JPH03284612A - チロシナーゼ活性抑制剤、抗酸化剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 この発明は、チロシナーゼ活性抑制剤、抗酸化剤および
抗菌剤に関するものである。

〈従来の技術および発明の背景〉 肌（皮膚）の黒化には色素のメラニンが深く関与してい
るものと考えられている。すなわち、紫外線等の外的刺
激を受けてメラニンが肌の皮膚組織で生産され、そのた
めに肌の黒化が促進され、シミ・ソバカス・色黒などの
症状が引き起こされるものと考えられている。

肌の美白の作用機序としてい（つかが挙げられるが、そ
の一つとしてメラニンの生成に関与するチロシナーゼ（
酵素）の活性化を抑制することが提唱されている。

従来、チロシナーゼの活性を抑制し得る公知の物質とし
てグルタチオンが育効であるとされている。しかし、こ
のグルタチオンは、湿性の条件下では酸化され易く、か
つ変色・変臭などを誘発し易いため、特に化粧料に配合
する成分としては致命的な問題があった。また、生薬（
天然物）中、たとえば防風、浜防風およびツクリタケ（
Ａｇａｒｉｃｕｓ　　ｂｉｓｐｏｒｏｕｓ　　）にもチ
ロシナーゼ活性抑制効果を有する物質の存在が知られて
いる。（特公昭５９−４８８０４号） これら天然物中に存在する公知のチロシナーゼ活性抑制
物質はいずれも刺激性が少ないという利点があるが、反
面そのチロシナーゼ活性抑制率が低く、しかも量産に適
しないという諸問題がある、それゆえ、チロシナーゼ活
性抑制率が高く、化学的安定性・保存性・安全性のある
物質で量産のできるものの開発が要望されていた。

発明者等は、上記諸要請に基づき、天然物由来のチロシ
ナーゼ活性抑制物質の検索・研究を進め、先ずニンギョ
ウタケ、ショウゲンジ、ホンシメジ、ウスムラサキハツ
、ウスムラサキホウキタケおよびマイタケの各子実体か
ら水または／および有機溶剤により抽出される抽出物中
に優れたチロシナーゼ活性抑制効果を有する物質が存在
することを見出して第１の発明を完成した。（特開平２
４９７１０号）そして、発明者等は、さらに研究を進め
て前記ニンギョウタケの抽出物に含まれるチロシナーゼ
活性抑制効果を有する物質を単離・精製し、かつ当該チ
ロシナーゼ活性抑制効果を有する有効物質の化学構造（
有効物質が「５−ファルネシル−６メチル一レゾルシノ
ール／別名：ネオグリフォリン、または２−ファルネシ
ル−オルシノール、または国際命名法による化合物色：
Ｅ、Ｅ−５メチル−４−（３，７，１１−）ツメチル−
２，６，１０−ドデカトリエニル）−１，３−ベンゼン
ジオール１であること）を明らかにすることにより新た
な第２の発明を完成して、天然物中に存在する有効物質
の化学釣合成による質的安定・チロシナーゼ活性抑制率
の実質的向上および有効物質の安定的な量産・供給を可
能にする途を拓いた。（特願平１−２４７７２６号）〈
発明が解決しようとする問題点〉 この発明は、発明者等による一連の前記諸発明をさらに
一歩前進させ、前記ネオグリフォリンの類似化合物とも
いうべきｒオルシノール誘導体１の数種類を化学的合成
方法により得て、それぞれの有効な生理活性、すなわち
チロシナーゼ活性抑制効果、抗酸化効果、抗菌効果など
を確認することにより完成されたものであり、化粧料・
医薬品・食料品に利用できる優れた有効物質を提供する
ことを目的とするものである。

〈問題点を解決するための手段〉 上記目的を達成するために、この発明では、■−一般式
Ａ〕■型化合物および一般式（Ｂ）Ｉｎ型化合物 　Ｈｓ ＣＨ３ ［Ａ）ｎ型化合物 （Ｂ）ｎ型化合物 〔式中、Ｒ１およびＲ７は一般式〔Ｃ〕で表わされる基
であって、ＲＩはｎ＝０．１゜２．４で示される基、Ｒ
２はｎ＝ｏ、１．２゜３．４で示される基〕で表わされ
る化合物群から選択される化合物の１種または２種以上
を含有することを特徴とするチロシナーゼ活性抑制剤。

■−一般式Ａ）ｎ型化合物および一般式（Ｂ）Ｉｎ型化
合物 ＣＨｌ 　Ｈｓ ＣＨ。

ＣＨ８ Ｚ （Ａ）１型化合物　　　　ＣＢ）　Ｉ［型化合物〔式中
、ＲｏおよびＲ２は一般式〔Ｃ〕ｚ （Ａ）ｎ型化合物　　　　（Ｂ）Ｉｎ型化合物〔式中、
Ｒ，およびＲ２は一般式ＥＣ）で表わされる基であって
、Ｒ８はｎ＝ｏ、１゜２．３．４で示される基、Ｒ２は
ｎ＝０．１゜２．３．４で示される基〕で表わされる化
合物群から選択される化合物の１種または２種以上を含
有することを特徴とする抗酸化剤。

■−一般式Ａ）ｎ型化合物および一般式（Ｂ：ｌＩｎ型
化合物 で表わされる基であって、Ｒ３はｎ＝１２４で示される
基、Ｒ２はｎ＝１．２．４で示される基〕で表わされる
化合物群から選択される化合物の１種または２種以上を
含有することを特徴とする抗菌剤。

をそれぞれ構成することとした。

この発明にかかる前記オルシノール誘導体において、Ｒ
，、Ｒ，の各置換基を具体的に記述すると、ｎ−００場
合： 水素原子ニーＨ ｎ−１の場合ニ ブレニル基：　（以下「Ｐ基」と略記する）ｎ＝２の場
合： ｎ＝３の場合： ｎ−４の場合： ゲラニルゲラニル基： （以下ｒＧＧ基」と略記する） をそれぞれ示すこととなる。

したがって、前記一般式（Ａ）ｎ型化合物および一般式
ＣＢ）ｎ型化合物において、Ｒ１およびＲ２に前記プレ
ニル基、ゲラニル基、ファルネシル基、ゲラニルゲラニ
ル基を置換して化学的合成方法により調製された各種オ
ルシノール誘導体は（Ａ）ｎ型化合物に関しては、 ■Ｒ１がプレニル基であるｎ型化合物（２−プレニル−
オルシノール）、 ■Ｒ１がゲラニル基であるｎ型化合物（２−ゲラニル−
オルシノール）、 ■Ｒ１がファルネシル基であるｎ型化合物（２−ファル
ネシル−オルシノール）、 ■Ｒ３がゲラニルゲラニル基であるｎ型化合物（２−ゲ
ラニルゲラニル−オルシノール）、（Ｂ）Ｉｆｎ型化合
物関しては、 ■Ｒ２がプレニル基であるｎ型化合物で４−プレニル−
オルシノール）、 ■Ｒ２がゲラニル基であるｎ型化合物（４−ゲラニル−
オルシノール）、 ■Ｒ２がファルネシル基であるｎ型化合物（４ファルネ
シル−オルシノール）、 ■Ｒ２がゲラニルゲラニル基であるｎ型化合物（４−ゲ
ラニルゲラニル−オルシノール）、の■〜■の各種オル
シノール誘導体をそれぞれ得ることになる。なお、ｎ＝
ｏの場合、つまりＲ１＝Ｒ，＝Ｈ（水素原子）の場合、
いうまでもなくｎ型化合物およびｎ型化合物はオルシノ
ールである。

ｉ）各種オルシノール誘導体の合成方法：この発明にか
かる各種オルシノール誘導体の化学的合成は、公知の方
法つまりＪ、　　Ｍａｒｑｕｅｔ等の方法（文献：　Ｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ　　Ｌｅｔｔｅｒｓ　　１９８１＋　
ｐ１７３〜１７６）により行う。すなわち、オルシノー
ル（２モル）とプレニルアルコール類〔＝テルペンアル
コール類：たとえば、プレノール、ゲラニオール、ファ
ルネソール、ゲラニルゲラニオール〕（１モル）とをそ
れぞれの割合で混合溶解し、これに０．７モルの割合で
縮合剤（たとえば、無水塩化コバルト／ＣｏＣ１ｚ　）
を加え、約６０′ｃ〜７０″Ｃ３約２時間加熱反応させ
る。この化学的合成方法により、オルシノールの各種誘
導体・前記ＣＡＤＩ型化合物および〔Ｂ）Ｉｎ型化合物
の混合物ならびに未反応物等が得られる。なお、合成に
使用する初発原料である前記オルシノール（市販品）お
よび各種プレニルアルコール類（市販品）の純度につい
ては、ガスクロマトグラフィー（ＧＬＣ）によりその純
度を測定し、可能な限り高純度のものを使用する。

前記合成反応式を化学式で示すと次のとおりである。

〔本頁以下余白］ ＣＨ５ （ｎ＝１〜４） （Ａ）Ｉ型化合物 （ＢＥＩＩ型化合物 反応終了後、室温まで冷却し、これに約５０倍容のジエ
チルエーテルを加えて目的とするＩ型化合物および■型
化合物をジエチルエーテル相に溶かす。このジエチルエ
ーテル相を約２容の水で数回洗浄した後、無水硫酸すｈ
　ＩＪウム（約５ｇ）を加えて脱水する。次いでジエチ
ルエーテルを留去し、粗反応生成物を得る。なお、各種
合成生成物の収率は、粗反応生成物の高速液体クロマト
グラフィー（ＨＰＬＣ）またはガスクロマトグラフィー
（ＧＬＣ）の分析結果より求める。

ｉｉ）この発明にかかる目的とする各種オルシノール誘
導体（合成生成物）の単離・精製方法二目的とする各種
合成生成物の単離・生成には、順相および逆相の高速液
体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を組み合わせて目的
とする合成化合物に該当する保持時間（Ｒｔ値：文献に
基づ＜Ｒｔ値）をメルクマルとして、目的化合物を分取
する。そして、この単離精製された目的の化合物は、ガ
スクロマトグラフィー（ＧＬＣ）によりその純度を測定
する。

合成にかかる各種オルシノール誘導体の同定・ｈＥ’２
には（ａ）赤外線吸収スペクトル（ＩＲ）、（ｂ）紫１
ｉ’ｌスペクトル（ｔＪＶ）、（Ｃ）マススペクトル（
ＭＳ）、（ｄ）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、（
ｅ）ガスクロマトグラフィー（ＧＬＣ）およびげ）プロ
トン核磁気共鳴スペクトル（’Ｈ−ＮＭＲ）によりおこ
なう。

山）この発明にかかる各種オルシノール誘導体（合成′
！＃）の生理活性の測定。

供試試料には、前記合成および単離・精製後の各種化合
物（各種オルシノール誘導体）を使用する。

（ａ、）この発明にかかる各種オルシノール誘導体のチ
ロシナーゼ活性抑制効果の測定方法。

各種オルシノール誘導体のチロシナーゼ活性抑制効果の
測定には、ドーパクロム（メラニンの前駆物質）の生成
量を測定する公知の方法に基づき測定する。

すなわち、オルシノールおよび各種オルシノール誘導体
を適当な希釈溶剤（たとえば、エタノール／１，３−ブ
チレングリコール（以下［１，３ＢＧＪという）／蒸留
水＝５０／３０／７０の混合溶液）を用いて適当な濃度
、たとえば約０．１〜１０％等の濃度であって＋　４７
５ｎｍにおける吸光度が適当な値を示す範囲の濃度、に
希釈調整したものを「測定用供試試料溶液」とする。試
験管に、Ｌ−チロンン溶液（濃度：　　０．３ｍｇ／　
ｍｌ）　　Ｉ　ｍｌと、マノキルベイン緩衝液（門ｃＩ
ｖａｉｎ　　ＢｕｆｆｅｒＳｏｌｕｔｉｏｎ　）　（ｐ
Ｈ６，８）　１　ｍｌとをそれぞれ入れておき、これら
の各試験管に前記オルシノール誘導体を溶解した各種測
定用供試試料溶液またはブランクテスト　（陰性対照）
の希釈溶剤（エタノール／１，３−ブチレングリコール
／蒸留水＝５０／３０／７０の混合溶液）をそれぞれＯ
，Ｍ加え、これを３７°Ｃの恒温水槽中で１０分間イン
キユヘートする。

前記インキュベートしたものにチロシナーゼ溶液（濃度
＝ＩＩＩ１ｇ／ｒｄ・マツキルベイン緩衝液）を０．１
ｄ加えて、よく攪拌し直ちに４７５ｎｍにおける吸光度
を経時的に測定する。（各測定時点での吸光度値として
、チロシナーゼ溶液添加直後の吸光度に対しては添字。

を、添加後Ｘ分インキュベート経過後の吸光度値に対し
ては添字Ｘをそれぞれ付して示す）各吸光度値を次の■
弐に代入してチロシナーゼ活性抑制率を算出する。なお
、この発明における各種オルシノール誘導体のチロシナ
ーゼ活性抑制率の算出には、反応液投入後１０分後の吸
光度を使用する。

チロシナーゼ活性抑制率（％） 二の発明にかかる各種オルシノール誘導体のチロシナー
ゼ活性抑制効果を比較検討するに際しては、チロシナー
ゼ活性を５０％抑制するのに必要な供試料の量をモル濃
度（Ｍ）で示すこととし、これを仮にＩＤｓ。とじて表
わす。そして、前記ＩＤｓ。値は次の■弐により算出し
た。なお、前記ＩＤ５゜値を０式により算出するに際し
て、算出ＩＤｓ。の誤差をできるだけ小さくするために
、Ｃｓの濃度（Ｍ）はＩＤｓ。値濃度（Ｍ）に近似した
Ｃｓ１度（Ｍ）を試行選定し、当該ｒｌＤｓ。の近似Ｃ
ｓ１ｉ度１におけるチロシナーゼ活性抑制率（Ｔ　Ｉ　
）を測定するのが肝要である。

ｘ Ａχ ０式 ニブランク溶液の０分後における吸光度値ニブランク溶
液のＸ分後における吸光度値：試験溶液の０分後におけ
る吸光度値 ：試験溶液のＸ分後における吸光度値 １Ｄｓ。：供試試料のチロシナーゼ活性５０％抑制濃度
（単位：モル＝Ｍ） Ｃ８：測定に供した供試試料の濃度（単位：モル＝Ｍ） ＴＩ＝測定にかかるチロシナーゼ活性抑制率（単位二％
）〔つまり、前記測定に供した供試料の濃度Ｃｓ　（Ｍ
）におけるチロシナーゼ活性抑制率〕 第９表は、オルシノールおよびこの発明にかかる各種オ
ルシノール誘導体のチロシナーゼ活性抑制効果（ＩＤ５
゜）の比較表である。第９表は、オルシノールおよびこ
の発明にかかるいずれのオルシノール誘導体も、１０４
〜１０４モル（Ｍ）単位でチロシナーゼ活性５０％抑制
効果を示すことを示唆している。そして、−船釣には同
一置換基の誘導体について比較検討すれば、■型化合物
よりも工型化合物の方が優れたチロシナーゼ活性抑制効
果を有することをも同時に示唆している。特に、置換基
におけるｎの値が小さい程チロシナーゼ活性抑制効果の
差が大きい。（つまり、プレニル基〉ゲラニル基〉ファ
ルネシル基〉ゲラニルゲラニル基） （ｂ）この発明にかかる各種オルシノール誘導体の抗酸
化効果（抗酸化力価）の測定方法。

各種オルシノール誘導体の抗酸化効果（抗酸化力価）の
測定は、公知のロダン鉄性に基づき測定する。すなわち
、標準的な被酸化試料としてリノール酸を使用する。そ
して、チオシアン酸アンモニウム試薬と、酸化されたリ
ノール酸と、塩化第一鉄試薬とを反応させて赤色を呈す
るロダン鉄を生成せしめ、５００ｎｍにおける吸光度を
測定することにより、このロダン鉄の生成量（赤色色素
）を定量測定する。したがって、被酸化試料のリノール
酸が酸化される程高い吸光度を示し、よって、前記各種
オルシノール誘導体が有する抗酸化作用に基づき前記被
酸化試料（リノール酸）の酸化が抑制されると、生成ロ
ダン鉄による吸光度が低い値を示すこととなる。なお、
この測定における陰性対照（ブランク）にはエタノール
を、陽性対照には０．０１％α−トコフェロール（エタ
ノール希釈液）ヲ使用する。そして、塩化第一鉄試薬を
加えて３分後の５００ｎｍにおける吸光度を測定する。

その後、各試料溶液の経時的抗酸化効果（力価）を計測
するために、各測定試料液は３８°Ｃに保ち、２４時間
毎に波長５００ｎｍにおける吸光度を経時的に測定する
。

第１０表は、オルシノール、この発明にかかる各種オル
シノール誘導体および陽性対照（いずれも濃度：　０．
０１％）の抗酸化効果（力価）の測定結果示す。第１０
表は、測定濃度０．０１％という低濃度において、優れ
た抗酸化効果（力価）を奏することを示唆している。同
一置換基の各種誘導体を比較した場合、■型化合物の方
が■型化合物よりも優れた抗酸化作用を有していること
を示唆している。そして、Ｉ型化合物について共通した
作用・効果としては、２４時間〜４８時間において特に
優れた抗酸化作用・効果を有することを示唆している。

また、従来の公知の抗酸化側としてその効果が一般的に
是認されているα−トコフェロールと比較した場合、置
換基がプレニル基またはファルネシル基の■型化合物に
ついては特に顕著な抗酸化効果（力価）を奏することが
示唆されている。

（Ｃ）この発明にかかる各種オルシノール誘導体の抗菌
効果の測定方法。

オルシノールおよびこの発明にかかる各種オルシノール
誘導体の抗菌効果の測定は、公知のペーパーディスク法
により測定する。供試菌株としては、この発明にかかる
各種オルシノール誘導体の食料品・医薬品（内服薬）へ
の応用・利用を考慮して、菌体外毒素生産菌の黄色ブド
ウ球菌（スタフィロコッカス・オーレウス／５ｔａｐｈ
ｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　　　ａｕｒｅｕｓ　　）に対する
抗菌効果を測定する。一方、この発明にかかる各種オル
シノール誘導体の化粧料・医薬品（外用薬）等への応用
・利用を考慮して、■細菌由来のリパーゼ等の酵素を生
産して皮脂の成分である中性脂質が加水分解されて遊離
の脂肪酸ができ。

この脂肪酸により皮膚に炎症を起こすと考えられている
点、さらに■細菌が各種毒素・酵素を菌体外に生産し、
ニキビ病巣部に関与していると考えられている点等々、
このような■■の諸問題を考慮して、その代表的な細菌
（プロピオニバクテリウム・アクネス／Ｐｒｏｐｉｏｎ
ｉｂａｃｔｅｒｉｕｍａｃｎｅｓ　　）に対する抗菌効
果を測定する。

第１１表は、前記黄色ブドウ球菌（スタフィロコッカス
・オーレウス）に対する抗菌効果試験の測定結果例を示
す。第１２表は、前記プロピオニバクテリウム・アクネ
スに対する抗菌効果試験の測定結果例を示す。第１１表
および第１２表は、いずれも、この発明にかかる各種オ
ルシノール誘導体は０．０１％〜０．５％という濃度に
おいても、優れた抗菌作用・効果を奏することを示唆し
ている。特に、Ｃ−Ｉ型化合物およびＧ−■型化合物の
誘導体はプロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐ
ｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ａｃｎｅｓ　　）に対
する抗菌効果が顕著であることを示唆している。

く作用〉 この発明にかかる各種オルシノール誘導体（８種類）は
、いずれも優れた生理活性、すなわち（ａ）チロシナー
ゼ活性抑制作用、（ｂ）抗酸化作用および（Ｃ）抗菌作
用を有することが認められる。また、オルシノールにつ
いては、前記チロシナーゼ活性抑制作用および抗酸化作
用が認められる。

〈実施例〉 ■〕化学的合成方法による、この発明にががる各種オル
シノール誘導体の調製例 ｉ）置換基（Ｒ，およびＲ２）が、プレニル基（ｎ−１
）である［Ａ）Ｉ型化合物および（Ｂ）■型化合物の調
製例。

（ａ）合成原料： ・プレノール（ｐｒｅｎｏｌ　） （３−ｏ＋ｅｔｈｙｌ−２−ｂｕｔｅｎ−１−ｏｌ　）
（Ｃ，Ｈ，、Ｏ：　　分子量（ＭＷ）　−８６，１３市
販品／純度＝９９．３以上） ・オルシノール（ｏｒｃｉｎｏｌ　） （３，５−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｔｏｌｕｅｎｅ　）（Ｃ
，Ｈ，Ｏ□　：　　　　ＭＷ＝１２４．１４市販品／純
度＝９５．０％以上） （ｂ）合成方法： オルシノール２．５ｇ（０，０２Ｍ）とプレノール０．
９ｇ（０，０１Ｍ）　とをナス型フラスコに秤りとり、
これに無水塩化コバル）　　（ＣｏＣ１ｚ）　０．９ｇ
を加え、還流冷却器を付し、時々攪拌しなから７０°Ｃ
，２時間加熱した。

反応後、これを冷却したのち、ジエチルエーテル１００
−を加えて反応物を溶かし、これを濾過してコバルト化
合物と分けた。

ジエチルエーテル相は、５０！！！１の水で数回洗浄し
た後、無水硫酸ナトリウム５ｇ加えて脱水した。その後
、エチルエーテルを留去し、粗反応生成物（未反応物も
含む）を約３．２ｇを得た。

この粗反応生成物中、Ｉ型化合物〔２−プレニル−オル
シノール（以下ｒＰ−１型化合物」という）〕が約２０
．４％、■型化合物〔４−プレニル−オルシノール（以
下ｒ　ｐ　−ｎ　型（ｔ、ｌ＋」という）〕が約６．６
％含まれていた。

（Ｃ）　Ｐ　−１型化合物およびＰ−１型化合物の単離
・精製： ■順相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による
単離・精製。

・カラム条件： Ｓｈｉ＋ｎａ−ｐａｃｋ　ＰＲＥＰ−３ＩＬ、　２．０
ｃｍφＸ　２５ｃｍ、液相：イソブロビルアルコール／
ｎ−ヘキサン＝５／９５．流速：　９．Ｏｄ／ｍｉｎ、
　　Ｕ　Ｖ　：　２２０ｎｍ　）■−１分画→Ｐ−１型
化合物：Ｒｔ＝１３分前後■−２分画→Ｐ−ＩＩ型化合
物：　Ｒｔ＝１１分前後■逆相高速液体クロマトグラフ
ィー（ＨＰＬＣ）による単離・精製。

前記■−１分画および■−２分画を集め、溶剤を留去し
た後、それぞれ逆相高速液体クロマトグラフィー（）（
ＰＬＣ）によりさらに精製・単離した。

・カラム条件： Ｓｈｉｍａ−ｐａｃｋ　ＰＲＥＰ−００３，２，０ｃｍ
φＸ２５ｃｍ、（液相：メタノール／水＝６５／３５）
士酢酸０．１％１流速：　　９．Ｏｍｌ／ｍｉｎ、　　
ＵＶ：　　２２０ｎｍ　　）■−１分画→Ｐ−１型化合
物：Ｒｔ＝１７分前後■−２分画→Ｐ−Ｉ［型化合物：
Ｒｔ＝３３分前後前記■−１分画および■−２分画を分
取し、これに３倍容の水を加え、Ｚ容のジクロロメタン
により３回抽出し、脱水し、溶剤を留去しＰ−１型化合
物およびＰ−１）型化合物をそれぞれ得た。なお、前記
ｐ−１型化合物の純度は９９．４％以上、Ｐ−［［型化
合物の純度は９９．１％以上であった。また、粗反応生
成物１ｇよりＰ−１型化合物を１１４＋ｎｇ、　Ｐ−１
７型化合物を５５ｍｇ得た。

ｉｉ）置換基（Ｒ，およびＲｚ　）が、ゲラニル基（ｎ
＝２）である（Ａ）Ｉ型化合物および（Ｂ）■型化合物
の調製例。

（ａ）合成原料： ・ゲラニオール（Ｇｅｒａｎｉｏｌ　　）（ｔｒａｎｓ
−３，７−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２＋６−ｏｃｔａｄｉｅ
ｎ−１−ｏｌ　）（Ｃ，、Ｈ，ＢＯ：　　分子量（ＭＷ
）　＝１５４．２４市版品／純度＝９８．５以上） ・オルシノール（ｏｒｃｉｎｏｌ　） （３，５−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｔｏｌｕｅｎｅ　）（Ｃ
２０，０２：　　　ＭＷ＝１２４．１４市販品／純度−
９５，０％以上） （ロ）合成方法： オルシノール２．５ｇ（０，０２Ｍ）とゲラニオール１
．６ｇ（０，０１Ｍ）　　とをナス型フラスコに秤りと
り、これに無水塩化コバル）　　（ＣＯＣ］Ｚ）　０−
９ｇを加え、還流冷却器を付し、時々攪拌しながら７０
’Ｃ。

２時間加熱した。

反応後、これを冷却したのち、ジエチルエーテル１０帽
を加えて反応物を溶かし、これを濾過してコバルト化合
物と分けた。

ジエチルエーテル相は、５０ｄの水で数回洗浄した後、
無水硫酸ナトリウム５ｇ加えて脱水した。その後、エチ
ルエーテルを留去し、粗反応生成物（未反応物も含む）
を約３．９ｇを得た。

この粗反応生成物中、■型化合物〔２−ゲラニル−オル
シノール（以下ｒＧ−１型化合物」という）〕が約２２
．６％、■型化合物〔４−ゲラニル−オルシノール（以
下ｒＧ−ｎ型化合物」という）〕が約１３．０％含まれ
ていた。

（ｃ）Ｇ−１型化合物およびｃ−ｍ型化合物の単離・精
製： ■順相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による
単離・精製。

・カラム条件： Ｓｈｉｍａ−ｐａｃｋ　ＰＩ？ＥＰ−５ＩＬ、　２．０
ｃｒａφＸ２５ｃｍ、液相：ｎ−ヘキサン／イソプロパ
ツール＝９５１５　。

流速：　９．Ｏｄ／ｍｉｎ、　　Ｕ　Ｖ　：　２２０ｎ
ｍ　　）■−１分画＝＋Ｇ−■型化合物：Ｒｔ＝１８分
前後■−２分画＝＋Ｇ　−ＩＩ型化合物：　Ｒｔ＝１４
分前後■逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
による単離・精製。

前記■−１分画および■−２分画を集め、溶剤を留去し
た後、それぞれ逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ
ＬＣ）によりさらに精製・単離した。

・カラム条件： Ｓｈｉ＋ｌ１ａ−ｐａｃｋ　ＰＲＥＰ−００Ｓ、　２．
０ｃＩＩｌφＸ２５ｃｍ、液相：メタノール／水＝８５
／１５．流速：　　９．０ｍ／＋ｎｉｎ、　　Ｕ　Ｖ　
：　２２０ｎｍ　　）■−１分画→Ｇ−Ｉ型化合物：Ｒ
ｔ＝１６分前後■−２分画→ｃ−ｎ型化合物：Ｒｔ＝１
２分前後前記■−１分画および■−２分画を分取し、こ
れに３倍容の水を加え、２容のジクロロメタンにより３
回抽出し、脱水し、溶剤を留去しＣ−Ｉ型化合物および
Ｇ−ＩＩ型化合物をそれぞれ得た。なお、前記ｃ−１型
化合物の純度は９７．９％以上、ｃ−ｎ型化合物の純度
は９９．７％以上であった。また、粗反応生成物１ｇよ
りＧ−Ｉ型化合物を１５５ｍｇ、　Ｇ　−ＩＩ型化合物
を８８ｍｇ得た。

１ｉｉ）置換基（Ｒ１およびＲ２）が、ファルネシル基
（ｎ＝３）である〔Ａ〕　１型化合物および〔Ｂ）Ｉ［
型化合物の調製例。

（ａ）合成原料： ・ファルネシル基　（Ｆａｒｎｅｓｏｌ　　）（Ｅ＋Ｅ
−３＋７−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２＋６−ｏｃｔａｄｉｅ
ｎ４−ｏｌ　）（Ｃ＋　ｓ　Ｈｔ　−０：　　分子量（
ＭＷ）　＝２２２．３７市販品／純度＝９９．５以上） ・オルシノール（ｏｒｃｉｎｏｌ　） （３，５−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｔｏｌｕｅｎｅ　）（Ｃ
，Ｈ，Ｏ，：　　　ＭＷ＝１２４．１４市販品／純度＝
９５．０％以上） ０））合成方法ニ オ／、１／シノール２．５ｇ（０，０２Ｍ）とファルネ
ソール２．２ｇ（０，ＯＩＭ）　　とをナス型フラスコ
に秤りとり、これに無水塩化コバルト（ｃｏＣＩ□）　
０．９ｇを加え、還流冷却器を付し、時々攪拌しながら
７０°Ｃ１２時間加熱した。

反応後、これを冷却したのち、ジエチルエーテル１００
ｄを加えて反応物を溶かし、これを濾過してコバルト化
合物と分けた。

ジエチルエーテル相は、５０−の水で数回洗浄した後、
無水硫酸ナトリウム５ｇ加えて脱水した。その後、エチ
ルエーテルを留去し、粗反応生成物（未反応物も含む）
を約４．４ｇを得た。

この粗反応生成物中、■型化合物〔２−ファルネシル−
オルシノール（以下ｒＦ−ｒ型化合物」という）］が約
２１．０％、■型化合物（４−ファルネシル−オルシノ
ール（以下ｒＦ−ＩＩ型化合物」という）〕が約９．５
％含まれていた（ｃ）　Ｆ　−’ｔ４型化合物およびＦ
−ＩＩ型化合物の単離・精製： ■順相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣによる単
離・精製。

・カラム条件； Ｓｈｉｍａ−ｐａｃｋ　ＰＲＥＰ−５ＩＬ、　２．０ｃ
ＩＩｌφＸ２５ｃｍ、液相：ｎ−ヘキサン／イソプロパ
ツール＝９５１５　。

流速：　９．Ｏｄ／ｍｉｎ、　　Ｕ　Ｖ　：　２２０ｎ
ｍ　　）■−１分画→Ｆ−１型化合物：Ｒｔ＝１５分前
後■−２分画＝＝＝＝＞Ｆ−Ｉｎ型化合物：Ｒｔ＝９分
前後分前後高逆相高速液体クロマトグラフィーＬＣ）に
よる単離・精製。

前記■−１分画および■−２分画を集め、溶剤を留去し
た後、それぞれ逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ
ＬＣ）によりさらに精製・単離した。

・カラム条件： Ｓｈｉｍａ−ｐａｃｋ　ＰＲＥＰ−ＯＤＳ＋　２．０ｃ
ｎφＸ　２５ｃｍ、液相：メタノール／水＝９０／１０
　、流速：　　９．Ｏｄ／ｗｉｎ　　ＵＶ　：　２２０
ｎｍ　　）■−１分画＝＋Ｆ−Ｉ型化合物：Ｒｔ＝２２
分前後■−２分画＝＋Ｆ−ＩＩ型化合物：Ｒｔ＝１５分
前後前記■−１分画および■−２分画を分取し、これに
３倍容の水を加え、％容のジクロロメタンにより３回抽
出し、脱水し、溶剤を留去しＦ−ｎ型化合物およびＦ−
ＩＩ型化合物をそれぞれ得た。なお、前記Ｆ−１型化合
物の純度は９９．５％以上、Ｆ−ｎ型化合物の純度は９
９．３％以上であった。また、粗反応生成物１ｇよりＦ
−ｎ型化合物を１２２ｍｇ、　Ｆ　−ＩＩ型化合物を５
８ｏ＋ｇ得た。

なお、ここで合成されたオルシノールのファルネシル誘
導体つまりＦ−ｎ型化合物およびＦ−ｎ型化合物は、い
ずれも天然物にンギョウタケなど）に存在する化合物〔
ネオグリフォリン（＝Ｆ−Ｉ型化合物）およびグリフォ
リン（Ｆ−ｎ型化合物）〕であることが各種化合物同定
・確認データ（赤外線スペクトル、紫外ｎスペクトル、
マススペクトル、ＴＬＣ，ＮＭＲなどの諸データ）より
判明した。

ｉｖ）置換基（Ｒ，およびＲ２）が、ゲラニルゲラニル
Ｍ（ｎ＝４）である（Ａ）ｎ型化合物およびＣＢ）ＩＩ
型化合物の調製例。

（ａ）合成原料： ・ゲラニルゲラニオール（Ｇｅｒａｎｙ１ｇｅｒａｎｉ
ｏ！　）（Ｅ、Ｅ、Ｅ−３，７，１１，１５−ｔｅｔｒ
ａｍｅｔｈｙｌ−２，６，１０＋１４−ｐｅｎｔａｄｅ
ｃａｔｅｔｒａｅｎ−１−ｏｌ　）（Ｃｚ。Ｈｓ４０：
　　分子量（ＭＷ）　＝２９０．４９市販品／純度＝９
８．８以上） ・オルシノール（ｏｒｃｉｎｏｌ　） （３，５−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｔｏｌｕｅｎｅ　）（Ｃ
’ｒ　Ｈｓ　Ｏ□　：　　　ＭＷ＝１２４．１４市販品
／純度＝９５．０％以上） （ｂ）合成方法： オルシノール２．４８ｇ（０，０２Ｍ）とゲラニルゲラ
ニオール２．９０ｇ（０，ＯＩＭ）とをナス型フラスコ
に秤りとり、これに無水塩化コバルト　（ＣｏＣ１ｚ）
　０．９ｇを加え、還流冷却器を付し、時々攪拌しなか
ら７０°Ｃ，２時間加熱した。

反応後、これを冷却したのち、ジエチルエーテル１００
１ｄを加えて反応物を溶かし、これを濾過してコバルト
化合物と分けた。

エチルエーテル層は、５０戚の水で数回洗浄した後、無
水硫酸ナトリウム５ｇ加えて脱水した。その後、エチル
エーテルを留去し、粗反応生成物（未反応物も含む）を
約５．２ｇを得た。

この粗反応生成物中、ｎ型化合物［２−ゲラニルゲラニ
ル−オルシノール（以下ｒｃｃ−ｒ型化合物」という）
〕が約２１．２％、■型化合物〔４−ゲラニルゲラニル
−オルシノール（以下ｒｃｃ−ｎ型化合物」という）〕
が約１５．６％含まれていた。

（ｃ）ＣＧ−１型化合物およびｃｃ−ｎ型化合物の単離
・精製： ■順相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による
単離・精製。

・カラム条件： Ｓｈｉｍａ−ｐａｃｋ　ＰＲＥＰ−３ＩＬ、　２．０ｃ
ｎφＸ　２５ｃｍ、液相：イソブ口ピルアルコール／ｎ
−ヘキサン＝５／９５．流速：　９．Ｏｄ／ｗｉｎ、　
　Ｕ　Ｖ　：　２２０ｎｍ　　）■−１分画→ＧＯ−Ｉ
型化合物：　Ｒｔ＝１５分前後■−２分画＝＋Ｇ　Ｇ　
−Ｉｆ型化合物：Ｒｔ＝９分前後分前後高逆相高速液体
クロマトグラフィーＬＣ’）による単離・精製。

前記■−１分画および■−２分画を集め、溶剤を留去し
た後、それぞれ逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ
ＬＣ）によりさらに精製・単離した。

・カラム条件： Ｓｈｉｍａ−ｐａｃｋ　ＰＲＥＰ−ＯＤＳ、　２．０ｃ
＋＋＋＄　Ｘ２５ＣＤ＋、液相：メタノール／水＝９５
１５　　、流速：　９．０ｒＩＩｌ／ａｋｉｎ、　　Ｕ
　Ｖ　：　２２０ｎｍ　　）■−１分画→ＧＧ−Ｉ型化
合物：Ｒｔ＝２２分前後■−２分画→ＧＧ−ｎ型化合物
：Ｒｔ＝１６分前後前記■−１分画および■−２分画を
分取し、これに３倍容の水を加え、Ａ容のジクロロメタ
ンにより３回抽出し、脱水し、溶剤を留去しＧＧ−１型
化合物およびｃｃ−ｎ型化合物をそれぞれ得た。なお、
前記ＣＧ−Ｉ型化合物の純度は９９．７％以上、ｃｃ−
ｎ型化合物の純度は９８．９％以上であった。また、粗
反応生成物１ｇよりｃｃ−ｒ型化合物を１４５Ｂ、　Ｃ
Ｇ　−ｎ型化合物を１１０ｎｇ得た。

二の実施例において合成した各種オルシノール誘導体（
単離・精製後の各化合物）の各種同定・確認データは第
１表ないし第８表に示すとおりである。

第１表は、この実施例において合成した各種オルシノー
ル誘導体（単離・精製後）の各種性状を示す比較表であ
る。第２表は、この実施例において合成した各種オルシ
ノール誘導体（単離・精製後）のガスクロマトグラフィ
ー（ＧＬＣ）の同定・確認結果例である。この第２表の
結果より、各種オルシノール誘導体は、高純度で単離・
精製されていることが立証される。第３表は、この実施
例において合成した各種オルシノール誘導体の薄層クロ
マトグラフィー（ＴＬＣ）結果の比較表である。第３表
よりいずれも単一のスポットのみを得ており、単離・精
製されていることが立証されている。第４表は、この実
施例において合成した各種オルシノール誘導体の紫外線
吸収スペクトル（ＵＶスペクトル）結果の比較表であり
、各種イし金物の極大吸収波長およびモル吸光係数の比
較表である。第５表は、この実施例において合成した各
種オルシノール誘導体の赤外線吸収スペクトル（ＩＲス
ペクトル）の各特徴的吸収波長を示す比較表である。な
お、合成にかかる各種オルシノール誘導体の赤外線吸収
スペクトル（ＩＲスペクトル）の図を第１図〜第８図に
示した。第６表しよ、この実施例において合成した各種
オルシノール誘導体の分子イオンビークの理論値と実測
値結果との比較表であり、この表から目的物が合成・単
離・精製されていることが立証される。第７表番よ、こ
の実施例において合成した各種オルシノール誘導体のマ
ススペクトル（ＭＳ）における各フラグメントの比強度
を表である。この第７表により、各種オルシノール誘導
体の各フラグメントを解析すると、目的とする各種オル
シノール誘導体が得られ、単離・精製されていることが
立証されている。第８表は、この実施例において合成さ
れた各種オルシノール誘導体の’Ｈ−ＮＭＲの結果例の
比較表である。第８表の結果によれば、この発明の実施
例で合成・単離・精製された各種オルシノール誘導体の
ＩＨ−ＮＭＲスペクトルは目的とする各化合物の化学構
造に一致した値を示しており、目的の各種オルシノール
誘導体が確実に合成され、単離・精製されていることが
立証されている。なお、合成にかかる各種オルシノール
誘導体の’Ｈ−ＮＭＲのスペクトル回を第９圀〜第１６
図に示した。

［本頁以下余白］ 第１表：実施例において合成された各種オルシノール誘
導体（単離・精ｍの同定・確認結果例［その１］ 第２表：実施例において合成された各種オルシノール誘
導体（単離・精製瀕の同定・確認結果例Ｃその２） 〜ガスクロマトグラフィー結果例〜 （本頁以下余白） 第３表：実施例において合成された各種オルシノール誘
導体（単離・精製後）の同定・確認結果例〔その３〕〜
薄層クロマトグラフィー結果例〜 第４表：実施例において合成された各種オルシノール誘
導体（単離・精製後）の同定・確認結果例〔その４）〜
紫外線吸収スペクトル結果例： 極大吸収波長およびモル吸光係数〜 薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）条件：（１）薄層担
体ニジリカゲル７０プレート、ワコー（和光純薬味製、
ＲＭ） （２）展開溶剤コヘンゼン／酢酸エチル＝３／１（３溌
色剤：１０％硫酸エタノーノ叶劉夜［木頁以下余白］ 第５表：実施例において合成された各種オルシノール誘
導体（単離・精製□□□の同第６表：実施例において合
成された各種オルシノール誘導体（単離・精鼎勿の同定
・確認結果例［その５］ 定・確認結果例〔その６〕 〜赤外線吸収スペクトル結果例＝ＩＲ結果例〜〜マスス
ペクトルの分子イオンビークの結果例および計算値との
比較〜Ｃ本頁以下余白〕 ■］この発明にかかる各種オルシノール誘導体の各種生
理活性の測定試験。

Ａ）供試料： 後述の（ｉ）チロシナーゼ活性抑制効果測定試験、（ｉ
ｉ）抗酸化効果試験および（ｉｊ）抗菌効果試験の各種
試験の供試料として、オルシノールおよび前記実施例Ｉ
で合成され、精製・単離された各種オルシノール誘導体
（８種類）、すなわち前記、 ■Ｐ−１型化合物、　■Ｐ−ＩＩ型化合物、■Ｇ−Ｉ型
化合物、　■ｃ−ｎ型化合物、■Ｆ−Ｉ型化合物、　■
Ｆ−ＩＩ型化合物、■ＣＧ−ｒ型化合物、■ＧＧ−１１
ｒ型化合物をそれぞれ使用した。

ｉ）各種オルシノール誘導体のチロシナーゼ活性抑制効
果測定試験。

（ａ）供試料等の測定用溶液の調製。

前記供試料（前記■〜■）およびオルシノールをエタノ
ール／Ｌ３−ブチレングリコール／水”’５０／３０／
７０　（ｖ／ｖ）を希釈液として適当な濃度（たとえば
、約０．１％〜１０％等の濃度であって、４７５ｎｍに
おける吸光度が適当な値を示す範囲の濃度）に希釈して
調製する。

（ｂ）測定方法 試験管にそれぞれＬ−チロシン溶液（濃度：０．３　ｍ
ｇ／ｄ）　１　ｒａと、マ・ンキルベイン緩衝液（Ｍｃ
ｌｖａｉｎ　　Ｂｕｆｆｅｒ　　５ｏｌｕｔｉｏｎ　）
　（ｐＨ６，８）１ｄとをいれておき、こられの各試験
管に前記（ａ）で調製した各供試料の測定用溶液および
ブランク（陰性対照）用の希釈溶液（エタノール／１，
３−ブチレングリコール／水＝５０／３０／７０　（ｖ
／ｖ））をそれぞれＯ１撹加え、これを３７°Ｃの恒温
水槽中で１０分間インキュベートする。

前記インキュベートしたものにチロシナーゼ溶液（１度
：ｌｏ＋ｇ／ｍ・マツキルベイン緩衝液）を０．ｌｄ加
えて、よ（攪拌し直ちに４７５ｎａ＋における吸光度を
経時的に測定する。

（各測定時点での吸光度値として、チロシナ−ゼ溶液添
加直後の吸光度に対しては添字。

を、添加後Ｘ分インキュベート経過後の吸光度値に対し
ては添字χをそれぞれ付して示す）各吸光度値を次の０
式に代入してチロシナーゼ活性抑制率を算出する。なお
、この発明における各種オルシノール誘導体のチロシナ
ーゼ活性抑制率の算出には、反応液投入後１０分後（ｘ
　＝ＩＯ）の吸光度を使用する。なお、この吸光度値は
ドーパクロム（メラニンの前駆物質）の生成料により測
定されるものである。

チロシナーゼ活性抑制率（％） （Ｂ＋。−Ｂ、） ０式 Ｂｏ　ニブランク溶液の０分後における吸光度値Ｂ、。

ニブランク溶液の１０分後における吸光度値へ〇　：試
験溶液の０分後における吸光度値Ａ１゜：試験溶液の１
０分後における吸光度値二の発明にかかる各種オルシノ
ール誘導体のチロシナーゼ活性抑制効果を比較検討する
に際しては、チロシナーゼ活性を５０％抑制するのに必
要な供試試料の量をモル濃度（Ｍ）で示すこととし、こ
れを仮にＩＤ、。とじて表わす。そして、前記ＩＤ、。

値は次の■式により算出した。なお、ＩＤ、。値の測定
に際しては、１０．。値の誤差を最小とするため、各測
定用供試料の濃度（Ｃｓ）を可能なかぎりチロシナーゼ
活性抑制率が５０％に近い濃度となるように選定してお
こなった。

ＩＤ、。：チロシナーゼ活性を５０％抑制するのに必要
な濃度（単位二モル＝Ｍ） Ｃｓ：測定ムこ供した供試試料の濃度（単位：モル＝Ｍ
） ＴＩ：測定にかがるチロシナーゼ活性抑制率（単位二％
） （Ｃ）試験結果 この発明にかかる各種オルシノール誘導体及びオルシノ
ールのＩＤｓ。を第９表に示した。

［本頁以下余白〕 第９表：この発明にかかる各種オルシノール誘導体及び
オルシノールのチロシナーゼ活性５０％抑制率比較結果
例。

〔本頁以下余白〕

第９表は、オルシノールおよびこの発明にかかる各種オ
ルシノール誘導体のチロシナーゼ活性抑制効果（ＩＤ５
゜）の比較表である。第９表は、オルシノールおよびこ
の発明にかかるいずれのオルシノール誘導体も、１０４
〜１０−５モル（Ｍ）単位でチロシナーゼ活性５０％抑
制効果を示すことを示唆している。そして、−船釣には
同一置換基の誘導体について比較検討すれば、■型化合
物よりもＩ型化合物の方がすぐれたチロシナーゼ活性抑
制効果を有することをも同時に示唆している。特に、置
換基におけるｎの値が小さい程チロシナーゼ活性抑制作
用の差が大きい。（つまり、プレニル基〉ゲラニル基〉
ファルネシル基〉ゲラニルゲラニル基）。

ｉｉ）各種オルシノール誘導体の抗酸化効果測定試験。

　（ｒロダン鉄性Ｊによる） （ａ）供試料および陽性対照等の測定用溶液の調製：前
記供試料（前記■〜■）およびオルシノールをエタノー
ルで希釈し、０．０１％濃度の各測定用溶液を調製した
。なお、陽性対照としてα−トコフェロールの０．０１
％溶液を使用、陰性対照（ブランク）としてエタノール
使用した。

Φ）試薬の調製： （１）リノール酸（冷凍保存） （２）０．１？Ｉリン酸緩衝液： （Ａ液）　０．ＩＭ　ＫＨｚＰＯ４、 （Ｂ液）　０．１Ｍ　ＮａｚＨＰＯ４・１２ＨｚＯ１前
記（Ａ液）：（Ｂ液）＝４：６に混合し、ｐＨ７，０に
調整した液を調製する。

（３）３０％ロダンアンモニウム液： チオシアン酸アンモニウムを３０％（Ｗ／Ｗ）水溶液と
なるように調製する。

（４）２Ｘ１０−２月塩化第−鉄（３，５％ＨＣＩ）水
溶液：２　Ｘｌ０−”Ｍ塩化第一鉄・５水塩を濃塩酸１
０ｄに溶かし、９０ｄの水で希釈して調製する。

（Ｃ）ロダン鉄性の試料の調製： （１）リノール酸０．８４１３ｇを３０ｍのエタノール
に熔解して調製する。

（２）前記（Ｃ）（１）のリノール酸エタノール液に前
記（ｂ）（１）の０．１Ｍリン酸緩衝液を加えて全量１
５０戚としたものを８周製する。

（３）前記（Ｃ）　（２）の調製液ＩＭと、前記（ａ）
の各種供試料の測定用溶液２雌と、前記ら）（１）の０
．１Ｍリン酸緩衝液８Ｉｄとを混ぜる。

（ｄ）ロダン鉄性： （１）前記（Ｃ）　（３）の試料液０．１ｄに、７５％
エタノール４．７ｍｉ！および前記（ｂ）　（３）の３
０％ロダンアンモニウム液０．１ｍを加えた。

（２）前記（ｂ）（４）の２Ｘ１０−”Ｍ塩化第一鉄（
３，５％ＦＩＣＩ）水溶液０．１ｍを前記（ｄ）（１）
の混合液に加えて、３分後の波長λ−５００ｎｍにおけ
る吸光度を測定した。

（３）前記（（６）（２）の反応液は３８°Ｃに保ち、
２４時間毎経時的に波長λ＝　５００ｎｒａにおける吸
光度を測定した。

（４）陽性対照としては、前記各種オルシノール誘導体
の測定用溶液の代わりに、０．０１％α−トコフェロー
ル（エタノール溶液）について同様に吸光度の測定をし
た。

また、陰性対照としては、エタノールについて同様に吸
光度の測定をした。

第１０表は、オルシノール、この発明にかかる各種オル
シノール誘導体、陽性対照（α−トコフェロール）およ
び陰性対照（ブランク−エタノール）についての抗酸化
効果の測定結果の一例を示すものである。

［本頁以下余白］ 第１０表：この発明にかかる各種オルシノール誘導体の
抗酸化効果の測定結果例。

（表中の各数字は、波長：λ＝５００ｎｍ　　における
吸光度値を示す。）〔重置以下余白］ 第１０表は、オルシノールおよびこの発明にかかる各種
オルシノール誘導体（濃度：　０．０１％）の抗酸化効
果（力価）の測定結果示す。第１０表は、測定濃度０．
０１％という低濃度において、優れた抗酸化効果（力価
）を奏することを示唆している。同一置換基の各種誘導
体を比較した場合、■型化合物の方が■型化合物よりも
優れた抗酸化作用を有していることを示唆している。

そして、Ｉ型化合物について共通した作用・効果として
は、２４時間〜４８時間において特に優れた抗酸化作用
・効果を有することを示唆している。また、従来の公知
の抗酸化剤としてその効果が一般的に是認されているα
−トコフェロールと比較した場合、置換基がプレニル基
またはファルネシル基のＩ型化合物については特に顕著
な抗酸化効果（力価）を奏することを示唆している。

ｉｎ）各種オルシノール誘導体の抗菌効果測定試験実施
例。　（ｒペーパーディスク法」による）（ａ）供試菌
株： （１）スタフィロコッカス・オーレウス（Ｓｔａｐｈｙ
ｌｏｃｏｃｃｕｓ　　ａｕｒｅｕｓ　　）：　この発明
にかかる各種オルシノール誘導体の食品・医薬品（内服
薬）への応用・利用を考慮して菌体外に毒素・酵素を生
産するこの黄色ぶどう球菌を選んだ。

（２）プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉ
ｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ａｃｎｅｓ　　）：この
発明にかかる各種オルシノール誘導体の化粧料・医薬品
（外用薬）への応用・利用を考慮して、ニキビ等の皮膚
病巣部に関与していると考えられている代表的微生物と
してこの菌株を選んだ。

［有］）使用培地： （１）スタフィロコッカス・オーレウスの培養に関して
は、ＳＣＤ培地（日本製薬株式会社製）を使用した。

（２）プロピオニバクテリウム・アクネスの培養に関し
ては、ＣＡＭ培地（日水製薬株式会社製）を使用した。

なお、寒天平板をつくる場合には、寒天の含量を１．５
％とした。

（Ｃ）測定用各種供試料： 供試料としては、この発明の前記合成にかかる各種オル
シノール誘導体（前記■〜■の８種類）とオルシノール
とを使用し、これらの各供試料をＤＭＳＯ（ジメチルス
ルホキシド〕で所定の濃度に溶解したものを使用した。

溶解濃度としては　０．０１％、０．０２５％、０．０
５％、０．１％の４種または０．５％の１種の濃度につ
いて測定した。

（ｄ）菌株の前培養： （１）スタフィロコッカス・オーレウスは、ＳＣＤ液体
培地で２８°Ｃ１２４時間好気培養をしたものを使用し
た。

（２）プロピオニバクテリウム・アクネスはＣＡＭ液体
培地で３７°Ｃ，３日間嫌気培養をしたものを使用した
。

（ｅ）平板培地への供試菌株の混釈： 前記（ｄ）で前培養した菌液（菌体数：約１．０×１０
ｂ個／ｄ）は、それぞれスタフィロコッカス・オーレウ
スの菌液０．ＬｄをＳＣＤ寒天培地２０ｄに、プロピオ
ニバクテリウム・アクネスの菌液０．１ｉをＣＡＭ寒天
培地２０ｄに加え、混釈して平板寒天培地をつくった。

（ｆ）測定用各種供試料の添加： スタフィロコッカス・オーレウスに関しては１５ｍｍφ
のペーパーディスクを、一方、プロピオニバクテリウム
・アクネスに関しては直径６朋φのペーパーディスクを
使用し、それぞれのペーパーディスクに前記測定用各種
供試料を浸した後、前記供試菌株を混釈した前記各平板
培地上に前記各種供試料を含浸したペーパーディスクを
接着させた。

（ｇ）抗菌効果測定のための培養： スタフィロコッカス・オーレウスに関しては３７°Ｃ１
好気条件下で３日間培養し、一方、プロピオニバクテリ
ウム・アクネスに関しては３７°Ｃ９嫌気条件下で３日
間培養し、それぞれ前記培養後、阻止円の直径を測定し
た。

第１１表は、この発明にかかる各種オルシノール誘導体
およびオルシノールのスタフィロコッカス・オーレウス
に対する抗菌効果の試験結果例を示す。一方、第１２表
は、この発明にかかる各種オルシノール誘導体およびオ
ルシノールのプロピオニバクテリウム・アクネスに対す
る抗菌効果の試験結果例を示す。

〔重置以下余白〕

第１Ｉ表二二の発明にかかる各種オルシノール誘導体お
よびオルシノールのスタフィロコッカス・オーレウスに
対する抗菌効果の試験結果ｆｊＩＬ第１罎：この発明に
かかる各種オルシノール誘導体およびオルシノールのプ
ロピオニバクテリウム・アクネスに対す注１−ペーパー
ディスクの直径＝１シ藺φである。

注２＝表中の単位は、抗菌作用による阻止円の直径　闘
φを示す。

注３二表中、−の記号は抗菌効果が認められなかったこ
とを示す。

注４：尚、溶解溶剤として使用したＤＭＳＯに…范廼効
果は認められなかった。

注１：ベーバーディスクは直径＝６ｍｍφである。

注２＝表中の単位は、抗菌効果による阻止円の直径　ｍ
ｍφを示す。

注３二表中、−の記号は、抗菌作用が認められなったこ
とを示す。

注４二尚、溶解溶剤ｊとして使用したＤＭＳＯには抗菌
効果は認められなかった。

第１１表は、前記黄色ブドウ球菌（スタフィロコッカス
・オーレウス）に対する抗菌効果試験の測定結果例を示
す。第１２表は、前記プロピオニバクテリウム・アクネ
スに対する抗菌効果試験の測定結果例を示す。第１１表
および第１２表は、いずれも、この発明にかかる各種オ
ルシノール誘導体は０．０１％〜０．５％という濃度に
おいても、優れた抗菌作用・効果を奏することを示唆し
ている。特に、Ｇ−１型化合物およびＧ−ｎ型化合物の
誘導体はプロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐ
ｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ａｃｎｅｓ　　）に対
する抗菌効果が顕著であることを示唆している。

〈効果〉 この発明にかかる各種オルシノール誘導体（８種類）お
よびオルシノールは、いずれも優れた（１）チロシナー
ゼ活性抑制作用、（２）抗酸化作用を有しており、また
この発明にかかる各種オルシノール誘導体は（３）抗菌
作用を有しているので、（ａ）チロシナーゼ活性抑制作
用に基づき、これらを配合した化粧料等には優れた肌の
美白作用・効果を有する。

０））抗酸化作用に基づき、これらを配合した各種製品
の酸化防止を達成ができる。しかも後述（Ｃ）のように
、この発明にかかる各種オルシノール誘導体は食料品・
化粧料・医薬品（内服薬および外用薬）等々に広く適用
でき、その利用・応用範囲が極めて広い。

（Ｃ）抗菌作用に基づき、これらを食料品・医薬品（内
服薬）等に配合することにより食料品の防腐や食中毒の
防止を図ることができ、食品衛生上すぐれた抗菌剤とな
り得る。また、化粧料・医薬品（外用薬）等に配合する
ことにより、皮膚微生物等の繁殖防止を図ることができ
、皮膚衛生上すぐれた抗菌剤にもなり得る。

（ｄ）前記（ａ）〜（Ｃ）記載のすぐれた作用を有する
この発明にかかる各種オルシノール誘導体は、化学的合
成方法により高純度で得ることができるので、各種利用
目的に応じて合目的的に利用・応用でき、しかも不純物
が混在しないため安全で、品質が一定で、さらに量産・
安定供給できるという産業上極めて優れた利点がある。

等々、この発明の目的を達成する顕著な効果を奏するこ
とができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、Ｐ−ｎ型化合物のＴＲスペクトル図、第２図
は、Ｐ−ｎ型化合物のＴＲスペクトル図、第３図は、Ｇ
−ｎ型化合物のＴＲスペクトル図、第４図は、Ｇ−ｎ型
化合物のＴＲスペクトル図、第５図は、Ｆ−１型化合物
のＴＲスペクトル図、第６図は、Ｆ−Ｉｎ型化合物のＴ
Ｒスペクトル図、第７図は、ＧＧ−ｎ型化合物のＴＲス
ペクトル図、 第８図は、ｃｃ−ｎ型化合物のＴＲスペクトル図、 第９図は、Ｐ−１型化合物のＩＨ−ＮＭＲスペクトル図
、 第１０図は、Ｐ−ｎ型化合物の’Ｈ−ＮＭＲスペクトル
図、 第１１図は、Ｇ−ｎ型化合物の’Ｈ−ＮＭＲスペクトル
図、 第１２図は、ｃ−ｎ型化合物の’Ｈ−ＮＭＲスペクトル
図、 第１３図は、Ｆ−１型化合物の’Ｈ−ＮＭＲスペクトル
図、 第１４図は、Ｆ−ｎ型化合物の’Ｈ−ＮＭＲスペクトル
図、 第１５図は、ＧＧ−１型化合物の’Ｈ−ＮＭＲスペクト
ル図、 第１６図は、ＧＧ−Ｉｎ型化合物の’Ｈ−ＮＭＲスペク
トル図 をそれぞれ示す。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式〔Ａ〕 I 型化合物および一般式〔Ｂ〕II
   型化合物 ▲数式、化学式、表等があります▼〔Ａ〕 I 型化合物
   ▲数式、化学式、表等があります▼〔Ｂ〕II型化合物〔
   式中、Ｒ＿１およびＲ＿２は一般式〔Ｃ〕▲数式、化学
   式、表等があります▼〔Ｃ〕 で表わされる基であって、Ｒ＿１はｎ＝０、１、２、４
   で示される基、Ｒ＿２はｎ＝０、１、２、３、４で示さ
   れる基〕で表わされる化合物群から選択される化合物の
   １種または２種以上を含有することを特徴とするチロシ
   ナーゼ活性抑制剤。
2. （２）一般式〔Ａ〕 I 型化合物および一般式〔Ｂ〕II
   型化合物 ▲数式、化学式、表等があります▼〔Ａ〕 I 型化合物
   ▲数式、化学式、表等があります▼〔Ｂ〕II型化合物〔
   式中、Ｒ＿１およびＲ＿２は一般式〔Ｃ〕▲数式、化学
   式、表等があります▼〔Ｃ〕 で表わされる基であって、Ｒ＿１はｎ＝０、１、２、３
   、４で示される基、Ｒ＿２はｎ＝０、１、２、３、４で
   示される基〕で表わされる化合物群から選択される化合
   物の１種または２種以上を含有することを特徴とする抗
   酸化剤。
3. （３）一般式〔Ａ〕 I 型化合物および一般式〔Ｂ〕II
   型化合物 ▲数式、化学式、表等があります▼〔Ａ〕 I 型化合物
   ▲数式、化学式、表等があります▼〔Ｂ〕II型化合物〔
   式中、Ｒ＿１およびＲ＿２は一般式〔Ｃ〕▲数式、化学
   式、表等があります▼〔Ｃ〕 で表わされる基であって、Ｒ＿１はｎ＝１、２、４で示
   される基、Ｒ＿２はｎ＝１、２、４で示される基〕で表
   わされる化合物群から選択される化合物の１種または２
   種以上を含有することを特徴とする抗菌剤。