JPH03219888A - ストレプトバリシンの製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野］ 本発明は、高い生産効率を有するストレプトバリシンの
製造方法に関する。

〔従来の技術〕

ストレプトバリシンは、主にＡ、Ｂ、Ｃ，ＤおよびＥの
５種からなり、当初抗結核抗生物質としての有用性が注
目され、最近になってこれを化学変性して得られる誘導
体が抗レトロウィルス剤、抗癌剤等として有用であるこ
とが判明し注目されるに到っている（例えば、特開昭５
４−１１００００号公報参照）。このような有用誘導体
はストレプトバリシンＣから誘導されているため、スト
レプトバリシンＣが特に注目されている。

従来、かかるストレプトバリシンの製造方法としては、
ストレプトマイセス・スペクタビリスの深部培養により
発酵生産する方法が知られているしかし、上記の従来の
製造方法は生産効率が低く、極めて少量のストレプトバ
リシンしが得られない。そのため、工業的には実用化は
困難であるという欠点を有する。上記従来の方法におい
ては、生産されたストレプトバリシンが培地中で速やか
に分解されることが判明したほが、生産されたストレプ
トバリシンが脂溶性が高いために菌糸表面に蓄積し生産
抑制を引き起こすためと考えられる。

〔課題を解決するための手段〕

そこで、本発明の目的は、従来の方法を改良し、ストレ
プトバリシンを高い生産効率で製造することができる製
造方法を提供することにある。

すなわち、本発明は、上記の従来の方法の問題点を解決
するものとして、 ストレプトマイセス属に属するストレプトバリシン生産
菌を、フマル酸およびその水溶性塩からなる群から選ば
れる少なくとも１種の存在下で培養する工程を有するス
トレプトバリシンの製造方法を提供するものである。

微生物 本発明の方法に用いられるストレプトマイセス属に属す
るストレプトバリシン生産菌としては、例えば、ストレ
プトマイセス・スペクタビリス（ＡＴＣＣ２７４６５の
雷託ＮｏでＡＴＣＣから入手できる）が挙げられる。

フマル酸及びその水溶性塩 本発明の方法において、フマル酸またはその水溶性塩は
発酵助剤として作用するものと考えられる。用いること
ができる水溶性塩としては、例えば、フマル酸カリウム
、フマル酸ナトリウム、フマル酸カリウムナトリウム、
フマル酸−カリウム、フマル酸−す）　ＩＪウム等が挙
げられる。フマル酸および上に例示のフマル酸塩は、１
種単独でも２種以上を組み合わせても使用することがで
きる。

フマル酸またはその水溶性塩の培地への添加量は、フマ
ル酸として培地に対し０．１〜１０％、さらに０．５〜
５％程度が好ましい。このフマル酸またはその塩も、培
地に発酵前に添加してもよいし、発酵開始後に添加ある
いは追加してもよいが、通常は発酵開始前に添加してお
くのがよい。

その他の培養条件 本発明の方法に用いられる培地その他の条件には特に制
限はなく、微生物の培養により抗生物質等を製造する際
に通常用いられる条件を用いることができる。すなわち
、窒素源、資化性炭素源および無機塩を含む水性培地を
用い、好気的条件下で深部培養を行うのが一般的である
。

窒素源としては無機、有機のいずれも用いることができ
、例えば牛肉エキス、ペプトン、大豆粉等の植物性タン
パク質、カゼイン、麦芽エキス、魚粉、綿粉、ケイソイ
　（脱脂大豆微粉末）、落花生粉、醸造用酵母、コーン
グルテン粉、コーンスチーブリカー等の有機窒素源；硫
酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、硝酸カリウム等の
無機窒素源が挙げられる。

資化性炭素源としては、例えばグルコース、デキストリ
ン、糖蜜、スターチ、マルトース、ガラクトース、マン
ニトール、蔗糖、乳糖、大豆油等が挙げられる。

栄養無機塩類としては、例えばナトリウム、カルシウム
、燐酸根、硫酸根等のイオンを生じる塩類が挙げられ、
具体的には、炭酸カルシウム、燐酸カリウム、硫酸マグ
ネシウム、塩化カリウム、塩化す）　ＩＪウム、硫酸亜
鉛、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、塩化コバルト、モリブ
デン酸アンモン等がある。

培養における、培地のｐＨは５．５〜７．５程度が適当
であり、温度は２３〜３７℃、特に２５〜３０℃の範囲
が適当で、およそ４〜８日程度の培養によって最大収量
が得られる。

ストレプトバリシンの採取 本発明の方法によると、発酵により生産されたストレプ
トバリシンは培地中に分散した形で得られる。このスト
レプトバリシンは、例えば、次のようにして培地から採
取し、精製することができる。

即ち、発酵終了後の培地をろ過してろ液を得る。

残渣中の菌糸は洗浄して菌糸洗浄液を得る。こうして得
られたろ液と菌糸洗浄液を合わせたものを、例えば酢酸
エチル、塩化メチレンなどの適当な有機溶剤で抽出する
操作を行い、ストレプトバリシンを溶剤層へ移行させる
。次に、溶剤層を分離し、減圧下で濃縮後乾固すると、
粗ストレプトバリシンが得られる。得られた粗ストレプ
トバリシンは、例えば再結晶の繰り返し、シリカゲルカ
ラムクロマトグラフィー等によりさらに精製することが
できる。

〔実施例〕

次に本発明の方法を実施例によりさらに詳しく説明する
。

実施例Ｉ Ｎ−Ｚ７ミンＡ　１．２５ｇ、クルコース０．６３　ｇ
。

大豆酵素分解エキス０．６３ｇ、燐酸−カリウム０．１
６ｇ、燐酸二カリウム０．１６ｇおよび蒸留水１０〇−
を混合してつくった種培地を含む５００−一振盪フラス
コ内にストレプトマイセス・スペクタビリスＡＴＣＣ２
７４６５株の培養菌を接種した。このフラスコを回転振
盪器に装填し、２７℃、２０Ｏｒｐｍの条件で７２時間
培養し、種培養体を得た。

次に、脱脂大豆粉末１ｇ、コーンスタープリ力−１ｇ、
コーンスターチ２ｇ、ビール酵母０．２５ｇ、塩化カリ
ウム０．３ｇ、炭酸カルシウム０．４ｇおよび蒸留水１
００−を混合して調製した前培養培地を含む５００　ｄ
−振盪フラスコ内に前記の種培養体２証を接種した。次
に、このフラスコを回転振盪器に装着し、２７℃、２０
Ｏｒｐｍの条件で回転させながら４８時間培養を行い、
前培養体を得た。

次に、こうして得た前培養体１００−を、予め５１−ジ
ャーファーメンタ−内に調製しておいた、大豆粉８０ｇ
、グルコース８０ｇ１ビール酵母５ｇ。

塩化ナトリウム６　ｇ１炭酸カルシウム１ｇ、フマル酸
−ナトリウム２４ｇ　′Ｊ６よび蒸留水２β混合してな
る発酵培地に導入した。次に、培地を５０Ｏｒｐｍの回
転速度で攪拌し、培地に空気を５　ｖ／ｖ／ｍｉｎ送入
しながら２７℃で菌の培養を行った。培地中のストレプ
トバリシン蓄積量は７０時間後に最高に達した。

このとき、培地中のストレプトバリシンＣの濃度は７．
６ｍｇ／Ａ’であり、また培地中の菌体量は乾燥菌体と
して２４．５ｇ／βであった。

比較例１ 発酵培地として、フマル酸−ナトリウムのみを欠く以外
は実施例１で使用のものと同一の組成を有する培地を用
いた以外は、実施例１と同様にして培養を行った。培地
中のストレプトバリシン蓄積量は９０時間後に最高に達
した。このとき、培地中のストレプトバリシンＣの濃度
は２．４ｍｇ／　Ｉ！　Ｔ！あり、また培地中の菌体量
は乾燥菌体として２９ｇ／Ｉ！であった。

〔発明の効果〕

従来ストレプトマイセス属微生物の培養によっては少量
のストレプトバリシンしか得ることができなかったが、
本発明の方法によれば２倍以上の効率でストレプトバリ
シンを生産することができ、工業的にも実用性が極めて
高い製造方法である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）ストレプトマイセス属に属するストレプトバリシ
   ン生産菌を、フマル酸およびその水溶性塩からなる群か
   ら選ばれる少なくとも１種の存在下で培養する工程を有
   するストレプトバリシンの製造方法。