JPH0347077A - Ｍａｃ―１のアファ‐サブユニットから成る白血球付着レセプター - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発凱■履を五分団 本発明は、白血球付着レセプター（Ｉｅｕｋｏｃｙ　ｔ
ｅａｄｈｅｓｉｏｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ）Ｍａｃ　−１
に関する。さらに、本発明は、この分子（Ｍａｃ−１）
をコードするＤＮＡ配列をクローニングすることに関す
る。本発明は、部分的に政府の援助によってなされたも
のであり、該政府はこの発明に関する特定の権利を所有
している。

回」夜街■■ 免疫系は、バクテリア、ウィルスなどの異物から動物を
防護する役割を果たす。アイゼン（Ｅｉｓｅｎ。

Ｉｌ、　Ｗ、）は、この防御系に関する優れた検討を行
なっている（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏ　　、第３版、米国
ペンシルバニア州Ｈａｒｐｅｒ　＆　Ｒｏｉｖ　（１９
８０）　、　　２９０〜２９５頁、３８１〜４１８頁参
照〕。異物に対して動物を防御する免疫系の能力は、白
血球として知られる血球の存在と機能に大きく依存する
。白血球がそのような防御能を発揮するためには、細胞
基質および細胞外基質に白血球が付着することが必要で
あるということが見出されている。

例えば、白血球は内皮細胞に付着しなければならず、こ
れによって、白血球が循環系から炎症の生じている部位
へと移動することができるのである。さらに、通常の免
疫応答が生じ得るように、白血球は抗原提示細胞に付着
しなければならない。

白血球はまた適当な標的細胞にも付着しなければならず
、かくして、ウィルス感染細胞（腫瘍細胞）の溶菌が起
こる。さらに、白血球は、各種の活性タンパク質（例え
ばｉＣ３ｂ：補体の第三成分の活性型）に付着できる能
力を有することにより、微生物や細胞の残滓を効率的に
貧食し除去し得ることが必要である。このように、白血
球の付着は、通常の防御系が機能するための必要条件で
ある。

移殖のような場合にはこの防御系を抑制することが望ま
れる。宿主が移殖組織を異物とみなし該組織に対して免
疫応答が開始されるからである。したがって、白血球付
着は、移殖された組織や器官に対する拒絶反応にも関与
している。かくして、白血球付着を解明することにより
、感染に対する動物の抵抗能を高めるか、あるいは移殖
１１Ｖ６．に対する動物の拒絶能力を抑制することがで
きるであろう。

最近、白血球付着に関与する白血球の表面分子が、ハイ
ブリドーマ技術を用いて明らかにされた。

簡単に言えば、ヒトＴ細胞（Ｄａｖｉｇｎｏｎ他、独。

Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　　　　　７８　：
　４５３５〜４５３９（１９８１）参照〕とマウス肺臓
細胞（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ他、Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ、、　　９　：　３０１〜３０６（１９７９）参
照〕に対するモノクローナル抗体が、白血球表面に結合
し、上述したような付着に関連する機能を抑制すること
が見出された（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ他、Ｆｅｄ、　Ｐｒｏ
ｃ、、　　４４　：　２６６０〜２６６３　　（１９８
５））。これらのモノクローナル抗体により認識された
分子は、付着レセプター分子（ａｄｈｅｓｉｏｎ　ｒｅ
ｃｅｐｔｏｒ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）の「リンパ球機能
関連抗原−１群（ＬｙｍｐｈｏｃｙＬｅ　Ｆｕｎｃｔｉ
ｏｎＡｓｓｏｃｉａｔｅｄ　　Ａｎｔｉｇｅｎ　−Ｉ　
Ｆａｍｉｌｙ　：　　Ｌ　　Ｆ　Ａ　−１群）　」とし
て知られる一群の白血球付着レセプターから成る。

付着レセプター分子のＬＦＡ−１群は、互いに関係の深
い３種類の細胞表面糖タンパク質（ｃｅｌ、１ｓｕｒｆ
ａｃｅ　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ）を含有する・こ
れらの糖タンパク質は、炎症において細胞／細胞間相互
作用を仲介することが見出されている。そして、これら
の糖タンパク質は、ｒ　Ｌ　Ｆ　Ａ　−１（ｌｙｍｐｈ
ｏｃｙｔｅｆｕｎｃｔｉｏｎ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　
ａｎｔｉｇｅｎ　−１：リンパ球機能関連抗原−１」、
ｒＭａｃ−ＩＪおよびｒｐ１５０，９５Ｊとそれぞれ称
されている。ＬＦＡ−１は殆んどの白血球の表面に見出
される（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ他、Ｉｍｍｕｎｏｌ。

血０．工８：１１１〜１３５　（１９８２））が、Ｍａ
ｃ−１およびｐ１５０．９５は、主として、マクロファ
ージ、顆粒球その他の大粒リンパ球上に見出されている
（Ｓ　ｒａｎ　ｅｒ　　％　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｒｅｖ
、。

６８：１１１〜１３５　（１９８２）；Ｋｅｉｚｅｒ他
、Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｉ＋ｕ＋ｕｎｏ１．、　１５　：　
１１４２〜ｌ　１４７（１９８５））。

ＬＦＡ−１群の糖タンパク質は、ヘテロダイマーから構
成されており、糖タンパクの各々は、アルファ−サブユ
ニットと、該サブユニットが非共有結合的に結合したベ
ータ−サブユニットとを含む。このＬＦＡ−１群のアル
ファ−サブユニットは互いに異なることが見出されてお
り、それぞれ、ＣＤＩ　１　ａ、ＣＤＩ　ｌ　ｂおよび
ＣＤｌＩＣと称されている。グリコジル化されたこれら
のアルファ−サブユニットの概略の分子量は、それぞれ
、１８０．１７０および１５０Ｋｄである。これに対し
て、付着レセプターのＬＦＡ−１群のベータ−サブユニ
ットは互いに同一であり、９５に、ｄの分子量を有する
ことが見出されている（Ｓａｎｃｈｅｚ・Ｍａｄｒｉｄ
他、Ｌ−旦す旦う−μｌ工、　　１５８　：　１７８５
〜１８０３　　（１９８３）　　；Ｋｅｉｚｅｒ他、Ｅ
ｕｒ、　Ｊ。

Ｉｍｍｕｎｏｌ、、↓５　：　１１４２〜１１４７　；
Ｓｐｒｉｎｇｅｒ他、Ｆｅｄ、　Ｐｒｏｃ、、１土：２
６６０〜２６６３（１９８５）　　；　Ｓａｎｃｈｅｚ
−Ｍａｄｒｉｄ他、Ｌ」狸肛。

漁ｄ、、１５８：５８６〜６０２（１９８３））。

ＬＦＡ−１群の糖タンパク質のアルファ−サブユニット
は、ベータ−サブユニットを共有することによる広範な
相同性を示さないが、該糖タンパク質のアルファ−サブ
ユニットを詳細に分析してみると、それらの間にかなり
の近似性が存することが示された。付着分子である糖タ
ンパク質群のアルファ−サブユニットとベータ−サブユ
ニットの近似性に関する検討はＳａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄ
ｒｉｄによって行なわれているＣＪ、　Ｅｘ　ｅｒ、　
Ｍｅｄ、、　　１５８　：５８５〜６０２　　（１９８
３）　　；Ｊ、　Ｅｘｅｒ、　Ｍｅｄ。

１５８：１７８５〜１８０３　　（１９８３）：Ｍｉｌ
ｌｅｒ他、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１３８　：　２
３８１〜２３８３（１９８７））。

ＬＦＡ−１群の重要性は、当初、モノクローナル抗体（
特定のアルファ−サブユニットか、または、共通のベー
タ−サブユニットに対して結合能があるもの）が白血球
の機能（付着に依存する）を抑制する能力を有すること
を研究する過程で認識された（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄ
ｒｉｄ他、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。

Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、、困［：　７４８９〜７４９３（
１９８２）　　；　Ｂｅ１ｌｅｒ他、Ｊ、　Ｅｘｐｅｒ
、　Ｍｅｄ、　１５６：１０００〜１００９　（１９８
２））。

最近、白血球の細胞表面に付着タンパク質Ｍａｃ−１を
通常の量で出現できない人が存在することが明らかにさ
れている。この病気は「白血球付着不全（Ｌｅｕｋｏｃ
ｙｔｅ　Ａｄｈｅｓｉｏｎ　ＤｅｆｉｃｉｅｎｃｙＪす
なわちｒＬＡＤＪと呼ばれており、その特徴は、慢性的
で再発性の感染が起こることであり、これにその他の臨
床症状が加わる（Ａｎｄｅｒｓｏｎ他、Ｆｅｄ、　Ｐｒ
ｏｃ、。

４４：２６７１〜２６７７　　（１９８５）：Ａｎｄｅ
ｒｓｏｎ他、Ｊ、　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ、、１５２
　：　６６８〜６８９（１９８５）：ｌ。ＬＡＤ患者か
らの白血球は、通常人の白血球がＬＦＡ−１群に特異的
なモノクローナル抗体により拮抗されたときに見られる
のとＷ４４以したインビトロ欠陥を示す、ＬＡＤ患者は
、通常の免疫応答を発揮することができないことが見出
された。しかして、この欠陥は、ＬＡＤ患者の白血球が
細胞基質や細胞外基質に付着する能力を有しないことに
よることが見出されている（Ａｎｄｅｒｓｏｎ他、Ｆｅ
ｄ、　Ｐｒｏｃ、＋　　４４　：　２６７１〜２６７７
　（１９８５）　　；Ａｎｄｅｒｓｏｎ他、Ｊ、　Ｉｎ
ｆｅｃｔ。

Ｄｉｓ、、１５２　：　６６８〜６８８　　（１９８５
））。

これらの研究によれば、白血球の細胞表面において機能
する付着分子を欠いているために白血球の通常の付着能
力がないときには、炎症反応は軽減されることが示され
ている。

総括すれば、白血球が動物の健康や生存を維持する能力
を発揮するには、白血球は、他の細胞（例えば、内皮細
胞）やタンパク質（例えばｉＣ３ｂ）に付着できること
が必要である。そして、この付着には、白血球の表面に
存在する特定のレセプター分子の仲介が必要である。細
胞表面のこれらのレセプター分子は互いに相関関係が高
いことが見出されている。このような細胞表面のレセプ
ター分子を欠いている人は、慢性的で再発性感染などの
臨床症状を呈する。

また、白血球付着は、異物組織を認識しこれを拒絶する
プロセスに関与しているので、このプロセスを解明する
ことは、臓器移殖、組織移殖、アレルギーおよび腫瘍学
の分野において非常に価値のあることである。

２１１口１斐 本発明は、白血球細胞表面付着レセプター分子に関し、
特に、組換えＤＮＡ技術を用いることによりレセプター
分子Ｍａｃ−１のアルファ−サブユニットをクローニン
グし発現させることに関する。

本発明は、付着分子そのもの、該分子の機能性断片、そ
れらのレセプター分子をコードすることのできる核酸（
すなわち、ＤＮＡ、特にｃＤＮＡ）、および、そのよう
な核酸配列を含有するプラスミドに関する。さらに、本
発明は、組換えＤＮＡを技術を用いることによる当該レ
セプター分子の製造方法にも及ぶ。

詳述すれば、本発明は、Ｍａｃ−１のアルフｙ　−サブ
ユニット、または、その機能性断片であって、天然の混
在物を実質的に含まないものに関する。

さらに、本発明は、上述のＭａｃ−１アルフアーザブユ
ニツトまたはその機能性誘導体であって、細胞の表面上
に存在する分子と結合する能力を有するものに関する。

さらに、本発明は、上述のＭａｃ−１のアルファサブユ
ニット分子であって、該分子は、次の群より選ばれる少
なくとも１種のポリペプチドを含有するものである： ａ、　＾−Ｎ−Ｑ−Ｒ−Ｇ−Ｓ−Ｌ； ｂ、Ｍ−Ｅ−Ｑ−Ｌ−に−に−８； ｃ、Ｔ−Ｄ−Ｇ−Ｅ−に−Ｆ−Ｇ； ｄ、Ｇ−Ｖ−Ｆ−Ｌ−Ｙ−Ｔ−Ｓ。

ｅ、Ｖ−Ｄ−Ｖ−Ｄ−５−Ｓ−Ｎ−Ｇ−５−ＴＨｆ、Ｄ
−Ｖ−Ｎ−Ｇ−Ｄ−に−Ｌ−Ｔ−Ｄ−Ｖ−Ａ。

ｇ、　Ｄ−Ｌ−Ｔ−Ｍ−Ｄ−Ｇ−Ｌ−Ｖ−Ｄ−Ｌ；ｈ、
Ｙ−１−Ｌ−Ｔ−５−１ｆ−Ｎ； ｉ、Ｃ−Ｑ−Ｄ−Ｄ−Ｌ−Ｓ−１゜ ｊ、　　Ｔ−Ｉ−Ｑ−Ｎ−ローＬ−Ｒ。

ｋ、Ｖ−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｖ−Ｌ−Ｇ。

１、Ｙ−Ｑ−１１−１−Ｇ−Ｌ−Ｖ； 摺、Ｌ−Ｆ−Ｔ−Ａ−Ｌ−Ｆ−Ｐ； ｎ、Ｆ−Ｓ−Ｌ−シーＧ−Ｔ−Ｐ。

本発明は、さらに、Ｍａｃ−１アルファ−サブユニット
またはその機能性誘導体を発現することのできる組換え
ＤＮＡ分子に関する。

さらに、本発明は、次の各工程から成り、Ｍａｃ−１ア
ルファ−サブユニットを実質的に純粋な形で得ることの
できる方法を提供する： （ａ）　Ｍａｃ　−１アルフアサブユニツトを産生ずる
細胞の膜からＭａｃ−１アルフアサブユニツトを可溶化
して、可溶化Ｍａｃ−１アルファ−サブユニット調製物
を形成し、 （ｂ）　Ｍａｃ　−１アルファ−サブユニットに対して
結合能を有する固定化抗体を含有するアフィニティ基体
（アフィニティーマトリックス）に、前記Ｍａｃ−１ア
ルファーサプユニソＨｉ製物を導入し、 （ｃ）　Ｍａｃ　−１アルフアサブユニツトをアフィニ
ティ基体の抗体に結合させ、 （ｄ）アフィニティ基体から、該抗体に結合することの
できない化合物を除去し、さらに （ｅ）基体からＭａｃ−１アルフアサブユニツトを溶出
させることにより、該Ｍａｃ−１アルファサブユニット
を実質的に純粋な形で回収する。

本発明は、さらに、咄乳動物の被検体において非特異性
防御系の応答に起因する炎症（例えば、成人呼吸窮迫症
候群−敗血症に派生する多発性器官損傷症候群；外傷に
派生する多発性器官損傷症候群；組織の再灌流損傷（ｒ
ｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　１ｎｊｕｒｙ）　；急性糸状休
腎炎；反応性関節炎；急性炎症成分を伴なう皮膚疾患；
中枢神経系炎症疾患；熱損傷；血液透析；白血球症（ｌ
ｅｕｋａｐｈｅｒｅｓｉｓ）　　；潰瘍性大腸炎：クロ
ーン病；壊死性全腸炎；顆粒球輸注関連症候群；および
サイトカイン誘発毒性に因るもの）を治療するための方
法であって、当該治療を必要とする被検体に、当該炎症
を抑制するのに充分な量の抗炎症剤を投与し、この時、
該抗炎症剤が、Ｍａｃ−１アルフアサブユニツトおよび
Ｍａｃ　−１アルファ−サブユニットの機能性誘導体よ
り成る群から選ばれる方法を提供する。

さらに、本発明は、上述の方法において、Ｍａｃ−１ベ
ータサブユニツトおよびその機能性誘導体より成る群か
ら選ばれる薬剤を併用する工程を追打することにも関す
る。

３種類の白血球付着タンパク質Ｍａｃ−１、ｐ１５０．
９５、およびＬＦＡ−１は、それぞれの機能が異なり、
また、各種の白血球における出現の度合も異なっている
（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ他、Ｂｉｏｃｈｅｍ…］ｏｆ　Ｍａ
ｃｒｏ　！＋ａ　ｅｓ　（Ｃｒ　Ｂ　Ａシンポジウム１
１８）、英国ロンドンＰｉｔｍａｎ発行、１０２〜１２
６（１９８６））。

血液単球が組織マクロファージに分化する間に、ｐ１５
０．９５の出現は非常に増大し、また、Ｍａｃ−１の出
現は減少する（Ｓｃｈｗａｒｔｉｎｇ他、Ｂｌｏｏｄ。

６５　：　９７４〜９８３　　（１９８５）；ｌｏｎｇ
他、Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、±６：２４０〜
２４８　（１９８６））　。

また、ｐ１５０．９５は、特定のタイプの活性化Ｔリン
パ球およびＢリンパ球にも出現されるが、血液中ではこ
れらの細胞上に出現しない（Ｋａｌｉｇａｒｉｓ・Ｃａ
ｐｐｉｏ他、旧ｏｏｄ、６６：１０３５〜１０４２（１
９８５）　　；　Ｍｉｌｌｅｒ他、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ、＋　１３７　：２８９１〜２９００　　（１９８６
）；Ｋｅｉｚｅｒ他、ムＩｍｍｕｎｏ１．．１３８　：
　３１３０〜３１３６（１９８７））。

ＬＦＡ−１は、あらゆる白血球上に存在するが、但し、
ある種のマクロファージは例外である。モノクローナル
抗体のブロッキングに関する研究によれば、ＬＦＡ−１
は、Ｔリンパ球キラー作用、ヘルパーＴ細胞応答、ナチ
ュラルキラー作用、および抗体依存性キラー作用におい
て重要であることが示されている〔Ｓｐｒｉｎｇｅｒ他
、Ａｎｎ、　Ｒｅｖ。

Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　　５　：　２２３〜２５２　　（
１９８７）　）。

標的細胞への付着は、ＬＦＡ−１に対する抗体によって
ブロックされる過程である。Ｒｏｔｈｌｅｉｎらによる
機能性に関する研究によれば、ＬＦＡ−１は数種のリガ
ントと相互作用し、該リガントの１種がＩ　ＣＡＭ−１
であると考えられる（Ｒｏｔｈｌｅｉｎ他、Ｊ、　　Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ、、　　１　３　７　　：　　　１　２　
７　０　〜１　２　７　４　　（１９８６））　　。

Ｍａｃ−１とｐ１５０．９５は循環している好中球と単
球の細胞内小胞区画に出現され、この小胞区画は炎症媒
介物質によって細胞表面に移動する（Ｔｏｄｄ他、Ｊ、
　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、、　　７４　：　１２８
０−１２９０　　（１９Ｂ　４）　　；Ｓｐｒｉｎｇｅ
ｒ他、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｏｆ　Ｍａｃｒｏ　ｈａ
　ｅｓ　（ＣＩ　Ｂ　Ａシンポジウム１１８）、Ｌｏｄ
ｏｎのＰｉ　ｔｍａｎ発行、１０２〜１２６　（１９８
６）；Ｌａｎ１ｅｒ他、Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ、、　　１５　：　７１３〜７１８　（１９８５）　
　；Ｙａｎｃｙ他、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、。

１３５：４６５〜４７０　　（１９８５））。この移動
は付着性の増大き相関しているＣＡｎｄｅｒｓｏｎ他、
Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｍｅｄ、、　　３８　：　１７５
〜１９４（１９８７）：ｌ。

Ｍａｃ−１サブユニツトは、血液単球およびＰＭＡ−誘
導骨髄セルラインでは検出されたが、Ｔ細胞またはＢ細
胞系では検出されず、Ｍａｃ−１タンパク質の表面の出
現度と相関している。

細胞障害性Ｔ細胞（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　Ｔ　ｌｙｍｐ
ｈｏｃｙｔｅ：ＣＴＬ）のクローンには、はぼ同量のｐ
１５０，９５とＬＦＡ−１を出現させるものが見出され
ている。

ＬＦＡ−１とｐ１５０．９５のアルファ−サブユニット
に対するモノクローナル抗体は、そのようなＣＴＬクロ
ーンによるキラー作用を抑制する（Ｋｅｉｚｅｒ他、Ｊ
、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１３８　：　３１３０〜３１
３６　（１９８７））。さらに、ｐ１５０，９５アルフ
ァ−サブユニットに対する抗体は、内皮への単球の付着
を抑制することも明らかにされている（Ｋｅｉｚｅｒ他
、Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、上７　：１３１
７〜１３２２　（１９８７））。

Ｍａｃ−１またはｐ１５０．９５に対するモノクローナ
ル抗体は、内皮細胞、タンパク賞被覆表面、バクテリア
、原生動物寄生虫、および菌類に対して好中球が凝集し
付着するのを抑制する（Ｈａｖｌａｎ他、坦Ａ剋エエ６
：１６７〜１７８　（１９８５）；Ｓｐｒｉｎｇｅｒ他
、旧ｏｃｈｅｍｉｓｔｒ　　ｏｆ　Ｍａｃｒｏ　ｈａ　
ｅｓ　（ＣｒＢＡシンポジウム１１．８　）　Ｐｉｔｍ
ａｎ　（英国Ｌｏｎｄｏｎ）発行、１０２〜ｌ　２６　
　（１９８６）　　；Ｄａｎａ他、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ、＋１３’ｊ：３２５９　（１９８６）；Ｂｕｌｌｏ
ｃｋ他、Ｊ。

■匣ム」閃、、１６５：１９５〜２１０（１９８７）；
Ｍｏ５ｓｅｒ他、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　　１３５
　：　２７８５〜２７８９　（１９８５））。

Ｍａｃ　−１（ＣＤ　１　ｌ　ｂ／ＣＤ　１８）は、白
血球付着に関与するヘテロダイマー性糖タンパク賞であ
り、細胞／細胞および細胞／基質間付着相互作用におけ
る役割に加え、ｉＣ３ｂ　（ＣＲ３）に対するレセプタ
ーとしても機能する（Ｂｅｌｌｅｒ他、Ｊ。

ハ肱ム」射、、１５６：１０００〜１００９　（１９Ｂ
２））。

洗剤溶解性のＭａｃ−１およびｐ１５０．９５は、ｔｃ
３ｂ−セファロースに結合できることが示されている（
Ｍｉｃｋｌｅｍ他、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、、　２３１
　：２３３〜２３６　（１９８５））。

Ｍａｃ−１のα−サブユニットは、１１３７の残基から
成る膜貫通９”／バク質（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ
ｐｒｏｔｅｉｎ）であり、長い細胞外ドメイン（１（１
９２残基）と１９のアミノ酸から成る細胞質テイル（尾
部）とを有している。細胞外ドメインは、３個の二価カ
チオン結合性配列と１９個のグリコジル化部位とを含有
しているものと考えられる。

Ｍａｃ−１のα−サブユニットのアミノ酸の示すところ
によれば、これはインテグリン（ｉｎＬｅｇｒｉｎ）超
科の一員であり；Ｍａｃ−１のα−サブユニットは、白
血球付着糖タンパクｐ１５０．９５のα−サブユニット
に対して６３％、また、細胞外マトリックレセプター血
小板糖タンパク質１１ｂ／ＩＩＩａ、フィブロネクチン
レセプターおよびビトロネタチンのα−サブユニットに
対して２５％の相同性を示す。

Ｍａｃ−１のα−サブユニットにおける推定上の二価カ
チオン結合性部位およびフランキング領域は、ｐ１５０
，９５のα−サブユニットに対して高い相同性を示しく
アミノ酸レベルで８７％）、残すのインテグリンα−ザ
ブユニットに対しても高い相同性（３８％）を示した。

ｐ１５０．９５のα−サブユニットと同様に、Ｍａｃ−
１のα−サブユニットは、細胞外領域において１８７個
のアミノ酸から成るドメインを有しているが、これは他
のインテグリンでは存在しない。この白血球、すなわち
「Ｌ」ドメインは、フオンビルブランド因子のＡドメイ
ンと相同であり、そして、７オンビルブランド因子のＡ
ドメインは、Ｃ３結合タンパク質因子ＢおよびＣ２の領
域と相同性を有する。これらの知見から、Ｍａｃ−１の
当該領域は、ｉＣ３ｂに対する結合部位としての可能性
があることが考えられる。

Ｍａｃ−１の機能は、当初、マクロファージと多形核白
血球に対するｉＣ３ｂ被覆赤血球のロゼツト化が、抗Ｍ
ａｃ−１α−サブユニットモノクローナル抗体（ＭＡｂ
）によってブロックされることにより［Ｂｅ１ｌｅｒ他
、Ｊ、Ｂｘｐｅｒ９Ｍｅｄ、、　　１５６　：１０００
〜１００９　（１９８２）］　、Ｍａｃ−１は補体レセ
プターの３型（ＣＲ３）と区別できないことから説明さ
れた。次いで、抗Ｍａｃ−１α−サブユニットＭＡｂお
よび抗Ｍａｃ−１β−サブユニッＩ−ＭＡｂにより内皮
細胞に対する好中球の凝集と付着が抑制されることによ
り、炎症過程におけるＭａｃ−１の関与が明らかにされ
た（Ａｎｄｅｒｓｏｎ他、■上：６７２〜６８２　（１
９８８））。最近のエピトープマンピングに関する研究
が示唆するところによれば、ｔｃ３ｂ結合に関与する部
位は、タンパク質被覆プラスチックへの好中球の凝集と
付着に関与する部位とは異なる（Ａｎｄｅｒｓｏｎ他、
ム（１９８６）　　；Ｒｏｓｅｎ他、Ｊ、　Ｅｘ　ｅｒ
、　Ｍｅｄ、、１６６：１６８５〜１７０１　　（１９
８７））。したがって、Ｍａｃ−１は、少なくとも２つ
の互いに独立した付着関連機能を有する多価レセプター
と思われる。

Ｍａｃ−１の機能活性の出現は、白血球の分化と活性化
過程において制御される。骨髄単球セルラインの分化と
成熟は、Ｍａｃ−１の出現の増大を起こさせる（Ｍｉｌ
ｌｅｒ他、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、＋　　１３７　：２
８９１〜２９００　　（１９８６））が、組織マイロフ
ァージへの血液単球の分化が生じると、あらゆる細胞表
面においてＭａｃ−１の量が相当減少する（　Ｈｏ　ｇ
　ｇ他、Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　　１６
　：　２４０〜２４８　（１９８６））。循環している
好中球と単球の表面におけるＭａｃ−１の出現は、炎症
刺激によって調整される：Ｍａｃ−１は細胞内小胞区画
に貯蔵され、該小胞区画は化学誘引剤により細胞表面に
迅速移動させられる（Ｔｏｄｄ他、Ｊ、　Ｃｌ１ｎ。

Ｉｎｖｅｓｔ、、　７土：１２８０〜１２９０　（１９
８４）；ＭＨＩｅｒ他、Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓ
ｔ、＋　　８０　：　５３５〜５４４　（１９８７））
、Ｍａｃ−１の出現量が増大すれば付着性は増大するが
、リガント結合の調節には細胞活性化後の定性的な変化
も重要であろう（Ｄｅｔｍｅｒｓ他、Ｊ、　Ｃｅ１ｌ　
Ｂｉｏｌ、、　１０５　：　１１３７〜１１４５　（１
９８７））。炎症部位における毛細前後内皮への白血球
結合の調節には、定性的変化と定量的変化の相当が重要
であろう。

ネズミとヒトのＭａｃ−１α−サブユニットのＮ末端配
列（Ｍｉｌｌｅｒ他、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１３８
　：　２３８１〜２３８３　　（１９８７）　　；Ｓｐ
ｒｉｎｇｅｒ他、Ｎａｔｕｒｅｓ３１、４　：　５４０
〜５４２　（１９８５））、および、短いＮ末端エクソ
ンをコードするネズミのゲノムクローン（Ｓａｓ　ｔｒ
ｅ他、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ。

（Ｕ、　　Ｓ、　　八、）、　　且：５６４４〜５６４
８（１９８６））についての報告がなされている。

Ｍａｃ−１のα−サブユニットは、細胞外マトリックス
リセブクーインテグリンのα−サブユニットに類似して
おり、さらに、フォンビルブランド因子のＡ　９Ｊ（域
および２種類の０３−結合性タンパク質（因子ＢとＣ２
）に関連するドメインも有している。

ｎ、Ｍａｃ−１のアルファ−サブユニットのクローニン
グ Ｍ、ａｃ−１のアルファ−サブユニットの遺伝子をクロ
ーニングするには、各種の方法を用いることができる。

１つの方法に従えば、（Ｍａｃ−１アルファ−サブユニ
ットを産生ずる細胞から得られる）ｃＤＮＡインサート
のシャトルベクターライブラリーを分析して、Ｍａｃ−
１アルファ−サブユニット遺伝子を含有するインサート
を求める。そのような分析は、例えば、当該ベクターで
細胞をトランスフェクトし、しかる後、Ｍａｃ−１アル
ファ−サブユニットの産生を測定すればよい。Ｍａｃ−
１アルファ−サブユニットの測定は、Ｍａｃ−１アルフ
ァ−サブユニットに対して特異的な抗体を用いるのが好
ましい。Ｍａｃ−１アルファーサフ゛ユニント遺伝子を
クローニングするための好ましい方法では、Ｍａｃ−１
アルフア一サブユニツト分子または該分子のトリブチツ
ク（ｔｒｙｐｔｉｃ　）ペプチドのアミノ酸配列を測定
する。これを行なうためには、モノクローナル抗体アフ
ィニティクロマトグラフィにより産生細胞からＭａｃ−
１アルフア一サブユニツト分子を精製し、ナトリウム・
ドデシル・サルフェート・ポリアクリルアミドゲル（Ｓ
ＤＳＰＡＧＥ）電気泳動と電気泳動溶出により単離する
ことが好ましい（Ｍｉｌｌｅｒ他、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ、　１３８：２３８１〜２３８３　　（１９８７）参
照〕。当該アルファ−サブユニット分子は、シアノゲン
・プロミド、または、パパイン、キモトリプシンもしく
はトリプシンのごときプロテアーゼを用いて分画される
（Ｏｉｋｅ他、Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、、　　２
５７　：　９７５１〜９７５８　（１９８２）；Ｌｉｕ
他、Ｉｎｔ、　Ｊ、　Ｐｅ　ｔ。

Ｐｒｏｔｅｆｎ　Ｒｅｓ、＋　　２上：　２０９〜２１
５　　（１９８３）　）。

好ましくは、このアルファ−サブユニットはトリプシン
を用いるタンパク質加水分解により消化される。得られ
るペプチドは、逆相ＨＰＬＣによって分離され、アミノ
酸配列決定に供される。この作業を実施するには、自動
配列決定装置により当該タンパク質の分析を行なうのが
好ましい。Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットの全アミ
ノ酸配列を決定することも可能であるが、該分子のペプ
チド断片の配列を求めることが好ましい。Ｍａｃ−１ア
ルファ−サブユニットの好ましい入手源は、５ＫＷ３セ
ルラインである。

ペプチド中のアミノ酸残基の配列を示すために、本明細
書においては、一般に採用されている３文字表示法また
は１文字表示法を用いる。これらの３文字または１文字
表示法の一覧表は、例えば、ｒＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
　＋ｔ　Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ著、０ｒｔｈ　Ｐｕｂｌｉ
ｓｈｅｒｓ発行（米国ニューヨーク州）、１９７０年」
のようなテキストに見出すことができる。ある配列を縦
方向にリストしているときは、アミン末端残基は当該リ
ストの最上部にあるものとし、また、カルボキシ末端残
基はリストの最底部にあることを意味するものとする。

同様に、水平方向にリストしているときは、アミノ末端
は左端にあり、一方、カルボキシ末端は右端にあるもの
とする。

成るペプチドのアミノ酸残基は、ハイフンによって分け
ることができる。このハイフンは、アミノ酸配列の表示
を容易にする目的のためにのみ用いられるものである。

例えば、 −Ｇｌｙ−ＡＪａ−３ｅｒ−Ｐｈｅ　−によって表示さ
れるアミノ酸配列は、Ａｊ２ａ残基がＧｌｙのカルボキ
シ基に結合されており、また、Ｓｅｒ残基がＡｌａのカ
ルボキシ基に結合され、Ｐｈｅ残基のアミノ基に結合さ
れていることを示す。

この表示は、さらに、該アミノ酸配列がテトラペプチド
Ｇｌｙ　−Ａ　ｌ　ａ　−Ｓｅｒ　−Ｐｈｅ−を含むこ
とを示す。この表示は、アミノ酸配列をこのような唯一
のテトラペプチドに限定されることを意味するものでは
なく　、（１）アミノ末端およびカルボキシ末端のいず
れか一方に１個またはそれ以上のアミノ酸が結合されて
いるテトラペプチド、（２）アミノ末端およびカルボキ
シ末端の双方に１個またはそれ以上のアミノ酸残基が結
合しているテトラペプチド、（３）アミノ酸残基を追打
していないテトラペプチドを含むように意図するもので
ある。

１種またはそれ以上の適当なペプチド断片について配列
決定が行なわれると、それをコードすることのできるＤ
ＮＡ配列について検討する。遺伝子コードは縮重してい
るので、特定のアミノ酸をコードするには１つ以上のコ
ドンを用いることがある（Ｗａｔｓｏｎ、　Ｊ、　Ｄ、
、Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏ　　ｏｆ　ｔｈｅ釦
憇、第３版、Ｗ、　Ａ、　Ｂｅｎｊａｍｉｎ発行（米国
カルフォルニア州Ｍｅｎｌｏ　Ｐａｒｋ）　、１９７７
年、３５６〜３５７）。ペプチド断片を解析し、縮重度
の最も低いオリゴヌクレオチドによってコードされてい
ると考えられるアミノ酸配列を明らかにする。これを行
なうには、単一のコドンによってのみコードされている
アミノ酸を含有する配列を明らかにするのが好ましい。

ある特定のアミノ酸配列は、たまたま単一のオリゴヌク
レオチドによってのみコードされていることもあるが、
一連の類似するオリゴヌクレオチドによってコードされ
ていることが多い。重要なことは、この一連のオリゴヌ
クレオチドの全部が当富亥ペプチドをコードすることの
できるオリゴヌクレオチドを含有し、したがって、当該
ペプチド断片をコードする遺伝子と同一のオリゴヌクレ
オチド配列を含有する可能性があるが、その一連のオリ
ゴヌクレオチドの唯一が当該遺伝子のヌクレオチド配列
と同一のヌクレオチド配列を含有するということである
。この唯一のオリゴヌクレオチドは一連のオリゴヌクレ
オチドの中にあり、一連のオリゴヌクレオチド中の他の
オリゴヌクレオチドの存在下においてもＤＮＡとハイブ
リダイズすることができるので、上述と同様の方法によ
り、一連の非分画オリゴヌクレオチドを採用して、単一
のオリゴヌクレオチドを用いて当８亥ペプチドをコード
する遺伝子をクローニングすることもできる。

適当な１個のオリゴヌクレオチドまたは一群のオリゴヌ
クレオチド−Ｍａｃ−１アルフアサブユニツト遺伝子の
１断片をコードすることができるもの（または、そのよ
うなオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド群に
相補的であるもの）−を同定しく上述したような手法を
用いる）、合成し、且つ、当該技術分野においてよく知
られている方法により、ＤＮＡ、より好ましくはＭａｃ
１アルファ−サブユニット遺伝子を産生させることので
きるヒト細胞に由来するｃＤＮＡ調製物とハイブリダイ
ズさせる。核酸ハイブリダイゼーションの技術は、Ｍａ
ｎｉａｔｉｓ他（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃ１ｏｎｉＢ。

Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒ　　Ｍａｎｕａｌ、　Ｃｏ１ｄ
　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂ。

ｒａｔｏｒｉｅｓ、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｔｎｇ　Ｈａｒ
ｂｏｒ、米国ニューヨーク（１９８２））、およびＨａ
ｙｍｅｓ他（ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｆｄ　Ｈｙｂｒｉｄｉ
ｚａｔｉｏｎ、　Ａ　Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　Ａｐｐｒｏ
ａｃｈ、　ＩＲＬＰｒｅｓｓ発行（米国ワシントンＤＣ
）　、（１９８５））によって開示されていることを参
与のために言及しておく。ＤＮＡ源またはｃＤＮＡ源は
、Ｍａｃ１アルファ−サブユニットに関して濃厚にして
おくことが好ましい。そのような濃厚化は、Ｍａｃ　−
１アルファ−サブユニットを高レベルで産生ずる細胞か
らのＲＮＡを抽出することにより得られるｃＤＮＡから
非常に簡単に取得できる。

上述したような技術またはこれに類似する技術は、ヒト
のアルデヒド・デヒドロゲナーゼの遺伝子［Ｈｓｕ他、
Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳ
Ａ、８２：３７７１〜３７７５　（１９８５））、ヒト
のエストロゲンレセプター遺伝子（Ｗａ　Ｉ　ｔｅｒ他
、Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、　　Ａｃａｄ、　　Ｓｃｉ、　　ＵＳＡ、　
−俣■−二２　　：　　７　８　８　９　〜７８９３（
１９８５））、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ｐ
６ｎｎ　ｉｃａ他、Ｎａｔｕｒｅ、　３０１　：　２１
４〜２２１　　（１９８３））、ヒト胎盤アルカリフォ
スファターゼのｃＤＮＡ　（Ｋａｍ他、Ｐｒｏｃ、Ｎａ
口。

Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、　８２　：８７１５〜
８７１９（１９８５））をクローニングするのに成功し
ている。

遺伝子コードを用いると（Ｗａｔｓｏｎ、　Ｊ、　Ｄ、
　　：Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏ　　ｏｆ　ｔｈ
ｅ　Ｇｅｎｅ　ｓ第３版、Ｗ、八。

Ｂｅｎｊａｍｉｎ　Ｉｎｃ、　　（米国カリフォルニア
州Ｍｅｎｌ。

Ｐａｒｋ）発行、（１９７７）　）　、Ｍａｃ−１アル
フアーサブユニ７トのトリブチツクペプチドをコードす
ることができると考えられる１種またはそれ以上の互い
に異なるオリゴヌクレオチドを得ることができる。事実
問題として１つの特定のオリゴヌクレオチドが実際のＭ
ａｃ−１アルフアサブユニツトをコードする配列を構成
しているという可能性の予測は、真核細胞における、異
常塩基対合関係（ａｂｎｏｒｍａｌ　ｂａｓｅ　ｐａｉ
ｒｉｎｇ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ　）と、（ある
特定のアミノ酸をコードするのに）ある特定のコドンが
実際に用いられている頻度とを考慮することにより行な
うことができる。そのような「コドン用法則（ｃｏｄｏ
ｎ　ｕｓａｇｅ　ｒｕｌｅｓ　ＪはＬａｔｈｅらによっ
て開示されている（Ｌａ　ｔｈｅ他、Ｊ、　Ｍｏ１ｅｃ
。

Ｂｉ虹、、１８３　：　１〜１２　（１９８５））、Ｌ
ａｔｈｅの「コドン用法則」を用いれば、Ｍａｃ　　１
アルファ−サブユニットのトリブチツクペプチドをコー
ドすることができると理論的に「最も可能性の高い」ヌ
クレオチド配列を含有する単一のオリゴヌクレオチド、
またはオリゴヌクレオチド群を同定することができる。

Ｍａｃ−１アルファサブユニット断片をコードすること
ができる理論的に「最も可能性の高い」配列を含有する
オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド群を用い
て、「最も可能性の高いｊ配列または配列群にハイブリ
ダイズすることのできる相補的オリゴヌクレオチドまた
はオリゴヌクレオチド群の配列を明らかにする。そのよ
うな相補的配列を含有するオリゴヌクレオチドは、Ｍａ
ｃ１アルファサブユニット遺伝子を同定し単離するため
のプローブとして用いることができる（Ｍａｎｉａｔｉ
ｓ他、Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　Ａ　Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒＭａｎｕａｌ、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎ
ｇ　ｌ１ａｒｂｏｒ　Ｐｒｅｓｓ　（米国ニューヨーク
州、Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ）発行、（
１９８２）　）。

以上のことをまとめると、Ｍａｃ−１アルフアサブユニ
ツトのペプチド配列を実際に確認することにより、その
ようなペプチドをコードすることのできる理論的に「最
も可能性の高いＪ　ＤＮＡ配列または配列群を明らかに
することができる。この理論配列に相補的なオリゴヌク
レオチドを構成することにより（または、「最も可能性
の高い」オリゴヌクレオチド群に相補的なオリゴヌクレ
オチド群を構成することにより）　、Ｍａｃ　−１アル
フアサブユニツト遺伝子を同定し単離するプローブとし
て機能することのできるＤＮＡ分子（またはＤＮＡ分子
群）を得ることができる。

Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットのトリブチツクペプ
チドをコードする「最も可能性の高い」配列に相補的な
一本鎖オリゴヌクレオチド分子の合成は、当該分野の当
業者によく知られている手法を用いて行なった〔ｈ圏■
バ他、Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、。

２４５：５７６５〜５７８０　（１９７９）；Ｍａｎｉ
ａｔｉｓ他、Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ
ｓ　ｉｎ　ｔｈｅＣｏｎｔｒｏｌ　　ｏｆ　　Ｇｅｎｅ
　　Ｅｘ　　ｒｅｓｓｉｏｎ、　　八ｃａｄ、　　Ｐｒ
ｅｓｓ　　　（米国ニューヨーク）発行、（１９７６）
ｉ１他、Ｐｒｏ　　、　　Ｎｕｃｌ、　　八ｃｉｄ　　
Ｒｅｓ、　　Ｍｏ１ｅｃ、　　Ｂｉｏｌ、ｌ　　２　１
　　：１０１〜１４１　　（１９７８）；Ｋｈｏｒａｎ
ａ、　　５ｃｉｅｎｃｅ。

２０３：６１４〜６２５　　（１９７９）　〕。なお、
ＤＮＡの合成は、自動合成装置を用いて行なうこともで
きる。

Ｍａｃ−１アルファ−サブユニット遺伝子を含有してい
ると考えられる真核細胞Ｄ　Ｎ　Ａ　８　％物から該遺
伝子をクローニングすることが可能である。

Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットタンパク質ヲコード
する遺伝子を同定しクローニングするためには、ＤＮＡ
ライブラリー、より好ましくはｃ　Ｏ：’ｌ　、Ａライ
ブラリーのスクリーニングを行なって上述したオリゴヌ
クレオチドプローブとハイブリダイズする能力を調べる
。好適なりＮＡ調製物（例えば、ヒトゲノムＤＮＡ）を
酵素的に切断またはランダムに切断し、組換えベクター
に連結する。しかる後、これらのベクターについて、上
述したオリゴヌクレオチドプローブに対してハイブリダ
イズする能力を測る。ハイブリダイゼーションの手法は
、（米国ニューヨーク州Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａ
ｒｂｏｒ）発行、（１９８２））や、Ｈａｙｍｅｓ他に
よるｒＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄ　Ｈｂｒｉｄｉｚａｔｉ
ｏｎ　ａ　Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　　Ａ　　ｒｏａｃｈ＋
　　ＩＲＬＰｒｅｓｓ　（英国オックスフォード）発行
、１９８５Ｊに開示されている。その後、そのようなハ
イブリダイゼーションを行なうことができるベクターを
分析して、該ベクターが含有するＭａｃ−１アルフア一
サブユニツト配列の度合と性質を求める。純粋に統計学
的な考察に基づけば、僅か１８のヌクレオチドを有する
オリゴヌクレオチドプローブを用い（ハイブリダイゼー
ショススクリーニングを介して）　Ｍａｃ　−１アルフ
ア一サブユニツト分子をコードする遺伝子のようなある
遺伝子を明瞭に同定することができるはずである。

上述の方法によって得られたクローン化Ｍａｃ−１アル
ファ−サブユニット遺伝子は、発現ベクターに作動に結
合され、原核細胞または真核細胞に導かれてＭａｃ７１
アルファ−サブユニットタンパク賞を産生ずる。そのよ
うな操作の技術は、上述したＭａｎｉａｔｉｓの著書に
開示されており、当該分野では周知である。

ｍ、Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットの本発明を導い
た事実の一つは、Ｍａｃ−１分子のアルファ−サブユニ
ットをコードするｃＤＮＡ配列を発見したことである。

この配列（またはこの配列の一断片）を機能プロモータ
に作動的に結合する（ｏｐｅｒａｂｌｙ　ｌｉｎｋｉｎ
ｇ）ことにより、細胞または微生物の中でＭａｃ−１ア
ルフアサブユニツト（またはその機能性３Ｍ’ｌＬ体）
を発現させることが可能である。

ＤＮＡのような核酸分子は、転写と翻訳の調節に関する
情報を含有するヌクレオチド配列を含有し、さらに、そ
のような配列が、ポリペプチドをコードするヌクレオチ
ド配列に作動的に結合されていると、当該ポリペプチド
を「発現する能力がある」と言われている。作動的な結
合とは、調節に関与するＤＮＡ配列と、発現しようとす
るＤＮＡ配列とが遺伝子発現を可能にするように結合さ
れている結合である。遺伝子発現に必要な調節領域の厳
密な特性は微生物によって変化し得るが、船釣には、プ
ロモーター領域を含まなければならず、このプロモータ
ー領域は、原核細胞においては、（ＲＮＡ転写の開始を
支配する）プロモーターと、ＲＮＡに転写されたときに
タンパク質合成の開始に信号を与えるＤＮＡ配列との両
方を含有している。真核細胞における調節領域は、一般
に、ＲＮＡ合成の開始を支配するのに充分なプロモータ
ー領域を含む。

２種類のＤＮＡ配列（例えば、プロモーター領域のＤＮ
Ａ配列とＭａｃ−１アルファ−サブユニットをコードす
るＤＮＡ配列）は、それらの２種類のＤＮＡ配列の間の
結合の性質が次のような場合でないならば、作動的に結
合されていると言われる：すなわち、（１）フレームシ
フト変異を生じさせ、ｆ２）Ｍａｃ−１アルファ−サブ
ユニットをコードする配列の転写を誘導するプロモータ
ー領域配列の能力を妨害し、または、（３）　Ｍ　ａｃ
　−１アルファ−サブユニットをコードする配列の被転
写能がプロモーター領域によって妨害される。したがっ
て、プロモーター領域が、あるＤＮＡ配列の転写を実施
させることができるならば、Ｈｌ　Ｄ　Ｎ　Ａ配列に対
してプロモーター領域は作動的に結合されているという
ことになろう。

本発明は、原核細胞または真核細胞においてＭａｃ−１
アルファ−サブユニット（または、その機能性誘導体）
を発現させることを含む。原核細胞（例えば、Ｅ、ｃｏ
ｌｉ、　Ｂ、５ｕｂｔｉｌｉｓ＋　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓ。

鎚聾旦匣匹組など）においてＭａｃ−１アルファ−サブ
ユニット（またはその機能性誘導体）を発現させるため
には、Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットをコードする
配列を原核細胞用プロモーターに作動的に結合させるこ
とが必要である。そのようなプロモーターは、構成性（
ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ）であってもよいが、より好
ましくは調節性（ｒｅｇｕＩａｔａｂｌｅ　）　、すな
わち、誘導性（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ）または脱抑制性（
ｄｅｒｅｐｒｅｓｓｉｂｌｅ）のものである。構成性プ
ロモーターの例としては、バクテリオファージλのｉｎ
ｔプロモーター　ｐＢＲ３２２のβ−ラクタマーゼ遺伝
子のｂｌａプロモーター、およびｐＢＲ３２５のクロラ
ムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ遺伝子のＣ
ＡＴプロモーター等が挙げられる。誘導性原稿プロモー
ターの例としては、バクテリオファージλの主要右部プ
ロモーターと左部プロモーター（ＰＬとＲ＋＋）　、Ｅ
、ｃｏｌｉのの江ＪｉｒｅＣ几ハ媛、釦虹および」虹プ
ロモーターα−アミラーゼ（Ｕ１ｍａｎｅｎ他、Ｊ、Ｂ
ａｃｔｅｏｒｉｏｌ、＋１６２：１７６〜１８２　　（
１９８５））、Ｂ。

５ｕｂｔｉｌｉｓのσ−２８特異的プロモーター（Ｇｉ
ｆｍａｎ他、蝕匣、ａｚ：ｔｔ〜２０（１９８４））、
Ｂａｃｉｌｌｕｓのバクテリオファージ類の各種プロモ
ーター（Ｇｒｙｃｚａｎ他、Ｔｈｅ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａ
ｒ　Ｂｉｏｌｏ　　ｏｆｔｈｅ　Ｂａｃｉｌｌｉ　ｓ　
Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　Ｉｎｃ、　　（米国ニ
ューヨーク）発行、（１９８２））、鎚匹Ｈ竺圧竺プロ
モーター（１４ａｒｄ他、Ｍｏ１．　Ｇｅｎ、　Ｇｅｎ
ｅｔ、、　２０３　：４６８〜４７８　（１９８６））
。原核プロモーターは、Ｇ１ｉＣｋ　　（Ｊ、　Ｉｎｄ
、　Ｍｔｃｒｏｂｉｏｌ、＋土：２７７〜２８２　（１
９８２）　）　、Ｃｅｎａｔｉｅｍｐｏ　（Ｂｔｏｃｈ
ｉｏ＋ｉｅ。

６８：５０５〜５１６　（１９８６））、およびＧｏｔ
ｔｅｓｌｌ＋ａｎ　　（Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｇｅｎｅ
ｔ、、　　１８　：　４１５〜４４２　（１９８４））
によってまとめられている。

原核細胞における発現には、遺伝子をコードする配列の
上流にリポソーム結合部位の存在が必要である。そのよ
うなリポソーム結合部位は、例えば、Ｇｏｌｄ等（Ａｎ
ｎ、　Ｒｅｖ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、＋　　３５　：
　３６５〜４０４　（１９８１））によって開示されて
いる。

酵母、菌類、動物細胞または植物細胞のような真核細胞
における発現が所望されるときには、そのような真核細
胞宿主において転写を導くことができるプロモーターを
用いることが必要である。

好ましい真核プロモーターとしては、マウスのメタロチ
オネイン■遺伝子のプロモーター（Ｈａｍｅｒ他、Ｊ、
　Ｍｏ１．八　１．　Ｇｅｎ、＋上：２７３〜２８８（
１９８２））、ヘルペスウィルスのＴＫプロモーター（
ＭｃＸｎｉｇｈｔ、　Ｃｅ１ｌ＋　　３土：３５５〜３
６５（１９８２））、ＳＶ４０初期プロモーター（Ｂｅ
ｎｏｉｓｔ他、Ｎａｔｕｒｅ　（Ｌｏｎｄｏｎ）　、２
９０　：　３０４〜３１０　（１９８１））、酵母の月
１１遺伝子プロモーター（Ｊｏｈｎｓ　ｔｏｎ他、Ｐｒ
ｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ。

Ｓｅｔ、（ＵＳＡ）　、７９　：　６９７１〜６９７５
釘り二已し辷Ａ）Ｓ　８上：５９５１〜５９５５（１９
８４））が挙げられる。

広く知られているように、真核ｍＲＮＡの翻訳は、最初
のメチオニンをコードしているコドンで開始される。こ
のため、真核プロモーターとＭａｃ−１アルフアサブユ
ニツト（またはその機能性誘導体）との間の連結が、メ
チオニンをコードすることできる介在コドン（すなわち
、ＡＵＧ）を含有しないようにしておくことが好ましい
。そのようなコドンが存在していると、融合タンパクが
形成される（Ｍａｃ−１をコードしているＤＮＡ配列と
同一の読取り枠内にＡＵＧコドンがある場合）か、ある
いはフレームシフト変異が生じる（Ｍａｃ−１をコード
する配列と同一の読取り枠内にＡＵＧコドンがない場合
）。

Ｍａｃ−１タンパク質（または、その機能性誘導体）を
コードするＤＮＡ配列は、プロモーターに作動的に結合
されると、各種の適当な手段（形質転換、トランスフェ
クション、接合、プロトプラスト融合、エレクトロポレ
ーションなど）により受容細胞に導入される。

Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットをコードする遺伝子
とこれに作動的に結合されたプロモーターとは、非複製
型ＤＮＡ　（またはＲＮＡ）分子として受容細胞に導入
することがあるが、このときには、該分子は、線状分子
か、または、より好ましくは、共有結合性の閉じられた
環状分子となっているであろう。そのような分子は自律
複製をする能力がないので、Ｍａｃ−１アルファ−サブ
ユニットの発現は、一過性の発現を通じて起こることに
なるであろう。この代わりに、導入配列を宿主染色体に
組込むと恒久的な発現が起こるであろう。

導入配列は、受容細胞において自律複製能のあるプラス
ミドまたはウィルスベクターに挿入することが好ましい
。この目的には、いろいろな種類のベクターを使用する
ことができる。プラスミドまたはウィルスベクターを選
択するに際して重要な因子は次のとおりである二当該ベ
クターを含有する受容細胞を認識し、そのベクターを含
有しない受容細胞から選別し易いこと；特定の宿主細胞
において所望されるベクターのコピー数；異なる種類の
宿主細胞間における「シャトル」ベクターとして機能す
ることが所望されているかということ。好ましい原核ベ
クターとしては、Ｅ、　ｃｏｌｔ中で複製することがで
きるようなプラスミド（例えば、ｐＢＲ３２２、Ｃｏ１
Ｅ１、ｐｓｃｌｏｌ、ｐＡＣＹＣｌ　８４、πＶＸ）が
挙げられる。そのようなプラスミドは、例えば、Ｍａｎ
ｉａｔｉｓ他によるｒＭｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃ１ｏｎｉ
ｎ　＋　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒ　　Ｍａｎｕａｌ。

Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｐｒｅｓｓ　
（米国ニューヨーク州）発行、１９８２Ｊに開示されて
いる。バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）のプラスミドとし
ては、ｐｃ　１９４、ｐＣ２２１、ｐＴ１２７等が挙げ
られる。そのようなプラスミドは、Ｇｒｙｃｚａｎによ
るｒＴｈｅ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏ　　ｏｆ　
ｔｈｅ　Ｂａｃｉｌｌｉ、　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅ
ｓｓ　（米国ニューヨーク州）発行、１９８２．３０７
〜３２９頁」に示されている。好適なストレプトミセス
（旦島蛙羽匹競）のプラスミドとしては、ｐＩＪｌ　０
１　（Ｋｅｎｄａｌｌ他、Ｊ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、
＋　１６９　：４１７７〜４１８３　（１９８７））、
およびφＣ３１のようなストレプトマイセス・バクテリ
オファージ（Ｃｈａ　ｔｅｒ他、５ｉｘｔｈ　Ｉｎｔｅ
ｒｎａｔｉｏｎａｌＳ　ｔａ　ｏｓｉｕｍ　ｏｎ　Ａｃ
ｔｉｎｏｍ　ｃｅｔｅｌｅｓ　Ｂｉｏｌｏ　　＋＾ｋａ
ｄｅｍｉａｉＫａｉｄ□　　（Ａンガリー、ブタペスト
）発行、１９８６．４５〜５４頁〕が挙げられる。シュ
ードモナス（Ｐｒｅｕｄｏｍｏｎａｓ　）のプラスミド
は、Ｊｏｈｎ他によるｒＲｅｖ、　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｄ
ｉｓ、、　８　：　６９３〜７０４（１９８６）Ｊおよ
ヒＩｚａｋｉによる［用虹」ユバ叩虹凡１．，３３ニア
２９〜７４２　　（１９７８）Ｊにまとめられている。

好ましい真核プラスミドとしては、ＢＰＶ、ワタシニア
、ＳＶ４０．２−ミクロンサークル等、およびそれらの
ｍＮ一体がある。そのようなプラスミドは当該分野でよ
く知られている（Ｂｏｔｓｔｅｉｎ他、Ｍｉａｍｉ　Ｗ
ｎｔｒ、　Ｓ　ｍ　、上９：２６５〜２７４（１９８２
）　　；　Ｂｒｏａｃｈ、　Ｔｈｅ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａ
ｒ　Ｂｉｏｌ。

ｏｆ　ｔｈｅ　Ｙｅａｓｔ　５ａｃｃｈａｒｏｎ＋　ｃ
ｅｓ　：　Ｌｉｆｅ　Ｃｃｌｅ　ａｎｄＩｎｈｅｒｉｔ
ａｎｃｅ、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ＋Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｔｎｇ　ｌ１
ａｒｂｏｒｓ米国ＮＹ、４４５〜４７０（１９８１）　
　；Ｂｒｏａｃｈ、　Ｃｅ１１．　２８　：　２０３〜
２０４　　（１９８２）　　；Ｂｏｌｌｏｎ他、Ｊ、　
Ｃｌ１ｎ、　Ｈｅｍａｔｏｌ。

０ｎｃｏ１．＋上０　：　３９〜４８（１９８０）　；
Ｍａｎｉａｔｉｓ。

Ｃｅ１ｌ　Ｂｔｏｌｏ　　：八Ｃｏｍ　ｒｅｈｅｎｓｉ
ｖｅ　Ｔｒｅａｔｉｓｅ、　　Ｖｏｌ。

３　、Ｇｅｎｅ　Ｅｘ　ｒｅｓｓｉｏｎ、　Ａｃａｄｅ
ｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　　（米国ニューヨーク）発行、５
６３〜６０８　（１９８０）参照〕。

ＩＶ、Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットまたはそのの 本発明は、Ｍａｃ−ルセブター分子のアルファ−サブユ
ニットの核酸配列とアミノ酸配列を提供する。これを見
出したことにより、組換えＤＮＡ技術を利用してＭａｃ
−１アルフア一サブユニツト分子を産生ずることができ
る。以下に述べるように、本発明は、Ｍａｃ−１分子の
アルファ−サブユニットそのものの抗炎症剤としての用
途にも関する。好ましい態様においては、Ｍａｃ−１分
子のアルファ−サブユニットをそのベータ−サブユニッ
トと組合せて使用する。より好ましい態様では、Ｍａｃ
−１のアルファ−サブユニットとベータ−サブユニット
とからヘテロダイマーが形成されるような組合せで用い
る。さらに好ましくは、そのようなヘテロダイマーが、
組換えによるＭａｃ−１アルファ−サブユニットまたは
その機能性誘導体を含有するものである。そのような組
合せは各種の方法を用いて得ることができる。例えば、
Ｍａｃ　−１のベータ−サブユニットをＭａｃ−１のア
ルファ−サブユニットとは独立して製造した後、２つの
分子を混合してもよい。しかしながら、Ｍａｃ−１のア
ルファ−サブユニットとベータ−サブユニットの両方を
同じ宿主細胞で産生させて、それらが自己集合してＭａ
ｃ−１ヘテロダイマーレセプター分子を形成し易くする
ことが好ましい、Ｍａｃ−１のベータ−サブユニット（
これは、ＬＦＡ−１およびｐ１５０．９５にも共通して
いる）は、化学合成または組換えＤＮＡ技術のいずれに
よって製造してもよい（Ｋ　ｉｓｈ　ｉｍｏ　ｔｏ他、
Ｃｅ１１．　４８　：　６８１〜６９０　（１９８７）
）、Ｍａｃ−１のベータ−サブユニットのクローニング
については、本出願人と同一人の出願に係る米国特許出
願第１９．４４０号（１９８７年２月２６日出願）に開
示されていることを参考のために言及しておく。

本発明は、その−態様において、Ｍａｃ−ルセプター分
子のアルファーザブユニットの核酸配列とタンパク質配
列に関する。この発現により、組換えＤＮＡ技術を利用
して、細胞付着の拮抗剤として機能することのできるＭ
ａｃ−１アルファ−サブユニットの機能性誘導体を産生
させることができる。本明細書において用いる「細胞付
着の拮抗剤（ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ　ｏｆ　ｃｅｌｌｕ
ｌａｒ　ａｄｈｅｓｉｏｎ　）　Ｊとは、細胞／細胞付
着または細胞／基質付着の過程を抑制する能力を有する
分子を意味する。ある特定の化合物が拮抗剤であるか否
かの決定は、内皮細胞への単球付着、好中球凝集、ある
いは、好中球のｉＣｂａロセツト化を測定することによ
り行なうことができる。細胞付着の好適な測定法は、例
えば、Ａｎｄｅｒｓｏｎ他によるｒＪ、　Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ、、　１３７　：１５〜２７　　（１９８６）ＪやＫ
ｅｉｚｅｒ他によるｒＥｕｒ。

Ｊ、　Ｉｎｕ＋＋ｕｎｏ１．、１７　：　１３１７〜１
３２２　（１９８７）　Ｊにおいて示されているので参
考のために記しておく。細胞付着の拮抗剤は、抗炎症剤
として使うこともできる。

本明細書において用いるＭａｃ−１のアルファ−サブユ
ニットの「機能性誘導体（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｄｅｒ
ｉｖａｔｉｖｅ）　Ｊとは、Ｍａｃ−１のアルファ−サ
ブユニットの生物学的活性と実質的に同一の生物学的活
性（機能上または構造上のいずれかにおいて）を有して
いる化合物である。生物学的活性の例としては、Ｍａｃ
−１の天然リガントに結合する能力やＬＦＡ群糖少糖タ
ンパク質−サブユニットに結合する能力が含まれる。こ
のような結合能は、内皮を通る顆粒球移動、顆粒球凝集
およびｉＣ３ｂロセント化のような付着に関連する現象
を抑制すると考えられる。２つの分子が実質的に同一の
構造を有する場合、あるいは、実質的に同一の生物学的
活性を有する場合には、それらの分子は「実質的に同一
（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ　５１ｍ１ｌａｒ　）　
Ｊと言う。

Ｍａｃ−１のアルファ−サブユニットの「機能性誘導体
」とは、該Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットの「断片
（ｆｒａｇｍｅｎｔｓ　）　Ｊおよび「変異型（ｖａｒ
ｉａｎｔｓ）　Ｊの両方を含むものとする。ｒＭａｃ＝
１のアルファ−サブユニットの断片」とは、該分子を分
断して得られる全てのポリペプチドを意味する。ｒＭａ
ｃ−１のアルファ−サブユニットの変異型」とは、当該
分子に全体または一部が構造において実質的に同一な分
子であって、該「変異型」が、Ｍａｃ−１のアルファ−
サブユニットの活性に同じか、またはＭａｃ−１の活性
を抑制するような少なくとも１種類の生物学的活性を有
しているものを意味する。すなわち、ある分子が、Ｍａ
ｃ−１の活性と同じか、またはそのような活性を抑制す
るような少なくとも１種類の生物学的活性を有していれ
ば、当該分子はＭａｃ−１アルファ−サブユニットの「
変異型」と考え、ある分子が他の分子において存在しな
い１個またはそれ以上のアミノ酸を含有している場合や
、あるいは、２つの分子におけるアミノ酸残基の配列が
同一でない場合においても「変異型」という語を使用す
る。したがって、例えば、Ｍａｃ−１のアルファ−サブ
ユニットに存在する（または存在しないＨ個またはそれ
以上のアミノ酸残基を欠如している（または含有してい
る）化合物も、該化合物がＭａｃ−１のアルファ−サブ
ユニットの生物学的活性に類似する（あるいは該活性に
抑制的な）生物学的活性を有していれば、Ｍａｃ−１の
アルファ−サブユニットの変異型とみなす。「生物学的
活性（ｂｉｏｌｏ−ｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ）　
Ｊという語は、「構造的（ｓ　ｔｒｕｃ−ｔｕｒａｌ）
　Ｊな活性に加えて［触媒的（ｃａｔａｌｙｔｉｃ）　
Ｊな活性等も含む（すなわち、Ｍａｃ−１のベータ−サ
ブユニット、抗Ｍａｃ−１アルファ−サブユニット抗体
、ｉＣ３ｂ、または、Ｍａｃ−１の他の天然リガントの
ような他の分子に結合する能力）ものとする。

本発明は、Ｍａｃ−１分子のアルファ−サブユニットの
機能性誘導体を製造するための方法を提供する。そのよ
うな誘導体を得るためには、Ｍａｃ　−１アルファ−サ
ブユニットをコードするＤＮＡ、ＲＮＡ、または（より
好ましくは）ｃＤＮＡに突然変異誘発を起こさせればよ
い。突然変異誘発は、ランダムであってもよく、あるい
は部位特異的であってもよい。さらに、突然変異誘発は
、自発的なものもあるが、化学的手法、放射性手法また
は組換え技術を用いて誘発させることもできる。

さらに、本発明は、特定のアミノ酸残基を欠いているか
、あるいは、別のアミノ酸残基を含有しているが、細胞
付着を増大させるか抑制させる能力を有するａ化性誘導
体にも関する。

化学的変異誘発剤としては、塩基アナログ（例えば・、
５−ブロモウラシル、または２−アミノプリン）：脱ア
ミノ化剤（例えば、亜硝酸、ヒドロキシルアミンなど）
；アルキル化剤（例えば、メチル・メタンスルホネート
、ニトロソグアニジンなど）；あるいはシフト型変異剤
（ｉｎｔｅｒｃｏｌａｔｉｎｇａｇｅｎｔ　）　　（例
えば、アクリジンオレンジ、エチジウムプロミド、ブソ
ラレンなど）が挙げられる。

放射線変異誘発は、紫外線、ガンマ線、Ｘ線などによっ
て引き起こすことができる。核酸分子の突然変異誘発に
関する技術は、ＭｉｌｌｅｒによるｒＥｘ　ｅｒｉｅ＋
ｅｎｔｓ　ｉｎ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏ　　
、　ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ　（米国ニューヨーク）発行、１９７２」や
５ｉｌｈａｖｙ他によるｒ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｗ
ｉｔｈ　Ｇｅｎｅ　Ｆｕｓｉｏｎｓ、　　Ｃｏ１ｄ　Ｓ
ｐｒｉｎｇ　）Ｉａｒｂｏｒしａｂｏｒａｔｏｒｙ　（
米国ニューヨーク）発行、１９８４Ｊを参考にすればよ
い。

Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットをコードする核酸の
所望の部位に特異的な突然変異を起こすには、部位特異
的突然変異誘発を用いることができる。簡単に言えば、
この方法は、一般に、確定した所望のＤＮＡ配列を有す
る合成オリゴヌクレオチドを合成することを含む。その
ようなオリゴヌクレオチドの合成法はＩｔａｋｕｒａ他
によるｒ　Ａｎｎ。

Ｒｅｖ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、、５３　：　３２３〜３５６
　　（１９８４）　Ｊに示されている。Ｍａｃ　　１ア
ルファ−サブユニットまたはその機能性誘導体をコード
する核酸は、一般に、Ｍ１３、φ×１７４などのような
二重鎖ベクター上にサブクローニングされ、該ベクター
の一本鎖を互いに分離することになる。その後、該ベク
ターの一本鎖は、前記合成オリゴヌクレオチドの存在下
に培養される。オリゴヌクレオチドのＤＮＡは確定して
いるので、Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットをコード
する核酸の任意の領域と塩基対合することのできるオリ
ゴヌクレオチドを構成することが可能である。該オリゴ
ヌクレオチドと一本鎖プラスミドとの間に塩基対合が生
じると、ＤＮＡポリメラーゼを用いてオリゴヌクレオチ
ドを伸長させ二本鎖ＤＮＡ分子を作り、しかる後、ＤＮ
Ａリガーゼにより該分子をシールすることができる。こ
の二本１Ｎ　Ｄ　Ｎ　Ａ分子を細胞に導入すると、生保
存的ＤＮＡ複製の結果、Ｍａｃ−１アルファ−サブユニ
ットをコードする配列にオリゴヌクレオチド断片のＤＮ
Ａ配列が移入された子分子が生じる。

本発明のＭａｃ−１アルファ−サブユニットまたはその
機能性誘導体は、よく知られているＭｅｒｒｉｅｆｉｅ
ｌｄ法その他のペプチド合成法を用いて化学的方法によ
り合成することもできる。別の方法として、化学合成（
例えば、ホスホジエステル合成法を用いる）により核酸
分子を得た後、発現させて所望の分子を製造することも
できる。

このように、Ｍａｃ−１をコードする配列の特定の部位
に点突然変異を起こさせ外来性ＤＮＡ配列を導入しよう
とする場合、あるいは、そのような配列において通常は
存在するヌクレオチドを削除を起こさせようとする場合
には、当該突然変異ないしは配列を含有する（または欠
如する）ようなオリゴヌクレオチド断片を設計した後、
上述した手法を行なうことになる。Ｍａｃ−１アルファ
−サブユニットをコードする核酸の特定の領域に突然変
異を起こしたり外来性ＤＮＡを導入するためには、突然
変異誘発を所望している領域のＤＮＡ配列に相補的なフ
ランキングＤＮＡ配列によって、当該突然変異の配列ま
たは外来性ＤＮＡの配列を囲むことが必要である（Ｊｅ
ｎｋｉｎｓ他、…ｑ、５　：　２４４〜２４７　（１９
８６）　　；Ｄｏｅｒｆｌｅｒ。

Ａｎ　ｅｗ、　Ｃｈｅｍ、　Ｉｎｔ、　Ｅｄ、　Ｅｎ　
１．＋　２３　：　９１９〜９３１　　（１９８４）　
　；Ｋａｉｎａ、　Ｂｉｏｌ、　Ｚｅｎｔｒａｌｂｌ、
。

９９：５１３〜５３１　　（１９８０）；Ｋｕｎｋｅｌ
。

Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　（Ｕ
ＳＡ）＋　　８２　：　４８８〜４　９　２　　（１９
８５）　　　；Ｎ１５ｂｅｔ（也、　Ｇｅｎｅ−Ａｎａ
ｌ。

Ｔｅｃｈ、、　２　：　２３〜２９　（１９８５）　　
；ｌ１ｉｎｅｓ他、Ｇｅｎｅ、１１：２０７〜２１８　
（１９８０）；Ｍｅｓｓｉｎｇ　　他、　Ｎｕｃｌ、　
　八ｃｉｄ、　　Ｒｅｓ、、　　　９　　：　　３　０
　９（１９８１））　　。

突然変異は、組換えＤＮＡ技術を応用することによって
も生じ得る。例えば、Ｍａｃ−１アルファ−サブユニッ
トをコードする核酸分子のヌクレオチド配列を走査して
、制限酵素エンドヌクレアーゼによって認識され得るよ
うなオリゴヌクレオチド部位を明らかにする。その後、
そのようなエンドヌクレアーゼを用いて、特定の認識部
位において核酸配列を特異的に切断することができる。

Ｍａｃ−１をコードする配列の２つの位置を認識しく且
つその位置において切断する）制限酵素エンドヌクレア
ーゼを使用することにより、Ｍａｃ−１アルファ−サブ
ユニットをコードする配列の１つの断片を切除すること
ができる。別の方法として、この目的のために２種類の
異なるエンドヌクレアーゼを用いることも可組である。

ＤＮＡリガーゼの存在下に切断分子を培養（インキュベ
ート）することにより、Ｍａｃ−１アルファ−サブユニ
ットをコードする配列を再シールして、（切除断片を欠
く）単一の配列を形成させることができる。

Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットをコードする配列中
に適当な制限酵素エンドヌクレアーゼ認識部位が存在し
ない場合には、上述したような部位特異的突然変異誘発
法により、当該配列中にそのような部位を導入すること
ができる。

別の方法として、エキソヌクレアーゼを用いて、Ｍａｃ
　　１アルファ−サブユニットをコードする配列を切断
し自由末端を［かじるにプリング：　ｎｉｂｂｌｉｎｇ
）　Ｊことによっても突然変異を導くことができる。こ
のような処理によれば、欠失のみならず、フレームシフ
ト変異やその他の突然変異も導くことができる。さらに
、この方法は、Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットをコ
ードする配列に新規な制限酵素エンドヌクレアーゼ部位
を導入することができる。エンドヌクレアーゼ、ＤＮＡ
ＩＪガーゼ、およびエキソヌクレアーゼの使用法は、例
えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ他によるｒＭｏｌｅｃｕｌａｒ
　吐並旦ＬＡ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒ　　Ｍａｎｕａｌ、
　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　ＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａ
ｔｏｒｙ　（米国ニューヨーク州）発行、１９８２　Ｊ
に示されている。

組換えＤＮＡ技術は、また、Ｍａｃ−１アルファ−サブ
ユニットタンパク質（またはその機能性誘導体）と新規
なポリペプチドとから構成される融合タンパク質を製造
するのにも用いられる。この新規なポリペプチドとは、
特定のポリペプチドに限定されるものではなく、単一の
アミノ酸または一連の複数のアミノ酸から構成されるも
のである。

そのような融合分子は、フレームシフト変異を導かなよ
うに、当該新規ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を
、Ｍａｃ−１アルファ−サブユニット（またはその機能
性誘導体）をコードするＤＮＡ配列に結合することによ
って得られる。Ｍａｃ−１アルファ−サブユニット遺伝
子に融合され得る好ましいポリペプチドの例としては、
真核生物または原核生物のシグナル配列（Ｇｉｌｂｅｒ
ｔ他、米国特許第４，４１１．９９４号；　Ｃａ５ａｄ
ａｂａｎ他、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。

八ｃａｄ、　　Ｓｃｉ、　　（Ｕ　Ｓ　　Ａ）＋どし６
　　：　　４５３０　〜４５３３（１９７９））、また
は、Ｍａｃ−１アルファ−サブユニット（またはその機
能性誘導体）の安定性、生物学的半Ｗ期、または効能を
増大（または減少）させるポリペプチドがある。遺伝子
融合の方法論に関する優れた総括は、５ｉｌｈａｖｙ他
（ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｗＨｈ　Ｇｅｎｅ　Ｆｕｓｉ
ｏｎｓ　、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　ＨａｒｂｏｒＬ
ａｂｏｒａｔｏｒｙ　（米国ニューヨーク）発行、（１
９８４）　）によって与えられている。

Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットの各種断片あるいは
組換えＭａｃ−１アルファ−サブユニットを用いる免疫
に応答して抗体（特にモノクローナル抗体）を引き出す
ことができる。そのような抗体は、内皮細胞に対する幾
つかの白血球の結合を妨げるのに使うことができ、した
がって、抗炎症剤として用いることができる。

上述したような各種の方法を用いて、Ｍａｃ−１アルフ
ァ−サブユニットの断片を調製し、それらが細胞付着の
拮抗剤であるか否かを測定することができる。細胞付着
の拮抗剤であることが見出された断片は、本発明に従い
抗炎症剤として使用することができる。

本発明が導かれた一つの理由は、循環している好中球と
単球の付着能はＭａｃ−ルセプター分子の関与する相互
作用に起因するということを発見したことである。その
ような血球が炎症部位に移動しおよび（または）炎症に
寄与する各種のエフェクター作用を行なうためには細胞
付着が必要であるから、そのような細胞付着を抑制する
物質は炎症を弱めたり防止するであろう。Ｍａｃ−ルセ
プター分子は、好中球および単球の細胞の表面に存在す
る。これらの血球の成形表面や内裏細胞単層への付着は
、Ｍａｃ−ルセプター分子によって仲介されている。さ
らに、異物に食作用を行なう単球の能力はＭａｃ−ルセ
ブター分子によって仲介されることも見出されている。

このレセプター分子は、さらに、単球の化学キネシスと
化学走性にも寄与していると考えられることも見出され
ている。

Ｍａｃ−ルセブター分子がその天然の結合リガントに結
合する能力を阻害する物質は、このように、前述したＭ
ａｃ−１依存性の全ての機能を損うことができる。かく
して、本発明に従い、それらの物質は抗炎症剤として機
能することができる。

そのような薬剤としては、Ｍａｃ−１のアルファ−サブ
ユニット、Ｍａｃ−１（すなわち、アルファ−サブユニ
ットとベータ−サブユニットとから構成されるヘテロダ
イマー）、非結合のＭａｃ−１アルファ−サブユニット
とＭａｃ−１ベータ−サブユニットとから成る組成物、
および、Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットまたは該サ
ブユニットの断片に結合することのできる抗体がある。

本発明の一態様においては、そのような薬剤は、溶解性
のＭａｃ−１アルファ−サブユニット（または、溶解性
であるその機能性誘導体）から成り、天然のＭａｃ−１
アルファ−サブユニットがそのベータ−サブユニットに
結合するのを阻害ないしは抑制したり、あるいは、Ｍａ
ｃ−１がその天然の結合リガントに結合する能力を抑制
することができるものである。

そのような薬剤は全て本発明に従って使用することがで
きる。本発明の抗炎症剤は、非特異的防御系の反応によ
って引き起こされる炎症を治療することができるもので
ある。

「非特異的防御系反応」とは、免疫記憶を有することが
できない白血球によって仲介される反応である。そのよ
うな血球としてはリンパ球とマクロファージがある。本
明細書においては、炎症が、非特異的防御系の反応に起
因したり、仲介されたり、あるいは該反応に関連してい
るときには、炎症は非特異的防御系反応の結果であると
言うことにする。少なくとも部分的には、非特異的防御
系の反応によって生じる炎症の例としては、以下に述べ
るような状態に関連する炎症が挙げられる：成人呼吸窮
迫症候群；敗血症に派生する多発性器官損傷症候群；外
傷に派生する多発性器官損傷症候群；組織の再灌流損傷
；急性糸状休腎炎；反応性関節炎；急性炎症成分を伴な
う皮膚疾患；中枢神経系炎症疾患；熱損傷；血液透析；
白血球症（ｌｅｕｋａｐｈｅｒｅｓｉｓ　）　　；潰瘍
性大腸炎；クローン病；壊死性全腸炎；顆粒球輸注関連
症候群；サイトカイン誘導毒性およびアテローム硬化症
。

Ｍａｃ−１は、内皮組織に結合することのできる細胞上
に出現するので、患者にＭａｃ−１アルファ−サブユニ
ットまたはＭａｃ−１（アルファ−サブユニットとベー
タ−サブユニット）を投与すると内皮組織をイメージン
グもしくは視覚化することができる。さらに、この手法
によって、視覚化組織上に存在するＭａｃ−ルセプター
分子の結合リガントの量と分布に関する診断情報が与え
られる。

そのように使用する場合においては、ラジオアイソトー
プ、アフィニティラベル（例えば、ビオチン、アビジン
など）、螢光性ラベル、常磁性原子などを用いることに
より、Ｍａｃ−１アルファ−サブユニット（または、Ｍ
ａｃ−１のアルファ／ベータレセプター分子）に検知可
能になるようにラベルを付する。そのようなラベル化を
行なう手法は当該技術分野においてはよく知られている
。ラジオアイソトープ、酵素ラベル、螢光ラベル、常磁
性ラベル、電子密度ラベル、トキシンラベルなどを用い
ることにより、抗体（またはその断片）を検出可能にラ
ベルすることもできる。好ましいトキシンラベルには、
ジフテリアトキシン、リジン、コレラトキシンが含まれ
る。患者にそのようなラベル（標識）化分子を投与する
と炎症部位が明らかにされる。そのような検出用ラベル
は、また、患者の免疫系の状態を分析するのに使うこと
もできる。診断用イメージング（画像化）における抗体
の臨床的利用についての総括は、ＧｒｏｓｓｍａｎｒＵ
ｒｏｌ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｎｏｒｔｈ　Ａｍｅｒ、　１３
　：　４６５〜４７４（１９８６）　Ｊ　、Ｕｎｇｅｒ
他ｒｌｎｖｅｓｔ、　Ｒａｄｉｏｌ。

２０：６９３〜７００　（１９８５）Ｊ、およびＫｈａ
ｗ他ｒｓｃｉｅｎｃｅ　、　２０９　：　２９５〜２９
７（１９８０）Ｊによって行なわれている。

炎症部位に単球が自発的に移動する能力はＭａｃ＝１に
依存する（Ｋｅｉｚｅｒ他、Ｅｕｒ、　Ｊ、Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ、を上７：１３１７〜１３２２　（１９８７））、
Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットまたはＭａｃ−１（
アルファサブユニットとベータサブユニット）を投与す
ることによりそのような移動を抑制し得る。

同様に、内皮細胞に対する単球細胞の付着能力、および
単球細胞が化学走性、化学キネシスまたは食作用を受け
る能力もＭａｃ−１に依存することが見出されている（
Ｋｅｉｚｅｒ他、Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、＋
２７：１３１７〜１３２２　（１９８７））。本発明の
抗炎症剤はそのような活性を抑制するのに用いることが
できる。

Ｉ　ＣＡＭ類（例えば、Ｉ　ＣＡＭ−１）は、特定のヒ
トウィルスによって認識される〔特に、主型（ｍａｊｏ
ｒ　ｔｙｐｅ）のライノウィルスはＩ　ＣＡＭ−１に結
合する〕。このようなウィルスは、この認識によりヒト
細胞に結合し、この結果、ウィルス感染を仲介すること
になる。かくして、ウィルス感染の病因における中心的
な過程は、細胞レセプターとウィルスとの間の相互作用
である。

したがって、ＩＣＡＭ分子に結合するウィルスの能力を
抑制、競合または阻害する薬剤は、ウィルス感染（特に
ラインウィルス感染）の処置に応用することができる。

かくして、本発明は、Ｉ　ＣＡＭ−１と相互作用し、そ
れにより、細胞／ウィルス間結合およびウィルス感染を
防止したり、そのような感染の程度または期間を弱化ま
たは減少させることができるＭａｃ−１アルファ−サブ
ユニットまたはその機能性誘導体の能力に関する。

本発明にとって特に興味が深いのは、溶解化状態のＭａ
ｃ−１アルファ−サブユニット、Ｍａｃ−１アルファ−
サブユニットの断片等のようなＭａｃ−１アルファ−サ
ブユニットの機能性誘導体である。

そのような薬剤は、当該分子をＣＤ−１８群（ＣＤ−１
８７アミ’）−）　のべ−１−４７’ユニツトの分子と
検出させたことから成るヘテロダイマーとして患者に投
与することが好ましい。上述したようなウィルス感染を
治療するという目的を達成するためには、単一の薬剤と
してもよく、あるいは、一種以上の薬剤の組合せとして
もよい。

ウィルス感染を処置するためには、本発明に従う上述の
薬剤を（例えば、鼻腔的投与により）、ウィルスがＩ　
ＣＡＭ分子に結合する能力を抑制し、競合または阻害す
るのに充分な量で患者に投与する。そのような投与量は
、（各投与薬剤毎に）−般に、患者体重ｋｇ当り０．０
１ｐｇから１■であるが、これよりも多い量あるいは少
量を用いることもできる。

ウィルス感染を処置するために、このような薬剤は、「
予防のために」投与するか、または「治療のために」投
与してもよい。予防のために投与するときには、感染時
に先行（すなわち、感染時の前または直後）するがウィ
ルス感染の症状の前に薬剤を投与する。薬剤の予防投与
は、後続の感染を防止するか弱める機能を果たす。治療
のために投与するときには、実際のウィルス感染の症状
（例えば、ウィルスによる鼻内うっ血等の出現、あるい
は、体液内でのウィルスの検出や感染患者の血清内での
抗ウイルス抗体の検出など）の発生時（または発生直後
）に薬剤を投与する。薬剤の治療的投与は、実際の感染
を弱め、その感染の程度や期間を減少させる働きをする
。

Ｖ、Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットのＭａｃ−ルセ
プター分子（すなわち、αおよびβ−サブユニット）、
Ｍａｃ−１アルフア一サブユニツト分子、または、治療
上活性なその機能性誘導体を患者に投与することにより
、Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットの治療効果を明ら
かにすることができる。これらの分子は、化学合成によ
るか、あるいは、組換えＤＮＡ技術を用いることにより
得ることができる。さらに、タンパク質加水分解により
、Ｍａｃ−ルセプターの各種断片やそのアルファ−サブ
ユニットを得ることもできる。キャリアへのカップリン
グを増大させたり活性を向上させるために加えられた追
加のアミノ酸残基を有するような゛機能性誘導体を使用
することにより、分子の治療効能を増大させることもで
きる。

本発明の分子は、当該分子の化合物に通常および天然で
は見出されるような物質を実質的に含まないときには「
天然の混在物を実質的に含まない」と言うことにする。

本発明の治療用分子を患者に投与するに際して、投与量
は、患者の年齢、体重、性別、一般的な健康状態、以前
の病歴などの因子に依存する。一般的には、約１ｐｇ／
ｋｇ（患者体重）から１０■／ｋｇ（患者体重）の範囲
の投与量で、Ｍａｃ　　１アルファ−サブユニット（ま
たはその機能性誘導体）を投与することが望ましいが、
それより低い量や高い量も投与され得る。

本発明の分子の患者への投与は、静脈投与、筋肉内投与
、皮下投与、腸管的投与、または非経口投与などによっ
て行なわれる。投与は連続注入でもよく、あるいは、単
一または多回の固形投与などによって行なわれる。

本発明の抗炎症剤は、炎症を抑制するのに充分な量で患
者に与えられるものとする。当該薬剤の投与量、投与経
路などが炎症を弱めたり防止するのに充分であれば、そ
の量を炎症抑制に充分な量というものとする。本発明の
抗炎症剤は、炎症の発生前に投与して（予測される炎症
を抑制するため）もよく、あるいは、炎症の開始後に投
与してもよい。

組成物の投与が患者に受は入れられるときには、該組成
物は［薬理学的に許容できる（ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇ
ｉｃａｌｌｙ　ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ）　Ｊと言われる
。そのような薬剤の投与量が生理学的に意義があるとき
には、当該薬剤は「治療上の有効量で（Ｌｈｅｒａ−ｐ
ｅｕｔｉｃａｌｌｙ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ａｍｏｕｎ
ｔ）Ｊ投与されたと言う。薬剤の存在により患者の生理
に検出できるような変化が生じた場合には、その薬剤は
生理学的に意義がある。本発明の分子は既知の方法に従
って製剤化されて製薬的に許容できる組成物に調製され
、当該物質またはその機能性誘導体は製薬的に許容でき
る担体と混合される。好適な担体としては、例えば、ｒ
Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ
ｌＳｃｉｅｎｃｅ　　（第１６版）　Ｏｓｏ１ｍ集、米
国ペンシルバニア州Ｅａｓｔｏｎ、　　（１９８０）　
Ｊに記載されているようなヒトのタンパク質（例えば、
ヒト血清アルブミン）が挙げられる。有効投与を発揮す
る製薬的に効果のある組成物を調製するためには、好適
量の担体とともに、製薬的に有効な量のＭａｃ−１アル
ファ−サブユニットまたはその断片もしくは機能性誘導
体を組成物に含有させるようにする。

製薬上の手段を追加して、作用期間を調節することもで
きる。放出を調節した製剤（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄｒｅ
ｌｅａｓｅ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ）を得るには、
例え′ば・ポリマーを用いて、Ｍａｃ−１アルファ−サ
ブユニット（またはその断片もしくは機能性誘導体）と
結合させたりまたはそれらの化合物を吸収する。薬剤供
給の調節（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｃｌ　ｄｅｌｉｖｅｒｙ
）を行なうには、適当な巨大分子（例えば、ポリエステ
ル、ポリアミノ酸、ポリビニル、ピロリドン、エチレン
酢酸ビニル、メチルセルロース、カルボキシメチルセル
ロース、または硫酸プロタミン）を選択し、巨大分子の
濃度を選定するとともに、薬剤放出を行なうための移入
手段を定める。放出調節型の製剤により作用期間を調節
することのできる別の方法は、Ｍａｃ−１アルフア一サ
ブユニツト分子（またはその断片もしくは機能性誘導体
）をポリマー（例えば、ポリエステル、ポリアミノ酸、
ヒドロゲル、ポリ乳酸、またはエチレン／ビニルアセテ
ートコポリマー）の粒子に移入することである。

別の方法として、ポリマー粒子に当該薬剤を移入する代
りに、例えば、コアセルベーション法または界面重合の
ような方法で調製したマイクロカプセル（例えば、ヒド
ロキシメチル、セルロースマイクロカプセル、ゼラチン
マイクロカプセル、ポリメチルメタクリレートマイクロ
カプセル）、コロイド系薬剤放出剤（ｄｒｕｇ　ｄｅｌ
ｉｖｅｒｙ　ｓｙｓｔｅｍｓ　：例えば、リポソーム、
アルブミンミクロスフイア、ミクロエマルジョン、ナノ
粒子、マイロエマルジョンのナノ粒子）に当該分子を包
括させることもできる。これらの技術は、Ｒｅｍｉｎｇ
ｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａ−ｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉ
ｅｎｃｅｓ　　（１９８０）に示されている上述の一般
的な説明に加えて、以下の実施例を参照することにより
本発明を一層理解することができるであろう。以下の実
施例は説明のためのものであり、特に言及していない限
り本発明を限定するためのものではない。

実施例１ タンパク質の精製と配列決定 モノクローナル抗体−アフィニティクロマトグラフィに
より、白血球のＴｒｉｔｏｎＸ　−１００ライセード（
溶菌液）からＭａｃ−１のα／βコンプレックスを精製
した。この精製は、抗Ｍａｃ−１アルファ−サブユニッ
トモノクローナル抗体、ＬＭ２／１　　［Ｍｉｌｌｅｒ
他、Ｊ、　　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　１３８　：　２３８
１〜２３８３　（１９８７）］、または、より好ましく
は、抗Ｍａｃ−１β−サブユニットモノクローナル抗体
、Ｉ　Ｂ　４．５　（Ｗｒｉｇｈｔ他、Ｐｒｏｃ、　Ｎ
ａｔｌ、　Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、（ＵＳＡ）、　８０　：　５６９９〜５７０３
　（１９８３））を用いて行なった。アフィニティクロ
マトグラフィは、セファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）
に当該抗体を結合することによって行なった（Ｍｉｌｌ
ｅｒ他、Ｊ。

〜１０７６９　（１９８２）参照〕。

Ｍａｃ　−１産生細胞のライゼートは、Ｍｉｌｌｅｒ他
によるｒＪ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、１３８　：　２３８
１〜２３８３（１９８７）Ｊに記載の方法に従って調製
した。

３１Ｉ１１のプロティＡ／セファロース予備カラムとこ
れに直列に結合した３、　５　ｒａ　ｊ！のＩ　Ｂ　４
．５カラムに前記ライゼートを通した。なお、それらの
２つのカラムは、０．５％ＴｒｉｔｏｎＸ　−１００，
０，５％ソジウムデオキシコレート、２０ｍＭ　Ｔｒｉ
ｓ　−ＨＣ１（ｐＨ８）の５０ｍ１を用いて予備洗浄し
ておいた。

ライゼートを通した後、カラムを同じ溶液の４０ｍ１で
洗浄し、一連の洗浄で緩衝液のｐＨまたはイオン強度を
増加させることにより結合物質の溶出を行なった：１Ｈ
０ｍＡの０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ　−１００，０，１Ｍ
グリシン、ｐＨ９　；　２）　２０ｍｊｉ！の０．１％
ＴｒｉｔｏｎＸ　−１００，０，１Ｍグリシン、ｐＨ１
０：３）５０ｍｊｌ！の０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ　−１
００，０，１Ｍ　　ＴＥＡ、　ｐＨＩ　Ｌ、５　；　４
）　４０ｍｊ！の０．１４Ｍ　ＮａＣβ、０．５％Ｔｒ
ｉｔｏｎＸ　−１００，０，０１ＭＴｒｉｓ　−ＨＣ１
ｐＨ８゜分画成分の５ＤＳ−ＰＡＧＥによれば、結合物
質の大部分はｐＨ１１，５において溶出されたことを示
した。

アフィニティ精製抗原の５ＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動によ
りＭａｃ−１のアルファ−サブユニットを分離した。電
気泳動溶出後、エタノールを用いて分離α−サブユニッ
トを沈降させ還元し且つアルキル化した。０．１Ｍの重
炭酸アコモニウム、０．１ｍＭの塩化カルシウム、０．
３％のｚｗｉｔｔｅｒｚｅｎｔ　３−１４で精製アルフ
ァ−サブユニットの５０Ｍｇを溶解し、２％（ｗ／ｗ）
のトリプシンを３７℃で６時間用い、さらに、２時間毎
に１％トリプシンを追加して該サブユニットを消化した
。０４カラム（Ｖｙｄａｃ）上の逆相ＨＰＬＣにより、
得られたペプチドを分離し、０．１％トリフルオロ酢酸
中のアセトニトリル勾配（０〜６０％）を用いて２時間
にわたって溶出した。集めた分画成分を濃縮し、Ｂｉｏ
ｓｙｓｔｅｍｓの気相／液相配列決定装置によるミクロ
配列決定　（ｍｉｃｒｏｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）に供し
た。

サブユニットに特異的な免疫沈降が示したところによれ
ば、抗−βモノクローナル抗体／セファロースカラムか
ら溶出された主要分子はＭａｃ−１であった。好中球は
、白血球ライセード中の主要血球であり、また、ＬＦＡ
−１やｐ１５０，９５よりも多量のＭａｃ−１を出現さ
せるのであるから、上記の事実は予期されたとおりであ
る。

実施例２ ｃＤＮＡクローンの分離と配列決定 精製後のα−サブユニットをトリプシンを用いて消化し
、得られたペプチドを逆相ＨＰＬＣで分離し、タンパク
質ミクロー配列決定（ｍｉｃｒ。

ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）に供した（第１表）。ｐ１５０
，９５のα−サブユニットの配列［（：ｏｒｂｉ他、Ｂ
ＭＢＯＪ。

６　：４０２３〜４０２８（１９８７）］と］Ｍａｃ−
１アルファ−サブユニットペプチド配を比較するとかな
りの相同性のあることが示された。第１表は１．Ｍａｃ
−１アルファ−サブユニットのトリブチツクペプチドと
、ｃ　Ｄ　Ｎ　Ａ由来配列における位置を示す。この表
において、アミノ酸配列の帰属の判らない位置は「Ｘ」
で示し、また、不確定な位置はカッコ内に示している。

ペプチドは、ＩＢ４モノクローナル抗体／プロティンＡ
　／　５ｅｐｈａｒｏｓｅ上で精製されたＭａｃ−１か
ら得られたものである。

但し、ペプチド８６は、ＬＭ２／１モノクローナル抗体
／　５ｅｐｈａｒｏｓｅ上で精製されたＭａｃ−１から
得られたものであり、また、ペプチド８８と９０はそれ
らの供給源の両方から得られたものである。

オリゴヌクレオチドプローブ用のペプチド配列について
は下線を施している。

第一」−一表 ペプチド　アミノ酸配列 １４　　　Ｔ　Ｉ　Ｑ　Ｎ　Ｑ　Ｌ　Ｒ３２Ｖ　Ｑ　Ｓ
　Ｌ　Ｖ　Ｌ　Ｇ　Ａ　Ｐ　Ｒ４３Ｙ　Ｖ　Ｉ　Ｇ　Ｖ
　Ｇ　Ｄ　Ａ　Ｆ　Ｒ４４Ｙ　Ｑ　ＨＩ　Ｇ　Ｌ　Ｖ　
Ａ　Ｍ　Ｆ　Ｒアミノ酸残基 ３０７−３１３ ４００−４０９ ２６７−２７６ ４１０−４２０ ３Ｂ １ ７９＾ ９Ｂ （Ｓ） （Ｍ）　（Ｅ）　（Ｑ）　（Ｌ） 】５５ ６４ Ｌ　Ｆ　Ｔ　Ａ　Ｌ　Ｆ　Ｐ　Ｆ　Ｅ　Ｋ　　　　　　
　　７４４−７５３Ｖ　Ｄ　Ｓ　Ｄ　Ｍ　Ｎ　Ｄ　Ａ　
　Ｙ　Ｌ　Ｇ　　（Ｙ）　　　　３７９−３９０Ｘ　Ｑ
　　（Ｃ）　　Ｘ　Ｉ　Ｐ　Ｆ　Ｆ　Ｇ　Ｉ　Ｑ　Ｅ　
　　１０１５−１０２６８ Ｓ ０１ １４ ペプチド配列を利用して、 単一配列から成る４ 個オリゴヌクレオチドプローブを設計した。ペプチド８
８を選択して、Ｍａｃ−１のα−サブユニットに特異的
な４２−量体（４２−ｍａｒ）オリゴヌクレオチドを設
計した。このペプチドを選択した理由は、縮重レベルの
低いこと、また、Ｃ末端（すなわち、ｃＤＮＡの３′末
端側）近傍の領域においてｐ１５０．９５のα−サブユ
ニットと相同性を有しているからである。

Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼと［ｒ３２ｐｌ　−ＡＴ
Ｐを用いてオリゴヌクレオチドの末端をラベルし［Ａｌ
ａｎｉａｔｉｓ他、Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎ
ｇ、　Ａ　ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｕｎａｌ、　Ｃｏ
１ｄ　Ｓｐｉｒｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｉｅｓ　　（米国ニューヨーク州Ｈ９８２Ｆ、さらに
、このオリゴヌクレオチドを用いてＰＭＡ−誘導ＨＬ６
０細胞から、サイズ選択したｃＤＮＡライブラリーのス
クリーニングを行なった〔（：ｏｒｂｉ他、ＥＭＢＯＪ
、。

６：４０２３〜４０２８　　（１９８７））。５Ｘ１０
５個の一次組換体をプレートに配置し、ニトロセルロー
スフィルターに移し、−晩かけて予備ハイブリダイゼー
ションを行なった［Ｃｏｒｂｉ他、ＥＭＢＯＪ、、６：
４０２３〜４０２８　（１９８７））。

当該オリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーションは
、６　ｘＳＳＣｌｏ、１％ＳＤＳ、０．０５％ピロリン
酸ナトリウム、および１００μｇ／ｍｌのｔＲＮＡにお
いて３７℃で一晩かけて行なった。

ｔＲＮＡの非存在下に室温で３０分間、さらに、４５℃
で１５分間、上記と同し溶液でフィルターを洗浄した。

増悪スクリーンを有し予備フラッシュをかけたＸ線フィ
ルムに一晩かけて前記湿潤フィルターを露出した。

次に示す４２−ｍｅｒオリゴヌクレオチドを用いるスク
リーニング後、陽性シグナルを与えるファージプラーク
が得られた： ５　　’　　−ＡＣＣＣＡＧＧＴＧＡＣＣＴＴＣＴＴＣ
ＴＴＣＣＣＣＣＴＡＧＡＣＣＴＧＴＣＣＴＡＣＣＧＧ−
３’このファージプラークを、同じプローブを用いてさ
らに３回のサブクローニングとスクリーニングに供した
。全長ｃＤＮＡクローンを単離するために、次の配列： ５　’　　−ＧＧＡＴＧＧＡＣＴＧＧＴＡＧＡＣＣＴＧ
ＡＣＴＧＴＡＧＧＡＧＣ−３’を有する末端ラベル化オ
リゴヌクレオチドと、部分ｃ　Ｄ　Ｎ　ＡクローンλＭ
１４の５′末端からのニックトランスレーション化プロ
ーブとを用いてフィルターの再スクリーニングを行なっ
た。

４２−ｍａｒを用いてＰＭＡ誘導ＨＬ−６０ｃＤＮＡラ
イブラリーから５ＸＩＯ’の一次組換え体をスクリーニ
ングすることにより、１６の陽性クローンが得られ、最
長のもの（２Ｍ１４．２．９ｋｂ）を選択して配゛列決
定に供した（第１図参照）。この２Ｍ１４ｃＤＮΔ由来
のアミノ酸配列は、精製Ｍａｃ−１アルファ−サブユニ
ットに由来するトリブチツクペプチドのうちの４個をコ
ードしている。

Ｍａｃ−１アルフアサブユニツトの全長のｃ　ＤＮＡク
ローンを分離するために、１．　ＯＫ　ｂのＥｃｏＲＩ
断片と２Ｍ１４の５′末端から得られた３　０−ｍａｒ
を用いてライブラリーを再スクリーニングし、当該タン
パク質のＮ末端に向かって伸びている２４個の新しいｃ
ＤＮＡを選んだ。これら２４のｃＤＮＡのインサートを
分離すると、それらのうちの３個（２Ｍ２３．２Ｍ４２
および２Ｍ９０）が、２Ｍ１４の５′側を２Ｋｂ伸びて
いることが示された（第１図参照）。

２Ｍ２３は、全長Ｍａｃ−１アルファサブユニットのｃ
ＤＮＡクローンである。これは、当該タンパクのＮ末端
［Ｍｉｌｌｅｒ他、Ｊ、　　［ｍｍｕｎｏｌ、、　１３
８　：２３８１〜２３８３　（１９８７）〕、およびλ
Ｍ１４では検知されないトリブチツクペプチドをコード
している。２Ｍ１４と２Ｍ２３は、互いの重複領域にお
いては同一の制限地図を有している。

実施例３ 制限酵素マツピングと配列決定 陽性ファージから限られたＤＮＡを精製し、ｐＵｃ１３
、ｐＵｃ１８またはｐＵｃ１９にクローニングし、標準
的な手法により制限地図を作った１Ｊ４ａｎｉａｔｉｓ
他、Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ、　Ａ　Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、　　Ｃｏ１ｄ　　Ｓｐ
ｒｉｎｇ　　１（ａｒｂｏｒ　　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉ
ｅｓ　　　（米国ニューヨーク州）、１９８２］。制限
断片をＭｌ　３ｍｐ　１８およびｍｐ１９にサブクロー
ニングし、デオキシターミネーション法により配列決定
を行なった［　Ｓａｎｇｅｒ他、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ
、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ。

（ＵＳＡ）、　７４　：　５４６３〜５４６７　　（１
９７７）］。

適当な制限部位がないときには、オリゴヌクレオチドプ
ライマー付ＤＮＡ配列決定を用いた。全コード領域、５
′側非翻訳領域、および３′側非翻訳領域の６０％以上
について両側で配列決定を行なった。ｃＤＮＡクローン
λＭ２３と２Ｍ９０の３′側非翻訳領域をプラスミドＤ
ＮＡのデオキシ配列決定に供し、さらに、塩基消去法（
Ｅｒａｓｅ−ａ−ｂａｓｅ　ｓｙｓｔｅｍ：　ｐｒｏｍ
ｅｇａ”）を用いて製造者の指示に従う欠損を生じさせ
た（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ、　Ｇｅｎｅ＋　　２８　：３５
１〜３５９　（１９８４））。

２Ｍ２３の複合ｃＤＮＡ配列は、４７４０ｂｐを含有し
、３５３４のヌクレオチドから成る長い読取り枠（オー
プンリーディングフレーム）を有し、５′側非翻訳領域
は７２ｂｐで、３′側非翻訳領域は１．２　Ｋ　ｂであ
る（第２図参照）。７Ｍ１４の３′側非翻訳領域は、ｐ
ｏｌｙ　　（ＣＡ）の逆位ストレッチ（Ｓｕｎ他、Ｎｕ
ｃｌ、　Ａｃ１ｄ　Ｒｅｓ、＋　１２　：　２６６９〜
２６９０　（１９８４））、部分的Ｋｐｎｌ散在反復単
位（ヌクレオチド４５６６〜４６３１）　　（Ｓｕｎ他
、　Ｎｕｃｌ、　　八ｃｉｄＲｅｓ、、１２：２６６９
　〜２６９０（１９８４））、および４０個以上のアデ
ノシンから成るストレッチを備える端部を含有している
。

λＭＩ４．２Ｍ２３および７Ｍ９Ｑからの３′側非翻訳
領域の分析によれば、最初のポリアデニル化信号は２Ｍ
２３において用いられ、また、第二のポリアデニル化信
号は７Ｍ１４と２Ｍ９０において使用されており、この
ことは、いずれのポリアデニル化信号も機能的であるこ
とを示している。

１５の追加のｃＤＮＡクローンの制限酵素マツピングが
示唆しているところによれば、２つのポリアデニル化部
位は等しい頻度で使用される。２Ｍ９０　（およびλＭ
４２）の３′側非翻訳領域は、７Ｍ１４および２Ｍ２３
におけるヌクレオチド３６２９と４０７０の間に存在す
る４４０ｂｐを欠失している（第１図参照）。咳欠失領
域の境界におけるＧＡＡ／ＧＴＡＴＣＣおよびＡＡＧ／
Ａという配列（第２図の矢印参照）は、スプライシング
部位に対するＧＴ／ＡＧ則と一致し−ζおり（Ｍｏｕｎ
ｔ、　Ｎｕｃｌ、Ａｃ１ｄ　Ｒｅｓ、＋　　１０　：　
４５９〜４７２（１９８２））、かくして、２つの異な
るｃ　ＤＮＡはスプライスされたｍＲＮＡに相当してい
るようである。

λＭ１４／λＭ２３からの読取り枠は、１１３７個のア
ミノ酸残基から成るタンパク質に翻訳され、ここで、１
６個のアミノ酸のシグナルペプチドが存しているが、こ
れは、以前に報告されたＭａｃ−１アルファ−サブユニ
ットのＮ末端配列に一致しているＣＭｉｌｌｅｒ他、Ｊ
、’　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１３８　：　２３８１〜２
３８３　　（１９８７）　　；Ｐｉｅｒｃｅ他、Ｂ　１
ｏｃｈ　ｉｍ。

Ｂｉｏｐｈｙｓ、　ＡｃＬａ、、　　８７４　：　３６
８〜３７２）　　（第２図参照）。タンパク質Ｎ末端配
列が一致していることに加え、トリブチツクペプチド配
列決定により明らかにされた１８６の残基（第１表参照
）は、翻訳された配列と完全に一致する。これは、真正
なＭａｃ　　１アルファ−サブユニットのｃＤＮＡクロ
ーンが単離されたことを確認するものである。

Ｍａｃ−１のアルファ−サブユニットのアミノ酸配列は
、旧来から知られている膜貫通型タンパク質（ｔｒａｎ
ｓｍｅｍｂｒａｎｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ）の特徴を有して
おり、Ｎ一端側の１０９２残基から成るドメイン、２５
残基から成る疎水性の膜貫通ドメインと推定される部分
、および１９残基から成るＣ一端側の親水性ドメインを
備えている（第２図参照）。Ｎ一端側の１０９２残基の
ドメインに１９個のＮ−グリコジル化の可能な部位（Ａ
ｓｎ　−Ｘ　ａａ　−Ｓ　ｅｒ／　Ｔ　ｈｒ）が存在し
ていること−そのうちの１つはペプチド９０　（アミノ
酸残基７１８〜７４３）おいて配列測定されているーは
、該ドメインが細胞外ドメインであることを確認するも
のである。このタンパク質の推定分子量は１２５．６１
１ダルトンであり、Ｍａｃ−１のアルファ−サブユニッ
トのＮ−グリカナーゼ処理後についての従来からの推定
値（１３７，ＯＯＯＭｒ）と一致する［Ｍｉｌｌｅｒ他
、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、１３９　：８４２’−８４７
（１９８７）］高マンノースカーボハイドレート当り２
５００Ｍｒと仮定すれば、Ｍａｃ−１アルファ−サブユ
ニットの前駆体についての予測値はＭｒ＝１７３．００
１であり、これに対して実測値はＭ＝１６０，０００で
ある［Ｍｉｌｌｅｒ他、Ｊ、ｂｎｍｕｎｏｌ、、　１３
９　：　８４２−８４７（１９８７）］。カーボハイド
レート処理後は、Ｍａｃ＝１アルファ−サブユニットは
１７０．０００Ｍ　ｒとなる。

Ｍａｃ−１のアルファ−サブユニットの一次構造は、７
個の内部反復単位（ｉｎｔｅｒｎａｌ　ｒｅｐｅａｔｓ
）が存在していることを示している（第３図）、反復単
位Ｖ１■および■は、統計学的に意味があるほど互いの
類似性がきわめて高＜（ｐ＜１０−”からｐ〈１０−’
）　、また、タンパク質様カルモジュリンおよびパルバ
ルミンの二価カチオン結合性ＥＦ−ハントループモチー
フに類似する配列を含有しており［５ｚｅｂｅｎｙｉ他
、Ｎａｔｕｒｅ、　　２９４　：　３２７〜３３２（１
９８１，）］（第３図参照）、このことは、Ｍａｃ−１
の仲介する付着に二価カチオンが必要となることと相関
づけられる（Ｗｒｉｇｈｔ他、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。

八ｃａｄ、Ｓｃｉ、　　　（ＬＩＳＡ）、８０：５６９
９〜５７０３（１９８３）］。反復構造Ｉ〜■は、ＥＦ
−ハントループ様の配列を欠失しているが、それらの反
復構造の中央部の両側部に保存性の高い配列ＹＦＧＡＳ
／ＡＬ、！＝　　ＬＶＴＶＧＡＰを含有シテいる（第３
図参照）。これらの共通のフランキング配列は、他のイ
ンテグリンにおいても保存されている（第３図）。７個
の反復構造の存在は、Ｍａｃ−１アルファ−サブユニッ
トのＮ末端部分の多くは複製によって生じたことを示唆
している。

実施例４ ノーザンプロット分析 Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ遠心分離と、ＲＰＭ１１
６４０および１０％牛脂児血清を有する組織培養プレー
トで３７℃、３０分間単核細胞を培養することにより、
末梢血から付着性単核細胞を分離した。

ＲＰＭ１１６４０によりさらに洗浄することにより培養
プレートから非付着性細胞を分離した。

１０＋ｙｌのＰ　Ｂ　Ｓ　、　５　ｍＭ　　Ｅ　Ｄ　Ｔ
　Ａを用いて３７゜Ｃで１５分間の培養により該プレー
トから付着性細胞を分離した。間接免疫螢光法により検
出したところ、前記付着性細胞の９５％以上が、Ｍａｃ
−１の存在について陽性であった。セルラインＨＬ−６
０とＵ９３７のＰＭＡ処理を行なった〔Ｍｉｌｌｅｒ他
、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、１３７　：２８９１〜２９
００（１９８６）参照〕。グアニジンイソチオシアネー
トを用い、末梢血付着性細胞から、さらに、セルライン
５ＫＷ３、ＪＹ、ＨＬ−６０およびＵ９３７から、全Ｒ
ＮＡを抽出した［：Ｍａｎｉａｔｉｓ他、Ｍｏ１ｅｃｕ
ｌａｒ　　［’ｌｏｎｉｎｇ、　　八　しａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ　　Ｍａｎｕａｌ、　　ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇ　
Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔ、ｏｒｉｓ　　（米国ニ
ューヨーク州）、（１９８２）］。各サすプルの１０ま
たは２０μｇを１％ホルムアルデヒド・アガロースゲル
にかけ、ナイロン膜に移した。プローブとして１λＭ２
３からの２．３ＫｂＥｃｏＲＩ断片を用いてハイブリダ
イゼーションを行なった。

Ｍａｃ−１のα／β複合体（コンプレックス）の細胞表
面出現は、殆んど、骨普系細胞に限定されることが見出
された［Ｍｉｌｌｅｒ他、Ｊ、　　Ｉｍｍｕｎｏｌ、。

１３７：２８９１〜２９００　（１９８６）］。ノーザ
ンプロットによれば、Ｍａｃｌアルファ−サブユニット
のｍＲＮＡは、４．７　Ｋ　ｂであり、単球と骨髄セル
ラインには存在するが、Ｔ細胞またはＢ細胞セルライン
には存在していなかった。

Ｍａｃ−１の出現は、白血球分化中に調節され、また、
フォルボールエステルを有する培地により１〜３日で骨
髄単球細胞セルライン中で誘導することもできる［Ｍｉ
ｌｌｅｒ他１．Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１３７　：
２８９１〜２９００（１９８６）］。ノーザンプロット
分析の示したところでは、ＨＬ−６０およびＵ９３７骨
髄単骨髄用ラインにおけるＭａｃ−１アルファ−サブユ
ニットのＲＮＡの定常状態濃度はきわめて低いか零であ
る［Ｍｉｌｌｅｒ他、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、。

１３７：２８９１〜２９００（１９８６）］。両セルラ
インをＰＭＡ処理すると、Ｍａｃ−１アルファ−サブユ
ニットのｍ　ＲＮ　Ａの出現が誘導され、また、β−サ
ブユニッ）ｍＲＮＡの出現が増大する。

これらの事実は、Ｍａｃ−１のアルファ−サブユニット
とβ−サブユニットの生合成に関する従来の研究［Ｍｉ
ｌｌｅｒ他、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　　１３９　：
　８４２〜８４７　　（１９８７））、それらのセルラ
イン上でのＭａｃ−１のα／β複合体の表面出現に関す
る研究［Ｍｉｌｌｅｒ他、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１
３７　：　２８９１〜２９００　　（１９８６］に一致
しており、Ｍａｃ−１の細胞表面出現はｍ　Ｒ，Ｎ　Ａ
濃度によって調節されることを示唆している。同様に、
ネズミの前骨髄卓球セルラインＭ１をＴ−インタフエロ
ンで処理しても、ネズミＭａｃ−１アルファ−サブユニ
ットのｍＲＮＡの出現を誘導する［５ａｓｔｒｅ他、Ｐ
ｒｏｃ、Ｎａｔｌ。

Ａｃａｄ、　　Ｓｃｉ、（ＵＳＡ）、８３　：　５６４
４〜５６４８（１９８６）　］　０Ｍａｃ−１アルファ
−サブユニットの２種類のメーセッジ（約４．７　Ｋ　
ｂと４．４Ｋｂ）を骨儲単球セルラインＨＬ６０および
Ｕ９３７に溶解し、ＲＮＡの長時間電気泳動に供した。

Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットのｍＲＮＡの多種が
存在することは、２個のポリアデニル化信号を選択的に
使用したことあるいは選択的なスプライシングに因るも
のかもしれない。該ｍＲＮＡ種のサイズはこれらの可能
性と一致している。ス）　ＩＪンジエン条件（緊縮条件
）下におけるヒ）ＤＮＡのサザンプロット分析は、Ｍａ
ｃ−１アルファ−サブユニットは単一のコピー遺伝子に
よってコードされていることを示した。

実施例５ 配列の相同性 Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットの配列を、ｔｈｅＮ
ａｔｉｏｎａｌ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒ
ｃｈ　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ（ＮＢＲＦ）（米国ワシン
トンＤＣ）にあるタンパク質配列データベースと比較し
た。配列のアラインメントを行なうためにＡＬＩＧＮプ
ログラムを使用した（：Ｄａｙｈｏｆｆ他、Ｍｅｔ、　
ＩＥｎｚｙｍｏｌ、、　９１　：　５２４〜５４５　　
（１９８３））。アラインメントを行なった配列の１０
０の無作為順列についてアラインメントスコアを求め、
さらに、無作為比較のスコアの平均と実質のアラインメ
ントのスコアとの間の標準偏差値を計算して、アライン
メントの統計学的意義を評価した。スコアリングに当っ
て、−２５０ＰＡＭ変異データマトリックス（ギャップ
ペナルティ＝６、バイアス＝６）を使用した。

・実施例６ インデクリン遺伝子超科の一員としての！、１　ａ　ｃ
−ＩＭａｃ−１、ＬＦＡ−１、およびｐ１５０．９５に
共通のβ−サブユニットの一次構造の決定［Ｋｉｓｈｉ
ｍｏｔｏ他、Ｃｅ１ｌ、４８：６８１〜６９０（１９８
７）　；　Ｌａｖｖ他、ＥＭＢＯ、Ｔ、、６：９１５〜
９１９（１９８７）］およびｐ１５０．９５のアルファ
−サブユニットの一次構造の決定［Ｃｏｒｂｉ他、ＥＭ
ＢＯＪ、、６：４０２３〜４０２８　（１９８７）］に
よって示唆されているように、白血球付着レセプターは
、進化上、細胞外マトリックス（ｅｘｔｒａ−ｃｅｌｌ
ｕｌａｒ　ｍａｔｒｉｘ　　：　ＥＣＭ）レセプターと
関連しており、［インテグリン（ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ）
　Ｊと称される細胞／細胞および細胞／マトリックスレ
セプターの遺伝子超科軸ｅｎｅ　Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌ
ｙ）という考え方が導かれた（ｆｌｙｎｅｓ、　Ｃｅ１
ｌ、　　４８　：　５４９〜５５４（１９８７）：］。

インテグリン分子については３つのサブファミリーが見
出され、各サブファミリーは別異のβ−サブユニットを
有する。すなわち、フィブロネクチンレセプターサブフ
ァミリー（インテグリンβ１を有する）、白血球付着レ
セプーターサブファミリー（インテグリンβ２を有する
）、および、ビトロネクチンレセプターＩＩｂ／［Ｉａ
サブファミリー（インテグリンβ３を有する）である。

各種インテグリンをコードするアミノ酸配列と核酸配列
をＭａｃ−１アルファ−サブユニットのそれらと比較し
て、いろいろなインテグリンサブファミリーのアルファ
−サブユニット間の関係を明らかにした（第４図）ｏＭ
ａｃ−１とｐ１５０．９５のアルファ−サブユニットは
、アミノ酸レベルでは６３％、また、ヌクレオチドレベ
ルでは６８％同一であることが見出された。Ｍａｃ−１
とｐ　１５０．９５のアルファ−サブユニット間の構造
上の類似性が高いことは機能の面に反映されている。す
なわち、Ｍａｃ−１およびｐ１５０．９５は、ｉＣ３ｂ
結合能２３１　：２３３〜２３６（１９８，５）］、ま
た、いずれもタンパク質も、好中球の凝集および内皮細
胞への好中球と単球の付着に関与することが知られてい
る〔へｎｄｅｒｓｏｎイ也、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　
１３７　：１５〜２７　　（１９８６）；Ｖｅｄｄｅｒ
他、Ｊ、　Ｃｌ１ｎ。

（１９８７））。ＬＦＡ＝１のアルファ−サブユニット
は、Ｍａｃ−１およびｐ１５０，９５のアルファ−サブ
ユニットに３５％同一である。フィブロネクチンレセプ
ター、ビトロネタチンレセプターおよび糖タンパクｎｂ
のアルファ−サブユニットは、互いに、４０％同一であ
る。Ｍａｃ−］とｐ１５０．９５のアルファ−サブユニ
ットはその３種の８０Ｍレセプターのアルファ−サブユ
ニットに２５％同一であるから、Ｍａｃ−１、ｐ１５０
．９５およびＬＦＡ−１のアルファ−サブユニットは、
他のインテグリンサブユニットよりも、互いに相関性が
高いことになる。さらに、白血球のアルファ−サブユニ
ットは、ＥＣＭのアルファ−サブユニットには見出され
ない１８７個の残基からなる部分を含有していることに
おいて（Ｍａｃ−１のアルファ−サブユニットにおいて
はアミノ酸１５０〜３３８）、さらに、２８個のアミノ
酸領域が欠失していること（Ｍａｃ−１における残基位
１００２におけるギャップ）において互いに類似いる一
当該２８個のアミノ酸領域は、８０Ｍレセプターのアル
ファ−サブユニットがプロセシング中にタンパク分解酵
素により切断されてジスルフィド結合した２つの鎖を生
じるところである［ｕｏｓｌａｈｔｉ他、５ｃｉｅｎｃ
ｅ、２３８　：４９１〜４９７（１９８７）］。

Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットと他の残りのインテ
グリンアルファ−サブユニットとの間の同一性が最も見
出される区域は、アミノ酸残基４３４〜５９２間、正確
には、推定上の二価カチオン結合性配列を含有する３つ
の内部反復構造の境界に存する。この領域においては、
Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットは、ｐ１５０．９５
アルファ−サブユニットに対してアミノ酸レベルで８８
％、ヌクレオチドレベルで９０％の同一性を示し、ＥＣ
Ｍレセプターインテグリンアルファ−サブユニットに対
する同一性のパーセントは３８％である。

ＥＣＭレセプターアルファ−サブユニットは、その−次
構造内に４個の二価カチオン結合性推定邪位を有してお
り（：５ｕｚｕｋｉ他、Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　　ｌＴｈｅ
ｍ、。

２６２　：１４０８０〜１４０８５　（１９８７）；２
６２＋８４７６〜８４８２　（１９８７）］、これらは
、Ｍａｃ−１’とｐ１５０．９５のアルファ−サブユニ
ットにおける反復構造■〜■に対応し、Ｍａｃ−１とｐ
１５０．９５における反復構造■は二価カチオン結合性
の推定配列を含有しない（第３図）。ＥＣＭレセプター
インテグリンによるリガント結合はカルシウム依存性で
あり［：Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ他、５ｃｉｅｎｃｅ、２３
８　：４９１〜４９７（１９８７）］、糖タンパクＩＩ
ｂ／ｌｅａの場合には放射性カルシウムの結合が確１認
されている（Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ他、５ｃｉｅｎｃｅ、
２３８：４９１〜４９７　　（１９８７）］。これらの
領域の保存性が高いことは、レセプターコンホメーショ
ンの維持に関与していること、あるいは、リガント結合
に直接的に関係していることを示唆している。

インテグリンのアルファ−サブユニット間において保存
性の高い別の領域は、膜スパンニング領域である。Ｍａ
ｃ−１の膜貫通ドメイン（膜貫通領域）は、ｐ１５０．
９５アルファ−サブユニットにおける同ドメインと８８
％の同一性、また、■ｂ１ＶＮＲおよびＦＮＲのアルフ
ァ−サブユニットの同ドメインとは４０〜５０％の同一
性を示す［Ｔａｍｋｕｎ他、Ｃｅ１ｌ、　　４６　：　
２７１〜２８２　　（１９８６）；Ａｒｇｒａｖｅｓ他
、Ｊ、　　［：ｅｌｌ　Ｂｉｏｌ、、　１０５　：　１
１８３〜１１９０　　（１９８７）；Ｐｏｎｚ他、Ｊ、
　　Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、　２６２：８４７６〜８４
８２（１９８７））　　（第４図参照）。別のβ−サブ
ユニットの膜貫通ドメインや細胞膜ドメインにおいても
同様の保存性が認められている［Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏイ
也、Ｃｅ１ｌ、４８二６８１〜６　９　０　　　（１９
８７）　　　；Ｌａｗ　　イ也、　ＥＭＢＯＪ。

６：９１５〜９１９（１９８７）；Ｔａｍｋｕｎ他、Ｃ
ｅ１ｌ。

４６　：　２７１〜２８２（１９８６）；　Ｆｉｔｚｇ
ｅｒａｌｄ他、１１８３〜１１９０（１９８７））。こ
のような高度の保存性に基づき、これらの領域は、リガ
ント結合の調節に関与し［Ｖｅｄｄｅｒ他、Ｊ、Ｃｌ１
ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、。

８１：６７２〜６８２　　（１９８８）］、このとき、
他の膜成分や細胞骨格と相互作用をしているものと考え
られる。フィブロネタチンはタリノを結合すること［Ｈ
ｏｒｖｉｔｚ他、Ｎａｔｕｒｅ、　　３２０　：　５３
１〜５３３　（１９８６）：］、ＬＦΔ−１の仲介する
相互作用は細胞骨格の完全性に依存すること［Ｓｐｒｉ
ｎｇｅｒイ也、　Ａｎｎ、　　　Ｒｅｖ、　　　［ｍｍ
ｕｎｏｌ、、　　　５　　：　　２　２　３〜２５２　
（１９８７）］、また、ＬＦＡ−１はフォルボールエス
テルの刺激後、タリノと共にキャは、上述したドメイン
が細胞骨格相互作用やシグナル形質導入に関与している
ことをさらに支持するものである。

実施例７ Ｍａｃ−１アルファ−サブユニット遺伝子のマツピング Ｍａｃ−１、ＬＦＡ−１およびｐ１５０．９５のアルフ
ァ−サブユニットおよびβ−サブユニットについて、マ
ウス×ヒト体細胞ハイブリッド上のサザンプロット、さ
らに、ｃＤＮＡプローブを用いる染色体インサイドハイ
プリダイジョンにより、位置決定を行なった。ＬＦＡ−
１、Ｍａｃ−１およびｐ１５０．９５のアルファ−サブ
ユニットをコードする遺伝子は、染色体１６にあり（バ
ンドｐ１１とｐ　ｌ　３．１の間）、白血球付着に関与
する遺伝゛子りラスターの存在を明らかにした。この３
種類のアルファ−サブユニットの遺伝子に共通の構造上
の特徴があり近似していることは、Ｍａｃ−１、ｐ１５
０．９５およびＬＦＡ−１のアルファ−サブユニットの
遺伝子は、遺伝子複製現象で生じたものであり、また、
この遺伝子複製は各種のインテグリンアルファ−サブユ
ニットサブファミリーの分岐後に生じたことを示唆して
いる。

実施例８ フォンビルブランド因子および因子Ｂとの相同性ｐ１５
０．９５に関連して前述したように［［ｏｒｂｉ他、Ｅ
ＭＢＯＪ、、６：４０２３〜４０２８１９８７）　］　
、］Ｍａｃ−１アＪＬ／７フーサブユニツには、前述の
配列決定した３種類Ｅ　ＣＭレセブターインテグリンの
アルファ−サブユニットには相応部分が認められない１
８７個のアミノ酸から成る領域（残基位置１５０〜３３
８）がある。この領域は、白血球インテグリンに存在す
るので、Ｌドメインと呼ばれている。前に述べたＴｈｅ
　ＮａｔｉｏｎａｌＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅａ
ｒｃｈ　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎの配列データベースに基
づきＦΔＳＴＰプログラムを使って調べたところ、Ｍａ
ｃｌアルファ−サブユニットのアミノ酸残基１２８〜３
１４がフォンビルブランド因子（ｖ　Ｗ　Ｆ　）との相
同性を示した［３ｈｅ１ｔｏｎ−１ｎｌｏｅｓ他、Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ、、　　２５　＋　３１６４〜３１７１（１
９８６）］　　（第５図参照）。これらの相同領域は特
に興味がある。というのは、これらの相同領域は、Ｍａ
ｃ−１ではＬ−ドメインにほぼ正確に対応し、また、ｖ
ＷＦではＡドメインに対応しているからであるーなお、
Ａドメインとは前述したように、ＡＩ（４９７〜７１６
）　、Ａ２　　（７１７〜９０９）およびＡ３（９１０
〜１１１１）と名づけられる２００個の残基から成る３
つの相同性タンデム反復構造体から成るものである［：
５ｈｅｌｔｏｎ−Ｉｎｌｏｅｓ他、Ｂｉｏｃｈｅｍ、、
　　２５　：　３１６４〜３１７１（１９８６）］。ｐ
１５０．９５のアルファ−サブユニット（第４図）およ
びネズミのＭａｃ−１アルファ−サブユニットもまたｖ
ＷＦのＡドメインに対して相同性を示す。従来よりｖＷ
ＦのＡドメインは因子Ｂ（補体の第二経路における成分
で、Ｃ３と相互作用する）と相同性があることが示され
ていたので〔５ｈｅｔｏｎ−Ｉｎ　１ｏｅｓ他、Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ、　２５　：３１６４〜３１７１　　（１９８
６）；Ｍｏ１ｅ他、Ｊ、　　Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｍ、、２５９：　３４０７〜３４１２（１９８４
））、因子Ｂとの相同性、および古典経路におけるその
相同性、Ｃ２［Ｂｅｎｔｌｅｙ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ
、、　２３９　：３３９〜３４５　（１９８６）］との
相同性も調べた（第５図参照）。因子Ｂにおける相同性
ドメインは、Ｎ末端側においては、因子Ｂが切断されて
活性なりｂ因子を与える部位により、また、Ｃ末ｉ　側
ではセリンプロテアーゼドメインにより明瞭に画定され
ている［１Ｊｏｌｅ他、Ｊ、Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、。

２５９　：３４０７〜３４１２（１９８４）；　Ｂｅｎ
ｔｌｅｙ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ、、２３９　：　３３９〜３４５（
１９８６）］（第６図参照）。ＡＬＩＧＮプログラムを
用いる評価によれば（Ｄａｙｈｏｆｆ他、Ｍｅｔ、Ｂｎ
ｚｙｍｏｌ、、　　９１　：５２４〜５４５　　（１９
８３）］、ｖ’ｖＶＦドメイン（Ａｌ、Ａ２およびＡ３
）ならびに因子Ｂに対するＭａｃ−１の相同性は統計学
的な意義も高く　（第２表）、シたがって、これらのタ
ンパク質の各々における相同性アミノ酸領域は単一の初
生ドメインから進化したものにちがいないということを
示唆している。Ｃ２に対するＭａｃ−１の相同性は統計
学的に意義のあるものではないが、因子Ｂは、Ｃ２に対
して有意の相同性を示し、そして、進化性リンク（ｅｖ
ｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ　１ｉｎｋ）として機能し、これ
らのことは、Ｃ２領域も同一の初生ドメインがら生じた
ことを示唆している。第２表には、Ｍａｃ−１アルファ
−サブユニットの白血球特異性ドメイン（１２８〜３１
４）のアラインメントスコアを、フォンビルプラント因
子のＡ領域（Ａ１：５０９〜６９２；Ａ２ニア３０〜９
０３；Ａ３：９２３〜１１０３）、因子Ｂ（２４０〜４
４３右よびＣ２（２２８〜４３４）と比較している。こ
の表はＡＬＩＧＮプログラムを用いて作成された。

アラインメントスコアは標準偏差として与えている。ア
ラインメントの確率（第６図に示す）は、各アラインメ
ントスコアの下のカッコ内に示している。

第一じＬ−表 Ｖ−ｆ　　Ａｌ Ｖ誓ｆ　　Ａ２ Ｖ讐ｆ　　Ａ３ 因子 ２ 部位 因子ＢとＬドメインの相同性、およびＣ３ｂに対する因
子Ｂの結合能から、ＬドメインはＭａｃｌとｐ１５０．
９５のｉＣ３ｂリガント結合部位であるという結論が支
持される。さらに、Ｃ３ｂにＢｂが結合するにはＭｇ″
ｔが必要であるということも興味深い［Ｍｕｌｌｅｒ−
Ｂｂｅｒｈａｒｄ他、Ａｄｖ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、。

２９：１〜５３（１９８０））。同様に、ｉＣａｂ感作
細胞に対して、あるいは、ｉＣ３ｂ−セファロース（Ｓ
ｅｐｈａｒｏｓｅ）に対して単離後のＭａｃ−１および
ｐ１５０．９５が結合するには二価カチオンを必要とす
る［ｒｉｇｈｔ他、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、
　Ｓｃｉ。

（ＵＳＡ）、８０：５６９９〜５７０３（１９８３）；
Ｍｉｃｋｌｅｍ他、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ、、　　２３１
　：　２３３〜２３６（１９８５）］。Ｌドメインにお
ける二価カチオン結合推定部位は、Ｍａｃ−１、ｐｉ５
０，９５および因子Ｂに関係があるｄＧを含有する配列
モチーフと、ＤＧおよびＧＤを含有する別の配列モチー
フとによって表わすことができるかも知れない（第５図
の下線参照）。これらの部位が３次元構造において連続
的であるならば、Ｍａｃ−１のアルファ−サブユニット
の内部反復単位Ｖ〜■に存在するのと配列的に類似して
いる二価カチオン結合部位を形成することができるであ
ろう。Ｌドメイン、および、反復単位■〜■を含有する
後続領域は、Ｎ−リンクグリコジル化部位やシスティン
が比較的存在せず（第６図）、コンフォメーション上の
適応性があるようになっている。ＬドメインがｉＣ３ｂ
の認識に関与しているだろうという考えによれば、ｉＣ
３ｂにはＲ，Ｇ　Ｄとは異なる配列を認識する可能性が
あることになる。ＲＧＤは、ｉＣ３ｂには存在している
が、Ｍａｃ−１による認識において重要である［Ｗｒｉ
ｇｈｔ他、Ｐｒｏｃ、Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、　（ＵＳＡ）、８４　：　１９６５〜１９６８
（１９８７）：］という証明は、ペプチド阻害データに
よって確δ忍されるべきである。

ｖＷＦのＡＩドメインとへ３ドメインはいずれもコラー
ゲンに結合し［：Ｇｉｒｍａ他、旧ｏｏｄ、７０：６０
５〜６１１　　（１９８７）］、また、Ａ１ドメインは
血小板糖タンパク質１ｂとヘパリンに結合する［Ｇｉｒ
ｍａ他、Ｂｌｏｏｄ、　７０　：　６０５〜６１１（１
９８７）’］。因子Ｂが重要な役割を果たす補体第二経
路は、非自己から自己を区別する免疫系の最も根源的な
機構である［Ｍｕｌｌｅｒ−Ｂｂｅｒｈａｒｄ他、Ａｄ
ｖ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、２９　：　１〜５３　（１９
８０）　〕。

かくして、２００個のアミノ酸から成る当該ドメインは
、初生の認識単位と考えられ、この認識単位が、多様な
認識機能を果たすように発達した多くのタンパク質中に
複製されたり包埋されたと考えられる。ここで、多様な
認識機能とは、止血（ｖＷＦ）、細胞外マトリックス（
ＣＭＰ）補体活性化（因子ＢおよびＣ２）、ならびに、
補体リセブターおよび細胞／細胞間相互作用（白血球イ
ンテグリン）等における機能である。

実施例１０ 各種インラグリン間の系統発生学的関係ＥＭＣレセブタ
ーインテグリン類は、ショウジヨウバエにおける配列相
同性で示されるように系統発生学的には古（［Ｒｕｏｓ
ｌａｈｔｉ他、５ｃｉｅｎｃｅ。

２３８：４９１〜４９７　（１９８７）］、線虫や菌類
における同様の大きさのタンパク質との免疫学的交差反
応によっても古くから知られていた。

これらの結果の示すところでは、Ｍａｃ−１アルファ−
サブユニットは、初生認識ドメインがＥＣＭレセプター
型のアルファ−サブユニットに導入されたことにより生
じたことになる（第６図参照）。

追加のドメインの導入は、白血球インテグリンによる各
種リガントの認識能を高めたとも考えられ、また、リガ
ント特異性が若干異なることの説明になるかも知れない
（ＬＦＡ−１によるＩＣＡＭ−１リガントのＳ忍識はＲ
ＧＤを含まない）　　［Ｍａｒｌｉｎ他、Ｃｅ１１．５
１　＋８１：３〜８１９　（１９８７）；５ｔａｕｔｏ
ｎ他、Ｃｅ１ｌ、５２：９′２５〜９３３（１９８８）
　　；　Ｓｉｍｍｏｎｓ他、Ｎａｔｕｒｅ、　　３３１
　：６２４〜６２７　（１９８８）参考〕。

Ｍａｃ−１のアルファ−サブユニットとβ−サブユニッ
トの両方に対するｃＤＮＡを利用できることにより、ｉ
Ｃ３ｂ結合および細胞／細胞間付着に関与する明らかな
リガント結合部位を同定することができ、また、細胞刺
激がリガント結合部位（細胞質ドメインまたは膜ドメイ
ンから伝達される）におけるコンホメーション変化を引
き起こしリガントに対する親和性を変化させるという仮
説を確かめることができる。

特定の態様に沿って本発明を説明したが、本発明は各種
の修正が可能であり、本発明の原理に従う各種の変更や
応用も本発明に包含されるものとする。

【図面の簡単な説明】

第１図は、Ｍａｃ−１のアルファ−サブユニットのｃＤ
ＮＡクローンの制限酵素地図を示すものである。太線は
、ｃＤＮＡのコード領域を表わす。 ポリアデニル化シグナルはブラックボックスとして示す
。２Ｍ９０において欠失している領域は点線で示されて
いる。図に示す制限部位はＢａ１ｒ（Ｂ）、ＢａｍＨＩ
　（Ｂａ）、Ｂ　ａｌ　ＩＩ　（Ｂｇ）、ＥｃｏＲＩ　
（ｔＥ）、Ｅ　ｃｏＲＶ　（Ｂｖ）、）（１ｎｃＩＩ　
（Ｈｃ）、Ｈ１ｎｄＩＩＩ　（Ｈ）、ＳｍａＩ　（Ｓ）
　、およびＰ　ｓｔ　Ｉ　（Ｐ）である。 第２ＡＳＢ図は、Ｍａｃ−１のアルファ−サブユニット
のヌクレオチド配列およびｃＤＮＡから誘導されたアミ
ノ酸配列を示す。Ｎ〜グリコジル化推定部位に下線を施
している。シグナル配列および膜貫通推定領域には点線
を施している。終止コドンはアステリスクで標識してい
る。矢印は、ｃＤＮＡからスプライシングすると考えら
れるイントロンの境界を表示する。 第３図は、Ｍａｃ−１のアルファ−サブユニットにおけ
る相同性反復単位を示す。共通しているアミノ酸残基に
は囲みを施している。二価カチオン結合推定部位を含有
する３つの反復単位（Ｖ〜■）を、Ｃａ”＋またはＭｇ
”＋結合推定部位を欠失している残りのＮ−末端側配列
（１〜■）と並べている。 Ｍａｃ−１のアルファ−サブユニットの７つの反復単位
および他のインテグリン（ｐ１５０．９５、フィブロネ
クチンレセプター、ビトロネクチンレセプターおよび血
小板糖タンパクＩＩ　ｂ　）　　〔Ｃｏｒｂｉ他、ＢＭ
ＢＯＪ、６：　４０２３〜４０２８　　（１９８７）］
における各アミノ酸残基の頻度に基づき、二価カチオン
結合推定部位の側部の領域に共通配列が見出された。こ
こで、共通配列とは、分析した配列の少なくとも３０％
において認められるものとした。Ｃａ”＋およびＭ　ｇ
　２＋結合タンパク質パルバルブミン、トロポニンＣお
よびカルモジュリンの配列と３次元構造に基づき二価カ
チオン結合部位の配列と二価カチオンに配位するアミノ
酸残基を求め、７つの反復単位のアラインメントの下方
に記している。 第４図は、Ｍａｃ−１、ｐ１５０．９５、ビトロネクチ
ンレセプター、フィブロネクチンレセプターおよび糖タ
ンパク質ｕｂのアルファ−サブユニットの一次構造の比
較を示すものである。カチオン結合推定部位および前述
の側部配列（フランキング配列）には、それぞれ、実線
および点線で下線を施している。膜貫通推定部位にはＴ
Ｍと記している。 第５図は、Ｍａｃ−１のアルファ−サブユニットおよび
ｐ１５０．９５のアルファ−サブユニットの白血球特異
的ドメインの配列を、フォンビルブランド因子のへ領域
、補体成分Ｃ２および因子Ｂと比較したものを示してい
る。Ｍａｃ〜１アルファ−サブユニットおよび／または
ｐ１５０，９５アルファ−サブユニットと残りのタンパ
ク質との間の共通配列には囲みを施している。 第６図は、Ｍａｃ−１のアルファ−サブユニット、フォ
ンビルブランド因子のＡドメイン、因子ＢおよびＣ２の
進化上について考えられる関係を示すものである。フォ
ンビルブランド因子の結合ドメインとリガントを最上部
に示している［５ｈｅｌｔｏｎ−Ｉｎｌｏｅｓ他、Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ、２５：３１６４〜３１７１（１９８６）　
　；　Ｇｉｒｍａ他、Ｂｌｏｏｄ、　７０　：　６０５
〜６１１　　（１９８７）’］。従来より報告されてい
るようなＣ２と因子Ｂの構造［Ｍｏ１ｅ他１．Ｊ、　Ｂ
ｉａｌ。 Ｃｈｅｍ、、２５９　：３４０７〜３４１２（１９８４
）：Ｂｅｎｔｌｅｙ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、、　　
２３９　：３３９〜３４５（１９８６）］についても検
討した。因子ＢとＣ２におけるＲＣＡ　（Ｒｅｇｕｌａ
ｔｏｒｏｆ　ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ　ａｃｔｉｖａｔｉ
ｏｎ　：補体活性調節）反復単位は、多くの補体および
レセプターに共通であり６０個のアミノ酸から成る相同
性単位である。Ｍａｃ−１のアルファ−サブユニットに
おけるＮ−グリコジル化部位およびシスティン残基は、
それぞれ、図の上部および底部に示している。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）天然の混在物質を実質的に含まないＭａｃ−１ア
   ルファ−サブユニットまたはその機能性誘導体。 （２）Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットが、細胞の表
   面に存在する分子に結合する能力を有している請求項（
   １）に記載のＭａｃ−１アルファ−サブユニットまたは
   その機能性誘導体。 （３）細胞の表面に存在する前記分子が、ｉＣ３ｂまた
   はＭａｃ−１の他の天然リガントである請求項（２）に
   記載のＭａｃ−１アルファ−サブユニット。 （４）前記分子が、Ｍａｃ−１ベータ−サブユニットに
   結合してＭａｃ−１ヘテロダイマーを形成することがで
   きる請求項（１）に記載のＭａｃ−１アルファ−サブユ
   ニット。 （５）前記ヘテロダイマーが、ｉＣ３ｂまたはＭａｃ−
   １のその他の天然リガントに結合することができる請求
   項（４）に記載のＭａｃ−１アルファ−サブユニット。 （６）前記分子が、 ａ、Ａ−Ｎ−Ｑ−Ｒ−Ｇ−Ｓ−Ｌ；ｈ、Ｙ−Ｉ−Ｌ−Ｔ
   −Ｓ−Ｈ−Ｎ；ｂ、Ｍ−Ｅ−Ｑ−Ｌ−Ｋ−Ｋ−Ｓ；ｉ、
   Ｃ−Ｑ−Ｄ−Ｄ−Ｌ−Ｓ−Ｉ；ｃ、Ｔ−Ｏ−Ｇ−Ｅ−Ｋ
   −Ｆ−Ｇ；ｊ、Ｔ−Ｉ−Ｑ−Ｎ−Ｑ−Ｌ−Ｒ；ｄ、Ｇ−
   Ｖ−Ｆ−Ｌ−Ｙ−Ｔ−Ｓ；ｋ、Ｖ−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｖ−Ｌ
   −Ｇ；ｅ、Ｖ−Ｄ−Ｖ−Ｄ−Ｓ−Ｓ−Ｎ−Ｇ−Ｓ−Ｔ；
   ｌ、Ｙ−Ｑ−Ｈ−Ｉ−Ｇ−Ｌ−Ｖ；ｆ、Ｄ−Ｖ−Ｎ−Ｇ
   −Ｄ−Ｋ−Ｌ−Ｄ−Ｖ−Ａ；ｍ、Ｌ−Ｆ−Ｔ−Ａ−Ｌ−
   Ｆ−Ｐ；ｇ、Ｄ−Ｌ−Ｔ−Ｍ−Ｄ−Ｇ−Ｌ−Ｖ−Ｄ−Ｌ
   ；ｎ、Ｆ−Ｓ−Ｌ−Ｖ−Ｇ−Ｔ−Ｐ；より成る群から選
   ばれる少なくとも１つのポリペプチドを含有している請
   求項（２）に記載のＭａｃ−１アルファ−サブユニット
   。 （７）機能性誘導体がＭａｃ−１アルファ−サブユニッ
   トの断片である請求項（２）に記載のＭａｃ−１アルフ
   ァ−サブユニットの機能性誘導体。 （８）機能性誘導体がＭａｃ−１アルファ−サブユニッ
   トの変異型である請求項（２）に記載のＭａｃ−１アル
   ファ−サブユニットの機能性誘導体。 （９）機能性誘導体が、Ｍａｃ−１アルファ−サブユニ
   ットの類縁体（アナログ）である請求項（２）に記載の
   Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットの機能性誘導体。 （１０（１０）機能性誘導体が、Ｍａｃ−１アルファ−
   サブユニットの化学的誘導体である請求項（２）に記載
   のＭａｃ−１アルファ−サブユニットの機能性誘導体。 （１１）Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットまたはその
   機能性誘導体を発現することができる組換えＤＮＡ分子
   。 （１２）Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットまたはその
   機能性誘導体が、 ａ、Ａ−Ｎ−Ｑ−Ｒ−Ｇ−Ｓ−Ｌ；ｈ、Ｙ−Ｉ−Ｌ−Ｔ
   −Ｓ−Ｈ−Ｎ；ｂ、Ｍ−Ｅ−Ｑ−Ｌ−Ｋ−Ｋ−Ｓ；ｉ、
   Ｃ−Ｑ−Ｄ−Ｄ−Ｌ−Ｓ−Ｉ；ｃ、Ｔ−Ｄ−Ｇ−Ｅ−Ｋ
   −Ｆ−Ｇ；ｊ、Ｙ−Ｉ−Ｑ−Ｎ−Ｑ−Ｌ−Ｒ；ｄ、Ｇ−
   Ｖ−Ｆ−Ｌ−Ｙ−Ｔ−Ｓ；ｋ、Ｖ−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｖ−Ｌ
   −Ｇ；ｅ、Ｖ−Ｄ−Ｖ−Ｄ−Ｓ−Ｓ−Ｎ−Ｇ−Ｓ−Ｔ；
   ｌ、Ｙ−Ｑ−Ｈ−Ｉ−Ｇ−Ｌ−Ｖ；ｆ、Ｄ−Ｖ−Ｎ−Ｇ
   −Ｄ−Ｋ−Ｌ−Ｔ−Ｄ−Ｖ−Ａ；ｍ、Ｌ−Ｆ−Ｔ−Ａ−
   Ｌ−Ｆ−Ｐ；ｇ、Ｄ−Ｌ−Ｔ−Ｍ−Ｄ−Ｇ−Ｌ−Ｖ−Ｄ
   −Ｌ；ｎ、Ｆ−Ｓ−Ｌ−Ｖ−Ｇ−Ｔ−Ｐ；より成る群か
   ら選ばれる少なくとも１つのポリペプチドを含有する請
   求項（１）に記載のＤＮＡ分子。 （１３）請求項（１１）に記載の組換え分子の発現によ
   り製造されたＭａｃ−１アルファ−サブユニットまたは
   その機能性誘導体。 （１４）哺乳動物被検体における非特異的防御系の反応
   によって生じる炎症を治療するための方法であって、該
   炎症を抑制するのに充分な量の抗炎症剤で被検体を治療
   することから成り、該炎症剤が、Ｍａｃ−１アルファ−
   サブユニットおよびＭａｃ−１アルファ−サブユニット
   の機能性誘導体より成る群から選ばれる方法。 （１５）抗炎症剤がＭａｃ−１アルファ−サブユニット
   である請求項（１４）に記載の方法。 （１６）抗炎症剤がＭａｃ−１アルファ−サブユニット
   の機能性誘導体である請求項（１４）に記載の方法。 （１７）Ｍａｃ−１ベータ−サブユニットまたはＭａｃ
   −１ベータ−サブユニットの機能性誘導体を投与するこ
   とを追有する請求項（１４）に記載の方法。 （１８）Ｍａｃ−１アルファ−サブユニットが、組換え
   ＤＮＡ分子の発現により製造され、該Ｍａｃ−１アルフ
   ァ−サブユニットがＭａｃ−１ベータ−サブユニットに
   結合されてＭａｃ−１ヘテロダイマーを形成する請求項
   （１７）に記載の方法。 （１９）炎症が始まる前に被検体に抗炎症剤を投与する
   請求項（１４）に記載の方法。 （２０）腸内投与および非経口投与より成る群から選ば
   れる手段により抗炎症剤を投与する請求項（１４）に記
   載の方法。 （２１）非経口投与が、筋肉内投与、静脈投与および皮
   下投与より成る群から選ばれる請求項（２０）に記載の
   方法。 （２２）炎症が、成人呼吸窮迫症候群；敗血症に併発す
   る多発性器官損傷症候群；外傷に併発する多発性器官損
   傷症候群；組織の再灌流損傷；急性糸状体腎炎；反応性
   関節炎；急性炎症成分を伴なう皮膚疾患；中枢神経系炎
   症疾患；熱損傷；血液透析；白血球症；潰瘍性大腸炎；
   クローン病；壊死性全腸炎；顆粒球輸注関連症候群；サ
   イトカイン誘導毒性；およびアテローム硬化症より成る
   群から選ばれる状態に関連している請求項（１４）に記
   載の方法。 （２３）前記状態が、成人呼吸窮迫症候群である請求項
   （２２）に記載の方法。 （２４）前記状態が、敗血症に併発する多発性器官損傷
   症候群である請求項（２２）に記載の方法。 （２５）前記状態が、外傷に併発する多発性器官損傷症
   候群である請求項（２２）に記載の方法。 （２６）前記状態が、組織の再潅流損傷である請求項（
   ２２）に記載の方法。 （２７）再潅流損傷が、心筋組織の再潅流損傷である請
   求項（２６）に記載の方法。 （２８）前記状態が急性糸状休腎炎である請求項（２２
   ）に記載の方法。 （２９）前記状態が、反応性関節炎である請求項（２２
   ）に記載の方法。 （３０）前記状態が、急性炎症成分を伴なう皮膚疾患で
   ある請求項（２２）に記載の方法。 （３１）前記状態が中枢神経系炎症疾患である請求項（
   ２２）に記載の方法。 （３２）中枢神経系炎症疾患が、急性化膿性髄膜炎であ
   る請求項（３１）に記載の方法。（３３）前記状態が熱
   損傷である請求項（２２）に記載の方法。 （３４）前記状態が血液透析である請求項（２２）に記
   載の方法。 （３５）前記状態が白血球症である請求項（２２）に記
   載の方法。 （３６）前記状態が、潰瘍性大腸炎である請求項（２２
   ）に記載の方法。 （３７）前記状態が、クローン病である請求項（２２）
   に記載の方法。 （３８）前記状態が、懐死性全腸炎である請求項（２２
   ）に記載の方法。 （３９）前記状態が、顆粒球輸注関連症候群である請求
   項（２２）に記載の方法。 （４０）前記状態がサイトカイン誘導毒性である請求項
   （２２）に記載の方法。 （４１）前記状態が、アテローム硬化症である請求項（
   ２２）に記載の方法。 （４２）Ｍａｃ−１のアルファ−サブユニット、または
   その機能性誘導体を含有する組成物の有効量を被検体に
   投与することから成るウィルス感染を処置する方法。