の色素及びタングステン酸塩の濃度を増加させるこ
とによって、低濃度〜痕跡量の濃度の蛋白質を含む試験
試料の間の色識別が改良されることが見出された。
物中の色素及びタングステン酸塩の濃度を増加させるこ
とによって、低濃度〜痕跡量の濃度の蛋白質を含む試験
試料の間の色識別が改良されることが見出された。
更に、本発明の他の重要な特徴によれば、水性温媒、タ
ングステン酸塩／色素コンプレックス指示試薬組成物及
び尿試料の相対量を変化させ、タングステン酸塩／色素
コンプレックス及びバッファーの種類及び二を変化させ
て、既知の蛋白質、Ｑ度の溶液から得られた標準色に対
して視覚的及び／又は装置によって比較することが可能
であるような、検出及び識別することが可能な色変化を
与えることによって、尿及び他の液体試料中の蛋白質の
水性半定量試験を行なうための試験を設計することは、
試験具製造の当業者の熟練技術の範囲内に完全に含まれ
るものである。
ングステン酸塩／色素コンプレックス指示試薬組成物及
び尿試料の相対量を変化させ、タングステン酸塩／色素
コンプレックス及びバッファーの種類及び二を変化させ
て、既知の蛋白質、Ｑ度の溶液から得られた標準色に対
して視覚的及び／又は装置によって比較することが可能
であるような、検出及び識別することが可能な色変化を
与えることによって、尿及び他の液体試料中の蛋白質の
水性半定量試験を行なうための試験を設計することは、
試験具製造の当業者の熟練技術の範囲内に完全に含まれ
るものである。
蛋白質に関する湿潤和水性試験に加えて、タングステン
酸塩／色素コンプレックス指示試薬組成物を乾燥状態で
用いて、タングステン酸塩／色素指示試薬組成物を用い
る蛋白質用試験パッド試験を当該技術において周知の方
法によって行なうことができる。概して、蛋白質に関す
る試験は、尿又は他の試験試料を、タングステン酸塩／
色素指示試薬組成物を含む分析対象物検出器具と接触さ
せることによって行なわれる０分析対象物検出器具は、
試験試料中に浸漬することができ、あるいは、試験試料
を分析対象物検出器具に温和することができる。得られ
た分析対象物検出器具の色変化によって蛋白質の存在が
示され、そのように設計されている場合には、得られた
色変化を標準カラーチャートと比較して、尿又は試験試
料中の蛋白質の濃度の半定量測定を得ることができる。
酸塩／色素コンプレックス指示試薬組成物を乾燥状態で
用いて、タングステン酸塩／色素指示試薬組成物を用い
る蛋白質用試験パッド試験を当該技術において周知の方
法によって行なうことができる。概して、蛋白質に関す
る試験は、尿又は他の試験試料を、タングステン酸塩／
色素指示試薬組成物を含む分析対象物検出器具と接触さ
せることによって行なわれる０分析対象物検出器具は、
試験試料中に浸漬することができ、あるいは、試験試料
を分析対象物検出器具に温和することができる。得られ
た分析対象物検出器具の色変化によって蛋白質の存在が
示され、そのように設計されている場合には、得られた
色変化を標準カラーチャートと比較して、尿又は試験試
料中の蛋白質の濃度の半定量測定を得ることができる。
通常、分析対象物検出器具は、単一パッド試験片（単一
の分析対象物のみに対するもの）又は多重パッド試験片
（数種の分析対象物を同時に試験するためのもの）のい
ずれかとして設計されている試薬組成物含浸試験片であ
る。どちらのタイプの試薬含浸試験片に関しても、試験
片は、通常は疎水性プラスチックから構成されている支
持片又は柄部、及び、吸収性もしくは非吸収性キャリヤ
ーマトリクスを有する試薬試験パッドを有している。通
常、キャリヤーマトリクスは、毛細管力に応じてマトリ
ックスを通って試験試料を移動させて試薬組成物と接触
させ、検出及び測定可能な色変化を生成させることので
きる吸収材料である。
の分析対象物のみに対するもの）又は多重パッド試験片
（数種の分析対象物を同時に試験するためのもの）のい
ずれかとして設計されている試薬組成物含浸試験片であ
る。どちらのタイプの試薬含浸試験片に関しても、試験
片は、通常は疎水性プラスチックから構成されている支
持片又は柄部、及び、吸収性もしくは非吸収性キャリヤ
ーマトリクスを有する試薬試験パッドを有している。通
常、キャリヤーマトリクスは、毛細管力に応じてマトリ
ックスを通って試験試料を移動させて試薬組成物と接触
させ、検出及び測定可能な色変化を生成させることので
きる吸収材料である。
キャリヤーマトリクスは、キャリヤーマトリクスが化学
試薬に対して実質的に不活性であり、キャリヤーマトリ
クスを構成する成分の試験試料による抽出によるか、あ
るいは、その後の試験を非決定的、不正確又は疑わしい
ものにするように尿又は試験試料をある程度変化させる
ことによって、尿又は他の試験試料に混入しない限りに
おいて、対象となる試験を行なうために必要な化学試薬
を包含することのできるいかなる物質であってもよい、
また、キャリヤーマトリクスは、液体試験試料に対して
多孔性及び／又は吸収性（ａｂｓｏｒｂｅｎｔｌのもの
でなければならない、［キャリヤーマトリクス」という
表現は、水及び他の生理学的液体中で不溶性であり、水
及び他の生理学的液体に曝した際にその構造安定性を保
持する吸収性又は非吸収性ｆｎｏｎｂｉｂｕｌｏｕｓｌ
のマトリックスを意味するものである。好適な吸収性マ
トリックスとしては、２戸紙、スポンジ材料、セルロー
ス、木、織成布又は非織布等が挙げられる。非吸収性マ
トリックスとしては、ガラス繊維、ポリマーフィルム及
び予め形成されているか又は微孔性腺が挙げられる。他
の好適なキャリヤーマトリクスとしては、シリカゲル、
アルミナ、珪藻土などのような親水性無機粉末；粘土質
物質：布二親水性天然ポリマー材料、特にセルロースピ
ースのようなセルロース系材料、並びに、特に濾紙もし
くはクロマトグラフィー紙のような繊維含有紙；セルロ
ースアセテート、ポリ塩化ビニル、ポリアクリルアミド
、ポリアクリレート、ポリウレタン、架橋デキストラン
、アガロースのような合成又は変性された天然ポリマー
並びに他の架橋及び非架橋水不溶性親水性ポリマーが挙
げられる。疎水性及び非吸収性（ｎｏｎ−ａｂｓｏｒｐ
ｔｉｖｅｌ物質は、本発明のキャリヤーマトリクスとし
て用いるのに好適でない、キャリヤーマトリクスは、異
なる化学組成のもの又は化学組成物の混合物であっても
よい、また、マトリックスは、硬質性及び軟質性と組み
合わさって平滑性及び粗面性に関して変化してもよい、
しかしながら、どの場合においても、キャリヤーマトリ
クスは親水性又は吸収性材料を有していなければならな
い、柄部は、通常、セルロースアセテート、ポリエチレ
ンテレツクレート、ポリカーボネート又はポリスチレン
のような疎水性材料から製造され、最も有利には、キャ
リヤーマトリクスは、吸収性濾紙又は非吸収性透過性ポ
リマーフィルムから構成される。
試薬に対して実質的に不活性であり、キャリヤーマトリ
クスを構成する成分の試験試料による抽出によるか、あ
るいは、その後の試験を非決定的、不正確又は疑わしい
ものにするように尿又は試験試料をある程度変化させる
ことによって、尿又は他の試験試料に混入しない限りに
おいて、対象となる試験を行なうために必要な化学試薬
を包含することのできるいかなる物質であってもよい、
また、キャリヤーマトリクスは、液体試験試料に対して
多孔性及び／又は吸収性（ａｂｓｏｒｂｅｎｔｌのもの
でなければならない、［キャリヤーマトリクス」という
表現は、水及び他の生理学的液体中で不溶性であり、水
及び他の生理学的液体に曝した際にその構造安定性を保
持する吸収性又は非吸収性ｆｎｏｎｂｉｂｕｌｏｕｓｌ
のマトリックスを意味するものである。好適な吸収性マ
トリックスとしては、２戸紙、スポンジ材料、セルロー
ス、木、織成布又は非織布等が挙げられる。非吸収性マ
トリックスとしては、ガラス繊維、ポリマーフィルム及
び予め形成されているか又は微孔性腺が挙げられる。他
の好適なキャリヤーマトリクスとしては、シリカゲル、
アルミナ、珪藻土などのような親水性無機粉末；粘土質
物質：布二親水性天然ポリマー材料、特にセルロースピ
ースのようなセルロース系材料、並びに、特に濾紙もし
くはクロマトグラフィー紙のような繊維含有紙；セルロ
ースアセテート、ポリ塩化ビニル、ポリアクリルアミド
、ポリアクリレート、ポリウレタン、架橋デキストラン
、アガロースのような合成又は変性された天然ポリマー
並びに他の架橋及び非架橋水不溶性親水性ポリマーが挙
げられる。疎水性及び非吸収性（ｎｏｎ−ａｂｓｏｒｐ
ｔｉｖｅｌ物質は、本発明のキャリヤーマトリクスとし
て用いるのに好適でない、キャリヤーマトリクスは、異
なる化学組成のもの又は化学組成物の混合物であっても
よい、また、マトリックスは、硬質性及び軟質性と組み
合わさって平滑性及び粗面性に関して変化してもよい、
しかしながら、どの場合においても、キャリヤーマトリ
クスは親水性又は吸収性材料を有していなければならな
い、柄部は、通常、セルロースアセテート、ポリエチレ
ンテレツクレート、ポリカーボネート又はポリスチレン
のような疎水性材料から製造され、最も有利には、キャ
リヤーマトリクスは、吸収性濾紙又は非吸収性透過性ポ
リマーフィルムから構成される。
本発明の有利性を十分に達成するためには、タングステ
ン酸塩／色素コンプレックス指示試薬組成物を好適なキ
ャリヤーマトリクス中に含浸させ、試験試料中の蛋白質
の試験用の乾燥相試験片において用いる０本発明方法に
よって、家庭又は研究室において行なうことができ、経
済的で、正確かつ確実な、試験試料中の蛋白質の全濃度
に関する試験が提供される。更に、本発明方法によって
、試験試料中の低濃度〜痕跡量の蛋白質濃度の検出、識
別及び測定を行なうことができ、したがって、試験がよ
り臨床的に有用なものにな本発明方法によれば、蛋白質
用の乾燥相試験片試験を行なうためには、まず、全濃度
的０．３ミリモル（ｍＭ）〜約５ｍＭの、タングステン
酸塩／ピロカテコールバイオレットのようなタングステ
ン酸塩／色素指示薬を含み、ｐＨ２，５に調節及び緩衝
されている水溶液を調製する１次に、水滴液を濾紙のシ
ートもしくは予め切断しである片上に展開、浸漬又は噴
霧することによって、）戸紙、例えばＷｈａｔｍａｎ
Ｌｔｄ、、 Ｍａｉｄｓｔｏｎｅ、 Ｋｅｎｔ。
ン酸塩／色素コンプレックス指示試薬組成物を好適なキ
ャリヤーマトリクス中に含浸させ、試験試料中の蛋白質
の試験用の乾燥相試験片において用いる０本発明方法に
よって、家庭又は研究室において行なうことができ、経
済的で、正確かつ確実な、試験試料中の蛋白質の全濃度
に関する試験が提供される。更に、本発明方法によって
、試験試料中の低濃度〜痕跡量の蛋白質濃度の検出、識
別及び測定を行なうことができ、したがって、試験がよ
り臨床的に有用なものにな本発明方法によれば、蛋白質
用の乾燥相試験片試験を行なうためには、まず、全濃度
的０．３ミリモル（ｍＭ）〜約５ｍＭの、タングステン
酸塩／ピロカテコールバイオレットのようなタングステ
ン酸塩／色素指示薬を含み、ｐＨ２，５に調節及び緩衝
されている水溶液を調製する１次に、水滴液を濾紙のシ
ートもしくは予め切断しである片上に展開、浸漬又は噴
霧することによって、）戸紙、例えばＷｈａｔｍａｎ
Ｌｔｄ、、 Ｍａｉｄｓｔｏｎｅ、 Ｋｅｎｔ。
ＵＫ、から市販されているＷＨＡＴＭＡＮ ＣＣＰ５０
師戸紙のような吸収性マトリックスを、タングステン酸
塩／色素指示試薬組成物を含む水溶液で飽和及び含浸す
る。空気オゾン中、約５０℃で約１５〜２０分間オブン
乾燥することによって水溶液を除去した後に、タングス
テン酸塩／色素コンプレックス指示試薬組成物が含浸さ
れた１戸紙を、約０．２５ＣｍＸ約０．５ｃｍ〜約０．
５ｃｍｘ約１．０ｃｍの寸法を有するパッドのような適
当な寸法に切断する。
師戸紙のような吸収性マトリックスを、タングステン酸
塩／色素指示試薬組成物を含む水溶液で飽和及び含浸す
る。空気オゾン中、約５０℃で約１５〜２０分間オブン
乾燥することによって水溶液を除去した後に、タングス
テン酸塩／色素コンプレックス指示試薬組成物が含浸さ
れた１戸紙を、約０．２５ＣｍＸ約０．５ｃｍ〜約０．
５ｃｍｘ約１．０ｃｍの寸法を有するパッドのような適
当な寸法に切断する。
次に、タングステン酸塩／色素コンプレックス指示試薬
組成物が含浸された２戸紙を、両面粘着テブによって不
透明又は透明な疎水性プラスチックの柄部材に固着させ
る。
組成物が含浸された２戸紙を、両面粘着テブによって不
透明又は透明な疎水性プラスチックの柄部材に固着させ
る。
次に、得られた試験片を、試験パッドが試料で飽和する
のに十分な時間、新しい非遠心尿試料中に浸漬する。約
１分〜約２分のような所定時間待機した後、試験片を、
応答に関して視覚的又は装置によって評価する。試験パ
ッドの色変化があれば、それによって尿試料中の蛋白質
の存在及び／又は濃度が示される。
のに十分な時間、新しい非遠心尿試料中に浸漬する。約
１分〜約２分のような所定時間待機した後、試験片を、
応答に関して視覚的又は装置によって評価する。試験パ
ッドの色変化があれば、それによって尿試料中の蛋白質
の存在及び／又は濃度が示される。
上述した蛋白質用の水性液相試験と同様に、本発明の方
法及び組成物を利用する蛋白質の半定量試験を設計する
ために、試薬パッドの寸法、タングステン酸塩／色素コ
ンプレックス指示試薬含浸溶液の濃度、並びに浸漬より
もピペット温和によるほうが良いといったような試験片
への試験試料の導入方法の間の適当なバランスを決定す
ることは、試験片製造の当業者の熟練技術に十分含まれ
るものである。
法及び組成物を利用する蛋白質の半定量試験を設計する
ために、試薬パッドの寸法、タングステン酸塩／色素コ
ンプレックス指示試薬含浸溶液の濃度、並びに浸漬より
もピペット温和によるほうが良いといったような試験片
への試験試料の導入方法の間の適当なバランスを決定す
ることは、試験片製造の当業者の熟練技術に十分含まれ
るものである。
多くの場合、試験片を簡単に視覚検査することによって
所望の情報が得られる。より正確な情報が必要な場合に
は、試験片において用いられる特定のタングステン酸塩
／色素コンプレックス指示試薬組成物に関する、種々の
既知の蛋白質濃度に対応する色スポットを有するカラー
チャートを製造することができる６次に、尿試料と接触
した後に得られる試験片の色を、チャート上の色スポッ
トと比較して、試験試料の蛋白質濃度を決定することが
できる。
所望の情報が得られる。より正確な情報が必要な場合に
は、試験片において用いられる特定のタングステン酸塩
／色素コンプレックス指示試薬組成物に関する、種々の
既知の蛋白質濃度に対応する色スポットを有するカラー
チャートを製造することができる６次に、尿試料と接触
した後に得られる試験片の色を、チャート上の色スポッ
トと比較して、試験試料の蛋白質濃度を決定することが
できる。
もっと正確な測定が必要な場合には、分光光度計又は比
色計を用いて、色変化の度合をより正確に測定すること
ができる。更に、３０ｍｇ／ｄ１以下、特に１５ ｍｇ
／ ｄｌのような低い蛋白質濃度において、色変化の度
合をより確実にかつより正確に測定し、試験試料中の蛋
白質の濃度をより正確に測定するために、視認法に対し
て、分光光度計又は比色計を用いることによって、水性
液相試験及び乾燥相試薬片試験のいずれによっても半定
量試験を行なうことができる。
色計を用いて、色変化の度合をより正確に測定すること
ができる。更に、３０ｍｇ／ｄ１以下、特に１５ ｍｇ
／ ｄｌのような低い蛋白質濃度において、色変化の度
合をより確実にかつより正確に測定し、試験試料中の蛋
白質の濃度をより正確に測定するために、視認法に対し
て、分光光度計又は比色計を用いることによって、水性
液相試験及び乾燥相試薬片試験のいずれによっても半定
量試験を行なうことができる。
以下により詳細に説明するように、驚くべきかつ予期し
なかったことに、タングステン酸塩／色素コンプレック
ス指示試薬組成物を用いることにより試験試料中の低濃
度〜痕跡量の蛋白質を検出し、識別しかつ測定すること
ができることによって、液体試験試料中の全蛋白質含有
量に関する改良された試験方法が提供される０例えば、
今日の方法によれば、約３０ｍｇ／ｄ１以下の尿中の蛋
白質濃度を正確に検出し測定するためには、高価でかつ
時間のかかる加熱及び沈殿法が必要である。したがって
、本発明方法に至るまでは、乾燥相試験片法を用いて、
尿中においてしばしば観察される約１５ｍｇ／＃以下の
ような低濃度〜痕跡濃度の蛋白質を検出及び測定するこ
とができなかった。したがって、本発明の重要な特徴に
よれば、タングステン酸塩／色素コンプレックス指示試
薬組成物を好適なキャリヤーマトリクス中に含浸させる
ことにより、乾燥相試験片を用いることによって尿試料
中の低濃度〜痕跡濃度の蛋白質の存在及び濃度を測定す
ることができることが示された。
なかったことに、タングステン酸塩／色素コンプレック
ス指示試薬組成物を用いることにより試験試料中の低濃
度〜痕跡量の蛋白質を検出し、識別しかつ測定すること
ができることによって、液体試験試料中の全蛋白質含有
量に関する改良された試験方法が提供される０例えば、
今日の方法によれば、約３０ｍｇ／ｄ１以下の尿中の蛋
白質濃度を正確に検出し測定するためには、高価でかつ
時間のかかる加熱及び沈殿法が必要である。したがって
、本発明方法に至るまでは、乾燥相試験片法を用いて、
尿中においてしばしば観察される約１５ｍｇ／＃以下の
ような低濃度〜痕跡濃度の蛋白質を検出及び測定するこ
とができなかった。したがって、本発明の重要な特徴に
よれば、タングステン酸塩／色素コンプレックス指示試
薬組成物を好適なキャリヤーマトリクス中に含浸させる
ことにより、乾燥相試験片を用いることによって尿試料
中の低濃度〜痕跡濃度の蛋白質の存在及び濃度を測定す
ることができることが示された。
タングステン酸塩／色素コンプレックス指示試薬組成物
を用いて試験試料中の蛋白質の量を検出及び測定するこ
とによって得られる新規なかつ予期しない結果を示すた
めに、タングステン酸塩／色素コンプレックス指示薬組
成物又はモリブデン酸塩／色素コンプレックス指示薬組
成物のいずれかを７戸紙マトリックスに含浸させて含む
乾燥相試験片を用いた全蛋白質試験から色空間プロット
（ｃｏｌｏｒ ５ｐａｃｅ ｐｌｏｔｓｌ を作成した
。標準アルブミン；６液を、タングステン酸塩／色素コ
ンプレックス指示試藁組成物又はモリブデン酸塩／色素
コンプレックス指示試薬組成物のいずれかを濾紙マトリ
ックスに含浸させて含む種々の乾燥相試験片と接触させ
ることによって色空間プロットを得た。
を用いて試験試料中の蛋白質の量を検出及び測定するこ
とによって得られる新規なかつ予期しない結果を示すた
めに、タングステン酸塩／色素コンプレックス指示薬組
成物又はモリブデン酸塩／色素コンプレックス指示薬組
成物のいずれかを７戸紙マトリックスに含浸させて含む
乾燥相試験片を用いた全蛋白質試験から色空間プロット
（ｃｏｌｏｒ ５ｐａｃｅ ｐｌｏｔｓｌ を作成した
。標準アルブミン；６液を、タングステン酸塩／色素コ
ンプレックス指示試藁組成物又はモリブデン酸塩／色素
コンプレックス指示試薬組成物のいずれかを濾紙マトリ
ックスに含浸させて含む種々の乾燥相試験片と接触させ
ることによって色空間プロットを得た。
通常、色空間プロットは、３つの軸、即ち、Ｌ”、Ａ’
及びＢ０軸を有する６垂直軸上にプロットされるＬｏの
値は１色強度の測定値であり、これによって、Ｌｌの値
が大きいと明るい色であることを示し、Ｌ”＝Ｏである
と完全に黒色であることを示す、水平なＡ°軸は緑から
赤への色変化の測定値であり、これによって、Ａ゛の値
がより正であると色がより赤に近いことを示し、同様に
、八〇の値がより負であると色がより緑に近いことを示
す、同様に、第３の軸Ｂ＃は青から黄色への色変化の測
定値であり、これによって、Ｂｏの値がより大きいと色
がより黄色に近いことを示し、同様にＢｏの値がより小
さいと色がより青に近いことを示す。
及びＢ０軸を有する６垂直軸上にプロットされるＬｏの
値は１色強度の測定値であり、これによって、Ｌｌの値
が大きいと明るい色であることを示し、Ｌ”＝Ｏである
と完全に黒色であることを示す、水平なＡ°軸は緑から
赤への色変化の測定値であり、これによって、Ａ゛の値
がより正であると色がより赤に近いことを示し、同様に
、八〇の値がより負であると色がより緑に近いことを示
す、同様に、第３の軸Ｂ＃は青から黄色への色変化の測
定値であり、これによって、Ｂｏの値がより大きいと色
がより黄色に近いことを示し、同様にＢｏの値がより小
さいと色がより青に近いことを示す。
色空間差（ｃｏｌｏｒ ５ｐａｃｅ ｄ微量ｆｅｒｅｎ
ｃｅｌ （△Ｅ）は、次の計算式（式１）から計算され
る。
ｃｅｌ （△Ｅ）は、次の計算式（式１）から計算され
る。
△Ｅ：１”！ ＋ １−２ ＋ １−２（式１）
色空間差（△Ｅ）は、三次元の色空間プロットにおける
二点間の直線距離である。理論的には、１の色空間差は
、人間の眼によって識別することのできる最も小さな色
差である。しかしながら、個々の人間の視認能力の固有
の差異のために、色の間を実用的かつ確実に識別するた
めには約５の色空間差（△Ｅ）が必要である。
二点間の直線距離である。理論的には、１の色空間差は
、人間の眼によって識別することのできる最も小さな色
差である。しかしながら、個々の人間の視認能力の固有
の差異のために、色の間を実用的かつ確実に識別するた
めには約５の色空間差（△Ｅ）が必要である。
色空間プロット上にプロットされたＬ９、Ａｏ及びＢｏ
の値は、当該技術において周知な標準式を用いて、４０
０ｎｍ〜７００ｎｍの間で均等に分割された１６の異な
る波長において採られた反射率測定値（％）から計算さ
れる０通常、１６の異なる波長のそれぞれにおける反射
率（％）に、その波長における光の強度をかける。次に
、これらの値に、赤、緑及び青に関する標準秤量関数を
かけ、最終的にこれらを足す、これらの計算によって、
三つの三刺激値Ｘ、Ｙ及びＺが得られ、以下の式を用い
て、Ｘ、Ｙ及び２の三刺激値からＬｏ、Ａｏ及びＢｏが
算出される。
の値は、当該技術において周知な標準式を用いて、４０
０ｎｍ〜７００ｎｍの間で均等に分割された１６の異な
る波長において採られた反射率測定値（％）から計算さ
れる０通常、１６の異なる波長のそれぞれにおける反射
率（％）に、その波長における光の強度をかける。次に
、これらの値に、赤、緑及び青に関する標準秤量関数を
かけ、最終的にこれらを足す、これらの計算によって、
三つの三刺激値Ｘ、Ｙ及びＺが得られ、以下の式を用い
て、Ｘ、Ｙ及び２の三刺激値からＬｏ、Ａｏ及びＢｏが
算出される。
Ｌ”＝ １１６ ｘ ［ｆＹ／Ｙ、ｌ”’−１６１］
（式２）Ａ”・５００ ｘ ［ｆＸ／Ｘｏｌ”３
ｉＹ／Ｙｏｌ”３］ （式３）Ｂ ’＝ ２００ Ｘ
［ｆＹ／ＹＯＩ”’１２／２０１””］ （式４）［上
式において、Ｘｏ、ＹｏおよびＺｏは、完全な白色（即
ち、全ての波長において反射率＝１００％）に関する三
刺激値であり：Ｘ、Ｙ及びＺは、４００ｎｍ〜７００ｎ
ｍの間の１６の波長から上記のように計算された三刺激
値である］ 色空間プロットから、色空間差（△Ｅ）が算出され、以
下により詳細に説明するように要約され、評価される。
（式２）Ａ”・５００ ｘ ［ｆＸ／Ｘｏｌ”３
ｉＹ／Ｙｏｌ”３］ （式３）Ｂ ’＝ ２００ Ｘ
［ｆＹ／ＹＯＩ”’１２／２０１””］ （式４）［上
式において、Ｘｏ、ＹｏおよびＺｏは、完全な白色（即
ち、全ての波長において反射率＝１００％）に関する三
刺激値であり：Ｘ、Ｙ及びＺは、４００ｎｍ〜７００ｎ
ｍの間の１６の波長から上記のように計算された三刺激
値である］ 色空間プロットから、色空間差（△Ｅ）が算出され、以
下により詳細に説明するように要約され、評価される。
得られたデータの解釈においては、△Ｅ ｆＡｌｂ １
５−ロ）のような用語は、アルブミン１５ ｍｇ／ ｄ
ｌを含む標準蛋白質溶液に関する蛋白質試験と、アルブ
ミンＯｍｇ／ｄＩのものに関する試験との間の色空間差
である。同様に、△Ｅ （Ａｌｂ ３０−０１ とい
う用語は、蛋白質３０ＩＩ１ｇ／ｄｌを含む蛋白質溶液
に関する蛋白質試験と、蛋白質Ｏｍｇ／ ｄｌの溶液に
関する試験との間の色空間差である。用語△Ｅ ＣＡｌ
ｂ １００−０１は、同様に定義される（上記において
Ａｌｂは蛋白質アルブミンを意味する）、同様に、△Ｅ
（１，００７−１，００１２１のような用語は、同一
の蛋白質濃度を有するが、異なる比重を有する、したが
って異なるイオン強度を有する標準原溶液に関する蛋白
質試験の間の色空間差を意味する。
５−ロ）のような用語は、アルブミン１５ ｍｇ／ ｄ
ｌを含む標準蛋白質溶液に関する蛋白質試験と、アルブ
ミンＯｍｇ／ｄＩのものに関する試験との間の色空間差
である。同様に、△Ｅ （Ａｌｂ ３０−０１ とい
う用語は、蛋白質３０ＩＩ１ｇ／ｄｌを含む蛋白質溶液
に関する蛋白質試験と、蛋白質Ｏｍｇ／ ｄｌの溶液に
関する試験との間の色空間差である。用語△Ｅ ＣＡｌ
ｂ １００−０１は、同様に定義される（上記において
Ａｌｂは蛋白質アルブミンを意味する）、同様に、△Ｅ
（１，００７−１，００１２１のような用語は、同一
の蛋白質濃度を有するが、異なる比重を有する、したが
って異なるイオン強度を有する標準原溶液に関する蛋白
質試験の間の色空間差を意味する。
初めに、従来のモリブデン酸塩／色素コンプレックスを
用いて蛋白質濃度に関して尿を試験することの固有の不
利性及び欠点を示すために、同量の蛋白質アルブミンを
含むが、塩化ナトリウムを加えることによってイオン強
度及び比重を変化させた尿試料における一連の試験を表
２に示す。
用いて蛋白質濃度に関して尿を試験することの固有の不
利性及び欠点を示すために、同量の蛋白質アルブミンを
含むが、塩化ナトリウムを加えることによってイオン強
度及び比重を変化させた尿試料における一連の試験を表
２に示す。
表 ２
表２においては、２５１ｎＩのメスフラスコにヒトアル
ブミン０．０７５ｇを加え、モリブデン酸アンモニウム
／ピロカテコールバイオレット／酒石酸指示薬溶液で容
量を２５−とじ、ｐＨ２，５に調節及び緩衝させること
によってモリブデン酸塩／色素指示薬（試薬Ａ）を調製
した。この溶液は、アルブミンを３００ｍｇ／ｄＩの等
量で含んでいた。同様に、モリブデン酸アンモニウムを
タングステン酸アンモニウムに代え、酒石酸を除いた外
は同様にしてタングステン酸塩／色素指示薬（試薬Ｂ）
を調製した。試薬Ａ及び試薬Ｂを、ＷＨＡＴＭＡＮ Ｃ
ＣＰ５００？戸紙の別々の片中に含浸させた。
ブミン０．０７５ｇを加え、モリブデン酸アンモニウム
／ピロカテコールバイオレット／酒石酸指示薬溶液で容
量を２５−とじ、ｐＨ２，５に調節及び緩衝させること
によってモリブデン酸塩／色素指示薬（試薬Ａ）を調製
した。この溶液は、アルブミンを３００ｍｇ／ｄＩの等
量で含んでいた。同様に、モリブデン酸アンモニウムを
タングステン酸アンモニウムに代え、酒石酸を除いた外
は同様にしてタングステン酸塩／色素指示薬（試薬Ｂ）
を調製した。試薬Ａ及び試薬Ｂを、ＷＨＡＴＭＡＮ Ｃ
ＣＰ５００？戸紙の別々の片中に含浸させた。
含浸された濾紙の断片を上記記載のように乾燥し、片に
切断した６次に、それぞれ、アルブミンを含まないが、
塩化ナトリウムを加太ることによって異なる比重及びイ
オン強度を有する尿試料中に試験片を短時間浸漬した０
表２において示された観察結果から、試験試料中のアル
ブミン濃度が未変化のままであったにもかかわらず、イ
オン強度及び比重が１．００７から１．０２０に増加す
ることによってモリブデン酸塩／色素指示薬（試薬Ａ）
が青から灰褐色に変化したのに対して、タングステン酸
塩／色素指示薬（試薬Ｂ）は比重／イオン強度に対する
依存性を示さなかったことが分かる。アルブミン４００
ｍｇ／ ｄｌを含むモリブデン酸塩／色素指示薬は、
蛋白質Ｏｍｇ／ ｄｉ及び蛋白質１５ｍｇ／ｄｌを含む
試料の試験におけるモノブチン酸１／色素と同一の結果
を与えた。
切断した６次に、それぞれ、アルブミンを含まないが、
塩化ナトリウムを加太ることによって異なる比重及びイ
オン強度を有する尿試料中に試験片を短時間浸漬した０
表２において示された観察結果から、試験試料中のアル
ブミン濃度が未変化のままであったにもかかわらず、イ
オン強度及び比重が１．００７から１．０２０に増加す
ることによってモリブデン酸塩／色素指示薬（試薬Ａ）
が青から灰褐色に変化したのに対して、タングステン酸
塩／色素指示薬（試薬Ｂ）は比重／イオン強度に対する
依存性を示さなかったことが分かる。アルブミン４００
ｍｇ／ ｄｌを含むモリブデン酸塩／色素指示薬は、
蛋白質Ｏｍｇ／ ｄｉ及び蛋白質１５ｍｇ／ｄｌを含む
試料の試験におけるモノブチン酸１／色素と同一の結果
を与えた。
上記記載のように試験片を製造し、ヒトアルブミンを除
いて同一の一連の試験を行なりたことに注意すべきであ
る。それぞれ、アルブミンＯｍｇ／ ｄｌを含み、異な
るイオン強度及び比重を有する尿試料中にこれらの試験
片を短時間浸漬すると、試験片によって、低いイオン強
度／比重の試ｔ」の色が青色ではなく灰赤色であったこ
とを除いて表２に示したものと同様の結果が得られた。
いて同一の一連の試験を行なりたことに注意すべきであ
る。それぞれ、アルブミンＯｍｇ／ ｄｌを含み、異な
るイオン強度及び比重を有する尿試料中にこれらの試験
片を短時間浸漬すると、試験片によって、低いイオン強
度／比重の試ｔ」の色が青色ではなく灰赤色であったこ
とを除いて表２に示したものと同様の結果が得られた。
これによって、これらの試験により、モリブデン酸塩／
色素指示薬（試薬Ａ）を含浸した試験片は、イオン強度
／比重の変化に対応して色が変化することが示される。
色素指示薬（試薬Ａ）を含浸した試験片は、イオン強度
／比重の変化に対応して色が変化することが示される。
更に、尿試料に塩化ナトリウムではなくグルコースを加
えるよるなどして、尿試料の比重を増加させるが、イオ
ン強度を一定に保持すると、イオン強度の増加による色
変化は起こらず、これによって、モリブデン酸塩／色素
指示薬が、試料の比重変化よりも試１４のイオン強度の
変化により感度が高いことが示される。上記に示すよう
に、かつ以下により詳細に説明するように、驚くべきか
つ予期しなかったことに、本発明のタングステン酸塩／
色素コンプレックスを指示試薬組成物中に含ませた試験
片を用いる尿量白質試験は、試験試料のイオン強度又は
比重によって影響を受けないことが見出された。
えるよるなどして、尿試料の比重を増加させるが、イオ
ン強度を一定に保持すると、イオン強度の増加による色
変化は起こらず、これによって、モリブデン酸塩／色素
指示薬が、試料の比重変化よりも試１４のイオン強度の
変化により感度が高いことが示される。上記に示すよう
に、かつ以下により詳細に説明するように、驚くべきか
つ予期しなかったことに、本発明のタングステン酸塩／
色素コンプレックスを指示試薬組成物中に含ませた試験
片を用いる尿量白質試験は、試験試料のイオン強度又は
比重によって影響を受けないことが見出された。
タングステン酸塩／色素コンプレックス指示試薬組成物
の、尿のイオン強度及び比重の影響からの非依存性を示
すために、２戸紙キャリヤーマトリクスを、ピロカテコ
ールバイオレット０．０１０２ｇ （０，０２ミリモル
）、タングステン酸アンモニウム０．０１．５１ｇ （
０，００５ミリモル）及びグリシン２５０ｍＭを含み、
ｐ Ｈ２，５に調節され緩衝された水溶液１００−に浸
漬することによって指示試薬試験片を製造した。
の、尿のイオン強度及び比重の影響からの非依存性を示
すために、２戸紙キャリヤーマトリクスを、ピロカテコ
ールバイオレット０．０１０２ｇ （０，０２ミリモル
）、タングステン酸アンモニウム０．０１．５１ｇ （
０，００５ミリモル）及びグリシン２５０ｍＭを含み、
ｐ Ｈ２，５に調節され緩衝された水溶液１００−に浸
漬することによって指示試薬試験片を製造した。
タングステン酸塩／ピロカテコール色素コンプレックス
指示試薬組成物を含ませた試験片を用いて、アルブミン
Ｏｍｇ／ｄＩ！、１５ｍｇ／ｄ１．３０ｍｇ／ｄＲ及び
１００ｍｇ／Ｖｌを含む標準尿試料を試験した６それぞ
れのアルブミン濃度に関して、尿試料の比重を、塩化ナ
トリウム又はグルコースによって、１．００７、ｌ ０
１２．１．０２０゜１．０２８及び１．０３２に調節し
た０色空間ブロットが得られ、１．００７〜１．０３２
の範囲の比重にわたるそれぞれのアルブミン濃度に関し
て色空間差（△Ｅ）を算出した。結果を表３に示す。
指示試薬組成物を含ませた試験片を用いて、アルブミン
Ｏｍｇ／ｄＩ！、１５ｍｇ／ｄ１．３０ｍｇ／ｄＲ及び
１００ｍｇ／Ｖｌを含む標準尿試料を試験した６それぞ
れのアルブミン濃度に関して、尿試料の比重を、塩化ナ
トリウム又はグルコースによって、１．００７、ｌ ０
１２．１．０２０゜１．０２８及び１．０３２に調節し
た０色空間ブロットが得られ、１．００７〜１．０３２
の範囲の比重にわたるそれぞれのアルブミン濃度に関し
て色空間差（△Ｅ）を算出した。結果を表３に示す。
表 ３
表３において示されるように、尿試料のイオン強度（比
重）の変化による色空間差の変化は、僅か０．８０単位
から最大で３．２４単位であり、この値は人間の眼によ
って色変化を検出するのに必要な５単位の通常認められ
ている最小値よりも十分に低いものである。全体的に、
タングステン酸塩／色素コンプレックス指示試薬組成物
は、表３から、最大の比重効果が約３△Ｅ単位であるの
で、試験試料のイオン強度又は比重から受ける障害が少
ないか全く影響を受けないことが示された。かかる小さ
な色空間差の値を、尿試料における比重（イオン強度）
の変化に対応した従来のモリブデン酸塩／色素コンプレ
ックスに関する表２に示した実際の視認検出可能な色変
化と直接比較することができる。尿蛋白質試験において
タングステン酸塩／色素コンプレックス指示試薬組成物
を指示薬として用いると、グルコースを加えて尿試料の
比重を増加させることによって、１００７から１０１５
への尿の比重の変化に関しては２．３７単位の色空間差
（△Ｅ１．及び、１．００７から１．０２２への尿の比
重の変化に関しては３．８４の△Ｅが与えられたことに
注意すべきである。ここでも、これらの△Ｅ値は通常視
認検出可能な限界である５単位よりも小さく、したがっ
て、タングステン酸塩／色素コンプレックス指示試薬組
成物を用いた蛋白質試験が比重単独の影響には依存して
いないことが示される。
重）の変化による色空間差の変化は、僅か０．８０単位
から最大で３．２４単位であり、この値は人間の眼によ
って色変化を検出するのに必要な５単位の通常認められ
ている最小値よりも十分に低いものである。全体的に、
タングステン酸塩／色素コンプレックス指示試薬組成物
は、表３から、最大の比重効果が約３△Ｅ単位であるの
で、試験試料のイオン強度又は比重から受ける障害が少
ないか全く影響を受けないことが示された。かかる小さ
な色空間差の値を、尿試料における比重（イオン強度）
の変化に対応した従来のモリブデン酸塩／色素コンプレ
ックスに関する表２に示した実際の視認検出可能な色変
化と直接比較することができる。尿蛋白質試験において
タングステン酸塩／色素コンプレックス指示試薬組成物
を指示薬として用いると、グルコースを加えて尿試料の
比重を増加させることによって、１００７から１０１５
への尿の比重の変化に関しては２．３７単位の色空間差
（△Ｅ１．及び、１．００７から１．０２２への尿の比
重の変化に関しては３．８４の△Ｅが与えられたことに
注意すべきである。ここでも、これらの△Ｅ値は通常視
認検出可能な限界である５単位よりも小さく、したがっ
て、タングステン酸塩／色素コンプレックス指示試薬組
成物を用いた蛋白質試験が比重単独の影響には依存して
いないことが示される。
異なるアルブミン濃度並びに異なる比重及びイオン強度
を有する尿試料の蛋白質試験に関して色空間プロットが
得られたモリブデン酸塩／色素指示試］Ａに関して表２
に示した結果を表４に数値として示す、グルコースを加
えることによって尿試料の比重を変化させることによっ
ては、△Ｅ（１，００７−１，０１５１は２２４単位で
あり、△Ｅ（Ｉ２Ｏ３−１，０２２１が１２１単位であ
り、これらどちらも約５単位の最小検出可能値よりも小
さいので、従来のモリブデン酸塩／色素コンプレックス
法を用いた蛋白質試験に影響を与えないことが分かった
。しカルながら、表４によって、塩化ナトリウムを用い
て尿試料の比重を増加させると、尿試料のイオン強度が
同様に増加し、結果として、本発明方法とは異なり、蛋
白質試験に対する悪影響が観察されることが示される０
表４を注意深く検討することによって、同一のアルブミ
ン濃度を有するが異なるイオン強度及び比重を有する試
験試料から得られる色空間差が、慨して５単位を超える
ものであることが示され、したがって、視認の色識別及
び潜在的に誤りのある蛋白質試験が人間の分析者によっ
て検出されることが示される。
を有する尿試料の蛋白質試験に関して色空間プロットが
得られたモリブデン酸塩／色素指示試］Ａに関して表２
に示した結果を表４に数値として示す、グルコースを加
えることによって尿試料の比重を変化させることによっ
ては、△Ｅ（１，００７−１，０１５１は２２４単位で
あり、△Ｅ（Ｉ２Ｏ３−１，０２２１が１２１単位であ
り、これらどちらも約５単位の最小検出可能値よりも小
さいので、従来のモリブデン酸塩／色素コンプレックス
法を用いた蛋白質試験に影響を与えないことが分かった
。しカルながら、表４によって、塩化ナトリウムを用い
て尿試料の比重を増加させると、尿試料のイオン強度が
同様に増加し、結果として、本発明方法とは異なり、蛋
白質試験に対する悪影響が観察されることが示される０
表４を注意深く検討することによって、同一のアルブミ
ン濃度を有するが異なるイオン強度及び比重を有する試
験試料から得られる色空間差が、慨して５単位を超える
ものであることが示され、したがって、視認の色識別及
び潜在的に誤りのある蛋白質試験が人間の分析者によっ
て検出されることが示される。
驚（べきかつ予期しなかったことに、従来文献において
記載されているモリブデン酸塩／色素コンプレックスを
用いた尿蛋白質試験に関する表４に示した結果は、本発
明のタングステン酸塩／色素コンプレックス指示試薬組
成物を用いた尿蛋白質試験に関する表３に示した結果と
明らかに対比されるものである０表３に示したデータを
表４に示したデータと比較することによって、本発明方
法が試験試料のイオン強度及び比重による影響を受けな
いことが示される。タングステン酸塩／色素コンプレッ
クスを用いた表３においては、色空間差は、全て、通常
認識されている最小検出可能限界である５単位よりも小
さいものである。しかしながら、モリブデン酸塩／色素
コンプレックスを用いた表４においては、実質的に全て
の色空間差が５単位の最小検出可能限界を大きく超人で
おり、したがって試験試料の比重（イオン強度）によっ
て蛋白質試験が変化しつるものである。
記載されているモリブデン酸塩／色素コンプレックスを
用いた尿蛋白質試験に関する表４に示した結果は、本発
明のタングステン酸塩／色素コンプレックス指示試薬組
成物を用いた尿蛋白質試験に関する表３に示した結果と
明らかに対比されるものである０表３に示したデータを
表４に示したデータと比較することによって、本発明方
法が試験試料のイオン強度及び比重による影響を受けな
いことが示される。タングステン酸塩／色素コンプレッ
クスを用いた表３においては、色空間差は、全て、通常
認識されている最小検出可能限界である５単位よりも小
さいものである。しかしながら、モリブデン酸塩／色素
コンプレックスを用いた表４においては、実質的に全て
の色空間差が５単位の最小検出可能限界を大きく超人で
おり、したがって試験試料の比重（イオン強度）によっ
て蛋白質試験が変化しつるものである。
本発明の他の重要な特徴によれば、タングステン酸アン
モニウム／ピロカテコールバイオレットコンプレックス
指示薬を調製するために用いるタングステン酸アンモニ
ウムの量を、上記の全ての試験において用いられている
タングステン酸アンモニウム０．０１５１ｇからタング
ステン酸アンモニウム０．０７５ｇに増加させ、ピロカ
テコールバイオレットの量をピロカテコールバイオレッ
ト０．０１０５ｇからピロカテコールバイオレット０．
０３ｇに増加させて、ｐＨ３に調節され緩衝されたタン
グステン酸塩／色素コンプレックス１００−を調製する
ことによって、試料中の低濃度〜痕跡量の蛋白質の試験
の感度が向上する。
モニウム／ピロカテコールバイオレットコンプレックス
指示薬を調製するために用いるタングステン酸アンモニ
ウムの量を、上記の全ての試験において用いられている
タングステン酸アンモニウム０．０１５１ｇからタング
ステン酸アンモニウム０．０７５ｇに増加させ、ピロカ
テコールバイオレットの量をピロカテコールバイオレッ
ト０．０１０５ｇからピロカテコールバイオレット０．
０３ｇに増加させて、ｐＨ３に調節され緩衝されたタン
グステン酸塩／色素コンプレックス１００−を調製する
ことによって、試料中の低濃度〜痕跡量の蛋白質の試験
の感度が向上する。
表４に、低濃度〜痕跡量の蛋白質に関する尿の試験にお
ける更なる改良を示すにこでは、試験試料中のアルブミ
ン濃度１０ｍｇ／ｄＩ！を、アルブミンＯｍｇ／ａを含
む対照試料と容易に識別することができ、試験試料中の
アルブミン濃度５ｍｇ／＃を、アルブミン０ｍｇ１ｄｌ
を含む対照試料と容易に識別することができる０表５に
おいて、蛋白質１０ｍｇ／ａを含む試験試料とブランク
試験試料（Ｏｔｎｇ／ ｄｉ ）との間の色空間差が約
１６単位であり、蛋白質５ ｍｇ／ ｄｌを含む試験試
料とブランク試験試料との間の色空間差が約９単位であ
ることが示される。したがって、アルブミン５ｍｇ／＋
ｆｆを含む試験試料をブランク試験試料と比較すると、
約５単位の色空間差又は約１のカラーブロックが得られ
る。この色空間差は、人間の眼による識別の閾値以上の
ものであるので、痕跡量の尿蛋白を検出及び測定するの
に十分な色空間差である。更に、表５において、アルブ
ミン１０ｍｇ／ａ’を含む試験ｇ、ｔ １４とアルブミ
ン５ｍｇ／ｄｆ！を含む試験試料とは、これらのアルブ
ミン濃度を有する試料の間の色空間差が約８であるか又
は人間の眼による識別の閾値以上であるので識別できる
ことが示される。
ける更なる改良を示すにこでは、試験試料中のアルブミ
ン濃度１０ｍｇ／ｄＩ！を、アルブミンＯｍｇ／ａを含
む対照試料と容易に識別することができ、試験試料中の
アルブミン濃度５ｍｇ／＃を、アルブミン０ｍｇ１ｄｌ
を含む対照試料と容易に識別することができる０表５に
おいて、蛋白質１０ｍｇ／ａを含む試験試料とブランク
試験試料（Ｏｔｎｇ／ ｄｉ ）との間の色空間差が約
１６単位であり、蛋白質５ ｍｇ／ ｄｌを含む試験試
料とブランク試験試料との間の色空間差が約９単位であ
ることが示される。したがって、アルブミン５ｍｇ／＋
ｆｆを含む試験試料をブランク試験試料と比較すると、
約５単位の色空間差又は約１のカラーブロックが得られ
る。この色空間差は、人間の眼による識別の閾値以上の
ものであるので、痕跡量の尿蛋白を検出及び測定するの
に十分な色空間差である。更に、表５において、アルブ
ミン１０ｍｇ／ａ’を含む試験ｇ、ｔ １４とアルブミ
ン５ｍｇ／ｄｆ！を含む試験試料とは、これらのアルブ
ミン濃度を有する試料の間の色空間差が約８であるか又
は人間の眼による識別の閾値以上であるので識別できる
ことが示される。
表５に示したデータは、ピロカテコールバイオレット３
０ｍｇ／＃、タングステン酸アンモニウム７５ｍｇ／ｄ
Ｉ及びグリシンバッファ ２５０ｍＭを含み、ｐＨ３に
した水溶液を含浸したＷＨＡＴＭＡＮＣＣＰ５ＱＯｉ戸
紙を有する試験片によって得られた。また、表５におい
て２分の反応時間後に得られた色空間差を示す。
０ｍｇ／＃、タングステン酸アンモニウム７５ｍｇ／ｄ
Ｉ及びグリシンバッファ ２５０ｍＭを含み、ｐＨ３に
した水溶液を含浸したＷＨＡＴＭＡＮＣＣＰ５ＱＯｉ戸
紙を有する試験片によって得られた。また、表５におい
て２分の反応時間後に得られた色空間差を示す。
試験キット製造の当業者は、本発明の方法及び組成物を
用いた上記試験が約５単位の色空間差を示すような、試
験試料中５ｍｇ／ｄＩのアルブミンを検出及び測定する
のに十分な量で特に有効なタングステン酸塩／色素指示
試薬系を含んだ最適の試験片を設計することができるこ
とを理解すべきである。この△Ｅ値は、人間の眼によっ
て検出するのにほとんど十分なものであり、今日の色差
計及び／又は分光光度計によって検出することができる
。同様に、本発明の方法及び組成物によってアルブミン
１０ ｍｇ／ ｄＲを含む試験試料とアルブミン５ｍｇ
／ｄ１を含む試験試料との間、又はアルブミン１５ ｍ
ｇ／ ｄｌ及び１０ ｍｇ／ ｄＩを有する試験試料の
間の識別を行なうことができる６ 本発明の他の重要な特徴によれば、指示薬としてタング
ステン酸塩／色素コンプレックスを含む試験片の色の完
全な展開は、試験片を試験試料に接触させた後、約１〜
約２分以内で起こることが見出された０表５において示
されている最大の色展開は、接触の約２分後に起こって
いる。しかしながら、許容でき信頼できる試験結果は、
試験試料との接触の約１分後に試験片を色変化に関して
評価した場合に得られる。僅かで視覚的に検出できない
色展開の変化が１分から２分の間に起こる。試験片の完
全な色展開のためのかかる短い時間は、最大の色展開の
ために約１０分を必要とした従来のモリブデン酸塩／色
素コンプレックスを凌ぐ本発明のタングステン酸塩／色
素コンプレックスの更なる有利性である。したがって、
本発明のタングステン酸塩／色素指示試薬組成物を含む
試験片を用いて、特にモリブデン酸塩／色素コンプレッ
クスをベースとした試験片を１０分未満における色応答
に関して評価する試験と比較して、より迅速で潜在的に
より正確な試験を得ることができる。後者の場合には、
最大の色変化が起こらないので誤った試験結果を与久る
。表５を除く表中に示した全ての蛋白質試験に関して、
タングステン酸塩／色素コンプレックスを含む試験片は
試験試↑４との接触時間の１．５分後に色応答に関して
評価し、モリブデン酸塩／色素コンプレックスの場合に
は接触時間の２分後に応答に関して評価したことに注意
すべきである。また、アルブミンとタングステン酸塩／
色素コンプレックスとの相互作用から得られた色変化は
、時間が経過しても安定であることが見出された。
用いた上記試験が約５単位の色空間差を示すような、試
験試料中５ｍｇ／ｄＩのアルブミンを検出及び測定する
のに十分な量で特に有効なタングステン酸塩／色素指示
試薬系を含んだ最適の試験片を設計することができるこ
とを理解すべきである。この△Ｅ値は、人間の眼によっ
て検出するのにほとんど十分なものであり、今日の色差
計及び／又は分光光度計によって検出することができる
。同様に、本発明の方法及び組成物によってアルブミン
１０ ｍｇ／ ｄＲを含む試験試料とアルブミン５ｍｇ
／ｄ１を含む試験試料との間、又はアルブミン１５ ｍ
ｇ／ ｄｌ及び１０ ｍｇ／ ｄＩを有する試験試料の
間の識別を行なうことができる６ 本発明の他の重要な特徴によれば、指示薬としてタング
ステン酸塩／色素コンプレックスを含む試験片の色の完
全な展開は、試験片を試験試料に接触させた後、約１〜
約２分以内で起こることが見出された０表５において示
されている最大の色展開は、接触の約２分後に起こって
いる。しかしながら、許容でき信頼できる試験結果は、
試験試料との接触の約１分後に試験片を色変化に関して
評価した場合に得られる。僅かで視覚的に検出できない
色展開の変化が１分から２分の間に起こる。試験片の完
全な色展開のためのかかる短い時間は、最大の色展開の
ために約１０分を必要とした従来のモリブデン酸塩／色
素コンプレックスを凌ぐ本発明のタングステン酸塩／色
素コンプレックスの更なる有利性である。したがって、
本発明のタングステン酸塩／色素指示試薬組成物を含む
試験片を用いて、特にモリブデン酸塩／色素コンプレッ
クスをベースとした試験片を１０分未満における色応答
に関して評価する試験と比較して、より迅速で潜在的に
より正確な試験を得ることができる。後者の場合には、
最大の色変化が起こらないので誤った試験結果を与久る
。表５を除く表中に示した全ての蛋白質試験に関して、
タングステン酸塩／色素コンプレックスを含む試験片は
試験試↑４との接触時間の１．５分後に色応答に関して
評価し、モリブデン酸塩／色素コンプレックスの場合に
は接触時間の２分後に応答に関して評価したことに注意
すべきである。また、アルブミンとタングステン酸塩／
色素コンプレックスとの相互作用から得られた色変化は
、時間が経過しても安定であることが見出された。
表５から、色空間差が事実上人間の眼によって識別する
のに必要な最小値であるので、アルブミンを５ ｍｇ／
ｄｌの痕跡量含む尿試料を視認による検出及び測定方
法によって試験することができることが示される。同様
に、表５の△Ｅ値、特に△Ｅ ｆＡｌｂ １０−５１及
びΔＥ （Ａｌｂ ＋５−１０１ により、タングステ
ン酸塩／色素コンプレックス中のタングステン酸アンモ
ニウムの量を増加させることによって、液体試験試料の
蛋白質１度、特に低濃度〜痕跡量の蛋白ｆｆｉ？、１度
に対していかに感度が高められるかが示さる。
のに必要な最小値であるので、アルブミンを５ ｍｇ／
ｄｌの痕跡量含む尿試料を視認による検出及び測定方
法によって試験することができることが示される。同様
に、表５の△Ｅ値、特に△Ｅ ｆＡｌｂ １０−５１及
びΔＥ （Ａｌｂ ＋５−１０１ により、タングステ
ン酸塩／色素コンプレックス中のタングステン酸アンモ
ニウムの量を増加させることによって、液体試験試料の
蛋白質１度、特に低濃度〜痕跡量の蛋白ｆｆｉ？、１度
に対していかに感度が高められるかが示さる。
全体として、表２〜表５によって、濾紙のような好適な
キャリヤーマトリクス中に含浸されたタングステン酸塩
／色素指示試薬組成物によって、異なる蛋白質濃度を有
する試験試料の間の色分解が改良され、特に３０ｍｇ／
＃未満の低い蛋白質レベルの液体試験試料中の全蛋白質
濃度に関する試験感度が向上することが示される。従来
のモリブデン酸塩／色素コンプレックス法を凌ぐ本発明
の方法及び組成物の向上された感度に加λて、本発明組
成物は、イオン強度又は比重の影響を受けず、極めて短
い時間内に完全な色展開及び正確な試験結果を与える。
キャリヤーマトリクス中に含浸されたタングステン酸塩
／色素指示試薬組成物によって、異なる蛋白質濃度を有
する試験試料の間の色分解が改良され、特に３０ｍｇ／
＃未満の低い蛋白質レベルの液体試験試料中の全蛋白質
濃度に関する試験感度が向上することが示される。従来
のモリブデン酸塩／色素コンプレックス法を凌ぐ本発明
の方法及び組成物の向上された感度に加λて、本発明組
成物は、イオン強度又は比重の影響を受けず、極めて短
い時間内に完全な色展開及び正確な試験結果を与える。
また１本発明の方法及び組成物によって、タングステン
酸塩／色素コンプレックス指示試薬組成物を含浸したキ
ャリヤーマトリクスと、Ｏｍｇ／ｄｌからｌｏｍｇ／ａ
！の間及び５ｍｇ／ａ！以下のレベルの蛋白質を含む試
験試料とを接触させて得られる色変化を視覚識別するこ
とができ、これによって、低濃度〜痕跡量の蛋白質を含
む試験試料の正確で信頼できる試験が提供される。
酸塩／色素コンプレックス指示試薬組成物を含浸したキ
ャリヤーマトリクスと、Ｏｍｇ／ｄｌからｌｏｍｇ／ａ
！の間及び５ｍｇ／ａ！以下のレベルの蛋白質を含む試
験試料とを接触させて得られる色変化を視覚識別するこ
とができ、これによって、低濃度〜痕跡量の蛋白質を含
む試験試料の正確で信頼できる試験が提供される。
したがって、本発明の重要な特徴によれば、タングステ
ン酸塩／色素コンプレックス指示試薬組成物を用いるこ
とによって、尿又は他の液体試験試料中の全蛋白質濃度
、低分子量蛋白質１度及び特に低濃度〜痕跡量の全蛋白
質濃度に関するより正確で確実な試験を行なうことがで
きる。タングステン酸塩／色素指示試薬組成物によって
、蛋白質濃度間の色分解が改良され、したがって特に約
１５ｍｇ／／１以下の低濃度〜痕跡量のアルブミン濃度
における試験感度が向上する。
ン酸塩／色素コンプレックス指示試薬組成物を用いるこ
とによって、尿又は他の液体試験試料中の全蛋白質濃度
、低分子量蛋白質１度及び特に低濃度〜痕跡量の全蛋白
質濃度に関するより正確で確実な試験を行なうことがで
きる。タングステン酸塩／色素指示試薬組成物によって
、蛋白質濃度間の色分解が改良され、したがって特に約
１５ｍｇ／／１以下の低濃度〜痕跡量のアルブミン濃度
における試験感度が向上する。
明らかに、上記記載のような本発明の多くの修正及び変
更を本発明の精神及び範囲から逸脱することなく行なう
ことができ、したがって、特許請求の範囲によって示さ
れた制限のみにしか課せられるべきではない。
更を本発明の精神及び範囲から逸脱することなく行なう
ことができ、したがって、特許請求の範囲によって示さ
れた制限のみにしか課せられるべきではない。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１）水溶性のタングステン酸塩、ポリヒドロキシベン
ゼンスルホンフタレインタイプの色素及び／又はポリヒ
ドロキシベンゼンフタレインタイプの色素、並びに、組
成物を酸性のｐＨに保持するバッファーを含むことを特
徴とする、蛋白質含有液体試験試料と接触することによ
って、試験試料中の蛋白質の存在及び／又は濃度を示す
のに十分な色変化を示しうる組成物。 （２）水溶性タングステン酸塩が、タングステン酸アン
モニウム、ｐ−タングステン酸アンモニウム、タングス
テン酸ビスマス、タングステン酸カドミウム、タングス
テン酸カルシウム、タングステン酸リチウム、タングス
テン酸マグネシウム、タングステン酸カリウム、メタタ
ングステン酸ナトリウム、タングステン酸ナトリウム、
タングステン酸ストロンチウム、タングステン酸亜鉛、
アルカリ金属及び／又はアンモニウム及び／又はアルキ
ル、ジアルキル、トリアルキルもしくはテトラアルキル
アンモニウムカチオンを有するホスホタングステン酸塩
、タングステン酸アルキルアンモニウムもしくはヒドロ
キシアルキルアンモニウム、タングステン酸ジアルキル
アンモニウムもしくはジ（ヒドロキシアルキル）アンモ
ニウム、及びタングステン酸トリアルキルアンモニウム
もしくはトリ（ヒドロキシアルキル）アンモニウム、あ
るいはこれらの組み合わせからなる群より選択される請
求項１記載の組成物。 （３）ポリヒドロキシベンゼンスルホンフタレインタイ
プの色素又はポリヒドロキシベンゼンフタレインタイプ
の色素が、ピロカテコールバイオレット、ポリガロール
レッド、ブロモピロガロールレッド、キシレノールオレ
ンジ、ピロガロールフタレイン及びｏ−ヒドロキシヒド
ロキノンフタレイン、あるいはこれらの組み合わせから
なる群より選択される請求項１記載の組成物。 （４）バッファーが、ラクテート、フタレート、トリク
ロロアセテート、スルホサリチレート、ホスフェート類
、アセテート類、塩化ナトリウム／塩酸、ピペラジン−
Ｎ，Ｎ′−ビス（２−ヒドロキシプロパン）スルホン酸
（ＰＯＳＰＯ）、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン
−Ｎ′−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、３−Ｎ
−（トリスヒドロキシメチル）メチルアミノ−２−ヒド
ロキシプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）、及び２−（
［トリス−（ヒドロキシメチル）−メチル］−アミノ）
エタンスルホン酸（ＴＥＳ）、あるいはこれらの混合物
からなる群より選択される請求項１記載の組成物。 （５）水溶性タングステン酸塩に対するポリヒドロキシ
ベンゼンスルホンフタレートタイプの色素及び／又はポ
リヒドロキシベンゼンフタレインタイプの色素のモル比
が約１：１〜約１：１０の範囲内である請求項１記載の
組成物。 （６）（ａ）液体試料を、水溶性のタングステン酸塩、
ポリヒドロキシベンゼンスルホンフタレインタイプの色
素及び／又はポリヒドロキシベンゼンフタレインタイプ
の色素、並びに、組成物を酸性のｐＨに保持するバッフ
ァーを含む試薬組成物と接触させ； （ｂ）試薬組成物の色変化の強度及び／又は程度から液
体試料中の蛋白質の存在及び／又は濃度を測定すること
を特徴とする、液体試料中の蛋白質の存在及び／又は濃
度を測定する方法。 （７）水溶性タングステン酸塩に対するポリヒドロキシ
ベンゼンスルホンフタレートタイプの色素及び／又はポ
リヒドロキシベンゼンフタレインタイプの色素のモル比
が約１：１〜約１：１０の範囲内である請求項６記載の
方法。 （８）（ａ）液体試料を、水溶性のタングステン酸塩、
ポリヒドロキシベンゼンスルホンフタレインタイプの色
素及び／又はポリヒドロキシベンゼンフタレインタイプ
の色素、並びに、組成物を酸性のｐＨに保持するバッフ
ァーを含む試薬組成物を含有する試薬試験パッドを有す
る分析対象物検出器具と接触させ； （ｂ）分析対象物検出器具を、液体試験試料中の蛋白質
含有量に応答した色変化に関して試験することを特徴と
する、液体試料中の蛋白質の存在及び／又は濃度を測定
する方法。（９）指示片：試薬試験パッド：及び、試験
試験パッド中に導入されており、水溶性のタングステン
酸塩、ポリヒドロキシベンゼンスルホンフタレインタイ
プの色素及び／又はポリヒドロキシベンゼンフタレイン
タイプの色素、並びに、組成物を酸性のｐＨに保持する
非キレート化バッファーを含む試薬組成物を含む、液体
試験試料中の蛋白質の存在及び／又は濃度を測定するた
めの分析対象物検出器具。 （１０）（ａ）液体試料を、水溶性のタングステン酸塩
、ポリヒドロキシベンゼンスルホンフタレインタイプの
色素及び／又はポリヒドロキシベンゼンフタレインタイ
プの色素、並びに、組成物を酸性のｐＨに保持するバッ
ファーを含む試薬組成物に接触させ； （ｂ）試薬組成物の色変化の強度及び／又は程度から液
体試料中の低濃度〜微量の蛋白質を検出及び測定するこ
とを特徴とする、液体試料中の低濃度〜微量の蛋白質を
検出及び測定する方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US202552 | 1988-06-06 | ||
| US07/202,552 US4960710A (en) | 1988-06-06 | 1988-06-06 | Device and method of assaying for trace mounts of proteins |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0244256A true JPH0244256A (ja) | 1990-02-14 |
| JPH0670632B2 JPH0670632B2 (ja) | 1994-09-07 |
Family
ID=22750349
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1141291A Expired - Fee Related JPH0670632B2 (ja) | 1988-06-06 | 1989-06-05 | 微量の蛋白質を試験するための組成物及び方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4960710A (ja) |
| EP (1) | EP0345582B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0670632B2 (ja) |
| AU (1) | AU606283B2 (ja) |
| CA (1) | CA1333251C (ja) |
| DE (1) | DE68903884T2 (ja) |
Families Citing this family (32)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5258308A (en) * | 1989-07-21 | 1993-11-02 | Freeman Mary J | Method, kit and apparatus for verifying calibration and linearity of vertical photometers |
| ATE155249T1 (de) * | 1991-09-09 | 1997-07-15 | Canon Kk | Quantitativer nachweis vom lipid |
| US5320969A (en) * | 1992-10-22 | 1994-06-14 | Miles Inc. | Method, composition and device for the semiquantitative determination of specific gravity of a test sample |
| US5302531A (en) * | 1992-10-22 | 1994-04-12 | Miles Inc. | Composition for the semiquantitative determination of specific gravity of a test sample |
| US5399498A (en) * | 1993-12-17 | 1995-03-21 | Miles Inc. | Reduction of background interferences in the molybdate-dye protein assay |
| US5780239A (en) * | 1994-11-23 | 1998-07-14 | Carter; Jesse M. | Method for the determination of cast in urine |
| PL322449A1 (en) * | 1995-03-24 | 1998-02-02 | Vorwerk Co Interholding | Method of testing domestic dust |
| US5593895A (en) * | 1995-04-27 | 1997-01-14 | Bayer Corporation | Method for the detection of protein in urine |
| CA2236350C (en) * | 1997-05-06 | 2007-05-15 | Thomas Arter | Dry analytical elements for the determination of protein |
| US5908787A (en) * | 1997-09-23 | 1999-06-01 | Bayer Corporation | Total protein detection method |
| US6475743B1 (en) | 1998-10-02 | 2002-11-05 | Ischemia Technologies, Inc. | Marker useful for detection and measurement of free radical damage and method |
| US20050142613A1 (en) * | 1998-10-02 | 2005-06-30 | David Bar-Or | Test for the rapid evaluation of ischemic states and kits |
| US20030215359A1 (en) * | 1998-10-02 | 2003-11-20 | Ischemia Technologies, Inc. | Tests for the rapid evaluation of ischemic states and kits |
| US7070937B1 (en) | 1998-10-02 | 2006-07-04 | Ischemia Technologies, Inc. | Marker useful for detection and measurement of free radical damage and method |
| US7282369B2 (en) * | 1998-10-02 | 2007-10-16 | Ischemia Technologies, Inc. | Tests for the rapid evaluation of ischemic states and kits |
| US7449338B2 (en) | 1998-10-02 | 2008-11-11 | Ischemia Technologies, Inc. | Tests for the rapid evaluation of ischemic states and kits |
| JP3516012B2 (ja) | 1998-12-25 | 2004-04-05 | アークレイ株式会社 | 微量の蛋白質を測定するための組成物 |
| JP4214271B2 (ja) * | 2002-10-15 | 2009-01-28 | アークレイ株式会社 | クレアチニン測定用試験片 |
| MXPA06003183A (es) * | 2003-09-23 | 2006-06-23 | Oakville Hong Kong Co Ltd | Dispositivos de prueba de flujo lateral y metodos de uso. |
| US7189522B2 (en) | 2005-03-11 | 2007-03-13 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Dual path immunoassay device |
| WO2006098804A2 (en) | 2005-03-11 | 2006-09-21 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Dual path immunoassay device |
| US20100022916A1 (en) | 2008-07-24 | 2010-01-28 | Javanbakhsh Esfandiari | Method and Apparatus for Collecting and Preparing Biological Samples for Testing |
| DE102009019902A1 (de) * | 2009-05-05 | 2010-11-11 | Merck Patent Gmbh | Mittel und Verfahren zur Bestimmung des Aldehyd-Gehalts |
| US8603835B2 (en) | 2011-02-10 | 2013-12-10 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Reduced step dual path immunoassay device and method |
| US9804154B2 (en) | 2013-03-12 | 2017-10-31 | Epinex Diagnostics, Inc. | Rapid test for urine albumin and urine creatinine |
| SG11201608278WA (en) | 2014-04-02 | 2016-10-28 | Chembio Diagnostic Systems Inc | Immunoassay utilizing trapping conjugate |
| JP6608642B2 (ja) * | 2014-08-07 | 2019-11-20 | アークレイ株式会社 | 尿試料の評価方法、分析装置及び分析システム |
| US20160116466A1 (en) | 2014-10-27 | 2016-04-28 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Rapid Screening Assay for Qualitative Detection of Multiple Febrile Illnesses |
| CN105115966B (zh) * | 2015-08-18 | 2016-11-09 | 江苏东博生物医药有限公司 | 尿液中巯基类化合物检测试剂盒及制备方法和应用 |
| CN106370646B (zh) * | 2016-08-16 | 2022-06-28 | 南阳师范学院 | 检测待测样品中蛋白质的方法 |
| AU2019207642A1 (en) | 2018-01-09 | 2020-07-02 | Idexx Laboratories, Inc. | Methods for measuring analyte and/or protein in biological samples |
| CN110632325B (zh) * | 2019-09-27 | 2022-04-19 | 昆山迪安医学检验实验室有限公司 | 一种总蛋白检测试剂及其制备方法 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2862796A (en) * | 1953-07-20 | 1958-12-02 | Edward N Gomberg | Method and means for testing aqueous solutions for presence of protein |
| US3485587A (en) * | 1956-02-29 | 1969-12-23 | Miles Lab | Protein indicator |
| US2986453A (en) * | 1957-11-13 | 1961-05-30 | Miles Lab | Diagnostic compositions |
| US4110077A (en) * | 1976-10-08 | 1978-08-29 | Hoffmann-La Roche Inc. | Determination of β-lipoproteins in blood serum with polyanethole sulfonate |
| DE2653537C3 (de) * | 1976-11-25 | 1979-08-23 | Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt | Verfahren und Mittel zur Bestimmung von Hydroperoxiden |
| US4239495A (en) * | 1979-02-12 | 1980-12-16 | Sherwood Medical Industries Inc. | Determination of protein |
| US4268270A (en) * | 1979-04-30 | 1981-05-19 | Children's Hospital Medical Center | Glycosylated hemoglobin measurement |
| JPS6282359A (ja) * | 1985-10-07 | 1987-04-15 | Saburo Yasuda | たん白半定量試験紙 |
-
1988
- 1988-06-06 US US07/202,552 patent/US4960710A/en not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-05-18 CA CA000600070A patent/CA1333251C/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-05-27 EP EP89109612A patent/EP0345582B1/en not_active Expired
- 1989-05-27 DE DE8989109612T patent/DE68903884T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-06-05 AU AU36027/89A patent/AU606283B2/en not_active Ceased
- 1989-06-05 JP JP1141291A patent/JPH0670632B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| BUNSEKI KAGAKU=1983 * |
| CHEM PHARM BULL=1984 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE68903884T2 (de) | 1993-04-22 |
| JPH0670632B2 (ja) | 1994-09-07 |
| US4960710A (en) | 1990-10-02 |
| EP0345582A2 (en) | 1989-12-13 |
| EP0345582B1 (en) | 1992-12-16 |
| AU606283B2 (en) | 1991-01-31 |
| CA1333251C (en) | 1994-11-29 |
| DE68903884D1 (de) | 1993-01-28 |
| EP0345582A3 (en) | 1990-02-28 |
| AU3602789A (en) | 1989-12-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH0244256A (ja) | 微量の蛋白質を試験するための組成物及び方法 | |
| JP2519102B2 (ja) | 水性液を比重に関して試験するための組成物及び方法 | |
| US5302531A (en) | Composition for the semiquantitative determination of specific gravity of a test sample | |
| US5049358A (en) | Composition and test device for assaying for proteins | |
| US5403744A (en) | Method, composition and device for measuring the ionic strength or specific gravity of a test sample | |
| JP3219874B2 (ja) | 尿タンパク質検定のための改良された組成物および試験具ならびにそれを用いる方法 | |
| US5077222A (en) | Method for assaying for proteins using a dual indicator reagent composition | |
| US5320969A (en) | Method, composition and device for the semiquantitative determination of specific gravity of a test sample | |
| US5087575A (en) | Composition for determining trace amount of protein | |
| US5350694A (en) | Composition method and device for measuring the divalent cation concentration or specific gravity of a test sample | |
| JP3061447B2 (ja) | 総蛋白を分析するための試験用パッドの製造方法、試験具、それを用いる測定方法及び試験具の製造方法 | |
| US5240735A (en) | Method of manufacturing a test article for the determination of protein | |
| US5124266A (en) | Method and device for determining protein using carrier matrix impregnated with polymerized urethane based compounds and method of making the device | |
| JP3516012B2 (ja) | 微量の蛋白質を測定するための組成物 | |
| JPH09145711A (ja) | 尿中タンパク質を検出するための試験片 | |
| AU609630B1 (en) | Method and composition for the assay of albumin |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |