JPH03247288A - クロストリジウムサーモハイドロスルフリカムのキシロースイソメラーゼ遺伝子 - Google Patents
クロストリジウムサーモハイドロスルフリカムのキシロースイソメラーゼ遺伝子Info
- Publication number
- JPH03247288A JPH03247288A JP4471690A JP4471690A JPH03247288A JP H03247288 A JPH03247288 A JP H03247288A JP 4471690 A JP4471690 A JP 4471690A JP 4471690 A JP4471690 A JP 4471690A JP H03247288 A JPH03247288 A JP H03247288A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- xylose isomerase
- isomerase gene
- clostridium thermohydrosulfuricum
- thermohydrosulfuricum
- xylose
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108700040099 Xylose isomerases Proteins 0.000 title claims abstract description 20
- 241000193447 Thermoanaerobacter thermohydrosulfuricus Species 0.000 title claims abstract description 15
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 abstract description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 4
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 abstract description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 abstract description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 abstract description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 abstract description 2
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 abstract description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 abstract description 2
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 abstract description 2
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 abstract description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 abstract description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 abstract description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 abstract description 2
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 abstract description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 abstract 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 abstract 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 abstract 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 abstract 1
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 5
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 4
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 101900019163 Bacillus subtilis Xylose isomerase Proteins 0.000 description 1
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- ZAQJHHRNXZUBTE-WUJLRWPWSA-N D-xylulose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)CO ZAQJHHRNXZUBTE-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 241001672648 Vieira Species 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 108090001015 cancer procoagulant Proteins 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000002977 hyperthermial effect Effects 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
る）のキシロースイソメラーゼ遺伝子に関する。
キシロースイソメラーゼは、Ｄ−キシロースとＤ−キシ
ルロースの相互変換を触媒する酵素であるが、同時にグ
ルコースをフラクトースに変換する能力も有し、工業的
に重要である。
ルロースの相互変換を触媒する酵素であるが、同時にグ
ルコースをフラクトースに変換する能力も有し、工業的
に重要である。
一方、Ｃ，サーモハイドロスルフリカムは、高熱性細菌
の一種であり、ＡＴＣＣ３３２２３の寄託番号が付され
ている。
の一種であり、ＡＴＣＣ３３２２３の寄託番号が付され
ている。
Ｃ，サーモハイドロスルフリカムがキシロースイソメラ
ーゼを産生ずることは、従来から知られていた［Ｊ、Ｂ
ａｃｔｅｒｉｏｌ、 １６４．１１４６−１１５２（１
９８５）参照〕しかし、Ｃ，サーモハイドロスルフリカ
ムのキシロースイソメラーゼ遺伝子は知られていなかっ
た。
ーゼを産生ずることは、従来から知られていた［Ｊ、Ｂ
ａｃｔｅｒｉｏｌ、 １６４．１１４６−１１５２（１
９８５）参照〕しかし、Ｃ，サーモハイドロスルフリカ
ムのキシロースイソメラーゼ遺伝子は知られていなかっ
た。
７１４の十ンロースイソメラーで遺伝子を提供すること
にある。
にある。
高熱性細菌であるＣ、サーモハイドロスルフリカムのキ
シロースイソメラーゼは、好熱性であることから、その
遺伝子をタンパク質生産性の高い細菌に導入すれば、好
熱性のキシロースイソメラーゼを大量に生産することが
可能となる。
シロースイソメラーゼは、好熱性であることから、その
遺伝子をタンパク質生産性の高い細菌に導入すれば、好
熱性のキシロースイソメラーゼを大量に生産することが
可能となる。
本発明のＣ，サーモハイドロスルフリカムのキシロース
イソメラーゼ遺伝子は、例えば第１図に示す塩基配列を
有する。Ｃ，サーモハイドロスルフリ旦のキシロースイ
ソメラーゼ遺伝子は、以下の方法で大腸菌へクローニン
グすることにより調製し、その塩基配列を決定すること
ができる。
イソメラーゼ遺伝子は、例えば第１図に示す塩基配列を
有する。Ｃ，サーモハイドロスルフリ旦のキシロースイ
ソメラーゼ遺伝子は、以下の方法で大腸菌へクローニン
グすることにより調製し、その塩基配列を決定すること
ができる。
ｌ巷：
クロストリジウム サーモハイドロスルフリカム：ＡＴ
ＣＣ３３２２３ 大腸菌ＭＶ１１８４：ａｒａ、△（Ｉａｃ−ｐｒｏ）、
５ｔｒＡ、ｔｈｉ、（φ８０△１ａｃｌＺ△Ｍ１５）、
△ （ｓｒｌ−ｒｅｃＡ）３０６： ：ＴｎｌＯ
（ｔｅｔ’）；Ｆ’ ；ｔｒａＤ３６゜ｐｒｏＡＢ、
１ａｃＩ”Ｚ△Ｍ１５（１）生育条件 Ｃ，サーモハイドロスルフリカム菌は、メラスニエミ（
Ｍｅｌａｓｎｉｅｍｉ）によって記載されているように
キシロースを炭素源として用い、かつＮＨ，ｃｌ １
ｇ／ｆ、ＣｏＣ１’２０．０３ｇ ／ ＩＩを補充した
培地を用いて６５℃で生育させた。
ＣＣ３３２２３ 大腸菌ＭＶ１１８４：ａｒａ、△（Ｉａｃ−ｐｒｏ）、
５ｔｒＡ、ｔｈｉ、（φ８０△１ａｃｌＺ△Ｍ１５）、
△ （ｓｒｌ−ｒｅｃＡ）３０６： ：ＴｎｌＯ
（ｔｅｔ’）；Ｆ’ ；ｔｒａＤ３６゜ｐｒｏＡＢ、
１ａｃＩ”Ｚ△Ｍ１５（１）生育条件 Ｃ，サーモハイドロスルフリカム菌は、メラスニエミ（
Ｍｅｌａｓｎｉｅｍｉ）によって記載されているように
キシロースを炭素源として用い、かつＮＨ，ｃｌ １
ｇ／ｆ、ＣｏＣ１’２０．０３ｇ ／ ＩＩを補充した
培地を用いて６５℃で生育させた。
大腸菌細胞は、２倍濃度のイーストエキス・トリプトン
培地（Ｄｉｒｃｏ）中で３７℃で生育させた。
培地（Ｄｉｒｃｏ）中で３７℃で生育させた。
クローニング及びシーフェンシング操作ゲノムＤＮＡは
、斉藤の方法［’５ａｉｔｏ、 Ｈ，及びＭｉｕｒａ、
Ｋ、 Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒａｎｓｆ
ｏｒｍｉｎｇ ＤＮＡ ｂｙｐｈｅｎｏｌ ｔｒｅａｔ
ｍｅｎｔ、 Ｂｉｏｃｈｉｍ、 Ｂｉｏｐｈｙｓ、
Ａｃｔａ １９６３、７２（６１９−６２９） ］ に
より、Ｃ，サーモハイドロスルフリカムから抽出した。
、斉藤の方法［’５ａｉｔｏ、 Ｈ，及びＭｉｕｒａ、
Ｋ、 Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒａｎｓｆ
ｏｒｍｉｎｇ ＤＮＡ ｂｙｐｈｅｎｏｌ ｔｒｅａｔ
ｍｅｎｔ、 Ｂｉｏｃｈｉｍ、 Ｂｉｏｐｈｙｓ、
Ａｃｔａ １９６３、７２（６１９−６２９） ］ に
より、Ｃ，サーモハイドロスルフリカムから抽出した。
凍結ペレット（０，３４ｇ）をＮａＣｌを２００ ｍＭ
、 ＥＤＴＡを１００ｍＭ含むトリス５０ｍＭ （１）
Ｈ８，０） ４．５ｍｌに溶解した。１０％ＳＤ Ｓ
０．５ ｄを加え、混合物は６００Ｃ１５分間ゆっくり
と回転させ、次いで６０°Ｃ３０分間 ＲＮＡ５ｅＡ
（０，０５ｍｇ／ｄ） テ処理した。次ｉ：６０℃テ
ロ０分間プロティナーゼＫ（０，５■／−）で処理した
。溶菌液は、フェノール／トリスバッファーで３回、フ
ェノール／クロロホルムで１回抽出した。
、 ＥＤＴＡを１００ｍＭ含むトリス５０ｍＭ （１）
Ｈ８，０） ４．５ｍｌに溶解した。１０％ＳＤ Ｓ
０．５ ｄを加え、混合物は６００Ｃ１５分間ゆっくり
と回転させ、次いで６０°Ｃ３０分間 ＲＮＡ５ｅＡ
（０，０５ｍｇ／ｄ） テ処理した。次ｉ：６０℃テ
ロ０分間プロティナーゼＫ（０，５■／−）で処理した
。溶菌液は、フェノール／トリスバッファーで３回、フ
ェノール／クロロホルムで１回抽出した。
残渣を遠心分離（１０分間、１５０００ ｒｐｍ ）で
除去した。０．８容のイソプロパツールを添加した後、
ＤＮＡを巻き出し、ＥＤＴＡｙｆｒ：１ ［１１Ｍ含む
トリス１０ｍＭ （ｐＨ８，０） １．５艷に溶解した
。最後に、ＤＮＡをＤＥＡＥカラム（洗浄バッファー：
トリス５゜ｍＭ、 ｐＨ８，０、ＥＤＴＡ １ｍＭ、
ＮａＣ１０，１５Ｍ ；溶出バッファー、トリス５０
ｍＭＸｐ）１８． Ｏ１ＥＤＴＡ １ ｍＭ。
除去した。０．８容のイソプロパツールを添加した後、
ＤＮＡを巻き出し、ＥＤＴＡｙｆｒ：１ ［１１Ｍ含む
トリス１０ｍＭ （ｐＨ８，０） １．５艷に溶解した
。最後に、ＤＮＡをＤＥＡＥカラム（洗浄バッファー：
トリス５゜ｍＭ、 ｐＨ８，０、ＥＤＴＡ １ｍＭ、
ＮａＣ１０，１５Ｍ ；溶出バッファー、トリス５０
ｍＭＸｐ）１８． Ｏ１ＥＤＴＡ １ ｍＭ。
ＮａＣｌ ＬＭ）を用いたアニオン交換樹脂により精
製した。
製した。
ゲノムＤＮＡは、ＥｃｏＲＩ 、 Ｈｉｎｄｌｌｌ及び
ＰｓｔＩを用いて消化した。フラグメントは、０．４％
アガロースゲル電気泳動で分離した。ＤＮＡは、２５分
間１．５ ＭＮａＣｌ、０．５ Ｍ ＮａＯＨ中にゲ
ルを浸すことにより変性した。ゲルは、３Ｍ酢酸ナトリ
ウム（ｐＨ５，５）で中和した。ＤＮＡは、エレクトロ
ブロッティング（３時間、２ ｍＡ／ ｃｍ）によりナ
イロン膜（Ｂｉｏｄｙｎｅ）に移し、８０℃で１時間焼
成した。
ＰｓｔＩを用いて消化した。フラグメントは、０．４％
アガロースゲル電気泳動で分離した。ＤＮＡは、２５分
間１．５ ＭＮａＣｌ、０．５ Ｍ ＮａＯＨ中にゲ
ルを浸すことにより変性した。ゲルは、３Ｍ酢酸ナトリ
ウム（ｐＨ５，５）で中和した。ＤＮＡは、エレクトロ
ブロッティング（３時間、２ ｍＡ／ ｃｍ）によりナ
イロン膜（Ｂｉｏｄｙｎｅ）に移し、８０℃で１時間焼
成した。
このプロットを、バチルス スブチリス（Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ） キシロースイソメラーゼ遺
伝子から得た３２ｐラベルされた２４０ヌクレオチドＢ
ｂｅＩ −Ｄｄｅｌフラグメント（１０’ｃｐｒｎ／ｍ
ｌ）を用いて５８°Ｃでハイブリダイズさせた。このフ
ラグメントは、ｖｉｏｌａｃｅｏｎｉ ｅｒ）及びアン
プラリエラ（Ａｍｐｕｌａｒｉｅｌｌａ）から得たキシ
ロースイソメラーゼアミノ酸配列と比べると分かるよう
に、２つの比較的高いホモロジー領域を含む。ハイブリ
ダイゼーションの後、ＥｃｏＲＩでは８．７ Ｋｂ、
ＨｉｎｄＩＩＩでは２．２Ｋｂ及びＰｓｔｌでは３．６
Ｋｂ付近に単一のバンドが現れた。
ｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ） キシロースイソメラーゼ遺
伝子から得た３２ｐラベルされた２４０ヌクレオチドＢ
ｂｅＩ −Ｄｄｅｌフラグメント（１０’ｃｐｒｎ／ｍ
ｌ）を用いて５８°Ｃでハイブリダイズさせた。このフ
ラグメントは、ｖｉｏｌａｃｅｏｎｉ ｅｒ）及びアン
プラリエラ（Ａｍｐｕｌａｒｉｅｌｌａ）から得たキシ
ロースイソメラーゼアミノ酸配列と比べると分かるよう
に、２つの比較的高いホモロジー領域を含む。ハイブリ
ダイゼーションの後、ＥｃｏＲＩでは８．７ Ｋｂ、
ＨｉｎｄＩＩＩでは２．２Ｋｂ及びＰｓｔｌでは３．６
Ｋｂ付近に単一のバンドが現れた。
ＰｓｔＩ消化クロスりリジュウムＤＮＡの３．６Ｋｂ±
０．６Ｋｂのフラグメントは、ガラスミルク（ｇｌａｓ
ｓｍｉｌｋ）を用いた抽出により単離され、Ｐｓｔｌ消
化された大腸菌ベクターｐＵｃ１１９とリゲートさせた
。コンピテント大腸菌ＭＶ１１８４細胞をリゲートした
ＤＮＡで形質転換した。所望のクロストリジュウムＤＮ
Ａを有するコロニーをバチルス スブチリスプローブと
形質転換体のコロニーとのハイブリダイゼーションによ
り検出した。ポジティブなシグナルを与えるコロニーか
らアルカリ溶解法によりプラスミドＤＮＡを抽出し、制
限酵素による消化及びサザンハイプリダイゼーションに
より分析した。
０．６Ｋｂのフラグメントは、ガラスミルク（ｇｌａｓ
ｓｍｉｌｋ）を用いた抽出により単離され、Ｐｓｔｌ消
化された大腸菌ベクターｐＵｃ１１９とリゲートさせた
。コンピテント大腸菌ＭＶ１１８４細胞をリゲートした
ＤＮＡで形質転換した。所望のクロストリジュウムＤＮ
Ａを有するコロニーをバチルス スブチリスプローブと
形質転換体のコロニーとのハイブリダイゼーションによ
り検出した。ポジティブなシグナルを与えるコロニーか
らアルカリ溶解法によりプラスミドＤＮＡを抽出し、制
限酵素による消化及びサザンハイプリダイゼーションに
より分析した。
バチルス スブチリスキシロースイソメラーセ遺伝子か
ら得たプローブと強力にハイブリダイズする３、 ５５
ＫｂＰｓｔｌフラグメントを得た。
ら得たプローブと強力にハイブリダイズする３、 ５５
ＫｂＰｓｔｌフラグメントを得た。
この３．５５’Ｋｂフラグメントを、制限酵素Ａｌｕｌ
。
。
）１ａｅＩＩＩ、 Ｎｄｅｌ及び旧ｎｄｌｌｌを用いて
小さい−フラグメントに消化した。これらのフラグメン
トは、ｐＵＣ１１８及びｐＵｃ１１９を用いて大腸菌Ｍ
Ｖ１１８４にサブクローンした。１本鎖ＤＮＡをビエイ
ラ（Ｖｉｅｉｒａ）の方法に従って調製し、Ｔ７ＤＮＡ
ポリメラーゼ（ンークエンスｖｅｒ２．０ ：商品名）
及び７−デアザｄＧＴＰを用いて配列を決定した。
小さい−フラグメントに消化した。これらのフラグメン
トは、ｐＵＣ１１８及びｐＵｃ１１９を用いて大腸菌Ｍ
Ｖ１１８４にサブクローンした。１本鎖ＤＮＡをビエイ
ラ（Ｖｉｅｉｒａ）の方法に従って調製し、Ｔ７ＤＮＡ
ポリメラーゼ（ンークエンスｖｅｒ２．０ ：商品名）
及び７−デアザｄＧＴＰを用いて配列を決定した。
ツメラーゼ遺伝子の塩基配列及びアミノ酸配列を第１図
に示す。
に示す。
本発明のＣ，サーモハイドロスルフリカムのキシロース
イソメラーゼ遺伝子は、例えばバチルスプレビス及び枯
草菌等の菌に導入し、この導入歯を培養することにより
、キシロースイソメラーゼを大量に生産し得ることが期
待される。
イソメラーゼ遺伝子は、例えばバチルスプレビス及び枯
草菌等の菌に導入し、この導入歯を培養することにより
、キシロースイソメラーゼを大量に生産し得ることが期
待される。
第１図に本発明のＣ，サーモハイドロスルフリカムのキ
シロースイソメラーゼ遺伝子の塩基配列を示す。 第１ 図 ０ ＣＴＧＣＡＧＧＡＴＡ ０ ＣＣＡＣＡＣＧＧＡＧ ０ ＣＴＴＴＣＡＡＡＴＧ ０ ＴＧＧＡＧＣＡＡＡＧ ０ ＴＴＴＴＡＡＡＴＡＡ ０ ＴＴＡＴＡＴＴＴＴＣ ３０ ＡＡＡＡＡＴＧＴＡＣ ４０ ＣＡＣＡＡＡＴＡＡＡ ５０ ＡＴＡＴＧＡＡＧＧＡ ９０ ＴＴＴＴＡＣＡＡＴＣ ００ ＣＡＧＡＴＧＡＡＡＴ １０ ＡＡＴＡＧＡＣＧＧＡ ５０ ＧＴＡＧＣＧＴＡＣＴ ６０ ＧＧＣＡＣＡＣＡＴＴ ７０ ＴＡＣＡＧＣＣＡＡＴ １０ ＣＡＡＡＧＧＣＣＡＴ ２０ ＧＧＧＡＣＣＡＴＴＴ ３０ ＴＡＣＴＧＡＣＣＣＴ ７０ ＧＣＣＴＴＴＧＡＡＣ ８０ ＴＡＴＴＴＧＡＡＡＡ ９０ ＡＣＴＣＧＡＣＧＴＡ ３０ ＧＣＴＣＣＧＧＡＡＧ ４０ ＧＡＧＡＧＡＣＡＴＴ ５０ ＡＡＧＧＧＡＧＡＣＧ ９０ ＡＴＡＡＡＡＧＡＣＴ ００ ＡＣＴＴＡＡＡＧＡＣ １０ ＧＡＧＣＡＡＡＡＣＡ その ■ ０ ＡＧＡＣＡＡＴＧＧＡ ０ ＡＧＣＡＴＡＴＡＴＴ ０ ＧＣＡＴＧＧＣＡＣＴ ００ ＡＡＡＡＡＧＧＡＧＧ １０ ＡＡＡＡＴＧＡＣＡＴ ２０ ＧＧＡＡＴＡＣＴＴＣ ６０ ＣＣＡＡＡＡＴＣＡＡ ７０ ＡＣＡＡＴＣＣＡＴＡ ８０ ＴＧＣＡＴＴＴＡＡＡ ２０ ＡＡＡＣＣＴＴＴＡＡ ３０ ＡＡＧＡＡＣＡＣＴＴ ４０ ＧＣＧＴＴＴＴＴＣＡ ８０ ＧＧＧＡＣＡＧＡＴＣ ９０ ＣＡＴＴＴＧＧＡＧＣ ００ ＡＣＣＣＡＣＡＡＴＧ ４０ ＡＴＧＧＡＴＡＴＴＧ ５０ ＣＣＡＡＡＧＣＧＡＧ ６０ ＡＧＴＡＧＡＡＧＣＡ ００ ＣＣＡＴＴＴＴＴＣＴ １０ ＧＴＴＴＣＣＡＴＧＡ ２０ ＣＡＧＡＧＡＴＡＴＡ ６０ ＡＡＣＡＡＡＡＡＴＴ ７０ ＴＡＧＡＴＡＣＡＡＴ ８０ ＡＧＴＴＧＣＡＡＴＧ ２０ ＡＡＡＧＴＡＴＴＡＴ ３０ ＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣ ４０ ＧＡＡＣＣＴＴＴＴＴ
シロースイソメラーゼ遺伝子の塩基配列を示す。 第１ 図 ０ ＣＴＧＣＡＧＧＡＴＡ ０ ＣＣＡＣＡＣＧＧＡＧ ０ ＣＴＴＴＣＡＡＡＴＧ ０ ＴＧＧＡＧＣＡＡＡＧ ０ ＴＴＴＴＡＡＡＴＡＡ ０ ＴＴＡＴＡＴＴＴＴＣ ３０ ＡＡＡＡＡＴＧＴＡＣ ４０ ＣＡＣＡＡＡＴＡＡＡ ５０ ＡＴＡＴＧＡＡＧＧＡ ９０ ＴＴＴＴＡＣＡＡＴＣ ００ ＣＡＧＡＴＧＡＡＡＴ １０ ＡＡＴＡＧＡＣＧＧＡ ５０ ＧＴＡＧＣＧＴＡＣＴ ６０ ＧＧＣＡＣＡＣＡＴＴ ７０ ＴＡＣＡＧＣＣＡＡＴ １０ ＣＡＡＡＧＧＣＣＡＴ ２０ ＧＧＧＡＣＣＡＴＴＴ ３０ ＴＡＣＴＧＡＣＣＣＴ ７０ ＧＣＣＴＴＴＧＡＡＣ ８０ ＴＡＴＴＴＧＡＡＡＡ ９０ ＡＣＴＣＧＡＣＧＴＡ ３０ ＧＣＴＣＣＧＧＡＡＧ ４０ ＧＡＧＡＧＡＣＡＴＴ ５０ ＡＡＧＧＧＡＧＡＣＧ ９０ ＡＴＡＡＡＡＧＡＣＴ ００ ＡＣＴＴＡＡＡＧＡＣ １０ ＧＡＧＣＡＡＡＡＣＡ その ■ ０ ＡＧＡＣＡＡＴＧＧＡ ０ ＡＧＣＡＴＡＴＡＴＴ ０ ＧＣＡＴＧＧＣＡＣＴ ００ ＡＡＡＡＡＧＧＡＧＧ １０ ＡＡＡＡＴＧＡＣＡＴ ２０ ＧＧＡＡＴＡＣＴＴＣ ６０ ＣＣＡＡＡＡＴＣＡＡ ７０ ＡＣＡＡＴＣＣＡＴＡ ８０ ＴＧＣＡＴＴＴＡＡＡ ２０ ＡＡＡＣＣＴＴＴＡＡ ３０ ＡＡＧＡＡＣＡＣＴＴ ４０ ＧＣＧＴＴＴＴＴＣＡ ８０ ＧＧＧＡＣＡＧＡＴＣ ９０ ＣＡＴＴＴＧＧＡＧＣ ００ ＡＣＣＣＡＣＡＡＴＧ ４０ ＡＴＧＧＡＴＡＴＴＧ ５０ ＣＣＡＡＡＧＣＧＡＧ ６０ ＡＧＴＡＧＡＡＧＣＡ ００ ＣＣＡＴＴＴＴＴＣＴ １０ ＧＴＴＴＣＣＡＴＧＡ ２０ ＣＡＧＡＧＡＴＡＴＡ ６０ ＡＡＣＡＡＡＡＡＴＴ ７０ ＴＡＧＡＴＡＣＡＡＴ ８０ ＡＧＴＴＧＣＡＡＴＧ ２０ ＡＡＡＧＴＡＴＴＡＴ ３０ ＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣ ４０ ＧＡＡＣＣＴＴＴＴＴ
Claims (2)
- （１）クロストリジウムサーモハイドロスルフリカムの
キシロースイソメラーゼ遺伝子。 - （２）クロストリジウムサーモハイドロスルフリカムが
ＡＴＣＣ３３２２３である請求項１記載のキシロースイ
ソメラーゼ遺伝子。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4471690A JPH03247288A (ja) | 1990-02-26 | 1990-02-26 | クロストリジウムサーモハイドロスルフリカムのキシロースイソメラーゼ遺伝子 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4471690A JPH03247288A (ja) | 1990-02-26 | 1990-02-26 | クロストリジウムサーモハイドロスルフリカムのキシロースイソメラーゼ遺伝子 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03247288A true JPH03247288A (ja) | 1991-11-05 |
Family
ID=12699143
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4471690A Pending JPH03247288A (ja) | 1990-02-26 | 1990-02-26 | クロストリジウムサーモハイドロスルフリカムのキシロースイソメラーゼ遺伝子 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH03247288A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9951326B2 (en) | 2015-07-13 | 2018-04-24 | MARA Renewables Corporation | Enhancing microbial metabolism of C5 organic carbon |
-
1990
- 1990-02-26 JP JP4471690A patent/JPH03247288A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9951326B2 (en) | 2015-07-13 | 2018-04-24 | MARA Renewables Corporation | Enhancing microbial metabolism of C5 organic carbon |
| US10662418B2 (en) | 2015-07-13 | 2020-05-26 | MARA Renewables Corporation | Enhancing microbial metabolism of C5 organic carbon |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111363775B (zh) | 一种生物酶法去消旋化制备l-草铵膦的方法、草铵膦脱氢酶突变体及应用 | |
| US20210032636A1 (en) | Promoter and use thereof | |
| CN113151198B (zh) | 一种γ-谷酰胺甲胺合成酶的突变体，其编码基因、氨基酸序列及其应用 | |
| WO2023236638A1 (zh) | 热稳定性改善的葡萄糖氧化酶GoxM10突变体E361P及其衍生突变体和应用 | |
| Dekker et al. | Xylose (glucose) isomerase gene from the thermophile Clostridium thermohydrosulfuricum; cloning, sequencing, and expression in Escherichia coli | |
| JPH04126080A (ja) | 耐熱性キシロースイソメラーゼの製造方法 | |
| EP0877084B1 (en) | Thermostable diaphorase gene | |
| JPH03247288A (ja) | クロストリジウムサーモハイドロスルフリカムのキシロースイソメラーゼ遺伝子 | |
| Loughney et al. | Ribosomal RNA precursors of Bacillus subtilis | |
| KR100787995B1 (ko) | 신규한 우라실-ｄｎａ 글리코실라제(ｕｄｇ) 및 이의 용도 | |
| WO2018171400A1 (zh) | 阿卡波糖工程菌及其制备方法和应用 | |
| CN114230644A (zh) | 一种gp32蛋白突变体、重组载体及其构建方法和应用 | |
| CN109762801B (zh) | 卤醇脱卤酶突变体及其在合成手性药物中间体中的应用 | |
| CN112063642A (zh) | 一种依赖t5核酸外切酶构建重组质粒的预混液及其应用 | |
| Sampson et al. | Increased Expression ofBrevibacterium sterolicumCholesterol Oxidase inEscherichia coliby Genetic Modification | |
| JPH01225483A (ja) | 組換え体プラスミド | |
| JPH0556789A (ja) | テルムス アクアテイカスのキシロースイソメラーゼ遺伝子、キシロースイソメラーゼ及びそれを用いたフラクトースの製造方法 | |
| CN113564141B (zh) | 单细胞基因组扩增酶突变体及其应用 | |
| Rowen et al. | Cloning of bacterial DNA replication genes in bacteriophage λ | |
| JP4352286B2 (ja) | 変異型グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼおよびその製造法 | |
| CN113151213B (zh) | 一种高忠实性dna聚合酶及其制备方法和pcr应用 | |
| WO2024114637A1 (zh) | 生产阿卡波糖的工程菌及其构建方法和应用 | |
| WO1999027115A1 (fr) | Phosphoesterase alcaline calorifuge et son expression | |
| US11697805B2 (en) | High-fidelity polymerase with preference for gapped DNA and use thereof | |
| CN111662893A (zh) | 分子诊断酶制剂的制备方法 |