JPH03504931A

JPH03504931A - Ｃ―反応性タンパクの修飾形態による免疫複合体の結合

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Publication number: JPH03504931A
Application number: JP50471689A
Authority: JP
Inventors: ポテンパ　ローレンス　エイ; アンダーソン　バイロン　イー
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1988-04-04
Filing date: 1989-03-31
Publication date: 1991-10-31
Anticipated expiration: 2015-08-07
Also published as: JP3073501B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】Ｃ−反応性タンパクの修飾形態による免疫複合体の結合発明の分野本発明は、Ｃ−反応性タンパク、天然産タンパク質の修飾形態を用いる、哺乳類の全ての免疫グロブリンイソタイプ、特に１ｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＭを含む、免疫グロブリン、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体の結合に関する。特に、本発明は、種々の病気の治療に於ける、及び免疫複合体の検出及び定量化のための分析の一部として免疫複合体を結合するための修飾されたＣ−反応性タンパクの使用に関する。Ｃ−反応性タンパクの修飾形態は、固体表面に被覆される場合または免疫複合体を含む溶液に添加される場合に、免疫複合体を結合できる試薬として使用し得る。ネオＣＲＰ抗原を形質発現する修飾Ｃ−反応性タンパクが好ましい。

更に本発明は、修飾Ｃ−反応性タンパクの調製方法、並びにそれらをネオＣＲＰに対する抗体と接触させることを含む凝集免疫グロブリン、免疫複合体及び免疫グロブリンの結合方法に関する。

最後に、また本発明は、免疫複合体を検出し、定量化するための試験キット、並びに免疫複合体及び免疫グロブリンを液体から除去するための装置に関する。

発明の背景免疫複合体は、しばしばその他のタンパク質と組合せて、抗体を抗原と結合することにより生成される。免疫複合体を形成する抗原は、感染生物の成分、宿主生物に対し外来性のその他の分子、腫瘍に関連した分子及び、多くの病気の場合には、正常な組織分子の成分を含む。抗原に対して生産される抗体は、特別な抗原物質に特異的である。抗体は、抗原に結合し、そして、例えば、毒素の生物活性を変えること、微生物の感染力を中和すること、または認識信号を与えることにより抗原を実質的に中和し、それにより抗体＋結合された抗原が循環または組織から除去される。抗体が抗原に結合する場合、抗体−抗原複合体は免疫複合体と称される。

抗原＋抗体＝抗原−抗体複合体異物＋免疫系応答＝免疫複合体免疫複合体は、肝臓、膵臓及びリンパ節中に見られる固定マクロファージ並びに循環マクロファージによるような種々の正常な機構により循環及び組織から除去される。抗体及び免疫複合体の生成は、感染及び癌の如き病気と戦うための個人の自然応答の一部である。抗原への抗体の結合及び免疫複合体の除去は、抗原が中和され、組織及び血液から取り除かれ、ついで分解される機構である。

循環中の免疫複合体の継続する存在及び組織中のそれらの沈着は、悪化した免疫系機能及び炎症性病状の原因となる。免疫複合体は肺、腎臓、心臓及び関節の如き組織中に沈着することがあり、これらの器官に一過性の損傷及び永久的な損傷の両方を生じる。

癌の場合、存在複合体は免疫機構の適当な機能を阻害し得ると考えられ、この機構はそれがなげれば癌細抱を破壊し、体内の癌の増殖及び拡大を防止するであろう。

循環免疫複合体が病気中に多量に見られるのには一つまたは幾つかの理由があり得る。抗原及び免疫応答系はほぼ最高であることがあり、生成される免疫複合体はそれらの除去のためのこれらの系の能力を簡単に圧倒することがある。また、成る機構が免疫複合体除去系の有効性を悪化したのかもしれないし、あるいは関与する抗原及び抗体の性質が不充分な除去をもたらすかもしれない。免疫複合体は、癌、自己免疫、関節性の病気、及び感染性の病気病気をもつ多くの個人中に存在することが知られている。それ故、体外装置による免疫複合体の結合及び除去は、癌をもつ個人の臨床的な改善をもたらすことができ癌のその他の治療の有効性を改良することができ、感染性の病気中に生じる免疫複合体に関連する器官中の病変の防止をもたらすことができ、しかもこれらの後者の病気の臨床的な改善をもたらすことができる。事実、多くの発表された研究は、循環免疫複合体の除去、または循環からのそれらの浄化値の増大は有効な治療上の処置を構成し得ることを示す。〔セオフィロポウロス　（Ｔｈｅｏｆｉｌｏｐｏｕｌｏｓ）、Ａ、　Ｍ及びディクソン（Ｄｉｘｏｎ）、　　Ｆ、　　Ｊ、著、Ａｄｖ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　、２８巻、９０〜２２０頁（１９７９年）：セオフィ口ポウラス、　Ａ、　Ｎ及びディクソン、　　Ｆ、　　Ｊ、著、′ 癌の免疫診断（１ｍｍｕｎｏｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ　ｏｆＣａｎｃｅｒど　８９６頁（Ｍ、デツカ−・インコーポレーション（Ｄｅｃｋｅｒ　Ｉｎｃ、）、ニューヨーク１９７９年）を参照のこと〕。

抗原に結合する抗体分子の数に広い変化があることがあり、抗原が種々の大きさ及び形状のものであり、こうして免疫複合体の大きさに広い変化をもたらす。また、幾つかの免疫複合体は、更に大きく、更に不均一な構造をもたらし得るＣ１ｑ及びＣ３の如き補体タンパクを固着し得る。成極の免疫複合体は白血球を刺激し、一方、その他の免疫複合体はリンパ球または血小板を刺激する〔リッツマン（Ｒｉｔｚｍａｎｎ）ら著、Ｃｌ１ｎ、ＣｈｅＩｌｌ、、　２８巻、１２５９〜１２７１頁（１９８２年）；マイアー（Ｍａｉｒｅ）ら著、Ｃｌ１ｎ、　Ｅｘｐ。

１＋＋＋ｎ＋ｕｎｏｌ、、　　５１巻、２１５〜２２４頁（１９８３年）、及び ’／　−）　７　エルク　（Ｓｈｉｆｆｅｒｌｉ）ら著、Ｎｅｗ　Ｅｎｇ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、、　　３１５巻、４４８〜４９５頁（１９８６年）を参照のこと〕。免疫複合体は長期間にわたって循環中に残存し種々の組織中に沈着し、自己免疫及びその他の病気の炎症性の症状発現及びびらん性の症状発現の原因となることがある〔エマンチパト−（Ｅｍａｎｃｉｐａｔｏｒ）ら著、Ｌａｂ、　Ｉｎｖｅｓｔ、、　　５４巻、４７５〜４７８頁（１９８６年）を参照のこと〕。

循環免疫複合体は、悪性転換に関して仮定されたように、免疫系の自然効果機構の有効性を阻害し、また低下することがある２４７頁（１９７０年）；マンガリ（Ｍａｎｇａｒ　ｉ）ら著、Ｊ、　Ｉｍｍ＋ａｕｎｏｌ、。

１２１巻、７６７頁（１９７８年）；セオフィロポウロスら著、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１１９巻、６５７〜６６３頁（１９７７年）；セオフィロポウラスら著、“癌の免疫診断”、８９６頁、Ｍ。

デツカ−、ニューヨーク（１９７９年）、及びレビンスキイ（Ｌｅｖ　１ｎｓｋｙ）ら著、Ｌａｎｃｅｔ、　１巻、５６４頁（１９７７年）を参照のこと〕。循環からの免疫複合体の除去は、自己免疫症及び感染症並びに癌に関連する臨床上の問題の多くを減少し得る。例えば、血液中の循環免疫複合体の量を監視すること、及び循環免疫複合体を特異的に結合し除去すること（これらの複合体はそうしないと免疫系機能を悪化し、また急性もしくは慢性の炎症をもたらし得る）が、有益である。それ故、多くの研究は、循環免疫複合体と選択的に反応するが未複合の免疫グロブリンと反応しないように分析及び吸着剤を工夫することにより循環免疫複合体の監視及び除去を試みた。

免疫複合体に関する分析に使用される方法は、ポリエチレングリコールを用いる物理的な分離；免疫複合体を含む溶液の温度を低下すること（例えば、低温沈殿）；補体タンパクＣ１ｑまたは補体タンパクＣ３及びＣ３分解生戊物に対して特異的な抗体への免疫複合体の結合；リウマチ因子への免疫複合体の結合；ウシタンパクコングルチニンへの結合；または血小板もしくはラージリンパ芽球様細胞株（Ｒａｊｉ　Ｉｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｏｉｄａｌ　ｃｅｌｌ　１ｉｎｅ）への免疫複合体の結合を含む〔セオフィロポウロスら著、）ｌｏｓｐ、　Ｐｒａｃｔ、。

１０７〜１２１頁（１９８０年２月）；インジウム（ｌｎｇｒａｍ）著、′免疫プロセスの動物モデル（Ａｎｉｍａｌ　Ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＰｒｏｃｅｓｓｅｓ　）　”　、２２１〜２５３頁（１９８２年）；レビンソン（Ｌｅｖ　１ｎｓｓｏｎ）ら著、Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　７巻、３２８〜３３６頁（１９８４年）；シン７（Ｓｉｎｇｈ）ら著、Ｊ、Ｉｍ＋ｎｕｎｏ！、　Ｍｅｔｈ、、　５０巻、１０９〜１１４頁（１９８２年）；ハイ（ｌ（ａｙ）ら著、Ｃｌ１ｎ。

Ｅｘｐ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　２４巻、３９６〜４００頁（１９７６年）；ペレイラ（ｐｅｒｅｉｒａ）ら著、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１２５巻、７６３〜７７０頁（１９８０年）：チオフィロポウロスら著、Ｊ、　Ｃｌ１ｒＬＩｎｖｅｓｔ、、　６　］巻、１５７０頁（１９７８年）；クレイトン（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ）ら著、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１１１巻、１２１９頁（１９７３年）；ジュール（Ｓｃｈｕｒ）著、Ｎ、　Ｅｎｇｌ、　、１．　Ｍａｄ、、　　２９８巻、１６１頁（１９７８年）、及びブルニュ（Ｂｒｕｎｅａｕ）ら著、Ｊ、　Ｃｌ１ｎ。

Ｉｎｖｅｓｔ、、　６４巻、１９１頁（１９７９年）を参照のこと〕。夫々の分析には利点があり、並びに非感受性、非特異性、全ての大きさの免疫複合体並びに全ての免疫グロブリンイソタイプ及びサブイソタイプの免疫複合体を検出できないこと、補体タンパクを含む免疫複合体に関する信頼性、並びに非複合免疫グロブリンによる干渉を含む欠点がある。また、特定の病気をもつ患者からの血清中で循環免疫複合体を検出する能力が使用される分析により変化することが明らかである〔マクドウガル（ＭｃＤｏｕｇａｌ）、　Ｊ、　Ｓ、ら著、Ａｄｖ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｃｈｅｍ、　２４巻、１〜６０頁＜１９８５年）を参照のこと〕。

それ故、上記の分析のいずれかにより集められた結果は、診断目的のためには限界値であると考えることができるが、診断を支持ｊ７、免疫複合体の量と相関関係づけることにより病気の重度を評価し、あるいはＣｌ１ｎ、　　Ｃｈｅｗ、　Ｎｅｗｓ、　　４１！％　５〜６頁（１９８７年）に於いてフェルドカンプ（Ｆｅｌｄｋａ＋ｍｐ）により示唆されているような治療上の処置後のフォローアンプを監視するのに使用し得る。

血液から免疫複合体を除去する方法は血漿交換または血液濾過の治療を強調していた。一般に、血液濾過治療に関して、複合免疫グロブリンを結合し得る物質が、オンラインに入れられる固体担体上に固定化され、この中を患者から取り出された血液または血漿が通される。成る場合には、吸着剤（体外の装置中）の通過後に、血液成分が患者中に再注入され、こうして多量の血漿交換またはその他の液体の交換の必要をなくす。

現在、固定化された循環免疫複合体吸着剤としてのブドウ球菌プロティンＡ（種々の亜型が１プロテインＡ″として集合的に知られている）の使用の研究に関心がある。研究者らによる幾つかの試みが有望な結果をもたらしたが、その他の試みは、おそらくプロティンＡが免疫複合体中の免疫グロブリンを非複合免疫グロブリンから有効に区別し得ないことのために、及びこの細菌生産物が発熱活性の刺激、補体活性化及び全般の免疫系反応性に関して有する何らかの効果（ベトラム（Ｂｅｔｒａｍ）　　ら著、Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｒｅ５ｐ。

Ｍｏｄ、、　　３巻、２３５〜２４０頁（１９８４年）；チーマン（Ｔｅｒｓａｎ）　　ら著、Ｎｅｗ　Ｅｎｇ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、、　３０５巻、１１９５〜２０００頁（１９８１年）；ドブレ（Ｄｏｂｒｅ）ら著、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｍｅｔｈ、＋　６６巻、１７１〜１７８頁（１９８４年）；ニルマン（Ｎｉｌｓｓｏｎ）ら著、５ｃａｎｄ、　Ｊ、　Ｈａｅｍａｔｏｌ、＋　３０巻、４５８ −４６４頁（１９８３年）、及びナウツ（Ｎａｕｔｓ）著、“癌に対する宿主防御及びその強化（）ｌｏｓｔ　Ｄｅｆｅｎｓｅ　Ａｇａｉｎｓｔ　Ｃａｎｃｅｒ　ａｎｄ　Ｔｔｓ　Ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ）　　”　。

３３７〜３５１頁（１９７５年）に報告されている）のために失敗した。

プロティンＡは、免疫グロブリンの“ＦＣ′部分に結合する。

その他の研究者らは、Ｃ１ｑもしくはりウマチ因子の如きその他のＦｃレセプター、または特異的な抗原もしくは抗体を固定化免疫吸着剤として使用することを提案し、また試みていた〔ニルソン（Ｎｉｌｓｓｏｎ）、！、門、ら著、Ｐ］ａｓ＋＋ａ、　Ｔｈｅｒ、　Ｔｒａｎｓｆｅｒｓ。

Ｔｅｃｈｎｏｌ、、　　５巻、１２７〜１３４頁（１９８４年）；ライ　（Ｌａｉ）。

Ｋ、　Ｎ、ら著、Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　Ｏｒｇａｎｓ、　１１巻、２５９〜２６４頁（１９８７年）；ニルソン、　１．　Ｍ、　　ら著、“第■因子インヒビター　（Ｆａｃｔｏｒ　　■Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）　”、２２５頁（１９８４年）；リベルチ（Ｌｉｂｅｒｔｉ）、　Ｐ、　Ａ、　　ら著、Ｊ、　Ｉ−ｗｕｎｏｌ、＋　１２３　’ｌ、２２１２〜２２１９頁（１９７９年）；ランダーソン（Ｒａｎｄｅｒｓｏｎ）＋　Ｄ、　Ｈ，ら著、Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　Ｏｒｇａｎｓ、　６　巻、４３〜４９頁（１９８２年）を参照のこと〕。

Ｃ−反応性タンパク（ＣＲＰと称する）は、原型の急性期反応物質である。それは、Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、、　　５２巻、５６１〜５７１頁（１９３０年）に於いてティレフト（Ｔｉｌｌｅｔｔ）及びフランシス（Ｆｒａｎｃｉｓ）により最初に記載されたものであり、彼らは、急性疾患の患者からの血清が肺炎球菌細胞壁の分画Ｃと共に沈殿することを観察した。その後、別の研究者が反応性血清因子をタンパクとして同定し、それ故Ｃ−反応性タンパクと称した。

ＣＲＰは宿主防御の役割をもつことが、後に発見された。

ＣＲＰは、細胞または細菌の表面上で、または！！！濁液中で幾つかのりガントの一つを認識し結合し得る。これらのリガンドは、ホスホリルコリン、クロマチン及びポリカチオンを含む。成極のＣＲＰ−リガンド複合体は、補体経路を活性化し、こうして免疫系の成る面を刺激することが明らかである。

臨床用途に於いて、ＣＲＰは嘗性炎症のマーカーとして使用されていた。生体の炎症応答に於けるその正確な役割はまだ知られていないが、マウスにＣ−反応性タンパクを注射することは成極の腫瘍増殖を抑制または反転するのに有効であり得ることが示されていた〔デオドハ−（Ｄｅｏｄｈａｒ）、　Ｓ、　Ｄ、　ら著、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ。

４２巻、５０８４〜５０８８頁（１９８２年）；バルナ（Ｂａｒｎａ）、　Ｂ、　Ｐ。

ら著、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、、　４４巻、３０５〜３１０頁（１９８４年）；トムフ゛しくτｈｏｍｂｒｅ）、　　Ｐ、　Ｓ、ら著、Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ。

１６巻、１４５〜１５０頁（１９８４年）を参照のこと〕。

特別の実験条件下で、ＣＲＰは急性炎症マーカーとして監視されるＣＲＰ分子とはかなり異なるｔ荷、大きさ、溶解性及び抗原性特性をもつように変えることができる〔ポテンバ（Ｐｏｔｅｍｐａ）　。

Ｌ、　Ａ、　　ら著、Ｍｏ１．　Ｉｖｅｕｎｏｌ、＋　２０巻、１１６５〜１１７５頁（１９８３年）を参照のこと〕。変性ＣＲＰと関連する示差的抗原性は“ ネオＣＲＰ”と称され、変性ＣＲＰ分子それ自体は“修飾ＣＲＰ”と称された。

適当な試薬及び分析を使用して、ネオＣＲＰ抗原性を形質発現する修飾ＣＲＰは免疫系反応性の状態を評価するのに使用される種々の分析で試験管内で作用することが決定された。要約すると、修飾ＣＲＰは、 −　ガラス付着性の単核細胞を刺激してインターロイキン１を分泌し； −ガラス付着性の単核細胞を刺激してプロスタグランジン及びロイコトリエンの代謝を増大し； −血小板を刺激して顆粒状の成分を凝集し分泌し；−多形核白血球及び単核細胞を強化して、凝集（複合）免疫グロブリンにより刺激される酸化的代謝を増大し、且つ−内皮細胞を刺激してタンパク質を増殖し合成することが知られていた。

〔ボテンバ、Ｌ、へ６．ゲウル゛ン（Ｇｅｗｕｒｚ）、ｌ、、ハリス（Ｈａｒｒｉｓ）　＋Ｊ、　Ｅ、及びブラウン（Ｂｒａｕｎ）＋　Ｄ、　Ｐ、著、“生物液体のプロタイド（Ｐｒｏｖｉｄｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｆｌｕｉｄｓ）、３４ｊｅ、２８７〜２９０頁（１９８６年）・ポテンパ、　Ｌ、　Ａ、　、ゼルラー（Ｚｅｌｌｅｒ）。

Ｊ、　Ｍ、フィーデル（Ｆｉｅｄａｌ）　、　Ｂ、＾０、キノシタ、　Ｃ，Ｍ、及びゲウルツ、Ｈ８著、Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ、　　１２巻、３９１〜４０５頁（１９８８年）；グプタ（Ｇｕｐｔａ）、　Ｒ，Ｃ，、ボテンパ、　Ｌ、　Ａ、、クリシュナン（Ｋｒｉｓｈｎａｎ）　、　Ｍ、　Ｒ，、及びボスドレスバイト（Ｐｏｓｔｌｅｔｈｗａｉｔｅ）　、　Ａ、　Ｅ、著、“関節炎及びリウマチ０．３１巻、Ｒ３９ａ　（１９８８年）；チュー　（Ｃｈｕ）、　Ｅ、　Ｂ、　、ボテンパ。

Ｌ、　Ａ、　、ハリス、　Ｊ、　Ｅ、　、ゲウルツ、Ｈ１、及びブラウン、　Ｄ、　Ｐ。

著、Ａｖｅｒ、　Ａｓ５ｏｃ、　Ｃａｎｃｅｒ、　Ｒｅｓ、　　２９巻、３７１ａ（１９８８年）；ドウフエリイ　（Ｄｏｕｇｈｅｒｙ）＋　Ｔ、　Ｊ、、ゼルラー、　Ｊ、　？！、　、ボテンパ。

Ｌ、　Ａ、　、ゲウルツ、Ｈ３、及びシーゲル（Ｓｉｅｇａｌ）、　Ｊ、著、′ 生物液体のプロタイド”、３４巻、２９１〜２９３頁（１９８６年）を参照のこと〕。

修飾ＣＲＰがこれらの活性に寄与する正確な機構は知られていない、しかしながら、全てのこれらの列記された活性に共通の一致する特徴は、修飾ＣＲＰが凝集免疫グロブリンにより刺激されるこれらの活性を模擬し、または増強することである。

また、修飾ＣＲＰは生体内でも使用されていた。致死量（９０％）の型７Ｆ肺炎球菌を受ける３０分前に修飾ＣＲＰを注射されたマウスは、投薬量に比例する相当な様式で死をまぬがれた〔チュドウイン（Ｃｈｕｄｗｉｎ）、　Ｄ、　Ｓ、　　ら著、Ｊ、　ＡＩｌｅｒｇｙ　Ｃ１ｊｎ。

ｌＩＩｍｕｎｏｌ、、７７巻、２１６９頁（１９８６年）を参照のこと〕。

生体細胞でネオＣＲＰ抗原としての修飾ＣＲＰの自然産出を同定するのに適当な試薬及び技術を用いて、ネオＣＲＰ抗原性が大きい顆粒状リンパ球の表面上に自然成分（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂリンパ球、多形核白血球及び単核細胞）として見られることが、最近測定された。ナチュラル・キラー及び゛　Ｂ細胞に関して、ネオＣＲＰに対する抗体により認識された抗原は、いずれの細胞でも見られるＦｃレセプターにより直接会合されることがわかった。ナチュラルキラー細胞のＦｃレセプターは、Ｂ細胞のＦｃレセプターと異なり、これはＣＲＰが二つの物理的に異なるが機能的に関連する分子の構造中の共通のリンクであり得ることを示唆する〔アンケレス（Ｕｎｋｅｌｅｓｓ）、　Ｊ、　Ｃ，ら著、Ａｄｖ、　ｒｍｍｕｎｏｌ、　、３１巻、２４７〜２７０頁、（１９８１頁）；ベルシア（Ｐｅｒｕｓｓｉａ）　、　　Ｂら著、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　、１３３％、１８０〜１８９頁（１９８４年）；アンダーソン（Ａｎｄｅｒｓｏｎ）　＋Ｃ，Ｌ、及びローニイ　（Ｌｏｏｎｅｙ）、　Ｊ、　Ｒ，著、Ｉｗｗｕｎｏｌ、　Ｔｏｄａｙ　。

７１！、２６４〜２６６頁（１９８６年）を参照のこと〕。

１所■！ね本発明は、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を下記のＣ−反応性タンパク（修飾ＣＲＰと称する）と接触させることを含む凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体の結合方法を含む、その方法は、液体を修飾ＣＲＰと接触させ、ついで修飾ＣＲＰに結合された凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体から液体を分離することにより、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を液体から除去するのに使用し得る。本発明のこの特徴は、免疫複合体の除去を必要とする哺乳類の体液から免疫複合体を除去するのに特に有益であり、且つ治療操作に使用される液体（例えば、Ｔ−グロブリン）または診断操作に使用される液体（例えば、抗体溶液）から凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を除去するのに特に有益である。また、その方法は、免疫複合体を検出し定量化する分析に使用し得る。免疫複合体を検出または定量化するために、ラベルした修飾ＣＲＰが使用されてもよく、あるいは修飾ＣＲＰまたは免疫複合体に結合するラベルした成分が添加されて免疫複合体を検出または定量化してもよい。こうして、本発明の方法は、診断分析、病気の治療、及び診断操作または治療操作に使用された液体から望ましくない凝集免疫グロブリン及び免疫複合体を除去することに利用し得る。

特に、本発明の方法は、体液（例えば、全血、血清、血漿、関節液、髄液、胸膜液、または腹水）中またはその他の免疫グロブリンを結合し、もしくは含む物質中の免疫複合体を結合することにより有害免疫反応を制御するのに使用し得る。

免疫グロブリンを結合し、または含む物質は、診断試験、治療上の処置のため、あるいは免疫グロブリンを結合し、または含む研究目的のために使用される物質または溶液と定義し得る。詳しくは、これらの物質は、血漿、血清、モノクローナル抗体、免疫複合体に関連する抗原、注射用のγ−グロブリン、補体タンパクもしくはその誘導体、凝固機構に関連するタンパク、即ちフィブリノーゲンまたはフィブロネクチン、等を含んでもよい。一般に、血液から血漿の分離を除き、液体物質の特別な前処理または分離は必要ではない。

本発明の方法の好ましい態様を実施する際に、免疫複合体を含む哺乳類からの液体は、臨床的な診断目的のために現在定量化されるＣＲＰと異なる抗原性を形質発現するように分離され処理された固定して結合されたＣ−反応性タンパク（ＣＲＰ）で被覆された固体担体表面と接触される。この示差的抗原性は、ｎ−ＣＲＰまたはネオＣＲＰと称され、本発明の実施に使用するのに好ましい修飾ＣＲＰはネオＣＲＰ抗原性を形質発現する。免疫複合体を含む液体は、体外の装置中のカラム中の粒状濾過物質、マイクロタイターウェルの如き固体担体表面またはその他の好適な表面に通され、またはそれらの表面上で保温され、その結果、免疫複合体は未複合の免疫グロブリンの認められる結合なく吸着される。

このようにして、免疫複合体は、固体担体表面に固定化される。

免疫複合体がこの処理により除去された液体は、その後、治療上の処置の一部として哺乳類に戻すことができる。

本発明の一つの実施態様は、免疫複合体が結合される自然プロセスを模擬し改善するための半ビボの修飾ＣＲＰの使用である。

ＣＲＰまたは修飾ＣＲＰを固体表面に適当に固定化するため、免疫複合体を含む溶液がそれらを選択的に除去され得る。ＣＲＰを固体表面に固定化する殆どの方法が、ＣＲＰの修飾及びネオＣＲＰ抗原性の形質発現をもたらす。表面に固定化されたＣＲＰまたは修飾ＣＲＰは、診断目的及び治療目的の両方のためのその使用を最適化するように形づくられる。

診断用に於いて、標準免疫分析の場合のように、免疫複合体が修飾ＣＲＰにより固体担体表面に結合された後に、それらは表面に結合されたままで充分に洗浄できる。このような洗浄は、免疫複合体測定の精度を低下し得る未結合成分の除去を確実にする。

固体担体表面との接触により、免疫複合体を含む試料の除去の後に、好ましくは表面を洗浄した後に、表面上の免疫複合体の濃度が通常の免疫測定技術により測定される。

本発明の別の実施態様は、固定化された修飾ＣＲＰへの凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体の結合を強化するのに必要であり、あるいはその結合を強化し得るその他の分子による修飾ＣＲＰの結合を含む。こうして、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を結合する修飾ＣＲＰの感受性及び／または特異性が、また免疫グロブリン結合活性を有するその他の分子により修飾ＣＲＰを同時固定化すること（ＣＯ−ｉｍ＊ｏｂｉｌｉｚｉＢ）により、または修飾ＣＲＰを適当な親水性または疎水性の表面に固定化することにより、あるいは付着されたリンキング剤を有する固体表面に修飾ＣＲＰを固定化することにより増強し得る。

ガウザー（Ｇａｕｔｈｅｒ）ら著、Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、、　　１５６巻、７６６〜７７７頁（１９８２年）は、免疫複合体付着に関する表面電荷の効果を報告した。また、−１ｙｓ−ａｌａ−ａｓｐ−ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−ａｓｐ −ｇｌｙの如き種々のペプチドが、Ｃ１ｑタンパクへの免疫複合体の結合に影響を及ぼすと示されていた〔ボアクル（Ｂｏａｃｋｌｅ）、　ｌ？、　Ｊ、　ら著、Ｎａｔｕｒｅ、２８２巻、７４２頁（１９７９年）を参照のこと〕。ポリカチオン系（例えば、ポリ−リジンまたはポリ−アルギニン）、ポリアニオン系（例えば、ポリ−グルタミン酸またはポリ−アスパラギン酸）の静電力及び非静電力は全て免疫グロブリンとその他の分子との相互作用に関係していた〔バートン（Ｂｕｒｔｏｎ）、Ｄ、Ｒ。

著、Ｍｏ１．　ＩＩＩｍｕｎｏｌ、、　２２巻、１６１〜２０６頁（１９８５年）を参照のこと〕。ボアクルら著、Ｊ、　ｆｎｕｎｏｌ、　、１２７巻、１５０９〜１５１４頁（１９８２年）は、ＣＲＰが選択性を有するポリカチオン性リガンドに結合し得ることを報告していた。

それ故、本発明の別の実施態様は、カチオン電荷またはアニオン電荷を示すように処理された表面に修飾Ｃ１？Ｐを固定化することである。例えば、プロタミンが疎水性表面を下塗りするのに使用されてもよい、その後、修飾ＣＲＰがこのカチオン性表面に吸着される時に、免疫複合体の結合に優れた結果が見られた（実施例９を参照のこと）、修飾ＣＲＰがアニオン性表面に吸着される時に、増強された結合がまた得られる。その他の表面は、市販のイオン交換樹脂、特に誘導体化された表面及び種々の型のマイクロタイタブレートを含むが、これらに限定されない。

別の実施態様は、治療上の処置または診断試験に使用された試薬液体または溶液から凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を除去するための固体表面に結合されたＣＲＰまたは修飾ＣＲＰの使用を含む。このような試薬または溶液は、静脈内のγ−グロブリン、モノクローナル抗体及びポリクローナル抗体、抗血清、アフィニティ精製抗体、並びに第■因子及び遺伝子操作したタンパクの如きその他の単離された血液成分を含むが、これらに限定されるべきではない。

更に、本発明は、固体表面に結合された修飾ＣＲＰ及び液体がその固体表面と接触できるように固体表面を入れるための手段を含む、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を液体から除去するための装置を含む。

また、本発明は、修飾Ｃ−反応性タンパクを保持する容器を含む、免疫複合体を検出または定量化するための試験キ７）を含む。

修飾ＣＲＰは免疫複合体の検出または定量化を与えるためにラベルされてもよく、あるいはキットは免疫複合体が検出または定量化できるように免疫複合体または修飾ＣＲＰに結合するラベルされた成分を保持する容器をまた含んでもよい。

本発明の別の実施態様は、免疫複合体の量を減少するのに有効な量の修飾ＣＲＰを哺乳類に投与することを含む、免疫複合体の量の減少を必要とする哺乳類でその量を減少する方法である。哺乳類の体内または血液中への修飾ＣＲＰの注射は、哺乳類中の修飾ＣＲＰの相対濃度を増大する。ネオＣＲＰ抗原性を形質発現する修飾ＣＲＰは、哺乳類中に見られる天然成分である。実施例１０　（下記を参照のこと）に記載されるように、！！！湧液中の修飾ＣＲＰは熱凝集免疫グロブリンを溶液から有効に除去した。

また、本発明は、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体をふオＣＲＰに対する抗体と接触させることを含む、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体の結合方法を含む、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体は、ネオＣＲＰ抗原を形質発現する修飾ＣＲＰを当然含んでもよく、あるいはネオＣＲＰに対する抗体と接触される前もしくはその間にそれを結合させて凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体に結合されるネオＣＲＰ抗原の量を追加または増加してもよい、その方法は免疫複合体を検出または定量化するのに使用でき、またネオＣＲＰに対する抗体を保持する容器を含む免疫複合体を検出または定量化するための試験キットが提供される。

また、固体表面に結合されたネオＣＲＰに対する抗体及び液体がその固体表面と接触し得るように固体表面を入れるための手段を含む、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を除去するための装置が本発明の一部である。

最後に、本発明は、修飾ＣＲＰをつくる方法、及び免疫グロブリンを修飾ＣＲＰまたはネオＣＲＰに対する抗体と接触させることを含む単量体免疫グロブリンの結合方法を含む。修飾ＣＲＰは単量体免疫グロブリンよりも非常に大きな程度に免疫複合体を結合するが、それは免疫グロブリンのサブクラスであると考えられる成極の単量体免疫グロブリンを結合する。

皿皿至囚皇呈脱ユ第１図〜第３図は、病気のヒト血清及び正常な（即ち、陰性の）ヒト血清からの免疫グロブリンの、ホリスチレンマイクロタイタウエルに固定化された修飾ＣＲＰへの結合を示す。

第４図は、多発硬化症をもつ患者の血漿からの免疫グロブリンの、未置換アガロース樹脂及び修飾ＣＲＰが付着された臭化シアン活性化アガロース樹脂への結合を示す。

第５図は、重症筋無力症をもつ愚者の血漿及び凍結融解した正常な血脩からの免疫グロブリンの結合を示す。

しい　　肚　の舌　なｉ−ヨ天然源からＣ−反応性タンパク（ＣＲＰ）を単離する方法は、公知である。本発明で利用したＣＲＰは、ボラナキス（Ｖｏｌａｎａｋｉｓ）ら著、Ｊ、　Ｉ＋ｎ５ｕｎ、　、１１３巻、９〜１７頁（１９７８年）に記載されポテンバら著、Ｍｏ１．　Ｉｖ＋＋ｕｎｏ１．．２４巻、５３１〜５４１頁（１９８７年）により改良されたような、ポリホスホリルコリン置換セファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）　（ファーマシア（ＰｈａｒＩｌａｃｉａ　）によりつくられたアガロース系樹脂）を用いるカルシウム依存性アフィニティクロマトグラフィーにより胸膜液または腹水から単離された。この操作に於いて、初期のアフィニティカラムは、２８０ｎ−に於ける吸光度が０．０２未満になるまで、２ｍＭのＣａＣ１ｚを含む７５１のトリス（Ｔｒｉｓ）　−ＨＣ１−緩衝食塩水（ｐＨ７，２）で徹底的に洗浄され、ＣＲＰが７５＋＋Ｍのトリス、７．５ｍＭのクエン酸塩緩衝食塩水（ｐＨ７，２＞中に溶出される。この高濃度のトリスは、アフィニティ精製ＣＲＰ調製物を汚染すると認められる非特異的に吸着されるタンパクをかなり減少する。ＣＲＰを含む百分が溜められ、脱イオン蒸留水で３倍に希釈され、ＤＥ５２イオン交換樹脂に吸着され、線形０．０５〜０．５ＭのＮａＣＡ勾配を用いて溶出される。ＣＲＰを含む両分が溜められ、２ｓＭのＣａＣｊ！、を含むｌＯ− とのトリス−ＨＣｆ緩衝食塩水（ｐＨ７，２）中に透析され、未置換バイオゲル（Ｂｉｏｇｅｌ）　Ａ　０．５に適用されて残留の血清アミロイド成分（ＳＡＰと称する）を除去する。最終ＣＲＰ調製物は、１．９８のＣＲＰ吸光率（■／ｌ＞を用いて１■／−に濃縮される。

ＣＲＰは、２ｍＭのＣａＣ１ｚを含む１０ｍＭのトリス−ＨＣｌ−緩衝食塩水（ｐＨ７，２）中で徹底的に透析され、無菌濾過され、４℃で貯蔵される。これらの調製物は、連ａｓＤｓ−ＰＡＧＥ電気泳動で単一のＭｒ　２２．０００帯を生しる。最終ＣＲＰ調製物は主な汚染物質ＳＡＰ及び■ｇＧを〉９９％含まず、全てのその他のタンパクを９７％含まない。

また、ＣＲＰは通常の組換えＤＮＡ技術及び発酵技術を用いて調製し得る。ＣＲＰの遺伝子配列が知られており、ＣＲＰがクローン化された〔レイ　（Ｌｅｉ）ら著、Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ、、２６０巻、１３３７７〜１．３３８３頁（１９８５年）を参照のこと〕、事実、組換えＤＮＡ技術によりつくられたＣＲＰは、それがふオＣＲＰを形質発現することが知られていたので、特に有益であることがわかる。

〔マントゾウラニス（Ｍａｎｔｚｏｕｒａｎｉｓ）　　ら著、Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ。

１８巻、２６０ａ頁（１９８４年）を参照のこと〕。

ＣＲＰは、環状対称に配置された５つのサブユニ７）を含む分子である０個々のサブユニットが解離またはそれ以外に修飾されるようになった時、ＣＲＰは構造を変化し、新しい抗原性が形質発現される（即ち、ネオＣＲＰ）、また、リガンド結合特性、溶解性及び電気泳動特性が未修飾分子と異なる〔ポテンバら著、Ｍｏ１．Ｉｍｍｕｎｏｌ、、２０巻、１１６５〜１１７５頁（１９８３年）を参照のこと〕。

修飾ＣＲＰは、それが本明細書に更に説明されるような免疫複合体、凝集免疫グロブリン及び単量体免疫グロブリンを結合するように、好適な方法により変性されたＣＲＰと定義される。それは、ＣＲＰを変性することにより、またはＣＲＰを疎水性もしくは親水性の固体表面に吸着させることにより調製し得る。ネオＣＲＰ抗原は改良法により形質発現されることが好ましい。また、°修飾ＣＲＰ” という用語は、ネオＣＲＰに対して特異的な試薬を用いて見い出されたＣＲＰの形態を含み、それにより７オＣＲＰは、今までのところ未知の機構により生成される。また、修飾ＣＲＰの形態は、免疫系の種々の作用を刺激することが示されている。

ＣＲＰは、熱、酸、尿素キレート化、疎水性もしくは親水性の固体表面への吸着、またはその他の方法により構造的に修飾または変性することができ、本発明者らがネオＣＲＰとして同定するネオ抗原性を形質発現する。重合体物質に見られるような固体表面の如き固体表面と接触する時に、ＣＲＰは修飾または変性されてネオＣＲＰを形質発現する。この形態の修飾ＣＲＰは、凝集免疫グロブリンまたは免疫重合体を結合するのに使用される好ましい実施態様の一つである。

ＣＲＰは固体表面に固定化されることにより修飾または変性されることが好ましいが、その他の修飾方法または変性方法がネオＣＲＰ抗原を形質発現するのに使用し得る０例えば、ＣＲＰは有効量の尿素及び通常のキレート剤により処理または接触し得る。

好ましいキレート剤は、エチレンジアミンテトラ酢酸（Ｅ　Ｄ　Ｔ　Ａ）、クエン酸及びヘパリンを含む、更に、ＣＲＰは、そのタンパクのｐＨを約３以下または約９以上に調節することにより修飾または変性し得る。

また、加熱がＣＲＰの修飾または変性を生じ得る。キレート試薬は、ＣＲＰＵＲ製物がカルシウムイオンを含む場合に必要なことがある。変性または修飾を生じるのに有効な時間にわたって５０℃以上に加熱することが好ましい、その後、ＣＲＰは、好ましくは０．０７５Ｍの塩濃度を有する緩衝液中に透析し得る。しかしながら、塩濃度はこの好ましい量よりも高くても、低くてもよい。

ＣＲＰが修飾された後に、それは凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を結合するのに使用し得る。修飾ＣＲＰは、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を含む液体に直接添加されてもよく、あるいは凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を含む液体と接触される前に固体表面に付着されてもよい。

固体担体表面に付着された修飾ＣＲＰに関して、体液は診断分析に使用するための固定化された修飾ＣＲＰＯ上で静的に保温されてもよく、あるいは液体は治療上の処置のための、即ち免疫複合体を結合するための体外の装置中で固定化された修飾ＣＲＰを横切って動的に通されてもよい、固体担体表面を選択する際に、修飾ＣＲＰが固相表面を浸出するか否かについて考慮すべきである。そうｔある場合には、浸出は最小にされる必要がある。

本発明の修飾ＣＲＰと共に使用し得る固相表面の例は、アガロース系樹脂、ポリアクリルアミド、ポリメチル−メタクリレート、ポリカーボネート、ポリスルホン、ポリアクリロニトリル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ラテックスビーズ、デキストラン、ガラス、ナイロン、ポリビニルアルコール、ゲル、クレー、及びセルロース誘導体並びに特別な処理により親水性にされたポリスチレンを含むその他の重合体物質を含むが、これらに限定されない。しかしながら、−ｉには、固相表面から修飾ＣＲＰの著しい浸出を生じないあらゆる重合体物質が使用し得る０重合体物質は親水性、疎水性、またはその両方であってもよい。しかしながら、親水性重合体物質が使用されることが好ましい０重合体物面の正に荷電された表面は、実施例９に示されるように、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を結合するための修飾ＣＲＰの結合活性を増強する。また、増強された結合は、負に荷電された表面を用いて得られる。しかしながら、診断分析のための静的系に使用される９６ウエルのマイクロタイタブレート上の如き疎水性表面が使用される場合には、その上に吸着された修飾ＣＲＰはまた凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を結合する能力を有する。

本発明の別の実施態様に於いて、固体表面（疎水性または親水性）に吸着されたＣＲＰが凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を結合するのに使用し得る。ＣＲＰが固体表面に直接吸着される場合、それは変化し、結合活性が支配的である抗原性ネオＣＲＰを形質発現する。こうして吸着されたＣＲＰは、固体表面への吸着の前に修飾されたＣＲＰの免疫複合体及び凝集免疫グロブリン結合特性を有する。

更に、修飾ＣＲＰは、カラム中に使用するためのビーズとして成形された重合体物質の表面に吸着させることができ、循環免疫複合体を結合し得る。ＣＲＰが使用される場合、それはビーズの表面に吸着され、変性され、はぐされて、ネオＣＲＰ抗原を形質発現する。カラム及び固相物質は、バイオ・ラド・ラボラトリイズ（Ｂｉｏ　Ｒａｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）　　（リッチモンド、ＣＡ）；ピアース・ケミカル・カンパニイ（Ｐｉｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）　（ロー／クツオード、ＩＬ）；パル・バイオサポート（Ｐａｌｌ　Ｂｉｏｓｕｐｐｏｒｔ）　（グレンコープ、ＮＹ）；ミクロ・メンブリング（Ｍｉｃｒｏ　Ｍｅｍｂｒａｎｓ）　　にューアーク、ＮＪ）；ファーマシア・ファイン・ケミカルズ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｆｉｎｅ　ＣｈｅＩｉｉｃａｌｓ）　　（アップサラ、スウェーデン）；その他から米国で市販されている。

凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を修飾ＣＲＰに完全に結合することを確実にする試みで、リンキング剤が重合体物質への修飾ＣＲＰの付着を確保するのに使用し得る。修飾ＣＲＰは、リンキング剤により重合体物質の表面に非共有結合または共有結合で固定化し得る。本発明の目的のため、リンキング剤は、タンパクが添加される前に、重合体固形表面の一部として組込まれ、あるいはその表面上に誘導体化され、通常と考えられ、それらはジイミドエステル、カルボジイミド、過ヨウ素酸塩、ハロゲン化アルキル、ジメチルピメリミデート及びシマレイミドを含むがこれらに限定されない〔プライト（Ｂｌａｉｔ）、　Ａ、　Ｈ，及びゴーセ（Ｇｈｏｓｅ）　ｒ丁、■、著、Ｊ、　Ｉｍ＋＋ｕｎｏ１．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　、５９巻、１２９頁（１９８３年）：サライアー（Ｂｌａｉｒ）、　Ａ、　Ｈ，及びゴーセ、　Ｔ、　Ｌ著、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、、４１巻、２７００頁（１９８１年）；ガウンアー（Ｇａｕ　ｔｈ　１ｅｒ）ら著、Ｊ、　Ｅｘｐｒ、　Ｍｅｄ、　　１５６巻、７６６〜７７７頁（１９８２頁）を参照のこと〕。

リズク（Ｒ４ｚｋ）　、Ｓ、　Ｌ、　　らは、Ｃａｎｃｅｒ−、５８巻、５５〜６ｏ頁（１９８６年７月１日）に於いて、正に荷電したペプチドが’　　ＣＲＰを標的細胞に定着させ得ることを報告している。これらのポリカチオンは、ポリーＬ−アルギニン、ヒストン（核）、及びプロタミン並びに主要な塩基性タンパク（エオシン好性）を含む。

また、ポリカチオンによるリンキングが修飾ＣＲＰに有効であることがわかった。

また、負に荷電した表面は、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体の結合を増強することがわかった。このような負に荷電した表面を調製するのに有効な好適な物質は、グリシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、及びヘパリンを含む。グリシンは溶液中で双性イオン性であり、アミン基により固体表面に結合された後にのみ負の電荷を示すことが注目すべきである。

接合反応は、一般にタンパク質アミノ酸Ｒ基もしくは架橋剤またはその両方の初期修飾を必要とする。このような修飾は、Ｒ基（例えば、カルボジイミド−Ｏ− アシル尿素、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、及びＣ−末端カルポン酸残基による中間体生成）を選択的に活性化し、適当な有効な薬剤官能基（カルポジミドの場合、アミノ基）との反応を与えるのに利用し得る。また、修飾は、リシンｔ−アミノ残基にピリジルジチオ基を導入する新規な反応性部分（例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）−プロピネート）の導入を含む、これは、タンパクと薬剤との間にジスルフィド結合生成を与える。成る場合には、タンパクＲ基と関係する薬剤との間に橋を形成する二官能性カンブリング試薬が使用される。

本発明の修飾ＣＲＰは、液体を修飾ＣＲＰと単に接触させることにより、全血、血漿、その他の体液またはその他の免疫グロブリンを結合し、または含む物質の如き液体から凝集免疫グロブリン、免疫複合体を除去するのに使用し得る。このような接触は、修飾ＣＲＰで被覆された固体表面及び液体がその固体表面と接触するように固体表面を入れるための手段を有する体外の装置中に血液、血漿またはその他の液体を通すことにより行なうことができる。接触の期間は重要な制限に拘束されないが、それは、勿論、凝集免疫タンパク質または免疫複合体を固体表面上の修飾ＣＲＰに吸着させ、結合させるのに充分であるべきである。

治療用に関し、ＣＲＰまたは適切には修飾ＣＲＰは、全血または血漿が動的に循還される体外の装置中にオンラインで入れられる固体担体表面に塗布でき、その結果、全血または血漿中に含まれる免疫複合体が結合され、それにより血漿または血液から除去される。この方法は、通常のプラズマフエレーシス技術または血液透析技術を用いて使用し得る。このような液体は体内に戻すことができ、血液交換治療の必要をなくす。

装置の固体表面及びそれを入れる手段は、如何なる生体適合性物質からつくられてもよい０例えば、固体表面は、ＣＲＰで被覆された膜表面、アガロース系ビーズまたは中空繊維であってもよい。体外の装置は、ビーズで充填されたカラム、腎臓透析に使用されるシリンダーのようなシリンダーに入れられた中空繊維膜、ウェルを含むマイクロタイクプレート、または好適な表面（これらは修飾ＣＲＰで被覆されている）であってもよい。また、装置は、それを患者に接続するための適当な管並びに装置中の液体の通過及び１色者への戻しを助け、且つ空気が系に入ることを防止するためのポンプを含んでもよい。装置は治療用には滅菌される必要があり、滅菌はエチレンオキサイドによるパージ、または装置を照射することによるような通常の方法で行ない得る。

また、本発明は、免疫複合体が修飾ＣＲＰに結合するように、免疫複合体を修飾ＣＲＰと接触させることを含む免疫複合体を検出または定量化する方法を含む。

修飾ＣＲＰは、免疫複合体を含む液体に直接添加されてもよく、あるいは上記の型の固体表面に。

上記の方法で固定化されてもよい、また、修飾ＣＲＰは免疫複合体を有する細胞または組織試料に直接添加されてもよく、ラベルした修飾ＣＲＰが哺乳類に注射されてもよく、その結果それは哺乳類の体の領域（炎症の領域のように、免疫複合体が見られる〉中に局所化する。

診断分析に於いて、修飾ＣＲＰは、免疫複合体を含む溶液に直接添加でき、免疫複合体を結合し変化させ、且つ免疫複合体の沈殿を促進するように免疫複合体の性質を変え、且つ免疫複合体のその他の結合相互作用を増強して、循環からの免疫複合体の除去をもたらす、また、ＣＲＰまたは適当に修飾されたＣＲＰは、固体担体表面上に固定化でき、その結果、免疫複合体または免疫グロブリンを含む液体がそれと接触でき、または保温でき、そして所望により、非特異的に結合された免疫グロブリンを洗浄して除去した後に、結合された免疫複合体が検出または定量化し得る。

免疫複合体を検出または定量化するために、ラベルした修飾ＣＲＰが使用し得る。本発明に有効なラベルは、１１２１ラベル、ビオチンラベル、酵素ラベルまたは蛍光ラベルの如き、当業界で既知のラベルである。また、免疫複合体は、免疫複合体または修飾ＣＲＰに結合するラベルした成分を添加することにより通常の免疫測定技術を用いて検出または定量化し得る。このような通常の免疫測定技術は、凝集測定、放射免疫測定、酵素免疫測定及び蛍光測定を含む。酵素結合免疫吸着検定法（ＥＩＡと称する）は、それらが免疫複合体の量の感度の良い定量化のための手段を与えるので好ましい。

本明細書中の実施例に使用されるＥＩＡは、以下のように行なわれる標準のＥＴＡ測定である。試験タンパク（１〜１０μｇ／Ｈ１）１００μｌがポリスチレンプレート中の夫々のウェルに入れられ、３７℃で２時間保温される。ＣＲＰまたは修飾ＣＲＰが直接固定化されたＥＴＡ測定に関して、ＣＲＰまたは修飾ＣＲＰは、被覆の前に遇析され、または１０−の重炭酸ナトリウム緩衝液ＣｐＨ９，０）中で希釈された。ＣＲＰまたは修飾ＣＲＰがリン酸塩緩衝液（ｐＨ７，４）中で調製された場合に同様の結果が得られた。ウェルが０．３　ＭのＮａＣ！Ｌ及び０．０５％のトウイーン（Ｔｗｅｅｎ）　　２０を含む１０ｍＭのリン酸塩緩衝液＜ｐＨ７，３）　　（洗浄緩衝液）で洗浄され、その後、水中の１％ウシ血清アルブミン（ＲＡＳと称する）で３７℃で３０分間裏面塗布され、洗浄緩衝液ですすがれた。試験試料（１００μｌ／ウエル）が、１％ＢＳＡを含む０．１Ｍのリン酸塩緩衝食塩水（ｐＨ７，３）（Ｐ　Ｂ　Ｓ）中で希釈され、３７℃で１時間保温された。多くの洗浄工程後、１％ＢＳＡを含む０．０２ＭのＰＢＳ中で希釈された適当な酵素複合体１３０μｌが添加され、３７℃で２時間保温された。洗浄後、酵素基質溶液１００μｐがウェルに添加され、３７℃で保温された。

ウェルが、タイターチク（Ｔｉｔｅｒｔｅｋ）マルチスカンプレートリーダー（フロー・ラボラトリイズ（Ｆｌｏｗ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ヘルシンキ、フィンランド）で適当な波長で吸光度に関して読み取られた。

また、修飾ＣＲＰは、凝集測定に使用するためのラテックスビーズ、または定量的もしくは半定量的免疫測定に使用するためのディノブスティソク（ｄｉｐｓｔｉｃｋ）　　（例えば、ポリカーボネート、ポリスルホンまたはラテックスからつくられる）に被覆されてもよい、一般に、観察し得る性質の変化を生じるあらゆる免疫測定技術が使用し得る。

免疫複合体の検出または定量化を与えるために、修飾ＣＲＰに結合された免疫複合に添加されるラベルした成分は、免疫測定に使用される通常の試薬である。また、使用されるラベルは当業界で既知のものである０例えば、免疫グロブリンまたは免疫複合体中の抗原に対して、酵素ラベルした抗体、Ｉ′！５ラベルした抗体またはビオチンラベルした抗体が使用できた。

哺乳類からの体液は通常免疫複合体を含んでいるので、哺乳類からの試料中の免疫複合体の量の比較は、症状を指示する免疫複合体の量を同定するためには、正常体中に見られる量に対して行なわれる必要がある。

免疫複合体を検出または定量化するための試験キットがまた本発明の一部である。そのキットは、修！ｆｌｉＣＲＰの溶液または固体表面に付着された修飾ＣＲＰを保持する容器を含む、固体表面は上記の型であり、修飾ＣＲＰは上記のように付着される。こうして、その容器は、保護包装材中に入れられた修飾ＣＲＰで被覆されたディンブスティック、修飾ＣＲＰで被覆されたラテックスビーズ、または壁が修飾ＣＲＰで被工されるマイクロタイタブＩ／−トであり得る。

修飾ＣＲＰは、それが免疫複合体を検出または定量化のために使用される場合には、ラベルされてもよい、また、キットは、免疫測定技術が使用される場合に、免疫複合体の検出または定量化を可能にする上記のラベルした成分を保持する容器を更に含んでもよい。

ＣＲＰまたは修飾ＣＲＰから誘導されたフラグメント（これらはネオＣＲＰ抗原性を形質発現してもよいし、それを形質発現しなくてもよい）は、修飾ＣＲＰの生物学的機能をもつことがある。

これらのフラグメントはペプチドであってもよい、こうして、本発明はまた免疫複合体または凝集免疫グロブリンを結合するこのようなあらゆるフラグメントの使用を包含する。

ネオＣＲＰまたはＣＲＰのペプチドフラグメントに対して通常の技術により生成されるポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体及び抗血清が、また凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を結合するのに使用し得る。好ましくは、ＣＲＰは上記のように変性または修飾でき、その後抗体が通常の技術によりネオＣＲＰ抗原に対して生成し得る。ＣＲＰを解離し、ＣＲＰ抗原を卓離し、特性決定する方法がポテンパら著、Ｍｏ１．　Ｉ＋ｕ＋ｕｎｏ１．．２４巻、５３１〜５４１頁（１９８７年）に開示されており、この文献は参考として本明細書に含まれる。

その後、ネオＣＲＰに対する抗体は、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体（これらは当然にネオＣＲＰ抗原を形質発現するＣＲＰを含み得る）を結合するのに使用し得る。また、免疫複合体または凝集免疫グロブリンは、ネオＣＲＰに対する抗体と接触される前またはその間にネオＣＲＰ抗原を形質発現する修飾ＣＩＩＰと接触させることができ、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体に結合される量を追加し、または増加し得る。

この方法は、液体、細胞または組織中の免疫複合体を検出または定量化するのに使用でき、ネオＣＲＰに対する抗体を保持する容器及び、必要により、ネオＣＲＰを形質発現する修飾ＣＲＰを保持する容器を含む試験キットがまた提供される。１オＣＲＰに対する抗体は既知のラベルでラベルでき（例えば、Ｂｚｓ、酵素、ビオチン、フルオレセインでラベルされる）、免疫複合体の検出及び定量化を可能にする。また、免疫複合体またはネオＣＲＰに対する抗体に結合するラベルした成分が免疫複合体を検出または定量化するのに使用でき、そのキットはこの成分を保持する容器を更に含む。再度、これらのラベルした成分及びラベルは、免疫測定に使用するための既知のものである。また、固体表面に結合された７オＣＲＰに対する抗体及び液体がその固体表面と接触し得るように固体表面を入れるだめの手段を含む、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を液体から除去するための装置が提供される。抗体を固体表面に結合する方法は知られている。それ以外に、この装置の構造、操作及び実用性は、固体表面に結合された修飾ＣＲＰを有する上記の装置と同じである。

担体用の固体表面を使用しないで独立に使用される場合に、修飾ＣＲＰは液相相互作用が免疫複合体を依然として結合し得る。

こうして、修飾ＣＲＰ、修飾ＣＲＰの選択された生物活性部分、またはＣＲＰは、癌その他の病気に対する治療活性のために体液中に注入し得る。免疫複合体を含む体液中への修飾ＣＲＰの導入の際に、可溶性抗原及び抗体複合体は物理的な大きさの点で一層大きく成長することがあり、沈殿する（溶液から析出する）ことがあり、あるいは、そうでなければ、修飾されて食細胞によるそれらの除去を促進することがある。ザヘジ（Ｚａｈｅｄｉ）ら著、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　　４６Ｓ５０７７〜５０８３頁（１９８６年）及びバーナ（Ｂａｒｎａ）ら著、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　　４７巻、３９５９〜３９６３頁（１９８７年）は、マクロ゛ファージ及び華核細胞がＣＲＰの存在下に刺激されて抗癌応答を増大することを示していた。本発明は、実施例１ｏに示されるように、沈殿を促進することによる修飾ＣＲＰの治療効果を開示する。

実験室の実施に際し、修飾ＣＲＰは、研究もしくは治療操作または診断試験に使用された液体から凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を除去するのに使用し得る。このような試薬中の凝集免疫グロブリンの存在は、補体を失活するための抗血清の熱処理の如き、これらの液体をつくるのに使用される処理工程のために予想し得る。修飾ＣＲＰまたはＣＲＰは、試薬物質または溶液、例えば、モノクローナル抗体、誘導体化試薬、静脈内のγ−グロブリン、または単離された血液成分を含む溶液から凝集免疫グロブリンまたは複合免疫グロブリンを結合するために固体表面に結合されてもよい。また、修飾ＣＲＰは、凝集免疫グロブリンまたは複合免疫グロブリンを除去するためにこのような試薬物質または溶液に直接添加されてもよく、それによりそれらを無害にし得る。

以下の実施例に示されるように、修飾ＣＲＰはまた単量体免疫グロブリンに結合するが、それが凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体に結合するよりも非常に少ない程度である。修飾ＣＲＰが結合されているアガロースビーズのカラムに正常な血漿を連続的に通すことにより、単量体免疫グロブリンの約５％が最初のカラムにより除去され、約１％が第二カラムにより除去され、１％未満が第三カラムにより除去されることがわかった。こうして、免疫グロブリンの選ばれた部分またはサブクラスのみが結合し、単量体免疫グロブリンは一般に結合しない。免疫グロブリンのこのサブクラスはまだ特性決定されていなかったが、異常な免疫グロブリンであり得るし、症状と関連し得る。こうして、本発明の方法は、免疫グロブリンのこのサブクラスを特性決定するのに有効であり、この物質を液体から定量化して除去し、且つこのような症状を監視し治療するのに使用し得る。

免疫グロブリンのこのサブクラスを結合し、定量化し、除去する方法は、修飾ＣＲＰ及びネオＣＲＰに対する抗体を用いて免疫複合体を結合し、定量化し、除去することに関して既に説明した方法と同じである。また、既に説明したキット及び装置と同様のキット及び装置が、この免疫グロブリンを検出し定量化し、且つそれを液体から除去するのに使用し得る。

実施例本発明の方法が、以下の実施例により更に説明される。

実施例　１尿素及びキレート化を用いて、ＣＲＰネオ抗原を提示する分子の調製精！ｌ１ｃＲＰ　（１■／ｄ）（上記のようにして調製した）を、１０ｍＭのＥＤＴＡの存在下で８Ｍの超純粋な尿素（シュワルツ−マン（Ｓｃｈｗａｒｔｚ− Ｍａｎｎ）、スプリング・バレー・ニューヨーク）中で室温で１時間保温した。

これらの条件は、ポテンパら著、Ｍｏｌ。

１＋＋ｕｎｕｎｏ１．．２０巻、１１６５〜１１７５頁（１９８３年）に記載されているようにネオＣＲＰの発生に関して最適であることが知られている。０．１５ＭのＮａＣｊ２を含む１０ｍＭのリン酸塩緩衝液（ｐＨ７，４＞中の透析により尿素を除去した時、殆どのＣＲＰが沈殿した。吸光率及びローリ−タンパク測定の両方により定量化されるように、約１００〜１５０μｇ　／　ｍＩ！のＣＲＰが可溶性のまま残った。電気泳動法及び抗原検出法を用いて、ネオＣＲＰ抗原が沈殿画分及び可溶性画分の両方に見られた。０．０１５ＭのＮａＣ１を含む１０ｍＭのリン酸塩緩衝液（ｐＨ７，４）中の透析により尿素を除去した時、目視できる沈殿は観察されなかった。処理前に有効なタンパクの〉９０％が、透析後に溶液相中に明らかにされた。

１範五−１修飾ＣＲＰによる種々の抗体−抗原比の免疫複合体のＥＩＡ人ウサギ抗ペルオキシダーゼ抗血清及び単離されたペルオキシダーゼを、６．２５％のウサギ血清の存在下で種々の比で一緒に予備保温して可溶性免疫複合体（ｓｏｌ−Ｉ　Ｃｓと称する）を生成した。

ウサギ血清を使用前に遠心分離して、存在する内因性の複合免疫グロブリンまたは凝集免疫グロブリン（Ｉｇｓ）の効果を最小にした。試薬の比を調節して約５＝１．２．５：１、及び１．２５：１の抗体（Ａｂ）：酵素（Ｅｎｄ）の比（モル：モル）のＩＣｓを生成した。抗−ベルオキシダーゼ：ペルオキシダーゼｓｏｌ　−ＩＣｓを含む血清を、修飾ＣＲＰ　（実施例１に記載したようにして調製した）が前記の条件により１０Ｍｇ／−で固定化されたポリスチレン９６−ウェルマイクロタイタプレートのウェル中で保温した。

この測定構成物は、ペルオキシダーゼ基質により結合された複合体に関するＥＩＡの直接展開を可能にし、こうして別の洗浄工程及び保温工程の必要を回避した。対照として、表面固定化ＢＳＡ（陰性対照）及びブドウ球菌プロティンＡ（陽性対照）を、表面固定化した修飾ＣＲＰへの結合の比較のために使用した。全ての場合、正常なウサギ血清に添加された酵素単独は、実験表面に結合しなかった。下記の結果を得た。

表　　　　　１修飾ＣＲＰへのウサギ抗ペルオキシダーゼの結合を測定する、４１４ｎｍに於ける吸光度Ａｂ：Ｅｎｇの　　Ａｂ単独、続　　　　　　　Ｓｏ＋−１ｃ／Ａｈ単独の」社り慧旦　　いＴＥｎｇ単独　　５ｏｌ−ＩＣｓ　　増強すれた結合の比５：１　　　　０．２３　　　　０．５０　　　　　２．２２．５：ｌ　　　　　０１１０　　　　０．４６　　　　　４．６１．２５：１　　　　０．００５　　　０．８７　　　１７４．０これらのデータは、修飾ＣＲＰが抗体単独よりも２．２倍〜１７４倍太きく５ｏｌ−ＩＣを結合することを示す。抗原に対し１〜３の抗体を含むＩＣｓは、自由抗体結合とは最も顕著に異なっていた。また、５ｏｌ−ＩＣｓは、ここに記載された全ての比でプロティンＡを結合することがわかった。しかしながら、６６倍まで多い未複合の免疫グロブリンは修飾ＣＲＰよりもプロティンＡに結合した（１．２５：ｌの比で）。こうして、プロティンＡは、ＩＣｓ中の免疫グロブリンよりも単量体免疫グロブリンを結合するのに選択的ではない。アフィニティ精製されたウサギ抗ペルオキシダーゼ試薬を用いる同様の実験、ウサギ抗−β−ガラクトシダーゼ−β−ガラクトンダーゼ抗体：酵素系を用いる同様の実験、及びヤギ抗ビオチン（またアフィニティ精製された） −ビオチニル化アルカリホスファターゼ系を用いる同様の実験を行なった。

全ての系で、実験結果は示されたものと実質的に同じであった。

実施例２に記載された系と同様のアフィニティ精製抗体系を、２．５：１の抗体対酵素の比に調節した。特定量のｓｏｌ　−ＩＣｓを、１％のＢＳＡを含む緩衝液または希釈した正常の血清（６，２５％）に添加した。固定化された修飾ＣＲＰ　（実施例１に記載したようにして修飾した）の量を１０μｇ／ウェルから１　ｎｇ／ウェルに変え、修飾ＣＲＰに与えられ、結合されたｓｏｌ　−ＩＣの多数のシグモイド結合曲線を確立した。０．５〜ｌｔｔｇの修飾ＣＲＰ／ウェルがＥＩＡに関して最適であり、５０〜１１００ｎ／ウエルの程度の少量が成極の測定条件及びｓｏｌ　−ＩＣ濃度で機能的であった。

測定構成物は、ｓｏｌ　−ＩＣｓとして存在する抗体タンパク１〜１０μｇを検出できた＊ｓｏｌ　−ＩＣｓとしてのヤギ抗体及びウサギ抗体は修飾ＣＲＰに選択的に結合した。ウサギ抗体及びヤギ抗体のｓｏｌ　−ＩＣｓを用いる別の抑制実験は、修飾ＣＲＰへのそれらの結合の際に明らかな種特異性を示さないことを示した。

ス皇Ｕ飾ＣＲＰへのヒト　　グロブ１ン°　　の　ム特定のヒト免疫複合体系が容易に入手できなかったので、対称系としてビオチニル化された単離ヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）を使用した。ポリスチレン表面に固定化された１μｇ／ウェルの量の修飾ＣＲＰを用いて、実施例２及び実施例３に記載したようにして、ＥＩＡを行なった。ビオチニル化１ｇを６３℃で３０分間熱凝集させ（ａｇｇｌｇ）、大きい複合体を遠心分離により除去した。熱凝集したビオチニル化１ｇを、示された濃度に希釈し、固定化された修飾ＣＲＰＯ上で１時間保温した。結合しなかった物質を多くの洗浄工程で除去し、連鎖球菌−アビジン−β−ガラクトシダーゼ− 酵素複合体及び適当な基質を用いて、結合ｒｇを検出した。

スー　　　　２ビオチニル化ヒトＩｇＧの結合を測定る４０５ｒ＋＋ｗに　番る盗豊■訊鼠■　　ハ旦と匹聚■　　　息匹皿叩マイクＵグラム数　　　単量体　　　　　単量体　　　　　単量体−ｎＺ鼠−−江一　ハれＬｊｌ−ム紅１ｊＪ− 釦旺Ｌ１２０．０　　　０．４０　　０．７４　　０．５０　　０．９１　　０．８６　　０．７２６０．０　　　０．３７　　０．５２　　０．６３　　０．６３　　０．７４　　０．７５３０．０　　　０．２４　　０．５２　　０．６６　　０．８２　　０．７３　　０．６６１５．０　　　０．１６　　０．４２　　０．６６　　０．９２　　０．６Ｂ　　　０．７３７．５　　　０．１０　　０．２５　　０．７２　　０．８２　　０．６１　　０．６５３．７５　　０．０５　　０．１５　　０．７２　　０．７２　　０．４６　　０．６０１．８７　　０．０３　　０．０９　　０．７８　　０．６８　　０．３４　　０．４Ｂ０．９４　　０．０１　　０．０５　　０．６１　　０．５０　　０．２４　　０．３８０．４７　　０　　　０．０２　　０．３７　　０．２８　　０．１４　　０．２２これらのデータは、修飾ＣＲＰがプロティンＡ及びＣ１ｑと同様の感度でヒトａｇｇ１ｇを結合することを示す、更に、これらの実験から、修飾ＣＲＰは、それがプロティンＡまたはＣ１ｑよりも単量体１ｇを多く結合しない点で優れた試薬であることが明らかである。修飾ＣＲＰに結合する単量体Ｉｇはａｇｇｌｇとの間の明らかな区別は、約２μｇ／−〜５０μｇ／−のＩｇ澹度で観察される（表２中の下線を付した値を参照のこと）、正常なヒト血清（ＮＨ３）中に存在と予想されるｓｏｌ　−ＩＣｓが合計１ｇ（１（１＋ｇ／−であると推定される）のＯ，ＯＯ１〜１％に相当すると計夏したとするならば、ｓｏｌ　 −ＩＣ検出測定は０．５μｇ／−〜１００μｇ／−の感度を必要とする。こうして、修飾ＣＲＰは、この濃度範囲内で、試験したその他の試薬よりも有効にｓｏｌ　−ＩＣｓをＩＩＦ：的に識別する。

１隻■−工血清中の修飾ＣＲＰ結合因子を同定し定量化るための　　ＥＩＡ血清の種々の希釈液を、ポリスチレンマイクロタイタブレート上に１μｇ／ウェルで固定化された修飾ＣＲＰ　（実施例１に記載したようにして調製した）の上で保温してＩＣｓの結合を可能にした。洗浄後、特別に調製した抗〜ネオＣＲＰ −酵素複合体試薬の結合に何らかの変化（即ち、予想される減少）があることが予想される。その理由は、修飾ＣＲＰに結合されたＩＣｓがネオＣＲＰ抗原に対する抗−ネオＣＲＰポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体（及び適当な酵素−複合体）の結合の増大を阻止するからである。二つの結果が得られた。１）血清因子、おそらくＩＣｓは、別個の測定ウェル中の酵素接合した抗と）ＩｇＧ試薬で検出されるように、固相吸着した修飾ＣＲＰに結合した。そして、２）修飾ＣＲＰに結合されたＩｇＧは、酵素接合されたプロティンＡに対し反応性ではなかった。この後の知見は、ＩｇＧがＩｇＧのＣ２−Ｃ３スインチ領域へのプロティンＡの結合を阻止するように修飾ＣＲＰに結合していることを示唆した〔バートン、Ｄ、　Ｒ，ｉ、Ｍｏ１．　Ｉｓｍｕｎｏｌ、　、２２巻、１６１〜２０６頁（１９８５年）；スジッダール（Ｓｊｏｄａｈｌ）著、Ｊ、εｕｒ、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、７８Ｓ１４７１〜４９０頁（１９７７年）を参照のこと〕。

尿素キレート化により調製された修ＬＩＣＲＰに代えて、マイクロタイタブレートのウェルで直接固定化することにより調製された修飾ＣＲＰを用いて、匹適する結果を得た。

スＵ患者の血清、血ま及び胸膜液からの免疫複合体のＣＲＰへの七ム種々の病気をもつ２１人の患者の血清、血漿、及び胸膜液を、実施例１に記載されたようにして調製した修飾ＣＲＰに結合するヒ）ＩｇＧ　（酵素接合された抗ヒ）ＩｇＧ試薬を用いる）に関して試験した。本発明者らは２１の試料のうちの１７個中で結合する物質を見い出した（８１％陽性）、一般に、血漿試料は、血清に比較して、同しか、または幾つかの場合に増大された量の修飾ＣＲＰ結合物質を与えた。前記の修飾ＣＲＰ結合物質の場合のように、結合したＩｇＧはプロティンＡ展開試薬（ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ　ｒｅａｇｅｎｔｓ）では検出できなかった。試験した１０の正常なヒト血清に関して、少量（グラフ中の陰性）のＩｇＧを、血清の１＝１０以下の希釈液でのみ検出した。ＥＴＡ結合曲線の例が第１図〜第３図に示されている。

一般に、二つのパターンが観察された。一つの結果が、慢性関節リウマチ（第１図）または盲腸炎（第２図）をもつ患者からの血清で示される。修飾ＣＲＰに結合したＩｇＧ物質の量は、血清濃度（血液希釈）と相関関係にあった。結果の第二の型は、側頭動脈炎（第１図または第２図）または盲腸炎（第３図）をもつ患者からの血清で示される。プロシンに憤た現象を示唆するベル形曲線が得られた。修飾ＣＲＰに結合したＩｇＧの量は、正常な血清試料中よりも患者試料中で非常に多かった（１：１０００までの希釈で観察される）６本発明者らは、修飾ＣＲＰ結合ＩｇＧの量及びＣＲＰの血清量の正もしくは逆の相関関係を見い出さなかった。

こうして、ＣＲＰは炎症の一般指数として使用されるが、その量はおそらく複合１１Ｇを結合する修飾ＣＲＰの能力に関して明らかに反映しない。

尿素キレート化により調製された修飾ＣＲＰに代えて、マイクロタイタブレートのウェルで直接固定化により調製された修飾ＣＲＰを用いて匹適する結果が得られた。

実施■−ユリウマチ活性因子を含む血清からのＩｇｓのＣＲＰへの　ム本発明者らは、ラテックス凝集試験により測定されるように、リウマチ因子をもつことが知られている患者血清を固相固定化された修飾ＣＲＰ　（実施例１に記載されたようにして調製した）の上で保温した。測定条件は、前の実施例に記載されたものと同じであった。洗浄後、抗ヒトＩｇＭ及び抗ヒ）ＩｇＧ酵素複合体を用いて、ウェルを結合１ｇＭ及びＩｇＧに関して精査した。正常のヒト血清を対照として使用した。全その試料をエアフユージ（ａｉｒｆｕｇｅ）中で予め遠心分離してプレート保温の前に粒状複合体を除去した。

下記の結果が観察された。

表−３飾ＣＲＰへの　人を゛　　る４０５ｎｓ＋に　しる　　庁カーｌｈ則り刈　し利器り皿しり正常な血清Ｉｌｌ　　　−０，０１０，０１０，０１０，０４０，０４０，０３正常な血清１２　　−　　０．０２　０．０２　０．０１　０．１０　０．０Ｂ　　０．０７、ａ、者Ｉｌｌ　１．５６０　０．２３０．２００．１４０．３９０．４００．３６患者＃２１．３４０　０．０Ｂ　０．０７０．０７０．３Ｂ　０．３４０．２８これらのデータは、慢性関節リウマチ患者からのＩｇＧが修飾ＣＲＰに結合し、またその血清の少なくとも一つからのＩｇＭが修ｆｉ５ＣＲＰに結合した（表３中の下線を付した値を参照のこと）ことを示す、ＩｇＭは二つの正常な血清から結合せず、少量のＩｇＧのみが二つの正常な血清から結合した。自涜が１：４０の水準に希釈された時に、検出された結合１ｇＧまたはＩｇＭの量は減少した。

これらのデータは、修飾ＣＲＰが単量体１ｇｇより非常に過剰の量でＩＣｓを結合し得ることを示す前の結果と一致する。

実施斑−主修飾ＣＲＰが凝集１ｇＭ及び凝集ＴｇＡ並びにＩＧ　　入　ることの−發精製ビオチニル化ヒトＩｇＧ　（ベクター・ラボラトリイズ（νａｃｔｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、バーリントン、ＣＡ）並びに標準プロトコルによりビオチニル化されたクロマトグラフィー精製した１ｇＭ調製物及びＩｇＡ調製物（ジャクソン・イムノ・リサーチ・ラボラトリイズ（Ｊａｃｋｓｏｎ　Ｔｍｓ＋ｕｎｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　１．ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）アボンバーク、ＮＹ）を使用した。夫々の複合体のアリコートを、６３℃の水浴中の２５分間の保温により熱凝集させた。熱凝集したアリコート及び熱凝集しなかったアリコートの両方を、１４０．０００　ｘ　ｇで１０分間遠心分離して、大きな不溶性の凝集物を除去した。得られた上澄液を９．２８０ｎｓに於ける吸光度により定量化し、直ちに使用した。

ポリスチレンＥＩＡプレートを、０．１Ｍの重炭酸ナトリウム（ｐＨ１４）中の修１ｌｌＩｉｃＲＰ（実施例１に記載されたようにして調製した）の１０９ｇ／ −溶液１００μｍ／ウェルで４℃で一夜塗布したやウェルを吸引し、１％ＢＳＡ、０．０２％アジ化ナトリウム及び０．１％トウィーンを含むＰＢＳ　（洗浄緩衝液）中で徹底的に洗浄し、その後、凝集及び非凝集の、遠心分離し、ビオチニル化した免疫グロブリンの１００μ７！／ウエル希釈液を、修飾ＣＲＰで塗布されたウェル中で３７℃で１時間保温した。ウェルを吸引し、洗浄緩衝液で徹底的に洗浄し、その後、洗浄緩衝液中の連鎖球菌−アビジン−β−ガラクトシダーゼ複合体（ライフ・テクノロジイズ・インコーポレーション（Ｌｊｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ　、　Ｉｎｃ、）、ガイザーズブルグ、ＭＤ）の希釈液１００ μｍ／ウェルをウェルに添加し、３７℃で１時間保温した。ウェルを吸引し、洗浄緩衝液中で徹底的に洗浄し、５ｓ＋Ｍの塩化マグネシウム及び０．７８％のβ −メルカプトエタノールを含む基質緩衝液（ＰＢＳ）中の４■／ｍの酵素基質オルトニトロフェニル−β−ガラクトピラノシド１００μｇ／ウェルを添加した０周囲温度で１０〜１２０分間保温した後、その反応を４０５ｎ調に於ける吸光度の変化により定量化した。結果が、下記のように要約される。

ｌ−一一土修飾ＣＲＰ上で保温された１ｇの　　　　　　　　　　　　　■　　　の３０　　　　　　０．２２０　　０．４６６　　０．０８９　　０．９２９　　０．３９５　　０．９２３１５　　　　　　０．１１７　　０．２５５　　０．０４７　　０．６６９　　０．２１２　　０．６８６７．５　　　　０．０５９　　０．１２９　　　０．０２７　　０．３９７　　０．１００　　０．４０？３．７５　　　０．０２９　　０．０７９　　０．０１４　　　０．２１６　　０．０５３　　０．２２５これらの結果は、修飾ＣＲＰが単離体１．を結合するのよりも３〜１０倍良好に、修飾ＣＲＰがｒｇｃ、ＩｇＭ及びＴｇＡ凝集物の夫々を結合することを示す、三つのｒＨの種類の全てがＩｃｓ中に天然に存在することが示されていたので、これらのデータは修飾ＣＲＰが全てのＩｇの種類のＩＣｓを結合するのに有効であることを示す。

ス１副［修飾ＣＲＰが吸着される表面を親水性リガンドで下塗りることの、゛　　　び゛　■Ｇの　人に　ば　・果ポリスチレンＥＩＡプレートを、種々の濃度のプロタミン（ポリカチオン性リガンド）１００μｌを０．１Ｍの重炭酸ナトリウム（ｐＨ９，４）中で４℃で一夜塗布した。吸引後、１００μｇ／−の修飾ＣＲＰ　（実施例１に記載されたようにして調製した）１００μｌを添加し、０．１　Ｍの重炭酸ナトリウム緩衝液（ｐ）１９．３＞中で３７℃で２時間保温した。吸引後、ウェルを、０．０２％のアジ化ナトリウム０．０２％を含むＰＢＳ中で１％のＢＳＡで３７℃で１時間にわたって裏面塗布した。ウェルを吸引し、洗浄緩衝液中で徹底的に洗浄し、実施例８に記載されたようにして調製した熱凝集ビオチニル化ヒトＩｇＧまたは単量体１５μｇ／−の１００μｌを洗浄緩衝液中で添加し、３７℃で１時間保温した。吸引し徹底的に洗浄した後、連鎖球菌−アビジン− β−ガラクトシダーゼ複合体の吸引された希釈液を添加し、３７℃で１時間保温した。吸引し洗浄した後、オルト−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトビラノンドを添加し、実施例８に記載したようにして反応を正確に記録した。結果が、下記のように要約される。

表　　　　５修飾ＣＲＰへのＩｇＧの結合を単量体１ｇＧ　　Ｏ，２０４０，１４５１，１８１０，７６９０，２８１０，２０５凝集　ＩｇＧ　　Ｏ，４４３０，３２３＞２．０　　１．７２６　０．８３８　０．５７３これらの結果は、修飾ＣＲＰが、ポリカチオン性表面に固定化された時、凝集（複合）ＩｇＧを結合し、加えて、ポリスチレンプレート表面に直接固定化された修飾ＣＲＰよりも１．３倍〜少なくとも４．５倍多いａｇｇ　ＩｇＧを結合するその能力を保持することを示す。グリシン、アスパラギン酸及びグルタミンが固体表面に固定化された場合、及びヘパリンが固体表面に塗布された場合に、四速する結果が得られた。これらのデータは、修飾ＣＲＰがＩＣを結合する有効性が、修飾ＣＲＰを特別に調製された表面に固定化する時に増大されることを示唆する。

修飾ＣＲＰは、Ｂ　Ｓ　Ａ被覆表面に吸着し、凝集１．に対する選択的な結合活性を保持した。しかしながら、修飾ＣＲＰが凝集１ｇＧを結合した有効性は、ポリスチレンプレート表面に直接吸着した修飾ＣＲＰの結合により測定された水準よりも改良されなかった。

去＃単量体ヒ）ｒｇＧまたは凝集ヒトＩｇＧを含むｔ６ゝに　飾ＣＲＰを、　することの六ヒトＩｇＧ（イムノ・セルム・グロブリン（ＩＩｌｍｕｎｅ　　ＳｅｒｕｍＧｌｏｂｕｌｉｎ）　、カッター−ガマスタン（Ｃｕｔｔｅｒ−Ｇａｍａｓｔａｎ））を、１０ｍＭのリン酸塩、０．３Ｍの塩化ナトリウム（ｐＨ７，３）　中で１■／−で調製した。アリコートを水浴中で６３℃で３０分間加熱した。実施例１に記載されたような尿素キレート化（８Ｍ尿素、１０ｍＭのＥＤＴＡ、３７℃で１時間、ＰＢＳ中に透析）により単＃ＣＲＰから調製された修飾ＣＲＰを、未処理のＴｇＧまたは熱凝集１ｇＧを添加した。これらの条件下で修飾ＣＲＰは優先的に沈殿した。それ故、修飾ＣＲＰの懸濁液をつくり、ＩｇＧ＜単量体１ｇＧまたは熱凝集１ｇＧ）アリコートに、最終修飾ＣＲＰ濃度が約１００μｇ／ｄとなるように、添加した。修飾ＣＲＰ−１ｇＧ混合物を３７℃で１時間保温し、その後、試料を１０，０ＯＯｘ　ｇで３０分間遠心分離して沈殿を除去した。

上澄をデカントし、可溶性のまま残るタンパクの濃度を２８０ｎｍに於ける吸光度により計算した。

同じ処理下でＰＢＳ中に可溶性のまま残存した修飾ＣＲＰによる混合物に更に帰因した吸光度の最大値に関して補正した。

これらの条件下で、単量体１ｇＧ（加熱されなかった）を修飾ＣＲＰと混合した場合、ＩｇＧ’４度の減少は観察されなかった。熱凝集１１Ｇを修ｔｉＣＲＰと混合した場合、凝集１ｇＧの３４．９％を溶液から除去した。これらのデータは、修飾ＣＲＰが液相中で凝集（複合＞ＩｇＧの沈殿を促進し得ることを示す。

ｘＪＪＩ上抗−ネオＣＲＰ血清及びアフィニティ精製−ネオーＣＲＰ　　　の量　り抗血清を調製するための通常の方法が使用し得る。しかしながら、ネオーＣＲＰ抗原の形質発現を最適化するために、尿素キレート化ＣＲＰで免疫することが必要である。

ネオＣＲＰに対して単特異性抗血清を、操作を用いてヤギで調節する。尿素キレート化ＣＲＰ（５００μｇ／−で５−）を、多重の皮下注射、片側注射、側を椎（ｐａｒａｓｐｉｎａｌ）注射用の完全フロイントアジェバントの等容量で乳化する。同一濃度の４つのブースター接種を、２適間隔でを椎の対向面で不完全フロイント中で与える。血清を４５％の硫酸アンモニウムで分別し、ヒトアルブミンカラム及び５ＡＰ−７フイニイテルカラムに連続して通した。これは抗血液を部分精製し、更に精製する場合には、尿素キレート化ＣＲＰを臭化シアン活性化バイオゲル（バイオ−ラド・ラボラトリイズ、リッチモンド、ＣＡ）で固定化したアフィニティカラムに通すことにより精製する。特異的抗体が、２ＭのＭｇＣｌ２　（最終ｐＨ４，５）を含むトリス緩衝食塩水（ｐＨ７，４）を用いて溶出され、１％ＢＳＡを含む１（１＋ＭのＰＢＳ　（ｐＨ７，４）中で平衡にされる。

この抗体は、ネオＣＲＰを形質発現する修飾ＣＲＰを含むか、またはそれを含むように補充された免疫グロブリンまたは免疫複合体を結合するのに使用し得る。

大血孤土１多発硬化症をもつ患者からの血漿（第４図）及び重症筋輿力症をもつ患者からの血漿（第５図）を、修飾ＣＲＰ　（実施例１に記載されたようにして調製した）が付着された臭化シアン活性化アガロース樹脂を含むカラムに通した。洗浄後、結合タンパクをＩＭのＣａＣＡ１を含む緩衝食塩水（ｐＨ７，４）で溶出した。

多量のタンパクを結合し、溶出した。含量に関して分析した場合、両方のを者からの結合タンパクは主としてＩｇＧ　（少な（とも９０％）であることがわかった。正常な血漿からのタンパクの大部分がまたＩｇＧとして同定された。

多発硬化症の血漿の同一のアリコートから未置換アガロースに結合されたタンパクの量が第４図に示される。また、凍結融解した正常の血漿から修飾ＣＲＰ−アガロース樹脂に結合されたタンパクの量が比較のために第５図に示される。正常な血漿の凍結融触処理は、血漿試料中の凝集１８Ｇの量を非特異的に増加することが知られている。こうして、この試験試料が“正常°であったとしても、相当な量のタンパク（ＩｇＧ）が修飾ＣＲＰ−アガロースに結合した。それにもかかわらず、結合しカラムから溶出した凍結融解した正常な血漿からのＩｇＧの量は、等容量の患者の血漿から結合されたＩｇＧの量のわずかに２５％〜４０％であった。

尿素キレート化により調製された修飾ＣＲＰに代えて、アガロース樹脂に直接固定化することにより調製された修飾ＣＲＰを用いて、四速する結果が得られた。

天丘±上ユネオＣＲＰ抗原性の形質発現に及ぼす種々の処理の効果をｉ・価　るための　素キレートｐ　のＣＲＰＯ−”止ｌｌ１ｇ／Ｗｌの車＠ＣＲＰの了りコートを、以下のように処理した。

＋１１　Ｅ　Ｄ　Ｔ　Ａの如きキレート剤の存在下で選択的に、ＣＲＰを緩衝食塩水中で２分間加熱した。（２）緩衝食塩水中のＣＲＰをＨＣ７！でＰＩ！２．０に調節し、ＮａＯＨで中和する前に周囲温度で１分間保温した。（３１ＣＲＰをポリスチレンピースまたはその他のラテンクス表面上で保温した。また、ＣＲＰを、分子生物学技術により試験管内で合成した。実施例１１で生産された抗体を通常の免疫測定に使用して、これらの操作の全てがネオＣＲＰの形質発現を生したことを測定した。

先の実施例は、一般にもしくは詳細に記載された反応体を置換すること、及び／または実施例に特別に使用されたものに関して本発明の条件を操作することにより同様に成功して反覆し得る。

以上の説明から、本発明が関係する当業者は、本発明の精神及び範囲から逸脱しないで、本発明の必須の特徴を容易に確かめることができ、それを種々の用途及び条件に適するように種々の変化及び改良をなし得る。

浄書（内容に変更なし）相互血清希釈相互血清希釈相互血清希釈画分番号特許庁長官　　植　松　　　敏　　殿１、特許出願の表示　　ＰＣＴ／ＵＳ　８９１０１２４７２、発明の名称　　　　Ｃ−反応性タンパクの修飾形態による免疫複合体の結合３、特許出願人氏名ホテンパ　ローレンス　エイ外１名浄書（内容に変更なし）請求の範囲１、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を修飾Ｃ−反応性タンパクと接触させることを特徴とする、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体の結合方法。

２、液体から凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を除去する方法であって、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体が修飾Ｃ−反応性タンパクに結合するように、液体を修飾Ｃ−反応性タンパクと接触させ、ついで修飾Ｃ−反応性タンパクに結合された凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を液体から分離することを特徴とする、上記の凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体の除去方法。

３、液体が免疫複合体の除去を必要とする哺乳類から採取された体液である、請求の範囲２項記載の方法。

４、免疫複合体が除去された後に体液が哺乳類に戻される、請求の範囲３項記載の方法。

５、免疫複合体が修飾Ｃ−反応性タンパクに結合するように免疫複合体を修飾Ｃ −反応性タンパクと接触させ、ついで修飾Ｃ−反応性タンパクに結合された免疫複合体を検出または定量化することを特徴とする、免疫複合体の検出または定量化方法。

６、修飾Ｃ−反応性タンパクがラベルされて免疫複合体の検出または定量化を特徴とする請求の範囲５項記載の方法。

７、免疫複合体または修飾Ｃ−反応性タンパクに結合するラベルした成分が添加されて免疫複合体を検出または定量化する、請求の範囲５項記載の方法。

８、修飾Ｃ−反応性タンパクがネオＣＲＰ抗原性を特徴とする請求の範囲１．２．３．４．５．６または７項に記載の方法。

９、修飾Ｃ−反応性タンパクが固体表面に固定化される、請求の範囲１．２．３．４．５または７項に記載の方法。

１０、固体表面が疎水性である、請求の範囲９項記載の方法。

１１、固体表面が親水性である、請求の範囲９項記載の方法。

１２、修飾Ｃ−反応性タンパクがネオＣＲＰ抗原性を特徴とする請求の範囲９項記載の方法。

１３、固体表面へのＣ−反応性タンパクの結合がネオＣＲＰ抗原性の形質発現を生じる、請求の範囲１２項記載の方法。

１４、リンキング剤が固体表面へのＣ−反応性タンパクの結合を増強するのに使用される、請求の範囲９項記載の方法。

１５、修飾Ｃ−反応性タンパクを保持する容器を含むことを特徴とする、免疫複合体を検出または定量化するための試験キット。

１６、修飾Ｃ−反応性タンパクがラベルされて免疫複合体の検出または定量化を特徴とする請求の範囲１５項記載のキット。

１７、免疫複合体または修飾Ｃ−反応性タンパクに結合して免疫複合体を検出または定量化するラベルした成分を保持する容器を更に含む、請求の範囲１５項記載のキット。

１８、液体から凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を除去するための装置であって、固体表面に結合された修飾Ｃ−反応性タンパク、及び液体が固体表面と接触し得るように固体表面を入れるための手段を含むことを特徴とする、上記の凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体の除去装置。

１９、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体をネオＣＲＰに対する抗体と接触させることを特徴とする、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体の結合方法。

２０、ネオＣＲＰに対する抗体がラベルされて免疫複合体の検出または定量化を特徴とする請求の範囲１９項記載の方法。

２１、免疫複合体またはネオＣＲＰに対する抗体に結合するラベルした成分が添加されて免疫複合体を検出または定量化する、請求の範囲１９項記載の方法。

２２、ａ集免疫グロブリンまたは免疫複合体を、ネオＣＲＰを形質発現する修飾Ｃ−反応性タンパクと接触させ、ついで同時に、またはその後に凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体をネオＣＲＰに対する抗体と接触させることを特徴とする、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体の結合方法。

２３、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体が液体中に含まれ、液体がネオＣＲＰに対する抗体に結合された凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体から分離され、それにより液体から凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体の除去を特徴とする請求の範囲１９項または２２項記載の方法。

２４、ネオＣＲＰに対する抗体を保持する容器を含むことを特徴とする、免疫複合体を検出または定量化するための試験キット。

２５、ネオＣＲＰ、を形質発現する修飾Ｃ−反応性タンパクを保持する容器を更に含む、請求の範囲２４項記載のキット。

２６、ネオＣＲＰに対する抗体または免疫複合体に結合して免疫複合体を検出または定量化するラベルした成分を更に含む、請求の範囲２４項記載のキット。

２７、液体から凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を除去するための装置であって、固体表面に結合されたネオＣＲＰに対する抗体、及び液体が固体表面と接触し得るように固体表面を入れるための手段を含むことを特徴とする、上記の凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体の除去装置。

２８、免疫複合体の量の減少を必要とする哺乳類中の免疫複合体の量を減少する方法であって、哺乳類中の免疫複合体の量を減少するのに有効な量の修飾Ｃ−反応性タンパクを哺乳類に投与することを特徴とする、上記の免疫複合体の量の減少方法。

２９、免疫グロブリンを修飾ＣＲＰと接触させることを特徴とする、免疫グロブリンの結合方法。

３０、免疫グロブリンをネオＣＲＰに対する抗体と接触させることを特徴とする、免疫グロブリンの結合方法。

手続補正書（方式）平成　　年　　月　　日特許庁長官　深　沢　　　亘　殿３、補正をする者事件との関係　　出願人氏名ホテンパ　ローレンス　エイ５、補正命令の日付　　平成３年７月９日７、補正の内容　　　　別紙のとおり手続補正書（方式）％式％１、事件の表示　　　平成１年特許願第５０４７１６号（ＰＣＴ／ＩｊＳ　８９１０１２４７）３、補正をする者事件との関係　　出願人氏名　　　ポテンパ　ローレンス　エイ５、補正命令の日付　　平成３年７月９日国際調査報告１ＩＩｌｌｌ＋１１＋＋１〜−＾−〇１□１畠訃・１匈　　　　ＰｅＴ／υｇｌｌ’Ｉ１０上２４７

Claims

【特許請求の範囲】

１．凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を修飾Ｃ反応性タンパクと接触させることを特徴とする、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体の結合方法。
２．液体から凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を除去する方法であって、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体が修飾Ｃ−反応性タンパクに結合するように、液体を修飾Ｃ−反応性タンパクと接触させ、ついで修飾Ｃ−反応性タンパクに結合された凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を液体から分離することを特徴とする、上記の凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体の除去方法。
３．液体が免疫複合体の除去を必要とする哺乳類から採取された体液である、請求の範囲２項記載の方法。
４．免疫複合体が除去された後に体液が哺乳類に戻される、請求の範囲３項記載の方法。
５．免疫複合体が修飾Ｃ−反応性タンパクに結合するように免疫複合体を修飾Ｃ −反応性タンパクと接触させ、ついで修飾Ｃ−反応性タンパクに結合された免疫複合体を検出または定量化することを特徴とする、免疫複合体の検出または定量化方法。
６．修飾Ｃ−反応性タンパクがラベルされて免疫複合体の検出または定量化を可能にする、請求の範囲５項記載の方法。
７．免疫複合体または修飾Ｃ−反応性タンパクに結合するラベルした成分が添加されて免疫複合体を検出または定量化する、請求の範囲５項記載の方法。
８．修飾Ｃ−反応性タンパクがネオＣＲＰ抗原性を形質発現する、請求の範囲１〜７項のいずれか一項記載の方法。
９．修飾Ｃ−反応性タンパクが固体表面に固定化される、請求の範囲１〜５項及び７項のいずれか一項記載の方法。
１０．固体表面が疎水性である、請求の範囲９項記載の方法。
１１．固体表面が親水性である、請求の範囲９項記載の方法。
１２．修飾Ｃ−反応性タンパクがネオＣＲＰ抗原性を形質発現する、請求の範囲９項記載の方法。
１３．固体表面へのＣ−反応性タンパクの結合がネオＣＲＰ抗原性の形質発現を生じる、請求の範囲１２項記載の方法。
１４．リンキング剤が固体表面へのＣ−反応性タンパクの結合を増強するのに使用される、請求の範囲９項記載の方法。
１５．修飾Ｃ−反応性タンパクを保持する容器を含むことを特徴とする、免疫複合体を検出または定量化するための試験キット。
１６．修飾Ｃ−反応性タンパクがラベルされて免疫複合体の検出または定量化を可能にする、請求の範囲１５項記載のキット。
１７．免疫複合体または修飾Ｃ−反応性タンパクに結合して免疫複合体を検出または定量化するラベルした成分を保持する容器を更に含む、請求の範囲１５項記載のキット。
１８．液体から凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を除去するための装置であって、固体表面に結合された修飾Ｃ−反応性タンパク、及び液体が固体表面と接触し得るように固体表面を入れるための手段を含むことを特徴とする、上記の凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体の除去装置。
１９．凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体をネオＣＲＰに対する抗体と接触させることを特徴とする、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体の結合方法。
２０．ネオＣＲＰに対する抗体がラベルされて免疫複合体の検出または定量化を可能にする、請求の範囲１９項記載の方法。
２１．免疫複合体またはネオＣＲＰに対する抗体に結合するラベルした成分か添加されて免疫複合体を検出または定量化する、請求の範囲１９項記載の方法。
２２．凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を、ネオＣＲＰを形質発現する修飾Ｃ−反応性タンパクと接触させ、ついで同時に、またはその後に凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体をネオＣＲＰに対する抗体と接触させることを特徴とする、凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体の結合方法。
２３．凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体が液体中に含まれ、液体がネオＣＲＰに対する抗体に結合された凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体から分離され、それにより液体から凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体の除去を可能にする、請求の範囲１９項または２２項記載の方法。
２４．ネオＣＲＰに対する抗体を保持する容器を含むことを特徴とする、免疫複合体を検出または定量化するための試験キット。
２５．ネオＣＲＰを形質発現する修飾Ｃ−反応性タンパクを保持する容器を更に含む、請求の範囲２４項記載のキット。
２６．ネオＣＲＰに対する抗体または免疫複合体に結合して免疫複合体を検出または定量化するラベルした成分を更に含む、請求の範囲２４項記載のキット。
２７．液体から凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体を除去するための装置であって、固体表面に結合されたネオＣＲＰに対する抗体、及び液体が固体表面と接触し得るように固体表面を入れるための手段を含むことを特徴とする、上記の凝集免疫グロブリンまたは免疫複合体の除去装置。
２８．免疫複合体の量の減少を必要とする哺乳類中の免疫複合体の量を減少する方法であって、哺乳類中の免疫複合体の量を減少するのに有効な量の修飾Ｃ一反応性タンパクを哺乳類に投与することを特徴とする、上記の免疫複合体の量の減少方法。
２９．免疫グロブリンを修飾ＣＲＰと接触させることを特徴とする、免疫グロブリンの結合方法。
３０．免疫グロブリンをネオＣＲＰに対する抗体と接触させることを特徴とする、免疫グロブリンの結合方法。
３１．下記の処理：（ａ）Ｃ−反応性タンパクの溶液のｐＨを約９以上に調節すること、（ｂ）Ｃ− 反応性タンパクの溶液のｐＨを約３以下に調節すること、（ｃ）キレート剤を添加して、またはキレート剤を添加しないでＣ−反応性タンパクの溶液を約５０℃ 以上に加熱すること、または（ｄ）Ｃ−反応性タンパクを固体表面に吸着させることの一つを含むことを特徴とする、修飾Ｃ−反応性タンパクの製造方法。
３２．ネオＣＲＰ抗原が修飾工程の結果として形質発現される、請求の範囲３０項記載の方法。