JPH03991B2

JPH03991B2 -

Info

Publication number: JPH03991B2
Application number: JP20227184A
Authority: JP
Inventors: Masayuki Kageyama; Sadayuki Juta
Original assignee: Sankin Industry Co Ltd; Toppan Printing Co Ltd
Current assignee: Sankin Industry Co Ltd; Toppan Inc
Priority date: 1984-09-27
Filing date: 1984-09-27
Publication date: 1991-01-09
Also published as: JPS6178373A

Description

【発明の詳細な説明】

（産業上の利用分野）本発明は、嫌気性細菌を培養するに当り、簡単
な操作でかつ、確実に培養のできる容器に関する
ものであり、主として嫌気性細菌の有無の検査お
よびサンプリングからアナエロボツクスまでの大
量培養に至るまで、輸送用容器として有利な嫌気
性細菌の培養容器に関するものである。（従来の技術）現在市販されている嫌気培養管には円筒状の容
器に脱酸素、能力を有する薬剤、あるいは脱酸素
能力と炭酸ガス発生能力を兼ね備えた薬剤を収容
したものがある。これらは、例えば試験管等の容
器に培地および菌を収容した後、この培養管に入
れ、ゴム栓等で密封し、上記薬剤により脱酸素ま
たは脱酸素と炭酸ガスの発生を起こし嫌気性菌を
培養するものである。また、これを更に改良して、脱酸素能力または
これと炭酸ガス発生能力を有する薬剤を収納し
て、嫌気状態となつた容器内部に外気からの密封
性を保持したまま培地及び菌を収容した試験管状
容器を収容できるようにした容器も知られてい
る。例えば、特公昭58−24115号公報に従う商品
名「Vacutainer」（BBL社製）は上記原理による
ものである。またこれらの容器には嫌気状態を検
知して変色する酸素インジケータも使用している
が、実際の商品では検知剤溶液を含浸させたシー
トまたは錠剤の形状が多く、従つて上記脱酸素ま
たは脱酸素・炭酸ガス発生薬剤とは別に容器内に
挿入されているために培養液の観察がしにくいと
いう欠点があつた。また、嫌気性細菌を培養する
際、採取した菌は、少しでも早く嫌気的雰囲気に
戻す必要がある（可能であればすべて嫌気的雰囲
気を維持したまま培養することが望ましいが、現
状では不可能である）。ところが、脱酸素薬剤ま
たは脱酸素・炭酸ガス発生薬剤の様な化学反応を
用いて嫌気的雰囲を短時間に創り出すとはおのず
から限界がある。（発明が解決しようとする問題点）本発明はこれら従来の欠点を解消し、また嫌気
性細菌を培養する雰囲気を短時間に創り出し、上
記方法と同程度または、それ以上の効果を得るた
めの嫌気性菌の培養容器に関するものである。（問題点を解決するための手段）本発明は、管状本体と、開封可能な上蓋・底蓋
とから成る気密性のよい容器において、 (a) 管状本体が培地入り容器支持部とその下に設
けられた管状本体脚部及び培地入り容器支持部
の上に設けられた培地入り容器収納部とから成
り、 (b) 管状本体における培地入り容器支持部及び底
蓋における脱酸素・炭酸ガス発生シートと対向
する面に凹凸を設け、 (c) 底蓋と管状本体脚部とで囲まれる空間内に脱
酸素・炭酸ガス発生シートを設置し、 (d) 底蓋と管状本体脚部とで囲まれる空間の大き
さを脱酸素・炭酸ガス発生シートの大きさより
わずかに大きくし、管状本体における培地入り
容器を収納するための空間の大きさを培地入り
容器の大きさよりわずかに大きくし、両空間を
連通する、ことを特徴とする嫌気性細菌の培養容器を提供す
る。本発明により、37℃で30分以内に酸素濃度を
0.1％以下、炭酸ガス濃度を５〜20％の雰囲気を
創り出す嫌気性細菌の培養容器に関するものであ
る。また、脱酸素・炭酸ガス発生シートの上部に
設けられた酸素インジケータにより、嫌気状態を
容器の外側から容易に観察、もしくは操作上のミ
スを確認可能とした嫌気性菌の培養容器に関する
ものである。以下本発明について図面に従い更に具体的に説
明する。第１図は、本発明の嫌気性細菌の培養を行う容
器に、脱酸素・炭酸ガス発生シート４及び嫌気性
細菌を接種した培地７入アンプル管６を設置し、
嫌気性細菌を培養する状態を示した断面図であ
る。第１図において本体２、上蓋１、底蓋３は、
ポリエステル樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリ
スチレン樹脂、ポリアクリル系樹脂等の熱成形性
が良く、ガスバリヤー性及び透明性良好なプラス
チツクが適当であり、上部より、酸素インジケー
タ４３の変色状態が容易に観察できることが特徴
である。また本体２と上蓋１及び底蓋３との嵌合
部には、ブチルゴム、シリコンゴム等弾力性の良
いパツキン１３及び１４を用いることにより密封
性をより一層上げられる。また、アンプル管６が
設置される本底部には、底蓋３を設け、この底蓋
３と管状本体脚部とで囲まれる空間内に脱酸素・
炭酸ガス発生シートを設置する。この管状本体に
は、アンプル管管６を支持するための培地入り容
器支持部を設け、この培地入り容器支持部は管状
本体と底蓋３内と通気性を持たせるための開口部
を有する。また、この培地入り容器支持部のアン
プル管と接触する部分１２には、凹凸部を設ける
ことにより通気性を維持することが可能である。底蓋３における脱酸素・炭酸ガス発生シート４
と対向する面には凹凸部を設けることにより、脱
酸素・炭酸ガス発生シート４の空気接触面積を大
きくし、嫌気的雰囲気をより早く創り出すことが
可能となる。８は培地入アンプル管６のキヤツプ
を示し使用前にはあらかじめγ線もしくはエチレ
ンオキサイド等の滅菌処理が必要となる。９はキ
ヤツプ上に設けられたツマミ部を示し、培養容器
中からアンプル管を取り出し易く工夫したもので
ある。以上のように、底蓋３と管状本体脚部とで
囲まれる空間の大きさを脱酸素・炭酸ガス発生シ
ート４の大きさよりわずかに大きくし、管状本体
における培地入り容器を収納するための空間の大
きさを培地入り容器の大きさよりわずかに大きく
し、両空間を連通することにより、37℃で30分以
内に酸素濃度を0.1％以下の雰囲気を創り出すこ
とができる。第２図は脱酸素・炭酸ガス発生シート４を示
す。４１は、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム及び
硫酸第一鉄７水塩を主剤とした水溶液を吸収した
吸水性・通気性良好なシートであり、例えばセル
ローズ繊維を主成分としたものが良好である。４
２は脱酸素・炭酸ガス発生薬剤水溶液が４３の酸
素インジケータインキ層に浸透することを防ぐた
めの疎水性層を示し、熱可塑性プラスチツクフイ
ルム、紙／プラスチツクフイルム等の積層体が適
している。次に酸素の有無を検知する酸素インジケータイ
ンキとしては、チアジン系染料としてメチレンブ
ルー等、また、還元剤としてＬ−アスコルビン酸
等を用い、その使用量は、上記染料１重量部に対
し１〜150重量部のＬ−アスコルビン酸を使用す
ることが好ましい。このインジケータを溶解もし
くは分散するためのアルコール可溶性バインダー
樹脂としては、エチルセルローズ、ブチラール樹
脂、酢酸ビニル樹脂等の少なくとも１種をエチル
アルコール、イソプロピルアルコール等のアルコ
ール系有機溶剤に溶解または分散したもので、少
なくとも20重量部以上を含有するものである。ま
た、上記溶液はアルコール系溶剤100重量部に対
し、樹脂５〜30重量部の範囲で溶解したものであ
る。また、本発明で用いるインジケータ組成物とし
て、バインダー樹脂と共に無機多孔物質が混用さ
れ、二酸化珪素、珪酸カルシウム等が使用され、
その使用量はバインダー樹脂20重量部に対し、５
〜20重量部の範囲が好ましい。この様な無機多孔
物質を加えたインキ組成物は、酸素との接触がよ
り速やかに行なわれ、インジケータの変色がより
速やかに行なわれることとなる。（発明の作用）本発明による37℃で30分以内に酸素濃度が0.1
％以下に達する培養容器と37℃で60分後に酸素濃
度が0.1％以下となる培養容器を用いて、同一嫌
気性細菌を培養比較した所、本発明に従う前者の
方が嫌気性細菌の増殖は旺盛であることが確認さ
れた。本発明の効果を確認するため以下の様な実験を
行つた。（実施例１）脱酸素・炭酸ガス発生シートを以下の様に設定
し、容器体積を変え実験を行つた。上質紙（60
ｇ／m²）／ポリエチレン（30μ）のポリエチレン
側とセルローズを主成分とするクツシヨンペーパ
ー3.2mm厚のもの（阿波製紙(株)製）とを熱圧着し、
上質紙側にシルクスクリーン印刷方式により酸素
インジケータインキを印刷し、40mmφに打ち抜い
た。この時のインキ組成は表−１の通りである。表−１Ａエチルアルコールエチルセルローズサイロイド 80重量部 20 〃 10 〃Ａ：Ｂの比ＢメチレンブルーＬ−アスコルビン酸水 0.1重量部 10重量部 100重量部 100：40 次にこの積層体の酸素インジケータインキ印刷
面の反対側から表−２に示す組成よりなる脱酸
素・炭酸ガス発生薬剤溶液１mlを滴下して脱酸素
炭酸ガス発生シートを製造した。表−２Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム５重量部硫酸第一鉄７水塩３〃水 10 〃次にポリアクリルスチレン樹脂を0.8mm厚で成
形し、第１図に準じた形状で２種類の容器を準備
した。すなわち、脱酸素・炭酸ガス発生シート及
びアンプル管を除いた培養管の空気容量が約20c.c.
(A)のものと約80c.c.(B)のものを作成し、それぞれの
容器に、上記脱酸素・炭酸ガス発生シートを、第
１図、底蓋３の位置に設置し、培地入りアンプル
管（容積約27c.c.）６を本体２に挿入後、上蓋１を
し、37℃の恒温室に放置し、ガス濃度の変化及び
酸素インジケータの色変化を観察した所、以下の
表−３のような結果を得た。

【表】

【表】すなわち、それぞれの容器を37℃の恒温室に放
置した場合、容器Ａでは30分以内、容器Ｂでは、
60分以内に酵素濃度が0.1％以下となることが確
認された。次に以下の様な実験方法に従い、嫌気性細菌の
培養を試みた。実験方法はVPI（THE Anaerobic Laboratory
of Virginia Polytechnic Institute）システムに
準拠して、下記菌株をBHI（Brain Heart
Infusion）brothで培養し、培養後菌数が
10^5〜7CFU／mlになるように菌液を調整し、Cary
−Blair培地のアンプル内に植菌する。そして、
嫌気ボツクス内で本装置にセツトし、37℃恒温室
にて保存する。保存した装置から経時的（０，
２，４，６，24，48hr）に嫌気ボツクス内でアン
プルを取り出し、BHI Agarplateに塗布し、嫌
気ボツクス内で37℃で48時間培養後、菌数を測定
した。使用菌株は、歯肉炎下プラーク由来のカプノサ
イトフアーガー・オクラシヤ（Capnocytophaga
ochracea）Ｓ−３、アクチノバチノバチラス・
アクチノマイセテムコムタンス
（Actinobacinobacillus
actinomycetemcomtans）ATCC29522、バクテ
ロイデス・ジンジバリス
（Bacteroidesgingivalis）＃381、バクテロイデ
ス・アサツカロリチカス（Bacteroides
asaccharolyticus）ATCC25260、バクテロイデ
ス・メラニノゲニカス・インターメデイアス
（Bacteroides melaninogenicus s.s.inter
medius）＃24、バクテロイデス・メラニノゲニ
カス・メラニノゲニカス（Bacteroides
melaninogenicus s.s.melaninogenicus）
ATCC15930およびフソバクテリウム・ヌクレア
タム（Fusobacterium nucleatum）ATCC25586
を使用した。（実施例２）特に酸素に対する感受性の高いB.
melaninogenicus s.s.intermediusを用いてＡ，
Ｂ両装置で輸送した時の生存率を上記方法により
調べた。第３図は、Ａ，Ｂ両装置における輸送時の生存
率を示したもので、Ｂ装置においては約２時間で
上記菌株は死滅するが、Ａ装置においては、48時
間でも増植も死滅もなく菌株の生存を維持するこ
とが可能である。（実施例３）上記の嫌気性細菌（７菌株）をＡ装置を用い
て、本装置の有用性を上記方法により調べ、いず
れの菌も死滅あるいは増殖していないことが判明
した。（表−４）

【表】

【表】（発明の効果）本発明により、混入空気中酸素を希釈する方法
によらず、嫌気性細菌を培養する雰囲気を短時
間、すなわち37℃で30分以内に酸素濃度を0.1％
以下に満すことが可能となり、嫌気性細菌の培養
を簡便にかつ確実に行い得ることが確認された。
また、嫌気状態の確認は、酸素インジケータの変
色により容器外部から明確に判断できる。本装置は、サンプリング後短時間で嫌気条件
（酸素0.1％以下、炭酸ガス５〜20％）を確保する
ことができ、少なくとも48時間、嫌気性細菌を増
殖および死滅させることなく輸送することができ
輸送用装置として有用である。上記方法は説明の目的で輸送用装置として説明
してきたが、本発明はその意味に制限されるもの
ではなく、本発明の装置はアンプルに輸送用培地
（Cary−Blair培地等）ではなく増殖用培地
（BHI培地等）を用いることにより嫌気性細菌を
培養することができ、さらに嫌気的条件下で行う
嫌気性細菌の生理活性を調べるのに使用できるな
ど、本発明の装置は嫌気条件下で行う種々の用途
に使用可能である。

【図面の簡単な説明】

図面は本発明の実施例を示し、第１回は本発明
の培養容器の断面図、第２図は脱酸素・炭酸ガス
発生シート４の断面図、第３図は本発明の培養容
器を使用した場合の菌の生存率の例を示すグラフ
である。１…上蓋、２…容器本体、３…底蓋、４…脱酸
素・炭酸ガス発生シート、６…アンプル管、７…
培地、８…キヤツプ、９…ツマミ部、１０…開孔
部、１１…凹凸部、１２…凹凸部、１３，１４…
パツキン、４１…シート、４２…疎水性層、４３
…酸素インジケータインキ。

Claims

【特許請求の範囲】

１管状本体と、開封可能な上蓋・底蓋とから成
る気密性のよい容器において、管状本体が培地入
り容器支持部とその下に設けられた管状本体脚部
及び培地入り容器支持部の上に設けられた培地入
り容器収納部とから成り、管状本体における培地
入り容器支持部及び底蓋における脱酸素・炭酸ガ
ス発生シートと対向する面に凹凸を設け、かつ底
蓋と管状本体脚部とで囲まれる空間内に脱酸素・
炭酸ガス発生シートを設置し、底蓋と管状本体脚
部とで囲まれる空間の大きさを脱酸素・炭酸ガス
発生シートの大きさよりわずかに大きくし、管状
本体における培地入り容器を収納するための空間
の大きさを培地入り容器の大きさよりわずかに大
きくし、両空間を連通することを特徴とする嫌気
性細菌の培養容器。