JPH0395236A - 表面改質ポリアクリロニトリル基剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、アクリロニトリルの重合体またはその共重合
体よりなる芯体と、その表面上のＮ−ハロアミド基とを
有する基剤に、また、その製造方法に関するものである
。本発明の一つの具体例は、その表面に吊り下げられた
（　ｐｅｎｄａｎｔ）　Ｎ−ハロアミド基を有するポリ
アクリロニトリルまたはアクリロニトリル共重合体の多
孔性、等方性ビーズを指向している。

本発明を要約すれば、アクリロニトリルの単独重合体ま
たは共重合体の芯体と　Ｎ−ハロアミドの表面とよりな
る組成物が、本件明細書に開示されたことである。この
組成物の製造方法も開示されている。

本発明はさらに、その中の上記の吊り下がりＮ−ハロア
ミド基がさらにその他の反応剤と反応して官能化された
基剤を形成している基剤に関するものでもある。上記の
官能化された基剤は、生物学的物質との錯体を形戊し、
これにより、たとえば上記の物質を含有する溶液からこ
の物質を分離するのに使用することができる。

本発明に従って製造した基剤は、クロマトグラフィー分
離法を含む種々の応用面に有用である。

中性の親木表面を有する剛い（ｒｉｇｉｄ）　ｓ膨潤し
ない重合体材料は、多くの応用面に有用である。

これにはクロマトグラフィー担体、膜、固定（　ｉｍｍ
ｏｂｉ　ｌ　ｉｚｅｄ）酵素用の担体または免疫学的検
定用担体が含まれる。当業界では、ポリアクリロニトリ
ル表面を水和してアクリルアミド基を形戊することが周
知されている。

米国特許第４．１１０．５２９号（ストイ（Ｓｔｏｙ）
は、凝固中のビーズの表面層への反応性基の導入を開示
している。ストイ特許の実施例５は、ポリアクリロニト
リルを部分水和して４０％のアミド基を得、ついで凝固
させて多孔性ビーズを形戊させることを開示しているが
、この手法で製造したビーズは水中で高度に膨潤し、か
つ、所望のアミド基以外に、かなりの量の副生或物のカ
ルボキシル基をも含有している。したがって、このビー
ズはクロマトグラフィー担体として特に有用であるとは
言えない。その膨潤する傾向は、クロマトグラ７イーカ
ラム中の過剰な圧力低下と不安定な流量との原因となり
、カルボキシル基の存在は、イオン交換を含まない分離
工程において非特定的結合を生む原因となる。アミド基
への高度の転化がビーズの強度の有意の損失を生み、ビ
ーズの剛性の損失によりクロマトグラフィー的流動の損
失を生むので、高い（４０％まで）アミド転化比率から
も問題が生ずる。

先行技術における、ニトリル基をアミドに転化させる他
の試みには、強酸または強塩基を用いる処理が含まれて
いるが、これらの技術の双方とも一般に、若干の表面力
ルボキシル基が形戊されることになる。たとえば米国特
許第４．１４３．２０３号（リゴボラス（Ｒｉｇｏｐｏ
ｌｏｕｓ）　）は、非透過性剛性ポリアクリロニトリル
芯体と水和表面とを有する固体粒子を開示している。こ
の表面は、固体ポリアクリロニトリル粒子を硫酸溶液中
、７５ないし９５℃の温度範囲で加熱することにより水
和されるが、この条件下で形或されるビーズは非多孔性
であり、また、かなりの量の副生或物のカルポキシル基
をも含有している。したがって、このビーズは非イオン
交換タンパク質特定クロマトグラフィーの応用面には有
用でない。

塩基性条件下におけるポリアクリロニトリルの表面改質
は、才−夕ら，日本化学会誌．　６．　１２００（１９
８５）により、表面赤外線スペクトル法を用いて研究さ
れた。オーク（Ｋ−　Ｏｈｔａ）らは、ポリアクリロニ
トリルフィルムを５％水酸化ナトリウム溶液で７０℃で
４時間処理したのちに、フィルムの表面に４．５％のア
ミド基と５．７％のカルボキシル基とを見いだしたこと
を報告している。５％水酸化ナトリウムと　１５％過酸
化水素との溶液を用いてフィルムを７０℃で４時間処理
（水性アルカリ性過酸化物反応）すると、２．１％のア
ミド基と０．７％のカルポキシル基とが生戊することが
報告されている。したがって、これらの処理は十分に選
択的ではない。

したがって、最近まで、当業界の状況ではなお、高度に
選択的な、非膨潤性の、高度に多孔性の、中性の親水性
表面を有するアクリロニトリル基剤の形戊に際して、深
刻な障害に遭遇していたのである。高度に多孔性のビー
ズの表面積が広く、重合体構造の直径が小さければ、永
和の程度の正確な制御が決定的に重要になる。ニトリル
基のアミド基への転化が１５％を超えるならば、クロマ
トグラフィー分離に際して流量に有意の損失が生まれる
結果となる。酸性水利に伴う反応の程度を正確に制御す
ることは困難である。酸性水和はまた、“ブロック”重
合体構造を生む、近傍の基への強力な効果を有すること
が知られている。低い転化率でのブロック重合体構造は
、表面が不均一になる結果を生む可能性を有する。また
、これは、クロマトグラフィーへの適用において非特定
的結合に伴う問題を生ずる。酸性永和に伴う第３の問題
は、カルボキシル基およびイミド基の生戊である。上記
のように、カルボキシル基の存在は、サイズ除外（ｓｉ
ｚｅ　ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ）中に、または親和性クａマ
トグラフィーへの適用ｌ：おいて、望ましくないイオン
相互作用の原因となる。

共に受理された出願連続番号０７／２７６．　１８３に
おいては、使用する溶媒を注意深く制御するニトリルの
アルカリ性過酸化物永和により、上記の諸問題が回避さ
れることが開示されている。この反応は、イミド基また
はカルボキシル基への副反応を伴うことなく、ニトリル
基をアミド基に選択的に転化させる。溶媒を適当に選択
することにより、この反応を容易に制御することができ
、実際に、低い転化率で停止させることができる。溶媒
、好ましくはメタノールの使用により、基剤の全表面を
（後に定義するように）転化させることができる。この
方法は、基剤表面においてアミド基の均一な分布が生ま
れることを開示している。

この穏やかな処理では、ポリアクリロニトリル芯体の剛
性の受ける影響は最小限に留まり、したがって、基剤は
非圧縮性であり、水中で実質的に膨潤しない。本件明細
書中で使用する場合には、“非圧縮性（ｎｏｎ−ｃｏｍ
ｐｒｅｓｓｉｂｌｅ）　”の語は、縦型床（ｃｏｌｕｍ
ｎａｒ　ｂｅｄ）中の約３０００　ｐｓｉ　までの静水
圧に対して抵抗性を有し、崩壊して床を通過する流れを
妨害する現象が起こらないことを表す。

たとえば上記の米国連続番号０７／２７６　．　１８３
に開示された表面処理した基剤のような基剤を、その表
面に吊り下がり　Ｎ−クロロアミド基を有し、基剤の芯
体は反応せずに留まるように転化させる、一つの方法が
ここに見いだされた。このようにして製造しｔ；基剤は
、吊り下がり　Ｎ−クロロアミド基の反応を通じて基剤
の芯体に結合した官能性部分を有する、表面処理した種
々の生或物の製造の中間体として有用である。

本発明に従えば： ａ）　ポリアクリロニトリルまたはアクリロニトリルと
少なくとも１種の共重合単量体との共重合体を含んでな
る芯体と ｂ）　その上に均一に分布した　Ｎ−ハロアミド基なら
びに任意にニトリル基およびアミド基を有する表面 とよりなる基剤が提供される。

本発明の好ましい具体例においては、実質的に表皮を持
たない、実質的に｛．５ｍα／ｇ未満でない微孔体積を
有する、実質的に等方性の、ポリアクリロニトリルまた
はアクリロニトリルの共重合体の芯体と、その表面に均
一に分布したＮ−クロロアミド基、および任意にニトリ
ル基とよりなる多孔性ビーズが提供される。

本発明に従えば、また、 ａ）　ポリアクリ口ニトリ？レまＩ；はアクリロニトリ
ルと少なくとも１種の共重合単量体との共重合体を含ん
でなる基剤をアルカリ性触媒および過酸化物、ならびに
任意に還元剤と、反応条件下で、基剤の表面に分布した
ニトリル基の少なくとも一部をアミド基に転化させるの
に十分な時間接触させ； ｂ）　上記の基剤をノ１ロゲン化剤と反応条件下で、ア
ミド基の少なくとも一部を　Ｎ−ｔ〜ロアミド基に転化
させるのに十分な時間接触させ； Ｃ）　表面改質された基剤を回収する ことよりなる、上記の基剤の製造方法が提供される。

また、本件明細書には、 ａ）　重合体ビーズまたは共重合体ビーズに対して非溶
媒である液体中に、ポリアクリロニトリルまたはアクリ
ロニトリルと少なくとも１種の共重合単量体との共重合
体を含んでなるけん濁液を形戊させ； ｂ）　アルカリ性触媒、過酸化物および任意に還元剤を
上記のけん濁液に添加し、全二１・リル基の約１５％ま
でを水和によりアミド基に転化させるのに十分な時間加
熱し； Ｃ）上記のけん濁液から上記のビーズを回収し：ｄ）上
記のビーズをハロゲン化剤と、反応条件下で、上記の表
面アミド基の少なくとも一部をＮ−ハロアミド基に転化
させるのに十分な時間接触させ； ｅ）　表面改質した多孔性重合体ビーズを回収する ことよりなる、上記のポリアクリロニトリル多孔性ビー
ズ基剤の製造方法が開示してある。

まｔ；、 ａ）　ポリアクリロニトリルまたはアクリロニトリルと
少なくとも１種の共重合単量体との共重合体を含んでな
る芯体と ｂ）　その上に均一に分布した ｉ）生物活性配位子と表面に結合したＮ−／’ロアミド
基との反応より誘導された化学結合を通じて表面に結合
した吊り下がり生物活性配位基、 ならびに任意に、 ｌｉ）ニトリル基および／またはアミド基を有する表面 とよりなる、生物学的物質の回収および／または単離に
有用な物質の組成物も本件明細書に開示してある。

本件明細書にはさらに、 ａ）　ポリアクリロニトリルまたはアクリロニトリルと
少なくとも１種の共重合単量体との共重合体を含んでな
る基剤をアルカリ性触媒、過酸化物および任意に還元剤
と、反応条件下で、基剤の表面に分布したニトリル基の
少なくとも一部をアミド基に転化させるのに十分な時間
反応させ；ｂ）　上記の基剤をハロゲン化剤と反応条件
下で、上記の表面アミド基の少なくとも一部を　Ｎ−ハ
ロアミド基に転化させるのに十分な時間反応させ；Ｃ）
　上記の基剤を生物活性配位子と反応させて、上記の生
物活性配位子を上記のＮ−ハロアミド基より誘導した化
学結合を通じて上記の基剤に結合させ、 ｄ）　上記の基剤を回収する ことよりなる、生物学的物質の回収および／または単離
に有用な上記の物質の組成物の製造方法も開示してある
。

また、上に定義した物質の組成物を用いる生物学的物質
の回収方法および／または単離方法も本件明細書に開示
してある。

アクリロニトリルの単独重合体または共重合体よりなる
基剤は周知の物質である。たとえば、ポリアクリロニト
リルの半透膜は種々の化学的分離に利用されている。ポ
リアクリロニトリルの中空繊維、たとえばアサヒ医学社
（Ａｓａｈｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏ。

Ｌｔｄ）により　ＰＡＮｌ４０の名で市販されているも
のは、現在、腎臓透析装置に使用されている。

アクリロニトリルの重合体または共重合体よりなる多孔
性ビーズ基剤は当業者には公知であり、本発明の実施に
も利用されている。多孔性共重合体を製造する一つの方
法は、米国特許第４，２４６．３５１号に記載されてい
る。多孔性ポリアクリ口ニトリルビーズを製造する好ま
しい方法は、全てｌ９８８年１１月２３日付で出願され
た、共に受理された同時係属中の上記のタックおよびヒ
スコックの米国特許出願連続番号０７／２７５，３１７
、リー　ヒスフックおよびタックの連続番号０７／２７
５　，　１７０、ならびにタックおよびビスコックの連
続番号０７／２７５　，　２５６に開示されている。そ
こに開示されている熱誘導相分離法は、アクリロニトリ
ルの重合体またはその共重合体よりなる、実質的に表皮
のない（ｓｋｉｎｌｅｓｓ）　、等方性の、かつ、大き
な微孔体積を有する微孔ビーズを提供する。

この種の多孔性ビーズ基剤は、好ましい基剤の中でも、
本発明の実施に使用される。非多孔性のシートまたはフ
ィルム、多孔性膜、多孔ｆ！Ｅｍ維、単繊維（＋ｎｏｎ
ｏｆｉｌａｍｅｎｔ）　、アクリル性ヤーンおよびフィ
ブリル化繊維ならびにこの種の形状の１種または２種以
上のものよりなる構造体を含む中空繊維のようなポリア
クリロニトリル基剤も好ましい。

基剤の形状がここに開示した発明の実施にとって決定的
なものではないことは、容易に見られるに相違ない。

上に述べたように、ポリアクリロニトリル基剤はアクリ
ロニトリルの単独重合体よりなるものであっても、共重
合体よりなるものであってもよい。

適当な共重合単量体には、Ｃ　２−Ｃ　ａ−モノオレフ
ィン、ビニルアミノ芳香族化合物、アルケニル芳香族化
合物、ビニル芳香族化合物、ハロゲン化ビニル、Ｃ＋−
Ｃａ−アルキル（メタ）アクリル酸エステル、アクリル
アミド、メタクリルアミド、ビニルビロリドン、ビニル
ビリジン、アルキル（メタ）アクリル酸の　Ｃ　，−Ｃ
　．−ヒドロキシエステル、（メタ）アクリル酸、アク
リロメチルブロビルスルホン酸、Ｎ−ヒドロキシ含有Ｃ
　＋−Ｃ　＊−アルキル（メタ）アクリルアミド、アク
リルアミドメチルブロビルスルホン酸、酢酸ビニル、（
メタ）アクリル酸グリシジル、（メタ）アクリル酸グリ
セロール、トリスー（ヒドロキシメチル）一アミノメチ
ルー（メタ）アクリルアミドまたはこれらの混合物が含
まれる。アクリロニトリル共重合体には、約９９ないし
約２０重量部のアクリロニトリルと約１ないし約８０重
量部の共重合単量体とよりなるものが可能である。アク
リロニトリルが約９０モル％以上存在することが好まし
く、好ましい共重合単量体はアクリル酸メチルが含まれ
る。

本件明細書において本発明記載の基剤の物理的記述に使
用する“表面”の語は、基剤と非基剤との界面を意味す
る。本件明細書において使用する“芯体（ｃｏｒｅ）　
″の語は、基剤の“表面“以外の部分を表す。

本発明の実施においては、アクリロニトリル基剤の表面
が最初に水和され、この表皮が吊り下がりアミド基を有
している。このことは、基剤の表面に存在するニトリル
基の少なくとも一部をアルカリ性過酸化物および任意に
還元剤と、この重合体に対して非溶媒の液体中で反応さ
せることにより達或される。この反応は、イミド基また
はカルポキシル基への副反応なしに、ニトリル基を選択
的にアミド基に水和する。表面二トリル基の少なくとも
一部がアミド基に転化したこの反応の生或物は、以後、
゛基剤【″と呼ぶ。さらに、本発明のこの初期反応は驚
くほど容易に制御することができ、ニトリル基の約１５
モル％以下のアミド基への転化が容易に得られる。この
反応は、上に引用した、共に受理された特許出願連続番
号０７／２７６　，　１８３に一般的に開示されている
。

ビーズを基剤として使用するならば、基剤■を製造する
工程は、上記のビーズと、上記のビーズと形戊された吊
り下がりポリアクリルアミド表面とよりなる、重合体に
対する非溶媒とのけん濁液を形成することよりなる。こ
のけん濁液に触媒を導入することも考えられる。ついで
、このけん濁液を撹拌し、アルカリ性反応剤を添加する
。ついで、このけん濁液を加熱し、けん濁液を撹拌しな
がら過酸化物および、好ましくは還元剤を添加し、反応
を所望の程度まで行わせる。

本発明の実施に使用する適当な過酸化物には、過酸化水
素、ｔ−プチルハイドロバーオキサイド、またはその混
合物等が含まれる。過酸化水素が特に好ましい。

多くのアルカリ性反応剤が当業者には公知であり、本発
明における使用に適している。アルカリ性反応剤には水
酸化ナトリウム、水酸化カリウム、またはその混合物等
が含まれる。

還元剤は、中間体のハイドロパーオキサイドと反応し得
るならば、いかなるものであってもよい。

ジメチルスルホキシドが特に好ましい。

反応に適した溶媒の選択が本発明にとって基本的である
。溶媒系の各戊分の選択と濃度とが反応の選択性と程度
とを制御すると考えられている。

本件出願人ら゛はいかなる理論にも束縛されることを望
まないが、アルカリ性反応剤と過酸化物とは溶解しなが
ら、一方では、生或するアミド基に対しては溶媒和する
能力が限定されているという溶媒系の能力が、反応の程
度を制御すると考える。

したがって、溶媒戒分の比率を制御することにより、反
応の程度も制御することができる。過酸化水素が使用す
る過酸化物であり、ジメチルスルホキシドが還元剤であ
り、水酸化ナトリウムが使用するアルカリ性反応剤であ
る場合には、好ましくはメタノールを、生或するポリア
クリルアミド表面に対する溶媒和能力が限定された溶媒
として使用する。

表面二トリル基が選択的にアミド基に転化する初期の反
応に続いて、その製造に使用する反応剤との接触から基
剤Ｉを除去する。この基剤は、基剤表面に見いだされた
ニトリル基の少なくとも２．５％がアミド基に転化して
いることが好ましい。

最も好ましくは、多孔性基剤中の全二トリル基の約１０
　−　１５％がアミド基に転化する。

多孔性ビーズを基剤として使用するならば、これを非溶
媒とのけん濁液に導入するに先立って、このビーズを焼
きなます（ａｎｎｅａ＋）ことが好ましい。この焼きな
まし段階は、最も好ましくは以下のようにして実施する
。ビーズを５０゜Ｃ以下の温度で乾燥し、ついで、約３
０ないし約６０分の範囲の時間、９０−　１００℃に加
熱する。焼きなましによりビーズの反応性が減少するよ
うに思われる。

本件出願人らは、いかなる単独の理論にも束縛されるこ
とを望むものではないが、このビーズの反応性の減少は
重合体の秩序が増大し、かつ／または表面積が減少する
ことにより起こると考えられる．焼きなましはニトリル
対アミド比に影響を与え、したがって、本発明の実施に
予定されるべきである。

ついで、基剤■を第２の反応にかけて、上記のアミド基
の少なくとも一部を　Ｎ−ハロアミド基に転化させる。

好ましい具体例はＮ−クロロアミド基の形戊である。こ
の転化は、吊り下がりニトリル基の反応、または他の許
容しがたい基の分解を通じての副生戊物を生ずることな
く行われることが重要である。ハロゲン化反応用の溶媒
の選択においては、溶媒はハロゲン化剤に対しては不活
性で、かつ、基剤よりなる重合体に対して非溶媒でなけ
ればならない。好ましい溶媒には水、四塩化炭素、テト
ラクロロエタンおよびクロロベンゼンが含まれる。この
ハロゲン化反応には、アミドを有する基剤とハロゲン化
剤、たとえば気体塩素、次亜塩素酸　ｔ−ブチル、クロ
ロモノオキシド、次亜塩素酸ナトリウム、次亜塩素酸、
次亜臭素酸ナトリウム、およびこれらの混合物との使用
が含まれる。典型的には、ハロゲン化剤は溶液中に、基
剤のアミド含有量を基準にして約１．０当量ないし約２
．０当量の範囲の量で存在する。例としてＮ−クロロア
ミドの形或を使用すれば、塩素化剤を基剤Ｉと、表面ア
ミド基の所望の割合を塩素化させるのに十分な時間接触
させる。典型的には、約ｌ．２５当量の溶液を使用する
場合には、接触時間は約０．５時間ないし約４．０時間
の、好ましくは約Ｌ時間ないし約３時間の範囲である。

塩素化反応を実施する温度は厳密なものではない。典型
的な反応温度は約０℃ないし約４０℃の、好ましくは約
ｌＯないし約　３０℃の範囲である。

基剤Ｉの表面の吊り下がりアミド基のＮ−クロロアミド
基への転化は、反応時間と塩素化剤の濃度とを制限して
制御することができる。好ましくは２５％ないし約１０
０％の転化を達成し得るが、より典型的には５０　−　
９０％の転化に遭遇する。

多孔性基剤に関しては約０．５　−　３．０ミリモル／
ｇのＮ−クロロアミド含有量が好ましく、同一の基準で
約１．０　−　２．０の含有量を有するものが特に好ま
しい。

所望のレベルのハａゲン化への反応の完了に続いて、基
剤（以後、本件明細書中では“基剤Ｉ＋”と呼ぶ）をハ
ロゲン化剤との接触から外す。この基剤は、任意に洗浄
してハロゲン化剤の残留量を除去することができる。任
意ではあるが、多孔性基剤を使用する場合にはその微孔
にハロゲン化剤が保持される傾向があるので、この段階
が特に望ましい。

上記の反応を通じて製造される基剤ＩＩは、アクリロニ
トリルの重合体または共重合体の芯体とＮ−ハロアミド
基を有する表面とよりなる。先行の反応が実施された程
度に応じて任意に、かつ直接に、基剤１１の表面はさら
にアミドニトリルおよび反応していない共重合単量体の
基を有していてもよい。

吊りさがり　Ｎ−ハロアミド基が存在するために、Ｎ−
ハロアミド反応に関連する化学が広く知られているので
、基剤［１は種々の最終製品の製造に有用な中間体とし
ての使用に特に好適である。Ｎ一ハロアミドがホフマン
転移を受けてインシアネートを形戊することは、よく知
られている。たとえば米国特許第４．３０１，２５７、
４，３５６．２８９および４，３５７．４４７号はＮ−
クロロアミドよりの可溶性重合体インシアネートの製造
を開示している。さらに、ホ７７冫転移の一般的議論は
マーチ（Ｊ．　Ｍａｒロー・ヒル．　１９６８に含まれ
ている。たとえばケ，ミカル●レヴユ−　（Ｃｈｅｍｉ
ｃａｌ　Ｒｅｖｉｅｗｓ）　，巻坐，４５７　−　４９
６ページ（１９７２）は、基剤Ｉ＋　より形或されるイ
ンシアネート中間体よりの、多くの生成物の製造に使用
し得る種々の反応図式を論じている。たとえば親和性ク
ロマトグラフィー、染料親和性クロマトグラ７イー、金
属イオン親和性、イオン交換、疎水性相互作用および逆
相クロマトグラフィーに有用な生成物を製造し得る。

生物分離（ｂｉｏｓｅｐａｒａＬｉｏｎ）および／また
は親和性クロマトグラフィーの領域で有用な生戊物の製
造が特に重要である。これらの生或物（以後、“生物基
剤（　Ｂｉｏｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ）″と呼ぶ）は、生
物学的物質と結合し得る官能基（生物配位子（ｂｉｏ１
ｉｇａｎｄ）　）の吊り下がり表面Ｎ−ハロアミド基を
通ずる基剤＋１への付着により製造される。本件明細書
中で使用する“結合（ｂｉｎｄｉｎｓ）　”の語は広く
、共有結合のみならず、より弱い相互作用、たとえば静
電気力、ファン・デル・ワール六カおよび水素結合の全
てをも包含すると解釈されるべきである。

生物配位子の基剤■への付着を通ずる生物基剤の製造は
、直接に、またはこの種の付着を容易にし得る中間体架
橋基の使用を通じて達或することができる。ｔ；とえば
、吊り下がりの　８　２　Ｎ　−、ＨＯ−またはＨＳ一
基を有する生物配位子は、直接番二基剤Ｈに付着させる
ことができる。したがって、吊り下がりの基 Ｏ ■ −Ｎ　Ｈ　Ｃ　Ｎ　Ｈ　−　Ｒ　−　Ｃ　Ｏ　！Ｈを有
するカチオン交換樹脂は、基剤目と、式中のＲがたとえ
ばｃ＋−ｃｔｍ−アルキル基であるＨ２Ｎ−Ｒ−Ｃｏ２
Ｈ　　との直接反応を通じて製造することができる。

生物配位子をの種々の基剤に結合させ、必要ならばこれ
を活性化する方法は、周知されている。

たとえば、以下の引用文献にはこの種の開示が含まれ、
その内容は本件明細書に引用文献として組み入れられて
いる。

トウルコーヴ７　（．１．　Ｔｕｒｋｏｖａ）　，親和
性クロマトグラフ｛　−　（Ａｆｆｉｎｉｔｙ　Ｃｈｒ
ｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）　＋　　クロマトグラ７｛一
文献雑誌（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｒｏｍａｔ１２
巻，　１５１　−　２０２ページ（０９７８）。

ジャーヴイス（Ｌ．　Ｊｅｒｖｉｓ）　．　’ＩＨｆ＠
ｉ　　４ｔ皇ｔ用いる合或と分離（Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ
　ａｎｄ　Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｕｓｉｎｇ　Ｆｕｎｃ
ｔｔｏｎａｌ　Ｐｏｌｙｍｅｒｓ）　，シエリントン（
Ｄ．Ｃ．　Ｓｈｅｒｒｔｎｇｔｏｎ）およびホツジャ−
　（Ｐ．　Ｈｏｄｇｅｒ）編。ジョン・ワイリー・アン
ド・サン（Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　ａｎｄ　Ｓｏｎｓ　
Ｌｉｄ．）　．　２６５　−　　３０４ページ（１９８
８）。

上記のように、生物配位子は生物学的物質と結合し得る
化学的、かつ生物学的部分である。本件明細書で使用す
る生物配位子の語はまた、その活性化に続いて生物学的
物質と結合し得る部分をも包含する。たとえば、−Ｃｏ
，Ｈ，−ｓｏｓＨ　または、その　Ｒ　がＣ　＋−ｓア
ルキル基である一ＮＲ２もしくは一ＮＲ３のような吊り
下がり基を有する生物配位子は、イオン交換様式により
生物学的物質と結合することが可能である。Ｃ＋−Ｃｔ
ｓ基を有する生物配位子は、疎水性相互作用により生物
学的物質と結合することができる。

これに替えて、生物配位子が架橋基により基剤ＩＩに結
合している生物基剤を製造することもできる。これは、
生物学的物質より誘導された生物配位子の付着に好まし
い様式である。架橋基の決定は、本発明の実施において
決定的なものではないが、少なくとも二官能性であり、
かつ、基剤Ｈの吊り下がり　Ｎ−ハロアミド基および生
物配位子の双方と、不適当に分解し、または製造される
生物基剤の性能を不適当に阻害することなく反応するこ
とが可能でなければならない。架橋基は、ポリアルキレ
ングリコールたとえばポリエチレングリコールおよびポ
リプロピレングリコール、好ましくは６２ないし２５０
の低分子量を有するもの；単糖類たとえば果糖、ブドウ
糖、マンノース、リボース、ガラクトース；二糖類たと
えばシヨ糖、麦芽糖、乳糖、セロビオーズ；ジアミン類
たとえばエチレンジアミン、ヘキサメチレンジアミン、
１．３−ジアミノ−２−プロバノール：アミノ酸たとえ
ばグリシン、β−アラニン、６−アミノカプロン酸；ア
シルジヒドラジドたとえばコハク酸ジヒドラジド、アジ
ビン酸ジヒドラジドを含む種々の二官能性化合物よりな
るものであってもよい。架橋基は、２個の反応性官能基
の間にｌないし１５個の、またはそれ以上の厚子の鎖長
を有する二官能性化合物から製造された、有用な鎖長の
いかなるものを有していてもよい。一Ｒ　Ｏ　Ｈ１−Ｒ
　Ｃ　Ｏ　！Ｈ，０ ／＼ −Ｒ　Ｎ　Ｈ　，、−ＲＣＨＯ，−ＣＨ−ＣＨ，、−（
Ｃ　Ｈ　Ｃ　Ｈ　Ｒ　Ｏ）．Ｈ，一カーボハイドレート
、Ｏ 喋 −ＣＮＨ，ＯＨ，および のような吊り下がり基を有する架橋基は、生物基剤とし
ての使用に先立って、活性化および／または他の生物配
位子との反応を必要とする。本発明の実施に好適に使用
される生物配位子はタンパク質Ａである。

架橋基およびその生物基剤の製造における使用は周知さ
れている。ｔ；とえば、上に引用したトウルコーヴアお
よびジャーヴイスはその使用を開示している。架橋基は
典型的には脂肪族、芳香族または環状脂肪族の炭化水素
基である。これらはへテロ原子、たとえばＯＳＮ　　ま
たは　Ｓ　を含有していてもよい。本件架橋基はまた、
典型的にはｌないし約１５個の炭素原子を含有する。

本発明ぼ実施において、架橋基は好ましくは以下の反応
剤より誘導する：モノー、ジーまたはトリアルキレング
リコール、モノー、ジーまたはトリアルキレンアミン、
低級ジオールおよびポリオール、アルカノールアミン、
ならびにアミノ酸。

生物配位子と基剤ＩＩ　との間の架橋基の誘導に使用す
る特に好ましい反応剤には、エチレングリコール、ジエ
チレングリコール、トリエチレングリコール、グリセロ
ール、エチレンジアミン、ジエチレンジアミン、エタノ
ーノレアミン、ジエタノールアミン、３．３’−ジアミ
ノーＮ−メチルブロビルアミン、ヘキサンジアミン、グ
リシン、β−アラニン、１・リス−（ヒドロキシメチル
）一アミノメタン、６−アミノカブロン酸およびポリオ
キシエチレンジアミンが含まれる。

架橋基はまｆ−、基剤目の存在下における逐次反応を通
じて形戊することもでき、また、基剤ＩＩ　との反応に
先立って得ることもできる。

本発明の実施における生物基剤の製造に、架橋基として
特に好ましいものは： ｌ）ソの　９−｝ルエンスノレホン酸２−フノレオ口−
１−メチルビリジニウムとの反応前のジエチレングリコ
ール、および、 ２）その　Ｎ−ヒドロキシサクシニミドとの反応前のア
ルキレンジアミンと無水コハク酸、および、３）そのＮ
−ヒドロキシサクシニミドとの反応前の６−アミノカブ
ロン酸 の反応生成物である。

基剤１ｌ　と反応剤との架橋基または生物基剤を生或す
る反応に続いて、基剤Ｉ＋に存在する残留Ｎ〜ハロアミ
ド官能性を典型的に破壊して、好ましくは基剤１ｇあた
り約０．１　ミリモル以下の活性塩素が残留するように
する，これは、熱の使用、還元剤（たとえば亜硫酸ナト
リウム）による処理、またはその双方を通じて達戊する
ことができる。

生物基剤を製造したのち、これを、その生物学的物質に
対する親和性およびそれに結合する能力を利用し得る応
用面に利用することができる。！；とえば、生物基剤は
、生物学的物質を含有する溶液にこの生物基剤を添加す
ることにより、または、生物基剤の固定床に上記の溶液
を通過させることにより、生物学的物質の溶液からの単
離に使用することができる。ついで、生物基剤を溶液か
ら単離する。本件生物基剤は、任意に、上記の生物学的
物質の溶液から分離して上記の生物学的物質を単離し、
本件生物基剤を回収、または再使用することができる。

実施例 以下の実施例は、本発明の実施を説明するために与えら
れるものであって、本発明の範囲を限定するものと考え
てはならない。

手ＪＩＩｌｉＡ ９９モル％のアクリロニトリルとｌモル％のアクリル酸
メチルとを含有する湿った共重合体（共重合体：水の重
量比１：ｌ）５ｇを、尿素５ｇおよびジメチルスルホン
３０　ｇとともに磨砕して粉末混合物を形威させた。こ
の混合物を、１００　ｍ（１の１６０°Ｃに加熱した鉱
物油を含有する１ｉ２のフラスコに入れた。１相は均一
な重合体溶液、他の相は鉱物油である２個の配位子相が
存在するようになるまで、上記の混合物を撹拌した。オ
ーバーヘッドパドル撹拌器を用いてこの混合物を急速に
撹拌することにより、鉱物油中の熱（約１２０゜Ｃ）重
合体溶液の小滴を含有するけん濁液が得られた．上記の
けん濁液を、套管（　ｃａｎｕ　ｌａ）を経て、７０℃
に維持した５００−の鉱物油、６ｇのジメチルスルホン
、およびＩｇのよりなる第２の撹拌混合物に移動させて
、上記の小滴を冷却した。より低温の鉱物油と接触する
と、上記の小滴が固化した。

この混合物を撹拌しながら室温に冷却し、ついで、塩化
メチレンで希釈して油状物の粘度を減少させた。上記の
小滴をブフナーロートに集め、塩化メチレンで洗浄し、
ついで，　２００　ｍ＋２のアセトンを用いて室温で１
．５時間、溶媒を抽出した。得．られｔ；ビーズを走査
電子顕微鏡法により試験したところ、高度に多孔性であ
り、かつ、約０．５ミクロンの比較的均一な微孔直径を
有することが見られた。上記の微孔はビーズの外表面を
通して延長していた。このビーズのサイズは、直径１０
　ミクロンないし数ミリメートルの範囲であった。

これらの多孔性重合体ビーズを製造する他の詳細例の一
つは以下のようなものである：ジメチルスルホン２８８
　ｇｓモル比９９：１のアクリロニトリル：アクリル酸
メチルよりなるアクリロニトリル共重合体１２　ｇ，お
よび１００　ｒａ（ｌのプロピレングリコールを混合し
、磁気駆動撹拌器とディップレッグ（ｄｉｐ　ｌｅｇ）
とを装備したバー（　Ｐａｒｒ）反応器に入れＩ；。こ
の反応器を１４０℃に加熱して均一な溶液を形或させた
．　１５０　ｐｓｉｇの窒素圧を用いて、この溶液を加
熱（１４０℃）配管および噴霧ノズル（レヒラ−社（Ｌ
ｅｃｈｌｅｒ　Ｃｏ．）製全円錐（ｆｕｌｌ　ｃｏｎｅ
）　　“センタージェット（　ｃｅｎｅｒ　ｊｅｔ）ノ
ズル、オリアイス直径０．４６インチ）を強制通過させ
た。ノズルは３Ｑの撹拌鉱物油の３インチ上、または４
ａの撹拌へブタンの４インチ上に設置して、液滴を急冷
した。固化した液滴をヘプタンで洗浄して鉱物油を除去
し、乾燥し、８５　−　９０℃の水３１２を用いて１時
間抽出して微孔性ビーズを得た。微孔サイズは０．０５
ないし　１．５ミクロンの範囲であり、ビーズの大部分
が２５ないし１５０ミクロンであった。

以下の実施例は、吊り下がりアミド基を有する基剤夏の
製造を説明するものである。

実施例ＩＡ 乾燥焼きなましポリアクリロニトリルビーズ５ｇ（４５
−９０ミクロン、９４．５ミリモル）を１１５ｒａＱの
メタノールにけん濁させたけん濁液、５ｍｆｆの水、お
よび４　ｍＱのジメチルスルホキシド（５６．４　ミリ
モル）を窒素パージ下で撹拌した。

１０分パージしたのち、このけん濁液に２．４　ｄの２
Ｎ水性水酸化ナトリウム（４．８ミリモル）を添加し、
このけん濁液を３５℃に加熱しｔ；。過酸化水素の３０
％溶液４．９　ｒｓＱ　（４７．９ミリモル）をｌＯ分
かけて添加した。この反応混合物を３５゜Ｃで３時間撹
拌した。３時間後、２．４ｍαの２Ｎ塩酸（４．８　ミ
リモル）を添加し、この反応混合物を１分撹拌し、濾過
した。０．Ｉ　Ｎ　水性塩酸、水、メタノールでビーズ
を洗浄し、ついで乾燥した。ビーズのアミド含有量は、
赤外線分析で測定した結果、９．７％であった。

以下の実施例は、吊り下がりアミド基を有する基剤■お
よびそれよりの生物基剤の製造を説明するものである。

実施例ＩＢ 乾燥焼きなましポリアクリロニトリル中空繊維０．５　
ｇ　ヲ１１．５　ｇ　ｔ）’＞）　９　／−ル、０．５
　ｇ　ノ水、０−２４　ｍＱの２Ｎ水酸化ナ１・リウム
水溶液、および０．４　ｖｔ（ｌのジメチルスルホキシ
ドと混合した。

この混合物を３５℃に加熱し、０．４９　ｙｎＱの３０
％過酸化水素溶液を添加した。室温に３時間放置したの
ち、この反応混合物を濾過した。この繊維を水およびメ
タノールで洗浄し、真空乾燥した（４０℃）。この繊維
のアミド含有量を赤外線分析で測定しｔ；結果は１４．
１％であったロ実施例ｌＣ 実施例１Ｂの手順に従ったが、ただ、非焼きなましフィ
ブリル化繊維シート０．５０　ｇを過酸化水素の３０％
溶液１．４７１ＩＩＱとともに使用し、反応前にこの繊
維を焼きなましした。ＩＲ　分析は、このＭＡＰ　　７
｛ブリル化繊維生戒物のアミド含有量が約２％であるこ
とを示した。

実施例ＩＤ 実施例ＩＢ　の反応手順に従ったが、８９．５＝１０．
５のアクリロニトリル：アクリル酸メチルのフィルムよ
り製造した非多孔性フイルム０．５２　ｇを使用し、フ
ィルムは焼きなまししなかった。水との接触角は４２″
であった。初期のフィルムは６３＠の水接触角を有して
いた。

以下の実施例は、吊り下がり　Ｎ−クロロアミド基を有
する基剤ＩＩおよびそれよりの生物基剤の製造を説明す
るものである。

東星亘−１ 実施例１Ａの生或物３ｇを７８　ｍＱの水と混合した。

このけん濁液に気体塩素０．４７１　ｇを添加した。塩
素の添加時間は１１分であった。この反応混合物を室温
で２時間撹拌した。２時間後、反応混合物を濾過しｔ；
。このビーズを水で洗浄し、ついで真空乾燥（４０°０
）した。ヨード滴定は、このビーズが、ビーズ上のアミ
ド基の約８０％が塩素化されたことに相当する、１．４
０ミリモル／ｇの活性塩素を含有することを示した。

実施例　３ ジエチレングリコール（Ｄ　Ｅ　Ｃ）　１３０　１１１
１２と２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液６．３　ｍＱとの溶
液を４０℃に加熱した。この溶液に実施例２の生或物５
ｇを添加した。この反応混合物を約４０゜Ｃで２時間撹
拌した。２時間後、反応混合物を濾過した。

ビーズを水で洗浄し、ついで真空乾燥（４０℃）しｔこ
　。

赤外線分光法により、ホフマン転移を通じてＤＥＣ　が
上記のビーズと反応していることが確認された。

実施例　４ 実施例３の手順に従ったが、ただ、エチレングリコール
（Ｅ　Ｇ）　１００　ｍＱ，　２　Ｎ　水酸化ナトリウ
ム水溶液３．３　ｔａＱ　８よび実施例２の生成物２ｇ
を反応に使用した。

赤外線分光法により、ホフマン転移を通じてＥＧ　が上
記のビーズと反応していることが確認された。

実施例　５ 実施例３の手頓に従ったが、ただ、トリエチレングリコ
ール（Ｔ　Ｅ　Ｇ）　２３５　ｒｎＱ、２Ｎ水酸化ナト
リウム水溶液３．３　ｒｎＱおよび実施例２の生戊物３
．５ｇを使用した。

赤外線分光法により、ホ７マン転移を通じてＴＥＧ　が
上記のビーズと反応していることが確認された。

実施例　６ 実施例３の手順に従ったが、ただ、メタノール１００　
ｍＱ，　２Ｎ　水酸化ナトリウム水溶液２．３ＩＩＩα
および実施例２の生或物２ｇを使用した。

赤外線分光法により、ホフマン転移を通じてメタノール
が上記のビーズと反応していることが確認された。

実施例　７ 実施例３の手順に従ったが、ただ、グリセロール６５　
ｍＱ、２Ｎ水酸化ナ１・リウム水溶液２．３ｒａＱおよ
び実施例２の生或物３．５ｇを使用し、ビーズの添加に
先立って上記のグリセロール溶液に４　ｒｍＱの水を添
加した。

赤外線分光法により、ホ７マン転移を通じてグリセロー
ルが上記のビーズと反応していることが確認された。

実施例　８ エチレンジアミン（Ｅ　ＤＡ）　９０　ｍＱ　ト水３　
肩Ｑとの溶液を４０℃に加熱した。この溶液に実施例２
の生或物２ｇを添加した。この反応混合物を約４０℃で
２時間撹拌した。２時間後、反応混合物を濾過した。ビ
ーズを水で洗浄し、ついで真空乾燥（４０℃）した。

赤外線分光法により、ホフマン転移を通じてＥＤＡ　が
上記のビーズと反応していることが確認された。

実施例　９ 実施例８の手順に従ったが、ただ、ジエチレントリアミ
ン（Ｄ　Ｅ　Ｔ　Ａ）　ｔｏｏ　ｒｒｒＱ，水３Ｉｌｔ
（２および実施例２の生戊物２ｇを使用した。

赤外線分光法により、ホフマン転移を通じてＤＥＴＡ　
が上記のビーズと反応していることが確認された。

実施例　１０ 実施例８の手順に従ったが、ただ、エタノールアミン（
Ｅ　Ａ）　１００　ｍＱ、水３　ｍＱおよび実施例２の
生戊物２ｇを使用した。

赤外線分光法により、ホフマン転移を通じてＥＡ　が上
記のビーズと反応していることが確認された。

実施例　１１ 実施例８の手順に従ったが、ただ、ジエタノールアミン
（Ｄ　Ｅ　Ａ）　７５　ｍＱ，水５０一および実施例２
の生或物２ｇを使用しｔ；。

赤外線分光法により、ホフマン転移を通じてＤＥＡ　が
上記のビーズと反応していることが確認された。

実施例　ｌ２ 実施例８の手順に従っｔ；が、ただ、トリエタノールア
ミ７　（Ｔ　Ｅ　Ａ）　７５　ｍＱ，水５０　ｍＱおよ
び実施例２の生或物２ｇを使用した。

赤外線分光法により、ホ７マン転移を通じてＴＥＡが上
記のビーズと反応していることが確認された。

実施例　ｌ３ 実施例８の手順に従ったが、ただ、プロビルアミン（　
Ｐ　Ａ）　９８　ｒｔｒＱ．水２．５　ｍ（！および実
施例２の生或物２ｇを使用した。

赤外線分光法により、ホフマン転移を通じてＰＡ　が上
記のビーズと反応していることが確認された。

実施例　ｌ４ 実施例８の手順に従ったが、ただ、ジエチルアミン（Ｄ
　Ｅ　Ａ）　１００　ｍＱ，水３　ｒｎＱおよび実施例
２の生戊物２ｇを使用しｔ；。

赤外線分光法により、ホフマン転移を通じてＤＥＡ　が
上記のビーズと反応していることが確認された。

実施例　ｌ５ 実施例８の手順に従ったが、ただ、３，３″−ジアミノ
ーＮ−メチルブロビルアミン１１００　ｍＱ、水２８ｍ
Ｑおよび実施例２の生戊物２２　ｇを使用した。

赤外線分光法により、ホフマン転移を通じて３，３′−
ジアミノーＮ−メチルブロビルアミンが上記のビーズと
反応していることが確認された。

実施例　１６ トリスー（ヒドロキシメチル）一アミノメタン（トリス
（Ｔｒｉｓ）　）　　６５　ｇと水６５　ｇとの混合物
を油浴中で加熱した。この混合物の温度が５５℃に達す
ると、この混合物は透明な溶液に変化した。この溶液を
４０℃に冷却し、この溶液に実施例２の生戊物２ｇを添
加した。このけん濁液を室温で２時間撹拌し、ついで濾
過した。ビーズを水で洗浄し、真空乾燥（４０℃）した
。

赤外線分光法により、ホフマン転移を通じてトリスー（
ヒドロキシメチル）一アミノメタン（トリス）が上記の
ビーズと反応していることが確認された。

実施例　１７ 実施例８の手順に従ったが、ただ、３−ジエチルアミノ
ブロビルアミン１００　ｍＱ１水２．Ｏ　ｍｌ２および
実施例２の生或物２．５ｇを使用し、反応混合物を４０
℃で３時間撹拌した。水性塩酸を用いるビーズの電位差
滴定は、ビーズが０．８６ミリ当量／ｇのアミノ基を含
有することを示した。

赤外線分光法により、ホフマン転移を通じてジエチルア
ミノブロピルアミンが上記のビーズと反応していること
が確認された。

実施例　ｌ８ ０．２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液２６０　ｍ（ｌに実施
例２の生或物１０ｇを添加した。このけん濁液を室温で
３時間撹拌し、ついで濾過した。ビーズを水で洗浄し、
真空乾燥し？＝（４０℃）。水性塩酸を用いるビーズの
電位差滴定は、ビーズが０．３３ミリ当量／ｇのカルボ
キシル基を含有することを示した。

実施例　ｌ９ ５０　ｇのデキストラン（分子量１５．０００）と水５
Ｑ　ｍ（ｌとを含有する溶液を４０℃に加熱した。この
溶液に実施例２の生戊物１０　ｇと２Ｎ水酸化ナトリウ
ム水溶液５　ｍＱとを添加した。このけん濁液を４２℃
で３時間撹拌し、ついで濾過した。ビーズを水で洗浄し
、真空乾燥した。アンスロン法（分析化学（Ａｎａｌ．
　Ｃｈｅｍ．）　２５．　１６５６．（１９５３）　）
を用いる分析は、このビーズが３重量％のデキストラン
を含有することを示しＩ；。

赤外線分光法により、ホフマン転移を通じて上記の官能
基が上記のビーズと反応していることが確認された。

実施例　２０ 実施例８の手順に従ったが、ただ、ボリオキシエチレン
ジアミン（ジエファミン（　Ｊｅｆ　ｆａｍｉｎｅ）Ｅ
　Ｄ　Ｒ　−１４８）　Ｊ３０　ｒｔｒＱ、水３　ｍＱ
および実施例２の生或物５ｇを使用した。

赤外線分光法により、ホフマン転移を通じてボリオキシ
エチレンジアミンが上記のビーズと反応していることが
確認された。

実施例　２１ デシルアミン１１７　ｍＱと水２．７　ｍＱとの溶液を
４０℃に加熱した。この溶液に実施例２の生或物４．５
ｇを添加した。このけん濁液を４０℃で２時間撹拌し、
ついで濾過した。ビーズをアセトンおよびヘキサンで洗
浄し、真空乾燥した（４０゜Ｃ）。

赤外線分光法により、ホフマン転移を通じてデシルアミ
ンが上記のビーズと反応していることが確認された。

実施例　２２ オクタデシルアミン１０ｇとヘキサデカンｌ５１ＩＩ２
との混合物を油浴中で加熱した。この混合物の温度が６
０℃に達すると、この混合物は透明な溶液に変化した。

この溶液に０．６　ｍｌ２の水と実施ｆｌ２の生或物１
．２５　ｇとを添加した。この混合物を６２℃で７５分
間撹拌し、ついで濾過した。

ビーズをヘプタンで洗浄し、真空乾燥した（４０℃）。

赤外線分光法により、ホフマン転移を通じて才クタデシ
ルアミンが上記のビーズと反応していることが確認され
た。

実施例　２３ ジオキサン（３Ａ　モレキュラー・シーブズで乾燥した
もの）　７５　ｍＱとカルポニルジイミダゾール１０．
５　ｇとの溶液を窒素でパージした。ついで、この溶液
を３５℃に加熱し、この溶液に実施例３の生戊物３．５
ｇを添加した。このけん濁液を窒素雰囲気下、３５℃で
１．５時間撹拌し、ついで濾過した。ビーズをアセトン
、冷水、ＴＨＦ　　およびアセトンで洗浄し、室温で真
空乾燥した。

赤外線分光法により、カルポニルジイミダゾールが上記
のビーズと反応していることが確認された。

実施例　２４ エチレンジアミン尿素ビーズ（実施例８の生戊物）１０
ｇと０．Ｉ　Ｎ　塩化ナトリウム９０　ｍＱとのけん濁
液を４℃の水浴に漫した。一様に撹拌しながら、粉末無
水コハク酸（４０　ｇ）を２時間かけて徐々に添加した
。５ＮＮａＯＨ　　を添加してｐＨを６．０ ℃　に保った。

時間、温度を ビーズを集め、 一ルで洗浄し、 ズｌａｄあたり 基を示した。

に維持し、温度を４°ＣないしｌＯ 無水コハク酸の添加後、さらに４ ４℃に保ち、ｐＨ　　を６．０に保った。

１．Ｏ　Ｎ　塩酸、水、およびメタノ 真空乾燥した。滴定結果は、ビー １４５マイクロモルのカルポキシル 実施例　２５ ｌｍＱあたり　１１４マイクロモルのカルボキシル基を
含有するサクシニル化したエチレンジアミン尿素ビーズ
（実施例２４と同様にして製造した）２．０　ＩＩＩ＋
２ヲｐ−シオキサン中で脱水素した。このビーズを集め
て５ｍαの乾燥　ｐ−ジオキサンに添加した。Ｎ−ヒド
ロキシサクシニミド５００マイクロモノレを、続いてジ
シクロへキシルカルポジイミド５００マイクロモルを添
加した。アクリロニトリルの重合体または共重合体に対
する非溶媒は、これと混合し得ないいかなる液体媒体よ
りなるものであってもよい。これを一晩揺動（　ｔｕｍ
ｂｌｅ）させ、集め、乾燥　ｐ−ジオキサンおよびメタ
ノールで洗浄した。活性化密度（ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ
　ｄｅｎｓｉｔｙ）は３７マイクロモル／ｒａ（ｌであ
った（ミロン（Ｔ．）Ｊｉｒｏｎ）およびウィルチェク
（Ｍ．　Ｗｉｌｃｈｅｋ）　＊分析生物化学（Ａｎａｌ
ｙｔｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）　，　１２
６．４３３　−４３５　（１９８２）の方法により測定
した）。

以下の実施例は、生物配位子または他の官能基の、種々
の架橋基を通ずる基剤ＩＩへの付着を説明するものであ
る。

実施例　２６ ｌｍ（２あたり　１１４マイクロモルのカルポキシル基
を含有するサクシニル化したエチレンジアミン尿素ビー
ズ（実施例２４と同様にして製造した）０．２５　ｇを
、２．５　ｍｌ２の０．Ｉ　Ｎ　ＮａＣｌに添加した。

エチレンジアミンニ塩酸塩０．４５　ｇを添加し、０．
Ｉ　Ｎ　ＮａＯＨ　を用いてｐＨ　を４．７に調整した
。ｌ−（３−ジメチルアミノブロビル）−３−エチルカ
ルポジイミド塩酸塩（ＥＤＡＣ）０．０４９　ｇを添加
し、ｐＨ　　を４．７に保ちながら、これを室温で２４
時間揺動させた。このビーズを集め、０．１　ＮＨＣＩ
，水、およびメタノールで洗浄し、ついで真空乾燥した
。このヒーズはｌｍ＋２あたり　９８マイクロモルのア
ミンを含有していた（アントーニ（ｃ．　Ａｎｔｏｎｉ
）ら２分析生物化学（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ）　，　１２９．　６０　−６３　（
１９８３）の方法により測定した）。

実施例　２７ ５５００マイクロモルの４−ジメチルアミノビリジン（
ＤＭＡＰ）を含有する１０　ｍＱの乾燥アセトニトリル
に、実施例３の脱水した生或物１０　ａｎを添加した。

このビーズ混合物に、５．０００マイクロモルのトルエ
ン−４−スルホン酸２−フルオロ−１−メチルビリジニ
ウム（ＦＭＰ）を２５　ｍｌ２の乾燥アセトニトリルに
入れたものを直接に添加した。

これを室温で２時間揺動させた。このビーズをｌＸｌ０
０ｍｌ２のアセトニトリル、２　Ｘ　１００　ｙｓＱの
アセトンで洗浄し，　３０　ｍＱの乾燥アセトン中、４
℃で貯蔵した。このビーズは、ビーズを０．２Ｎ水酸化
ナトリウム中、室温で２４時間揺動させたときに放出さ
れる　ｌ−メチル−２−ビリドンの量により検定した値
として、ｌｒｎＱあたり　１１２マイクロモルの活性ヒ
ドロキシル基を含有していた（分光光度法の検定手順に
関しては、ゴ（Ｔ．　Ｎｇｏ）　．生物技術（Ｂｉｏ／
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｒｙ）　＋　４巻．　１３４　−　１
３７（１９８６）を参照）。

得られた生放物を、トルエン−４−スルホン酸１一メチ
ル−２−ビリドキサル（ＭＰＴＳ）基を含有する重合体
として同定した。

実施例　２８ 実施例２７の手順に従ったが、ただ、実施例ｌ２の生戊
物３．５　ｒｔｒＱを、ＤＭＡＰ　１９２５マイクロモ
ルを３．５　ｍＱのアセトニトリルに入れたもの、およ
びＦ　Ｍ　Ｐ　１７５０　マイクロモルを８．９　ｒｔ
ｒＱ　（７）アセトニトリルに入れたものと反応させた
。活性化密度は２７．３マイクロモル／一であった。

得られた生戊物をＭＰＴＳ　基を含有する重合体として
同定した。

実施ｆ１２９ 実施例２７の手順に従ったが、ただ、実施例５０の生成
物５．５　ｍＱを、ＤＭＡＰ　３０２５マイクロモルを
、５．５　ｍＱのアセトニトリルに入れたもの、および
ＦＭＰ２７５０マイクロモルを１３．８ｍＱのアセトニ
トリルに入れたものと反応させた。

活性化密度は１５．５マイクロモル／ｍＱであった。

得られた生或物をＭＰＴＳ　基を含有する重合体として
同定しｔ；。

実施例　３０ 実施例２７の手順に従ったが、ただ、実施例ｌ６の生或
物２．Ｏ　ｒａＱを、ＤＭＡＰ　１１００マイクロモル
を２．０　ｍｌ２のアセトニトリルＩこ入れたもの、お
よびＦＭＰＩＯＯＯマイクロモルを５。Ｑ　ｖａＱのア
セトニトリルに入れたものと反応させた。活性化密度は
ｌ８．８マイクロモル／ｍ（ｌであった。

得られた生戊物をＭＰＴＳ　基を含有する重合体として
同定した。

実施例　３ｌ 実施例３０の手順に従ったが、ただ、４０％のジメチル
スルホキシドと６０％のアセトニトリルとの溶液をアセ
トニトリルに替えて使用した。活性化密度は２８．５マ
イクロモル／ｍＱであった。

得られた生成物をＭＰＴＳ　基を含有する重合体として
同定した。

衷遍』Ｌ一坦 実施例２７の手順に従ったが、ただ、実施例７の生或物
１０　ｒｍＱを使用した。活性化密度は２３．７マイク
ロモル／ｍ（ｌであった。

得られた生戊物をＭＰＴＳ　基を含有する重合体として
同定した。

実施例　３３ 実施例２７の手順に従ったが、ただ、実施例５の生或物
１０　ｔａαを使用した。活性化密度は７０．１マイク
ロモル／ｍＱであった。

得られた生戊物をＭＰＴＳ　基を含有する重合体として
同定した。

実施例　３４ 実施例３の脱水した生戊物６　ｙｒ（ｌを１８　ｍＱの
乾燥アセトニトリルに添加した。クｏＩｌ７ギ酸　ｐ−
ニトロフェニル６０００マイクロモルを添加し、この混
合物を４℃の水浴に浸した．　ＤＭＡＰ　７２００マイ
クロモルを　１０ＩｌｌＩ２の乾燥アセトニトリルに入
れたものを滴々添加し、この内容物を４℃で１時間揺動
させた。このビーズを集めて冷アセトン、５％のジオキ
サン中酢酸、メタノールおよびイソプロバノールで洗浄
し、インプロバノール中、４゜Ｃで貯蔵した。活性化密
度は２０．１マイクロモルｈｔｒＱであった（ミロンお
よびウィルチェク，国際生物化学（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）　，４巻，６号
，　６２９　−　６３５　（１９８２）の方法により測
定した値）。

得られた生或物を、ギ酸　ｐ−ニトロフエニル基を含有
する重合体として同定しＩ；。

実施例　３５ 実施例３の脱水した生放物２．５　ｍ（２を２５００マ
イクロモルのＮ．Ｎ’−ジサクシニミジルカーポネート
を含有する４　ｍＱの乾燥アセトニトリルに添加した。

４２５０マイクロモルのＤＭＡＰを５　ｒｎＱのアセト
ンに入れた溶液を徐々に添加した。このけん濁液を４℃
で１時間揺動させた。このビーズを集めて冷アセトン、
５％のジオキサン中酢酸、メタノールおよびイソプロバ
ノールで洗浄した。

この活性化したビーズをインプロバノール中、４℃で貯
蔵した。活性化密度は２８．５マイクロモル／ｍｌ２で
あった（ウイルチェクおよびミロン．応用生物化学およ
び生物技術　Ａ　ｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏ　ｙ）　＋　１１
巻，　１９１　−　１９３（１９８５）の方法により測
定した値）。

得られた生成物を、活性ヒドロキシサクシニミドカーボ
ネート（ＨＳＣ）基を含有する重合体として同定した。

実施例　３６ 実施例３５の手順に従ったが、ただ、実施例５の生戊物
を使用した。活性化密度は２５．６マイクロモル／ＩＩ
＋２であった。

得られた生或物を　ＨＳＣ　基を含有する重合体として
同定した。

実施例　３７ 実施例２７の生或物０−５０　ｍＱを３　Ｘ　１０　ｍ
Ｑの水、ｌＸ３＋＋＋１２の０．０５　Ｎ　炭酸ナトリ
ウム／炭酸水素ナトリウム、ｐＨ　８．５　Ｃカップリ
ング緩衝液）で洗浄した。５０　ｍｇのウシ血清アルブ
ミン（ＢＳＡ）を含有するカップリング緩衝液１．２０
峠をこのビーズに添加した。室温で２４時間揺動させた
のち、このビーズを４ＸＩＯ＋＋＋Ｑの１．ＯＮＮａＣ
ｌおよび３　Ｘ　１０　ｍＱの水で洗浄した。

このビーズはト一あたり　８．１　ｍｇの　ＢＳＡ　　
と結合していた（ビアース（Ｐｉｅｒｃｅ）　Ｂ　Ｃ　
Ａ　タンパク質検定法を用いて、集めた洗浄液の夕冫バ
ク質濃度より測定した値）。

得られた生戊物を固定ＢＳＡを有する重合体として同定
した。

実施例　３８ 実施例３７の手順に従っＩ；が、ただ、実施例２８の生
戊物を使用した。このビーズはｌｍｌ２あたり５．８　
ｎｇのＢＳＡ　と結合していた。

得られた生或物を固定ＢＳＡ　を有する重合体として同
定した。

実施例　３９ 実施例３５の生或物０．５０　ｍαを４℃の水および４
℃の０．Ｉ　Ｎ　　リン酸塩緩衝液ｐＨ　　−　７．５
（カップリング緩衝液）で洗浄した。５０　ｍｇのウシ
血清アルブミンを入れた１．２０　ｙｍＱのカップリン
グ緩衝液を添加した。これを４℃で２４時間揺動させた
。このビーズを４　Ｘ　４０　ｒｍＱのｌ．ＯＮＮａＣ
ｔおよび３　Ｘ　１０　ｍＱの水で洗浄した。このビー
ズはｌｍＱあたり　５．５　ｍｇの　ＢＳＡ　　と結合
していた（ビオーラッドＣ　Ｂｉｏ−Ｒａｄ）タンパク
質検定法を用いて、集めた洗浄液の夕冫バク質濃度より
測定した値）。

実施例　４０ 実施例３７の手順に従ったが、ただ、実施例３３の生或
物（１６マイクロモル／ｍＱの低活性化密度で製造した
もの）２−を使用した。このビーズに、チトクローム　
Ｃ　　１２．２　ｍｇを２．７　ｍＱの０．２　Ｎ　　
ＮａＨ　Ｃ　Ｏ　ｓ　ｐ｝ｉ　　−　９−０に入れたも
のを添加した。このビーズはｌｍ（２あたり　１．５　
ｍｇのチトクロームＣ　と結合していた（ビオーラツド
タンパク質検定法より測定した値）。

実施例　４１ 実施例４０の手順に従ったが、ただ、実施例２７の生或
物（２５マイクロモル／ｍＱの低活性化密度で製造した
もの）を使用した。このビーズは１＋ＩＱあたり２．９
　ｍｇのチトクロームＣ　と結合していたくビオーラッ
ドタンパク質検定法より測定した値）。

以下の実施例は、ビーズ以外の基剤を使用する本発明の
実施態様を説明するものである。

実施例　４２ 実施例ＩＢ　の生或物０．２４　ｇを１４　ｍαの水と
混合した。この混合物に０．０６６　ｇの塩素を４分で
添加しな。室温に１．５時間放置したのち、この反応混
合物を濾過しｔ；。この繊維を水で洗浄し、真空乾燥し
た（４０℃）。ヨード滴定は、この繊維が１．９２ミリ
モル／ｇの活性塩素を含有することを示した。

実施例　４３ ５　＋１１１２のジエチレングリコールと　０．２　ｍ
Ｑの２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液との溶液を４０℃に加
熱した。この溶液に実施例４２の生或物０．１２ｇを添
加した。この反応混合物を４２℃に２時間加熱し、つい
で濾過した。この繊維を水で洗浄し．、真空乾燥した。

赤外線分光法は、ジエチレングリコールがホ７マン転移
により繊維と反応したことを示した。

実施例　４４ 実施例ＩＣ　の生戊物０．４１　ｇを２０　ｍ（ｌの水
と０．１０　ｇの塩素との溶液と混合した。室温に２時
間放置したのち、この反応混合物を傾瀉した。繊維を水
で洗浄し、真空乾燥した（４０℃）。ヨード滴定は、こ
の繊維が０．７０ミリモル／ｇの活性塩素を含有するこ
とを示した。

実施例　４５ １５　ｍＱのＤＥＧ　　とＱ．４　ｍＱの２Ｎ水酸化ナ
トリウム水溶液との溶液を４０℃に加熱した。この溶液
に実施例４４の生戊物０．３　ｇを添加した。

４０℃で３時間放置したのち、この反応混合物を煩瀉し
、繊維を水およびメタノールで洗浄し、真空乾燥した（
４０’Ｃ）。

赤外線分光法は、ジエチレングリコールがホフマン転移
により繊維と反応したことを示した。

実施例　４６ 実施例４４の手順に従い、実施例ＩＤ　の生或物０．３
８　ｇを、それから吊り下がったＮ−クロロアミド基を
有する非多孔性アクリロニトリル共重合体フィルムを製
造する反応に使用した。

実施例　４７ 実施例４６の生戊物０．０５　ｇ，デシルアミン１０ｍ
Ｑおよび水０．２　ｍｌ２の混合物を４０’Ｏに３時間
加熱した。ついで、この反応混合物を傾瀉しＩ；。

７イルムをヘグタンで数回洗浄し、真空乾燥した（室温
）。このフイルムの水接触角は１０７”であった。

実施例　４８ トリ−（ヒドロキシメチル）一アミノメタン５ｇと水５
ｇとの混合物を５５℃に加熱して、この混合物を透明な
溶液に変化させた。この溶液を５０℃に冷却し、この溶
液に実施例４６の生戊物０．１２　ｇを添加した。４３
゜Ｃで３時間放置しｔ；のち、この反応混合物を傾瀉し
た。７イルムを水およびメタノールで洗浄し、空気乾燥
した。水接触角は５４′″であった。

実施例　４９ 実施例２７の手順に従ったが、ただ、実施例４３の生放
物０．０５８５　ｇを、３２０マイクロモルのＤＭＡ　
Ｐ　　を０．５８２　ｍＱの乾燥アセトニトリルに入れ
たもの、および２９０マイクロモルのＦＭＰを１−４５
０　ｍ（ｌの乾燥アセトニトリルに入れたものと反応さ
せた。得られた生戊物の活性化密度は２４１．０マイク
ロモル／ｇであった。

実施例　５０ 実施例８の手順に従ったが、ただ、Ｎ−メチルジエタノ
ールアミン２６　ｍＱ、水０．７０　ｍＱおよび実施例
２の生戊物１．Ｏ　ｇを使用した。

赤外線分光法により、Ｎ−メチルジエタノールアミンが
ホ７マン転移を通じて基剤と反応していることが確認さ
れた。

実施例　５ｌ 実施例８の手順に従っＩ；が、ただ、実施例２の生戊物
３ｇ％Ｎ，Ｎ−ジエチルエチレンジアミン（ＤＥＡＥ）
１００　ｍＱおよび水２　ｍＱを使用し、反応混合物を
４５゜Ｃで３時間撹拌した。

赤外線分光法により、ＤＥＡＥ　アミンがホ７マン転移
を通じて上記のビーズと反応していることが確認された
。水性塩酸を用いる電位差滴定は、このビーズが１．０
３　ミリ当量／ｇのアミノ基を含有することを示した。

実施例　５２ グリシン５２　ｇと３５％（Ｗ／Ｗ）水酸化ナトリウム
水溶液５２　ｒｔｒＱとの混合物を３５℃に加熱して透
明な溶液を得た。この溶液に実施例２の生戒物４ｇを添
加した。このけん濁ビーズを０．ＩＮの水酸化ナトリウ
ム水溶液および水で洗浄し、真空乾燥した。

赤外線分光法により、グリシンがホフマン転移を通じて
上記のビーズと反応していることが確認された。電位差
滴定は、このビーズが１．２０ミリ当量／ｇのカルボキ
シル基を含有することを示しｔこ　。

実施例　５３ 実施例５２の手順に従ったが、ただ、実施例２の生戊物
３　ｇｓ　β−アラニン３９　ｇおよび３５％（ｗ／ｗ
）水酸化ナトリウム水溶液３５　ｖｒ１２を使用した。

赤外線分光法により、β−アラニンがホフマン転移を通
じて上記のビーズと反応してＬ，％６こと力｛確認され
た。電位差滴定は、このビーズが１．２３ミリ当量／ｇ
のカルボキシル基を含有することを示した。

実施例　５４ 実施例５２の手順に従ったが、ただ、実施例２の生或物
３ｇ，６−アミノカプロン酸４２　ｇおよび３５％（　
ｗ／ｗ）水酸化ナトリウム水溶液２３　ｍ（ｌを使用し
、３５℃に加熱する前に、６−アミノｐプロン酸と３５
％水酸化ナトリウム水溶液との混合物に１５　ｒａＱの
水を添加した。

赤外線分光法により、６−アミノカプロン酸がホフマン
転移を通じて上記のビーズと反応してレ１ることが確認
された。電位差滴定は、このビーズカζ１．０９ミリ当
量／ｇのカルポキシル基を含有することを示しＩ；。

実施例　５５ 実施例４５の生或物０．１０　ｇを３　Ｘ　４０　ｍＱ
の乾燥アセトンおよび５Ｘ４０ｉＱの乾燥アセトニトリ
ルで洗浄し、溶媒を除去した。このフィブリル化した繊
維を０．０７　ｇの４−ジメチルアミノピリジンを含有
する８　ｒｔｒ（ｌの乾燥アセトニトリルに添加シた。

ｐ一トルエンスルホン酸２−７ルオロー１−メチルビリ
ジニウム（ＦＭＰ）０．１４　ｇを２．６ｍＱの乾燥ア
セトニトリルに入れたものを全量同時に添加し、この溶
液を室温で２時間揺動させｔ；。この繊維を集めてｌＸ
５ＱｍＱのアセトニトリルおよび２　Ｘ　１００−のア
セトンで洗浄した。

０．２Ｎの水酸化ナトリウムを用いて検定した結果、こ
の繊維はＩｇあたり　１２７マイクロモルの活性ヒドロ
キシル基を含有していた（検定法に関しては実施例２７
を参照）。このＩＩＡｌｓ生戊物はＭＰＴＳ基を含有す
ることを示した。

以下の実施例は、本発明に従って製造した種々の生物基
剤の使用を説明するものである。

実施例　５６ 実施例５５の生戊物０．６　ｇを３　Ｘ　１３　ｙｎＱ
の蒸留水および１３　ｍＱの０．０５　Ｎ　炭酸ナトリ
ウム、ｐＨ８．５（カップリング緩衝液）で洗浄した。

この緩衝液を除去し、１００　ｍｇのウシ血清アルブミ
ン（ＢＳＡ）を含有するカップリング緩衝液６．４一〇
を添加した。これを室温で２時間、ついで４℃で２日間
揺動させた。この繊維を３　Ｘ　１００ｌ！ＩＱのカッ
プリング緩衝液および４　Ｘ　１００　ｍＱの１．ＯＮ
　の塩化ナトリウムで洗浄した。この繊維は４．４４　
ｍｇのＢＳＡ　（繊維１ｇあたり　ＢＳＡ　７．３　ｍ
ｇ）と結合していた。これはビアースのＢＣＡ＊タンパ
ク質検定法を繊維に直接適用して測定した。

実施例　５７ 実施例２７の生或物（ビーズ１１１２あたり３１マイク
ロモルの活性ヒドロキシル基を用いて製造しｔ；もの）
ｌｍｌ２を３　Ｘ　１０　１１１２の水およびｌ×１０
　ｒＲＱの０．０５　Ｎ　炭酸ナトリウム、ｐＨ８．５
（カップリング緩衝液）で洗浄した。カップリング緩衝
液を除去し、８　ｍｇのタンパク質Ａ　を含有する脱気
したカップリング緩衝液１ｍｌ２を添加した。

これを室温で２４時間、ついで４℃で２４時間揺動させ
た。このビーズを０．５　Ｎ　のカップリング緩衝液中
ＮａＣｌ３＋ｘｌ２で、ついで４　Ｘ　　１０　ｍＱの
（０．００１　Ｎ　ＮａＯＨ，　０−Ｉ　Ｎの７５／２
５　（ｖ／ｖ）メタノール／水中ＬｉＣｌ）溶液で０．
５時間洗浄した。ｌＸＩＱｍＱの０．０１　Ｎ　酢酸ナ
トリウム、ｐＨ　　＝　　４．５で洗浄したのち、この
ビーズを０．０ＩＮ　のトリスーＨＣＩ，０．１％のナ
トリウムアジド、ｐＨ　　＝　８．５の中で、４℃で貯
蔵した。このビーズはタンパク質Ａ　と結合しているこ
とを示した。

実施例　５８ 実施例５５の生戊物１．２ｇを、実施例５７の手順に従
って夕冫バク質Ａ　３ｍｇと反応させたが、ｔ；だ、５
倍の体積の溶液を用いて繊維の濡れを完或させた。この
ビーズはタンパク質Ａ　と結合していることを示した。

実施例　５９ 実施例５７の生或物（ｌｍｌ２）を、リン酸塩緩衝液を
添加した塩水（ＰＢＳ）　　（０．１０　Ｍ　　リン酸
ナトリウム、０．９％塩化ナトリウム、０．０１％ナト
？ウムアジド、ｐＨ　　−　７．４）にけん濁させ、５
ｍｌ２のクロマトグラフィーカラムに充填した。このビ
ーズを５　ｍＱの１０％メタノール緩衝液（再生（　ｒ
ｅｇｅｎｅｒａｔ　ｉｏｎ）緩衝液）中０．１％の酢酸
で、ついで１５　ｍＱの　ＰＢＳ　（結合緩衝液）で、
４０ｍＱ／時の流速で洗浄しＩ；。正常ヒト血清（Ｎ｝
ｉｓ）をＮＨＳＩ部対結合緩衝液２部に希釈し、濾過し
た。希釈しｆ；ＮＨＳ　　１２　ｍＱをカラムを通して
自然落下で供給しｆ；（ｇｒａｖｉｔｙ　ｆｅｄ）　ｏ
　２０　ｍｌ２の結合緩衝液でビーズを洗浄したのち、
精製されたＩｇＤ　を０．Ｉ　Ｎ　　グリシンｐＨ　　
−　２−８緩衝液で溶離した。ヒト　ＩｇＤ　の１％溶
液の２８０　ｒｏ＋＋におけるｌ３．５の吸光係数を用
いて、このビーズの結合容量がビーズｌ一あたり　Ｉｇ
Ｄ　約２７．０　ｍｇであることが示された。

実施例　６０ 実施例５８の７イブリル化したｍＩＩ！生成物を３個の
１　７／８”の円形（０．３６　ｇ）に切り取り、力一
トリッジ（ミリボア■Ｊｉｌｌｉｐｏｒｅ）　）に充填
した。

実施例５９の手順に従って、この繊維を試験した。

結合容量は、繊維１ｇあたり　ＩｇＤ約　９．１　ｍｇ
であることが示された。

実施例　６ｌ 実施例８の手順に従ったが、ただ、１．６−ヘキサンジ
アミン１５ｇ，ジエチレングリコール１３．７ｇ１水１
．０　ｍＱおよび実施例２の生戊物１。Ｏｇを使用した
。これらのビーズは、実施例２６の方法で測定して、ビ
ーズ１ｍｌ２あたり１６９マイクロモルのアミンを含有
していた。

実施例　６２ ボーメ（Ｈ．　Ｊ．　Ｂｏｈｍｅ）らの方法（クロマト
グラ７イー雑誌（Ｊ．　ｏｆ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａ
ｐｈｙ）　＋　６９（１９７２）　２０９　−　２１４
）に従って、チバクロン青（Ｃｉｂａｃｒｏｎ　Ｂｌｕ
ｅ）　Ｆ３Ｇ−Ａ　（シグマ）　０．４　ｇを１２　ｍ
Ｑの水に入れたものを、実施例３の生或物２ｇを６０°
０の水７０　ｍＱに入れたものに添加した。これを　１
／２時間撹拌し、ついで９ｇの塩化ナトリウムを添加し
た。これを８０℃に加熱し、ついで０．８　ｇの炭酸ナ
トリウムを添加した。これを２時間撹拌し、ついで、こ
のビーズを集め、水およびメタノールで洗浄して暗青色
のビーズとした。チバクロン青染料がウレタンーＤＥＧ
　結合を通じてビーズに結合していることが測定された
。

実施例　６３ 非誘導（ｕｎｄｅｒｉｖａｔｉｚａｄ）　７　イブリル
化繊維０．５ｇを１０　ｍＱのｌ．ＱＮ　ＮａＣｌ溶液
、脱イオン水および３ＸＩＱｍｆ２のリン酸塩緩衝液を
添加した塩水（ＰＢＳ）　　（０．０１　Ｍ　　リン酸
ナトリウム、０．９％塩化ナトリウム、０．０１％ナト
リウムアジド、ｐＨ　−　７．４）で５回洗浄した。１
００　ｍｇのＢＳＡ　を含有する１０　ｍＱの　ＰＢＳ
　　をこの繊維と接触させ、これを室温でｌ時間揺動さ
せた。

この繊維を４　Ｘ　　１０　ｒｔｒＱの蒸留水で、まｆ
−１０　Ｘ１０　ｍ（ｌの　ＰＢＳ　　で洗浄した。ビ
アースのタンパク質検定試薬を用いて繊維について直接
に行ったタンパク質の検定は、繊維に非特定的に（　ｎ
ｏｎ−ｓｐｅｄｉｆ　ｉｃａｌｌｙ）結合した１．２　
ｍｇのＢＳＡ　を示した（繊維１ｇあｔ；り　ＢＳＡ　
２．４　　ｍｇ）　．実施例　６４ 実施例６３の手順に従ったが、ただ、実施例４５の生或
物０．５ｇを使用した。この繊維は非特異的に結合した
　ＢＳＡ　　を示さなかった。

実施例　６５ 紡糸したアクリル糸の試料１．１３　ｇを実施例ｌの開
示と同様に処理した。ＥＳＣＡ　　による表面の試験は
アミド基の存在を示した。

実施例　６６ ｌＩｌＩＱあたり　３３マイクロモルの活性ヒドロキシ
ル基を用いて製造した実施例２７の生戊物ｌ．ＯｍＱを
、実施例３７の手順に従ってＢＳＡ　　と結合させたが
、ただ、ビーズ１講αあたり　２５　ｍｇのＢＳＡ　を
添加した。結合量はビーズ１ｍαあたりＢＳＡ３．５ｍ
ｇであった。

実施例　６７ 実施例６６の手順に繰り返したが、ただ、４０％のエタ
ノールと　６０％（Ｖ／Ｖ）のカップリング緩衝液とを
使用した。結合量はビーズＬｒｎＱあｔ；り　Ｂ　Ｓ　
Ａ　１３．３　ｍｇであった。

本発明の主なる特徴および態様は以下のとおりである。

１．３）　ポリアクリロニトリルまたはアクリロニトリ
ルと少なくとも１種の共重合単量体との共重合体を含ん
でなる基剤をアルカリ性触媒および過酸化物、ならびに
任意に還元剤と、反応条件下で、基剤の表面に分布した
ニトリル基の少なくとも一部をアミド基に転化させるの
に十分な時間接触させ； ｂ）　上記の基剤をハロゲン化剤と反応条件下で、アミ
ド基の少なくとも一部を　Ｎ−ハロアミド基に転化させ
るのに十分な時間接触させ； Ｃ）　表面改質された基剤を回収する ことを特徴とする、その表面に均一に分布したＮ−ハロ
アミド基ならびに任意にニトリル基およびアミド基を有
するポリアクリロニトリルまたはアクリロニトリル共重
合体の芯体を含んでなる表面改質基剤の製造方法。

２．上記の基剤が、その基剤のポリアクリロニトリル含
有量が約１９ないし９９重量部の範囲であるアクリロニ
トリルの共重合体を含んでなる上記のＭｌ項記載の方法
。

３，上記の基剤のポリアクリロニトリル含有量が約５０
ないし約９８２ｔ量部の範囲である上記の第２項記載の
方法。

４．上記の共重合単量体が０　２　−　Ｃ　ａ−モノオ
レフィン、ビニルアミノ芳香族化合物、アルヶニル芳香
族化合物、ビニル芳香族化合物、ハロゲン化ビニル、Ｃ
ｌ−Ｃｓ−アルキル（メタ）アクリル．酸エステル、ア
クリルアミド、メタクリルアミド、ビニルビロリドン、
ビニルビリジン、アルキル（メタ）アクリル酸の　ＣＩ
−Ｃａ−ヒドロキシエステル、（メタ）アクリル酸、ア
クリロメチルグロビルスルホン酸、Ｎ−ヒドロキシ含有
　Ｃ　，−Ｃ　，−アルキル（メタ）アクリルアミド、
アクリルアミドメチルブ口ビルスルホン酸、酢酸ビニル
、（メタ）アクリル酸グリシジル、（メタ）アクリル酸
グリセロール、トリスー（ヒドロキシメチル）一アミノ
メチル−（メタ）アクリルアミドおよびこれらの混合物
よりなるグループから選択したものである上記の第１項
記載の方法。

５．上記の基剤がアクリロニトリルとアクリル酸メチル
との共重合体を含んでなり、上記のアクリロニトリルが
上記の基剤の少なくとも９０モル％を占める上記の第ｉ
項記載の方法。

６．上記の基剤が多孔性ビーズ、非多孔性シート、多孔
性膜、中空非多孔性繊維、中空多孔性繊維、単１／ａｔ
ａ，糸、フィブリル化した繊維またはこれらの組合わせ
を含んでなる上記の第１項記載の方法。

７．上記の基剤が多孔性ビーズよりなる上記の第１項記
載の方法。

８．上記の基剤が７イブリル化した繊維よりなる上記の
第１項記載の方法。

９．上記のＮ−ハロアミド基がＮ−クロロアミド基、Ｎ
−ヨードアミド基および　Ｎ−プロモアミド基よりなる
グループから選択したものである上記の第１項記載の組
成物。

ＩＯ．上記のＮ−ハａアミド基がＮ−クロロアミド基と
　Ｎ−プロモアミド基とよりなる上記の第ｌ項記載の方
法。

ｌｌ．上記の過酸化物が過酸化水素を含有し、上記の還
元剤がジメチルスルホキシドである上記の第１項記載の
方法。

１２．上記のハロゲン化剤が塩素、次亜塩素酸ｔ−ブチ
ル、クロロモノオキシド、次亜塩素酸ナトリウム、次亜
塩素酸、次亜臭素酸ナトリウムおよびこれらの混合物よ
りなるグループから選択したものである上記の第１項記
載の方法。

１３．上記の第ｌ項記載の方法により製造した生戊物。

１４．ａ）　　ポリアクリロニトリルまたはアクリロニ
トリルと少なくとも１種の共重合単量体との共重合体を
含んでなる芯体と ｂ）　その上に均一に分布したＮ−ハロアミド基ならび
に任意にニトリル基およびアミド基を有する表面 を含んでなる物質の組成物。

１５．上記の基剤がアクリロニトリルの共重合体を含ん
でなるものであり、上記の基剤のポリアクリロニトリル
含有量が約１９ないし９９重量部の範囲である上記の第
１４項記載の組成物。

１６．上記の基剤のポリアクリロニトリル含有量が約５
０ないし約９８重量部の範囲である上記の第ｌ５項記載
の組成物。

１７．上記の共重合単量体がＣ＊−Ｃｏ−モノオレフィ
ン、ビニルアミノ芳香族化合物、アルケニル芳香族化合
物、ビニル芳香族化合物、ハロゲン化ビニル、Ｃ！−Ｃ
．−アルキル（メタ）アクリル酸エステル、アクリルア
ミド、メタクリルアミド、ビニルビロリドン、ビニルビ
リジン、アルキル（メタ）アクリル酸の　Ｃ　ｒ−Ｃ　
ｓ−ヒドロキシエステル、（メタ）アクリル酸、アクリ
ロメチルプロビルスルホン酸、Ｎ−ヒドロキシ含有Ｃ　
，−Ｃ　，−アルキル（メタ）アクリルアミド、アクリ
ルアミドメチルプロビルスルホン酸、酢酸ビニル、（メ
タ）アクリル酸グリシジル、（メタ）アクリル酸グリセ
ロール、トリスー（ヒドロキシメチル）一アミノメチル
−（メタ）アクリルアミドおよびこれらの混合物よりな
るグループから選択したものである上記の第１４項記載
の組成物。

１８．上記の基剤がアクリロニトリルとアクリル酸メチ
ルとの共重合体を含んでなるものであり、上記のアクリ
ロニトリルが上記の基剤の少なくとも　９０モル％を占
める上記の第１４項記載の組成物。

１９、上記の基剤が多孔性ビーズ、非多孔性シート、多
孔性膜、中空非多孔性繊維、中空多孔性繊維、単繊維、
糸、フィブリル化した繊維またはこれらの組合わせを含
んでなる上記の第１４項記載の組成物。

２０．上記の基剤が多孔性ビーズを含んでなるものであ
る上記の第ｌ４項記載の組戒物。

２１．上記の基剤がフィブリル化した繊維よりなる上記
の第ｌ４項記載の組成物。

２２．上記のＮ−ハロアミド基がＮ−クロロアミド基、
Ｎ−ヨードアミド基およびＮ−プロモアミド基よりなる
グループから選択したものである上記の第ｌ４項記載の
組成物。

２３．上記のＮ−ハロアミド基がＮ−クロロアミド基と
　Ｎ−プロモアミド基とよりなる上記の第ｌ４項記載の
組成物。

２４．ａ）　　ポリアクリロニトリルまたはアクリロニ
トリルと少なくとも１種の共重合単量体との共重合体を
含んでなる基剤をアルカリ性触媒および過酸化物と、反
応条件下で、基剤の表面に分布したニトリル基の少なく
とも一部をアミド基に転化させるのに十分な時間接触さ
せ； ｂ）　上記の基剤をハロゲン化剤と反応条件下で、アミ
ド基の少なくとも一部を　Ｎ−ハロアミド基に転化させ
るのに十分な時間反応させ； Ｃ）　上記の基質上の上記のＮ−ハロアミド基を生物活
性配位子と、反応条件下で、上記の配位子を上記の基剤
に結合させるのに十分な時間反応させ； ｄ）　表面改質した基剤を回収する ことを特徴とする、生物学的物質の単離に有用な表面改
質基剤の製造方法。

２５．上記の基剤がアクリロニトリルの共重合体よりな
るものであり、上記の基剤のポリアクリロニトリル含有
量が約１９ないし９９重量部の範囲である上記の第２４
項記載の方法。

２６．上記の基剤のポリアクリロニトリル含有量が約５
０ないし約９８重量部の範囲である上記の第２５項記載
の方法。

２７．上記の共重合単量体がＣ２−ＣＡ−モノオレフィ
ン、ビニルアミノ芳香族化合物、アルケニル芳香族化合
物、ビニル芳香族化合物、ハロゲン化ビニル、Ｃ．−Ｃ
．−アルキル（メタ）アクリル酸エステル、アクリルア
ミド、メタクリルアミド、ビニルビロリドン、ビニルビ
リジン、アルキル（メタ）アクリル酸の　Ｃ　，−Ｃ　
，−ヒドロキシエステル、（メタ）アクリル酸、アクリ
ロメチルブロビルスルホン酸、Ｎ−ヒドロキシ含有Ｃ　
．−Ｃ　ａ−アルキル（メタ）アクリルアミド、アクリ
ルアミドメチルプ口ピルスルホン酸、酢酸ビニル、（メ
タ）アクリル酸グリシジル、（メタ）アクリル酸グリセ
ロール、トリスー（ヒドロキシメチル）一アミノメチル
−（メタ）アクリルアミドおよびこれらの混合物よりな
るグループから選択したものである上記の第２４項記載
の方法。

２８．上記の基剤がアクリロニ１・リルとアクリル酸メ
チルとの共重合体よりなるものであり、上記のアクリロ
ニトリルが上記の基剤の少なくとも９０モル％を占める
上記の第２４項記載の方法。

２９．上記の基剤が多孔性ビーズ、非多孔性シート、多
孔ｔｔ膜、中空非多孔性繊維、中空多孔性繊維、単繊維
、糸またはフィブリル化した繊維よりなる上記の第２４
項記載の方法。

３０．上記の基剤が多孔性ビーズよりなるものである上
記の第２４項記載の方法。

３１．上記の基剤が７イブリル化した繊維よりなる上記
の第２４項記載の方法。

３２．上記のＮ−ハロアミド基がＮ−クロロアミド基、
Ｎ−ヨードアミド基およびＮ−プロモアミド基よりなる
グループから選択したものである上記の第２４項記載の
方法。

３３．上記のＮ−ハロアミド基がＮ−クロロアミド基と
　Ｎ−プロモアミド基とよりなる上記の第２４項記載の
方法。

３４．上記の生物配位子がカルボン酸、スルホン酸、第
３級アミン、第４級アンモニウム塩、ペブチド、ホルモ
ン、酵素、酵素補足因子、酵素基質、酵素阻害剤、抗原
、抗体、染料、顔料、複合金属イオン、タンパク質、核
酸、ｐ−アミノベンザミジン、多ｆｌＭ，レクチン、毒
素、抗毒素、ポリヌクレオチド、ヒドラジドおよびハブ
テンよりなるグループから選択したものである上記の第
２４項記載の方法。

３５．上記の生物配位子と上記の基剤との結合がさらに
架橋基をも含有するものである上記の第２４項記載の方
法。

３６．上記の架橋基が、任意にヘテロ原子、たとえば０
、Ｎ　またはＳ　を含有することもあるＣ，ないしＣｌ
Ｂの脂肪族基、芳香族基および環状脂肪族基よりなるグ
ループから選択したものである上記の第３５項記載の方
法。

３７．上記の架橋基がエチレングリコール、ジエチレン
グリコール、トリエチレングリコール、グリセロール、
エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、エタノール
アミン、ジエタノールアミン、３，３゛−ジアミンーＮ
−メチルプロビルアミン、ヘキサンジアミン、グリシン
、β−アラニン、トリスー（ヒドロキシメチノレ）一ア
ミノメタン、６−アミノカプロン酸およびボリオキシエ
チレンジアミンよりなるグループから選択したものであ
る上記の第３５項記載の方法。

３８．上記の第２４項記載の方法により製造した生戊物
。

３９．ａ）　　ポリアクリロニトリルまたはアクリロニ
トリルと少なくとも１種の共重合単量体との共重合体を
含んでなる芯体と ｂ）　その上に均一に分布しｌ； ｉ）生物活性配位子と表面に結合したＮ−ハロアミド基
との反応より誘導された化学結合を通じて表面に結合し
た吊り下がり生物活性配位基、 ならびに任意に、 ｉｉ）ニトリル基および／またはアミド基を有する表面 を含んでなる物質の組成物。

４０．上記の基剤がアクリロニトリルの共重合体よりな
るものであり、上記の基剤のポリアクリロニトリル含有
量が約１９ないし９９重量部の範囲である上記の第３９
項記載の組成物。

４１．上記の基剤のポリアクリロニトリル含有量が約５
０ないし約９８重量部の範囲である上記の第４０項記載
の組成物。

４２。上記の共重合単量体がＣ　．−Ｃ　，−モノオレ
フィン、ビニルアミノ芳香族化合物、アルケニル芳香族
化合物、ビニル芳香族化合物、ハロゲン化ビニル、Ｃ．
−Ｃ１アルキル（メタ）アクリル酸エステル、アクリル
アミド、メタクリルアミド、ビニルビロリドン、ビニル
ビリジン、アルキル（メタ）アクリル酸の　Ｃ　，−Ｃ
　，−ヒドロキシエステル、（メタ）アクリル酸、アク
リロメチルプロビルスルホン酸、Ｎ−ヒドロキシ含有Ｃ
　，−Ｃ　，−アルキル（メタ）アクリルアミド、アク
リルアミドメチルグロビルスルホン酸、酢酸ビニル、（
メタ）アクリル酸グリシジル、（メタ）アクリル酸グリ
セロール、トリスー（ヒドロキシメチル）一アミノメチ
ル−（メタ）アクリルアミドおよびこれらの混合物より
なるグループから選択したものである上記の第３９項記
載の組放物。

４３．上記の基剤がアクリロニトリルとアクリル酸メチ
ルとの共重合体よりなるものであり、上記のアクリロニ
トリルが上記の基剤の少なくとも９０モル％を占める上
記の第３９項記載の組成物。

４４．上記の基剤が多孔性ビーズ、非多孔性シート、多
孔性膜、中空非多孔性繊維、中空多孔性繊維、単繊維、
糸またはフィブリル化した繊維よりなるものである上記
の第３９項記載の組成物。

４５．上記の基剤が多孔性ビーズよりなるものである上
記の第３９項記載の組成物。

４６．上記の基剤が７ィブリル化した繊維よりなるもの
である上記の第３９項記載の組成物。

４７．上記の　Ｎ−ハロアミド基がＮ−クロロアミド基
、Ｎ−ヨードアミド基および　Ｎ−プロモアミド基より
なるグループから選択したものである上記の第３９項記
載の組成物。

４８．上記の　Ｎ−ハロアミド基がＮ−クロロアミド基
と　Ｎ−プロモアミド基とよりなるものである上記の第
３９項記載の組成物。

４９．上記の生物配位子がカルポン酸、スルホン酸、第
３級アミン、第４級アンモニウム塩、ベブチド、ホルモ
ン、酵素、酵素補足因子、酵素基質、酵素阻害剤、抗原
、抗体、染料、顔料、複合金属イオン、タンパク質、核
酸、ｐ−アミノベンザミジン、多糖類、レクチン、毒素
、抗毒素、ポリヌクレオチド、ヒドラジドおよびハプテ
ンよりなるグループから選択したものである上記の第３
９ｘＪ４記載の組成物。

５０．上記の生物配位子と上記の基剤との結合がさらに
架橋基をも含有するものである上記の第３９項記載の組
虞物。

５１．上記の架橋基が、任意にヘテロ厚子、たとえば０
１Ｎ　　または　Ｓ　を含有することもあるＣＩないし
　Ｃ．の脂肪族基、芳香族基および環状脂肪族基よりな
るグループから選択したものである上記の第５０項記載
の組成物。

５２．上記の架橋基がエチレングリコール、ジエチレン
グリコール、トリエチレングリコール、グリセロール、
エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、エタノール
アミン、シエタノールアミン、３，３゛−ジアミンーＮ
−メチルプロビルアミン、ヘキサンジアミン、グリシン
、β−アラニン、トリスー（ヒドロキシメチノレ）一ア
ミノメタン、６−アミノカプロン酸およびポリオキシエ
チレンジアミンよりなるグループから選択したものであ
る上記の第５０項記載の方法。

５３．生物学的物質を含有する溶液を特許請求の範囲第
３９項記載の組成物と、反応条件下で、上記の組成物と
上記の生物学的物質とを結合させるのに十分な時間接触
させ、上記の組成物を上記の溶液から回収することを含
んでなる、溶液よりの生物学的物質の回収方法および／
または単離方法。

５４．上記の生物学的物質がペプチド、タンパク質、ホ
ルモン、酵素、抗原、抗体、核酸、多糖類、毒素、抗毒
素、またはポリヌクレオチドよりなる上記の第５３９４
記載の方法。

５５．上記の組成物からの上記の生物学的物質をさらに
単離することよりなる上記の第５３項記載の方法。

５６．特許請求の範囲第３９項記載の組成物とその組成
物に結合した生物学的物質を含んでなる組成物。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ａ）ポリアクリロニトリルまたはアクリロニトリル
   と少なくとも１種の共重合単量体との共重合体を含んで
   なる基剤をアルカリ性触媒および過酸化物、ならびに任
   意に還元剤と、反応条件下で、基剤の表面に分布したニ
   トリル基の少なくとも一部をアミド基に転化させるのに
   十分な時間接触させ； ｂ）上記の基剤をハロゲン化剤と反応条件下で、アミド
   基の少なくとも一部をＮ−ハロアミド基に転化させるの
   に十分な時間接触させ； ｃ）表面改質された基剤を回収する ことを特徴とする、その表面に均一に分布したＮ−ハロ
   アミド基ならびに任意にニトリル基およびアミド基を有
   するポリアクリロニトリルまたはアクリロニトリル共重
   合体の芯体を含んでなる表面改質基剤の製造方法。 ２、ａ）ポリアクリロニトリルまたはアクリロニトリル
   と少なくとも１種の共重合単量体との共重合体を含んで
   なる芯体と ｂ）その上に均一に分布したＮ−ハロアミド基ならびに
   任意にニトリル基およびアミド基を有する表面 を含んでなる物質の組成物。 ３、ａ）ポリアクリロニトリルまたはアクリロニトリル
   と少なくとも１種の共重合単量体との共重合体を含んで
   なる基剤をアルカリ性触媒および過酸化物と、反応条件
   下で、基剤の表面に分布したニトリル基の少なくとも一
   部をアミド基に転化させるのに十分な時間接触させ； ｂ）上記の基剤をハロゲン化剤と反応条件下で、アミド
   基の少なくとも一部をＮ−ハロアミド基に転化させるの
   に十分な時間反応させ； ｃ）上記の基質上の上記のＮ−ハロアミド基を生物活性
   配位子と、反応条件下で、上記の配位子を上記の基剤に
   結合させるのに十分な時間反応させ； ｄ）表面改質した基剤を回収する ことを特徴とする、生物学的物質の単離に有用な表面改
   質基剤の製造方法。 ４、ａ）ポリアクリロニトリルまたはアクリロニトリル
   と少なくとも１種の共重合単量体との共重合体を含んで
   なる芯体と ｂ）その上に均一に分布した ｉ）生物活性配位子と表面に結合したＮ−ハロアミド基
   との反応より誘導された化学結合を通じて表面に結合し
   た吊り下がり生物活性配位基、 ならびに任意に、 ｉｉ）ニトリル基および／またはアミド基 を有する表面 を含んでなる物質の組成物。 ５、生物学的物質を含有する溶液を特許請求の範囲第４
   項記載の組成物と、反応条件下で、上記の組成物と上記
   の生物学的物質とを結合させるのに十分な時間接触させ
   、上記の組成物を上記の溶液から回収することを含んで
   なる、溶液よりの生物学的物質の回収方法および／また
   は単離方法。 ６、特許請求の範囲第４項記載の組成物とその組成物に
   結合した生物学的物質を含んでなる組成物。