JPH03246297A - ガングリオシド誘導体及びこれを含有する抗ｈｉｖ剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、ガングリオシド誘導体及びこれを有効成分と
する抗ヒト免疫不全症ウィルス剤（以下、「抗ＨＩＶ剤
」と略称する）に関する。

〔従来の技術及び発明が解決しようとする課題〕後天性
免疫不全症候群〔八ｃｑｕｉｒｅｄ　ＩｍｍｕｎｅＤｅ
ｆｉｃｉｅｎｃｙ　Ｓｙｎｄｒｏｍｅ　：　ＡＩＤＳ）
は、ＨＩＶ！（ｕｍａｎ　１ｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅ
ｎｃｙ　Ｖｉｒｕｓ　；　Ｎａｔｕｒｅ、　１１２１゜
１０　（Ｉ９８６）　］の感染によって引き起こされる
重篤な免疫不全症であり、その死亡率が非常に高いこと
から、かかるＨＩＶ感染及びＡＩＤＳに対する対策は大
きな社会的課題とさえなっている。

現在臨床的に効果があると認められている抗ＨＩＶ剤と
しては、逆転写酵素の阻害作用を有するアジドチミジン
（ＡＺＴ）が知られているが、その臨床的効果は、尚不
十分であり、更にこれによる副作用、例えば骨髄く造血
組織）の障害や頭痛、けいれん等の神経症状等の副作用
が強いという問題を抱えている。殊にＨＩＶは、その遺
伝子がプロウィルスとなって感染した細胞の染色体に潜
り込み遺伝病のような状態になっていることから必然的
に薬剤の長期投与が要求されており、ＡＺＴの有するか
かる副作用は、これを抗ＨＩＶ剤として用いる場合の大
きな障害となっている。

また、ＨＩＶ感染者がＡＩＤＳを発症するまでには、通
常極めて長い臨床的潜伏期がありその為、感染予防対策
をたてることが非常に困難とされている。

かかる現状から、ＨＩＶ感染及びＡＩＤＳに対して奏効
する新しい医薬製剤の開発が斯界で待ち望まれている。

〔課題を解決するだめの手段〕

そこで、本発明者らは上記課題を解決すべく鋭意研究を
行った結果、ガングリオシドに硫酸根をつけた化合物が
優れた抗ＨＩＶ作用を有し、かつ安全性も高いことを見
出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は、次の一般式（Ｉ）（式中、 は水素原子又はスルホン酸基を示し、 Ｒ２及びＲ３はそれぞれ水素原子、 スルホン酸基又は 人ｃＮＨ Ｒ４は脂肪酸残基を示し、かつＲ’の少なくとも１２個
以上はスルホン酸基である） で表わされるガングリオシド誘導体及びこれを有効成分
として含有することを特徴とする抗ＨＩＶ剤を提供する
ものである。

上記一般式（Ｉ）中、Ｒ１は水素原子又はスルホン酸基
であるが、本発明化合物が良好な抗ＨＩＶ作用を発揮す
るためにはそのうち少なくとも７割すなわち１２個以上
がスルホン酸基であることが必要である。就中、全ての
Ｒ１がスルホン酸基である場合が特に好ましい。

上記一般式（Ｉ）中、Ｒ４で示される脂肪酸残基として
は、炭素数８〜３０の飽和もしくは不飽和の脂肪酸残基
が挙げられる。就中、本発明ガングリオシド誘導体の原
料が好適には動物組織由来のものであることから、当該
脂肪酸残基は、炭素数１２〜２７の飽和もしくは不飽和
脂肪酸残基が好ましい。

また、本発明抗ＨＩＶ剤の有効成分としてのガングリオ
シド誘導体（Ｉ）は必ずしも単一化合物である必要はな
く、Ｒ４で示される脂肪酸残基が相異なる複数の化合物
の混合物であってもよい。

本発明のガングリオシド誘導体（Ｉ）は、例えば次の反
応式に従って製造される。

（式中、 Ｒ４は脂肪酸残基を示し、 Ｒ５及びＲ６はそれ 人ｃＮＨ すなわち、ガングリオシド（Ｉ１）に硫酸又はその誘導
体を反応させることにより、本発明のガングリオシド誘
導体（Ｉ）を製造することができる。

原料であるガングリオシド（ｎ）としては、特に限定さ
れないが、例えばＧＭ、、、Ｇ０１４、ＧＯ，、、ＧＴ
、、などが挙げられる。これらは、常法に従い、動物組
織からの抽出・精製により製造することができる（Ｓｕ
ｚｕｋｉ、　Ｙ、、　５ｕｚｕｋｉ、　Ｎ、、　＆１ｉ
ｃｈｉ、　Ｈ。

ａｎｄ　　Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ、　　Ｍ、　　（Ｉ９８
５）　　Ｌｉｐｉｄｓ、　　２０．　　（ｋｇ）５８８
−５９３；＾ｎｄｏ、　Ｓ、、　１ｓｏｂｅ、　Ｍ、、
　ａｎｄ　Ｎａｇａｉ、　Ｙ。

（Ｉ９７６）　Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａ
ｃｔａ、　４２４．９８−１０５）　０また、これらの
ガングリオシド（ｎ）は化学合成によっても製造するこ
とができ、例えば動物組織から抽出された糖−セラミド
のセラミド部分の脂肪酸を除去し、任意の脂肪酸残基を
導入することにより製造することができる。かかる任意
の脂肪酸残基の導入方法としては、ヒドラジン分解によ
るリゾ型糖−セラミドの化学的合成及び脂肪酸無水物を
用いた再アシル化により行うことができる［５ｕｚｕｋ
ｉ、　Ｙ、　ｅｔ　ａｔ、、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、
、　９５．１２１９〜１２２２　（Ｉ９８４）　）。

上記反応において用いられる硫酸の誘導体としては、硫
酸−トリメチルアミン、硫酸−トリエチルアミンなどの
硫酸−トリアルキルアミン複合体；硫酸−トリピリジン
複合体等が挙げられる。

反応は、ガングリオシド（ＩＩ）と硫酸又は硫酸誘導体
を、反応に関与しない溶媒中で攪拌することにより行わ
れる。溶媒としては、ジメチルホルムアミド、ジメチル
アセトアミド、ピリジン、ジオキサンなどが用いられる
。反応温度は５０〜６０℃程度が好ましく、反応時間は
１０〜２０時間が好ましい。

また、ガングリオシド（Ｉ）の糖部分の任意の位置を硫
酸化しようとする場合には、予め硫酸化しない位置のヒ
ドロキシ基をシリル化しておき、次いで他のヒドロキシ
基を硫酸化した後、該シリル基を脱離せしめればよい。

シリル化剤としては、トリメチルシリルクロリド、トリ
エチルシリルクロリド等のトリアルキルハライド；モノ
低級アルコキシジ低級アルキルシリルハライド；ビスト
リ低級アルキルシリルアセトイミドなどが挙げられる。

硫酸化反応後、該シリル基を脱離せしめるには、トリフ
ルオロ酢酸、ｔｅｒｔ−ブチルアンモニウムフルオライ
ド、フッ化水素、酢酸−水、ダウエックス５０Ｗ−Ｘ８
、三フッ化ホウ素・ジエチルエーテル等で処理すればよ
い。

反応混合物より、ガングリオシド誘導体（Ｉ）を単離・
精製するには、常法、例えばシリカゲル、イオン交換樹
脂などを充填したカラムクロマトグラフィーを用いるの
が好ましい。

本発明の抗ＨＩＶ剤は上記ガングリオシド誘導体（Ｉ）
を必須成分とし、通常その薬理有効量と共に適当な医薬
製剤担体を配合することにより調製される。

製剤担体としては、使用形態に応じた製剤を調製するの
に通常慣用される充填剤、増量剤、保湿剤、崩壊剤、表
面活性剤等の賦形剤ないし希釈剤等のいずれもが使用で
きる。製剤組成物の形態はこれが上記有効成分を効果的
に含有する状態であれば特に限定はなく、例えば、錠剤
、粉剤、顧粒剤、大側等の固剤や通常液剤、懸濁剤、乳
剤等の液剤であることができる。また、これを使用前に
適当な担体の添加によって液状となし得る乾燥品とする
こともできる。上記製剤組成物には、必要に応じて通常
の各種添加剤、例えば溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤、
保存剤、着色剤等を添加することもでき、更に他の医薬
品を組み合せ配合することもできる。

本発明の抗ＨＩＶ剤は、該製剤組成物の形態に応じた適
当な投与経路で投与される。投与方法も特に限定はなく
、内用、外用及び注射によることができる。注射剤は、
例えば静脈内、筋肉内、皮下、皮内、腹腔内等に投与し
得、外用剤には、串刺等も包含される。

本発明抗ＨＩＶ剤の投与量は、その製剤形態、投与方法
、使用目的及びこれを適用される患者の年齢、体重、病
状等に応じて適宜設定され、一定ではないが一般には製
剤中に含有される有効成分の量が一成人当り、経口投与
の場合０．１ｇ〜１０ｇ程度、非経口投与の場合０．１
ｇ〜５ｇ程度とすることが好ましく、製剤中の有効成分
量は、この投与量に従って適宜設定される。なお、投与
は必要に応じて１日数回に分けて行うことも可能である
。

〔発明の効果〕

本発明のガングリオシド誘導体（Ｉ）は、ＨＩＶ感染の
予防及びＡＩＤＳ並びにその関連症候群ＡＲＣの発症予
防並びに治療に有効であり、またその細胞毒性が低いこ
とから、長期の投与にも好適に使用し得るものである。

従って、これを有効成分として含有する本発明の抗ＨＩ
　Ｖ剤は健常人のかかるＨＩＶ感染の予防、無症候感染
者（キャリア）の発症予防並びに治療及び発症したＡＩ
ＤＳ並びにＡＲＣの患者の治療に極めて有用である。

〔実施例〕

以下、実施例を挙げて本発明を更に説明するが、本発明
はこれら実施例に限定されるものではない。

参考例 （Ｉ）　　ウシ脳総ガングリオシドの調製新鮮ウシ脳灰
白質５　ｋｇを２５１のアセトンでブレンダー粉砕し、
吸引ろ過する。残渣をドラフト中で風乾した。得られた
アセトン粉末５００ｇを２．５１のメタノールとともに
ブレンダー粉砕し、それに、クロロホルム５１を加え、
時々攪拌しながら４時間以上放置して吸引ろ過した。残
渣にクロロホルム／メタノール（Ｉ：　１．ｖ／ｖ）５
ｊ２を加え、攪拌しながら４時間以上放置し、吸引ろ過
した。得られた抽出液を合わせ、ロータリーエバポレー
ターで４０〜５０℃で蒸発乾固した。残渣を再度クロロ
ホルム／メタノール（２：１．ｖ／ｖ）４ｊ２に溶かし
、不溶物を吸引ろ過により除去し、抽出液の１Ｉ４倍量
の蒸留水を加えてゆっくり上下攪拌した後、室温で放置
あるいは遠心によって上下２層に分離した。粗ガングリ
オシド混合物を含む上層を分取し、下層にクロロホルム
／メタノール／水（８：　４　：　３．ｖ／ｖ／ｖ）の
上層を１β加え、ゆっくりと上下回転攪拌後、上層を分
取した。この操作をもう一度行い、合わせた上層をエバ
ポレーターで濃縮した。濃縮液約１１を１０倍量の蒸留
水に対して３日間透析した。この間６回、蒸留水を交換
する。透析内液を凍結乾燥すると、白色の総ガングリオ
シド粉末が得られた。収量、約１ｇ１５００ｇア七トン
粉末／　５　ｋｇウシ脳脳内白 質２）　　ウシ脳ガングリオシドＧＭ、、、Ｇｆ）、、
、ＧＤ＋ｂ、ＧＴ、、のＱ−セファロースカラムクロマ
トグラフィーによる調製 上記ウシ脳総ガングリオシド粉末５ｇから、ガングリオ
シドＧＭ、いＧＤ、いＧＯ，、、ＧＴ、、をＱ−セファ
ロース（ファルマシア社）カラムクロマトグラフィーに
より精製、分離した（Ｙｏｓｈｉ。

Ｈｉｒａｂａｙａｓｈｉ、　Ｔｏｒｕ　Ｎａｋａｏ、　
Ｙａｓｕｏ　５ｕｚｕｋｉ。

Ｓｕｓｕｍｕ　　八ｎｄｏ：　　ｔｈｉｒｄ　　ＲＩＮ
Ｓ）１０−に８Ｎ　　１ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｃｏ
ｎｆｅｒｅｎｃｅ、　　Ａｂｓｔｒａｃｔ　　ｂｏｏｋ
　　ｐ、　　７４．　１９８８）。

すなわち、Ｑ−セファロースゲルを酢酸型とするため、
５倍量のクロロホルム／メタノール／４Ｍ酢酸ナトリウ
ム（３０：６０　：８．ｖ／ｖ／Ｖ）に懸濁し、室温に
て３０分放置後、吸引ろ過した。ゲルを再度同溶液に懸
濁し、室温で一昼夜放置した。ゲルを５倍量のメタノー
ルで数回洗った後、クロロホルム／メタノール／水（３
０：６０　：　８．ｖ／ｖ／ｖ）に懸濁し、内径３　ｃ
ｍ、高さ７５ｃｍのカラムに６５ｃｍの高さまで充填し
た。

その後、２βの同溶媒で洗浄した。上記の方法で調製し
たウシ脳ガングリオシド５ｇを５００ｄのクロロホルム
／メタノール／水（３０：６０：８゜ｖ　／　ｖ　／　
ｖ　）に溶解し、カラムに充填、吸着させた。カラムを
８００−の同溶媒で洗い、サンプル中の中性糖脂質を除
去した。その後、３Ｉ２のクロロホルム／メタノール／
水（３０：６０：８．ｖ／　Ｖ　／　Ｖ　）から３１の
クロロホルム／メタノール／４Ｍ酢酸ナトリウム（３０
：６０：８．ｖ／ｖ／Ｖ）への連続密度勾配で、室温に
てガングリオシドを溶出した。流速は、１．５ｍｊ！／
分で１５−ずつ分画した。溶出液を薄層クロマトグラフ
ィー（薄層クロマトグラフィープレート、５ｉｌｉｃａ
　Ｇｅ１６０　（メルク社）；展開溶媒、クロロホルム
／メタノール／１２ｍＭ　ＭｇＣｌ１ｚ（５：　５　：
　１．　　ｖ／ｖ／Ｖ））で標準品との比較によりモニ
ターした。各ガングリオシド画分をエバポレーターで濃
縮した後、蒸留水に対して透析、凍結乾燥した。純粋な
各ガングリオシドは、次に示す試験管番号の両分に溶出
された。各収量は括弧内に示した。ＧＭ、。。

試験管番号７５−８２（収量１１０■）　　；ＧＤ、、
。

試験管番号１５１−１６４　　（収量３４８ｍｇ）：Ｇ
［］、、、試験管番号１８１−１９２　（収量１０２２
ｍｇ）　　；ＧＴ、ｂ、試験管番号２１９−２４２　（
収量７０７ｍｇ）　　。

実施例Ｉ ＧＭ、、の硫酸化体の合成： ＧＩＬａ１５．６ｍｇ及び硫酸−トリメチルアミン複合
体４４ｍｇをジメチルホルムアミド１．５ｍｆに溶解さ
せ、５０−６０℃で２０時間攪拌した。反応液を減圧ａ
縮した後、残渣を塩化メチレン１．０−に溶解させ、ゲ
ルクロマトグラフィー（Ｓｅｐｈａｄｅｘ　Ｌｆ１２０
；展開溶媒、クロロホルムニメタノール：水１０　：　
１０　：　３　（ｖ／ｖ／ｖ）　、２０ｇ）に負荷して
から精製しＧＭ＋−のスルホン酸トリメチルアミ：’塩
２４ｍｇを得た。次に先のスルホン酸）　ＩＪ　メ＋ル
アミン塩体を塩化メチレン２．０ｍｌに溶かし、トリフ
ルオロ酢酸２１ｍｇを加えて１時間攪拌した。

反応液を減圧濃縮し、残渣にトルエンを加えて共沸した
後、塩化メチレン１．０証に溶解させ、アルク０フトグ
ラフイ（Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ２０；展開溶媒、クロ
ロホルム：メタノール：水＝１０＝１０　：　１　　（
ｖ／ｖ／ｖ）　、２０　ｇ）に負荷してから精製し、さ
らに凍結乾燥により、１６個の水酸基が硫酸エステル化
された目的物を１３ｍｇ（収率３４％）得た。

白色粉末 分解　１６５−１７０℃ ＩＲ（ＫＢｒ）　：　３４００　（叶）、　２９００．
２８２５（Ｃ１ｌ）、　１７３０（−ｎステル）、　　
１６４０．　１５６０（アミド）、　　１２５０゜１２
２０ｃｍ−’　（５Ｏ２） ＩＩ　ＮＭＲ（［：ＤＣｌ、−ＣＤ３０Ｄ）δ：　１．
２６　（Ｓ、脂肪酸残基）実施例２ ＧＯ＋−の硫酸化体の合成： 実施例１と同様にして、ＧＯ，、１８，７口ｇから１９
個の水酸基が硫酸エステル化された目的物を２５■（収
率５５％）得た。

白色粉末 分解１５０−１５２℃ ＩＲ（ＫＢｒ）　：３４５０（叶）、　２９５０．２８
４０（ＣＨ）、　１７３０（エステル）、　　１６５０
．　１５５０（アミド）、　　１２５０゜１２２０ｃｍ
　−’　（３口、） ’ｌ（ＮＭＲ（ＣＯＣ７３−Ｃ０３Ｃ’０）δ：Ｉ、２
６（Ｓ、脂肪酸残基）実施例３ ＧＯ，ｂの硫酸化体の合成： 実施例１と同様にしてＧＯ＋ｂ　１８．７ｍｇから１９
個の水酸基が硫酸エステル化された目的物を１３■（収
率２９％）得た。

白色粉末 分解１５８−１６０℃ ＩＲ（ＫＢｒ）：３４００（ＤＨ）、　　２９００．　
２８４０（ＣＨ）、　　１７４０（：ｒ−ステル）、　
　１６５０．　１５５０（アミド）、　　１２５０゜１
２２０ｃｍ　−’　（ＳＯ，） ＨＮＭＲ（ＣＤ（Ｉ！　、−ＣＤ、ＯＤ）δ：　１．２
６　（ｓ、脂肪酸残基）実施例４ ＧＴｌｂの硫酸化体の合成二 実施例１と同様にして、ＧＴ、ｂ　２１．８■から２２
個の水酸基が硫酸エステル化された目的物を１３■（収
率２５％）得た。

白色粉末 分解１６５−１６８℃ ＩＲ（ＫＢｒ）　＋　３４００　（叶）、　２９００．
２８４０（ＣＨ）、　１７４０（ｆｆ−ステル）、　　
１６５０．　１５５０（アミド）、　　１２５０゜１２
２０ｃｍ−’　（ＳＯ２） ’ＨＮＭＲ（ＣＤＣｊ！　、−ＣＤ、ＯＤ）δ：　１．
２６　（ｓ、脂肪酸残基）試験例１ 抗ＨＩＶ作用の検討： 実施例で得られたガングリオシド誘導体の抗ＨＩＶ活性
を、ＭＴ−４細胞を用いた感染実験系（Ｎａｇｕｍｏ、
　Ｔ　ａｎｃｆ　ｆｌｏｓｈｉｎｏ、　Ｈ；　Ｊｐｎ、
　Ｊ、　ＣａｎｃｅｒＲｅｓ、、　７９．９−１１．（
Ｉ９８８）で検討した。

すなわち、ｌＸ１０３個のＭＴ−４細胞に被検物質を加
え、これにＨＩＶを感染させ、５％Ｃ０２下３７℃で４
日間インキュベートした後ＭＴ−４細胞のスメア−を作
りＨＩＶ感染成立を間接蛍光抗体法で判定した。

その結果を被検物質を添加しなかった場合をコントロー
ルとし、該コントロールとの比較として第１表に示した
。表内の値は％を示す。

第１表 第１表より、本発明化合物には、明らかな抗ＨＩＶ作用
が詔ｔられた。

試験例２ 抗ＨＩＶ作用の検討： 実施例で得られたガングリオシド誘導体の抗ＨＩＶ活性
をＨＩＶ感染細胞とＨＩＶ未感染細胞を混合培養し、形
成された合胞体（Ｓｙｎｃｙｔｉｕｍ）の数を計測する
所謂シンシチウムアッセイ（Ｓｙｎｃｙｔｉｕｍ　Ａｓ
５ａｙ）法により調べた。

即ち、ｌＸｌ０’個のＭａｌｔ−４細胞（Ｊ。

Ｍｉｎｏｗａｄａ　ｅｔ　ａｌ、Ｊ、Ｎａｔｌ　Ｃａｎ
ｃｅｒ　Ｉｎ５ｔ（Ｊ、Ｎ、Ｃ。

１）、　４９．８９１−８９５．１９７２）に各被検物
質を加え、これに予めＨＩＶに感染させたＭｏ１ｔ−４
細胞１．５×１０４個を加え、これを５％ＣＤ□下、３
７℃で一晩インキユベートした後ホルムアルデヒドを＃
濃度５％になるように加えて固定し、形成された合胞体
の個数を数えた。その結果を被検物質を添加しなかった
場合をコントロールとし、第２表に示した。

第２表 本コントロール：９６ 第２表より、本発明化合物は優れた抗ＨＩＶ作用を有し
、また細胞毒性も弱いものであった。

試験例３ 活性部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）の検討： 実施例で得られたガングリオシド誘導体のＡＰＴＴをＡ
ＰＴＴ測定試薬（ブラテリン　プラス・アクティベータ
ー；オルカ゛ノン　テクニカ＠Ｊ）を用いて測定した。

その結果、本発明化合物はすべて１１００ＩＩ／ａｔ’
の濃度でもＡＰＴＴに影響を与えず、血液凝固阻止作用
がなく、また出血傾向もなく、安全であることが確認さ
れた。

以　　上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次の一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ｒ＾１は水素原子又はスルホン酸基を示し、Ｒ
   ＾２及びＲ＾３はそれぞれ水素原子、スルホン酸基又は
   ▲数式、化学式、表等があります▼（式中、Ｒ＾１は前
   記と同じ）を示し、Ｒ＾４は脂肪酸残基を示し、かつＲ
   ＾１の少なくとも１２個以上はスルホン酸基である） で表わされるガングリオシド誘導体。 ２、請求項１記載のガングリオシド誘導体を有効成分と
   して含有することを特徴とする抗ＨＩＶ剤。