JPH02119788A - ガラクトース転移生成物の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は乳糖または。−ニトロフェニルーβ−Ｄ−ガラ
クトピラノシド等、ガラクトース供与体とｍ、ｍアルコ
ール、ヌクレオシド、アルコール及びその誘導体等のガ
ラクトース受容体から一般式（Ｇａｌ）ｎ　−Ｒ　（但
しＧａｌはガラクトース残基、ｎは１〜４のｕ数、Ｒは
糖、糖アルコール、ヌクレオシド、アルコール及びその
誘導体等をそれぞれ表わす）で示されるガラクトース転
移生成物の製造法に関する。

近年、ガラクトース残基を含む化合物は糖への転移生成
物としてはビフィズス菌の増殖因子として注目されてお
り、その低糖アルコール、ヌクレオシド、アルコール等
への転移生成物は溶解度の増加等物性変化が認められ医
薬品への応用等きわめて利用価値が高い。

（従来技術と問題点） ガラクトース転移生成物を生成させる方法としては、大
腸菌のβ−がラクトルダーゼを用いてガラクトース残基
をフルクトースあるいはＮ−アセチルグルコサミンに転
移させる方法（ＢｉｏｔｓｃｈｎｏｌｏＦＣ−ｙＬｅｔ
ｔｅｒｓ　９巻２４３ページ（１９８７年））及びアデ
ノシン等ヌクレオシドに転移させる方法（日本農芸化学
会誌　４８巻　６０５イー−，７（１９７９年））が知
られているが、転移生成物の収率は低いという欠点を有
している。

（問題を解決するだめの手段） 本発明者らは上述の事情に鑑み、乳糖またはｏ−ニトロ
フェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド等、ガラクトー
ス供与体と糖、糖アルコール、ヌクレオシド、アルコー
ル及びその誘導体等のガラクトース残基からガラクトー
ス転移生成物を高蓄積・高収率で生成する微生物を検索
した結果、ロドトルラ属、ステリグマドマイセス属、ク
リプトコツカス属、ケ゛オトリカム属、アビ０オドｙカ
ム゛属、コリネバクテリウム属、・ぐチラス属、ブレビ
バクテリウム属、リゾビウム属に属する微生物が、乳糖
または０−ニトロフェニル−β−Ｄ−がラクトピラノシ
ド等、ガラクトース供与体と糖、糖アルコール、ヌクレ
オシド、アルコール及びその誘導体等のガラクトース受
容体から高蓄積・高収率でガラクトース転移生成物を生
成することを見いだし、本発明を完成させるに至った。

本発明において使用される微生物は具体的にはロドトル
ラ　ミヌタ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　ｍｊｎｕｔａ　
）　ＩＦＯ８７９、ステリグマドマイセス　エリビアエ
（Ｓｔｅｒｉｇｍａｔｏｍｙｃｅｓ　ｅｌｖｌａｅ　）
　ＡＪ１４１９９　（ＦＥＲＭＰ−１０００１）　、　
りＩＪ　ｆ　）コツカス　ローレンティ（Ｃｒｙｐｔｏ
ｃｏｃｃｕｓ　１ａｕｒｅｎｔｉｌ　）　ＩＦＯ６０９
、’ｒ”オトリカム　アミセリカム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈ
ｕｒｎ　ａｍｙｃｅｌｉｃｕｍ　）ＡＪ　ｉ４．１９６
　（ＦＥＲＭ　Ｐ　−１００７１）、７ビオトリカムフ
ミコーラ（Ａｐｉｏｔｒｌｃｈｕｍ　ｈｕｍｉｃｏｌａ
　）ＡＴＣＣ１４４３８゜コリネバクテリウム　ミシガ
ネラス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｍｊｃｈｌｇ
ａｎｅｎｓｅ　）　ＡＴＣＣ４９２、ノ’チラス　メガ
テリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｍｅｇａｔｅｒｆｕｍ　
）　ＡＪ　１２７２　（ＦＥＲＭＰ−３７４７）　、フ
ラゲパクテリウムオーランテアナム（Ｆｌａｖｏｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ　ａｕｒａｎｔｉａｎｕｍ　）　ＡＪ　２
４６２（ＦＥＲＭＰ−１００６９）　、リゾビウム　メ
リロティ（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ　ｍｅｌｉｌｏｔｉ　）
　ＡＪ　２８２３　（ＦＥＲＭＰ−８１９７）がある。

これらの微生物の培養には、通常これらの微生物が資化
しうる栄養源であれは何んでも使用しうる。例えばグル
コース、シュクロース等の炭水化物、エタノール、クリ
セロール等のアルコール、酢酸、ゾロピオン酸等の有機
酸；大豆油等の炭素源またはこれらの混合物、酵母エキ
ス、硬ゾトン、肉エキス、コーン、ステイープリカー、
硫安、アンモニア等の含窒素無機有機栄養源；リン酸塩
、マグネシウム、鉄、マンガン、カリ等の無機栄養源；
およびビオチン、チアミン等のビタミン類を適宜配合し
た通常の培地が用いられる。培養の方法としては栄養培
地の−を４０〜９．５の範囲で好気的に２０〜４０℃の
範囲で１２時間〜５日間培養する。

ガラクトース転移生成物を生産させる方法としては培養
初期あるいは培養途中に、乳糖またはｏ　−ニトロフェ
ニル−β−Ｄ−ガラクトぎラノシド等のガラクトース供
与体と糖、糖アルコール、ヌクレオシＰ、アルコール及
びその誘導体等のガラクトース受容体を培地に添加し、
培養しながら行なってもよいし静止菌体を用いてもよい
。

静止菌体を用いる方法としては、培養液をそのまま用い
る方法、遠心分離等により菌体を分離しこれをリン酸緩
衝液等に再懸濁したものに、乳糖または乳糖含有物を添
加し反応させる方法等がある。また菌体は生菌体のまま
でもよいしアセトン処理、凍結乾燥等の処理をほどこし
たものでもよい。またこれらの菌体を担体に固定化して
用いることもできる。

なお、乳糖または０−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラク
トピラノシド等のがラクトース供与体と糖、糖アルコー
ル、ヌクレオシド、アルコール及びその誘導体等のがラ
クトース受容体からガラクトース転移生成物を生成させ
る反応において、乳糖または。−二トロフェニルーβ−
Ｄ−がラクトピラノシド等のがラスドース供与体及び糖
、糖アルコール、ヌクレオシド、アルコール及ヒ（−（
７）誘導体等のガラクトース受容体の使用量は特に制限
されないが、乳糖として０．５〜７０％重量％の範囲、
好ましくは１チ〜３ｏチの重ｔ％であり、ｏ　−ニトロ
フェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシドとしては０．２
〜１０チ重量％の範囲、好ましくは０．５〜２チ重量％
の範囲であり、糖、糖アルコール、ヌクレオシド、アル
コール及びその誘導体としてＶｉｏ、　１〜５０チ重量
係の範囲、好ましくは１．０〜３０重量％の範囲である
。反応は通常２０〜７０℃、好ましくは２５〜６５℃の
温度でｐＨ２〜１０、好ましくは３〜７の範囲で２時間
〜１゜日間行なう。

反応が終了した反応液は必要に応じて菌体を分離後イオ
ン交換樹脂、グル濾過、活性炭吸着などのクロマトグラ
フィー等ＫかけることＫよりガラガ゛ラタトー増駅些生
へ物を精製できる。

以下、本発明を具体的に実施例にて説明するが、本発明
はこれら実施例のみに限定されるものでは々い。実施例
におけるガラクトース転移生成物の定量は高速液体クロ
マトグラフィー（ポンプは日立製作所製６５５型、検出
器は昭和電工５Ｅ−５１、カラムは５ｈｏｄｅｘ−８８
０１、溶媒は水）を用い、ピーク面積よシ求めた。

実施例１ ラクトース１．０　ｇ７ｄｌ　、グリセｏ−ル１．　Ｏ
ｇ／ｄｉ　＋酵母エキス１．０　ｇ／ｌｄｌ　、ポリペ
プトン１．０１１／ｄｅ　。

（ＮＨ４）２Ｓｏ４０．５　ｇ／ｄｉ　、　Ｋ２ＨＰＯ
４０，３Ｖｄｉ　、　ＫＨ２ＰＯ４０、Ｉ　Ｖｄｌ　、
　ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，０５ｇ／ｄ７！、を含む培
地（ｐ）１７．０　）を５００　ｍｌ容フラス＝＋に５
ｏｄ入れ１１５℃、１５分間殺菌した。これにマルツェ
キス寒天培地で２５℃、２日間培養した、ロドトルラ　
ミヌタＩＦＯ８７９、ステリグマドマイセス　エリビア
エＡＪ１４１９９　（ＦＥＲＭＰ−１０００１）　、ク
リプトコツカス　ローレンティＩＦＯ６０９、ダオトリ
ヵム　アミセリカムＡＪ１４１．９６　（ＦＥＲＭＰ−
１００７１）　、アビオトリヵムフミコーラＡＴＣＣ１
４４３８並びにブイヨン寒天培地に３０℃、２４時間培
養した、コリネパクテリウムミシガネラスＡＴＣＣ４９
２、バチラス　メガテリウムＡＪ１２７２　（ＦＥＲＭ
Ｐ−３７４７）　、フラデバクテリウムオーランテアナ
ムＡＪ２４６２　（ＦＥＲＭＰ−１００６９’）　、リ
ゾビウムメリロティＡＪ２８２３　（ＦＥＲＭＰ−８１
９７）をそれぞれ−白金耳接種し、３０℃でＩＦＯ８７
９。

ＡＪ１４１９９　（ＦＥＲＭＰ−１０００１）　、　Ｉ
ＦＯ６０９、ＡＪ１４１９６（ＦＥＲＭＰ−１００７１
）　、　ＡＴＣＣ１４４３８の場合には２日間、ＡＴＣ
Ｃ４９２、ＡＪ１２７２　（ＦＥＲＭＰ−３７４７）　
、　ＡＪ２４６２（ＦＥＲＭＰ−１００６９）　　、　
ＡＪ２８２３　（ＦＥＲＭＰ−８１９７）の場合には２
４時間振とう培養した。培養終了後遠心分離により菌体
を集め培養液と同量の生理食塩水で一回洗浄し菌体を集
めた。

この菌体を乳糖２．５９並びに表−１にしめした各糖５
ｙを添加した基質液（５０ｍＭ　リン酸緩衝液中、ｐＨ
７，０）５０ｍＪに懸濁し５０℃で２４時間反応させた
。反応液中のガラクトース転移生成物の生成量を表−１
にしめした。

実施例２ 実施例１と同様にして菌体を調製し、この菌体を乳糖２
．５１並びに表−２にしめした各糖アルコール及びアル
コール５ｇを添加した基質液（５０ｍＭリン酸緩衝液中
ｐＨ７，０）　５０　ｍｌに懸濁し、５０℃で２４時間
反応させた。反応液中のがラクトース転移生成物の生成
量を表−２にしめした。

双下余臼 実施例３ 実施例１と同様にして菌体を調製し、この菌体を乳糖０
．５ｇ並びに表−３にしめした各ヌクレオシド１．０ｇ
を添加した基質液（５０ｍＭ　＋）ン酸緩衝液中ＰＨ７
，０）１０ＷＬＩ！に懸濁し、５０℃で２４時間反応さ
せた。反応液中のガラクトース転移生成物の生成量を表
−３にしめしだ。

夙下余白 実施例４ 実施例１と同様にして菌体を調製し、この菌体をｏ−ニ
トロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド０．１５Ｆ
並びに表−４にしめした各ヌクレオシド１．Ｏｙを添加
した基質液（５０ｍＭリン酸緩衝液中ｐＨ７，０）１０
Ｍに懸濁し５０℃で２０時間反応させた。反応液中のガ
ラクトース転移生成物の生成量を表−４にしめしだ。

双下余白 実施例５ 実施例１と同様にして調製したロドトルラミヌタＩＦＯ
３７９の菌体を乳糖２．５ｇ並びにイノシン５ｇを添加
した基質液（５０ｍＭ　’）ン酸緩衝液中ｄＬ７．０）
５０ゴに懸濁し５０℃で４８時間反応させた。反応液中
のガラクトース転移生成物の生成量を表−５にしめしだ
。

表−５ ３，５，９，ラフィノースｏ、ｓ１１．シエクロース０
．７１含有）を添加した基質液（５０ｍＭ’Ｊン酸緩衝
液中ｐｉ−１７．Ｏ）　５０　ｄに懸濁し５０℃で２４
時間反応させた。その結果大豆オリコ“糖へのがラクト
ース転移生成物が２．６．９（内スタキオースに転移し
だもの２．２ｇ　ラフィノースに転移したものｏ、４１
１）生成した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）乳糖またはｏ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクト
   ピラノシド等、ガラクトース供与体と糖、糖アルコール
   、ヌクレオシド、アルコール及びその誘導体等のガラク
   トース受容体から一般式（Ｇａｌ）＿ｎ−Ｒ（但しＧａ
   ｌはガラクトース残基ｎは１〜４の整数、Ｒは糖、糖ア
   ルコール、ヌクレオシド、アルコール及びその誘導体を
   それぞれ表わす）で示されるガラクトース転移生成物を
   生成する能力を有する微生物を乳糖またはｏ−ニトロフ
   ェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド等、ガラクトース
   供与体と糖、糖アルコール、ヌクレオシド、アルコール
   及びその誘導体等のガラクトース受容体に作用せしめ生
   成するガラクトース転移生成物を採取することを特徴と
   するガラクトース転移生成物の製造方法。 ２）ガラクトース転移生成物を生成する能力を有する微
   生物が、ロドトルラ属、ステリグマトマイセス属、クリ
   プトコッカス属、ゲオトリカム属アピオトリカム属、コ
   リネバクテリウム属、バチラス属、フラボバクテリウム
   属、リゾビウム属に属する微生物であることを特徴とす
   る第１請求項記載の製造法。