JPH03504007A - 合成的ｇｔｆクロム物質及びその方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 合成的ＧＴＦクロム物質及びその方法 技術分野 本発明は一般にグルコース代謝に関し、より詳細にはグルコース耐性因子［ｇｌ ｕｃｏｓｅ　ｌｏｌ！＋ｘｎｃｅ　Ｉａｃｌｏｒ（ＧＴＦ）］活性を有する新規 なりロム含有物質に関する。

発明の背景 生理学的機構について完全には解明されていないが、精製された、クロムを含有 しない食事を数週間与えられた動物は、グルコース耐性、即ち、血中グルコース を正常濃度に維持する能力が非常に欠損していることを示す。

ブルワー酵母（ｂ＋ｅｖｅｒ’ｓ　７ｅａｔｔ）を含む食事によりこの欠損がな くなり、血中グルコース濃度が正常にもどることが見出だされた。

食物中に有機塩としてクロムが存在すると、特にクロムを含有するブルワー酵母 の抽出物が添加されるときに、ヒトにおいてグルコース酸化を増進することも又 、見出だされた。加えて、そのような物質を糖尿病患者に経口投与するとすい臓 に影響を及ぼし、正常量のインシュリンを産生ずることも見出だされた。

食物中のクロム含量とグルコース酸化活性における効果との関係は、例えば、ト エファ−（Ｔｏｅｐｌｃｒ）　　らによる、［クロミウム・フッズ・イン・リレ ーション・ツー・バイオロジカル・アクティビティ（Ｃｈｒｏｍｉｕｍ　Ｆｏｏ ｄｓ　１ｎＲｅｌａｔｉｏｎ　　ｊｏｅ　　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　　Ａｃｊｉ ｖＮｙ）　　Ｊ　　［、Ｊ、　　Ａｇｒ。

Ｆｏｏｄ、　　Ｃｈｅｍ、　　２１巻、６９頁（１９７３年）コに論じられてい る。

これらの及び他の知見により、微量無機物研究分野での初期の研究者は自然産生 グルコース耐性因子（ＧＴＦ）源としてのブルワー酵母に興味を示すようになっ た。

ＧＴＦ研究の変遷の論文がマツカーシーらによる「ハイクロミウム・イースト・ アンド・グルコース・トレランス・ファクター（Ｈｉｇｈ−Ｃｈｒｏｍｉｕｍ　 Ｙｅｘｓｔ　ａｎｄ　ＧｌｕｃｏｓｅＴｏｌｅｒａｎｃｅ　Ｆａｃｔｏｒ）　　 ［＋、　？ｔｙｅｎｌｉｏｎ　Ｍｔｄｉｃｉ＋！２巻（１９８３年）コに見るこ とができる。多くの研究がブルワー酵母のクロム含量を商業上利用できる量まで 濃縮することに向けられてきた（例えば米国特許第４．３４３．９０５号を参照 ）。

グルコース耐性因子は、ニコチン酸（ナイアシン）２モルとアミノ酸を少なくと も１モルを有する３価のクロムの錯体と考えられている。例えば、「プレゼンッ ・ルッジ・オブ・ザ・ロール・オブ・クロミウム（Ｐ　ｒ　ｅ　ｓ　ｔ　ｎ　ｒ Ｋｎｏｗｌｅ＋Ｉｇｅ　ｏｆｔｈｅ　Ｒｏｌｅ　ｏｌ　Ｃｈ＋ｏｍｉｕ＋ｎ）Ｊ 　　［Ｆｅｄ、　Ｐｒｏｃ。

３３巻１１号２２７５−２２８０頁（１９７４年）］中でメルフ（ＭｅａｚＪら により示唆されているように、天然ＧＴＦの構造はテトラアクオシニコチン酸ク ロム錯体即ち（式中の水分子はアミノ酸配位子により置換される）である構造か ら誘導されることが可能である。

ＧＴＦの正確な構造は現在知られていないが１つの取り得る構造は下記の通りで ある。

その代わりとして、ＷＯ８７１０３２００として公開された最近の特許出願では 、酵母がら、分子量１７４及び下記：（式中、Ｒ基は水素及び２つの非水素であ り、同一でないＲ基は−ＯＣＨ）又は−Ｎｌ２である）の構造式を有するキノリ ン誘導体である、ＧＴＦ活性を有する化合物の単離及び精製が報告されている。

この報告は酵母ＧＴＦ活性におけるクロム及びクロム−ニコチン酸−アミノ酸錯 体の役目に疑問を投げかけている他の研究成果への言及を包含している。

ＧＴＦ活性を示す微量金属錯体を合成する試みも行われてきた。例えば、米国特 許第４．２４２．２５７号には、１：２の割合でコバルトをニコチン酸で複合化 し、次にその錯体の酸化及びグルタチオンを用いての還元により得られる、ＧＴ Ｆ活性を示す物質が開示されている。同様に、アルコール中で塩化クロムをニコ チン酸及び数種のアミノ酸とともに約１６乃至２４時間還流することによる、Ｇ ＴＦ活性を示すクロム−ニコチン酸錯体の合成が開示されている。例えば、トー ファ＝（Ｔｏｅｐｌｅｒｌらによる「プリバレージョン・オブ・タロミラムコン ティング・マタリアル・オブ・グルコース・ファクタｍ−アクティビティ・フロ ム・プルワース・イースト・エクストラクツ・アンド会バイーシンセシス（Ｐ＋ ｅｐ＊ｒｔ口ｏｎ　ｏｆ　Ｃｈｒｏｍｉｎｍ−Ｃｏｎｊｓｉｎｉｎｇ　ＭＮｓ＋ ｉａｌ　ｏｌ　Ｇ１１ｌｃｏｓｅ　Ｆｉｃｌｏｒ　Ａｃｔｉｗｉｆ７ｆｒｏｍ　 　Ｂｒｅｗｅｒ’ｓ　　Ｙｅａｓｔ　　ＥＮｒｍｃｔｓ　　ａｎｄ　　ｂ７　５ ７ｎｔｈｅｓｉｓ　　）Ｊ［Ｊ、　Ａｇ＋、　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍ、　　２５巻 １号、＋６２−１６６頁（、１９７７年）］を参照。

水、アセトン等を包含する共通の有機溶媒に溶解されるピリジン−３−カルボン 酸にニコチン酸）との緑色クロム錯体の報告がある。カテージ（ＣｈａＮｅ＋ｊ ｅｅ）　　・Ｂによる［ドナー・プロパティース・オブ・ピリジン・アンド・キ ノリン・カルボキシリック・アシッズ：ピリジン・アンド・キノリン拳カルボキ シレート・コンプレックス・オブ・クロミウム（ｍ　）　　（Ｄｏｎｏｒ　Ｐｒ ｏｐｅ＋１ｉｅｓ　ｏｆＰｙｒｉｄｉｎｅ　ａｎｄ　Ｑｕｉｎｏｌｉｎｅ　Ｃａ ＋ｂｏｘ７１ｉｃ　Ａｃ１ｄｓ：　Ｐｙｒｉｄｉｎｅａｎｄ　Ｑｕｉｎｏｌｉｎ ｅ　Ｃａｒｂｏｘ７１ａｊｏ　ＣｏｍｐｐＩｔｘｅｓ　ｏｆ　Ｃｈｒｏｍｉｕｍ （Ｉ［［）　Ｊ　［１，Ｉｎｄｉａｎ　Ｃｈｅｍ、　　Ｓｏｃ、　　５３巻、＋ ２１２−１２１３頁（１９７６年）コ。その報告は前記錯体の使用を何ら開示し ていない。

ブルワー酵母からクロムＧＴＦを抽出し及び／又は濃縮する従来技術は適当に成 功しているが、必要な工程は通常かなり複雑である。このことは、その物質が、 クロムが欠乏した食事のクロム補給のために又は他にクロム補給が必要な人のた めに用いられるときにその物質を効果にする。はとんど合成的に製造したＧＴＦ 物質はわずかな活性しかなく、比較的収率が低く及び／又は非常に不安定である ので、ＧＴＦ物質を合成的に製造することによりこの問題は解決されていない。

従って、本発明の１つの目的は、長期間にわたり安定な合成的ＧＴＦ物質を製造 することである。

本発明の他の目的は、比較的緩和な条件下で容易に高収率で製造される合成的Ｇ ＴＦクロム錯体を製造することである。

本発明の他の目的は、ニコチン酸の吸収部位で活性的に移動される非極性クロム ＧＴＦ物質を製造することである。

さらに本発明の他の目的は、個々の代謝系により容易に好適な異性体に変化され 得るか又はそのような変化の必要なしにそのもの事態に生物活性を示す。クロム ＧＴＦ物質を供給することである。

他の目的は、酵母を含有しないそして、その合成において酵母を使用することを 必要としないクロムＧＴＦ物質を製造することである。

発明の開示 上記のそして他の目的及び利点は、合成的クロム−ニコチネートＧＴＦ物質及び その製造方法を開示することにより本発明に従って達成される。

本発明の１つの面に従って、クロム−ニコチネートＧＴＦ物質はニコチン酸のア ルカリ金属塩及び３価のクロム塩を出発物質として用いて比較的緩和な条件下で 合成され、高収率でクロム−ニコチネートＧＴＦ物質が製造される。

本発明の他の面に従って、天然のグルコース耐性因子及びその製造方法及びその 使用方法が供給される。

図面の簡単な説明 第１図は、１０■／　ｍｌの塩化クロム及び本発明の錯体のＵＶ−Ｖ、３スペク トルをグラフで表したものである。

本発明の実施態様 本発明の１つの面に従って、クロム−ニコチン酸塩ＧＴＦ物質がニコチン酸のア ルカリ金属塩及び３価のクロム塩を出発物質として用いることによりクロム−ニ コチン酸塩ＧＴＦ物質を合成する方法が供給される。

本発明のクロム−ニコチン酸塩ＧＴＦ物質の製造において、アルカリ金属水酸化 物のような、分離可能な形態のアルカリ金属及びニコチン酸を最初に反応させニ コチン酸のアルカリ金属塩を形成させる。その後、ニコチン酸塩を３価のクロム 塩と反応させて所望のＧＴＦ生成物を形成させる。その代わりとして、ニコチン 酸のアルカリ金属塩を他の供給源から都合よく得、クロム塩と反応して所望のＧ ＴＦ生成物を生成する。

その反応は通常、水性溶媒又はアルコール溶媒のような極性溶媒系で行われ、例 えば、およそ約５℃乃至約６０℃、好ましくは、約１０℃乃至約４０℃の緩和な 反応温度を必要とするだけである。前記の温度範囲は厳密な要件ではなく、前記 範囲よりいくらか高いか又は低い温度も用いられ得るが、速度又は収率において 比例した利益がなく反応体を冷却及び／又は加熱する付加的コストは、前記温度 範囲外の温度を用いることを望ましくないものとする。

ニコチン酸塩を製造するのに用いる場合、前記の分離可能なアルカリ金属は水酸 化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム又は水酸化マグネシウムのよう なアルカリ金属水酸化物を包含する、アルカリ金属を含む多くの化合物のいずれ かから成る。その代わりとして、例えばナトリウム、カリウム、リチウム又はマ グネシウムを含むアルカリ金属炭酸塩又は重炭酸塩もアルカリ金属水酸化物の代 わりとして用いられる。

しかし、経済的な理由及び取扱いやすさの理由で、分離可能なアルカリ金属とし て水酸化ナトリウムを用いるのが現在では好ましい。水酸化ナトリウムは食品級 又は試薬級ペレット［Ｊ、　Ｔ、ベーカー社（Ｊ、　Ｔ、　Ｂａｋｅｒ　Ｃｏ、 ）の形態で又は溶液として用いられる。しかし、食品添加物用の錯体の製造を容 易にするためには水酸化ナトリウムの食品級ペレットを用いるのが好ましい。

ニコチン酸の典型的な塩の形成において、分離可能なアルカリ金属をニコチン酸 を含有する溶液に添加され得て、困難なく反応させる。そのような溶液は、一般 に、しかし必ずではなく、本発明の方法用に選択されたのと同じ溶媒中で製造さ れる。

現在、本発明において用いられるのに好ましい３価のクロム塩は、例えば塩化ク ロム、硫酸クロム、酢酸クロム等のような、容易に溶解でき薬学的に容認できる 塩で所望のクロムＧＴＦ物質の生成を妨げず、毒性の副生物を生成しないいずれ の塩をも包含する。現在の好ましい態様においては、ＣｒＣｌ３　・６Ｈ２０（ 塩化クロム６水和物）又はＣ＋　（ＣＩｌ　３　Ｃ００）　３　・６Ｈ２０（酢 酸クロム６水和物）がクロム塩として用いられる。

本発明の方法において有用であることが見出だされた溶媒は、水及びアルコール 類、通常は１乃至ＩＣの炭素原子、より通常には１乃至６の炭素原子を有する飽 和又は不飽和のアルキル鎖を有するアルコールのような極性溶媒を包含する。そ のようなアルコールは、一般式：％式％ （式中、Ｒ１は、直鎖又は分枝形のＣＨ３（Ｃ）ｌ　２　）ｎ−の形態の有機ア ルキル基を表し、ｎは０乃至９の整数である）を有する。特に有用な溶媒は、水 及びメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル及びイソブチルアルコー ル及びそれらの混合物を包含するものであることが見出だされている。

しかし、下記の実験計画案中の特定のパラメーターが公知の原則に従ってわずか に変更されることを必要とし得るが、多くの他の極性溶媒を本発明の実施におい て用い得ることが容易に理解されるであろう。例えば塩素化炭化水素類、エーテ ル類、ケトン類、炭化水素類及びアルコール類のような、例えば多くの極性有機 溶媒を単独で又は水又はアルコール類の存在下で、本願発明の達成における溶媒 として用い得る。

クロム塩とニコチン酸のアルカリ金属塩、例えばニコチン酸ナトリウムとの反応 は非常に速く起こり、明らかな、色の変化及び続いて起こるクロムＧＴＦ物質の 沈殿によって証明される。例えば、水性反応媒体が用いられるとき、塩化クロム 塩により反応媒体中に与えた緑色は、おおよそ秒の単位で、通常６０乃至１２０ 秒未満で消え、溶液から、濃い紫色の物質が沈殿する。この沈殿物質は本発明の クロム−ニコチネートＧＴＦ物質であり、トリニコチン酸クロムを多量含有し、 クロム塩反応体に含まれるアニオンによって、多分いくらかのクロムシニコチネ ート・モノクロライド、モノアセテート、モノサルフェート等を含有すると考え られている。

本発明は、ニコチン酸ナトリウムのようなニコチン酸のアルカリ金属塩と塩化ク ロムのような３価のクロム塩との反応により製造された安定な合成のクロム−ニ コチンナートＧＴＦ物質を企図するものである。粗りロムーニコチネー）ＧＴＦ 物質は、トリニコチン酸のクロム錯体（トリニコチン酸クロム）の少なくとも実 質的部分を含有し、反応順序は下記の式で表される：トリニコチン酸クロムの正 確な構造式は知られていないし、その構造式は本発明にとって臨界的なものでは ない。しかし、トリニコチネート錯体の構造式は一般に下記のような式であると 考えられる。

式（ＩＶ）で表された反応は完了せず、いくらがのジニコチネート錯体が形成さ れ、トリニコチン酸クロム及びジニコチン酸クロムモノアニオン（例えば塩化物 、硫酸塩又は酢酸塩等）の両者を含有する生成物を生じるようである。粗反応生 成物中にいくらがのモノニコチン酸クロムシアニオンが存在すること又はペンタ ニコチン酸ジクロムのようなポリ核種が形成されることも可能である。

しかし、要求されるものではないが、トリニコチン酸クロムが反応主生成物であ り、本発明のクロム〜ニコチネ−トＧＴＦ物質中のＧＴＦ活性を示すと考えられ る。

その形成の後に、本発明の生成物を例えば約１０’Ｃ乃至約１５０℃で、好まし くは約２［１℃乃至約１００　℃で、１００％ｃ　　　未満の相対湿度で乾燥す る。加えて、その生成の後に、生成物が溶液から沈殿する間に生成物中に取り込 まれる溶解性の未反応物質を除去するために任意にその生成物を洗浄する。望ま しい洗浄液は水及び、クロム−ニコチネートＧＴＦ物質が実質的に溶解しない他 の溶媒である。

本発明の生成物は完全な哺乳動物においてグルコース耐性因子活性を有すること を示す。さらに、本発明の生成物は生体中で、グルコース酸化のレベルの増加） ような他の効果を示す。上記の生理学的効果を有することが示されているそのよ うな生成物は、クロム欠乏患者におけるグルコース耐性の増加及び糖尿病におけ るインシュリンの効果の増強のような多くの治療上の適用に用途を見出だすこと ができる。従って、本発明の生成物及びそれらを含有する組成物には治療薬とし ての広い用途が見本発明の化合物を有効量含有する組成物も又供給する。

そのような組成物は、レミングトンス・ファーマシュウ薬理学的技術分野で公知 の、生理学的に容認できる液体、ゲル又は固体の希釈剤、補助剤及び賦形剤と共 に供給され得る。

これらの生成物及び組成物は、例えば家畜のような獣医学的使用のために哺乳動 物に投与され、そして他の治療薬と同様にヒトに治療的使用のために投与される 。一般に、治療的効果を示すのに必要な用量は、クロムーニコチネー）ＧＴＦ物 質の血中糖低減活性及び患者の特殊な要求に依存して、投与体対象体重１ｋｇ当 たり約０．０１乃至１０Ｈμｇ１より一般的には、０．１乃至１０００μｇであ る。

その代わりに、長時間にわたる、通常２４時間を超えて、所望の治療効果が得ら れるまで一定の点滴により前記範囲内の量を投与する。

一般的には、前記組成物は経口用に、個別に投与される液体溶液又は懸濁液とし て、又は食品補充物質として調製する。経口の配合は例えば医薬縁のマンニトー ル、ラクトース、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セ ルロース、炭酸マグネシウム等のような通常用いられる賦形剤を含有する。これ らの組成物は、活性成分をＩＬ９５％、好ましくは２５−７０％含有し、溶液、 懸濁液、錠剤、カプセル、徐放配合剤又は粉末の形態をとる。

投与の他の形態に適する他の配合は、座薬、鼻腔内エアロゾルを包含し、ある場 合には、その組成物を注射、例えば皮下又は静脈注射により非経口的に投与され る。

注射可能なように、活性成分は、生理学的に許容され活性成分と配合可能な希釈 剤又は賦形剤としばしば混合される。適する希釈剤及び賦形剤は、水、生理食塩 水、Ｄ−クルコース、グリセロール等及びそれらの組み合わせである。又、もし 所望なら、組成物は、少量の湿潤剤又は乳化剤、安定剤又はＤＨ緩衝剤等のよう な補助剤を含有し得る。座薬用には従来の結合剤及び賦形剤、例えば、ポリアル キレングリコール又はグリセリドを含有し得る。

そのような座薬は、活性成分を０．５−１０％、好ましくはｌ−２％の範囲で含 有する混合物から形成し得る。

ＧＴＦ活性を示す本発明の生成物に加えて、本発明の生成物を、例えばその有用 な化合物をさらに精製する中間体としても用いることができる。

実施例 下記の実施例は本発明のある好ましい態様及び面を与えるものであり、本発明の 範囲を限定するものとして解釈するものではない。

下記の実施例において、他に示していなければ、すべての重量はダラム（ｇ）、 ミリグラム（■）又は（マイクログラム）μｇ１すべでの容積はリットル（Ｉり 又はミリリットル（ｍＩり、すべての波長はミリミクロン本発明のクロム−ニコ チネートＧＴＦ物質の合成を例示するために、仮定のトリニコチネート錯体を下 記のように製造した： ４．５４０ｇの蒸留水中３，６７３　ｇのニコチン酸（ナイアシン）米国局方界 の溶液を攪拌して混合した。この混合液に食品級の水酸化ナトリウムベレット［ Ｊ、Ｔ、ベー力コチン酸のアルカリ金属塩を含有する溶液を生成した。

別の容器に試薬級の塩化クロム六水和物（ＣｒＣ１，・６Ｈ２０）を２，７２４ ｇを蒸留水１，５８９ｇに添加し、完全に溶解するまで攪拌し、３価のクロム塩 を含有する溶液を生成させた。

緑色の塩化クロム溶液をニコチン酸塩溶液に、速く攪拌しながらゆっくりと添加 した。その混合物は、緑色のクロム溶液から沈殿した濃い紫色の錯体を生成した 。その沈殿物を濾過により回収し、トレイにおいて乾燥した。

緑色から紫色への非常に激しい色の変化及びその後の沈殿はクロムイオンから前 記錯体への化学的変化を表すものであった。クロムの原子軌道がいっばいになっ たのでこの色の変化が起こり、従って、吸収される光の波長が変化した。沈殿し た錯体は荷電しないのでマイナスに荷電したニコチネートイオンがＣｒ“イオン と錯体化したことを示している。

さらに下記の分析により、クロム−ニコチネートＧＴＦ物質中の錯体の存在が表 された： 化学的分析 １、水分＝６％−９％ ２、ナイアシン含量＝５０％−６６％ ３、クロム含量＝８％−１０％ ４、ナトリウム含量＝８％−１１％ ５、塩化物含量＝１２％−１６％ 元素分析　　　　′ １、　炭素　４３．２１％ ２、　水素　２．７７％ ３、　クロム　１２．９％ ４、　窒素　８．３３％ ５、　塩化物　３．３１％ ポーラログラフイー分析 Ｅ−１／２において明らかな変、化が見られた。しかし、おおよそ同じボルト数 でナイアシンが減少したため良好な定性結果は可能ではなかった。

紫外線−Ｖ、３スペクトル 図面に示されるように、６３７ｍμ及び４６１ｍμの可視範囲で塩化クロムの２ つの吸収極大が観察された。錯体が生成されたとき、吸収極大は５７４ｍμ及び ４１４ｍμにシフトした。

赤外分光分析 実施例１により製造されたクロム−ニコチネートＧＴＦ物質の試料を分析級の水 で数回洗浄し、１２０　℃で３時間乾燥した。クロム酸塩とニコチン酸の試料も 又、赤外分光分析により分析した。その試料を３％の臭化カリウム溶液中に懸濁 し、塩化ナトリウムのプリズム間においた。

吸収対照として、ＣｒＣ１３・５１１２０　！５８■をエタノールで１００ｍＡ ’に希釈し、明るい黄緑色の溶液を生じさせることにより塩化クロム対照を製造 した。その可視光吸収極大は６２８ｍμ及び４５５ｍμであった。

赤外分析の結果は、ｌ６３０逆波数の範囲の単一の非対称ピークを示した。

実施例　２ 本発明の生成物を生成させるのに、代わりの出発物質を用いることを示すために ニコチン酸２９０■及び炭酸ナトリウム２４９■を水５０ｍ１中に溶解させ、０ ．５ＭのＮａＯＨでｐＨを７．０ニ調整した。その後、ＣｒＣｌ１　・６Ｈ２０ を１５８■をエタノール５０ｍ　ｌ中に溶解し、ニコチン酸塩混合液を塩化クロ ム溶液中で攪拌した。攪拌を続けることにより紫色の錯体が生成した。

パーキン・エルマー２００紫外−可視分光光度計で測定し、吸収極大が５６８ｍ μ及び４２４ｍμであることが分かった。

紫色の錯体沈殿は乾燥するとエタノール又は水に実質的に不溶な結晶性粉末にな った。

実施例　３ 本発明の生成物の製造において代わりの極性溶媒の使用を示すために、一般的に 、蒸留水を使用した実施例１に記載した方法に従って、溶媒としてエタノール、 無水アルコール及びメタノールを用いてクロムーニコチネーｈＧＴＦ物質をを下 記のように製造した・それぞれの場合に、均質の混合液が生成するまで４５．４ ０　ｇの、適した溶媒に３６．７３　ｇのニコチン酸（ナイアシン）米国局方品 を添加した。次にニコチン酸のナトリウム塩に１７．４６ｍ１の水酸化ナトリウ ム（７０％溶液）（重量で１２．２４　ｇ　Ｎａ０Ｈ）を添加した。

別の容器に試薬級の三塩化クロム六水和物（Ｃ＋ＣＩｓ　・６）１２０　）［Ｊ 　、　　Ｔ　、ベーカー・ケミカル社（ＢａｋｅｒＣｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、） コ２７．２４　ｇを、適した溶媒１５．９　ｇに混合し、Ｃ＋ＣＩ３が完全に溶 解するまで攪拌した。その後、塩化クロム溶液をニコチン酸ナトリウム溶液にゆ っくりと添加した。

その後、その混合物を沈殿物の生成について検査した。

試料を採り、１００℃で１晩乾燥し、蒸留水で洗浄し、１００℃で２時間乾燥し た。

このＧＴＦ物質を色について検査した。エタノール、無水アルコール、メタノー ル及び水中で、本発明に従って生成した錯体の試料はそれぞれ紫−青乃至紫一灰 色の沈殿物を生成し、乾燥すると同じ色の粉末を生じた。これらの錯体の溶解性 プロフィールを第１表に表す。

実施例　４ 本発明に従う生成物の製造においてニコチン酸の重要性を明らかにするために、 ４７ｍ１の無水アルコールに３６．７３　ｇのニコチン酸（ナイアシン）米国局 方品を溶解させた。別の容器に試薬級の三塩化クロム六水和物（ＣｒＣＩ、　− ６８２０）２７．２４　ｇを無水アルコール１６ｇ中に混合した。塩化クロム溶 液をナイアシン溶液にゆっくりと混合し室温で２時間攪拌した。この溶液は沈殿 物を生じなかった。

この実施例の生成物は試験条件下で沈殿しない緑色を帯びた溶液を形成した。そ の乾燥し、洗浄した試料は緑色を帯びた粉末を形成した。

実施例１乃至４で生成した錯体の試料は水、メタノール、エタノール及び無水ア ルコール中の溶解度について検査した。溶解試験の結果を第１表に表す。

巽 真のＧＴＦ物質は下記の特徴を有するべきであるといわれてきた。

１、グルコース耐性を改良しなければならない。

２、胎盤に運搬されなければならない、３、脂肪組織の代謝が増加しなければな らない（脂肪及びグルコースの燃焼の高割合）、及び４、塩化クロムと異なって 代謝され、この成分に対する異なる生理学的プールの重要部分にならなければな らない。

従って、上記に概説されたＧＴＦ物質としての用途をを明らかにするために実施 例１で生成したニコチン酸クロムの試料反応生成物を試験した。

実施例　５ 合成的なラット飼料を下記の配合を有する２、２ｇの錠剤として製造した。

ビタミン　Ａ　　　　　　　　　　　　　　３０　　　１ＵＤ３　　　　　　　 　　　　　　　　　　　０．４　　１Ｕビタミン　Ｅ　　　　　　　　　　　　 　　１．０　　１υビタミン　ＣＯｌｌ　■ 葉酸　　　　　　　　　　　　　　　　０．００４■Ｂ１．　　　　　　　　　 　　　　　　　　　０．０１２■８２　　　　　　　　　　　　　　　　　　０ 、００６■８３　　　　　　　　　　　　　　　　　　０、０２　　■８６　　 　　　　　　　　　　　　　　　　０．００５■８１２　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　０．０００００６■ビオチン　　　　　　　　　　　　 　　０．０００３　　ｍｇパントテン酸　　　　　　　　　　　０．Ｏｆ　　　 ｍｇコリン　　　　　　　　　　　　　０．０３　　　■カルシウム　　　　　 　　　　　　　１．０　　　■ヨウ素　　　　　　　　　　　　　　０．０００ １　　■鉄　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．００８　 　　■マグネシウム　　　　　　　　　　　０．４　　　■銅　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　０６０００５　■亜鉛　　　　　　　　　　 　　　　　０１０００７　　■マンガン　　　　　　　　　　　　　０．０００ ６　　■モリブデン　　　　　　　　　　　　０．００００２５■カリウム　　 　　　　　　　　　　　５　　　１Ｔ１ｇナトリウム　　　　　　　　　　　　 ６　　　■セレン　　　　　　　　　　　　　　０．００００５　ｒｑパバ　　 　　　　　　　　　　　　　０．００５　　■Ｖ　　　　　　　　　　　　　　 　　　Ｏ，００００２５■エムテツクス（ＥＭＤＥｘ）■１１　　　　９Ｈｌ１ １ｇカゼイン　　　　　　　　　　　　９００　　　　■ヒマワリ油　　　　　 　　　　　　２００　　　　ｍｇシロイド（ＳＹＬＯＩＤ）■２）２０　　　　 ■ステアリン酸　　　　　　　　　　２０　　　　■ツルカフ順ツク（ＳＯＬＫ Ａ−ＦＬＯＣ）■”　２００　　　　■１）ニドワード・メンデル社［（Ｅｄｖ ａｒｄ　Ｍｅｎｄｅｌｌ　Ｃｏ、。

Ｉｎｃ、）、ニューヨーク州カーメル］により販売、デクストレーテス（Ｄｅｔ ＋＋ｇｌｅ＋　）としても知られているエムデックス■は、さらさらした噴霧結 晶化マルトース−Ｄ−グルコース多孔質球体の高度に精製されたデクストレーテ ス化合物に対する登録商標である。ケミカル・アブストラクト・サービスの登録 番号は５Ｇ−９９−７である。

２）　　Ｗ、Ｒ，ブレース・アンド・カンバ＝　−（Ｇｒａｃｅ　＆　Ｃｏ、　 ）のダビソン・ケミカル・ディビジョン（ＤｉｖｉｇｏｎＣｈｅｍｉｃａｌ　Ｄ ｉｙｉｓｉｏｎ　）により販売、微粉化合成非晶質シリカであるンロイド（ＳＹ ＬＯＩＤ■）は多機能的食品添加剤である。

３）　ニドワード・マンデル社により販売、ツルカフロックは北部地方の硬材（ カンパ、ブナ、カラマツ及びポプラ）のセルロースパルプから誘導された一連の 粉末セルロース生成物の登録商標である。

それぞれ１８０乃至２８０ｇの体重を有する１５匹のオスのアルピノラットに上 記の合成のラット飼料を２週間与えた。その後、ラットをそれぞれ５匹ずっ３グ ループに分けた。グループ■には上記の合成ラット飼料だけを与えた。グループ ■には合成ラット飼料と、飲料水に添加した実施例１のクロム−ニコチネートＧ ＴＦ物質１０ｐｐｍを一緒に与えた。グループ■には飲料水に添加した塩化クロ ムとしてのクロムＩＯｐｐｍと一緒に前記合成飼料を与えた。この飼料管理を６ 週間維持した。

２週間ごとにそれぞれの被験体の体重を測定した。各グループからの被験体の成 長速度は、ＧＴＦクロム生成物がラットの全体重及び脂肪含量に非常に効果を有 することが明らかだった。規定食の６週間の終りに、被験体を殺し、解剖し、臓 器をクロム含量に関して検査した。

クロムに関する検査結果は第■表に示した通りである。

解剖中に、グループエ及び■の被験体が皮膚の真下の脂肪組織及び腸中のレース 状の多量の脂肪組織が目立った。グループ■の被験体において脂肪組織の蓄積を 防ぐことにおいて、ＧＴＦクロム生成物の効果はほとんど即時的であった。

グループＩ及び■の被験体の成長速度は、塩化クロムの毒性がグループ■の動物 の体重の減少を生じさせるまでほとんど平行であった。観察された毒性は明らか に腎臓中に迅速に蓄積された塩化クロムから生じたものである。

臓器の検査に加えて各被験体から血液を採り、赤血球から血清を分離した。血清 をグルコース、トリグリセリド及びコレステロールに関して分析した。血清分析 の結果は第■表の通りである。

第■表 血清分析 グルコース　コレステ　　トリグリ グループＩ　　　３８１　　　　５３　　　　　８６対照 グループＩＩ　　　１４７　　　　４８　　　　　４９ＴＦ グループＩＩＩ　　　１７５　　　　５２　　　　　６４Ｃ＋ＣＩ３ 本実施例は、ＧＴＦクロムが塩化クロムと異なって代謝されたこと及び異なる生 物学的プールに流れることが示された。ＧＴＦクロムは又、脂肪組織の脂肪代謝 の速度を増加させた。

実施例６ 実施例１に従って製造されたクロム−ニコチネートＧＴＦ物質が胎盤を通過する ことを示すために、１５期妊娠のアルピノラットを各５匹の３グループに分けた 。これらのラットは１週間平衡させ、その後に実施例５の規定食を与えた。グル ープ■は対照群であり、実施例５の合成ラット飼料を与えた。グループ■は飲料 水に添加した実施例１−のクロム−ニコチネートＧＴＦ物１ｆｌＯＰｐｍノ補充 物質とともに前記合成ラット飼料を与えた。グループ■は飲料水中の塩化クロム としてのクロムＩＯｐｐｍを補足した合成ラット飼料を与えた。

一週間の終りに、被験物質の体重を測定し、殺し、解剖し、臓器及び胎児を実施 例５のように検査した。検査の結果は、第■、■及び■表に示す通りであった。

第７表 グルコース　　３０７　　　　２２２　　　　　２３６■／ｄ　１ コレステ　　　　８０　　　　　６１　　　　　　９３トリグリ　　　　６９　 　　　　　７６　　　　　　１０４■　／ｄ　　１ 平均初期　　　３０９．８　　　　３＋０　　　　３０９．２体重 平均最終　　　３０３　　　　　２７８　　　　２９６体重 変化％　　　　−２，１％　　　〜１０．３　　　　−４．３本実施例は、１週 間の経過を終えて、胎児組織中にクロム含量が対照群より３０％、塩化クロム群 より２１％多く、本発明のクロム−ニコチネートＧＴＦ物質が胎盤を通過するこ とを示した。

クロム−ニコチネートＧＴＦ物質が組織内で濃縮されず又毒性が非常に低いので 高組織含量にならないということは、興味深いことである。しかし、生物学的活 性を示す。このことは、ＧＴＦ物質はクロムとは体内では異なって作用し、異な る生物学的プールに入る。

脂肪代謝におけるＧＴＦの効果は劇的であり、全体の体脂肪は恐ら＜　ＧＴＦク ロムの最も感受性の強い活性指示物質である。ここでも、塩化クロムは腎臓で高 い保留割合を示した。

実施例　７ 実施例６の体重および臓器の検査の実験を、動物は７日でなく１０日間補充され た他は第２組の被験体について繰り返し、その結果を第■表及び１表に示した。

第１表 平均初期　　　３３１　　　　３４３　　　　　３０７体重 平均最終　　　３０１　　　　３１１　　　　　２６２体重 変化　　　　　−９，１％　　　−９，３！％　　　　−１４，７％本実施例は 、本発明のクロム−ニコチネートＧＴＦ物質が塩化クロムより良好な移動を証明 し、腎臓での塩化クロムの毒性を再確認した。

体重を出産後解剖前に正確な測定方法で測定した第１の妊娠試験（実施例６）で は、体脂肪量が減少したことが示された。本実施例では、体重を解剖前に測定し 、このことは胎児の体重及び流体の保留を考慮しながった。

しかし、体重の変化はグループ■及びグループ■に関してはほとんど同じであり 、グループＩ及び■はグループ■より少なかった。

前期の実施例から本発明のクロム−ニコチネートＧＴＦ物質が真のＧＴＦ錯体の 特徴を示すことは明らがであった。さらに前記実施例は、処理されたラットにお いて脂肪組織及び血清脂質の低減及び／又調整を示し、このことはＧＴＦ化合物 の公知の特徴であるので本発明のクロム−ニコチネートＧＴＦ物質を与えたヒト において同様な効果を表すであろう。例えば、本明細書に組み込まれる米国特許 第４．３４３．９０５号の実施例２を参照。

本発明物質がヒトのクロム補充に用いられるとき、経口投与の１日の用量は必要 なりロム補充に依存するが、クロム−ニコチネートＧＴＦ物質のクロム含量に基 づいて４μｇもの少量から５００乃至１，０００μｇの多量まで変化し得る。前 記物質を個々の食物又は飲み物に添加して、又はクロム−ＧＴＦ物質の適量を含 有する１以上の錠剤を投与することによりその補充が行われ得る。

本発明のＧＴＦ物質を含有する錠剤は、例えば、エムデックスを５００ｍｇ、ス テアリン酸マグネシウム５■、シロイド７４を２■及び本発明のクロム−ニコチ ネートＧＴＦ物質を２■例えばドライ混合することにより製造される。そのドラ イ混合物は約７７１６インチの直径の錠剤にプレスされる。本ＧＴＦ物質２■は 本分析によるとクロムを約２００μｇ供給することになる。

用いるＧＴＦ物質は、実施例１で製造されたクロム−ニコチネートＧＴＦ物質を 水で洗浄し、ホワットマン費ｌＩ″”　（ｗｈｘｌ＋ａａｎ■）４号濾紙を用い てブフナー１１″−（Ｂｕｃｈｎｅｒ■）漏斗で濾過する等により、塩及び水が ないものであるのが好ましい。濾過した物を脱イオン水の２液体量ですすぎフィ ルターケークを１００℃で１晩乾燥させた。

クロム−ニコチネートＧＴＦ物質は単に製品の配合に含有させることにより食物 や飲料に添加される。例えば、パンにはドウを作る工程で、スライス当たりクロ ムを約２０μｇ添加し得る。この補充量はクロム−ニコチネートＧＴＦ物質では ドウの約０．１％が必要であろう。

グルコース耐性を改良する目的の治療にヒトに用いられるときは用量は通常、１ 日当たりクロムとして約５００乃至１，０００μｇである。高脂血症の治療に用 いるとき、好ましい用量は１日当たりクロム濃度に基づいてクロム２乃至４■で ある。

前記実施例は特定のクロムＧＴＦ物質の製造及び用途を例示したものであり、本 適用の示唆は実施例で記載されたものより広い他の面を包含することを認識する であろう。従って本発明は請求の範囲のみによって限定されるべきである。

０座　Ｌ４更 国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　グルコース耐性因子活性を有するクロムーニコチネートＧＴＦ物質を生成さ せる条件下で、ニコチン酸のアルカリ金属塩を溶液中で３価のクロム塩と混合す ることにより得られる生成物を含むクロムーニコチン酸錯体反応生成物。 ２　ニコチン酸のアルカリ金属塩がナトリウム塩であり、クロム塩が塩化クロム である、請求項１に記載のクロムーニコチン酸錯体。 ３　トリニコチン酸クロム及びジニコチン酸クロムー塩化物の混合物を含む、請 求項２に記載のクロムーニコチン酸錯体。 ４　ニコチン酸の金属塩に３価のクロム塩の水溶液をクロムーニコチネートＧＴ Ｆ物質反応生成物が沈殿物として生成するまで５℃乃至６０℃で接触させること を含む、グルコース耐性因子活性を示す合成の、ニコチン酸のクロム錯体を製造 する方法。 ５　アルカリ金属水酸化物、炭酸塩又は重炭酸塩をニコチン酸と反応させニコチ ン酸のアルカリ金属塩を生成することをさらに含む、請求項４に記載の方法。 ６　ニコチン酸を水に溶解し、水酸化、炭酸又は重炭酸ナトリウムをニコチン酸 溶液に撹拌しながら添加することにより前記ニコチン酸アルカリ金属塩を生成す る工程、 Ｃ１Ｃｌ３・６Ｈ２Ｏを水中に溶解させ、緑色のクロム溶液を生成することによ るクロム溶液を生成する工程、ニコチン酸のナトリウム塩の溶液をクロム塩の溶 液と混合する工程及び 緑色の混合物が溶液から沈殿する、濃い紫色の錯体を生成するまで撹拌する工程 をさらに含む、請求項５に記載の方法。 ７　グルコース耐性活性を有する生成物を生成する条件下、極性溶媒中で、 ａ）ニコチン酸のアルカリ金属塩及び ｂ）３価クロム塩 を結合させることを含む方法により得られるクロムーニコチン酸反応生成物。 ８　溶媒が、アルコール系又は水性の溶媒からなる群がら選択される少なくとも １種である、請求項７に記載の錯体。 ９　溶媒が水から成る請求項８に記載の錯体。 １０　ニコチン酸のアルカリ金属塩が、ナトリウム、カリウム、リチウム及びマ グネシウムから成る群から選択される少なくとも１種のカチオンを含む、請求項 ７に記載の錯体。 １１　クロム塩が塩化物、硫酸塩、酢酸塩及び蓚酸塩から成る群から選択される 少なくとも１つのアニオンを含む薬理学的に容認できる塩である、請求項７に記 載のニコチン酸錯体。 １２　ニコチン酸のアルカリ金属塩に薬理学的に容認できる３価のクロム塩を接 触させることにより得られるクロムーニコチネートＧＴＦ物質を有効量、経口調 剤の形態で投与することを含む、哺乳動物にクロム補充を与える方法。 １３　クロムーニコチネートＧＴＦ物質はトリニコチン酸クロム及びジニコチン 酸クロムー塩化物の混合物を含む、請求項１２に記載の方法。 １４　クロムーニコチネートＧＴＦ物質が本質的にトリニコチン酸クロムから成 る、請求項１２に記載の方法。 １５　ニコチン酸のアルカリ金属塩に薬理学的に容認できる３価のクロム塩を反 応させることにより得られるクロムーニコチネートＧＴＦ物質を有効量、哺乳動 物に投与することを含む、グルコース耐性を改良する目的で哺乳動物にクロム補 充を与える方法。 １６　ニコチン酸ナトリウムに３価の塩化クロムを反応させることによりクロム ーニコチネートＧＴＦ物質を製造する請求項１５に記載の方法。 １７　ニコチン酸のアルカリ金属塩に薬理学的に容認できる３価のクロム塩を反 応させることにより得られるクロムーニコチネートＧＴＦ物質を有効量、哺乳動 物に投与することを含む、哺乳動物の脂肪含量を低減させる方法。 １８　ニコチン酸ナトリウムに３価の塩化クロムを反応させることによりクロム ーニコチネートＧＴＦ物質を製造する請求項１７に記載の方法。