JPH03200797A - 新規ペプチドならびに新規ｄｎａ - Google Patents
新規ペプチドならびに新規ｄｎａInfo
- Publication number
- JPH03200797A JPH03200797A JP1135781A JP13578189A JPH03200797A JP H03200797 A JPH03200797 A JP H03200797A JP 1135781 A JP1135781 A JP 1135781A JP 13578189 A JP13578189 A JP 13578189A JP H03200797 A JPH03200797 A JP H03200797A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- escherichia coli
- peptide
- formula
- gene
- expressed
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 abstract description 21
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 abstract description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 7
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 abstract description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 abstract description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 abstract description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 2
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 abstract description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 abstract description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 abstract 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 abstract 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 abstract 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 abstract 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 abstract 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 abstract 1
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 abstract 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 abstract 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 abstract 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002585 base Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150023003 RRF gene Proteins 0.000 description 2
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000798402 Bacillus licheniformis Ornithine racemase Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 description 1
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 102100026933 Myelin-associated neurite-outgrowth inhibitor Human genes 0.000 description 1
- 101100462611 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) prr-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 1
- 108010021757 Polynucleotide 5'-Hydroxyl-Kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000008422 Polynucleotide 5'-hydroxyl-kinase Human genes 0.000 description 1
- ZKQOUHVVXABNDG-IUCAKERBSA-N Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 ZKQOUHVVXABNDG-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000269821 Scombridae Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 238000003277 amino acid sequence analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- PZLXYMQOCNYUIO-UHFFFAOYSA-N lithium;hydrochloride Chemical compound [Li].Cl PZLXYMQOCNYUIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 235000020640 mackerel Nutrition 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- JOHZPMXAZQZXHR-UHFFFAOYSA-N pipemidic acid Chemical group N1=C2N(CC)C=C(C(O)=O)C(=O)C2=CN=C1N1CCNCC1 JOHZPMXAZQZXHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明のペプチド（ＲＲＦ）は、大腸菌における蛋白合
成過程において、リボゾームのｉＲＮＡからの離脱を促
進するペプチドであり、生体外でのペプチド合戊を工業
的に行う際に、その重要性が期待できるものである。
成過程において、リボゾームのｉＲＮＡからの離脱を促
進するペプチドであり、生体外でのペプチド合戊を工業
的に行う際に、その重要性が期待できるものである。
［従来の技術および課題］
従来、その存在と機能については、本発明者等が報告し
ていた（ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ． １１．４０３
７−４０４４（１９７２））が、ＲＲＦを大量に生産せ
しめた例はなく、その選択的大量生産が求められていた
。
ていた（ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ． １１．４０３
７−４０４４（１９７２））が、ＲＲＦを大量に生産せ
しめた例はなく、その選択的大量生産が求められていた
。
［課題を解決するための手段コ
本発明者は、既に、本発明者等が報告したアッセイ方法
並びに精製方法（ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１１．
４０３７４０４４（１９７２））により、その活性を確
かめながら、鯖製し、Ｎ末部分のアミノ酸配列を分析し
、そのアミノ酸配列を基に、ＤＮＡプローブを合威し、
大ＩＩＪ３＠の遺伝子バンクよりスクリーニングし、適
当なベクターに組み込み、大腸菌で発現させることに成
功し、本発明のべブチドを堤供するに至った。
並びに精製方法（ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１１．
４０３７４０４４（１９７２））により、その活性を確
かめながら、鯖製し、Ｎ末部分のアミノ酸配列を分析し
、そのアミノ酸配列を基に、ＤＮＡプローブを合威し、
大ＩＩＪ３＠の遺伝子バンクよりスクリーニングし、適
当なベクターに組み込み、大腸菌で発現させることに成
功し、本発明のべブチドを堤供するに至った。
即ち、本発明は、下記のアミノ酸配列
Ｍｅｔ ｌ １ｅＳｅｒＡｓｐ Ｉ １ｅＡｒｇＬｙｓ
Ａｓｐ＾１ａＧｌｕＶａｌＡｒｇＭｅｔＡｇｐしｙｓＣ
ｙｓＶａｌＧｌｕ＾ｌａＰｈｅＬｙｓＴｈｒＧＩｎｌｌ
ｅＳｅｒＬｙｓｌｌｅＡｒｇＴｈｒＧｌｙ＾ｒｇＡｌａ
ＳｅｒＰｒｏＳｅｒＬｅｕＬｅｕＡｓｐＧｌｙｌｌｅＶ
ａｌＶａ−ＩＧｌｕＴｙｒＴｙｒＧ１ｙＴｈｒＰｒｏＴ
ｈｒＰｒｏＬｅｕＡｒｇＧｌｎＬｅｕＡｌａＳｅｒＶａ
ｌＴｈｒＶａｌＧ１ｕＡｓｐＳｅｒＡｒｇＴｈｒＬｅｕ
ＬｙｓｌｌｅＡｓｎＶａｌＰｈｅＡｓｐＡｒｇＳｅｒＭ
ｅｔＳｅｒＰｒｏＡｌａＶａｌＧＩｕＬｙｓＡＩａｌｌ
ｅＭｅｔＡ１ａＳｅｒＡｓ ｐｌ．ｅｕＧ ｌ ｙＬｅ
ｕＡｓ ｎＰｒｏＡｓ ｎＳｅｒＡ １ａＧ １ｙＳｅ
ｒＡｓ ｐ ｌ ｌｅＡｒｇＶａｌＰｒｏＬｅｕＰｒｏ
ＰｒｏＬｅｕＴｈｒＧ１ｕＧ１ｕＡｒｇＡｒｇＬｙｓＡ
ｓｐＬｅｕＴｈｒＬｙｓ ｌ ｌｅＶａｌＡｒｇＧ１ｙ
Ｇ１ｕＡｌａＧ１ｕＧｌｎ＾ＩａＡｒｇＶａｌＡｌａＶ
ａｌＡｒｇＡｓｎＶａｌＡｒｇＡｒｇＡｓｐＡｌａＡ＋
ｓｎＡｓｐＬｙｇＶａｌＬｙｓ＾Ｉ ａＬｃｕｌ．ｅｕ
ＬｙｓＡｓ ｐＬｙＳＧ Ｉｕ ｌ ｌｅｓｅｒＧ １
ｕＡｓｐＡｓｐＡｓｐＡｒｇＡｒｇＳｅｒＧ１ｎＡｓ
ｐＡｓｐＶ＠ＩＧ１ｎＬｙｓＬｅｕＴｈｒＡｓｐＡｌａ
ＡｌａｌｌｅＬｙｓＬｙｓｌｌｅＧ１ｕＡｌａＡｌａＬ
ｅｕＡ１ａＡｓｐＬｙｓＧｌｕＡＩａＧＩｕＬｅｕＭｅ
ｔＧＩｎＰｈｅ からなる新規ペプチドおよびその構造遺伝子ならびに製
造方法である。
Ａｓｐ＾１ａＧｌｕＶａｌＡｒｇＭｅｔＡｇｐしｙｓＣ
ｙｓＶａｌＧｌｕ＾ｌａＰｈｅＬｙｓＴｈｒＧＩｎｌｌ
ｅＳｅｒＬｙｓｌｌｅＡｒｇＴｈｒＧｌｙ＾ｒｇＡｌａ
ＳｅｒＰｒｏＳｅｒＬｅｕＬｅｕＡｓｐＧｌｙｌｌｅＶ
ａｌＶａ−ＩＧｌｕＴｙｒＴｙｒＧ１ｙＴｈｒＰｒｏＴ
ｈｒＰｒｏＬｅｕＡｒｇＧｌｎＬｅｕＡｌａＳｅｒＶａ
ｌＴｈｒＶａｌＧ１ｕＡｓｐＳｅｒＡｒｇＴｈｒＬｅｕ
ＬｙｓｌｌｅＡｓｎＶａｌＰｈｅＡｓｐＡｒｇＳｅｒＭ
ｅｔＳｅｒＰｒｏＡｌａＶａｌＧＩｕＬｙｓＡＩａｌｌ
ｅＭｅｔＡ１ａＳｅｒＡｓ ｐｌ．ｅｕＧ ｌ ｙＬｅ
ｕＡｓ ｎＰｒｏＡｓ ｎＳｅｒＡ １ａＧ １ｙＳｅ
ｒＡｓ ｐ ｌ ｌｅＡｒｇＶａｌＰｒｏＬｅｕＰｒｏ
ＰｒｏＬｅｕＴｈｒＧ１ｕＧ１ｕＡｒｇＡｒｇＬｙｓＡ
ｓｐＬｅｕＴｈｒＬｙｓ ｌ ｌｅＶａｌＡｒｇＧ１ｙ
Ｇ１ｕＡｌａＧ１ｕＧｌｎ＾ＩａＡｒｇＶａｌＡｌａＶ
ａｌＡｒｇＡｓｎＶａｌＡｒｇＡｒｇＡｓｐＡｌａＡ＋
ｓｎＡｓｐＬｙｇＶａｌＬｙｓ＾Ｉ ａＬｃｕｌ．ｅｕ
ＬｙｓＡｓ ｐＬｙＳＧ Ｉｕ ｌ ｌｅｓｅｒＧ １
ｕＡｓｐＡｓｐＡｓｐＡｒｇＡｒｇＳｅｒＧ１ｎＡｓ
ｐＡｓｐＶ＠ＩＧ１ｎＬｙｓＬｅｕＴｈｒＡｓｐＡｌａ
ＡｌａｌｌｅＬｙｓＬｙｓｌｌｅＧ１ｕＡｌａＡｌａＬ
ｅｕＡ１ａＡｓｐＬｙｓＧｌｕＡＩａＧＩｕＬｅｕＭｅ
ｔＧＩｎＰｈｅ からなる新規ペプチドおよびその構造遺伝子ならびに製
造方法である。
上述した本発明のペプチドアミノ酸配列および以下の説
明においては、Ｖａｔは、パリン、Ａｒｇは、アルギニ
ン、Ｓｅｒは、セリン、Ｔｈｒは、スレオニン、Ｐｒｏ
は、プロリン、Ｌｙｓは、リジン、＾ｌａは、アラニン
ｓ Ｈｉｓは、ヒスチジン、＾ｓｎは、アスパラギン、
Ｇｉｎは、グルタミン、Ｇｌｕは、グルタミン酸、ｃｒ
ｙは、グリシン、Ｌｅｕは、ロイシン、Ａｓｐは、アス
パラギン酸、Ｔｙｒは、チロシン、１１ｅは、イソロイ
シン、Ｐｈｅは、フエニルアラニン、Ｃｙｓは、システ
インの各残基を意味する。
明においては、Ｖａｔは、パリン、Ａｒｇは、アルギニ
ン、Ｓｅｒは、セリン、Ｔｈｒは、スレオニン、Ｐｒｏ
は、プロリン、Ｌｙｓは、リジン、＾ｌａは、アラニン
ｓ Ｈｉｓは、ヒスチジン、＾ｓｎは、アスパラギン、
Ｇｉｎは、グルタミン、Ｇｌｕは、グルタミン酸、ｃｒ
ｙは、グリシン、Ｌｅｕは、ロイシン、Ａｓｐは、アス
パラギン酸、Ｔｙｒは、チロシン、１１ｅは、イソロイ
シン、Ｐｈｅは、フエニルアラニン、Ｃｙｓは、システ
インの各残基を意味する。
本発明の新規ペブチドは、大腸菌等を用いた遺伝子組換
え法により、容易に大量生産できるという特徴を有して
いるので、遺伝子組換え法により生産するのが好ましい
。
え法により、容易に大量生産できるという特徴を有して
いるので、遺伝子組換え法により生産するのが好ましい
。
以下に、本発明の新規ペプチドの製造方法について、説
明する。
明する。
ｌ）構造遺伝子の入手
本発明のペプチドの構造遺伝子を例えばシーンライブラ
リー例えば、Ｃ１ａｒｋとＣａｒｂｏｎの遺伝子バンク
（Ｃｅ１１，９．９ｌ−９９（１９７６））より、適当
なプローブを用いて、釣取するのが好ましい。特に、本
発明者は、ＲＲＰの遺伝子が大腸菌のＦ線毛接合時の２
から６分領域に存在することを確認しており、この部分
の遺伝子バンクより釣取することが特に好ましい。
リー例えば、Ｃ１ａｒｋとＣａｒｂｏｎの遺伝子バンク
（Ｃｅ１１，９．９ｌ−９９（１９７６））より、適当
なプローブを用いて、釣取するのが好ましい。特に、本
発明者は、ＲＲＰの遺伝子が大腸菌のＦ線毛接合時の２
から６分領域に存在することを確認しており、この部分
の遺伝子バンクより釣取することが特に好ましい。
２）発現ベクターの調製
本発明においてはその発現のためのプロモーター等の発
現システムを有し、大腸菌内で増殖可能なさまざまなプ
ラスミドを用いることが可能であり、それらのプラスミ
ドを調製するにあたっては、公知の常法に従って行うこ
とができるが、市販の発現プラスミドを利用することも
可能である。
現システムを有し、大腸菌内で増殖可能なさまざまなプ
ラスミドを用いることが可能であり、それらのプラスミ
ドを調製するにあたっては、公知の常法に従って行うこ
とができるが、市販の発現プラスミドを利用することも
可能である。
これらのプラスミドに前記の本発明のペプチドの構造遺
伝子を含むＤＮＡを一般の遺伝子組換えの操作によって
組込むことにより、プラスミド組換え分子を構築する。
伝子を含むＤＮＡを一般の遺伝子組換えの操作によって
組込むことにより、プラスミド組換え分子を構築する。
３）組換え体の作成
常法にしたがい、この組み換え分子を用いて適当な大腸
菌株を形質転換し、形質転換体を得る。
菌株を形質転換し、形質転換体を得る。
４）ペプチドの生産
形質転換体の培養に当たっては、Ｌ−培地、Ｍ９培地、
Ｍ９−カザミノ酸培地、高リン酸培地、高すン酸〜カザ
ミノ酸培地等を用いることができ、これらにおける培養
により本発明のペプチドを量産することができる。
Ｍ９−カザミノ酸培地、高リン酸培地、高すン酸〜カザ
ミノ酸培地等を用いることができ、これらにおける培養
により本発明のペプチドを量産することができる。
５）ペプチドの精製
大腸菌で発現したペプチドは、大腸菌を超音波破砕後、
遠心分離することによって、水溶性画分としての上清を
得、これにポリエチレンイミン等を加え、ＤＮＡ、 Ｒ
ＮＡ、リゾソームを沈澱させて除き遠心分離して上清を
得る。この上清より、硫安沈澱の手法を用い、粗分画を
集め、更に透析、陰イオンクロマトグラフィー等を行い
精製できる。
遠心分離することによって、水溶性画分としての上清を
得、これにポリエチレンイミン等を加え、ＤＮＡ、 Ｒ
ＮＡ、リゾソームを沈澱させて除き遠心分離して上清を
得る。この上清より、硫安沈澱の手法を用い、粗分画を
集め、更に透析、陰イオンクロマトグラフィー等を行い
精製できる。
更に純度を上げるため、特異抗体を用いたアフィニティ
ークロマトグラフに付すのも好ましい。
ークロマトグラフに付すのも好ましい。
以下、本発明について、実施例を示し、説明する。
［実施例コ
１ 、 ＲＲＦｃＤＮ＾を含むプラスミドの単離本発明
者等の報告（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１１．４０３
７４０４４（１９７２）） したポリゾームを用いたＲ
ＲＦ活性のアッセイ方法を指標として、Ｅ、ｃｏｌｉ
ＭＲＥ６００株のりボゾーム洗浄肢より本発明者等の報
告（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１１．４０３７−４０
４４（１９７２）） した精製方法でＲＲＦｆｆｉ白を
精製して、ＮａＤｏｄＳｏ＊を含有するポリアクリルア
ミドゲル電気泳動により、その純度を確かめた。精製し
たＲＲＦ蛋白４６０μｇをＢｒＣＮ４２０μｇとを室温
、遮光下で、８０％ギ酸５０μＱ中で２４時間反応させ
た。この反応を４５０μｇの精製水を加えて停止せしめ
、凍結乾燥後、再度０．１％トリフロ酢酸含有８Ｍ尿素
水溶液５０μＱに溶解し、セファデックスＧ５０カラム
に付し、０．１％トリフロ酢酸で溶出して、２種のフラ
クションを得、それぞれ、凍結乾燥し、アミノ酸配列分
析に供した。これを、プロテインンークエンサー（アプ
ライドバイオシステム４７０＾）に付し、一方のフラク
ションのＮ末シークエンスが、ＡｌａＳｅｒＡｓｐＬｅ
ｕＧｌｙＬｅｕＡｓｎＰｒｏＡｓｎＳｅｒＡｌａＧｌｙ
ＳｅｒＡｓｐｌ ｌｅＡｒｇＶａｌＰｒｏＬｅｕＰｒｏ
ＰｒｏＬｅｕであることを確かめ、ＤＮＡ合成機（アプ
ライドバイオシステム社製）により大腸菌の利用コドン
より推定した３°−ＴＡＣＣＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＣＣ
ＣＡＧＡＣＴＴＧＧＧＣＴＴＧＣＣ＾ＣＧＣＣＣＡＡＧ
ＡＣＴＧＴＡ（４７塩基）を合成し、ＲＲＦ遺伝子のプ
ローブとし、５°末端を１４ポリヌクレオチドキナーゼ
及び（ｙ−”Ｐ）ＡＴＰを用いて３１ｐラベルした。
者等の報告（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１１．４０３
７４０４４（１９７２）） したポリゾームを用いたＲ
ＲＦ活性のアッセイ方法を指標として、Ｅ、ｃｏｌｉ
ＭＲＥ６００株のりボゾーム洗浄肢より本発明者等の報
告（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１１．４０３７−４０
４４（１９７２）） した精製方法でＲＲＦｆｆｉ白を
精製して、ＮａＤｏｄＳｏ＊を含有するポリアクリルア
ミドゲル電気泳動により、その純度を確かめた。精製し
たＲＲＦ蛋白４６０μｇをＢｒＣＮ４２０μｇとを室温
、遮光下で、８０％ギ酸５０μＱ中で２４時間反応させ
た。この反応を４５０μｇの精製水を加えて停止せしめ
、凍結乾燥後、再度０．１％トリフロ酢酸含有８Ｍ尿素
水溶液５０μＱに溶解し、セファデックスＧ５０カラム
に付し、０．１％トリフロ酢酸で溶出して、２種のフラ
クションを得、それぞれ、凍結乾燥し、アミノ酸配列分
析に供した。これを、プロテインンークエンサー（アプ
ライドバイオシステム４７０＾）に付し、一方のフラク
ションのＮ末シークエンスが、ＡｌａＳｅｒＡｓｐＬｅ
ｕＧｌｙＬｅｕＡｓｎＰｒｏＡｓｎＳｅｒＡｌａＧｌｙ
ＳｅｒＡｓｐｌ ｌｅＡｒｇＶａｌＰｒｏＬｅｕＰｒｏ
ＰｒｏＬｅｕであることを確かめ、ＤＮＡ合成機（アプ
ライドバイオシステム社製）により大腸菌の利用コドン
より推定した３°−ＴＡＣＣＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＣＣ
ＣＡＧＡＣＴＴＧＧＧＣＴＴＧＣＣ＾ＣＧＣＣＣＡＡＧ
ＡＣＴＧＴＡ（４７塩基）を合成し、ＲＲＦ遺伝子のプ
ローブとし、５°末端を１４ポリヌクレオチドキナーゼ
及び（ｙ−”Ｐ）ＡＴＰを用いて３１ｐラベルした。
Ｃ１ａｒｋとＣａｒｂｏｎの遺伝子バンク（Ｃｅ１１．
９．９ｌ−９９）の内、０〜ｌＯ分領域から２０クロー
ンを選抜し、アルカリ融解を用いたミニプレバレージョ
ン法（Ｍａｎｉａｔｉｓ Ｔ、他、Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ
ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８２））でそれぞれのプラスミ
ドを得た。サザンハイプリダイズ法（Ｓｏｕｔｈｅｒｒ
＋ Ｅ、Ｍ、、Ｊ、Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、、９８．５０３
−５１７（１９７５））に従い、このプラスミドをアガ
ロースゲルよりＮＹＴＲＡＮ膜に移し、プレハイブリダ
イズした後、５ｘ Ｄｅｎｈａｒｔｓ溶液、０．５％Ｎ
ａＤｏｄＳＯａ、１００μｇ／ｍｃ酵母ｔＲＮＡ、前述
のｄ成プローブ（４７塩基）（０，６Ｘ １Ｇ”ｃｐｓ
／３．３ｐｍｏｌｅ）を含有する６ｘ ５ＳＰＥ（ｌｘ
５ＳＰＥ：０．１８１１ＮａＣ１，０，０４Ｍリン酸
ナトリウム（ｐＨ，７，７）、１＋ＩＩＭＥＤＴＡ）溶
’ｔｌｉＺｔｍＱ中で、３７℃、２０時間ハイブリダイ
ズした後、１％ ＮａＤｏｄＳＯａを含有するｌＸ５Ｓ
ＰＥ溶液で洗浄した結果、プラスミドｐＬＣ６−３２に
ＲＲＦ遺伝子が存在することを確認し、制限酵１ｇＥｃ
ｏＲＩで消化して２．２Ｋｂの遺伝子フラグメントを回
収した。このフラグメントには、ＲＲＰの開始コドンか
ら終止コドンまで（５５８塩基）が完全に含まれていた
。
９．９ｌ−９９）の内、０〜ｌＯ分領域から２０クロー
ンを選抜し、アルカリ融解を用いたミニプレバレージョ
ン法（Ｍａｎｉａｔｉｓ Ｔ、他、Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ
ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８２））でそれぞれのプラスミ
ドを得た。サザンハイプリダイズ法（Ｓｏｕｔｈｅｒｒ
＋ Ｅ、Ｍ、、Ｊ、Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、、９８．５０３
−５１７（１９７５））に従い、このプラスミドをアガ
ロースゲルよりＮＹＴＲＡＮ膜に移し、プレハイブリダ
イズした後、５ｘ Ｄｅｎｈａｒｔｓ溶液、０．５％Ｎ
ａＤｏｄＳＯａ、１００μｇ／ｍｃ酵母ｔＲＮＡ、前述
のｄ成プローブ（４７塩基）（０，６Ｘ １Ｇ”ｃｐｓ
／３．３ｐｍｏｌｅ）を含有する６ｘ ５ＳＰＥ（ｌｘ
５ＳＰＥ：０．１８１１ＮａＣ１，０，０４Ｍリン酸
ナトリウム（ｐＨ，７，７）、１＋ＩＩＭＥＤＴＡ）溶
’ｔｌｉＺｔｍＱ中で、３７℃、２０時間ハイブリダイ
ズした後、１％ ＮａＤｏｄＳＯａを含有するｌＸ５Ｓ
ＰＥ溶液で洗浄した結果、プラスミドｐＬＣ６−３２に
ＲＲＦ遺伝子が存在することを確認し、制限酵１ｇＥｃ
ｏＲＩで消化して２．２Ｋｂの遺伝子フラグメントを回
収した。このフラグメントには、ＲＲＰの開始コドンか
ら終止コドンまで（５５８塩基）が完全に含まれていた
。
２、遺伝子の発現
ｐＬｃ ６−３２を有するＥ、ｃｏｌｉ ＪＡ ２００
をコリシン １ｕｎｉｔ／ｌ１ｉ（！を含何する１、５
輪Ｑのｌ、−培地で定常期まで培養した。’ Ｍａｎｉ
ａｔｉｓらの方法（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎ
ｇ（１９８２））でこの大腸菌よりプラスミドを抽出し
、このプラスミドを１０ｍＭ ）リス塩酸（ｐＨ８，ｏ
）、１ａ＋ＭＥＤＴ＾からなる溶液１００μＱに２．５
０Ｄとなるように溶解し、この溶液よりプラスミド２．
００Ｄ相当量を取り、ＥｃｏＲＩ ６０ ｕｎｉｔと混
合し、ＢＲＬマニュアル記載の反応溶液１００μｇ中で
３７℃、３時間反応させ、５００＋ａＭ ＥＤＴＡＩＯ
μＱをくわえて、反応終了後、０．３％酢酸ナトリウム
存在下、２倍量のエタノールでＤＮＡを沈澱させた。こ
のＤＮＡを１．２％アガロースゲル電気泳動に付し、２
．２ｋｂの７ラグメントを得た。Ｄｕｍａｉｓらのゲル
内ライゲーション法（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、５
゜６２−６７（１９８７））により、このフラグメント
とあらかじめＥｃｏＲＩ消化し、牛小腸ホスファターゼ
で処理したｐｕｃ １９ベクターをライゲーションし、
このライゲーション混合物１０ｐＱをＥ、ｃｏｌ ｉ
ＤＩＩ５ａ ５０ｕ１２にトランスフオームし、５０μ
ｇ／ｌｌ１１２アンピシリン、２％Ｘ−Ｇａ１５０μＱ
を含有するし一培地プレートに撒いた。
をコリシン １ｕｎｉｔ／ｌ１ｉ（！を含何する１、５
輪Ｑのｌ、−培地で定常期まで培養した。’ Ｍａｎｉ
ａｔｉｓらの方法（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎ
ｇ（１９８２））でこの大腸菌よりプラスミドを抽出し
、このプラスミドを１０ｍＭ ）リス塩酸（ｐＨ８，ｏ
）、１ａ＋ＭＥＤＴ＾からなる溶液１００μＱに２．５
０Ｄとなるように溶解し、この溶液よりプラスミド２．
００Ｄ相当量を取り、ＥｃｏＲＩ ６０ ｕｎｉｔと混
合し、ＢＲＬマニュアル記載の反応溶液１００μｇ中で
３７℃、３時間反応させ、５００＋ａＭ ＥＤＴＡＩＯ
μＱをくわえて、反応終了後、０．３％酢酸ナトリウム
存在下、２倍量のエタノールでＤＮＡを沈澱させた。こ
のＤＮＡを１．２％アガロースゲル電気泳動に付し、２
．２ｋｂの７ラグメントを得た。Ｄｕｍａｉｓらのゲル
内ライゲーション法（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、５
゜６２−６７（１９８７））により、このフラグメント
とあらかじめＥｃｏＲＩ消化し、牛小腸ホスファターゼ
で処理したｐｕｃ １９ベクターをライゲーションし、
このライゲーション混合物１０ｐＱをＥ、ｃｏｌ ｉ
ＤＩＩ５ａ ５０ｕ１２にトランスフオームし、５０μ
ｇ／ｌｌ１１２アンピシリン、２％Ｘ−Ｇａ１５０μＱ
を含有するし一培地プレートに撒いた。
白色のコロニーとして、プラスミドを含む菌を得、これ
らのうちから、サイン法により、ｐｕｃ １９にＲＲＦ
の遺伝子を含む２．２ｋｂのプラスミドの組み込まれた
プラスミド（ｐＲＲｌ）を含む菌（Ｄ１１５ａ／ｐＲＲ
１）を得た。この菌を培養し、Ｃａ５ｋｅｙらの方法（
Ｊ。
らのうちから、サイン法により、ｐｕｃ １９にＲＲＦ
の遺伝子を含む２．２ｋｂのプラスミドの組み込まれた
プラスミド（ｐＲＲｌ）を含む菌（Ｄ１１５ａ／ｐＲＲ
１）を得た。この菌を培養し、Ｃａ５ｋｅｙらの方法（
Ｊ。
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、 、 １５８．３６５−３６８（
１９８４））で調製した菌体分解物の総蛋白をＳＤＳ電
気泳動に付し、ゲルをクマシプルー染色し、Ｂｒａｄｆ
ｏｒｄの方法（＾ｎａｌ。
１９８４））で調製した菌体分解物の総蛋白をＳＤＳ電
気泳動に付し、ゲルをクマシプルー染色し、Ｂｒａｄｆ
ｏｒｄの方法（＾ｎａｌ。
旧ｏｃｈｅｍ、 、７２，２４８−２５４）で定量した
。ここで、大腸菌の総蛋白の７０％以上がＲＲＦであっ
た。
。ここで、大腸菌の総蛋白の７０％以上がＲＲＦであっ
た。
更に、上記の２．２ｋｂのフラグメントのうちのＳａ＋
ａｌおよびＥｃｏＲＩ消化フラグメント（０，９ｋｂ）
を同様にｐＵｃ１９ベクターにライゲーションしてトラ
ンスフオームした場合は、大腸菌の総蛋白の９０％以上
がＲＲＦであった。
ａｌおよびＥｃｏＲＩ消化フラグメント（０，９ｋｂ）
を同様にｐＵｃ１９ベクターにライゲーションしてトラ
ンスフオームした場合は、大腸菌の総蛋白の９０％以上
がＲＲＦであった。
これらの大腸菌の抽出液のＲＲ’Ｆ活性を測定したとこ
ろ、通常の大腸菌に比べ圧倒的に高いＲＲＦ活性が認め
られた。
ろ、通常の大腸菌に比べ圧倒的に高いＲＲＦ活性が認め
られた。
３、ＲＲＦの精製
この菌体液より、本発明者等の報告
（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、ｌｌ、４０３７−４０４
４（１９７２）） したポリゾームを用いたＲＲＦ’活
性のアッセイ方法をｍｍとして、ＤＩ１５ａ／１）ＲＲ
ｌの菌体溶出液より、本発明者等の報告（Ｂｉｏｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ、 １１．４’０３７−４０４４（１９７
２））した精製方法でＲＲＦ蛋白（分子量約２０．００
０ダルトン）を精製した。
４（１９７２）） したポリゾームを用いたＲＲＦ’活
性のアッセイ方法をｍｍとして、ＤＩ１５ａ／１）ＲＲ
ｌの菌体溶出液より、本発明者等の報告（Ｂｉｏｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ、 １１．４’０３７−４０４４（１９７
２））した精製方法でＲＲＦ蛋白（分子量約２０．００
０ダルトン）を精製した。
４ＤＮ＾シークエンスの解析
支た、ＰＲＲＩを制限酵素ＥｃｏＲＩ、５ｅａｌ、５ａ
ｕ３ＡＩおよび８％目で消化してえられたフラグメント
についてジデオキシ法によりＤＮＡＮ−シークエン析を
行ったところ、ＲＲＦの開始コドンから終止コドンまで
のＤＮＡシークエンスは、 ５°−ＧＴＧＡＴＴＡＧＣＧＡＴＡＴＣＡＧＡＡＡＡＧ
ＡＴＧＣＴＧＡＡＧＴＡＣＧＣＡＴＧＧＡＣＡＡＡＴＣ
ＣＧＴＡＧＡＡＧＣＧＴＴＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＡＴＣ
ＡＧＣＡＡＡＡＴＡＣＧＣＡＣＧＧＧＴＣＧＴＧＣＴＴ
ＣＴＣＣＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＧＡＴＧＧＣＡＴＴＧＴ
ＣＧＴＧＧＡＡＴＡＴＴＡＣＧＣＣＡＣＧＣＣＧＡＣＧ
ＣＣＧＣＴＧＣＧＴＣＡＧＣＴＧＧＣＡＡＧＣＧＴＡＡ
ＣＧＧＴＡＧＡＡＧＡＴＴＣＣＣＧＴＡＣＡＣＴＧＡＡ
ＡＡＴＣＡＡＣＧＴＧＴＴＴＧＡＴＣＧＴＴＣＡＡＴＧ
ＴＣＴＣＣＧＧＣＣＧＴＴＧＡＡＡＡＡＧＣＧＡＴＴＡ
ＴＧＧＣＧＴＣＣＧＡＴＣＴＴＧＧＣＣＴＧＡＡＣＣＣ
ＧＡＡＣＴＣＴＧＣＧＧＧＴＡＯＣＧＡＣ＾ＴＣＣＯＴ
ＧＴＴＣＣＧＣＴＧＣＣＧＣＣＧＣＴＧＡＣＯＧＡＡＧ
ＡＡＣＧＴＣＧＴＡＡＡＧＡＴＣＴＧＡＣＣＡＡＡＡＴ
ＣＧＴＴＣＧＴＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＡＣＡＡＧＣＧ
ＣＧＴＣＴＴＧＣＡＧＴＡＣＧＴＡＡＣＧＴＧＣＧＴＣ
ＧＴＧＡＣＧＣＧＡＡＣＧＡＣＡＡＡＧＴＧ ＡＡＡＧ
ＣＡＣＴＧＴＴＧＡＡＡＧＡＴＡＡＡＧＡＧＡＴＣＡＧ
ＣＧＡＡＧＡＣＧＡＣＧＡＴ（：ＧＣＣＧＴＴＣＴＣＡ
ＧＧＡＣＧＡＴＧＴＡＣＡＧＡＡＡＣＴＧＡＣＴＧＡＴ
ＧＣＴＧＣＡＡＴＣＡＡＧＡＡＡＡＴＴＧＡＡＧＣＧＧ
ＣＧＣＴＧＧＣＡＧＡＣＡＡＡＧＡＡＧＣＡＧ＾＾ＣＴ
ＧＡＴＧＣＡＧＴＴＣＴＧＡ の（５５８塩基）であり、そのＤＮＡシークエンスに対
応するアミノ酸シークエンスは、 ＭｅｔＩ １ｅｓｅｒＡｓｐｌ ＩｅＡｒｇＬｙｓＡｓ
ｐＡｌａＧＩｕＶａｌＡｒｇＭｅｔＡｓｐＬｙｓＣｙｓ
ＶａｌＧｌｕＡｌａＰｈｅＬｙｓＴｈｒＧｌｎｌｌｅＳ
ｅｒＬｙｓｌｌｅＡｒｇＴｈｒＧ１ｙＡｒｇＡｌａＳｅ
ｒＰｒｏＳｅｒＬｅｕＬｅｕＡｓｐＧ１ｙｌｌｅＶａｌ
ＶａｌＧＩｕＴｙｒＴｙｒＧｌｙＴｈｒＰｒｏＴｈｒＰ
ｒｏＬｅｕＡｒｇＧｌｎＬｅｕＡｌａＳｅｒＶａｌＴｈ
ｒＶａｌＧｌｕＡｓｐＳｅｒ＾ｒｇＴｈｒＬｅｕＬｙｓ
ｌｌｅＡｓｎＶａｌＰｈｅ＾ｓｐＡｒｇＳｅｒＭｅｔＳ
ｅｒＰｒｏＡｌａＶａｌＧｌｕＬｙｓＡｌａｌｌｅＭｅ
ｔＡｌａＳｅｒＡｓｐＬｅｕＧｌｙＬｅｕＡｓｎＰｒｏ
ＡｓｎＳｅｒＡＩａＧｌｙＳｅｒＡｓｐｌ ｌｅＡｒｇ
ＶａｌＰｒｏＬｅｕＰｒｏＰｒｏＬｅｕＴｈｒＧｌｕＧ
ｌｕＡｒｇＡｒｇＬｙｓＡｓｐＬｅｕＴｂｒＬｙｓｌｌ
ｅＶａｌＡｒｇＧｌｙＧｌｕＡｌａＧｌｕＧｌｎＡｌａ
ＡｒｇＶａｌＡｌａＶａｌＡｒｇＡｓｎＶａｌＡｒｇＡ
ｒｇＡｓｐＡＩａＡｓｎＡｓｐＬｙｓＶａｌＬｙｓ＾１
ａＬｅｕＬｏｕＬｙｓＡｓｐＬｙｓＧＩｕｌ ＩｅＳｅ
ｒＧｌｕＡｓｐＡｓｐＡｇｐＡｒｇＡｒｇＳｅｒＧｌｎ
ＡｓｐＡｓｐＶａＩＧｌｎＬｙｓＬｅｕＴｈｒＡｓｐ＾
１ａＡｌａｌｌｅＬｙｓＬｙｓＩ ｌｅＧｌｕＡｌａＡ
ｌａＬｅｕＡｌａＡｓｐＬｙｓＧｌｕＡｌａＧｌｕＬｅ
ｕＭｅｔＧｌｎＰｈｅ であり、１８５アミノ酸、分子ｆｆｌ ２０．６３９で
あることが確認され、上記で得られた蛋白に対応するも
のであった。
ｕ３ＡＩおよび８％目で消化してえられたフラグメント
についてジデオキシ法によりＤＮＡＮ−シークエン析を
行ったところ、ＲＲＦの開始コドンから終止コドンまで
のＤＮＡシークエンスは、 ５°−ＧＴＧＡＴＴＡＧＣＧＡＴＡＴＣＡＧＡＡＡＡＧ
ＡＴＧＣＴＧＡＡＧＴＡＣＧＣＡＴＧＧＡＣＡＡＡＴＣ
ＣＧＴＡＧＡＡＧＣＧＴＴＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＡＴＣ
ＡＧＣＡＡＡＡＴＡＣＧＣＡＣＧＧＧＴＣＧＴＧＣＴＴ
ＣＴＣＣＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＧＡＴＧＧＣＡＴＴＧＴ
ＣＧＴＧＧＡＡＴＡＴＴＡＣＧＣＣＡＣＧＣＣＧＡＣＧ
ＣＣＧＣＴＧＣＧＴＣＡＧＣＴＧＧＣＡＡＧＣＧＴＡＡ
ＣＧＧＴＡＧＡＡＧＡＴＴＣＣＣＧＴＡＣＡＣＴＧＡＡ
ＡＡＴＣＡＡＣＧＴＧＴＴＴＧＡＴＣＧＴＴＣＡＡＴＧ
ＴＣＴＣＣＧＧＣＣＧＴＴＧＡＡＡＡＡＧＣＧＡＴＴＡ
ＴＧＧＣＧＴＣＣＧＡＴＣＴＴＧＧＣＣＴＧＡＡＣＣＣ
ＧＡＡＣＴＣＴＧＣＧＧＧＴＡＯＣＧＡＣ＾ＴＣＣＯＴ
ＧＴＴＣＣＧＣＴＧＣＣＧＣＣＧＣＴＧＡＣＯＧＡＡＧ
ＡＡＣＧＴＣＧＴＡＡＡＧＡＴＣＴＧＡＣＣＡＡＡＡＴ
ＣＧＴＴＣＧＴＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＡＣＡＡＧＣＧ
ＣＧＴＣＴＴＧＣＡＧＴＡＣＧＴＡＡＣＧＴＧＣＧＴＣ
ＧＴＧＡＣＧＣＧＡＡＣＧＡＣＡＡＡＧＴＧ ＡＡＡＧ
ＣＡＣＴＧＴＴＧＡＡＡＧＡＴＡＡＡＧＡＧＡＴＣＡＧ
ＣＧＡＡＧＡＣＧＡＣＧＡＴ（：ＧＣＣＧＴＴＣＴＣＡ
ＧＧＡＣＧＡＴＧＴＡＣＡＧＡＡＡＣＴＧＡＣＴＧＡＴ
ＧＣＴＧＣＡＡＴＣＡＡＧＡＡＡＡＴＴＧＡＡＧＣＧＧ
ＣＧＣＴＧＧＣＡＧＡＣＡＡＡＧＡＡＧＣＡＧ＾＾ＣＴ
ＧＡＴＧＣＡＧＴＴＣＴＧＡ の（５５８塩基）であり、そのＤＮＡシークエンスに対
応するアミノ酸シークエンスは、 ＭｅｔＩ １ｅｓｅｒＡｓｐｌ ＩｅＡｒｇＬｙｓＡｓ
ｐＡｌａＧＩｕＶａｌＡｒｇＭｅｔＡｓｐＬｙｓＣｙｓ
ＶａｌＧｌｕＡｌａＰｈｅＬｙｓＴｈｒＧｌｎｌｌｅＳ
ｅｒＬｙｓｌｌｅＡｒｇＴｈｒＧ１ｙＡｒｇＡｌａＳｅ
ｒＰｒｏＳｅｒＬｅｕＬｅｕＡｓｐＧ１ｙｌｌｅＶａｌ
ＶａｌＧＩｕＴｙｒＴｙｒＧｌｙＴｈｒＰｒｏＴｈｒＰ
ｒｏＬｅｕＡｒｇＧｌｎＬｅｕＡｌａＳｅｒＶａｌＴｈ
ｒＶａｌＧｌｕＡｓｐＳｅｒ＾ｒｇＴｈｒＬｅｕＬｙｓ
ｌｌｅＡｓｎＶａｌＰｈｅ＾ｓｐＡｒｇＳｅｒＭｅｔＳ
ｅｒＰｒｏＡｌａＶａｌＧｌｕＬｙｓＡｌａｌｌｅＭｅ
ｔＡｌａＳｅｒＡｓｐＬｅｕＧｌｙＬｅｕＡｓｎＰｒｏ
ＡｓｎＳｅｒＡＩａＧｌｙＳｅｒＡｓｐｌ ｌｅＡｒｇ
ＶａｌＰｒｏＬｅｕＰｒｏＰｒｏＬｅｕＴｈｒＧｌｕＧ
ｌｕＡｒｇＡｒｇＬｙｓＡｓｐＬｅｕＴｂｒＬｙｓｌｌ
ｅＶａｌＡｒｇＧｌｙＧｌｕＡｌａＧｌｕＧｌｎＡｌａ
ＡｒｇＶａｌＡｌａＶａｌＡｒｇＡｓｎＶａｌＡｒｇＡ
ｒｇＡｓｐＡＩａＡｓｎＡｓｐＬｙｓＶａｌＬｙｓ＾１
ａＬｅｕＬｏｕＬｙｓＡｓｐＬｙｓＧＩｕｌ ＩｅＳｅ
ｒＧｌｕＡｓｐＡｓｐＡｇｐＡｒｇＡｒｇＳｅｒＧｌｎ
ＡｓｐＡｓｐＶａＩＧｌｎＬｙｓＬｅｕＴｈｒＡｓｐ＾
１ａＡｌａｌｌｅＬｙｓＬｙｓＩ ｌｅＧｌｕＡｌａＡ
ｌａＬｅｕＡｌａＡｓｐＬｙｓＧｌｕＡｌａＧｌｕＬｅ
ｕＭｅｔＧｌｎＰｈｅ であり、１８５アミノ酸、分子ｆｆｌ ２０．６３９で
あることが確認され、上記で得られた蛋白に対応するも
のであった。
Claims (3)
- （１）下記のアミノ酸配列 【遺伝子配列があります。】 からなる新規ペプチド。
- （２）下記のアミノ酸配列 【遺伝子配列があります。】 からなるペプチドをコードする新規ＤＮＡ。
- （３）下記のアミノ酸配列 【遺伝子配列があります。】 【遺伝子配列があります。】 からなるペプチドをコードする新規ＤＮＡが【遺伝子配
列があります。】 【遺伝子配列があります。】 である新規ＤＮＡ。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1135781A JP2844346B2 (ja) | 1989-05-31 | 1989-05-31 | 新規ペプチドならびに新規ｄｎａ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1135781A JP2844346B2 (ja) | 1989-05-31 | 1989-05-31 | 新規ペプチドならびに新規ｄｎａ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03200797A true JPH03200797A (ja) | 1991-09-02 |
| JP2844346B2 JP2844346B2 (ja) | 1999-01-06 |
Family
ID=15159702
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1135781A Expired - Fee Related JP2844346B2 (ja) | 1989-05-31 | 1989-05-31 | 新規ペプチドならびに新規ｄｎａ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2844346B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998037202A1 (fr) * | 1997-02-24 | 1998-08-27 | Akira Kaji | Isolation de genes de facteur recyclant les ribosomes et determination des structures primaires de genes de facteur recyclant les ribosomes de pseudomonas aeruginosa et d'une autre bacterie |
| JP2015503524A (ja) * | 2011-12-22 | 2015-02-02 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | イオン交換膜クロマトグラフィー |
-
1989
- 1989-05-31 JP JP1135781A patent/JP2844346B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998037202A1 (fr) * | 1997-02-24 | 1998-08-27 | Akira Kaji | Isolation de genes de facteur recyclant les ribosomes et determination des structures primaires de genes de facteur recyclant les ribosomes de pseudomonas aeruginosa et d'une autre bacterie |
| JP2015503524A (ja) * | 2011-12-22 | 2015-02-02 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | イオン交換膜クロマトグラフィー |
| US10364268B2 (en) | 2011-12-22 | 2019-07-30 | Genentech, Inc. | Ion exchange membrane chromatography |
| JP2020040952A (ja) * | 2011-12-22 | 2020-03-19 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | イオン交換膜クロマトグラフィー |
| US11945837B2 (en) | 2011-12-22 | 2024-04-02 | Genentech, Inc. | Ion exchange membrane chromatography |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2844346B2 (ja) | 1999-01-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2686090B2 (ja) | 新規融合蛋白質およびその精製方法 | |
| RU2093519C1 (ru) | Способ энзиматического получения основного фактора роста фибробластов bfgf (10 - 155) и фармацевтическая композиция на его основе | |
| EP1220933B1 (en) | Purification of recombinant proteins fused to multiple epitopes | |
| CN116622795B (zh) | L-氨基酸连接酶的制备方法及其在二肽合成上的应用 | |
| WO1989006239A1 (en) | Elastase inhibiting polypeptides and process for their preparation by genetic recombination | |
| Aitken et al. | Amino and carboxy terminal sequences of the DNA-binding protein HU from the Cyanobacterium Synechocystis PCC 6701 (ATCC 27170) | |
| JPH03200797A (ja) | 新規ペプチドならびに新規ｄｎａ | |
| Jeong et al. | Expression of antihypertensive peptide, His-His-Leu, as tandem repeats in Escherichia coli | |
| CN113201074B (zh) | 一种pkek融合蛋白及制备方法与应用 | |
| CN112759653A (zh) | 一种pkek融合蛋白及其制备方法与应用 | |
| RU2122549C1 (ru) | Способ хроматографического выделения и очистки белков, пептидов и их комплексов | |
| CN114990097B (zh) | L-天冬氨酸-α-脱羧酶突变体及其应用 | |
| KR100535265B1 (ko) | 융합 단백질로부터 목적 단백질을 분리하는 방법 | |
| Fassina et al. | High yield expression and purification of human endothelin-1 | |
| CN111349623B (zh) | 9°n dna聚合酶突变体 | |
| JPS61291598A (ja) | 魚類カルシトニン誘導体及びその製造方法 | |
| JPH04316488A (ja) | 大腸菌による蛋白分泌生産の方法 | |
| KR100818982B1 (ko) | 혈압강하 펩타이드를 생산하는 형질전환 대장균 및 이를이용한 혈압강하 펩타이드의 대량 생산 방법 | |
| CN117417459A (zh) | 一种高酯键形成效率的Catcher/Tag肽连接体 | |
| CN116082471A (zh) | 一种Cth TerA内含肽变体及其在生物法制备四肽-7中的应用 | |
| JPS63263085A (ja) | ヒトインスリン様成長因子ｉを製造する方法 | |
| JPH04187091A (ja) | ジヒドロ葉酸還元酵素―抗アレルギー性ペンタペプチド多量体の融合タンパク質 | |
| JPH04117284A (ja) | ジヒドロ葉酸還元酵素―抗アレルギー性ペンタペプチド融合タンパク質 | |
| JPH01256390A (ja) | 新規ｄｎａとその生産方法、それを有する新規プラスミド、新規ポリペプチドとその生産方法、及び該ポリペプチドからなる新規抗腫瘍剤 | |
| JPH0466600A (ja) | ヒトβ神経成長因子を含む融合蛋白質 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |