JPH0335737A - バレイショ塊茎の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 イ、産業上の利用分野 本発明は組織培養法によるバレイショ （Ｓｏｌａｎｕｍ　ｔｕｂｅｒｏｓｕｓ　Ｌ、）の塊茎
の製造法に関するものである。より詳しくは、バレイシ
ョの植物体を成長点培養、多芽体培養、節培養などの組
織培養技術により増殖して得た無菌植物体に、特定の成
長制御物質を用いて効率よく数個の塊茎を形成させる方
法に関する。この塊茎は、培養容器から取り出して長期
間保存可能であり、かつまた萌芽およびその後の生育は
良好である。この方法により、バレイショの交配育種に
よって得た新品種あるいは海外より導入によって得た品
種の無病優良種苗を、短期間のうちに安価でかつ遺伝的
に均一な状態で大量に増殖することが可能となる。

口、従来技術 従来、組織培養法を利用したバレイショ塊茎の製造法に
ついては多くの研究がなされており、エストラーダ等は
成長制御物質の一種である２−クロロエチル−トリメチ
ルアンモニウムクロライド（ＣＣＣ）を含む培地でバレ
イショ無菌植物体を培養し、塊茎を得ている（Ｐｌａｎ
ｔ　ｅａｌ＋、　Ｔｉ５ｓｕｅａｎｄ　Ｏｒｇａｎ　Ｃ
ｕ１ｔｕｒｅ、　７　、　３〜ＩＬ　１９８［１）　ｏ
この方法においては塊茎の形成は促進されるがその効果
は必ずしも十分ではなく、薬剤の使用濃度が５００ｐｐ
ｍと高いので製造コストが高くつき、またＣＣＣは劇物
であるため取り扱いに格別の注意をフ）□する。

ハ、発明が解決ｊ、ようとする問題点 本発明は上記菌来技術の欠点を解決するためのち両であ
り、そのｌ」的とすると１゛、ろｉｔ、気候、土壌９、
季節ｔｉ　２ｆに関係な（短時間で植物組織培養法によ
り効率よくバ１ノイシ３の新品種や導入品種の急速普及
に用りするための塊朶を製造ずろにたである。

二問題点を解決するための手段 人発明台らは１、以上の問題点の解決を目的４！ニジて
、組織培ｆｉ　＋、二Ｊ：、るバレイシ１塊茎の製造法
について詳細な検討を行−）た結果、特定の成長制御物
質、即ちアンシミドール（α−シクロプロピル−α−（
ρ−メトキシフェニル）−５−ビリミジンメヂルアルコ
ール）、バクロブトラゾ・−・ル（（２−Ｒ８３−Ｒ８
）　　−１−（４−クロロフｘ、、ｌ−ル）４−４−ジ
メチル−２−（ＩＨ−１，２，４−１−リアゾール−１
−イル）ベソデンー３・オール）またはウニコラゾール
（（Ｅ）１−　　（４−り口ｒ３７　、ｚニル）４．４
−ジメチル−２−（１，２，４−トリアシー・ルー１−
イル）−］−］ベンクンー３−オールを培地に添加する
こたにより以上の問題点が昔しく改養するこｌ；を見い
だ１２、本発明を完成し、た。

本発明の製造法は次のＡおよびＢ−Ｌ程からなるオｉ織
培蒼法によって好適に実施される。３くＡ］＝、程二無
菌培養系の確立〉 バレイジ３の無菌植物体は公知の方７）＝によって得ら
れる。

例λば、バ１ノイシづの塊茎、茎頂、茎などあるいはそ
れらを切断した組織切片ｔ、。′１ｏ′ｆ′−ルアルコ
ール、次亜塩素酸ナトリウムなどを用いて殺菌処理した
のち、無菌水で、」、く洗う。このよ・）にして表面殺
菌［また植物体あるいは組織切片を、滅菌１、た固体培
地あるいは液体培地に培地１〜１００ｍ１当り１個の割
合を置床する。固体培地あるいは液体培地と１２では通
常植物の組織培養に用いられる培地ｅあればいかなるも
のも使用できる。たたえばムラシゲとスクーグの培地、
リンスマイヤーとスクーグの培地など、あるいはこれら
を基本培地としてこれらに種々の改変を加えたＩ、のな
とが用いられる。固体状にするｌ二めには寒天、アガロ
・−ス、ジグ、ランガムなだが用いられる。またオーキ
シン類りｌ′イトカイニン類なとの植物成長制御物質の
濃度を種々に組み合わせて培地に添加するこεもで肖る
。これらの植物成長制御物質の添加員は、植物成長制御
物質の種類、植物の部位、培養段階などによっでそれぞ
れ異なるが、一般に０．０１〜１０℃ｇ、／Ｎ程度でよ
い。境地のｐｌ＋は４．０〜、・７．０が好適で゛ある
。照明は１ｏｏ−ｉｏｏｏｏｏルクスの光度で行うのが
望ましい。後述のＢ丁程においても上記培地、植物成長
制御物質は適宜用いられる。。

置床後、１０〜３０℃、好まし７くは２１〜２５℃で１
〜２０週間の培播により植え付けた組織切片から植物体
が発達ｊ７てくる。以上のよう（４＝シτバレイシ１の
無菌培養系が確立ぎれる。

く０工程：成長制御物質１．″よる塊茎の形成・肥大促
進〉Ａ工程で確立した無菌植物体を切断・分割（７、本
発明の成長制御物質を含有する液体培地１〜１００ｍ１
当り１切片の割合で置床後、１０−３０℃で１〜２０週
間培養する。培養法には特に制限はなく、公知の方法、
即ち、静置、振とう、旋回、通気あるいは攪はん培養を
行うこにができる。培養により外植体である組織Ｉ　Ｉ
、ＪＪＪ↑に存在する蓚の葉茎化が抑制きれて、効率よ
く共が塊茎化され、かつまた塊茎の肥大が起こる。成長
制御物質の濃准は０．０１．　＝　ｌｏｎｇ／　Ｄの範
囲が適Ｌ２ている。成長制御物質としては、特定の成長
制御物質、即ち１、アンシミドール、ウニ、コナゾール
ま］。”、はバク「ｊブトラゾールが使用されるが、ウ
ニ１ノーゾールおよびバクロブ］・ラゾールが持に効果
が優れている。光の照射はなくてもよい。なお、これら
のＡおよび８工程を繰り返し実施するこ、！：ｊ、：よ
り組織培養による塊茎製造を安定かつ急速に行うこＬが
できる。

本発明の方法においては、先ず外植体の頂芽が肥大して
塊茎化され、次いで腋芽が上から順次塊茎化されるが、
頂芽を切除１９．ておくと腋芽が大量に塊茎され、多数
の塊茎を得るこ乏ができる。

ホ、実施例 次に実施例について説明する。

実施例　１ バレイショの品種メイクィーンの塊茎を園芸用バット内
のバーミキュライトの中に伏せ込み、温室内で育て芽を
萌芽させる。萌芽した芽を５０程度の長さにして１０％
次亜塩素酸ナトリウム溶液（Ｈ効塩素員１％）に１５分
間浸して表面殺菌したのち、滅菌蒸留水で３回洗浄する
。解剖顕微鏡下で幼葉をビンセットで外し成長点部を露
出させる。

メスにより成長点を高さ０．５＋ａｍの切片に切取り、
下記第１表の組成を有する寒天培地５ｍｌを含む内径１
６ＩＩＩｍ高さ１３０ｍｍの試験管に試験管１本当り１
個置床し、アルミホイルで栓をしたのち、２５℃、５０
００ルクスの照明下で培養する。

第　　　１ 硝酸アンモニウム 硝酸カリウム 塩化カルシウム・２水塩 硫酸マグネシウム・７水塩 リン酸第−カリウム 表 １６５０■ １９００ａ＋ｇ ４４０　ｍｇ ７０ｍｇ １７０鳳ｇ 第　　　１ 表 （続き） Ｎａ２ＥＤＴＡ◆２水塩 硫酸第一鉄・７水塩 ホ　　ウ　　酸 硫酸マンガン・４水塩 硫酸亜鉛・７水塩 ヨウ化カリウム モリブデン酸ソーダ 硫酸第一銅 塩化コバルト ビタミンＢｌ イノシトール 塩酸ピリドキシン ニコチン酸 グリシン シ　　ヨ　　糖 寒　　　　天 ３７．３区ｇ ２７．８■ ６．２■ ２２．３■ １．０３　■ ０．８３　■ ０．２５■ ０．０２５＋ａｇ Ｏ，（１２５ａ＋ｇ ０．４０　■ １００■ ０．５０　ａ＋ｇ ｏ、５０■ ２．００　■ ０ｇ ０ｇ 培地は上記成分を蒸留水に溶かして１リツトルとし、ｐ
Ｈを５．８に調整し、オートクレーブを用いて蒸気殺菌
して調製した。

この培養によって成長点は１ケ月程で幼植物体に発達し
た。幼植物体はｌＯ枚程度の葉ををする状態になったら
１節毎に切り離し、前記培地に植え換えた。塊茎製造を
行うための原材料はこの節の培養を繰り返すことによっ
て増殖した。塊茎の製造は、第１表の培地組成のショ糖
濃度を６０ｔｒ／Ｄに変更し、寒天を除き、パクロブト
ラゾールを０〜１００．０■／ｐ加えた液体培地５０ｍ
１を入れた３００　ｍｌの三角フラスコに、節培養開始
後１ケ月目の幼植物を移植し、１週間培養することによ
り実施した。培養は２０℃暗所で行った。第２表に示し
たように、パクロブトラゾールを０．０１〜ｌＯ■加え
た培地で培養した植物体には塊茎が２〜５個着生したの
に対して、パクロブトラゾールを全く含まない培地で培
養した植物体には塊茎の着生が認められなかった。以上
のようにして得られた塊茎を三角フラスコより取り出し
て流水で液体培地を除去するために洗浄した後、３℃の
冷蔵庫内に貯蔵した。３ケ月後、県別化学社製の園芸用
合成培土とピートモスを等容積ずつ混合した培地に塊茎
を植え付は温室内で栽培した。１週間内に萌芽がみられ
、２週間内には１００％発芽した。

第２表 １植物体当りの塊茎数 ０、Ｏｌ 　０５ ０．１ ０．５ １．０ ５．０ ＩＯｌｏ １００．０ 上記データは２０植物体当りの平均値である。

実施例　２ 実施例１と同様にしてバレイショ品種男爵いもの幼植物
を組織培養によって育てた。節培養開始後３週開目の植
物体を第１表の培地組成のうちシリ糖製！９−を６０ｇ
７□／ρにし、ウニコナゾールを０−１１１ｒｌ１ｇ　
／　（ｌ加え、寒天を除いた岐体培１１ｊｊｌニー移植
１、ノニ。１週間後、ウニ；１ナゾールを角む培地で培
養；７たと式には塊茎の着生が１植物体当り２−・４個
認められメ、・、が、巾ニコナゾールを６′まない場合
には塊茎の着生が認められなかった。

実施例　３ 実施例１と同様に（７てバレ・ｒシ３品種男湯いもの幼
植物を組織培養によって育てた。節培養開始後４週開目
の植物体を第１表の培地組成のうちシ４糖濃度をｅａｒ
／ｒにし、パクロブトラゾールを０．０１＝　１０ｍｇ
／　ｉ）あるいはＣＣＣを０．０１〜ｌＯａ＋ｇ／ρ加
え、寒天を除いた液体培地に移植した。１週間後、パク
ロブトラゾールを含む培地で培養ｊ７たとかには塊茎の
着生が１植物体当り３〜５個認められたが、ＣＣＣを衾
む場合には塊茎の着４［が認められなかった。

実施例　４ 実施例１と同様にしてバレイシ、ｌＩｌ乱抽ホッカイコ
ガネ、農林１号、ツニカ、紅丸、ハツフブキ、ユキジロ
、Ｉ−ヨシ口またはワセシロの幼植物を組識培５によ一
ンて育て！：０節培養開始後４週間１］の植物体を第１
表の培地組成のうちショ糖濃度を６０ｇ／Ｑに１１、ウ
ニコナゾールを０、旧−１０日ｇ２．／ρを加え、寒天
を除いた液体培地に移Ｉｔ、た。１週間後、全てのバ１
／イショ品種で塊茎の着生がＩ＋１′１物体当り２〜５
個認められた。

実施例　５ 実施例〕と同様に【、てバ１ノイショ品種男湯いもの幼
植物を組織培養によって青でだ。節培挟開始後ｄ週開目
の植物体を４つの節を含む切片に分断し７、第１、表に
示１．た培地組成から寒天を除いた液体培地で３日間２
５”Ｃの条件−ドで育てたのち、第１表の培地組成のう
ちショ糖濃度を８０ｇ／Ｄに１２、アンシミドールを１
．２５■／、Ｑ加え１．寒天を除いた液体培地とアンシ
ミドールを含まない培地に植換えた。２週間後、第３表
に示したようにアンシミドールを含む培地で培養したと
きには塊茎の着生が１植物体当り３〜５個認められたが
、アンシミドールを含まない培地の植物体には塊茎の着
生がほとんど認められなかった。

第 表 １培養瓶当りの塊茎数 アンシミドール添加　　　　１１，３ アンシＥドール無添加　　　　　１．０１培養瓶当り４
つの節を含む切片を３個植え付けた。データは３つの培
養瓶当りの平均値である。

比較試験例 種々の濃度の成長制御物質を用いて実施例１と同様にし
てバ１／イショ塊茎を製造し、塊茎形成率を調べた。結
果を第４表に示す。

（以下余白） 第 表 種々の成長制御物質を添加１．た培地における塊茎形成
ＣＣ ＭＱ １．０ ５．０ １０．０ １００．０ ５００．０ アンシミドール ＩＣ パクロブトラゾール ＩＣ １，０ ５，０ １０，０ ＊ ＩＣ：男湯いも ＭＱ：メイクィーン 炉を氏グＨＯ坏数 第４表から、ＣＣＣに比較して本発明の成長制御物質の
塊茎形成率が格別に高く、特にパクロブトラゾールおよ
びウニコナゾールは０．１〜１．Ｏｃｔｒｇ／Ｉという
極めて低濃度で優れた効力をＨすることがわかる。

へ発明の効果 本発明によれば、バレイショ無菌植物体から効率よく塊
茎を製造することができる。本発明の製造法においては
組織培養法を用いるため、季節、天候、土壌などの自然
条件に左右されず、かつ施肥、薬剤散布、給水等の栽培
管理も不要であり、広い土地を要することもなく、短期
間に多数のバレイショ塊茎が製造可能である。そして本
発明の製造法によって得られる塊茎は培養容器から取り
出して長期間保存可能であり、また萌芽およびその後の
生育が良好である。

従って本発明の製造法を利用することにより、バレイシ
ョの交配育種によって得た新品種の無病優良種苗を短期
間のうちに遺伝的に均一な状態で大量に増殖することが
可能である。

手続補正書 平成２年４月２３日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）組織培養によって得られたバレイショの無菌植物体
   をアンシミドール、パクロブトラゾールまたはウニコナ
   ゾールを含む培地で培養することを特徴とするバレイシ
   ョ塊茎の製造法。 ２）アンシミドール、パクロブトラゾールまたはウニコ
   ナゾールの培地中の濃度が０．０１〜１０ｍｇ／ｌであ
   る特許請求の範囲第１項記載の製造法。 ３）培養温度が１０〜３０℃である特許請求の範囲第１
   項記載の製造法。