JPH0322999A - ヒトパラインフルエンザ４ａ型ウイルス同定用検査薬に用いるｄｎａ断片 - Google Patents
ヒトパラインフルエンザ４ａ型ウイルス同定用検査薬に用いるｄｎａ断片Info
- Publication number
- JPH0322999A JPH0322999A JP1154745A JP15474589A JPH0322999A JP H0322999 A JPH0322999 A JP H0322999A JP 1154745 A JP1154745 A JP 1154745A JP 15474589 A JP15474589 A JP 15474589A JP H0322999 A JPH0322999 A JP H0322999A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- virus
- dna
- rna
- piv
- dna fragment
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 title claims abstract description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 title claims description 14
- 241000712041 Human parainfluenza virus 4a Species 0.000 title abstract description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 9
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 6
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 claims description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 abstract description 24
- 239000000523 sample Substances 0.000 abstract description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 abstract description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 abstract description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 abstract description 5
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 abstract description 3
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 abstract description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 abstract 1
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 abstract 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 27
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 22
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 5
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 5
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004518 RNA Probes Proteins 0.000 description 2
- 239000003391 RNA probe Substances 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N guanidine;isothiocyanic acid Chemical compound N=C=S.NC(N)=N YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N hydrochloric acid Substances Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- 101710186708 Agglutinin Proteins 0.000 description 1
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108091028026 C-DNA Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 101710146024 Horcolin Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 101710189395 Lectin Proteins 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 101710179758 Mannose-specific lectin Proteins 0.000 description 1
- 101710150763 Mannose-specific lectin 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710150745 Mannose-specific lectin 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 208000037065 Subacute sclerosing leukoencephalitis Diseases 0.000 description 1
- 206010042297 Subacute sclerosing panencephalitis Diseases 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 108010058966 bacteriophage T7 induced DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 1
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 150000003278 haem Chemical class 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 229940045641 monobasic sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 1
- 108700004121 sarkosyl Proteins 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940045885 sodium lauroyl sarcosinate Drugs 0.000 description 1
- KSAVQLQVUXSOCR-UHFFFAOYSA-M sodium lauroyl sarcosinate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCC(=O)N(C)CC([O-])=O KSAVQLQVUXSOCR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 125000005287 vanadyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、ヒトパラインフルエンザ４Ａ型ウイルス同定
用検査薬に用いるＤＮＡ断片に間し、より詳しくは、ヒ
トバラインフルエンザ４Ａ型ウィルス（以下、Ｐｌ／−
４Ａと略称する）ヘムアグル子ニンノイラミニダーゼ（
以下、ＨＮと略称する）の遺伝子ＲＮＡに相補性を示す
ＤＮＡ断片に間する． 〔従来の技術及びその問題点〕 従来、ウイルスは、血清学的性状に基づいて同定されて
いる．その主な方法としてエンザイムリンクドイムノソ
ルベントアッセイ法（以下、ＥＬＩＳＡ法と略称する）
、中和反応法、補体結合反応法、血球凝集抑制反応法、
蛍光抗体法、寒天内沈降反応法等があるが、これらいず
れの方法も検体中のウイルスに対する抗体を測定するこ
とにより判定を行うものであって、確度の高い判定を行
うためには、一般的に感染１週問後のウイルス抗体価が
上昇し始める段階で行わなければならず、場合によって
は、さらに数週間後に再測定を行って確認することが必
要であり、従って、発症前及び早期診断が難しいという
問題点がある．通常、ＰＩＶ−４Ａ（７）測定にはＥＬ
ＩＳＡ法が用いられており、この方法は、検体中のＰＩ
Ｖ−４Ａに対する抗体を測定するもので、例えば、ＰＩ
Ｖ−４Ａを固定化したプレートに、被検体を加え反応さ
せた後洗浄し、ざらに抗ＰＩＶ−４Ａ抗体を加え同様に
して反応させ、次いで酵素標識抗体を加えて反応後、発
色させることにより測定するものであるが、この方法も
上記同様発症前及び早期診断が難しいという問題点を有
している．本発明は、上記のような問題点の解決を目的
とするもので、ｆｌＶ−４Ａ感染症の早期診断を可能に
する検査薬に有用なＤＮＡ断片を提供するものである． 〔問題を解決するための手段〕 本発明は、下記［式］、 ［式］ ： ＧＧＧＧＡＡＣＡＣＡＣＴＴＣＴＣＡＧＣ
ＣＣＴＧＡＴＴＧＣＴＣＡＡＧＧＣＣＣＴＴＧＣＡＴＧ
ＴＧＣＡＡＣＣＧＡＧＡＣＡＣＣＣＣＣＣＡＣＡＡＧＣ
ＡＣＣＧＧＡＡＴＡＡＧＡＣＣＴＧＡＣＡＡＣＡＡＡＧ
ＴＡＧＣＡＧＣＣＡＣＣＡＣＧＡＣＣＣＡＡＡＡＡＣ＾
＾ＡＡＴＴＡＡＡＡＧＧＡＴＣＣＧＧＴＡＡＣＡＧＣＣ
ＣＡＴＣ＾＾ＣＣＡＧＣＡＡＴＣＡＴＡＧＡＡＴＣＣＡ
ＡＣＡＡＴＣＣＡＧＡＧＡＧＡＣＧＴＣＡＣＡＴＣＡＡ
ＣＴＣＡＴＣＣＡＣＧＡＡＴＣＴＴＣＧＡＡＧＧＧＡＡ
ＣＡＴＣＣＣＡＧＡＣＡＡＡＡＴＣＡＣＡＧＣＣＣＡＴ
ＴＣＣＣＴＧＡＴＣＡＣＧＧＡＴＡＡＡＣＴＧＡＧＡＡ
ＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＡＡＴＧＣＡＡＧＡＣＴＣＡＣＡ
ＴＧＧＴＡＡＴＡＣＡＣＡＡＡＴＡＣＴＣＡＡＣＣＡＧ
ＧＣＡＡＡＴＴＣＡＡＴＧＧＴＧ＾ＡＡＡＧＡＡＣＡＴ
ＧＧＡＧＡＴＴＡＣＴＡＴＴＴＣＧＡＡＴＴＧＣＡＡＣ
ＣＴＴＡＡＴＡＴＴＡＣＴＴＧＴＴＴＣＡＡＴＡＴＴＴ
ＧＴＧＴＴＡＴＣＧＣＴＣＡＴＡＡＴＴＧＴＡＴＴＡＣ
ＡＧＴＣＡＡＣＡＣＣＧＧＧＧＡＡＴＴＴＧＣＡＡＡＡ
ＣＧＡＴＡＴＣＡＡＴ＾ＴＡＡＴＴＡＧＡＡＡＧＧＡＧ
ＣＴＣＡＡＴＡＣＡＡＴＴＡＴＧＧＡＧＡＡＴＴＴＴＧ
ＡＡ＾ＣＴＡＣＡＴＣＴＡＡＧＴＣＡＣＴＧＴＴＡＡＧ
ＴＧＴＡＴＣＡＡＡＴＣ＾＾ＡＴＣＡＣＴＴＡＣＧＡＴ
ＧＴＡＴＣＡＧＴＡＣＴＴＡＣＴＣＣＴＡＴＡＡＧＡＣ
ＡＡＧＡＡＧＣＴＡＴＴＧＡＡＡＣＡＡＡＣＡＴＣＡＴ
ＴＴＣＡＡＡＡＡＴＡＡＡＡＧＡＴＣＡＴＴＧＣＡＡＡ
ＧＡＴＡＧＡＧＴＡＡＴＴＡＡＡＧＡＡＧＧＡＡＧＣＡ
ＣＴＴＧＣＡＣＡＴＴＧＡＡＴＣＧＣＡＧＣＣＣＴＴＴ
ＧＣＡＴＧＡＴＧＴＣＴＣＴＴＴＴＴＴＡＡＡＴＧＧＧ
ＴＴＣＡＡＴＡＡＡＴＴＣＴＡＴＴＴＣＡＣＡＴＡＴＡ
ＡＡＧＡＴＡＡＴＡＴＧＣＡＡＡＴＴＡＡＧＴＴＴＡＡ
ＡＴＣ＾ＴＴＡＴＴＡＧＡＴＴＡＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴ
ＡＴＴＣＣＡＡＣＴＧＣＴＡＣＡＡＣＴＣＣＣＣＡＣＧ
ＧＡＴＧＣＡＴＴＣＧＡＡＴＴＣＣＡＴＣＡＴＴＣＴＣ
ＣＴＴＡＧＧＴＣＡＡＡＣＣＣＡＴＴＧＧＴＧＴＴＡＴ
ＡＣＣＣＡＴＡＡＴＡＴＡＡＡＣＣＴＡＣＴＡＧＧＡＴ
ＧＴＧＣＡＧＡＣＣＣＴＧＣＡＴＣＴＡＧＣＡＡＴＣＡ
ＡＴＡＴＧＴＡＴＣＡＣＴＡＧＧＡＡＣＣＴＴＡＣＡＡ
ＧＴＣＴＴＡ＾＾ＡＡＴＧＧＧＴＧＡＣＣＣＴＴＡＴＴ
ＴＴＡＡＡＧＴＣＧＡＧＣＡＴＡＧＴＣＡＴＴＡＴＴＴ
ＡＡＡＴＧＡＣＧＧＧＡＧＧＡＡＴＣＧＡＡＡＧＡＧＴ
ＴＧＴＴＣＡＧＴＧＧＴＴＧＣＴＧＴＣＣＣＣＧＡＣＧ
ＧＡＴＧＣＣＴＧＣＧＧＡＡＴＴＧＴＧＴＧＡＣＣＡＴ
ＧＡＣＡＡＡＡＡＡＴＧＡＧＡＣＡＧＡＧＡＡＴＴＴＣ
ＡＡＡＧＡＣＣＴＣ＾＾ＴＴＧＧＣＡＡＣＡＣ＾＾ＴＴ
ＡＣＴＴＡＣＡＴＡＣＡＴＡＴＣＡＴＡＴＡＡＴＧＧＴ
ＡＣＣＡＴＴ＾ＡＡＧＡＣＴＣＧＴＡＴＡＡＴＡＡＡＴ
ＣＣＡＣＣＡＧＧＡＴＣＡＴＣＣＡＧＡＧ＾ＴＴＧＧＧ
ＴＴＣＡＴＡＴＣＧＣＡＣＣＡＧＧＧＧＴＡＧＧＣＴＣ
ＧＧＧＣＣＴＴＴＴＧＴＡＴＧＣＣＡＡＡＴＴＡＣＴＴ
ＡＴＡＴＴＴＣＣＴＴＴＧＴＡＴＧＧＧＧＧＴＣＴＣＡ
ＣＧＧＡＡＡＡＡＴＣＡＧＴＧＡＴＡＣＡＴＡＡＴＡＡ
ＴＣＡＡＴＣＡＧＧＧＡＡＡＴＡＴＴＴＴＴＴＣＣＣＴ
ＡＡＴＴＣＡＡＣＴＡＡＡＴＴＧＣＡＡＴＧＣＣＧＴＡ
ＡＣＡＧＣＡＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡ＾＾ＴＡＡＡＡＧＧ
ＡＧＣＡＡＡ＾ＧＡＴＴＣＡＴＡＣＡＣＡＡＴＡＡＣＴ
ＴＡＣＴＴＣＴＣＡＧＧＧＡＧＡＣＴＴＡＴＡＣＡＧＡ
ＧＴＧＣＡＴＴＴＣＴＧＧＴＴＴＧＴＧＡＴＣＴＡＡＧ
＾ＣＡＡＴＴＴＣＴＴＴＣＴＧＡＡＧＡＴＴＧＴＧＡＡ
ＡＴＣＴＴＡＡＴＴＣＣＴＡＧＴＡＡＴＧＡＴＴＡＣＡ
ＴＧＡＴＧＧＴＣＧＧＴＧＣＡＧＡＧＧＧＴＣＧＡＴＴ
ＡＴＡＴＡＡＣＡＴＴＧＡＧＡＡＣＡＡＣＡＴＡＴＴＴ
ＴＡＴＴＡＴＣＡＧＡＧＡＧＧＡＴＣＣＡＧＣＴＧＧＴ
ＧＧＣＣＴＴＡＴＣＣＧＡＧＣＣＴＣＴＡＴＡＧＡＡＴ
ＣＡＧＧＴＴＡＡＡＣＣＴＴＡＧＴＡＡＧＡＡＡＴＡＴ
ＣＣＴＡＧＡＡＴＡＡＣＴＧＡＡＡＴＴＡＡＡＴＴＴＡ
ＣＡＡＡＡＡＴＴＧＡＡＡＴＣＧＣＣＣＣＡＡＧＡＣＣ
ＡＧＧＣＡＡＣＡＡＡＧＡＴＴＧＴＣＣＡＧＧＡＡＡＴ
ＡＡＧＧＣＴＴＧＣＣＣＡＡＡＡＧＡＡＴＧＴＡＴＡＡ
ＣＧＧＧＡＧＴＣＴＡＣＣＡＡＧＡＴＡＴＡＴＴＧＣＣ
ＡＣＴＡＡＧＴＴＡＴＣＣＣＡＡＴＡＣＴＧＣＡＴＴＴ
ＣＣＡＣＡＣＴＴＡＡＡＡＣＡＡＧＣＧＴＡＴＴＡＴＡ
ＣＡＧＧＴＴＴＴＴＡＴＣＴＴ＾＾ＴＡＡＣＴＣＧＣＴ
ＣＧＡＧＡＧＡＣＧＣＡＡＴＣＣＡＡＣＡＴＴＴＴＡＴ
ＡＣＴＧＣＴＧＡＣＡＡＴＣＴＡＧＡＴＴＡＣＣＡＴＣ
ＡＡＣＡＧＧＡＡＡＧＡＴＴＡＧＧＴＡＡＡＴＴＣＡＡ
ＴＣＴＴＡＣＴＧＣＴＧＧＡＴＡＣＴＣＴＡＣＴＡＣＡ
ＡＣＴＴＧＴＴＴＴ＾＾ＡＣＡＧＡＣＣＡＣＴＡＣＴＧ
ＣＧＡＧＧＴＴＡＴＡＣＴＧＴＣＴＣＴＡＣＡＴＡＡＴ
ＴＧＡＡＧＴＧＧＧＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣＡＴＴＧＧＧ
ＧＡＣＴＴＴＣＡＧＡＴＣＡＣＣＣＴＴＴＴＴＴＴＡＧ
ＣＡＧＣＴＴＡＡＴＡＧＡＣＣＡＧＡＣＴＧＴＴＡＡＴ
ＴＡＡＴＣＡＡＣＡＡＡＧＴＴＡＴＴＣＴＧＴＡＡＴＡ
ＴＡＡＡＣＴＧＡＴＣＴＴＡＴＡＡＧＴＧＡＡＡＡＧＡ
ＴＧＣＣＴＡＴＣＣＡＡＧＧＡＧＧＴＴＧＡＴＡＧＡＣ
ＡＡＡＴＡＧＴＡＡＡＡＧＴＡＧＣＡＡＴＴＧＴＡＡＣ
ＡＡＡＡＣＴＣＴＡＡＧＧＡＡＡＡＡＧＴＡＡＴＴＣＧ
ＡＧＡＡＡＴＡＴＴＡＴＡＧＡＣＴＧＡＣＴＴＣＡＧＡ
ＧＣＡＡＡＣＡＣＡＡＣＡＴＣＧＡＴＣＣＡＴＡＡＴＡ
ＧＴＣＡＡＴＡＴＡＡＴＣＡＡＴＡＡＴＡＣＴＣＴＡＴ
ＧＡＧＡＣＣＴＴＡＣＣＴＡＴＣＡＡＣＡＧＣＡＡＡＡ
ＡＡＣＡＣＡＧＴＣＣＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＡＣＣＣＡ
ＡＣＴＣＧＣＴＣＣＡＴＣＣＴＴＡＡＴＣＡＴＣＣＡＣ
ＴＧＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＴＡＴＡＣＧＡ＾ＧＧＡＣＣ
ＡＴＣＧＧＣＣＡＣＣＧＧＧＴＣＣＡＡＡＣＡＡＴＣＴ
ＡＧＣＡＣＡＡＡＡＡＴＴＣＡＡＡＣＡＡＣＣＧＣＣＡ
ＡＡＣＴＣＴＧＴＴＣＧＧＣＣＴＣＡＡＣＡＡＡＣＡＡ
ＴＣＣＧＣＣＡＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＣＡＴＴＣＣＴＡ
ＴＡＣＣＡＡＣＡＣＡＣＡＡＣＣＡＴＣＣＣＡＴＴＣＣ
ＴＣＡＡＡＡＧＣＡＡＴＴＣＡＡＴＣＣＧＣＧＡＣＣＣ
ＡＡ＾ＧＡＡＧＡＣＴＣＴＣＣＡＣＡＴＡＴＣＣＡＧＣ
ＴＡＡＴＣＣＧＴＣＧＡＴＣＣＧＡＣＡＣＡＴＣＡＴＣ
ＧＴＡＴＣＴＴＴＴＡＡＧＡＡＡＡＡＡＡで表されるＤ
ＮＡ断片を提供することによって、ＰＩＶ−４Ａ感染症
の発症前及び早期診断が難しいという問題点の解決を図
ったものである．本発明によって提供されるＤＮＡ断片
は、Ｐ！Ｖ−４Ａ−ＨＮの遺伝子ＲＮＡに相補性を示す
ので、これをＰ Ｉ Ｖ−４Ａ同定用検査薬に用いた場
合、ＰＩＶ−４Ａの同定を直接行うことができ、従来の
間接的同定法による問題点の解決を可能にしたものであ
る． 本発明における上記〔式］で表されるＤＮＡ断片の製造
方法は、特に制限はなく、常法に従うことができ、例え
ば、 （ａ）Ｐ Ｉ Ｖτ４Ａ感染細胞から得られるｍＲＮＡ
よりｇ４！ｌ１されたｃ ＤＮＡを大腸菌０１つスミド
ベクター等の適当なベクターに導入し大Ｉｌｌ菌にクロ
ーン化させ、 ■ブローブとしてヌクレオカブシドＲＮＡを用いてスク
リーニングを行う方法、 ■ブローブとして上記式で表される塩基配列に基づいて
合成ざれたオリゴヌクレオチドを用いてスクリーニング
を行う方法、 ■Ｐ Ｉ Ｖ−４Ａに対する抗体を用いてスクリーニン
グを行う方法、 等でＰ Ｔ Ｖ−４Ａ − ＨＮ遺伝子をコードするク
ローンを単離し、この単離されたクローンのブラスミド
からインサートＤＮＡを分離する方法、（ｂ）上記［式
コで表されるＰＩＶ−４Ａ−ＨＮの遺伝子ＲＮＡに相補
性を示す塩基配列に基づいて、ホスホアミダイト法（Ｎ
ａｔｕｒｅ、３１０巻、 １０５頁、 １９Ｂ４）に従
って、合成ヌクレオチドを作成する方法、 （ｃ）上記（ａ）及び（ｂ）を併用する方法、等によっ
て製造することができる． 上記方法によって得られた本発明のＤＮＡ断片は、以下
のようにして用いることができる．例えば、上記方法で
得られたＤＮＡ断片は、必要ならば適当な制限酵素（例
えば、ＢａｍＨＩ、Ｘｂａ Ｉ等）で十敗塩基以上にさ
らに切断後、放射性同位元素等で標識して検査薬とし、
この検査薬を、検体（咽頭ｉα等）から抽出したＲＮＡ
を固定化したナイロン膜等と反応後、オートラジオグラ
フィ一等で判定するノーザンハイブリダイゼーション法
（以下、ノーザン法と略称する〉等でＰＩ Ｖ−４Ａの
同定を行うことができる．〔実施例〕 以下、実施例に基づいて本発明をさらに詳細に説明する
． Ｉ ＲＮＡの 牛胎児血清５％を含むイーグル必須培ｌＩ液中で初代サ
ル腎細胞を増殖させた後、この培ｉ液を新たに調整した
アクチノマイシンＤ（２μｓ／ｗｌ）を含むイーグル必
須培ｌＩ液と交換した．次いでＰＩＶ−４Ａ （東芝株
）を接種し、同培養液中で２４時間培養を行なった。ウ
イルス感染培！Ｉ細胞をトリブシン／ＥＤＴＡ混合液で
剥した後、８０００ｒｐｍで１０分間遠心することによ
り細胞を集め、グアニジンイソチオシアネート液（６Ｍ
グアニジンイソチオシアネート、５ｍＭクエン酸ナトリ
ウム、０．１Ｍ２−メルカブトエタノール、０．５％ラ
ウロイルザルコシン酸ナトリウム〉を加え、ホモゲナイ
ザー中で素早く溶解し、２１Ｇ注射針をつけた注射筒に
５回通すことで染色体ＤＮＡをせん断した．得られた繕
胞溶解液を、再度８０００ｒｐｍで遠心し、得られた上
澄液９ｎ＋ｌを、５．７Ｍ塩化セシウム水溶液３ｍｌの
入った別の遠心チューブに重層し、ベックマンロータ−
（Ｂｅｃｋｍａｎ ＳＷ４０Ｔｉ ｒｏｔｏｒ
） にて、 ３７０００ｒｐｍで１８時間１８℃で超
遠心を行い、遠心後ＲＮＡベレットを回収した． 上記のようにして得られるＲＮＡから、オリゴｄＴセル
ローズＴｙｐｅ？（ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ
）社製）を用い．てボリＡ鎖を含むｍＲＮＡ （以下、
ｐ ｏ ｌ ｙ （Ａ＋） ＲＮＡと略称する〕を分離
、精製した． ２ ｃＤＮＡラ ー１−の ｃＤＮＡライブラリーは、岡山・バーグ法に従い合成し
た．すなわち、上記ｐｏｌｙ（Ａ＋）ＲＮＡ４μｇに蒸
留水５μ；を加え、６５℃でｌＯ分間加温した後急冷し
、次にオリゴｄＴプライムドベクター（ｐＵｃ１１Ｂベ
クターのＫｐｎｌサイトにオリゴｄＴを付加したく０６
８〜１．２μｇ／ｌｌｌ））１０μｌ、合成反応液（５
００ｍＭ Ｔｒ１Ｓ一塩酸緩衝液ｐＨ８．３、３００
ｍＭ塩化カリウム、８０ｍＭ塩化マグネシウム、３ｍＭ
ジチオスレイトール）３７ｔｌ、及び、２０ｍＭｄＡＴ
Ｐ，２０ｍＭｄＣＴＰ，２０ｍＭｄＧＴＰ，２０ｍＭｄ
ＴＴＰを各々１μ＋づつ加え、さらに２０ｕｎｉｔｓＲ
Ｎａｓｉｎ，４０ｕｎｉｔｓリバーストランスクリブタ
ーゼを加えた後、蒸留水で全量を３０μ１とし、４２℃
３０分間反応を行い第一鎖ｃＤＮＡを合成した．第一鎖
ｃＤＮＡ合成終了後、ｄＧＴＰ存在下ターミナルデオキ
シヌクレオチジルトランスフエラーゼを用いてｌＯ〜３
０個のｄＧ塩基を付加した。次に制限酵素ＨｉｎｄＨに
よる哨化を行い、ざらにｄＣ塩基鎖を持つリンカーとア
ニール後、大腸菌ライゲースにより閉環状とした。最後
にＲＮａｓｅＨ存在下、ＤＮＡポリメラーゼにより第二
鎖の合成を行い、完全なブラスミドＤＮＡを作成した。
用検査薬に用いるＤＮＡ断片に間し、より詳しくは、ヒ
トバラインフルエンザ４Ａ型ウィルス（以下、Ｐｌ／−
４Ａと略称する）ヘムアグル子ニンノイラミニダーゼ（
以下、ＨＮと略称する）の遺伝子ＲＮＡに相補性を示す
ＤＮＡ断片に間する． 〔従来の技術及びその問題点〕 従来、ウイルスは、血清学的性状に基づいて同定されて
いる．その主な方法としてエンザイムリンクドイムノソ
ルベントアッセイ法（以下、ＥＬＩＳＡ法と略称する）
、中和反応法、補体結合反応法、血球凝集抑制反応法、
蛍光抗体法、寒天内沈降反応法等があるが、これらいず
れの方法も検体中のウイルスに対する抗体を測定するこ
とにより判定を行うものであって、確度の高い判定を行
うためには、一般的に感染１週問後のウイルス抗体価が
上昇し始める段階で行わなければならず、場合によって
は、さらに数週間後に再測定を行って確認することが必
要であり、従って、発症前及び早期診断が難しいという
問題点がある．通常、ＰＩＶ−４Ａ（７）測定にはＥＬ
ＩＳＡ法が用いられており、この方法は、検体中のＰＩ
Ｖ−４Ａに対する抗体を測定するもので、例えば、ＰＩ
Ｖ−４Ａを固定化したプレートに、被検体を加え反応さ
せた後洗浄し、ざらに抗ＰＩＶ−４Ａ抗体を加え同様に
して反応させ、次いで酵素標識抗体を加えて反応後、発
色させることにより測定するものであるが、この方法も
上記同様発症前及び早期診断が難しいという問題点を有
している．本発明は、上記のような問題点の解決を目的
とするもので、ｆｌＶ−４Ａ感染症の早期診断を可能に
する検査薬に有用なＤＮＡ断片を提供するものである． 〔問題を解決するための手段〕 本発明は、下記［式］、 ［式］ ： ＧＧＧＧＡＡＣＡＣＡＣＴＴＣＴＣＡＧＣ
ＣＣＴＧＡＴＴＧＣＴＣＡＡＧＧＣＣＣＴＴＧＣＡＴＧ
ＴＧＣＡＡＣＣＧＡＧＡＣＡＣＣＣＣＣＣＡＣＡＡＧＣ
ＡＣＣＧＧＡＡＴＡＡＧＡＣＣＴＧＡＣＡＡＣＡＡＡＧ
ＴＡＧＣＡＧＣＣＡＣＣＡＣＧＡＣＣＣＡＡＡＡＡＣ＾
＾ＡＡＴＴＡＡＡＡＧＧＡＴＣＣＧＧＴＡＡＣＡＧＣＣ
ＣＡＴＣ＾＾ＣＣＡＧＣＡＡＴＣＡＴＡＧＡＡＴＣＣＡ
ＡＣＡＡＴＣＣＡＧＡＧＡＧＡＣＧＴＣＡＣＡＴＣＡＡ
ＣＴＣＡＴＣＣＡＣＧＡＡＴＣＴＴＣＧＡＡＧＧＧＡＡ
ＣＡＴＣＣＣＡＧＡＣＡＡＡＡＴＣＡＣＡＧＣＣＣＡＴ
ＴＣＣＣＴＧＡＴＣＡＣＧＧＡＴＡＡＡＣＴＧＡＧＡＡ
ＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＡＡＴＧＣＡＡＧＡＣＴＣＡＣＡ
ＴＧＧＴＡＡＴＡＣＡＣＡＡＡＴＡＣＴＣＡＡＣＣＡＧ
ＧＣＡＡＡＴＴＣＡＡＴＧＧＴＧ＾ＡＡＡＧＡＡＣＡＴ
ＧＧＡＧＡＴＴＡＣＴＡＴＴＴＣＧＡＡＴＴＧＣＡＡＣ
ＣＴＴＡＡＴＡＴＴＡＣＴＴＧＴＴＴＣＡＡＴＡＴＴＴ
ＧＴＧＴＴＡＴＣＧＣＴＣＡＴＡＡＴＴＧＴＡＴＴＡＣ
ＡＧＴＣＡＡＣＡＣＣＧＧＧＧＡＡＴＴＴＧＣＡＡＡＡ
ＣＧＡＴＡＴＣＡＡＴ＾ＴＡＡＴＴＡＧＡＡＡＧＧＡＧ
ＣＴＣＡＡＴＡＣＡＡＴＴＡＴＧＧＡＧＡＡＴＴＴＴＧ
ＡＡ＾ＣＴＡＣＡＴＣＴＡＡＧＴＣＡＣＴＧＴＴＡＡＧ
ＴＧＴＡＴＣＡＡＡＴＣ＾＾ＡＴＣＡＣＴＴＡＣＧＡＴ
ＧＴＡＴＣＡＧＴＡＣＴＴＡＣＴＣＣＴＡＴＡＡＧＡＣ
ＡＡＧＡＡＧＣＴＡＴＴＧＡＡＡＣＡＡＡＣＡＴＣＡＴ
ＴＴＣＡＡＡＡＡＴＡＡＡＡＧＡＴＣＡＴＴＧＣＡＡＡ
ＧＡＴＡＧＡＧＴＡＡＴＴＡＡＡＧＡＡＧＧＡＡＧＣＡ
ＣＴＴＧＣＡＣＡＴＴＧＡＡＴＣＧＣＡＧＣＣＣＴＴＴ
ＧＣＡＴＧＡＴＧＴＣＴＣＴＴＴＴＴＴＡＡＡＴＧＧＧ
ＴＴＣＡＡＴＡＡＡＴＴＣＴＡＴＴＴＣＡＣＡＴＡＴＡ
ＡＡＧＡＴＡＡＴＡＴＧＣＡＡＡＴＴＡＡＧＴＴＴＡＡ
ＡＴＣ＾ＴＴＡＴＴＡＧＡＴＴＡＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴ
ＡＴＴＣＣＡＡＣＴＧＣＴＡＣＡＡＣＴＣＣＣＣＡＣＧ
ＧＡＴＧＣＡＴＴＣＧＡＡＴＴＣＣＡＴＣＡＴＴＣＴＣ
ＣＴＴＡＧＧＴＣＡＡＡＣＣＣＡＴＴＧＧＴＧＴＴＡＴ
ＡＣＣＣＡＴＡＡＴＡＴＡＡＡＣＣＴＡＣＴＡＧＧＡＴ
ＧＴＧＣＡＧＡＣＣＣＴＧＣＡＴＣＴＡＧＣＡＡＴＣＡ
ＡＴＡＴＧＴＡＴＣＡＣＴＡＧＧＡＡＣＣＴＴＡＣＡＡ
ＧＴＣＴＴＡ＾＾ＡＡＴＧＧＧＴＧＡＣＣＣＴＴＡＴＴ
ＴＴＡＡＡＧＴＣＧＡＧＣＡＴＡＧＴＣＡＴＴＡＴＴＴ
ＡＡＡＴＧＡＣＧＧＧＡＧＧＡＡＴＣＧＡＡＡＧＡＧＴ
ＴＧＴＴＣＡＧＴＧＧＴＴＧＣＴＧＴＣＣＣＣＧＡＣＧ
ＧＡＴＧＣＣＴＧＣＧＧＡＡＴＴＧＴＧＴＧＡＣＣＡＴ
ＧＡＣＡＡＡＡＡＡＴＧＡＧＡＣＡＧＡＧＡＡＴＴＴＣ
ＡＡＡＧＡＣＣＴＣ＾＾ＴＴＧＧＣＡＡＣＡＣ＾＾ＴＴ
ＡＣＴＴＡＣＡＴＡＣＡＴＡＴＣＡＴＡＴＡＡＴＧＧＴ
ＡＣＣＡＴＴ＾ＡＡＧＡＣＴＣＧＴＡＴＡＡＴＡＡＡＴ
ＣＣＡＣＣＡＧＧＡＴＣＡＴＣＣＡＧＡＧ＾ＴＴＧＧＧ
ＴＴＣＡＴＡＴＣＧＣＡＣＣＡＧＧＧＧＴＡＧＧＣＴＣ
ＧＧＧＣＣＴＴＴＴＧＴＡＴＧＣＣＡＡＡＴＴＡＣＴＴ
ＡＴＡＴＴＴＣＣＴＴＴＧＴＡＴＧＧＧＧＧＴＣＴＣＡ
ＣＧＧＡＡＡＡＡＴＣＡＧＴＧＡＴＡＣＡＴＡＡＴＡＡ
ＴＣＡＡＴＣＡＧＧＧＡＡＡＴＡＴＴＴＴＴＴＣＣＣＴ
ＡＡＴＴＣＡＡＣＴＡＡＡＴＴＧＣＡＡＴＧＣＣＧＴＡ
ＡＣＡＧＣＡＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡ＾＾ＴＡＡＡＡＧＧ
ＡＧＣＡＡＡ＾ＧＡＴＴＣＡＴＡＣＡＣＡＡＴＡＡＣＴ
ＴＡＣＴＴＣＴＣＡＧＧＧＡＧＡＣＴＴＡＴＡＣＡＧＡ
ＧＴＧＣＡＴＴＴＣＴＧＧＴＴＴＧＴＧＡＴＣＴＡＡＧ
＾ＣＡＡＴＴＴＣＴＴＴＣＴＧＡＡＧＡＴＴＧＴＧＡＡ
ＡＴＣＴＴＡＡＴＴＣＣＴＡＧＴＡＡＴＧＡＴＴＡＣＡ
ＴＧＡＴＧＧＴＣＧＧＴＧＣＡＧＡＧＧＧＴＣＧＡＴＴ
ＡＴＡＴＡＡＣＡＴＴＧＡＧＡＡＣＡＡＣＡＴＡＴＴＴ
ＴＡＴＴＡＴＣＡＧＡＧＡＧＧＡＴＣＣＡＧＣＴＧＧＴ
ＧＧＣＣＴＴＡＴＣＣＧＡＧＣＣＴＣＴＡＴＡＧＡＡＴ
ＣＡＧＧＴＴＡＡＡＣＣＴＴＡＧＴＡＡＧＡＡＡＴＡＴ
ＣＣＴＡＧＡＡＴＡＡＣＴＧＡＡＡＴＴＡＡＡＴＴＴＡ
ＣＡＡＡＡＡＴＴＧＡＡＡＴＣＧＣＣＣＣＡＡＧＡＣＣ
ＡＧＧＣＡＡＣＡＡＡＧＡＴＴＧＴＣＣＡＧＧＡＡＡＴ
ＡＡＧＧＣＴＴＧＣＣＣＡＡＡＡＧＡＡＴＧＴＡＴＡＡ
ＣＧＧＧＡＧＴＣＴＡＣＣＡＡＧＡＴＡＴＡＴＴＧＣＣ
ＡＣＴＡＡＧＴＴＡＴＣＣＣＡＡＴＡＣＴＧＣＡＴＴＴ
ＣＣＡＣＡＣＴＴＡＡＡＡＣＡＡＧＣＧＴＡＴＴＡＴＡ
ＣＡＧＧＴＴＴＴＴＡＴＣＴＴ＾＾ＴＡＡＣＴＣＧＣＴ
ＣＧＡＧＡＧＡＣＧＣＡＡＴＣＣＡＡＣＡＴＴＴＴＡＴ
ＡＣＴＧＣＴＧＡＣＡＡＴＣＴＡＧＡＴＴＡＣＣＡＴＣ
ＡＡＣＡＧＧＡＡＡＧＡＴＴＡＧＧＴＡＡＡＴＴＣＡＡ
ＴＣＴＴＡＣＴＧＣＴＧＧＡＴＡＣＴＣＴＡＣＴＡＣＡ
ＡＣＴＴＧＴＴＴＴ＾＾ＡＣＡＧＡＣＣＡＣＴＡＣＴＧ
ＣＧＡＧＧＴＴＡＴＡＣＴＧＴＣＴＣＴＡＣＡＴＡＡＴ
ＴＧＡＡＧＴＧＧＧＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣＡＴＴＧＧＧ
ＧＡＣＴＴＴＣＡＧＡＴＣＡＣＣＣＴＴＴＴＴＴＴＡＧ
ＣＡＧＣＴＴＡＡＴＡＧＡＣＣＡＧＡＣＴＧＴＴＡＡＴ
ＴＡＡＴＣＡＡＣＡＡＡＧＴＴＡＴＴＣＴＧＴＡＡＴＡ
ＴＡＡＡＣＴＧＡＴＣＴＴＡＴＡＡＧＴＧＡＡＡＡＧＡ
ＴＧＣＣＴＡＴＣＣＡＡＧＧＡＧＧＴＴＧＡＴＡＧＡＣ
ＡＡＡＴＡＧＴＡＡＡＡＧＴＡＧＣＡＡＴＴＧＴＡＡＣ
ＡＡＡＡＣＴＣＴＡＡＧＧＡＡＡＡＡＧＴＡＡＴＴＣＧ
ＡＧＡＡＡＴＡＴＴＡＴＡＧＡＣＴＧＡＣＴＴＣＡＧＡ
ＧＣＡＡＡＣＡＣＡＡＣＡＴＣＧＡＴＣＣＡＴＡＡＴＡ
ＧＴＣＡＡＴＡＴＡＡＴＣＡＡＴＡＡＴＡＣＴＣＴＡＴ
ＧＡＧＡＣＣＴＴＡＣＣＴＡＴＣＡＡＣＡＧＣＡＡＡＡ
ＡＡＣＡＣＡＧＴＣＣＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＡＣＣＣＡ
ＡＣＴＣＧＣＴＣＣＡＴＣＣＴＴＡＡＴＣＡＴＣＣＡＣ
ＴＧＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＴＡＴＡＣＧＡ＾ＧＧＡＣＣ
ＡＴＣＧＧＣＣＡＣＣＧＧＧＴＣＣＡＡＡＣＡＡＴＣＴ
ＡＧＣＡＣＡＡＡＡＡＴＴＣＡＡＡＣＡＡＣＣＧＣＣＡ
ＡＡＣＴＣＴＧＴＴＣＧＧＣＣＴＣＡＡＣＡＡＡＣＡＡ
ＴＣＣＧＣＣＡＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＣＡＴＴＣＣＴＡ
ＴＡＣＣＡＡＣＡＣＡＣＡＡＣＣＡＴＣＣＣＡＴＴＣＣ
ＴＣＡＡＡＡＧＣＡＡＴＴＣＡＡＴＣＣＧＣＧＡＣＣＣ
ＡＡ＾ＧＡＡＧＡＣＴＣＴＣＣＡＣＡＴＡＴＣＣＡＧＣ
ＴＡＡＴＣＣＧＴＣＧＡＴＣＣＧＡＣＡＣＡＴＣＡＴＣ
ＧＴＡＴＣＴＴＴＴＡＡＧＡＡＡＡＡＡＡで表されるＤ
ＮＡ断片を提供することによって、ＰＩＶ−４Ａ感染症
の発症前及び早期診断が難しいという問題点の解決を図
ったものである．本発明によって提供されるＤＮＡ断片
は、Ｐ！Ｖ−４Ａ−ＨＮの遺伝子ＲＮＡに相補性を示す
ので、これをＰ Ｉ Ｖ−４Ａ同定用検査薬に用いた場
合、ＰＩＶ−４Ａの同定を直接行うことができ、従来の
間接的同定法による問題点の解決を可能にしたものであ
る． 本発明における上記〔式］で表されるＤＮＡ断片の製造
方法は、特に制限はなく、常法に従うことができ、例え
ば、 （ａ）Ｐ Ｉ Ｖτ４Ａ感染細胞から得られるｍＲＮＡ
よりｇ４！ｌ１されたｃ ＤＮＡを大腸菌０１つスミド
ベクター等の適当なベクターに導入し大Ｉｌｌ菌にクロ
ーン化させ、 ■ブローブとしてヌクレオカブシドＲＮＡを用いてスク
リーニングを行う方法、 ■ブローブとして上記式で表される塩基配列に基づいて
合成ざれたオリゴヌクレオチドを用いてスクリーニング
を行う方法、 ■Ｐ Ｉ Ｖ−４Ａに対する抗体を用いてスクリーニン
グを行う方法、 等でＰ Ｔ Ｖ−４Ａ − ＨＮ遺伝子をコードするク
ローンを単離し、この単離されたクローンのブラスミド
からインサートＤＮＡを分離する方法、（ｂ）上記［式
コで表されるＰＩＶ−４Ａ−ＨＮの遺伝子ＲＮＡに相補
性を示す塩基配列に基づいて、ホスホアミダイト法（Ｎ
ａｔｕｒｅ、３１０巻、 １０５頁、 １９Ｂ４）に従
って、合成ヌクレオチドを作成する方法、 （ｃ）上記（ａ）及び（ｂ）を併用する方法、等によっ
て製造することができる． 上記方法によって得られた本発明のＤＮＡ断片は、以下
のようにして用いることができる．例えば、上記方法で
得られたＤＮＡ断片は、必要ならば適当な制限酵素（例
えば、ＢａｍＨＩ、Ｘｂａ Ｉ等）で十敗塩基以上にさ
らに切断後、放射性同位元素等で標識して検査薬とし、
この検査薬を、検体（咽頭ｉα等）から抽出したＲＮＡ
を固定化したナイロン膜等と反応後、オートラジオグラ
フィ一等で判定するノーザンハイブリダイゼーション法
（以下、ノーザン法と略称する〉等でＰＩ Ｖ−４Ａの
同定を行うことができる．〔実施例〕 以下、実施例に基づいて本発明をさらに詳細に説明する
． Ｉ ＲＮＡの 牛胎児血清５％を含むイーグル必須培ｌＩ液中で初代サ
ル腎細胞を増殖させた後、この培ｉ液を新たに調整した
アクチノマイシンＤ（２μｓ／ｗｌ）を含むイーグル必
須培ｌＩ液と交換した．次いでＰＩＶ−４Ａ （東芝株
）を接種し、同培養液中で２４時間培養を行なった。ウ
イルス感染培！Ｉ細胞をトリブシン／ＥＤＴＡ混合液で
剥した後、８０００ｒｐｍで１０分間遠心することによ
り細胞を集め、グアニジンイソチオシアネート液（６Ｍ
グアニジンイソチオシアネート、５ｍＭクエン酸ナトリ
ウム、０．１Ｍ２−メルカブトエタノール、０．５％ラ
ウロイルザルコシン酸ナトリウム〉を加え、ホモゲナイ
ザー中で素早く溶解し、２１Ｇ注射針をつけた注射筒に
５回通すことで染色体ＤＮＡをせん断した．得られた繕
胞溶解液を、再度８０００ｒｐｍで遠心し、得られた上
澄液９ｎ＋ｌを、５．７Ｍ塩化セシウム水溶液３ｍｌの
入った別の遠心チューブに重層し、ベックマンロータ−
（Ｂｅｃｋｍａｎ ＳＷ４０Ｔｉ ｒｏｔｏｒ
） にて、 ３７０００ｒｐｍで１８時間１８℃で超
遠心を行い、遠心後ＲＮＡベレットを回収した． 上記のようにして得られるＲＮＡから、オリゴｄＴセル
ローズＴｙｐｅ？（ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ
）社製）を用い．てボリＡ鎖を含むｍＲＮＡ （以下、
ｐ ｏ ｌ ｙ （Ａ＋） ＲＮＡと略称する〕を分離
、精製した． ２ ｃＤＮＡラ ー１−の ｃＤＮＡライブラリーは、岡山・バーグ法に従い合成し
た．すなわち、上記ｐｏｌｙ（Ａ＋）ＲＮＡ４μｇに蒸
留水５μ；を加え、６５℃でｌＯ分間加温した後急冷し
、次にオリゴｄＴプライムドベクター（ｐＵｃ１１Ｂベ
クターのＫｐｎｌサイトにオリゴｄＴを付加したく０６
８〜１．２μｇ／ｌｌｌ））１０μｌ、合成反応液（５
００ｍＭ Ｔｒ１Ｓ一塩酸緩衝液ｐＨ８．３、３００
ｍＭ塩化カリウム、８０ｍＭ塩化マグネシウム、３ｍＭ
ジチオスレイトール）３７ｔｌ、及び、２０ｍＭｄＡＴ
Ｐ，２０ｍＭｄＣＴＰ，２０ｍＭｄＧＴＰ，２０ｍＭｄ
ＴＴＰを各々１μ＋づつ加え、さらに２０ｕｎｉｔｓＲ
Ｎａｓｉｎ，４０ｕｎｉｔｓリバーストランスクリブタ
ーゼを加えた後、蒸留水で全量を３０μ１とし、４２℃
３０分間反応を行い第一鎖ｃＤＮＡを合成した．第一鎖
ｃＤＮＡ合成終了後、ｄＧＴＰ存在下ターミナルデオキ
シヌクレオチジルトランスフエラーゼを用いてｌＯ〜３
０個のｄＧ塩基を付加した。次に制限酵素ＨｉｎｄＨに
よる哨化を行い、ざらにｄＣ塩基鎖を持つリンカーとア
ニール後、大腸菌ライゲースにより閉環状とした。最後
にＲＮａｓｅＨ存在下、ＤＮＡポリメラーゼにより第二
鎖の合成を行い、完全なブラスミドＤＮＡを作成した。
次に塩化カルシウム処理を施すことにより得られるコン
ペテント細胞（ＤＨ！）１００〜２００μ１に、０．４
Ｍ塩化マグネシウム／０．１Ｍ塩化カルシウムの混合液
ｌＯμ１、及び、上記ＤＮＡ０．０２μｓを加え、０℃
で４０分間次いで４２℃で９０秒間放置し、次に培！Ｉ
液（バクトトリブトン１０ｇ、イーストイクストラクト
５ｇ， 塩化ナトリウム５ｇｔｔｌ０００ｍｌの蒸留
水に溶解した溶液Ｎ．５ｍｌを加え、３７℃で４０分間
放置することにより形質転換細胞を得た。
ペテント細胞（ＤＨ！）１００〜２００μ１に、０．４
Ｍ塩化マグネシウム／０．１Ｍ塩化カルシウムの混合液
ｌＯμ１、及び、上記ＤＮＡ０．０２μｓを加え、０℃
で４０分間次いで４２℃で９０秒間放置し、次に培！Ｉ
液（バクトトリブトン１０ｇ、イーストイクストラクト
５ｇ， 塩化ナトリウム５ｇｔｔｌ０００ｍｌの蒸留
水に溶解した溶液Ｎ．５ｍｌを加え、３７℃で４０分間
放置することにより形質転換細胞を得た。
上記により２００μ１のコンペテント細胞（ＤＨ１）に
、０．０２μｇのブラスミドＤＮＡを導入することによ
り、アンビシリン存在下で１５００個の独立したクロー
ンを得た． ３ レ ブシ ＲＮＡ ロ一 のＰＩＶ−４Ａ
感染初代サル腎細胞に、０．６％ノニデットＰ−４０、
１０ｍＭバナジルリポヌクレオチド複合体を含む溶液（
０．１５Ｍ塩化ナトリウム、０．０５ＭＴｒｉｓ一塩酸
緩衝液）を加え、水中で１時間ビペティングによる可溶
化を行い、８０００ｒｐｍでｌＯ分間遠心した．次いで
塩化セシウムの４０％水溶液、３０％水溶液、２５％水
溶液の各々１ｍｌ、２ ．５ｇｌ， １ ｍｌをこの順
に重層した遠心チューブに、上記遠心で得られた上澄液
９ｍ１をさらに重層し、ベックマンロータ−ＳＷ４ ０
Ｔ１にて、３７０００ｒｐｍ，１８時間１６℃で平衡密
度勾配遠心を行った．遠心後、３０％の塩化セシウム水
溶液層に生じたウイルスのヌクレオカブシドバンドを回
収した．次に０．１ＸＳＤＳ及びブロテイナーゼＫ （
２ ．５ｍｇ／ｍｌ）を加え、５６”ＣＩ５分間蛋白
分解を行った後、フェノール及びフェノール／クロロホ
ルム混液で処理を行い、ヌクレオカブシドＲＮＡを得ｋ
．得られたヌクレオカブシドＲＮＡに５０ｍＭＴｒｉｓ
−塩酸緩衝液ｐＨ９．７を加え、９５℃１０分間加温し
た後、室温まで徐々に冷やした。次にこのＲ Ｎ Ａ
？Ｊ液２０μＩに緩衝液（２ ５ ０ｍＭＴ ｒ ｉ
ｓ一塩酸、５０ｍＭ塩化マグネシウム、２５ｍＭＤＴＴ
，７．５ｍＭスベルミン、５００ｍＭ塩化カリウム）１
０μ１、及び’２ＰＡＴＰ（１００μＣｉ／６００ｐＭ
）３μ１、Ｔ ４ − Ｄ Ｎ Ａ力イネース２ｕｎ
ｉ ｔ ｓを加えた後、蒸留水で全量を５０μｌとし、
３７℃で１時間反応させヌクレオカブシドＲＮＡブロー
ブを得た。
、０．０２μｇのブラスミドＤＮＡを導入することによ
り、アンビシリン存在下で１５００個の独立したクロー
ンを得た． ３ レ ブシ ＲＮＡ ロ一 のＰＩＶ−４Ａ
感染初代サル腎細胞に、０．６％ノニデットＰ−４０、
１０ｍＭバナジルリポヌクレオチド複合体を含む溶液（
０．１５Ｍ塩化ナトリウム、０．０５ＭＴｒｉｓ一塩酸
緩衝液）を加え、水中で１時間ビペティングによる可溶
化を行い、８０００ｒｐｍでｌＯ分間遠心した．次いで
塩化セシウムの４０％水溶液、３０％水溶液、２５％水
溶液の各々１ｍｌ、２ ．５ｇｌ， １ ｍｌをこの順
に重層した遠心チューブに、上記遠心で得られた上澄液
９ｍ１をさらに重層し、ベックマンロータ−ＳＷ４ ０
Ｔ１にて、３７０００ｒｐｍ，１８時間１６℃で平衡密
度勾配遠心を行った．遠心後、３０％の塩化セシウム水
溶液層に生じたウイルスのヌクレオカブシドバンドを回
収した．次に０．１ＸＳＤＳ及びブロテイナーゼＫ （
２ ．５ｍｇ／ｍｌ）を加え、５６”ＣＩ５分間蛋白
分解を行った後、フェノール及びフェノール／クロロホ
ルム混液で処理を行い、ヌクレオカブシドＲＮＡを得ｋ
．得られたヌクレオカブシドＲＮＡに５０ｍＭＴｒｉｓ
−塩酸緩衝液ｐＨ９．７を加え、９５℃１０分間加温し
た後、室温まで徐々に冷やした。次にこのＲ Ｎ Ａ
？Ｊ液２０μＩに緩衝液（２ ５ ０ｍＭＴ ｒ ｉ
ｓ一塩酸、５０ｍＭ塩化マグネシウム、２５ｍＭＤＴＴ
，７．５ｍＭスベルミン、５００ｍＭ塩化カリウム）１
０μ１、及び’２ＰＡＴＰ（１００μＣｉ／６００ｐＭ
）３μ１、Ｔ ４ − Ｄ Ｎ Ａ力イネース２ｕｎ
ｉ ｔ ｓを加えた後、蒸留水で全量を５０μｌとし、
３７℃で１時間反応させヌクレオカブシドＲＮＡブロー
ブを得た。
４ コロニーハ ブリ ゼー・゛ヨン上記の形質転換
細胞１００〜２００μｌを、アンビシリン（１２０μｓ
／ｎｌ）を含む１５ｃｍの寒天プレー｝（１０ｇバクト
トリブトン、５ｇイーストイクストラクト、５ｇ塩化ナ
トリウム、 １５ｇアガーを加え蒸留水で全量を１００
０ｍｌとした）に蒔き、１２時間３７℃で培養した。ニ
トロセルロース膜に生じたコロニーを写し取り、３７℃
で６時間培養した．次にこの膜を、０．５Ｎ水酸化ナト
リウム／１．５Ｍ塩化ナトリウム混合液でｌＯ分間処理
し、さらに１．５Ｍ塩化ナトリウムを含む０．５ＭＴｒ
ｉｓ−塩酸緩衝ＭｐＨ８．０に１０分間置いた後、０．
３Ｍ塩化ナトリウム／０．０３Ｍクエン酸ナトリウム混
合液中で５分間リンスした．リンス後、膜を風乾し、８
０℃で１時間吸引しなからベーキングを行うことにより
ＤＮＡを膜に固定した． このようにして得られた膜５枚当りに、変性鮭Ｒ ＮＡ
（ ｔ ｍ８／＋Ｉ）ｔ ｍｌ、ＳＳＰＥＩＩ （３
．６Ｍ塩化ナトリウム、２００ｍＭ第一りん酸ナトリウ
ム、２０ｍＭＥＤＴＡ）７．５ｍｌ、デンハード液（２
％ＢＳＡ．．２％Ｆｉｃｏｌｌ，２％ポリビニルビロリ
ドン）１．２５ｍｌ、 １０％ＳＤＳ１．２５慣１から
なるプレハイブリダイゼーション液を加え、４２’ＣＩ
２時間反応させ、次に新たに調製した上記ブレハイブリ
ダイゼーション液に上記ヌクレオカブシドＲＮＡブロー
ブを、５００万Ｃｉ／ｓｏｌとなるように加え、４２℃
で１８時間反応を行った。反応終了後、０．１％ＳＤＳ
を含む２０倍希釈のＳＳＰＥ液中で４２℃５分間２回洗
浄し、次に０．１％ＳＤＳを含む２００倍希釈のＳＳＰ
Ｅ液中で４２℃１５分間２回洗浄を行った．洗浄終了後
、膜を風乾し、Ｘ線フィルム（ＲＸ５、コッダク社製）
を用いて、−８０℃１２時間オートラヂオグラフィーを
行い、数個の陽性クローンを得た．ＯＬＬニヱ之皿 上記の陽性クローンを用いてノーザン法を行った。すな
わち、前記（１）の方法で得られたＰ Ｉ Ｖ−４Ａ感
染細胞由来１） ０ １ ｙ（Ａ＋） ＲＮＡ、ウイル
ス非感染細胞由来ｐ ｏ １ ｙ （Ａ＋） ＲＮＡ及
びｒ ＲＮＡマーカーを、各々１．５％アガロースゲル
中で電ス泳動後、ナイロン膜（Ｈｙｂｏｎｄ−Ｎ１
アマシャム社！！）に転写し、風乾後ＵＶ照射をするこ
とによりＲＮＡをナイロン膜に共有結合させ、次に上記
の各陽性クローンをブローブとして各々ハイブリダイゼ
ーションを行った。
細胞１００〜２００μｌを、アンビシリン（１２０μｓ
／ｎｌ）を含む１５ｃｍの寒天プレー｝（１０ｇバクト
トリブトン、５ｇイーストイクストラクト、５ｇ塩化ナ
トリウム、 １５ｇアガーを加え蒸留水で全量を１００
０ｍｌとした）に蒔き、１２時間３７℃で培養した。ニ
トロセルロース膜に生じたコロニーを写し取り、３７℃
で６時間培養した．次にこの膜を、０．５Ｎ水酸化ナト
リウム／１．５Ｍ塩化ナトリウム混合液でｌＯ分間処理
し、さらに１．５Ｍ塩化ナトリウムを含む０．５ＭＴｒ
ｉｓ−塩酸緩衝ＭｐＨ８．０に１０分間置いた後、０．
３Ｍ塩化ナトリウム／０．０３Ｍクエン酸ナトリウム混
合液中で５分間リンスした．リンス後、膜を風乾し、８
０℃で１時間吸引しなからベーキングを行うことにより
ＤＮＡを膜に固定した． このようにして得られた膜５枚当りに、変性鮭Ｒ ＮＡ
（ ｔ ｍ８／＋Ｉ）ｔ ｍｌ、ＳＳＰＥＩＩ （３
．６Ｍ塩化ナトリウム、２００ｍＭ第一りん酸ナトリウ
ム、２０ｍＭＥＤＴＡ）７．５ｍｌ、デンハード液（２
％ＢＳＡ．．２％Ｆｉｃｏｌｌ，２％ポリビニルビロリ
ドン）１．２５ｍｌ、 １０％ＳＤＳ１．２５慣１から
なるプレハイブリダイゼーション液を加え、４２’ＣＩ
２時間反応させ、次に新たに調製した上記ブレハイブリ
ダイゼーション液に上記ヌクレオカブシドＲＮＡブロー
ブを、５００万Ｃｉ／ｓｏｌとなるように加え、４２℃
で１８時間反応を行った。反応終了後、０．１％ＳＤＳ
を含む２０倍希釈のＳＳＰＥ液中で４２℃５分間２回洗
浄し、次に０．１％ＳＤＳを含む２００倍希釈のＳＳＰ
Ｅ液中で４２℃１５分間２回洗浄を行った．洗浄終了後
、膜を風乾し、Ｘ線フィルム（ＲＸ５、コッダク社製）
を用いて、−８０℃１２時間オートラヂオグラフィーを
行い、数個の陽性クローンを得た．ＯＬＬニヱ之皿 上記の陽性クローンを用いてノーザン法を行った。すな
わち、前記（１）の方法で得られたＰ Ｉ Ｖ−４Ａ感
染細胞由来１） ０ １ ｙ（Ａ＋） ＲＮＡ、ウイル
ス非感染細胞由来ｐ ｏ １ ｙ （Ａ＋） ＲＮＡ及
びｒ ＲＮＡマーカーを、各々１．５％アガロースゲル
中で電ス泳動後、ナイロン膜（Ｈｙｂｏｎｄ−Ｎ１
アマシャム社！！）に転写し、風乾後ＵＶ照射をするこ
とによりＲＮＡをナイロン膜に共有結合させ、次に上記
の各陽性クローンをブローブとして各々ハイブリダイゼ
ーションを行った。
即ち、ナイロン膜を上記ブレパイプリダイゼーション液
中で４２℃１２時間反応させ、次に各陽性クローンから
作られた３２ｐでラベルされたブロープを１００万Ｃｉ
／ｍｌとなるようにブレハイブリダイゼーション液に加
え、４２℃１８時間反応させた．反応終了後、上記（４
）と同様に洗浄を行い、Ｘ線フィルムを用いてオートラ
ジオグラフィーを行い、その結果２６００’ｂａｓｅの
位置にハイツリダイズするクローンを１個得た。このク
ローンをｐＭ４Ｈと命名しｋ． なお、各陽性クローンのブロープは、各クローンを｝｛
ｉｎｄＩＩＩ及びＥｃｏＲＩで消化後、低融点アガロー
スを用いた電気泳勤によりインサートＤＮＡを分離し、
抽出後、３２ＰｄＣＴＰを用いたランダムプライムラベ
ルにより得た． 上記（５）で得られたクローンｐＭ４Ｈを種々の制限酵
素で切断して、その制限酵素地図を作成し、第１図にそ
の結果を示した．図面において１及び３はベクターＤＮ
Ａであり、２はインサー｝ＤＮＡで本発明のＤＮＡ断片
である． 第１図にしたがって各制限酵素で切断後、得られたフラ
グメントをブラスミドｐＵｃ１１Ｂのマルチクローニン
グサイトに各々導入し、ＳＥＱＵＥＮＡＳＥ”キット（
東洋紡社製）を用いてシークエンスを行った．又、一部
は、キロシークエンス用デレーションキット（宝酒造社
！１）を用いてデレーションミュータントを作成し、シ
ークエンスを行い塩基配列を決定した。
中で４２℃１２時間反応させ、次に各陽性クローンから
作られた３２ｐでラベルされたブロープを１００万Ｃｉ
／ｍｌとなるようにブレハイブリダイゼーション液に加
え、４２℃１８時間反応させた．反応終了後、上記（４
）と同様に洗浄を行い、Ｘ線フィルムを用いてオートラ
ジオグラフィーを行い、その結果２６００’ｂａｓｅの
位置にハイツリダイズするクローンを１個得た。このク
ローンをｐＭ４Ｈと命名しｋ． なお、各陽性クローンのブロープは、各クローンを｝｛
ｉｎｄＩＩＩ及びＥｃｏＲＩで消化後、低融点アガロー
スを用いた電気泳勤によりインサートＤＮＡを分離し、
抽出後、３２ＰｄＣＴＰを用いたランダムプライムラベ
ルにより得た． 上記（５）で得られたクローンｐＭ４Ｈを種々の制限酵
素で切断して、その制限酵素地図を作成し、第１図にそ
の結果を示した．図面において１及び３はベクターＤＮ
Ａであり、２はインサー｝ＤＮＡで本発明のＤＮＡ断片
である． 第１図にしたがって各制限酵素で切断後、得られたフラ
グメントをブラスミドｐＵｃ１１Ｂのマルチクローニン
グサイトに各々導入し、ＳＥＱＵＥＮＡＳＥ”キット（
東洋紡社製）を用いてシークエンスを行った．又、一部
は、キロシークエンス用デレーションキット（宝酒造社
！１）を用いてデレーションミュータントを作成し、シ
ークエンスを行い塩基配列を決定した。
その結果は、前記［式］に示す通りであった．７
へ（Ｄ ＰＩＶ−４Ａの上記（４）で得られた
ｐＭ４Ｈクローンを、ＢａｍＨｌで切断後、低融点アガ
ロースを用いた電ス泳勤によりインサー｝ＤＮＡの一部
を分離、抽出し、１２ｐを用いたランダムプライムラベ
リングによりプローベを作成した。次に、前記（１）の
方法で得られたＰＩＶ−４Ａ感染細胞由来ＲＮＡ、ウイ
ルス非感染細胞由来ＲＮＡｌｉ：０．３５μｇづつナイ
ロン膜にプロットした後、風乾、ＵＶ照射、以降の処理
は上記（５）のノーザン法と全く同様にして反応させオ
ートラジオグラフィーを行った。その結果、第２図の１
で示すようにＰ Ｉ Ｖ−４Ａ感染細胞由来ＲＮＡをプ
ロットした部分に反応が認められ、Ｐ Ｉ Ｖ−４Ａに
感染していることが確認された。
へ（Ｄ ＰＩＶ−４Ａの上記（４）で得られた
ｐＭ４Ｈクローンを、ＢａｍＨｌで切断後、低融点アガ
ロースを用いた電ス泳勤によりインサー｝ＤＮＡの一部
を分離、抽出し、１２ｐを用いたランダムプライムラベ
リングによりプローベを作成した。次に、前記（１）の
方法で得られたＰＩＶ−４Ａ感染細胞由来ＲＮＡ、ウイ
ルス非感染細胞由来ＲＮＡｌｉ：０．３５μｇづつナイ
ロン膜にプロットした後、風乾、ＵＶ照射、以降の処理
は上記（５）のノーザン法と全く同様にして反応させオ
ートラジオグラフィーを行った。その結果、第２図の１
で示すようにＰ Ｉ Ｖ−４Ａ感染細胞由来ＲＮＡをプ
ロットした部分に反応が認められ、Ｐ Ｉ Ｖ−４Ａに
感染していることが確認された。
これに対して、ウイルス非感染鞠胞由来ＲＮＡをプロッ
トした部分（第２図の２で示す部分）には反応が全く認
められなかった． 〔発明の効果〕 本発明によって提供される、前記［式］で表さｔ’Ｌる
ＤＮＡ断片は、ＰＩＶ−４Ａ−ＨＮの遺伝子ＲＮＡに特
異的に相補性を示すので、Ｐ Ｉ Ｖ−４Ａ感染症の早
期診断の検査薬に極めて有用に用いることができる．
トした部分（第２図の２で示す部分）には反応が全く認
められなかった． 〔発明の効果〕 本発明によって提供される、前記［式］で表さｔ’Ｌる
ＤＮＡ断片は、ＰＩＶ−４Ａ−ＨＮの遺伝子ＲＮＡに特
異的に相補性を示すので、Ｐ Ｉ Ｖ−４Ａ感染症の早
期診断の検査薬に極めて有用に用いることができる．
第１図は、上記［式］で表されるＰ Ｉ Ｖ−４Ａ・Ｈ
Ｎ遺伝子に相補性を示すＤＮＡ （ｐＭ４Ｈ）のｃＤＮ
Ａ領域の制限酵素地図、第２図はＰＩＶ−４Ａによる感
染及び非感染の判定結果である．ｌ及び３・・・・・・
ベクターＤＮＡ，２●●●●●◆インサー｝ＤＮＡ， ？■■ ■ 払 ￥１ｒｉＪ ２６Ｋｂ
Ｎ遺伝子に相補性を示すＤＮＡ （ｐＭ４Ｈ）のｃＤＮ
Ａ領域の制限酵素地図、第２図はＰＩＶ−４Ａによる感
染及び非感染の判定結果である．ｌ及び３・・・・・・
ベクターＤＮＡ，２●●●●●◆インサー｝ＤＮＡ， ？■■ ■ 払 ￥１ｒｉＪ ２６Ｋｂ
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 下記［式］で表わされるヒトパラインフルエンザ４Ａ型
ウィルス同定用検査薬に用いるＤＮＡ断片。 ［式］；ＧＧＧＧＡＡＣＡＣＡＣＴＴＣＴＣＡＧＣＣＣ
ＴＧＡＴＴＧＣＴＣＡＡＧＧＣＣＣＴＴＧＣＡＴＧＴＧ
ＣＡＡＣＣＧＡＧＡＣＡＣＣＣＣＣＣＡＣＡＡＧＣＡＣ
ＣＧＧＡＡＴＡＡＧＡＣＣＴＧＡＣＡＡＣＡＡＡＧＴＡ
ＧＣＡＧＣＣＡＣＣＡＣＧＡＣＣＣＡＡＡＡＡＣＡＡＡ
ＡＴＴＡＡＡＡＧＧＡＴＣＣＧＧＴＡＡＣＡＧＣＣＣＡ
ＴＣＡＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＡＴＡＧＡＡＴＣＣＡＡＣ
ＡＡＴＣＣＡＧＡＧＡＧＡＣＧＴＣＡＣＡＴＣＡＡＣＴ
ＣＡＴＣＣＡＣＧＡＡＴＣＴＴＣＧＡＡＧＧＧＡＡＣＡ
ＴＣＣＣＡＧＡＣＡＡＡＡＴＣＡＣＡＧＣＣＣＡＴＴＣ
ＣＣＴＧＡＴＣＡＣＧＣＡＴＡＡＡＣＴＧＡＣＡＡＡＧ
ＡＴＣＡＣＡＡＧＡＡＴＧＣＡＡＣＡＣＴＣＡＣＡＴＧ
ＧＴＡＡＴＡＣＡＣＡＡＡＴＡＣＴＣＡＡＣＣＡＧＧＣ
ＡＡＡＴＴＣＡＡＴＧＧＴＧＡＡＡＡＧＡＡＣＡＴＧＧ
ＡＧＡＴＴＡＣＴＡＴＴＴＣＧＡＡＴＴＧＣＡＡＣＣＴ
ＴＡＡＴＡＴＴＡＣＴＴＧＴＴＴＣＡＡＴＡＴＴＴＧＴ
ＧＴＴＡＴＣＧＣＴＣＡＴＡＡＴＴＧＴＡＴＴＡＣＡＧ
ＴＣＡＡＣＡＣＣＧＧＧＧＡＡＴＴＴＧＣＡＡＡＡＣＧ
ＡＴＡＴＣＡＡＴＡＴＡＡＴＴＡＧＡＡＡＧＧＡＧＣＴ
ＣＡＡＴＡＣＡＡＴＴＡＴＧＧＡＧＡＡＴＴＴＴＧＡＡ
ＡＣＴＡＣＡＴＣＴＡＡＧＴＣＡＣＴＧＴＴＡＡＧＴＧ
ＴＡＴＣＡＡＡＴＣＡＡＡＴＣＡＣＴＴＡＣＧＡＴＧＴ
ＡＴＣＡＧＴＡＣＴＴＡＣＴＣＣＴＡＴＡＡＧＡＣＡＡ
ＧＡＡＧＣＴＡＴＴＧＡＡＡＣＡＡＡＣＡＴＣＡＴＴＴ
ＣＡＡＡＡＡＴＡＡＡＡＧＡＴＣＡＴＴＧＣＡＡＡＧＡ
ＴＡＧＡＧＴＡＡＴＴＡＡＡＧＡＡＧＧＡＡＧＣＡＣＴ
ＴＧＣＡＣＡＴＴＧＡＡＴＣＧＣＡＧＣＣＣＴＴＴＧＣ
ＡＴＧＡＴＧＴＣＴＣＴＴＴＴＴＴＡＡＡＴＧＧＧＴＴ
ＣＡＡＴＡＡＡＴＴＣＴＡＴＴＴＣＡＣＡＴＡＴＡＡＡ
ＧＡＴＡＡＴＡＴＧＣＡＡＡＴＴＡＡＧＴＴＴＡＡＡＴ
ＣＡＴＴＡＴＴＡＧＡＴＴＡＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴＡＴ
ＴＣＣＡＡＣＴＧＣＴＡＣＡＡＣＴＣＣＣＣＡＣＧＧＡ
ＴＧＣＡＴＴＣＧＡＡＴＴＣＣＡＴＣＡＴＴＣＴＣＣＴ
ＴＡＧＧＴＣＡＡＡＣＣＣＡＴＴＧＧＴＧＴＴＡＴＡＣ
ＣＣＡＴＡＡＴＡＴＡＡＡＣＣＴＡＣＴＡＧＧＡＴＧＴ
ＧＣＡＧＡＣＣＣＴＧＣＡＴＣＴＡＧＣＡＡＴＣＡＡＴ
ＡＴＧＴＡＴＣＡＣＴＡＧＧＡＡＣＣＴＴＡＣＡＡＧＴ
ＣＴＴＡＡＡＡＡＴＧＧＧＴＧＡＣＣＣＴＴＡＴＴＴＴ
ＡＡＡＧＴＣＧＡＧＣＡＴＡＧＴＣＡＴＴＡＴＴＴＡＡ
ＡＴＧＡＣＧＧＧＡＧＧＡＡＴＣＧＡＡＡＧＡＧＴＴＧ
ＴＴＣＡＧＴＧＧＴＴＧＣＴＧＴＣＣＣＣＧＡＣＧＧＡ
ＴＧＣＣＴＧＣＧＧＡＡＴＴＧＴＧＴＧＡＣＣＡＴＧＡ
ＣＡＡＡＡＡＡＴＧＡＧＡＣＡＧＡＧＡＡＴＴＴＣＡＡ
ＡＧＡＣＣＴＣＡＡＴＴＧＧＣＡＡＣＡＣＡＡＴＴＡＣ
ＴＴＡＣＡＴＡＣＡＴＡＴＣＡＴＡＴＡＡＴＧＧＴＡＣ
ＣＡＴＴＡＡＡＧＡＣＴＣＧＴＡＴＡＡＴＡＡＡＴＣＣ
ＡＣＣＡＧＧＡＴＣＡＴＣＣＡＧＡＧＡＴＴＧＧＧＴＴ
ＣＡＴＡＴＣＧＣＡＣＣＡＧＧＧＧＴＡＧＧＣＴＣＧＧ
ＧＣＣＴＴＴＴＧＴＡＴＧＣＣＡＡＡＴＴＡＣＴＴＡＴ
ＡＴＴＴＣＣＴＴＴＧＴＡＴＧＧＧＧＧＴＣＴＣＡＣＧ
ＧＡＡＡＡＡＴＣＡＧＴＧＡＴＡＣＡＴＡＡＴＡＡＴＣ
ＡＡＴＣＡＧＧＧＡＡＡＴＡＴＴＴＴＴＴＣＣＣＴＡＡ
ＴＴＣＡＡＣＴＡＡＡＴＴＧＣＡＡＴＧＣＣＧＴＡＡＣ
ＡＧＣＡＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡＡＡＴＡＡＡＡＧＧＡＧ
ＣＡＡＡＡＧＡＴＴＣＡＴＡＣＡＣＡＡＴＡＡＣＴＴＡ
ＣＴＴＣＴＣＡＧＧＧＡＧＡＣＴＴＡＴＡＣＡＧＡＧＴ
ＧＣＡＴＴＴＣＴＧＧＴＴＴＧＴＧＡＴＣＴＡＡＧＡＣ
ＡＡＴＴＴＣＴＴＴＣＴＧＡＡＧＡＴＴＧＴＧＡＡＡＴ
ＣＴＴＡＡＴＴＣＣＴＡＧＴＡＡＴＧＡＴＴＡＣＡＴＧ
ＡＴＧＧＴＣＧＧＴＧＣＡＧＡＧＧＧＴＣＧＡＴＴＡＴ
ＡＴＡＡＣＡＴＴＧＡＧＡＡＣＡＡＣＡＴＡＴＴＴＴＡ
ＴＴＡＴＣＡＧＡＧＡＧＧＡＴＣＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧ
ＣＣＴＴＡＴＣＣＧＡＧＣＣＴＣＴＡＴＡＧＡＡＴＣＡ
ＧＧＴＴＡＡＡＣＣＴＴＡＧＴＡＡＧＡＡＡＴＡＴＣＣ
ＴＡＧＡＡＴＡＡＣＴＧＡＡＡＴＴＡＡＡＴＴＴＡＣＡ
ＡＡＡＡＴＴＧＡＡＡＴＣＧＣＣＣＣＡＡＧＡＣＣＡＧ
ＧＣＡＡＣＡＡＡＧＡＴＴＧＴＣＣＡＧＧＡＡＡＴＡＡ
ＧＧＣＴＴＧＣＣＣＡＡＡＡＧＡＡＴＧＴＡＴＡＡＣＧ
ＧＧＡＧＴＣＴＡＣＣＡＡＧＡＴＡＴＡＴＴＧＣＣＡＣ
ＴＡＡＧＴＴＡＴＣＣＣＡＡＴＡＣＴＧＣＡＴＴＴＣＣ
ＡＣＡＣＴＴＡＡＡＡＣＡＡＧＣＧＴＡＴＴＡＴＡＣＡ
ＧＧＴＴＴＴＴＡＴＣＴＴＡＡＴＡＡＣＴＣＧＣＴＣＧ
ＡＧＡＧＡＣＧＣＡＡＴＣＣＡＡＣＡＴＴＴＴＡＴＡＣ
ＴＧＣＴＧＡＣＡＡＴＣＴＡＧＡＴＴＡＣＣＡＴＣＡＡ
ＣＡＧＧＡＡＡＧＡＴＴＡＧＧＴＡＡＡＴＴＣＡＡＴＣ
ＴＴＡＣＴＧＣＴＧＧＡＴＡＣＴＣＴＡＣＴＡＣＡＡＣ
ＴＴＧＴＴＴＴＡＡＡＣＡＧＡＣＣＡＣＴＡＣＴＧＣＧ
ＡＧＧＴＴＡＴＡＣＴＧＴＣＴＣＴＡＣＡＴＡＡＴＴＧ
ＡＡＧＴＧＧＧＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣＡＴＴＧＧＧＧＡ
ＣＴＴＴＣＡＧＡＴＣＡＣＣＣＴＴＴＴＴＴＴＡＧＣＡ
ＧＣＴＴＡＡＴＡＧＡＣＣＡＧＡＣＴＧＴＴＡＡＴＴＡ
ＡＴＣＡＡＣＡＡＡＧＴＴＡＴＴＣＴＧＴＡＡＴＡＴＡ
ＡＡＣＴＧＡＴＣＴＴＡＴＡＡＧＴＧＡＡＡＡＧＡＴＧ
ＣＣＴＡＴＣＣＡＡＧＧＡＧＧＴＴＧＡＴＡＧＡＣＡＡ
ＡＴＡＧＴＡＡＡＡＧＴＡＧＣＡＡＴＴＧＴＡＡＣＡＡ
ＡＡＣＴＣＴＡＡＧＧＡＡＡＡＡＧＴＡＡＴＴＣＧＡＧ
ＡＡＡＴＡＴＴＡＴＡＧＡＣＴＧＡＣＴＴＣＡＧＡＧＣ
ＡＡＡＣＡＣＡＡＣＡＴＣＧＡＴＣＣＡＴＡＡＴＡＧＴ
ＣＡＡＴＡＴＡＡＴＣＡＡＴＡＡＴＡＣＴＣＴＡＴＧＡ
ＧＡＣＣＴＴＡＣＣＴＡＴＣＡＡＣＡＧＣＡＡＡＡＡＡ
ＣＡＣＡＧＴＣＣＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＡＣＣＣＡＡＣ
ＴＣＧＣＴＣＣＡＴＣＣＴＴＡＡＴＣＡＴＣＣＡＣＴＧ
ＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＴＡＴＡＣＧＡＡＧＧＡＣＣＡＴ
ＣＧＧＣＣＡＣＣＧＧＧＴＣＣＡＡＡＣＡＡＴＣＴＡＧ
ＣＡＣＡＡＡＡＡＴＴＣＡＡＡＣＡＡＣＣＧＣＣＡＡＡ
ＣＴＣＴＧＴＴＣＧＧＣＣＴＣＡＡＣＡＡＡＣＡＡＴＣ
ＣＧＣＣＡＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＣＡＴＴＣＣＴＡＴＡ
ＣＣＡＡＣＡＣＡＣＡＡＣＣＡＴＣＣＣＡＴＴＣＣＴＣ
ＡＡＡＡＧＣＡＡＴＴＣＡＡＴＣＣＧＣＧＡＣＣＣＡＡ
ＡＧＡＡＧＡＣＴＣＴＣＣＡＣＡＴＡＴＣＣＡＧＣＴＡ
ＡＴＣＣＧＴＣＧＡＴＣＣＧＡＣＡＣＡＴＣＡＴＣＧＴ
ＡＴＣＴＴＴＴＡＡＧＡＡＡＡＡＡＡ
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1154745A JPH074252B2 (ja) | 1989-06-19 | 1989-06-19 | ヒトパラインフルエンザ４ａ型ウイルス同定用検査薬に用いるｄｎａ断片 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1154745A JPH074252B2 (ja) | 1989-06-19 | 1989-06-19 | ヒトパラインフルエンザ４ａ型ウイルス同定用検査薬に用いるｄｎａ断片 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0322999A true JPH0322999A (ja) | 1991-01-31 |
| JPH074252B2 JPH074252B2 (ja) | 1995-01-25 |
Family
ID=15590985
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1154745A Expired - Lifetime JPH074252B2 (ja) | 1989-06-19 | 1989-06-19 | ヒトパラインフルエンザ４ａ型ウイルス同定用検査薬に用いるｄｎａ断片 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH074252B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008057428A (ja) * | 2006-08-31 | 2008-03-13 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 風力・太陽光発電装置 |
| ITMI20091340A1 (it) * | 2009-07-28 | 2011-01-29 | Noce S R L | Aerostato autostabile perfezionato e relativo sistema di involo e di recupero |
-
1989
- 1989-06-19 JP JP1154745A patent/JPH074252B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008057428A (ja) * | 2006-08-31 | 2008-03-13 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 風力・太陽光発電装置 |
| ITMI20091340A1 (it) * | 2009-07-28 | 2011-01-29 | Noce S R L | Aerostato autostabile perfezionato e relativo sistema di involo e di recupero |
| WO2011012996A3 (en) * | 2009-07-28 | 2011-07-07 | Noce S.R.L. | Improved self-righting aerostat and relative takeoff and recovery system |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH074252B2 (ja) | 1995-01-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Uroda et al. | Conserved pseudoknots in lncRNA MEG3 are essential for stimulation of the p53 pathway | |
| JP4205136B2 (ja) | サブトラクションｃＤＮＡライブラリーの作製方法および該作製されたライブラリーの使用 | |
| Andino et al. | Poliovirus RNA synthesis utilizes an RNP complex formed around the 5′‐end of viral RNA. | |
| US5220013A (en) | DNA sequence useful for the detection of Alzheimer's disease | |
| AU611122B2 (en) | Recombinant alzheimer's amyloid protein | |
| JP2812678B2 (ja) | ヒトパピローマウイルスの核酸プローブ | |
| JP2648303B2 (ja) | 型特異的乳頭腫ウイルスｄｎａ配列およびペプチド | |
| Imberti et al. | An immunoassay for specific amplified HCV sequences | |
| Kung et al. | Synthesis of plus strands of retroviral DNA in cells infected with avian sarcoma virus and mouse mammary tumor virus | |
| JPH01285198A (ja) | 日本脳炎ウイルス表面抗原蛋白質の製造法 | |
| Scott et al. | Prion protein gene expression in cultured cells | |
| US5744594A (en) | DNA encoding ATP-sensitive potassium channel genes | |
| JPH11514864A (ja) | ヘルペスウイルスのｒｆｈｖ／ｋｓｈｖ亜科の糖タンパク質ｂ | |
| JP2002511240A (ja) | 薬物に関連した核酸配列およびタンパク質 | |
| US5652223A (en) | DNA encoding CAI resistance proteins and uses thereof | |
| JPH0322999A (ja) | ヒトパラインフルエンザ４ａ型ウイルス同定用検査薬に用いるｄｎａ断片 | |
| JP2002515725A (ja) | カポジ肉腫および腹膜後繊維腫症に関連するガンマヘルペスウイルスのｄｎａポリメラーゼ | |
| JPH0757200B2 (ja) | ヒトパラインフルエンザ２型ウイルス同定用検査薬に用いるｄｎａ断片 | |
| JPH04197183A (ja) | ヒトパラインフルエンザ４ａ型ウイルスフュージョンプロテイン遺伝子及び該遺伝子を含む物質 | |
| JPH04144686A (ja) | 構造蛋白質遺伝子、組換えベクター、それにより形質転換された大腸菌、ポリペプチドおよびポリペプチドの製造方法 | |
| JPH04197179A (ja) | ヒトパラインフルエンザ２型ウイルスラージプロテイン遺伝子及び該遺伝子を含む物質 | |
| JP2004239639A (ja) | Ｄｎａ鎖切断の効率的検出法 | |
| JPH04197180A (ja) | ヒトパラインフルエンザ２型ウイルスマトリックスプロテイン遺伝子及び該遺伝子を含む物質 | |
| US6790936B1 (en) | CAI resistance proteins and uses thereof | |
| JPH07250700A (ja) | 競合ｐｃｒ法による核酸の簡易定量法 |