JPH03261726A - ぶどう膜炎治療用医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦと略すｊを有効成分と
するぶとう脱炎に対する治療用医薬組成物に関する。

（従来の技術） ぶとう脱炎はベーチェット病、フォークト・小柳・原田
症候群、サルコイド−シス、トキソプラズマ症など多種
の疾患を原疾患として発症する眼病変である。病態は、
前眼部型で虹彩毛様体炎や前房蓄電、眼底型では硝子体
混濁、眼底での出血や滲出性変化、網膜の浮腫混濁、視
神経炎などを呈する。しばしば併発白内障、後発緑内障
などを併発しつつ視力は低下し、失明に至る。発症の機
序および原疾患との関係は未だに不明である。また、ベ
ーチェット病、フォークト・小柳・原田症候群、サルコ
イド−シスなど原疾患の病因についてもはっきりしたこ
とは判っていない。

現在、本性の治療には、散瞳剤、ステロイド剤の点眼や
ステロイド剤の全身投与が普通におこなわれる。また、
本性は再発、遷延化しやすい疾患であるため、その予防
、軽減を目的として、ステロイド剤や免疫抑制剤の長期
間全身投与が実施される。しかし、ステロイド剤やサイ
クロスポリンなどの免疫抑制剤は副作用が強いことで知
られており、長期に亘る投与には危険が伴う。一方、効
果も確実なものとは言えず、症状の改善がない場合の投
薬の減量や中断などは却って病変の慢性化、遷延化をき
たしやすい、など問題が多い。

Ｃ問題点を解決するための手段） 腫瘍壊死因子、すなわちＴＮＦは多様な生物活性を有す
る公知のサイトカインである。本発明者らはＴＮＦに対
し、その薬理作用について鋭意研究を続けていたところ
、意外にも、ＴＮＦがぶどう膣炎抑制作用を有すること
を発見し、該知見に基づきさらに研究を続け、本発明を
完成した。

本発明によれば、ぶとう脱炎治療に有効な量のＴＮＦと
少なくとも一種の医薬投与可能な担体、希釈剤あるいは
賦形剤を含有するぶとう震災治療用の新規医薬組成物が
提供される。ぷどう脱炎患者の治療に用いられる本発明
の医薬組成物においては、腫瘍壊死因子は、ヒト由来の
細胞から、あるいは組替えＤＮＡ技術によって製造され
るものであることが好ましい。このような組成物には、
例えば、静脈内注射用、筋肉的注射、皮下注射用、皮肉
注射用、経口投与用、直腸内投与用、髄腔内投与用、外
部施用用、局所施用用、点脹用などに適合する投与形態
を与えることができる。さらに、本発明の医薬組成物は
ポリペプチド組成物に適合する投与形態を与えることが
できる。　腫瘍壊死因子、すなわちＴＮＦは、生存能力
のあるマイクロバクテリウム　ボーヴアイス（Ｍｉｃｒ
ｏｂａｃｔｅｒｉｕ曽ｂｏｖｉｃｅ）のバチルスカルメ
ツドーグニリン（Ｂａｃｉｌ−１ｕｓ　Ｃａ１ａ＋ｅｔ
ｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ）株（ＢＧＧ）を前投与後、細菌の
エンドトキシンを静脈内投与したマウスの血清中から初
めて発見された［プロシーデインゲス・オブ・ナショナ
ル・アカデミ−・オブ・サイエンス・ニー・ニス・ニー
（Ｐｒｏｃ、Ｎａ１．Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、［Ｊ、Ｓ。

Ａ、）７２巻第９号、３６６６−７０頁（１９７５年）
］。ＴＮＦを含有するマウス血清は、ｉｎ　ｖｉｔｒｏ
試験で多数のマウス及びヒト形質転換細胞系に対して細
胞傷害活性作用あるいは静細胞活性を示すが、これらの
作用は正常細胞に対しては非常に弱い。ＴＮＦを含有す
るマウス血清は、マウスに移植可能な腫瘍の壊死を生じ
せしめる。ＴＮＦはラット、ウサギ及びモルモットの血
清中にも産生ずる。さらに、ＴＮＦは哺乳類由来の単核
食細胞、繊維芽細胞、Ｂ細胞などによってもある条件下
において産生され得るものである。これに関しては、ロ
イド　ジェイ・オールド（Ｌｌｏｙｄ　Ｊ、０Ｉｄ）に
よってサイエンティフィック　アメリカン（Ｓｃｉｅｎ
ｔｉｆｉｃ　ａａ＋ｅｒｉｃａｎ）２５８巻第５号５９
−７５頁（１９８８年５月）の総説に引用された文献中
に多くの報告がある。本発明においては、哺乳類由来の
血清あるいは哺乳類由来の細胞から得られる上記ＴＮＦ
を活性成分として用いることができるが、ヒトの患者に
使用するためには、免疫適合性の点からヒ）ＴＮＦを含
有する医薬組成物を用いることが好ましい。

本発明において使用するのに適したヒ）ＴＮＦは、組換
えＤＮＡ技術によって製造することができる。あるいは
また、ヒトＴＮＦはヒト由来の細胞を培養することによ
っても製造することができる。

組換えＤＮＡ技術によりヒ）ＴＮＦを製造する方法の適
例としては、たとえば、シライ　ティー（Ｓｈｉｒａｉ
　Ｔ、）ら、ネーチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、３１３巻８
０３−８０６頁（１９８５年）や特開昭６０−２５２４
９６号（欧州特許出願公開第０．１５８，２８６号に対
応）に記載されている。

例えば、大腸菌の培養によって均質なヒ）ＴＮＦを得る
ことができる。精製中のヒトＴＮＦ活性は、Ｌ−門細胞
［アメリカン　タイプ　カルチャーコレクション、シー
シーエル１．２（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１
ｔｕｒｅ　ｃｏｒｅｃｔｉｏｎ、ＣＣＬ　１．２）］　
を用いたウィリアムソン等（Ｗｊｌｌｉａｍｓｏｎｅｔ
　ａｌ、、）の方法の変法によるマウスＬ−細胞に対す
る殺細胞活性によって知ることができる。従って、必要
に応じてより高純度ヒトＴＮＦは、ダイアン　ペニカ（
Ｄｉａｎｅ　Ｐｅｎｎ１ｃａ）らがネーチ＋　−（Ｎａ
　ｔｕｒｅ）、３１２巻、２０−２７頁（１９８４年１
２月）に記載した方法や、欧州特許出廟公開第１６８２
１４号及び第１５５５４９号等に記載されている他の公
知の方法によっても製造することができる。

ヒ）ＴＮＦを構成するアミノ酸の数は、ＴＮＦを得るた
めに用いる製造方法によって異なる。たとえば、欧州特
許出願公開第０１５８２８６号に記載されている組換え
ＤＮＡ技術によって製造されるヒ）ＴＮＦは１５５個の
アミノ酸から戒る。一方、上記のべ二カ（Ｐｅｎｎｉｃ
ａ）等の方法によって製造されるヒトＴＮＦは１５７個
のアミノ酸と、そのＮ末端に結合した２個のアミノ酸か
らなる配列を有する。

組換えＤＮＡ技術によって製造されるＴＮＦは、上記の
アミノ酸配列のＮ末端にメチオニン残基が結合している
ポリペプチドと、上記のアミノ酸配列のＮ末端にヒトＴ
ＮＦのシグナルペプチドの一部分あるいは全部が結合し
ている中間体も包含する。自然の変異、あるいは人為的
変異によって、そのポリペチドの活性に有為な変化を生
じることなくポリペプチドをコードするＤＮＡの構造の
一部を変えることは可能である。

本発明で用いることのできるヒトＴＮＦは、上記のアく
ノ酸配列を有するポリペプチドの相同変異体（ｈｏｍｏ
ｌｏｇｏｕｓ　ｖａｒｉａｎｔ）に相当する構造を有す
るポリペプチドを包含する。相同変異体の例として、米
国特許第４．６７７．０６３号と第４．６７７．０６４
号に記載されているペプチドが挙げられ、この開示内容
は、参照によって本明細書に記載する。これらすべての
生理活性ペプチドも、以下「ヒトＴＮＦ。

と称する。

天然のし）ＴＮＦは、生化学的修飾あるいは化学的修飾
を受は易く、また、２量体や３量体のような会合体の形
になり易い、天然に産生されるこれらのＴＮＦポリペプ
チドもまだ、以下「ヒトＴＮＦＪと称し、本発明の医薬
組成物の活性酸分として使用できる。

ＴＮＦは現在、抗癌剤としての臨床研究が進められてい
るほか、抗炎症・鎮痛作用（日本公開特許公報昭６２−
２９２７２７　）　、免疫複合体病として定義される自
己免疫疾患に対する抑制作用（日本公開特許公報昭６３
−３０４２６）　、等をも有することが報告されている
。しかし、ＴＮＦがぶとう震災を抑制するという報告は
いっさいなされていない。その反対に、ＴＮＦの硝子体
内投与は前眼部の炎症反応を惹起するという報告［（ロ
ーゼンバウムら、アメリカン・ジャーナル・オブ・パソ
ロジ−（Ａｓｈ。

Ｊ、　Ｐａｔｈｏｌ、）第１３３巻４７−５３頁（１９
８８年）コすらなされていた。ところが、発明者らはぶ
とう震災の動物モデルをもちいた実験において、意外に
もＴＮＦを投与するとぶとう震災の発症を抑制すること
を見出した。すなわち、本発明は既に知られている作用
のいずれとも異なった新しいＴＮＦの作用の発見に基づ
くものである。以下にその具体的な実験例について詳細
に述べる。

裏駿旌−土 前眼部型のぶとう震災のモデルとして、うさぎの内毒素
誘発ぶとう震災についてローゼンバウムら［（アメリカ
ン・ジャーナル・オブ・パソロジー（Ａｍ、　Ｊ、　Ｐ
ａｔｈｏｌ、）第１３３巻４７−５３頁（１９８８年）
］の一般的方法に従って検討した。雌性ニューシーラン
ト白色うさぎをケタミン（３０ｎ＋ｇ／ｋｇ）　とキシ
ラジン（５＋ｅｇ／ｗｌ）の筋肉内投与により麻酔し、
３０ゲージ注射針を用いてｌｏｇの大腸菌内毒素を硝子
体内投与することにより前眼部型のぶとう震災を誘発さ
せた。ぶとう震災の発症は、誘発注射２４時間後にうさ
ぎを層殺し、眼球のパラフィン包埋切片の組織病理学的
検索、および房水中の漏出蛋白量と滲出細胞数の測定に
よって検定した。蛋白量はブラッドフォードの色素結合
法にて定量し、滲出細胞数は血球計算盤にて計数した。

ヒトＴＮＦは、欧州特許出願公開第０．１５８．２８６
号に記載の方法に従って組換えＤＮＡ技術によって製造
したものを用い、誘発注射の２４時間前と１時間前にそ
れぞれ３００　、０００単位／ｋｇを１群４匹のうさぎ
に耳静脈内投与した。対照群４匹には、ヒ）ＴＮＦを希
釈するのに用いた溶液（０，１！ゼラチン含有リン酸緩
衝液）をヒ）ＴＮＦ投与投与量しスケジュール、同じ投
与法で投与した。

組織病理学的検索によると、対照群では虹彩と毛様体上
皮において多数の単核球および好中球の浸潤が観察され
たのに対して、ヒ）ＴＮＦ投与投与量明らかにそのよう
な浸潤細胞の減少が認められた。一方、別表に示すごと
く、前眼部における炎症の指標としての房水中の漏出蛋
白量と滲出細胞数についても、ヒトＴＮＦ投与群で・は
対照群に比べて減少していた。　以上の結果は、ヒトＴ
ＮＦ投与による内毒素誘発ぶとう震災の抑制作用を示し
ている。

（以下余白） 別表 （注）数値はうさぎ４匹の平均値上標準偏差を表わす。

裏駁班−主 眼底部をも含むぷどう脱炎のモデルとして、ラットの実
験的自己免疫性ぶどう膜網脱炎（ＥＡＵ）についてヌー
センブラ・ントら［アーカイフ゛ズ・オフ・オフタルモ
ロ−（Ａｒｃｈ、Ｏｐｈｔａｌｍｏｉ、）第１００巻。

１１４６−４９頁（１９８２年）］の一般的方法に従っ
て検討した。雌性ルイス・う・ント（５週齢）２こドー
レイら［オフタルミンク・リサーチ（Ｏｐｈｔｈａｌｍ
ｉｃ　Ｒｅｓ、）第１４巻、２４９頁（１９８２年）］
の方法によって調製したウシのＳ抗原（２０μｇ／ラン
ド）とフロイント完全アジュバントとの混合乳化液０．
０５ｍ１を後肢足践に感作してＥＡＵを誘発した。ＥＡ
Ｕの発症は、感作１４日後にラットを層殺し眼球のパラ
フィン包埋切片の病理学的検索によって検定した。ヒト
ＴＮＦは実験例１で述べた方法によって調製し、Ｓ抗原
感作後毎日１００．０００単位／ｋｇを層殺する日まで
１群４匹のラットに腹腔内投与した。対照群４匹には、
ヒトＴＮＦを希釈するのに用いた溶液（０，ｌχゼラチ
ン含有リン酸緩衝液）をヒトＴＮＦ投与群と同しスケジ
ュール、同じ投与法で投与した。

組織病理学的検索によると、対照群では網膜や脈絡膜に
おいて全体的に広が、った多数の単核球および好中球の
浸潤が観察されたのに対して、ヒトＴＮＦ投与群では明
らかにそのような浸潤細胞数の減少が認められた。

以上２つの実験結果より明らかなる如く、ヒトＴＮＦは
ふどう脱炎の発症を抑制する作用を有している。

本発明のぶとう脱炎の治療用医薬組成物は静脈内、筋肉
内、髄腔内、皮下及び皮肉注射剤として、または経口剤
、外用剤、坐剤、点眼剤として投与することが出来る。

製剤例としては、溶液または凍結乾燥品が挙げられる。

その製剤化にあったでは、賦形剤として、バレイショデ
ンプン、トウモロコシデンプン、デキストリン、小麦、
デン粉等のデンプン類、ヒドロキシプロピルスターチ等
のデンプン誘導体、乳糖、ブドウ糖、ショ糖、マントニ
トール、ソルビトール等の１１！、メチルセルロース、
カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセル
ロース等のセルロース類、塩化ナトリウム、ホウ酸、硫
酸カルシウム、リン酸カルシウム類、沈降炭酸カルシウ
ム等の無機物質、流動化剤としては、重質酸化マグネシ
ウム、台底ケイ酸アルミン酸マグネシウム、含水ケイ酸
、タルク、ステアリン酸マグネシウム、無水ケイ酸、カ
オリン（Ｋａｏｌｉｎ）等、結合剤としては、ポリエチ
レングリコール、ポリビニルピロリ下ン、ポリビニルア
ルコール等の合成高分子及びこれらの誘導体、アラビア
ゴム、トラガント、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、
グルテン等の天然物、安定化剤としては、アルブミン、
ゼラチン、グロブリン、プロタミン、プロタミン塩等の
蛋白質、及びアミノ酸類、ｐＨ調節剤としては、塩酸、
水酸化ナトリウム、リン酸塩類、クエン酸塩、炭酸塩等
を使用する事が出来る。

本発明の他の態様によれば、ふどう脱炎の治療に有効な
量のＴＮＦをぷどう脱炎の患者に投与することからなる
ふどう脱炎の治療方法が提供される。

本発明の医薬組成物は、底入に対するＴＮＦの一日投与
量として、一般に約５０から１００．０００．０００単
位の用量で、好ましくは、点眼の場合には、約５０から
５０，０００単位の用量で、静脈内投与や筋肉内投与の
ような一般的な投与のばあい、約１　、０００から１０
．０００．０００単位の用量で、そして経口投与の場合
には、約１０．０００から１００，０００，０００単位
の用量でぶどう膣炎の患者に投与することができる。

−日の投与量は患者の年齢や症状によって異なる。

上記のように本発明の医薬組成物は、通常、数日から数
週間にわたり、−日５０から１００，０００，０００単
位の用量で投与することができる。この−日投与量は、
−度に、あるいは数回に分けて患者に投与することがで
きる。本発明の医Ｎ組成物は、連日、あるいは、間隔を
おいて投与することができる。その代表的な投与方法の
例を次に示す。

ａ）１週間から４週間の連日投与 ｂ）６日間毎日投与した後、７日間から数週間の体薬を
はさむ間歇的投与 ｃ）１週間に１回投与 ｄ）５日間毎日投与した後、１ケ月の体薬期間をはさむ
間歇投与。

以上のように本発明によれば、現在は確実な治療法が存
在しないぶとう膣炎の治療用医薬組成物の提供が可能と
なる。

以下に実施例にて本発明の一実施態様を具体的に説明す
る。

（実施例） ヒトＴＮＦを上記組換えＤＮＡ技術によって調製し、得
られるヒトＴＮＦを用いて下記の組成を持つ注射用凍結
乾燥製剤を調製する。

組成 ヒトＴＮＦ Ｄ−マンニトール 正常血清アルプ稟ン（ヒト） 塩化ナトリウム リン酸三水素ナトリウム （水酸化ナトリウムでｐＨ８，０ ｓｏｏ、　ｏｏｏ単位 ０　ｖｓｇ ０　ｍｇ ２．０−８ ３．９　ｍｇ に調製）

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 　腫瘍壊死因子を有効成分とするぶどう膜炎の治療用医
   薬組成物。