JPH0335787A - ガラクトース転移生成物の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は乳糖または０−ニトロフェニルーβＤーガラク
トピラノシド等、ガラクトース供与体と糖、糖アルコー
ル、ヌクレオシド、アルコール及びその誘導体等のガラ
クトース受容体から一般式（Ｇａｆ）、−Ｒ（但しＧａ
ｌはガラクトース残基、ｎは１〜４の整数、Ｒは糖、糖
アルコール、ヌクレオシド、アルコール及びその誘導体
等をそれぞれ表わす）で示されるガラクトース転移生成
物の製造法に関する。

近年、ガラクトース残基を含む化合物は糖への転移生成
物としてはビフィズス菌の増殖因子として注−目されて
おり、その他糖アルコール、ヌクレオシド、アルコール
等への転移生成物は溶解度の増加等物性変化が認められ
医薬品へ、の応用等きわめて利用価値が高い。

（従来技術と問題点） ガラクトース転移生成物を生成させる方法としては、大
腸菌のβ−ガラクトシダーゼを用いてガラクトース残基
をフルクトースあるいはＮ−アセチルグルコサミンに転
移させる方法（Ｂｉｏｔｅｃｈｎ。

１ｏｇｙ　Ｌｅｔｔｅｒｓ９巻２４３ページ（１９８７
年））及びアデノシン等ヌクレオシドに転移させる方法
（日本農芸化学会誌４８巻６０５ページ（１９７９年）
）が知られているが、転移生成物の収率は低いという欠
点を有している。

（問題を解決するための手段） 本発明者らは上述の事情に鑑み、乳糖または０ニトロフ
ェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド等、ガラクトース
供与体と糖、糖アルコール、ヌクレオシド、アルコール
及びその誘導体等のガラクトース受容体からガラクトー
ス転移生成物を高蓄積・高収率で生成する微生物を検索
した結果、ロドトルラ属、ステリグマトマイセス属、ク
リブバクテリウム属、リゾビウム属、シロバシディウム
属に属する微生物が、乳糖またはＯ−ニトロフェニル−
β−Ｄ−ガラクトピラノシド等、ガラクトース供与体と
糖、糖アルコール、ヌクレオシド、アルコール及びその
誘導体等のガラクトース受容体から高蓄積・高収率でガ
ラクトース転移生成物を生成することを見いだし、本発
明を完成させるに至った。

本発明において使用される微生物は具体的にはロドトル
ラ　ミヌタ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　ｍ１ｎｕｔａ）
　ＩＦＯ８７９、ステリグマトマイセス　エリビアエ（
Ｓｔｅｒｉｇｍａｔｏｏ＋ｙｃｅｓ　ｅｌｖｉａｅ）　
ＡＪ　１４１９９　（ＦＥＲＭＰ−１０００１）＋クリ
プトコツカス　ローレンテイ（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕ
ｓｌａｕｒｅｎｔｉｉ）　ＩＦＯ６０９＋ゲオトリカム
　アミセリカム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ　ａｍｙｃｅｌ
ｉｃｕｍ）　ＡＪ　１４１９６　（ＦＥＲＭ　Ｐ１００
７１）　、アピオトリカム　フミコーラ（Ａｐｉｏｔｒ
ｉｃ−ｈｕｍ　ｈｕｓｉｃｏｌａ）　ＡＴＣＣ１４４３
８，コリネバクテリウムミシガネンス　（Ｃｏｒｙｎｅ
ｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｅ）ＡＴ
ＣＣ４９２，バチラス　メガテリウム（Ｂａｃｉｌ　ｌ
ｕｓｍｅｇａｔｅｒｊｕｍ）　ＡＪ　１２７２　（ＦＥ
ＲＭＰ−３７４７）、フラボバクテリウム　オーランテ
アナム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｕｒａｎｔｉ
ａｎｕｍ）　ＡＪ　２４６２　（ＦＥＲＭＰ−１００６
９）＋　　リゾビウムメリロテイ（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ
　ｍｅｌｉｌｏｔｉ）ＡＪ　２Ｂ２３（ＦＥＲＭＰ−８
１９７）　、　シロバシデイウムマグナム（Ｓｉ−ｒｏ
ｂａｓｉｄｉｕｍ　ｍｕｇｎｕｍ）　ＣＢＣ６８０３が
ある。

これらの微生物の培養には、通常これらの微生物が資化
しうる栄養源であれば何んでも使用しうる。例えばグル
コース、シュクロース等の炭水化物、エタノール、グリ
セロース等のアルコール、酢酸、プロピオン酸等の有機
物；大豆油等の炭素源またはこれらの混合物、酵母エキ
ス、ペプトン、肉エキス、コーン、ステイープリカー、
硫安、アンモニア等の含窒素無機有機栄養源ニリン酸塩
、マグネシウム、鉄、マンガン、カリ等の無機栄養源；
およびビオチン、チアミン等のビタミン類を適宜配合し
た通常の培地が用いられる。培養の方法としては栄養培
地のｐＨを４．０〜９．５の範囲で好気的に２０〜４０
°Ｃの範囲で１２時間〜５日間培養する。

ガラクトース転移生成物を生産させる方法としては培養
初期あるいは培養途中に、乳糖または〇−ニトロフェニ
ルーβ−Ｄ−ガラクトピラノシド等ガラクトース供与体
と糖、糖アルコール、ヌクレオシド、アルコール及びそ
の誘導体等のガラクトース受容体を培地に添加し、培養
しながら行なってもよいし静止菌体を用いてもよい。

静止菌体を用いる方法としては、培養液をそのまま用い
る方法、遠心分離等により菌体を分離しこれをリン酸緩
衝液等に再懸濁したものに、乳糖または乳糖含有物を添
加し反応させる方法等がある。また菌体は生菌体のまま
でもよいしアセトン処理、凍結乾燥等の処理をほどこし
たものでもよい、またこれらの菌体を担当に固体化して
用いることもできる。

なお、乳糖または０−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラク
トピラノシド等のガラクトース供与体と糖、糖アルコー
ル、ヌクレオシド、アルコール及びその誘導体等のガラ
クトース受容体からガラクトース転移生成物を生成させ
る反応において、乳糖または０−ニトロフェニル−β−
Ｄ−ガラクトピラノシド等のガラクトース供与体及びそ
の糖、糖アルコール、ヌクレオシド、アルコール及びそ
の誘導体等のガラクトース受容体の使用量は特に制限さ
れないが、乳糖として０．５〜７０％重量％の範囲、好
ましくは１％〜３０％の重量％であり、０−ニトロフェ
ニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシドとしては０．２〜１
０％重量％の範囲、好ましくは０．５〜２％重景％の範
囲であり、糖、糖アルコール、ヌクレオシド、アルコー
ル及びその誘導体としては０．１〜５０％重量％の範囲
、好ましくは１．０〜３０重量％の範囲である。反応は
通常２０〜７０°Ｃ１好ましくは２５〜６５°Ｃの温度
でｐＨ２〜１０、好ましくは３〜７の範囲で２時間〜Ｉ
Ｏ日間行なう。

反応が終了した反応液は必要に応して菌体を分離後イオ
ン交換樹脂、ゲルが過、活性単吸着などのクロマトグラ
フィー等にかけることによりガラクトース転移生成物を
精製できる。

以下、本発明を具体的に実施例にて説明するが、本発明
はこれら実施例のみに限定されるものではない。実施例
におけるガラクトース転移生成物の定量は高速液体クロ
マトグラフィー（ポンプは日立製作所製６５５型、検出
器は昭和電工５Ｅ−５１，カラムは５ｈｏｄｅｘ−８８
０１，溶媒は水）を用い、ピーク面積より求めた。

実施例１ ラクトース１．０ｇ／ｄｆ、グリセロール１．ｏｇ／ｄ
　ｆ、酵母エキス１．０ｇ／ｄｆ、ポリペプトン１．０
　ｇ／　ｄ　ｊ！、　（ＮＨ４）ｚｓＯ４０，５ｇ／　
ｄ　１．、　ＫｚＨＰＯｎＯ，３ｇ／　ｄ　ＣＫＨｔＰ
Ｏａ　Ｏ，Ｉ　ｇ／　ｄ　ｆ、　Ｍｇ５Ｏｎ・７１１ｚ
００．０５ｇ／ｌ！、を含む培地（ｐＨ７，０）を５０
０ｍ！！、容フラスコに５０ｍｊ２人れ１１５°Ｃ２１
５分間殺菌した。これにマルツエキス寒天培地で２５°
Ｃ１２日間培養した。ロドトルラ　ミヌタＩＦＯ８７９
゜シ ステリグマトマイセス　矢すビアエＡＪ　１４１９９（
ＦＥＲＭＰ−１０００１）　、クリプトコツカス　ロー
レンティＩＦＯ６０９、ゲオトリカムアミセリカムＡＪ
　１４１９６（ＦＥＲＭＰ−１００７１）　、アピオト
リカム　ラミコーラＡＴＣＣ１４４３８、シロバシディ
ウムマグナムＣＢＳ　６８０３並びにブイヨン寒天培地
に３０°Ｃ９２４時間培養した、コリネバクテリウム　
ミシガネンスＡＴＣＣ４９２゜バチラスメガテリウムＡ
Ｊ　１２７２　（ＰＥＲＭＰ−３７４７）　。

フラボバクテリウムオーランテアナム＾Ｊ　２４６２（
ＰＥＲ月Ｐ−１００６９）、リゾビウムメリロティＡＪ
　２８２３（ＦＥＲＭＰ−８１９７）をそれぞれ−白金
耳接種し、３０℃でＩＰＯ８７９，ＡＪ　１４１９９（
ＰＥＲＭＰ−１０００１）、　ＩＰＯ６０９゜ＡＪ　１
４１９６（ＦＥＲＭＰ−１００７１）、　ＡＴＣＣ１４
４３８，ＣＢＳ　６８０３の場合には２日間、ＡＴＣＣ
４９２，ＡＪ　１２７２（Ｐｌ！ＲＭＰ−３７４７）、
　ＡＪ　２４６２（ＦＥＲＭＰ−１００６９）、　ＡＪ
　２８２３（ＦＥＲＭＰ−８１９７）の場合には２４時
間振とう培養した。培養終了後遠心分離により菌体を集
め培養液と同量の生理食塩水で一回洗浄し菌体を集めた
。

この菌体を乳糖２．５ｇ並びに表−１にしめした各糖５
ｇを添加した基質液（５０ｓＭ’Ｊン酸緩衡液中、ｐＨ
７，０）５０ｍＩｌに懸濁し５０’Ｃで２４時間反応さ
せた。反応液中のガラクトース転移生成物の生成量を表
−１にしめした。

実施例２ 実施例１と同様にして菌体を調製し、この菌体を乳糖２
．５ｇ並びに表−２にしめした各糖アルーコール及びア
ルコール５ｇを添加した基質液（５０ｍＭ’Ｊン酸緩衡
液中ｐ！Ｉ　７．０）　５０　ｍ　ｌに懸濁し、５０°
Ｃで２４時間反応させた。反応液中のガラクトース転移
生成物の生成量を表−２にしめした。

以下余白 実施例３ 実施例１と同様にして菌体を調製し、この菌体を乳糖０
．５　ｇ並びに表−３にしめした各ヌクレオシド１．Ｏ
ｇを添加した基質液（５０ｍＭリン酸緩衝液中ｐＨ７，
０）　　１０ｍｊ！に懸濁し、５０’Ｃで２４時間反応
させた。反応液中のガラクトース転移生成物の生成量を
表−３にしめした。

以下余白 実施例４ 実施例１と同様にして菌体を調製し、この菌体を０−ニ
トロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド０．１５　
ｇ並びに表−４にしめした各ヌクレオシド１．０ｇを添
加した基質液（５０ｗＭリン酸緩衡液中ｐＨ７，０）１
０ｍｊ！に懸濁し、５０℃で２０時間反応させた０反応
液中のガラクトース転移生成物の生成量を表−４にしめ
した。

以下余白 実施例５ 実施例１と同様にして調製したロドトルラ　ミヌタＩＦ
Ｏ８７９の菌体を乳Ｉｔ！２．５ｇ並びにイノシン５ｇ
を添加した基質液（５０ｍＭリン酸緩衡液中ｐｌ＋７．
０）５０ｍｌに懸濁し５０″Ｃで４８時間反応させた。

反応液中のガラクトース転移生成物の生成量を表−５に
しめした。

表−５ 実施例６ 実施例１と同様にして調製したロドトルラ　ミヌタＩＰ
Ｏ８７９の菌体を、乳１！　２．５　ｇ並びに大豆ホエ
ーより抽出した大豆オリゴＩ！５ｇ（スタキオース３．
５ｇ、　　ラフィノース０．８ｇ、　　シュクロース０
．７ｇ含有）を添加した基質液（５０ｍＭリン酸緩衡液
中ｐＨ７，０）５０ｍｆｆｉに懸濁し、５０’Ｃで２４
時間反応させた。その結果大豆オリゴ糖へのガラクトー
ス転移生成物が２．６ｇ（内スタキオースに転移したち
の２．２ｇ　ラフィノースに転移したもの０．４ｇ）生
成した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）乳糖またはｏ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクト
   ピラノシド等、ガラクトース供与体と糖、糖アルコール
   、ヌクレオシド、アルコール及びその誘導体等のガラク
   トース受容体から一般式（Ｇａｌ）＿ｎ−Ｒ（但しＧａ
   ｌはガラクトース残基ｎは１〜４の整数、Ｒは糖、糖ア
   ルコール、ヌクレオシド、アルコール及びその誘導体を
   それぞれ表わす）で示されるガラクトース転移生成物を
   生成する能力を有する微生物を乳糖またはｏ−ニトロフ
   ェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド等、ガラクトース
   供与体と糖、糖アルコール、ヌクレオシド、アルコール
   及びその誘導体等のガラクトース受容体に作用せしめ生
   成するガラクトース転移生成物を採取することを特徴と
   するガラクトース転移生成物の製造方法。 ２）ガラクトース転移生成物を生成する能力を有する微
   生物が、ロドトルラ属、ステリグマトマイセス属、クリ
   プトコッカス属、ゲオトリカム属、アピオトリカム属、
   コリネバクテリウム属、バチラス属、フラボバクテリウ
   ム属、リゾビウム属、シロバシディウム属に属する微生
   物であることを特徴とする第１請求項記載の製造法。