JPH03200796A - 神経栄養ペプチド誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、医薬として有用な神経栄養ペプチド誘導体、
および該誘導体を用いた神経変性疾患治療剤に関するも
のである。

〔従来の技術〕

神経栄養因子は、神経末端の標的組織、グリャ細胞や血
流から供給されるものである。その作用としては神経細
胞の生存・維持、神経突起の伸長の促進および神経伝達
物質の合成酵素を誘導する作用が認められている。特に
長い投射路を持つニューロンのネットワークの形成や維
持においては、標的細胞からの神経栄養因子の供給が不
可欠なものであると考九られており、投射ニューロン系
の変性・脱落と神経学的疾患との関連が明らかにされて
きている。代表的な例としては、前脳基底野−新皮質海
馬のコリン性神経系の変性・脱落とアルツハイマー型痴
呆、黒貿−線条体のドーパミン性神経系の変性・脱落と
パーキンソン病、を髄運動神経系の変性・脱落と筋萎縮
性側索硬化症との関係が挙げられる。これらの神経の変
性・脱落、つまり疾患の原因としては、標的細胞由来の
神経栄養因子の不足や欠如が原因ではないかと推定され
ており、神経栄養因子補充による神経変性疾患の治療の
可能性が示唆されている〔アラペル（Ａｐｐｅｌ、　Ｓ
、　Ｈ，）アナルス・オブ・ニューロロジー（＾ｎｎ、
　Ｎｅｕｒａｌ、　）　１０巻、４９９頁、　　（１９
８１）　］。

現在までに、神経栄養因子の存在が数多く確認されてい
るが、単離され一次構造が明らかにされている神経栄養
因子としては神経成長因子（Ｎｅｒνｅ　ｇｒｏｗｔｈ
　ｆａｃｔｏｒ、ＮＧＦ）と脳由来神経栄養因子（ｅｒ
ａｉｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ　ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ　
ｆａｃｔｏｒ、ＢＤＮＦ）がある。

ＮＧＦは、α、β、γ、の３つの異なるサブユニットか
らなり、構成比はα２βＴ、で３サブユニツトのうち、
βＮＧＦのみが生理活性を示している〔バｏ　−ン（Ｖ
ａｒｏｎ　Ｓ、　ｅｔ　ａｔ、ンバイオケミストリー　
（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）　　７巻１２９６頁（１
９６８）　）。

マウスβＮＧＦの一次構造は１９７１年にアンゲレッテ
イとブラッドショー（Ａｎｇｅｌｅｔｔｉ　＆　Ｂｒａ
ｄｓｈｏｗ）によって決定され、アミノ酸の総数１１８
個（分子量１３２５９）の蛋白質である〔アンゲレッテ
ィとブラッドショー（Ａｎｇｅｌｅｔｔｉ　＆　Ｂｒａ
ｃｆｓｈｏｗ）プロシーデインゲス・オブ・ナショナル
・アカデミ−・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ
ｌ、＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＬＩＳ＾）６８巻２４１７頁
（１９７１）　）。ＮＧＦは末梢神経系では交感神経系
と知覚神経系に存在しており、中枢神経系でもコリン作
動性ニューロン系に見出されている〔コルシイング（Ｋ
ｏｒｓｃｈｉｎｇ　Ｓ、ｅｔ　ａｌ、）ニューロサイエ
ンス・レター（Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、Ｌｅｔｔ、）５４巻
　２０１頁（１９８５）　）　　Ｃコルシイング（Ｋ。

ｒｓｃｈｉｎｇ　Ｓ、ｅｔ　ａｌ、）ｚンボ・ジャーナ
ル（６１８０Ｊ。

）４巻１３８９頁（１９８５）　）。

ＢＤＮＦはテーネン（Ｔｈｏｅｎｏｎ）らによりブタの
脳から、胎児抜根神経節の感覚神経の生存を維持する神
経栄養因子として精製され、その−次構造は最近パルプ
（Ｂａｒｄｅ）らにより明らかにされた。それによると
ブタのＢＤＮＦはアミノ酸の総数１１９個（分子１１１
３５１１）の蛋白質でＮＧＦと非常に類似性が高いこと
が示されている〔パルプ（Ｂａｒｄｅ　Ｙ、＾、ｅｔ　
ａｌ。

）エンボ・ジャーナル（εＭＢＯＪ、　）１巻５４９頁
（１９８２）〕〔レイブロック（Ｌｅｉｂｌｏｃｋ　Ｊ
、ｅｔ　ａｌ、）ネイチ＋　−（Ｎａｔｕｒｅ）　３４
１巻　１４９頁（１９Ｂ９））。

次に、−次構造−は明らかにされていないが、その特徴
が調べられている神経栄養因子としては、毛様体神経栄
養因子（ＣＮＴＦ）がある。ＣＮＴＦはマンソープ（Ｍ
ａｎｔｈｏｒｐｅ）らにより、ニワトリ胎児の眼球から
精製された副交感神経節（毛様体神経節）の細胞に対し
て生存維持に作用する神経栄養因子である。分子量は２
０４００ダルトンで等電点は約５である〔マンソープ（
Ｍａｎｔｈｏｒｐｅ　Ｍ、ｅｔ　ａｌ、）ジャーナル・
オブ・ニューロケミストリー（Ｊ、Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ
、）　　３４巻６９頁（１９８０）　）　　（マンソー
プ（Ｍａｎｔｈｏｒｐｅ　Ｍ、ｅｔ　ａｔ、）ジャーナ
ル０オブ０二５−〇サイエンス・リサーチ（Ｊ、　Ｎｅ
ｕｒｏｓｃｉ、　Ｒｅ５）ｓｙ２３３頁（１９Ｂ２）　
）　　［７ンソープ（Ｍａｎｔｈｏｒｐｅ　　Ｍ。

６ｔａ１．）フェデレーション・プロシーデインゲス（
Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ　Ｐｒｏｃ、）　　４４巻２７５
３頁（１９８５）　］。

ＣＮＴＦはまだ一次構造およびイン・ビボの効果に関し
ては報告されていない。

一方、未だ精製されていないが、上記３種の神経栄養因
子以外にも種々の神経栄養因子が報告されている。その
うち、海鳥由来あるいは海馬、中隔核に作用する神経栄
養因子としては、下記のもの等が報告されている。

■新生ラット　（２〜３週令）の海馬組織より部分精製
されている神経栄養因子（小鹿他（Ｏｊｉｋａに。

ｅｔａｌ、）プロシーデインゲス・オブ・ナショナＪし
・アカデミ−・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ
、＾Ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ｕｓ＾）８１巻２５６７頁（
１９８４）　］、〔アアラペル（Ａｐｐｅｌ　Ｓ、　Ｈ
，）特開昭５８−１５４５１４］、〔小鹿幸生。

薬物・精神・行動（Ｊｐｎ、　Ｊ、　Ｐｓｙｃｏｐｈａ
ｍａｃｏｌｏｇｙ）７巻４４７頁（１９Ｂ？）　］　： その可溶性成分は海鳥組織に比較的特異的に存在し、培
養中隔中心核コリン作動性神経の発育を促進する。部分
精製の結果、分子量約９００ダルトンのポリペプチドで
あることが報告されている。

本因子の活性はＮＧＦ抗体の添加により阻害されないこ
とから、ＮＧＦとは異なっていると考えられている〔ポ
スドウ４”／り（Ｂｏｓｔｗｉｃｋ　Ｊ、Ｒｌｅｔ　ｅ
Ｉ）ブレーン・リサーチ（Ｂｒａｉｎ　Ｒｅ５ｅａｒｃ
ｈ）　４２２巻９２頁（１９８７）　］。

■新生ラット脳のアストロサイトの条件培地から分離さ
れた神経栄養因子〔ミュラー（Ｍｕｌｌｅｒ　ＨｏＩＩ
。

ｅｔ　ａｔ、）プロシーデインダス・オブ・ナショナル
・アカデミ−・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ
＋。

＾ｃａｄ、Ｓｃｉ、ＬＩＳ＾）８１巻１２４８頁（１９
８４）　）　　：セファデックスＧ１００のゲル濾過カ
ラムの溶出位置から分子量的５００と推定され、トリプ
シンおよびプロナーゼ処理により活性が消失しないこと
から、非蛋白性因子と考えられている。

■脳弓采（ｆｉｍｂｒｉａ　ｆｏｒｎｉｃｓ）切断１４
日後のラット海鳥抽出液より部分精製された神経栄養因
子〔吉田−成、座直医学６５巻１号４５頁’（１９８Ｂ
）：〕 ゲル濾過の結果、１万〜２万、３万〜４万、５万〜６万
ダルトンの分子量の３種の因子が報告されている。

■ラット海鳥組織より抽出された神経栄養因子〔ヒーコ
ック（Ｈｅａｃｏｃｋ＾０Ｍ　　ｅｔ　ａｌ、）ブレー
ン・リサーチ（Ｂｒａｉｎ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）　３６
３巻２９９頁（１９８６）　］　　： ニワトリ毛様体神経節細胞の生存を維持する活性を有す
る。分子量は１００００以上の酸性蛋白質である。

このように、これらの海鳥由来あるいは海鳥、中隔核に
作用する神経栄養因子は蛋白性因子や非蛋白性因子とし
て報告されているが、いずれも単離、精製されておらず
、−次構造も明らかにされていない。

更に、単離され、−次構造が明らかになっているＮＧＦ
とＢＤＮＦはいずれも分子量１３２５９と　１３５１１
の蛋白性因子であり、単離されその特徴が調べられてい
るＣＮＴＦも２０４００ダルトンの蛋白質であることか
ら、これらを神経変性疾患治療剤として使用する場合、
Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙや製造面での問題が考
えられる。そこでより低分子量のペプチド性神経栄養因
子、さらに同様の薬理作用を有するその誘導体の開発が
望まれていた。

〔発明が解決しようとする課題〕

本発明は上記従来の課題を解決するものである。

即ち、本発明の第１の目的は、コリナージ′ツク・ニュ
ーロンのアセチルコリン合成能増大活性を有する、新規
な神経栄養ペプチド誘導体を提供することである。

本発明の第２の目的は新規な神経変性疾患治療剤を提供
することである。

〔課題を解決するための手段〕

前記課題を解決するため種々の研究が行われ、本発明に
先だってすでに小腹は、独自のアッセイ系と精魁法を用
いて、新規な神経栄養ペプチドの単離、精製、構造決定
に成功していた（特願平ｌ−８０３９８）。この神経栄
養ペプチドは、海鳥組織の水溶性画分より単離精製され
た、コリナージック・ニューロンのアセチルコリン合成
能を増大させるペプチド性の神経栄養因子であり、以下
のアミノ酸配列構造を有するものであった。

ｃｏ＊ｃｏ−（又はＨ−）＾１ｍ−＾１ａ−＾５ｐ−１
１ｅ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｇｌｙ−Ｐｒ
ｏ−Ｌｅｕ−ロＨ〔以下、この神経栄養ペプチドをＨＣ
ＮＰ　（旧ｐｐｏｃａｍｐａｌ　Ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉ
ｃ　Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ　Ｐｅｐｔｉｄｅ）と略
称する場合がある。〕 本発明者らは、さらに研究を重ねた結果、意外にもＨＣ
ＮＰの部分ペプチド、並びにＨＣＮＰやその部分ペプチ
ドのＮ末端、Ｃ末端を修飾した誘導体も海鳥より抽出し
たＨＣＮＰとほぼ同様のＨＣＮＰ活性を有することを見
出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は、下記の一般式（Ｉ）で表されるア
ミノ酸配列の全部または一部のペプチド鎖からなるコリ
ナージック・ニューロンのアセチルコリン合成能増大活
性を有するペプチド、またはそのＮ末端及び／又はＣ末
端を修飾してなる誘導体（但し、Ｈ−＾１ａ−＾１ａ−
＾５ｐ−１１ｅ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｇ
ｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−ＯＨおよびＣ１１３ＣＯ−＾１
ａ−＾ｌト＾５ｐ−Ｉ　Ｉｅ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ
−＾１ａ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−０１４を除く〉Ｔ
ｒｐ−＾１ａ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕおよび、上記神
経栄養ペプチド誘導体を有効成分として含有する神経変
性疾患治療剤、または抗痴呆剤を提供するものである。

以下、本発明の神経栄養ペプチド銹導体についてさらに
詳細に説明する。本発明の神経栄養ペプチド誘導体とは
断片化、Ｎ末端の修飾またはＣ末端の修飾という３種の
誘導化方法を単独であるいは組み合わせて用いることに
より、脱化合物である神経栄養ペプチド（ＨＣＮＰ）の
構造を修飾あるいは変換したペプチド性誘導体を意味す
る。

さらに詳細には、下記の一般式（ｎ）で表される直鎮の
ペプチド性誘導体を意味する。

Ｘ−Ｚ−Ｙ　　　　　　　　　（ＩＩ）Ｘは、Ｈ１１種
アシル基あるいは各種スルホニル基等であり、代表的な
ものを例示すると、Ｈまたは、 Ｒ’ａ Ｒ’ｂ−Ｃ−ＣＯ− Ｒ’ｃ 〔式中、Ｒ’ａはＨ１非置換または置換アルキル。

アミノ、モノもしくはジＣ＋　　Ｃｍアルキルアミノ、
ヒドロキシ、　　−ＣＯ２Ｈ，グアニジノ、　　Ｃ，−
ｃ、アルキルグアニジノ、アリール、Ｃ，−Ｃ，アルコ
＋’ｉ、　ハｏ、　Ｎ（Ｒ’）３Ａ　　ＣＲ’　ｌｔｃ
＋　−Ｃ４フルキルであり、Ａは１価の負イオン類から
なる群より選択される対イオンである。］　、−ＣＯＮ
Ｒ’Ｒ’［Ｒ’およびＲ４は各々独立にＨまたはＣＩ　
　Ｃ、アルキルである。〕またはへテロ環であり、Ｒｌ
ｂはＨ３非置換または置換アルキルまたはハロであり、
Ｒ’ｃはＨ，Ｃ＋　　Ｃ４アルキルまたはハロである。

〕 〔式中、Ｒ’ａはＨ，ＣＩ　　Ｃ４アルキルまたはアリ
ールであり、Ｒ’ｂはＨまたはＣｔ　　Ｃ４アルキルで
ある。〕 または、　　Ｒ１−○−ＣＯ− 〔式中、Ｒ６はＣ，−Ｃ，アルキルまたはアリールであ
る。〕　； または、　　　Ｒ’　−ＣＯ− 〔式中、Ｒ７はＨ，アリールまたはへテロ環である。〕 または、　　　Ｒ＠−３○、− 〔式中、Ｒ＠は非置換または置換アルキルまたはアリー
ルである。〕などが挙げられる。

ＹはＯＨ，各種アミド基あるいは各種エステル基等であ
り、代表的なものを例示すると、−Ｎ　−Ｒ”ａ Ｒ”ｂ 〔式中、Ｒ”ａはＨ２非置換または置換アルキル。

ヒドロキシ、アリールまたはへテロ環であり、Ｒｓｂは
Ｈまたは非置換または置換アルキルである。〕または、
　　　−０−Ｒ’。

〔式中、Ｒ１はＨ１非置換または置換アルキル。

アリールま７たはへテロ環である。〕 〔式中、ＲＩＩａ及びＨｚｂはＮと共に含窒素飽和へテ
ロ環を形成する。〕などが挙げられる。

Ｚは、ＩＩｃＮＰのアミノ酸配列（＾Ｉａ−＾１ａ−＾
５ｐ−１１ｅ−３ｅｒ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｇ　
１ｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ）のＮ末端側よりアミノ酸残基を
減じる断片化、Ｃ末端側よりアミノ酸残基を減じる断片
化あるいはＮ末端側、Ｃ末端側の両側よりアミノ酸残基
を減じる断片化のいずれかにより得られる、２残基以上
、通常、３残基以上のアミノ酸からなるＨＣＮＰの部分
アミノ酸配列もしくは、ＨＣＮＰの全アミノ酸配列であ
る。特に好ましくは、ＨＣＮＰの７位に位置するＴｒｐ
残基を含み、−紋穴Ｚ’　−Ｔｒｐ　−Ｚ”　　ＣＺ’
はＡｌａ−＾１ａ−＾５ｐ−Ｉｔｅ−Ｓｅｒ−Ｇｉｎ、
＾１ａ−Ａｓｐ−１１ｅ−Ｓｅｒ−Ｇｉｎ、　Ａｓｐ−
１１ｅ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ、　ｌ１ｅ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ、
　５ｅｒ−Ｇｌｎ、　Ｇｌｎまたは単結合を表し、Ｚ２
は＾１ａ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ、　Ａｌａ−Ｇｌｙ
−Ｐｒｏ、＾Ｉａ−Ｇｌｙ、　Ａｌａまたは単結合を表
す。但し、Ｚｌが単結合である場合に、Ｚ２は単結合で
はあり得ない。〕で表されるアミノ酸配列である。さら
に特に好ましい配列部分の代表例を列挙すると、 Ａｌａ−Ａｌａ−＾５ｐ−１１ａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｔ
ｒｐ−＾１ａ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ；＾１ａ−Ａｌ
ａ−Ａｓｐ−１１ｅ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ
−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ；＾１ａ−Ａｌａ−＾５ｐ−１１ｅ−
９ｅｒ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｇｌｙ；Ａｌａ−八
ｌａ−八５ｐ＝１１ｅ−Ｓｅｒ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−＾ｌ
ａ；＾１ａ−Ａｌａ−Ａｓｐ−１１ｅ−３ｅｒ−Ｇｉｎ
−Ｔｒｐ；＾１ａ−Ａｓｐ−１１ｅ−３ｅｒ−Ｇｉｎ−
Ｔｒｆｌ−＾１ａ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ；１１ｅ−
５ｅｒ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌ
ｅｕ；Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅ
ｕ；＾１ａ−Ａｓｐ−１１ｅ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ
−＾１ａ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ；＾１ａ−Ａｓｐ−１１ｅ−
３ｅｒ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｒｐ−Ａ　Ｉａ　；＾１ａ−＾５
ｐ−１１ｅ−３ｅｒ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ；＾５ｐ−ｌｉｅ
−Ｓｅｒ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−Ｇｌｙ；１１ｅ−
Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａである。

但し、−級式（ＩＩ）において、■−＾１ａ−＾１ａ−
＾５ｐ−１１ｅ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｇ
ｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−ＯＨ及びＡｃ−＾１ａ−Ａｌａ
−＾５ｐ−１１ｅ−５ｅｒ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−＾１ａ−
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−ＯＨは除く。

なお、略称ＨＣＮＰを特に、誘導体の構造を略記するた
めに用いる場合においては、略称ＨＣＮＰは、Ｈ−＾１
ａ−Ａｌａ−＾５ｐ−ｒｌｅ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ
−＾１ａ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−〇■を意味する。

本明細書で用いられる“アルキノ１とは特定数の炭素原
子を有する分岐鎖および直鎖状の飽和脂肪族炭化水素基
を表し、例えばＣ，−Ｃ，アルキルとはメチル、エチル
、プロピル、ブチル、イソプロピル、イソブチル、ｔ−
ブチル等を意味する。

“アルコキシ”とは、酸素原子を介して結合せしめられ
る特定数の炭素原子を有するアルキル基を表し、例えば
Ｃ，−Ｃ，アルコキシとはメトキシ。

エトキシ、プロポキシ、ブトキシ等を意味する。

“ＣｌＣ４アルキルグアニジノ“とは、１または２個の
Ｃ１−Ｃ４アルキル基によりグアニジノ窒素原子がアル
キル化されたグアニジノ基を表す。

−ハロ”とは、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨー
ドを意味し、１対イオン”とはクロリド。

プロミド、アセテート、ペルクロレート、ベンゾエート
、マレエート、ベンゼンスルホネート。

タートレート、ヘミタートレート等のような一価の負イ
オンを表す。１アリール”とはＣ＋　　Ｃｓアルキル、
アミノ、モノもしくはジＣｔ　　Ｃ４アルキルアミノ、
アミノＣ＋　　Ｃｓアルキル、モノもしくはジＣｒ　　
Ｃ４アルキルアミノＣ＋　　Ｃｓアルキル、グアニジノ
、Ｃ，−Ｃ，アルキルグアニジノ、グアニジノＣ，−Ｃ
，アルキル、Ｃ３−Ｃ，アル・キルグアニジノＣ，−Ｃ
，アルキル、ヒドロキシル、ヒドロキシＣ、Ｃｅアルキ
ル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、−０口２１’Ｌ　カルボキ
シＣ＋−Ｃ，アルキル、ハロ、　Ｎ口２．　　ＣＦａ、
および−ＣＯＮＲ’Ｒ’［Ｒ３＃よびＲ４は前記と同義
である。〕等からなる群より独立して選択される１〜３
個の基で場合により置換されたフェニル、ナフチルまた
はアントリル等を意味する。“ヘテロ環″とは飽和また
は不飽和いずれかの３〜８員１１１式または９〜１０員
２１９式へテロ環を意味するが、これは炭素原子とＮ、
ＯおよびＳからなる群より選択される１〜３個のへテロ
原子からなり、窒素及び硫黄へテロ原子は場合により酸
化され、または窒素へテロ原子は場合により四級化され
ていてもよい。

結合箇所は、いずれかの炭素原子上であるが、Ｒｌａに
関しては、窒素原子１個以上を含むヘテロ環の場合にお
いて、窒素原子上をも結合箇所になりえる。このような
飽和のへテロ環基の例としては、ピロリジニル、ピペリ
ジル、ピペリジノ、ホモピペリジル、ヘブタメチレンイ
ミニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、モルホリニ
ル、モルホリノ、チオラニル、チオモルホリニル、チオ
モルホリニルスルホキシド、子オモルホリニルスルホン
。

テトラヒドロフリル等が挙げられ、このような飽和のへ
テロ環部分はさらにヒドロキシ、カルボキシル、カルボ
キシルＣＩ　　ＣＩアルキル、アリール、アリールＣｌ
−Ｃ４アルキル、Ｃｌ−Ｃ−アルキル、アミノ、モノも
しくはジＣ，−Ｃ，アルキルアミノ、アミノＣ，−Ｃ，
アルキル、モノもしくはジＣ，−Ｃ，アルキルアミノＣ
，−Ｃ，アルキル、ヒドロキシＣ，−Ｃ，アルキル、グ
アニジノ、ＣｌＣ４アルキルグアニジノ、グアニジノＣ
，−Ｃ，アルキル、Ｃ，−Ｃ，アルキルグアニジノＣ，
−Ｃ，アルキル、　−Ｎ（Ｒ”）３Ａ　　［Ｒ”および
Ａは前記と同義である。〕およびＮ（Ｒ２）３Ａ置換Ｃ
ＩＣｓアルキル　（Ｒ鵞およびＡは前記と同義である。

〕等からなる群より独立して選択されるｌ又は２個の基
で場合により置換されていてもよい。またこのような不
飽和のへテロ環基の例としては、ピロリル、ピリジル、
ピラジニル、イミダゾリル、ピラゾリル、フリル、オキ
サシリル。

チエニル、チアゾリル、インドリル、キノリル。

インキノリル等が挙げられ、このような不飽和のへテロ
環部分はさらにｃｐａ、ｃ＋−Ｃ，アルキル。

Ｃ，−Ｃ，アルコキシ、ハロ等からなる群より選択され
る基で場合により置換されていてもよい。

“含窒素飽和へテロ環”とは飽和の３〜８員１１ｆｉ式
含窒素へテロ環を意味するが、これは少なくとも１個以
上の窒素原子と、炭素原子、さらに場合によりＯおよび
Ｓからなる群より選択される１個のへテロ原子からなり
、結合箇所が窒素原子上であるものを意味する。窒素お
よび硫黄へテロ原子は場合により酸化され、または窒素
へテロ原子は場合により四級化されていてもよい。この
ような含窒素飽和へテロ環基の例としては、ピロリジニ
ル、ピペリジノ、ホモピペリジノ、ヘブタメチレンイミ
ニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル。

モルホリノ、チオモルホリノ、子オモルホリノスルホキ
シド、チオモルホリノスルホン等が挙げられ、このよう
な含窒素飽和へテロ環部分はさらにヒドロキシ、カルボ
キシル、カルボキシルＣ２Ｃ，アルキル、アリール、ア
リールＣ，−Ｃ，アルキル、Ｃ，−Ｃ，アルキル、アミ
ノ、モノもしくはジＣ，−Ｃ，アルキルアミノ、アミノ
ＣｌＣ，アルキル、モノもしくはジＣｔ　　Ｃ４アルキ
ルアミノｃ、−ｃｍアルキル、ヒドロキシＣ３−Ｃ，ア
ルキル、グアニジノ、Ｃ，−Ｃ，アルキルグアニジノ、
グアニジノＣ＋　　Ｃｓアルキル、Ｃ１−Ｃ，アルキル
グアニジノＣ，−Ｃ，アルキル。

−Ｎ（Ｒ’）ｓ＾　［Ｒ”およびＡは前記と同義である
。

〕およびＮ（Ｒ’＞３＾置換Ｃ，−ＣＳアルキル、　　
ＣＲ２およびＡは前記と同義である。〕等からなる群よ
り独立して選択される１又は２個の基で場合により置換
されていてもよい。１非置換または置換アルキル“とは
非置換又はアミノ、モノもしくはジＣ＋　　Ｃ−アルキ
ル了ミノ、ヒドロキシ、−Ｃ口Ｊ＋　グアニジノ、Ｃｌ
Ｃ４アルキルグアニジノ。

アリール、Ｃ１，Ｃ４アルコキシ、ハロ、Ｎ（、Ｒ″）
。

＾　（Ｒ”およびＡは前記と同義である。〕、−Ｃ口Ｎ
Ｒ’Ｒ’　　ＣＲ”およびＲ４は前記と同義である。〕
およびヘテロ環〔窒素原子１個以上を含むヘテロ環の場
合においては、窒素原子上も結合箇所になりえる。〕か
らなる群より選択される基で置換された１〜１６個の炭
素原子を有する分岐鎖および直鎮状の飽和脂肪族炭化水
素基すなわちｃ、　−Ｃ１６アルキルを意味する。

本明細書においては、アミノ酸、保護基、活性基、溶媒
等について、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢに基づく略号および、
当該分野における慣用略号で表示する場合があり、それ
らを例示すると次の通りである。

アミノ酸残基に対する略号は以下の通りである。

略　　号　　　　　　　名　　称 Ａｌａ　　　　Ｌ−アラニン Ａ　Ｓ　ｐ　　　　Ｌ−アスパラギン酸グリシン Ｌ−インロイシン Ｌ−ロイシン Ｌ−プロリン Ｌ−グルタミン Ｌ−セリン Ｌ−）リプトファン Ｌ−アスパラギン または　Ｌ−アスパラギン酸 Ｇｌｘ　　　　Ｌ−グルタミン または　Ｌ−グルタミン酸 特に断らない限り、本明細書で接頭辞り無しで命名され
ているアミノ酸残基は天然に生ずる絶対立体配置りに該
当する。

他の略号は次の通りである。

略　　号　　　　　　　　　名　　称 Ａｃ　　　　　　　アセチル Ｆｏｒ　　　　　　ホルミル Ｂｏｃ　　　　　　　ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂ
ｏｃ）２０　　　ジーｔープチルジカルボナｔｙ ｉｅ ｅｕ ｒ６ ｉｎ ｅｒ ｒｐ ｓｘ −ト Ｚ ベンジルオキシカルボニル Ｚ−ＣＩ ベンジルオキシカルボニル クロライド Ｏ５ ｐ−）ルエンスルホニル ｏｓ−ＣＩ ｃＨｅｘ ｚｌ ＣＣ ＥＤＣ−ＭＣＩ ＭＦ ＭＰ ＨＦ ｃＯＥｔ ＦＡ ｐ−）ルエンスルホニルク ロライド シクロヘキシルエステル ベンジル ジシクロへキシルカルポジ イミド ｌ−エチル−３−（３−ジ メチルアミノプロピル）− カルボジイミド塩酸塩 ジメチルホルムアミド Ｎ−メチル−２−ピロリジ ノン テトラヒドロフラン 酢酸エチル トリフルオロ酢酸 トリエチルアミン シクロヘキシルアミン ４−メチルベンズヒドリル アミン ｌ−ヒドロキシベンゾトリ アゾール ＨＯＮｐ　　　　　ｐ−ニトロフェノールＰＴＣフェニ
ルチオカルバミル ＡＣｈ　　　　　　アセチルコリン 本発明の神経栄養ペプチド誘導体の薬学的に許容しうる
塩としては、これらのペプチド類の慣用的無毒性塩また
は四級アンモニウム塩があるが、これらは例えば無機ま
たは有機酸あるいは塩基から懲戒される。このような酸
付加塩の例としては、酢酸、酪酸、クエン酸、乳酸、酒
石酸、シュウ酸。

マレイン酸、コハク酸、フマール酸、塩酸、臭化水素酸
、硫酸の塩がある。塩基の塩としては、アンモニウム塩
、ナトリウムおよびカリウム塩のようなアルカリ金属塩
、カルシウムおよびマグネシウム塩のようなアルカリ土
類金属塩、アルギニン。

ＯＢ　ｔ ＥＡ ＨＡ ＢＨＡ リジンのようなアミノ酸との塩等がある。　かかる塩は
自体既知の手段によって容易に製造することができる。

例えば、酢酸塩の場合は、当該神経栄養ペプチド誘導体
を水に溶かし、必要量の酢酸を加えることによって製造
される。

−製造方法− 本発明の神経栄養ペプチド誘導体は、通常のペプチド化
学において用いられる方法に準じて合成することができ
る。該公知方法としては例えば組Ｂｏｄａｎｓｋｙ及び
−、＾、０ｎｄｅｔｔｉ著「ペプチドシンセシス　（Ｐ
ｅｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ）　Ｊ　、　　Ｉｎｔ
ｅｒｓｃｉｅｎｃｅ社ＮｅｗＹｏｒｋ、　１９６６年；
Ｆ、Ｍ、Ｆｉｎｎ及びに、　Ｈｏｆｍａｎｎ著、「ザプ
ロテインズ（Ｔｈｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）　Ｊ　、第２
巻、ＨｏＮｅｕｒａｔｈ、　Ｒ，Ｌ、旧１１ｍ集、＾ｃ
ａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　Ｉｎｃ、。

Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　１９７６年；泉屋信夫他著、「ペ
プチド合成」、丸善（株）　、１９７５年；泉屋信夫他
著、「ペプチド合成の基礎と実験」、丸善（株）　、１
９８５年；日本生化学全編、生化学実験講座、第−巻、
「タンパク質の化学■」、第■部、矢島治明著、ペプチ
ド合成、１９７７年などに記載されている方法が挙げら
れる。すなわち、Ｃ末端部位の構造にまり液相法、固相
法のいずれかを選択して合成することができる。より詳
細には、Ｃ末端部位に−Ｃ００Ｈあるいは−ＣＯＮ）ｌ
＊の部分構造があるペプチド誘導体の場合には、液相法
、°固相法のいずれによっても得ることができるが、そ
れ以外の場合には液相法が望ましい。

例えば固相法により合成をおこなう場合、Ｃ末端アミノ
酸（アミノ基を保護したもの〉あるいはＣ末端置換基（
カルボキシル基を有し、アミノ基が存在する場合にはそ
れを保護したもの）をそのカルボキシル基によって、ま
ず不溶性担体に結合させる。次いで、必要であればアミ
ノ保護基を除去した後、目的ペプチドのアミノ酸配列に
従い、順次アミノ基保護アミノ酸をその反応性カルボキ
シル基と反応性アミノ基あるいは反応性水酸基との縮合
反応により結合させ、−段階ずつ合成する。

全配列を合成した後、必要であればＮ末端置換基を縮合
させ、次にペプチドを不溶性担体からはずすとともに保
護基を除去し、さらにここで必要であればＮ末端置換基
を縮合させ、保護基を除去することにより目的のペプチ
ドを得ることができる。

また液相法により合或をおこなう場合には、末端に遊離
のアミノ基を有するＣ末端アミノ酸（カルボキシル基を
保護したもの）あるいはＣ末端置換基（遊離のアミノ基
あるいは水酸基を有し、カルボキシル基が存在する場合
にはそれを保護したもの）を目的ペプチドのアミノ酸配
列に従い、アミノ基保護アミノ酸と縮合させる。次いで
、アミノ保護基を除去した後、順次アミノ基保護アミノ
酸をその反応性アミノ基および反応性カルボキシル基と
の縮合反応により結合させ、必要であれば最後にＮ末端
置換基を縮合させる。このようにして全配列を合或する
こともできるが、同様の手法で合或し、選ばれた保護基
を除去することにより得られるペプチドフラグメント同
志を縮合させることによっても全配列を合成することが
できる。

そして、保護基を除去し、さらにここで必要であればＮ
末端置換基を縮合させ、保護基を除去することにより目
的のペプチドを得ることができる。

上記各種方法において、反応性の官能基は保護しておく
ことが好ましい。

アミノ基の保護基としては、例えば、ベンジルオキシカ
ルボニル、ｔ−ブチルオキシカルボニルｐ−メトキシベ
ンジルオキシカルボニル、２−クロルベンジルオキシカ
ルボニル、　　ｐ−）ルエンスルホニル、トリフルオロ
アセチル、フタリル、ホルミル、０−ニトロフェニルス
ルフェニル、３−二トロー２−ピリジンスルフェニル、
ジフェニルホスフィノチオイル基などが挙げられる。カ
ルボキシル基の保護基としては、例えばアルキルエステ
ル（メチル、エチル、ｔ−ブチルなどのＣＩ−４アルキ
ルエステル）、ベンジルエステル、ｐ−ニトロベンジル
エステル、ｐ−メチルベンジルエステル、シクロヘキシ
ルエステル、シクロペンチルエステルなどがあげられる
。Ｓｅｔ等の水酸基は必ずしも保護する必要はないが、
必要であれば、例えば、ベンジル、２．６−ジクロルベ
ンジル、を−ブチル、ベンジルオキシカルボニル、アセ
チル基などで保護することができる。　Ｔｒｐ等のイン
ドリル基は必要であれば、ホルミル、ベンジルオキシカ
ルボニル、２．４−ジクロルベンジルオキシカルボニル
基などで保護することも可能である。

グアニジノ基は塩酸等でプロトン化させた状態で、保護
基としての役目をもたせることができるが、必要であれ
ば、例えばｐ−）ルエンスルホニル。

ニトロ、ベンジルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベン
ゼンスルホニル、メシチレン−２−スルホニル基等で保
護することができる。上記各種方法において、ペプチド
結合形成方法としては、例えばジシクロヘキシカルボジ
イミド、ｌ−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピ
ル）カルボジイミドなどのカルボジイミド型縮合剤を用
いる方法。

対称型酸無水物法、混合酸無水物法、アジド法。

活性エステル法、酸化還元法、ジフェニルホスホリルア
ジド法、カルボジイミド型縮合剤十添加物（１−ヒドロ
キシベンゾトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミ
ドなど）法など既知の手法があげられる。

保護基の除去法としては、例えば、トリフル−オロ酢酸
法、メタンスルホン酸法、トリフルオロメタンスルホン
酸法、フッ化水素法、液体アンモニアナトリウム法、接
触還元法、アルカリけん化法など既知の手法があげられ
る。

本発明によって製造されるペプチド誘導体の精製は、例
えばイオン交換樹脂１公配クロマトグラフィー、ゲルク
ロマトグラフィー、逆相型液体クロマトグラフィーなど
のペプチド化学の分野で通常用いられる方法を単独にま
たは組み合わせて用いることにより行うことができる。

−薬理作用− 本発明の神経栄養ペプチド誘導体は神経細胞の分化成熟
を調節する。すなわち、コリン系神経である中隔中心核
の組織のアセチルコリン合成を促進する。生物学的活性
の測定は小腹幸生ら〔薬物・精神・行動、７巻４４７〜
４５１頁（１９８５）　）の方法により、行うことがで
きる。

−治療剤への適用− 本発明の神経栄養ペプチド誘導体は、神経変性疾患治療
剤、抗痴呆剤として有用である。ここで神経変性疾患と
は、神経細胞が萎縮あるいは脱落する病気であり、たと
えばアルツハイマー病、アルツハイマー型老年痴呆症、
筋萎縮性側索硬化症。

パーキンソン氏病等があげられる。

また痴呆としてはアルツハイマー型痴呆、パーキンソン
痴呆、脳血管性痴呆等があげられる。

本発明化合物を投与される動物は特に制限されず、ヒト
のみならず、例えばマウス、ラット、イヌ、ウシ、ウマ
、ヤギ、ヒツジ、ウサギ、ブタ等の各種哺乳動物が対象
となる。

これらの動物およびヒトへの投与は通常の投与経路、例
えば経口、筋肉内、静脈内、皮下、腹腔内、鼻腔内およ
び脳内投与により行うことができる。投与量および投与
回数は動物種、投与経路、症状の程度、体重等によって
異なり特に限定されないが、ヒトにおいては、通常成人
１日あたり約ｌμｇ−１ｇ、を１日１回もしくはそれ以
上の回数で投与される。投与剤型としては、例えば散剤
。

細粒剤、　Ｉｆｆ粒剤１錠剤、カプセル剤、坐剤、注射
剤、経鼻剤などがあげられる。製剤化の際は、通常の製
剤担体を用い、常法により製造する。即ち、経口用製剤
を調教する場合は、生薬に賦形剤、さらに必要に応じて
結合剤、崩壊剤、滑沢剤１着色剤などを加えた後、常法
により錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などとする。注
射剤を調整する場合は、必要によりρｐＨ整剤、緩衡剤
、安定化剤。

可溶化剤などを添加し、常法により注射剤とする。

〔実施例〕

実施例１ Ａｃ　　ＨＣＮＰ（１−１１）Ｎｌｌｔの合成：使用し
た樹脂は粒径２００−４００メツシユのＭｅｌｔ＾樹脂
である（１％ジビニルベンゼンで架橋、樹脂１ｇ当たり
０．７３ミｌＪモルのアミノ基を含有）。

この樹脂６ｇを固相合成反応容器に入れ、後記スケジュ
ール１に従って工程３より合成を開始し、口ｏｃ−Ｌｅ
ｕ−ＯＨ，Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−０）１．　　Ｂｏｃ−Ｇｌ
ｙ−口Ｈ，Ｂｏｃ−＾１ａＯＨ，を順次カップリングさ
せた。その結果、中間体ＨＣＮＰ（８−１１）　ＮＨ，
ペプチド樹脂７．６ｇが得られた。

半量の樹脂３．８ｇはさらにスケジュール１に従って、
　Ｂｏｃ−Ｔｒｐ−ロ）ｌ、　　Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−０１
１，ロｏｃ−Ｓｅｔ　（Ｂｚｌ）−０）１゜Ｂｏｃ−１
１ｅ−０）１．　　Ｂｏｃ−＾ｓｐ（口ｃＨｅｘ）−Ｄ
Ｈ，Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＯＨを順次、カップリングさせた
。最後のアミノ酸のカップリング及びアセチル化工程終
了後、約３／４の樹脂を取り出した。残りの樹脂はさら
にスケジュールｌに従って、Ｂｏｃ−＾１ａ−ＯＨをカ
ップリングさせた。約１／２の樹脂を取り出し、残りの
樹脂はさらにスケジュール１の工程１〜９、続いて工程
１６〜１８を繰り返し、脱保護及びアセチル化を行った
。その結果、Ａｃ−ＨＣＮＰ　（１−１１）　Ｎ）＋２
ペプチド樹脂０．８１ｇが得られた。

このＡｃ−１（ＣＮＰ　（１−１１）　ＮＨ２ペプチド
樹脂０．８１ｇにアニソール３−、エチルメチルスルフ
ィド０．５ｍｆｆ１、無水フッ化水素２０−を加え、−
２０℃６０分間、０℃６０分間反応させた。減圧濃縮後
、ジエチルエーテル２００ｍ１を加え３０分間撹拌し、
濾過しジエチルエーテル１００−で洗浄した。線上物に
５％酢酸水１００ｒｎｌを加えて３０分間撹拌後、樹脂
を濾別し、５％酢酸水１００−で洗浄した。濾洗液を凍
結乾燥後、得られた粗ペプチドを０．１％ＴＦＡ水５０
−水溶０−、予め０．１％ＴＦＡ水で平衡化させた逆相
系充填剤ＹＭＣ−＾３６３　（Ｓ−５）　ＯＤＳカラム
（３０φＸ２５０ｍｍ）に注入し、カラムを０゜１％Ｔ
ＦＡ水で洗浄後、アセトニトリル濃度を１８０分で３３
％まで増加させ、流速？、　０ｒｎｌ／　ｍ　ｉ　ｎ。

で溶出した。溶出液をＡ２８０ｎｍでモニターし、目的
物を含む画分を集め、凍結乾燥し、Ａｃ−ＨＧＮＰ（１
−１１）Ｎｌｌｔ　　１６９．６■を得た。

得られたＡｃ−ＨＣＮＰ（１−１１）ＮＨ２は、逆相系
充填剤ＹＭＣ−八Ｍ３０３　（Ｓ−５）ＯＤＳカラム（
４，６φＸ２５０ｍｍ）を用いた、１０％から５０％ま
での０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリルの直線濃度勾
配溶出法による分析において保持時間２８．６分を示し
、そのアミノ酸分析値は理論値と一致した。

アミノ酸分析 加水分解：４Ｎメタンスルホン酸−２％トリプタミン、
１１０℃、２４時間 分析方法：　ＰＩ［：０−ＴＡＧ　　（逆相−ＰＴＣア
ミノ酸）法＊基準アミノ酸　　（）内理論値 Ａｓｘ：０．９１　　　（１） Ｇｌｘ：０．　９０ Ｓｅｒ：０．８９ Ｇｌｙ：１．０２ Ａｌａ：２．　５６ Ｐｒｏ：１．　０１ １１ｅ：１．　０２ ＊Ｌｅｕ：１．　００ Ｔｒｐ：０．　５７ （１） （１） （１） （３） （１） （１） （１） （１） スケジュール１ １、　（洗浄〉塩化メチレン６０ＷＲ１２または（脱保
護）５０％ＴＦＡ　− ５％エタンジチオール ４５％塩化１　ｆ　レン（Ｖ／Ｖ）６０ｍＡ’３または
（洗浄）塩化メチレン６０ｄ ４または（洗浄）メタノール６〇− ５、〈中和〉１０％トリエチルアミン −９０％塩化メチレン（Ｖ／Ｖ）　６０−２×３ ３×１ ２０×　１ ２×２ ２×２ １×１ ６または（洗浄）メタノール６０ｍｆ ７または（中和）　１０％トリエチルアミン−９０％塩
化／　チレン（Ｖ／Ｖ）６０ｍｇ　　Ｉ　Ｘ　１８また
は（洗浄）メタノール６０ｍｇ　　　　　２　Ｘ　２９
または（洗浄）塩化メチレン６０ｍｆ　　　　２　Ｘ　
３１Ｏ０（カップリング）各アミノ基保護アミノ酸（６
ミリモル）。

添加剤（ＨＯＢｔまたはＨ口Ｎｐ）。

５０％ＤＭＦ−５０％塩化メチレン （Ｖ／Ｖ）　３０１１Ｌ１！ 口ＣＣ（６ミリモル）の 塩化メチレン溶液１２ｍｇ　　　　　１２０ｘ　１１１
または（洗浄）５０％ＤＭＦ−５０％塩化１　ｆ　レン
（Ｖ／Ｖ）６０ｍｌ！１２または（洗浄〉メタノール６
０ｓｄ１１３または（中和）１０％トリエチルアミン−
９０％塩化メチレン（Ｖ／Ｖ）６０ｍｌ！　　１　ｘ　
１１４または（洗浄）メタノール６０ＩＩ１１！２Ｘ２
１５または（洗浄）塩化メチレン６０ｍｆ　　　　２Ｘ
２１６または（アセチル化）２５％無水酢酸Ｘ１ Ｘ２ ２×１ ５×１ ７５％塩化１　＋　レン（Ｖ／Ｖ）６０ｍ１１５ｘ　１
１７または（洗浄）塩化メチレン６０ｍ１２Ｘ２１８ま
たは（洗浄）メタノール６０ｍ１　　　　２　Ｘ　２但
し、工程１０のカップリング反応後、少量の樹脂をニン
ヒドリンで試験し、陽性青色となった場合にはカップリ
ング不完全であるとして同一の保護形アミノ酸を用い反
応を繰り返した。

そして２回目以降のカップリングの場合には、５０％０
肝−５０％塩化メチレン（Ｖ／Ｖ）の代わりにＤＭＦ、
またはｌ−メチル−２−ピロリジノンを用い反応時間を
最大１２時間まで延長した。

実施例２ ＾ｃ−ＨＣＮＰ（１−１０）ＮＨａの合成：使用した樹
脂は粒径１００−２００メツシユのＭ　Ｂ　ＩＩ　Ａ樹
脂である（１％ジビニルベンゼンで架橋、樹脂１ｇ当た
り０．４２ミ！Ｊモルのアミノ基を含有）。

この樹脂６ｇを固相合成反応容器に入れ、実施例１に記
載のスケジュールｌに従って工程３より合成を開始し、
Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ロＨ，Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−ＤＨ，Ｂｏｃ
−＾１ａ−ＤＨ，Ｂｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ，Ｂｏｃ−Ｇｌ
ｎ−ＯＨ，Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）＝ＤＨ１ｅ Ｂｏｃ−１−ｒ−ｐ−ＯＨ，Ｂｏｃ−＾ｓｐ（口ｃｌｅ
ｗ）−ロＨ，Ｂｏｃ−＾１ａ−０１１を順次二当量のＯ
ＣＣを用いてカップリングさせた。

途中Ｂｏｃ−Ｓｅｒ　（Ｂｚｌ）−ロＨ，Ｂｏｃ−１１
ｅ−ロＨ，Ｂｏｃ−＾５ｐ（Ｏｃ）ＩｅＸ）−ＯＨのそ
れぞれの導入後に、一部の樹脂を取り出し、さらに最後
のアミノ酸のカップリング及びアセチル化工程終了後、
一部の樹脂を取り出し、ＨＣＮＰ（２−１０）ＮＨ＊ペ
プチド樹脂４．１６ｇが得られた。

残りの樹脂はさらにスケジュール１に従って、Ｂ。

Ｃ−＾１ａ−ロ■をカップリングさせた。約１／２の樹
脂を取り出し、残りの樹脂はさらにスケジュール１の工
程１〜９、続いて工程１６〜１８を繰り返し、脱保護及
びアセチル化を行った。その結果、Ａｃ−ＨＣＮＰ（１
−１０）ＮＬペプチド樹脂１．２６ｇが得られた。

この＾ｃ−ＨＣＮＰ　（１−１０）　ＮＨ２ペプチド樹
脂１．２６ｇにアニソール３−、エチルメチルスルフィ
ド０．５−１無水フッ化水素２０−を加え、−２０℃６
０分間、０℃６０分間反応させた。減圧濃縮後、ジエチ
ルエーテル２００Ｉ１１１＋を加え３０分間撹拌し、濾
過しジエチルエーテル１００−で洗浄した。濾上物に１
０％酢酸水１００ａｔ１！を加えて３０分間撹拌後、樹
脂を濾別し、１０％酢酸水１００−で洗浄した。

濾洗液を凍結乾燥後、得られた粗ペプチドを１０％酢酸
水１００ｍ１！に溶解し、予め０．１％ＴＦＡ水で平衡
化させた逆相系充填剤ＹＭＣ−＾３６３　（Ｓ−５）　
ＯＤＳカラム（３０φＸ２５０ｍａ＋）に注入し、カラ
ムを０．１％ＴＦＡ水で洗浄後、アセトニトリル濃度を
１８０分で２５％まで増加させ、流速７．０ｍｌ’　／
　ｍ　ｉｎ、で溶出した。溶出液をＡ２８０ｎｍでモニ
ターし、目的物を含む画分を集め、凍結乾燥し、Ａｃ−
ＨＣＮＰ（１−１０）ＮＨ２１３９，５■を得た。

得られた＾ｃ−ＨＣＮＰ　（１−１０）　ＮＨａは、逆
相系充填剤ＹＭＣ−＾Ｍ３０３　（Ｓ−５）−００Ｓカ
ラム　（４，６φＸ　２５　Ｏｎｏｎ）を用いた、１０
％から５０％までの０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリ
ルの直線濃度勾配溶出法による分析において保持時間２
２．６分を示し、そのアミノ酸分析値は理論値と一致し
た。

アミノ酸分析 加水分解＝４Ｎメタンスルホン酸−２％トリプタミン、
１．１０℃、２４時間 分析方法：　ＰＩＣＯ−ＴＡＧ　　（逆相−ＰＴＣアミ
ノ酸）法＊基準アミノ酸　　（）内理論値 Ａｓｘ：　　０．９９　（１） Ｇｌｘ：　　０．９２　（１） Ｓｅｒ：　　０．９５　（１） Ｇｌｙ：　　ｏ、９６　（１） ＊Ａｌａ：　　３．００　（３） Ｐｒｏ：　　０．９９　（１） １１ｅ：　　１．００　（１） Ｔｒｐ：　　０．９１　　（１） 実施例３ Ａｃ−ＨＣＮＰ　（ＩＪ）　ＮＨａの合成：使用した樹
脂は粒径１００−２００メツシユのＭＢＨ＾樹脂である
（１％ジビニルベンゼンで架橋、樹脂１ｇ当たり０．６
４ミＩＪモルのアミノ基を含有〉。

この樹脂６ｇを固相合成反応容器に入れ、実施例１に記
載のスケジュールｌに従って工程３より合成を開始し、
Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ，Ｂｏｃ−＾１ａ−ＯＨ，Ｂｏｃ
−Ｔｒｐ−ロＨ，Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−ＯＨ，Ｂｏｃ−Ｓｅ
ｒ（Ｂｚｌ）−ロＨ，Ｂｏｃ−１１ｅ−ＯＨ。

Ｂｏｃ−＾５ｐ（ＯｃＨｅｘ）−ＤＨ，を順次カップリ
ングさせた。

途中Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−ロＨ，Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）
−ロｌ、　　１３ｏ（ニー１１ｅ−ＤＨのそれぞれの導
入後に、一部の樹脂を取り出し、さらに最後のアミノ酸
のカップリング及びアセチル化工程終了後、一部の樹脂
を取り出し、ＨＣＮＰ（３９）ＮＨ，ペプチド樹脂１．
４２ｇが得られた。残りの樹脂はさらにスケジュール１
に従って、Ｂｏｃ−＾１ａ−ロＨをカップリングさせた
。一部の樹脂を取り出し、残りの樹脂はさらにスケジュ
ールｌに従って、Ｂ。

Ｃ−＾１ａ−０１１をカップリングさせた。約１／２の
樹脂を取り出し、残りの樹脂はさらにスケジュールｌの
工程１〜９、続いて工程１６〜１８を繰り返し、脱保護
及びアセチル化を行った。その結果、Ａｃ−ＨＣＮＰ（
１−９）Ｎ）１．ペプチド樹脂１．０６ｇが得られた。

このＡｃ−ＨＣＮＰ　（ＩＪ）　ＮＨ＊ペプチド樹脂１
．０６ｇにアニソール３Ｉｎ１、エチルメチルスルフィ
ド０．５−１無水フッ化水素２０−を加え、−２０℃６
０分間、０℃６０分間反応させた。減圧濃縮後、ジエチ
ルエーテル２００−を加え３０分間撹拌し、濾過しジエ
チルエーテル１００ｒｎ１で洗浄した。濾上物に１０％
酢酸水１００ｍ１’を加えて３０分間撹拌後、樹脂を濾
別し、１０％酢酸水１００−で洗浄した。

濾洗液を凍結乾燥後、得られた粗ペプチドを１０％酢酸
水１５０ｍ１に溶解し、予め０．１％ＴＦＡ水で平衡化
させた逆相系充填剤ＹＭＣ−＾３６３　（Ｓ−５）ロロ
Ｓカラム（３０φＸ２５０ｍｍ）に注入し、カラムを０
．１％ＴＦＡ水で洗浄後、アセトニトリル濃度を１８０
分で２６％まで増加させ、流速７．０ｍｌ！　／　ｍ　
ｉｎ、で溶出した。溶出液をＡ２８０ｎｍでモニターし
、目的物を含む画分を集め、凍結乾燥し、＾ｃ−ＨＣＮ
Ｐ（１−９）ＮＨａ　３７．　Ｏｍｇを得た。

得られたＡｃ−ＨＣＮＰ　（１−９）　ＮＨａは、逆相
系充填剤ＹＭＣ−＾Ｍ３０３　（Ｓ−５）−〇〇Ｓカラ
ム（４，６φＸ２５０ｍｍ）を用いた、１０％から５０
％までの０．１％ＴＦＡを含むアセトニ）　ＩＪルの直
線濃度勾配溶出法による分析において保持時間２３．０
分を示し、そのアミノ酸分析値は理論値と一致した。

アミノ酸分析 加水分解：４Ｎメタンスルホン酸−２％トリプタミン、
１１０℃、２４時間 分析方法：　ＰＩＣＯ−ＴＡＧ　　（逆相−ＰＴＣアミ
ノ酸）法＊基準アミノ！　　　（）内理論値 Ａｓｘ：　　１．０５　（１） Ｇｌｘ：　　１．０４　　（１） Ｓｅｒ：　　０．９８　（１） Ｇｌｙ：　　１．０３　（１） ＊へｌａ：　　３．００　（３） １１ｅ：　　１．０２　（１） Ｔｒｐ：　　０．５４　（１） 実施例４ ＾ｃ−ｔｌｃＮＰ　（１−８）　Ｎ１（２の合成：使用
した樹脂は粒径１００−２００メツシユのＭＢ）Ｉへ樹
脂である（１％ジビニルベンゼンで架橋、樹脂１ｇ当た
り０．６４ミｌＪモルのアミノ基を含有）。

この樹脂６ｇを固相合成反応容器に入れ、実施例１に記
載のスケジュール１に従って工程３より合成を開始し、
Ｂｏｃ−＾１ａ−０）１．　Ｂｏｃ−Ｔｒｐ−ＤＨ，Ｂ
ｏｃ−Ｇｌｎ−０１（９口ｏｃ−３ｅｒ（Ｂｚｌ）−０
）１．　Ｂｏｃ−１１ｅ−ＯＨを順次カップリングさせ
た。途中Ｂｏｃ−３ｅｒ（Ｂｚｌ）−ＤＨの導入後に、
一部の樹脂を取り出し、さらに最後のアミノ酸のカップ
リング及びアセチル化工程終了後に、一部の樹脂を取り
出し、）ＩＣＮＰ（４Ｊｌ）ＮＨ２ペプチド樹脂１．１
６ｇが得られた。残りの樹脂はさらにスケジュール１に
従って、Ｂｏｃ−Ａｓｐ　（口ｃＨｅｘ）−０）１をカ
ップリングさせた。一部の樹脂を取り出し、残りの樹脂
はさらに後記スケジュール２に従って、口ＯＣ−＾１ａ
　−Ｏｔｌをカップリングさせた。一部の樹脂を取り出
し、）ＩＣＮＰ　（２−８）　Ｎ）Ｉ２ペプチド樹脂０
．７６ｇが得られた。残りの樹脂はさらに後期スケジュ
ール２に従って、Ｂｏｃ−＾１ａ−ＯＨをカップリング
させた。約ｌ／２の樹脂を取り出し、残りの樹脂はさら
にスケジュール２の工程１〜９、続いて工程１６〜１８
を繰り返し、脱保護及びアセチル化を行った。その結果
、＾ｃ−ＨＣＮＰ　（１−８）　ＮＨａペプチド樹脂１
．５６ｇが得られた。

この＾ｃ−ｔｌｃＮＰ　（１−８）　ＮＨ２ペプチド樹
脂１．５６ｇにアニソール３−、エチルメチルスルフィ
ド０．５ｍｌ！　。

無水フッ化水素２０ｍ１！を加え、−２０℃６０分間、
０℃６０分間反応させた。減圧濃縮後、ジエチルエーテ
ル２００−を加え６０分間撹拌し、濾過しジエチルエー
テル１００ｍ１で洗浄した。濾上物に５％酢酸水１００
−を加えて３０分間撹拌後、樹脂を濾別し、５％酢酸水
１００−で洗浄した。濾洗液を凍結乾燥後、得られた粗
ペプチドを１０％酢酸水４００−に溶解し、予め０．１
％ＴＦＡ水で平衡化させた逆相系充填剤ＹＭＣ＝ＳＨ３
４３−５（Ｓ−５）口ＯＳカラム（２０φＸ２５０ｍｍ
）に注入し、カラムを０．１％ＴＦＡ水で洗浄後、アセ
トニ）　ＩＪル濃度を１８０分で２５％まで、さらに６
０分で３１％まで増加させ、流ｉ１’　７．０ｍ５／ｍ
ｉｎ、で溶出した。溶出液をＡ２８０ｎｍでモニターし
、目的物を含む両分を集め、凍結乾燥し、Ａｃ−）１ｃ
ＮＰ（１−８）ＮＨ２３９，１■を得た。

４与れたＡｃ−）ＩＣＮＰ　（＋−８）　ＮＨ２は、逆
相系充填剤ＹＭＣ−ＡＭ３０３　（Ｓ−５）−００Ｓカ
ラム（４，６φＸ２５０ｍｍ）を用５）た、１０％から
５０％までの０，１％ＴＦＡを含むアセトニド１フルの
直線濃度勾配溶出法による分析においで保持時間２３．
５分を示し、そのアミノ酸分析値は理論値と一致した。

アミノ酸分析 加水分解＝４Ｎメタンスルホン酸−２％トリプタミン、
１１０℃、２４時間 分析方法：　ＰＩＣＯ−ＴＡＧ　　（逆相−ＰＴＣアミ
ノ酸）法＊基準アミノ酸　　（）内理論値 Ａｓｘ：　　１．Ｏｆ　　（ｆ） Ｇｌｘ：　　０．９９　　（１） Ｓｅｒ：　　０．９５　（１） ＊Ａｌａ：　　３．００　（３） ｌｉｅ：　　１．００　（１） Ｔｒｐ：　　０．６８　（１） スケジュール２ １または（洗浄）塩化メチレン３〇− ２または（脱保護）　５０％ＴＦＡ　−５％エタンジチ
オール ４５％塩化メチレン（Ｖ／Ｖ）　３０−Ｘ３ Ｘ１ ０ｘ　　ｌ ３または（洗浄）塩化メチレン３０ｍ１！４．（洗浄）
メタノール３〇− ５または（中和）１０％トリエチルアミン−９０％塩化
メチレン（Ｖ／Ｖ）　３０ｍｆ６または（洗浄）メタノ
ール３０ｍｆ ７または（中和）１０％トリエチルアミン−９０％塩化
メチレン（Ｖ／Ｖ）　３０ｍｅ８または（洗浄）メタノ
ール３〇− ９または（洗浄）塩化メチレン３０ｍｆｌＯ１（カップ
リング）各アミノ基 保護アミノｉ％１２（３ミリモル）。

添加剤（）ＩＯＢｔまたはＨＯＮｐ）　。

５０％口ＭＦ−５０％塩化メチレン （Ｖ／Ｖ）　１５ｍｆ ＤＣＣ（３ミリモル）の 塩化メチレン溶液６ｍｆ　　　　　１２０Ｘ１１１また
は（洗浄）５０％口ＭＦ−５０％塩化メチレン（Ｖ／Ｖ
）　３０ｍｆ １２または（洗浄）メタノール３〇− １３または（中和〉１０％トリエチルアミンＸＩ ２×２ Ｘ３ １×１ ２×１ ２×２ Ｘ１ ２×２ ２×２ Ｘ１ 一９０％塩化メ＋　レン（Ｖ／Ｖ）３０ｍｌ’　　Ｉ　
Ｘ　１１４または（洗浄）メタノール３０ｍ１’　　　
　　２　Ｘ　２１５または（洗浄〉塩化メチレン３０ｍ
Ａ’　　　　２Ｘ２１６または（アセチル化）２５％無
水酢酸−７５％塩化メチレン（Ｖ／Ｖ）３０ｍｉ’　　
１５Ｘ　１１７または（洗浄）塩化メチレン３０ｒｄ　
　　　２Ｘ　２１８または（洗浄）メタノール３０ｍ１
！　　　　　２　Ｘ　２但し、工程ｌＯのカップリング
反応後、少量の樹脂をニンヒドリンで試験し、陽性青色
となった場合には、カップリング不完全であるとして同
一の保護形アミノ酸を用い反応を繰り返した。そして２
回目以降のカップリングの場合には、５０％口ＭＦ−５
０％塩化メチレン（Ｖ／Ｖ）の代わりに口ＭＦ、または
１−メチル−２−ピロリジノンを用い反応時間を最大１
２時間まで延長した。

実施例５ ＾ｃ−ＨＣＮＰ　（１−７）の合成： 使用した樹脂は粒径１００−２００メツシユのクロロメ
チル化されたポリスチレンビニルベンゼン樹脂である（
１％ジビニルベンゼンで架橋、樹脂１ｇ当たり０．６８
ミリモルのクロライドを含有）。

ポリペプチドを合成するに当たり２．４８ｇのＢｏｃ−
Ｔｒｐ−叶をエチルアルコール１５−１水５−へ溶解し
、２０％炭酸セシウム水溶液にてｐＨ７とし、減圧濃縮
し、乾燥させた。これにＤＭＦ８０−を加え、１０ｇの
クロロメチル化樹脂を加え、５０℃にて１０時間、さら
に室温にて１２時間撹拌し、エステル化した。得られた
Ｂｏｃ−Ｔｒｐ−０−樹脂を濾過し、ＤＭＦ、９０％口
ＭＦ、　ＤＭＦ、エチルアルコールにて順次洗浄し、か
つ乾燥した。収量１１．１ｇ。

このＢｏｃ−Ｔｒｐ−０−樹脂６ｇを固相合成反応容器
に入れ、実施例１に記載のスケジュール１に従って、Ｂ
ｏｃ−Ｇｌｎ−叶、　Ｂｏｃ−３ｅｒ（Ｂｚｌ）−叶、
　Ｂｏｃ−１１ｅ−Ｏｔｌ、　Ｂｏｃ−＾ｓｐ（口ｃＨ
ｅｘ）−叶、　Ｂｏｃ−＾１ａ−叶を順次カップリング
させた。途中Ｂｏｃ−１１ｅ−ＤＨ，Ｂｏｃ−＾ｓｐ　
（Ｏｃ）ｌｅｘ）−０８の導入後に、一部の樹脂を取り
出し、さらに最後のＢｏｃ−Ａｌａ−ＤＨのカップリン
グ及びアセチル化工程終了後に、約１／２の樹脂を取り
出し１、）ＩＣＭＰ（２−７）ペプチド樹脂２．８３ｇ
が得られた。残りの樹脂はさらに実施例４に記載のスケ
ジュール２に従って、Ｂｏｃ−＾１ａ−ＯＨをカップリ
ングさせた。一部の樹脂を取り出し、ＨＣＮＰ　（１−
７）ペプチド樹脂２．０８ｇが得られた。残りの樹脂は
さらにスケジュール２の工程１〜９、続いて工程１６〜
１８を繰り返し、脱保護及びアセチル化を行った。その
結果、Ａｃ−ＨＣＮＰ（１−７）ペプチド樹脂０．９０
ｇが得られた。

この人ｃ−ＨＣＮＰ　（１−７）ペプチド樹脂０．９０
ｇにアニソール３Ｗｄｌ、エチルメチルスルフィド０゜
５−１無水フッ化水素２０−を加え、−２０℃６０分間
、０℃６０分間反応させた。減圧濃縮後、ジエチルエー
テル２００＋ｎＪ！を加え３０分間撹拌し、濾過しジエ
チルエーテル１００−で洗浄した。濾上物に５％酢酸水
１００−を加えて３０分間撹拌後、樹脂を濾別し、５％
酢酸水１００−で洗浄した。濾洗液を凍結乾燥後、得ら
れた粗ペプチドを１０％酢酸水２００−に溶解し、予め
０．１％ＴＦＡ水で平衡化させた逆相系充填剤ＹＭＣ−
＾３６３　（Ｓ−５）　ＤＯＳカラム（３０φＸ２５０
ｍｍ）に注入し、カラムを０゜ｌ％ＴＦＡ水で洗浄後、
アセトニトリル濃度を６０分で２８％まで増加させ、流
速？、Ｏ−／ｍｉｎ、で溶出した。溶出液を八２８０　
ｎｍでモニターし、目的物を含む両分を集め、凍結乾燥
し、Ａｃ−ＨＣＮＰ　（１−７）５４．１ｍｇを得た。

得られた＾ｃ−ＨＣＮＰ（１−７）は、逆相系充填剤Ｙ
ＭＣ八Ｍ３０３　（Ｓ−５）−００Ｓカラム（４，６φ
Ｘ２５０ｍｍ）を用いた、１０％から５０％までの０．
１％ＴＦＡを含むアセトニトリルの直線濃度勾配溶出法
による分析において保持時間２４．４分を示し、そのア
ミノ酸分析値は理論値と一致した。

アミノ酸分析 加水分解：４Ｎメタンスルホン酸−２％トリプタミン、
１１０℃、２４時間 分析方法：　ＰＩＣＯ−ＴＡＧ　　（逆相−ＰＴＣアミ
ノ酸）法＊基準アミノ酸　　（）内理論値 Ａｓｘ：　　１．０５　（１） Ｇｌｘ：　　１．０３　Ｎ＞ Ｓｅｒ：　　１．０１　　（１） ＊Ａｌａ：　　２．００　（２） １１ｅ： １、　１０　　（１） Ｔｒｐ：　　　０．　６３　　（１） 実施例６ ＨＣＮＰ　（１−７）の合成： 実施例５に記載のＨＣＮＰ　（１−７）ペプチド樹脂１
．００ｇにアニソール３−、エチルメチルスルフィド０
゜５−１無水フッ化水素２０−を加え、−２０℃６０分
間、０℃６０分間反応させた。減圧濃縮後、ジエチルエ
ーテル２００ｍＡ！を加え３０分間撹拌し、濾過しジエ
チルエーテル１００ｍで洗浄した。線上物に５％酢酸水
１００ＷＲ１を加えて３０分間撹拌後、樹脂を濾別し、
５％酢酸水１０Ｇ＋ａｌ！で洗浄した。濾洗液を凍結乾
燥後、得られた粗ペプチドを１０％酢酸水５０−に溶解
し、予め０．１％ＴＦＡ水で平衡化させた逆相系充填剤
ＹＭＣ−＾３６３　（Ｓ−５）　０口Ｓカラム（３０φ
Ｘ２５０ｍｍ）に注入し、カラムを０．１％ＴＦＡ水で
洗浄後、アセトニトリル濃度を１２０分で２５％まで増
加させ、流速７．０−／　ｍ　ｉｎ、で溶出した。溶出
液をＡ　２８　Ｏｒ＋ｍでモニターし、目的物を含む両
分を集め、凍結乾燥し、）ｌ（”ＮＰ（１−７）６７．
１　ｍｇを得た。

得られた）ＩＣＮＰ　（１−７）は、逆相系充填剤ＹＭ
Ｃ−ＡＭ３０３　（Ｓ−５）−〇ＤＳカラム（４，６φ
Ｘ２５０ｍｍ）を用いた、１０％から５０％までの０．
１％ＴＦＡを含むアセトニ）　Ｕルの直線濃度勾配溶出
法による分析において保持時間２１．４分を示し、その
アミノ酸分析値は理論値と一致した。

アミノ酸分析 加水分解＝４Ｎメタンスルホン酸−２％トリプタミン、
１１０℃、２４時間 分析方法：　ＰＩＣＯ−ＴＡＧ　　（逆相−ＰＴＣアミ
ノ酸）法＊基準アミノ酸　　（）内理論値 Ａｓｘ：　　１．０２　（１） Ｇｌｘ：　　１．００　（］） Ｓｅｔ：　　０．９７　（１） ＊Ａｌａ：　　２．００　（２） １１ｅ：　　１．１１　　（１） Ｔｒｐ：　　Ｏ，ＴＯ（１） 実施例７ Ｆｏｒ−ＨＣＮＰ　（１−７）の合成：Ｆｏｒ−ＨＣＮ
Ｐ（１−７）を合成するにあたり、まずアラニン４．４
６ｇを９８％ギ酸１０５ｍｊ！に溶解し、氷冷下無水酢
酸３５−を１０分間で滴下し、さらに１時間撹拌抜水８
０−を加え、減圧下濃縮した。残渣にジエチルエーテル
を加え、結晶化した。結晶を濾取、ジエチルエーテルで
洗浄し、乾燥してＦ。

ｒ−＾１ａ−０１１４，８９ｇが得られた。

実施例５に記載のＨＣＮＰ　（２−７）ペプチド樹脂１
．００ｇを固相合成反応容器に入れ、実施例４に記載の
スケジュール２に従って、上記のＦｏｒ−＾１ａ−ロＨ
をカップリングさせた。その結果、Ｆｏｒ−ＨＣＮＰ（
１−７）ペプチド樹脂１．０３ｇが得られた。

このＰａｒ−ＨＣＮＰ　（１−７）ペプチド樹脂１．０
３ｇにアニソール３ｒＲＩ！、エチルメチルスルフィド
０．５ｍ！、無水フッ化水素２０１Ｒ１を加え、−２０
℃６０分間、０℃６０分間反応させた。減圧濃縮後、ジ
エチルエーテル２００−を加え３０分間撹拌し、濾過し
ジエチルエーテル１００−で洗浄した。線上物に５％酢
酸水ｌ口０−を加えて３０分間撹拌後、樹脂を濾別し、
５％酢酸水１００−で洗浄した。濾洗液を凍結乾燥後、
得られた粗ペプチドを１０％酢酸水１００−に溶解し、
予め０．１％ＴＦＡ水で平衡化させた逆相系充填剤ＹＭ
Ｃ−＾３６３（Ｓ−５）　ＯＤＳカラム（３０φＸ　２
５０ｍｍ）に注入し、カラムを０．１％ＴＦ＾水で洗浄
後、アセトニトリル濃度を１２０分で２８％まで増加さ
せ、流速７．０ｍｌ　／　ｍｉｎ、で溶出した。

溶出液を＾２８０ｎｍでモニターし、目的物を含む両分
を集め、凍結乾燥し、Ｆｏｒ−ＨＣＮＰ　（１−７）　
３３．０ｍｇを得た。

得られたＦｏｒ−ＨＣＮＰ（１−７）は、逆相系充填剤
ＹＭＣ二＾Ｍ３０３　（Ｓ−５）−００Ｓカラム（４，
６φＸ　２５０ｒｎ１）を用いた、１０％から５０％ま
での０．１％ＴＦ＾を含むアセトニ）　ＩＪルの直線濃
度勾配溶出法による分析において保持時間２４．０分を
示し、そのアミノ酸分析値は理論値と一致した。

アミノ酸分析 加水分解：４Ｎメタンスルホン酸−２％トリプタミン、
１１０℃、２４時間 分析方法：　ＰＩＣＯ−ＴＡＧ　　（逆相−ＰＴＣアミ
ノ酸）法＊基準アミノ酸 Ａｓｘ：１．０２（１） Ｇｌｘ：１．０１（１） Ｓｅｒ：０．９９（１） ＊ＡＩａ　：２．ＯＯ（２） １１ｅ：１．１１（１） Ｔｒｐ：０．５４（１） （）内理論値 実施例８ ＨＣＮＰ（１−７）　ＮＨｔの合成： 使用した樹脂は粒径２００−４００メツシユのＭＢ）Ｉ
Ａ樹脂である（１％ジビニルベンゼンで架橋、樹脂１Ｈ
当たり０．７３ミ！Ｉモルのアミノ基を含有）。

この樹脂６ｇを固相合成反応容器に入れ、実施例１に記
載のスケジュール１に従って工程３より台底を開始し、
Ｂｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ，Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−ＯＨ，Ｂｏｃ
−Ｓｅｒ（口ｚｌ）−ＤＨ、Ｂｏｃ−１１ｅ−０）１．
　　ロｏｃ−＾５ｐ（ＯｃＨｅｘ）−０Ｈ。

Ｂｏｃ−Ａｌａ−０）１．　Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＤＨを順
次カップリングさせた。途中Ｂｏｃ−１１ｅ−０）１．
　Ｂｏｃ−＾ｓｐ　（ＯｃＨｅｘ）　−ＤＨ，Ｂｏｃ−
Ａ　ｌａ−ロＨの導入後に、一部の樹脂を取り出した。

その結果、ＨＣＮＰ　（１−７）　ＮＨ２ペプチド樹脂
３．３４ｇが得られた。

この）ＩＣＮＰ　（１−７）　ＮＨ！ペプチド樹脂０．
８３ｇにアニソール３−、エチルメチルスルフィド０．
５ｍ！、無水フッ化水素２０−を加え、−２０℃６０分
間、０℃６０分間反応させた。減圧濃縮後、ジエチルエ
ーテル２００ＩＩ１１！を加え３０分間撹拌し、濾過し
ジエチルエーテル１００−で洗浄した。濾上物に５％酢
酸水１００ｍ１を加えて３０分間撹拌後、樹脂を濾別し
、５％酢酸水１００−で洗浄した。濾洗液を凍結乾燥後
、得られた粗ペプチドを２．５％酢酸水２００ｒＩｄｌ
に溶解し、予め０．１％ＴＦ＾水で平衡化させた逆相系
充填剤ＹＭＣ−００Ｓ　（Ｓ−１０／２０）カラム（３
０φＸ３００ｍｍ）に注入し、カラムを０．１％ＴＦＡ
水で洗浄後、アセトニトリル濃度を２００分で１８％ま
で増加させ、流速６．０−／　ｍｉｎ、で溶出した。溶
出液を＾２８０ｎｍでモニターし、目的物を含む画分を
集め、凍結乾燥し、−吹精製）ＩＣＮＰ　（１−７）　
ＮＬ７１．９■を得た。この−吹精１１１ＨｃＮＰ（１
−７）ＮＯ３はさらに２％酢酸水５０−に溶解し、予め
０．１％ＴＦＡ水で平衡化させた逆相系充填剤ＹＭＣ−
３）Ｉ−３４３−５（Ｓ５）　ＯＤＳカラム（２０φＸ
５００ｍｍ）に注入し、カラムを０．１％ＴＦＡ水で洗
浄後、アセトニトリル濃度を１８０分で１６％まで、さ
らに６０分で１９％まで、さらに６０分で２１％まで増
加させ、流速７．Ｑｍｅ／ｍｉｎ、で溶出した。溶出液
をＡ２８０ｎｍでモニターし、目的物を含む両分を集め
、凍結乾燥し、）ＩＣＭＰ（１−７）ＮＨ２２６，８■
を得た。

得られた）ＩＣＮＰ（１−７）　Ｎ）Ｉ２は、逆相系充
填剤ＹＭＣ−ＡＭ３０３　（Ｓ−５）−０ＤＳカラム（
４，６φ×２５０關）を用いた、１０％から５０％まで
の０．１％ＴＦ＾を含むアセトニトリルの直線濃度勾配
溶出法による分析において保持時間１９．０分を示し、
そのアミノ酸分析値は理論値と一致した。

アミノ酸分析 加水分解＝４Ｎメタンスルホン酸−２％トリプタミン、
１１０℃、２４時間 分析方法：　ＰＩＣＯ−ＴＡＧ　　（逆相−ＰＴＣアミ
ノ酸）法＊基準アミノ酸　（）内理論値 Ａｓｘ：１．０５（１） Ｇｌｘ：１．０１（１） Ｓｅｒ：１．００（１） ＊Ａｌａ　　：２．００　　（２） １１ｅ：１．０８（１） Ｔｒｐ：０．７８（１） 実施例９ １１ｃＮＩ’（２−１１）の合成： 使用した樹脂は粒径１００−２００メツシユのクロロメ
チル化されたポリスチレンビニルベンゼン樹脂である（
１％ジビニルベンゼンで架橋、樹脂１ｇ当たり０．６８
ミｌＪモルのクロライドを含有）。

ＨＣＮＰ　（２−１１）を合成するに当たり、まず３．
０５ｇのＢ。

ｃ−Ｌｅｕ−ＯＨをエチルアルコール２０ｍ１！、水７
−へ溶解し、２０％炭酸セシウム水溶液にてｐＨ７とし
、減圧ａｗｒｒシ、乾燥させた。これにＤＭＦＩ　２０
−を加え、１５ｇのクロロメチル化樹脂を加え、５０℃
にて１２時間、さらに室温にて１２時間撹拌し、エステ
ル化した。得られたＢｏｃ−Ｌｅｕ−０−樹脂を濾過し
、ＯＭＦ、　９０％ＤＭＦ、　ＯＭＦ、エチルアルコー
ルにて順次洗浄し、かつ乾燥した。収量１６．９ｇ。

このＢｏｃ−Ｌｅｕ−０−樹脂６ｇを固相合成反応容器
に入れ、実施例１に記載のスケジ一−ル１に従って、Ｂ
ｏｃ−Ｐｒｏ−ＤＨ，Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ，Ｂｏｃ−
Ａｌａ−ＯＨを順次カップリングさせた。その結果、中
間体１１ｃＮＰ（８−１１）ペプチド樹脂６．７１ｇが
得られた。４．４７ｇの）ＩＣＮＰ（８−１１）ペプチ
ド樹脂はさらにスケジュール１に従って、Ｂｏｃ−Ｔｒ
ｐ−０１（、Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−ＯＲ，Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（
８ｚｌ）−０）１　、　Ｂ。

ｃ−１１ｅ−０）１．　　Ｂｏｃ−＾ｓｐ（口ｃｌｌｅ
ｘ）−０Ｈ、Ｂｏｃ−＾１ａ−叶を順次カップリングさ
せた。最後のＢｏｃ−＾１ａ−Ｏｆｆのカップリングお
よびアセチル化工程終了後、約３／４の樹脂を取り出し
た。その結果、）ＩＣＮＰ（２−１１）ペプチド樹脂５
．０９ｇが得られた。

このＨＣＮＰ　（２−１１）ペプチド樹脂１．００ｇに
アニソール３−、エチルメチルスルフィド（１，５ｍｌ
’、無水フッ化水素２０−を加え、−２０℃６０分間、
０℃６０分間反応させた。減圧濃縮後、ジエチルエーテ
ル２００−を加え３０分間撹拌し、濾過しジエチルエー
テル１００ｍ１！で洗浄した。濾上物に５％酢酸水１０
０ｄを加えて３０分間撹拌後、樹脂を濾別し、５％酢酸
水ｌＯ〇−で洗浄した。濾洗液を凍結乾燥後、得られた
粗ペプチドを１０％酢酸水３００−に溶解し、予め０．
１％ＴＦ＾水で平衡化させた逆相系充填剤ＹＭＣ−＾３
６３　（Ｓ−５）　０口Ｓカラム（３０φＸ２５０ｍｍ
）に注入し、カラムを０，１％ＴＦＡ水で洗浄後、アセ
トニトリル濃度を１８０分で３０％まで増加させ、流速
？、　Ｏｍｉ／　ｍｉｎ、で溶出した。

溶出液をＡ２８０ｎｍでモニターし、目的物を含む両分
を集め、凍結乾燥し、ＨＣＮＰ（２−１１）　１３４．
２ｍｇを得た。

得られたＨＣＮＰ　（２−１１）は、逆相系充填剤ＹＭ
Ｃ−＾Ｍ３０３　（Ｓ−５）　ＯＤＳカラム（４，６φ
Ｘ　２５０ｍｍ）を用いた、１０％から５０％までの０
．１％ＴＦ＾を含むアセトニトリルの直線濃度勾配溶出
法による分析において保持時間２５．９分を示し、その
アミノ酸分析値は理論値と一致した。

アミノ酸分析 加水分解＝４Ｎメタンスルホン酸−２％トリプタミン、
１１０℃、２４時間 分析方法：　ＰＩＣＤ−ＴＡＧ　　（逆相−ＰＴＣアミ
ノ酸）法＊基準アミノ酸　（）内理論値 Ａｓｘ：０．９２（１） Ｇｌｘ：０．９１（１） Ｓｅｒ：０．８９（１） Ｇｌｙ：０．９９（１） Ａｌａ：１．７６（２） Ｐｒｏ：１．００（１） １１ｅ：１．０２（１） ＊Ｌｅｕ　：　１．００　（１） Ｔｒｐ：０．６４（１） 実施例１０ ）ＩＣＮＰ（４−１１）の合成： 使用した樹脂は粒径１００−２００メツシユのクロロメ
チル化されたポリスチレンビニルベンゼン樹脂である（
１％ジビニルベンゼンで架橋、樹脂１ｇ当たり０．６８
　ミリモルのクロライドを含有）。

ＨＣＮＰ　（４−１１）を合成するに当たり、まず４．
０７ｇのＢＯｃ−Ｌｅｕ−叶をエチルアルコール３０−
１水１０ｍ１へ溶解し、２０％炭酸セシウム水溶液にて
ｐＨ７とし、減圧濃縮し、乾燥させた。これにＤＭＦｌ
　６０−を加え、２０ｇのクロロメチル化樹脂を加え、
５０℃にて１２時間、さらに室温にて１２時間撹拌し、
エステル化した。得られたＢｏｃ−Ｌｅｕ−０−樹脂を
濾過し、ＤＭＦ、　９０％口ＭＦ、　ＤＭＦ、エチルア
ルコールにて順次洗浄し、かつ乾燥した。収量２３．・
４ｇａこのＱｏｃ−Ｌｅｕ−０−樹脂２０ｇを固相合成
反応容器に入れ、後記スケジュール３に従って、Ｂｏｃ
−Ｐｒｏ−Ｏｆｆ。

Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−Ｏｔｌ、　　Ｂｏｃ−＾１ａ−ロＨ，
Ｂｏｃ−Ｔｒｐ−ＤＨを順次カップリングさせた。一部
の樹脂を取り出し、ＨＣＮＰ　（７−１１）ペプチド樹
脂１．０５ｇが得られた。残りの樹脂はさらにスケジュ
ール３に従って、Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−叶を、カップリング
させた。一部の樹脂を取り出し、ＨＣＮＰ（６−１１）
ペプチド樹脂１．１７ｇが得られた。残りの樹脂はさら
にスケジュール３に従って、Ｂｏｃ−３ｅｒ（Ｂｚｌ）
−０Ｈをカップリングさせた。その結果、ＨＣＮＰ（５
−１１）ペプチド樹脂２４．５０ｇが得られた。このＨ
ＣＮＰ（５−１１）ペプチド樹脂６．００ｇはさらに実
施例Ｉに記載のスケジュールｌに従って、Ｂｏｃ−１１
ｅ−ＯＨをカップリングさせた。一部の樹脂を取り出し
、ＨＣＮＰ（４−１１）ペプチド樹脂１．５０ｇが得ら
れた。

このＨＣＮＰ（４−１１）ペプチド樹脂０．７５ｇにア
ニソール３ｍ１、エチルメチルスルフィド０．５ｒｎ１
、無水フッ化水素２０−を加え、−２０℃６０分間、０
℃６０分間反応させた。減圧濃縮後、ジエチルエーテル
２００−を加え３０分間撹拌し、濾過しジエチルエーテ
ル１００−で洗浄した。濾上物に５％酢酸水１００−を
加えて３０分間撹拌後、樹脂を濾別し、５％酢酸水１０
０−で洗浄した。濾洗液を凍結乾燥後、得られた粗ペプ
チドを１０％酢酸水５０−に溶解し、予め０．１％ＴＦ
＾水で平衡化させた逆相系充填剤ＹＭＣ−＾３６３　（
Ｓ−５）ＯＤＳカラム（３０φＸ２５０ｍｍ＞に注入し
、カラムを０．１％ＴＦＡ水で洗浄後、アセトニトリル
濃度を１８０分で２９％まで増加させ、流速７．０−／
ｍｉｎ、で溶出した。

溶出液を＾２８０ｎｍでモニターし、目的物を含む画分
を集め、凍結乾燥し、ＨＣＮＰ　（４−１１）　７６、
１■を得た。

得られた１（ＣＮＰ（４−１１）は、逆相系充填剤ＹＭ
Ｃ−Ａ３０３　（Ｓ−５）−００Ｓカラム（４，６φ×
２５０叩）を用いた、１０％から５０％までの０．１％
ＴＦＡを含むアセトニトリルの直線濃度勾配溶出法によ
る分析において保持時間２５．４分を示し、そのアミノ
酸分析値は理論値と一致した。

アミノ酸分析 加水分゛解：４Ｎメタンスルホン酸−２％トリプタミン
、１１０℃、２４時間 分析方法：　ＰＩＣＯ−ＴＡＧ　　（逆相−ＰＴＣアミ
ノ酸）法＊基準アミノ酸　（）内理論値 Ｇｌｘ：１．０１（１） Ｓｅｒ：０．９８（１） Ｇｌｙ：１．１４（１） Ａｌａ：０．９３（１） Ｐｒｏ：０．９１（１） １１ｅ：０．９９＜１） ＊Ｌｅｕ：１．００　（１） Ｔｒｐ：０．５４（１） １、　（洗浄〉塩化メチレン２０〇− ２×３ ２または（脱保護）５０％ＴＦ八− ５％へタンジチオール−３Ｘ１ ４５％塩化メチＬ／：／（Ｖ／Ｖ）　２０　（ｌａｌ！
　　　２０ｘ　１３または（洗浄）塩化メチレン２００
ｍ１！　　　　２ｘ２４または（洗浄）メタノール２０
０ｍ１！　　　　　　２ｘ２５または（中和）１０％ト
リエチルアミン−９０％塩化メチレン（Ｖ／Ｖ）２００
ｍｆ　　ｌＸｌ６または（洗浄）メタノール２００　ｍ
ｌ　　　　　　２　Ｘ　１７または（中和）１０％トリ
エチルアミン−９０％塩化メチレン（Ｖ／Ｖ）　２００
ｍｆ　　１　ｘ　１８または（洗浄）メタノール２００
ｍ１！　　　　　　２ｘ２９または（洗浄）塩化メチレ
ン２００ｍｊ！　　　　　２ｘ３１Ｏ０（カップリング
）各アミノ基保護アミノ酸（２０ミリモル）。

添加剤（ＨＯＢｔ）。

５０％ＤＭＦ−５０％塩化メチレン （Ｖ／Ｖ）　　１００　ｒｒｄｌ　　　　　　　　　　
　５　ｘ　ＩＤＣＣ（２０ミリモル）の 塩化メチレン溶液４０ｍ１！　　　　　　１２０ｘｌ１
１または（洗浄）５０％　ＤＭＦ−５０％塩化メチレン
（Ｖ／Ｖ）　２００　ｍＮｌ２．（洗浄）メタノール２
０〇− １３または（中和）１０％トリエチルアミン−９０％塩
化メチレン（ｖ／ｖ）２００−１４または（洗浄）メタ
ノール２０〇−１５または（洗浄）塩化メチレン２００
−１６または（アセチル化）２５％無水酢酸−７５％塩
化メチレン（Ｖ／Ｖ）　２００　ｍＮｌ７または（洗浄
）塩化メチレン２０〇−Ｘ２ ２×１ １×１ Ｘ２ ２×２ １５×　１ ２×２ 但し、工程ｌＯのカップリング反応後、少量の樹脂をニ
ンヒドリンで試験し、陽性青色となった場合には、カッ
プリング不完全であるとして同一の保護形アミノ酸を用
い反応を繰り返した。

実施例１１ １１ＧＮＰ（６−１１）の合成： 実施例１Ｏに記載の）ＩＣＮＰ（６−１１）ペプチド樹
脂０．７０ｇにアニソール３ｒｎＩ！、エチルメチルス
ルフィド０゜５−１無水フッ化水素２０ｍ１’を加え、
−２０℃６０分間、０℃６０分間反応させた。減圧濃縮
後、ジエチルエーテル２００−を加え３０分間撹拌し、
濾過しジエチルエーテル１００ｄで洗浄した。濾上物に
５％酢酸水１００ｄを加えて３０分間撹拌後、樹脂を濾
別し、５％酢酸水１００−で洗浄した。濾洗液を凍結乾
燥後、得られた粗ペプチドを水３０−に溶解し、予め０
．１％ＴＦ＾水で平衡化させた逆相系充填剤ＹＭＣ−＾
３６３　（Ｓ−５）　０口Ｓカラム（３０φＸ２５（１
ｍｍ）に注入し、カラムを０．１％ＴＦ＾水で洗浄後、
アセトニトリル濃度を１８０分で２７％まで増加させ、
流速７．　ＯｍＪ！　／　ｍｉｄ、で溶出した。

溶出液を＾２８０ｎｍでモニターし、目的物を含む両分
を集め、凍結乾燥し、−吹精製ＨＣＮＰ（６−１１）６
３．２■を得た。−吹精製ＨＣＮＰ　（６−１１）　４
０．０■をさらに、水０、５ｍｌ！に溶解し、予め０．
１％ＴＦ＾水で平衡化させた逆相系充填剤ＹＭＣ−Ａ３
６３　（Ｓ−５）　０口Ｓカラム（３０φＸ２５０ａ＋
ｍ）に注入し、カラムを０．１％ＴＦ＾水で洗浄後、ア
セトニ）　Ｕル濃度を６０分で２７％まで増加させ、流
速７．０ＬＩＩｊ！／ｍｉｎ、で溶出した。溶出液をＡ
２８０ｎｍでモニターし、目的物を含む両分を集め、凍
結乾燥し、ＩＩｃＮＰ（６−１１）２５．７■を得た。

得られたＨＣＮＰ　（６−１１）は、逆相系充填剤ＭＭ
Ｃ−八Ｍ３０３　（Ｓ−５）−００Ｓカラム（４，６φ
Ｘ２５（ｌｕｓ）を用いた、１０％から５０％までの０
．１％ＴＦ＾を含むアセトニトリルの直線濃度勾配溶出
法による分析において保持時間２３．７分を示し、その
アミノ酸分析値は理論値と一致した。

アミノ酸分析 加水分解：４Ｎメタンスルホン酸−２％トリプタミン、
１１０℃、２４時間 分析方法：　ＰＩＣローＴＡＧ　　（逆相−ＰＴＣアミ
ノｉ％！２）法＊基準アミノ＃　　（）内理論値 Ｇｌｘ：０．９６（１） Ｇｌｙ：１．０３（１） Δｌａ：０．９４（１） Ｐｒｏ：０．９３（１） ＊Ｌｅｕ：１．００　（１） Ｔｒｐ：０．６３（１） 実施例１２ ＨＣＮＰ（７−１１）の合成： 実施例１０に記載のＨＣＮＰ（７−１１）ペプチド樹脂
０．５０ｇにアニソール３ＩＩＬ１！、エチルメチルス
ルフィド０゜５−１無水フツ化水素２０１ｎ１を加え、
−２０℃６０分間、０℃６０分間反応させた。減圧濃縮
後、ジエチルエーテル２００−を加え３０分間撹拌し、
濾過しジエチルエーテル１００ｍ１！で洗浄した。濾上
物に５％酢酸水１００ａｔｌ！を加えて３０分間撹拌後
、樹脂を濾別し、５％酢酸水１００−で洗浄した。濾洗
液を凍結乾燥後、得られた粗ペプチドを１０％酢酸水５
０−に溶解し、予め０．１％ＴＦ＾水で平衡化させた逆
相系充填剤ＹＭＣ−Ａ３６３　（Ｓ−５）　００５カラ
ム（３０φＸ２５０ｍｍ）に注入し、カラムを０゜１％
ＴＦＡ水で洗浄後、アセトニトリル濃度を１８０分で２
８％まで増加させ、流速７．０−／ｍｉｎ、で溶出した
。溶出液をＡ２８０ｎｍでモニターし、目的物を含む両
分を集め、凍結乾燥し、）ＩｃＮＰ　（７−１１＞　４
４．８■を得た。

得られたＨＣＮＰ　（７−１１）は、逆相系充填剤ＹＭ
Ｃ−ＡＭ３０３　（Ｓ−５）−ロロＳカラム（４，６φ
Ｘ２５０＋ａｍ）を用いた、１０％から５０％までの０
．１％ＴＦ＾を含むアセトニトリルの直線濃度勾配溶出
法による分析において保持時間２４．３分を示し、その
アミノ酸分析値は理論値と一致した。

アミノ酸分析 加水分解＝４Ｎメタンスルホン酸−２％トリプタミン、
１１０℃、２４時間 分析方法二ＰＩＣＯ−Ｔ＾６　（逆相−ＰＴＣアミノ酸
〉法＊基準アミノ酸　（）内理論値 Ｇｌｙ：１．０５（１） Ａｌａ：０゜９５（１） Ｐｒｏ：０．９６（１） ＊Ｌｅｕ：１．００　（１） Ｔｒｐ：０．６２（１） 実施例１３ ＨＣＮＰ（２−１０）ＮＨ，の合成： 実施例２に記載のＨＣＮＰ（２−１０）ＮＨ，ペプチド
樹脂１．００ｇにアニソール３Ｉｎ１．、エチルメチル
スルフィド０．５−１無水フツ化水素２ＯＮ１を加え、
−２Ｏ℃６０分間、０℃６０分間反応させた。減圧濃縮
後、ジエチルエーテル２００−を加え３０分間撹拌し、
濾過しジエチルエーテル１００−で洗浄した。濾上物に
５％酢酸水１００−を加えて３０分間撹拌後、樹脂を濾
別し、５％酢酸水１００ｒｎｌ。

で洗浄した。濾洗液を凍結乾燥後、得られた粗ペプチド
を１０％酢酸水３００ｍ１！に溶解し、予め０゜１％Ｔ
Ｆ＾水で平衡化させた逆相系充填剤ＹＭＣ−Ａ３６３（
Ｓ−５）ＯＤＳカラム（３０φＸ２５０ｍｍ＋）に注入
し、カラムを０．１％ＴＦ＾水で洗浄後、アセトニトリ
ル濃度を３６０分で２１％まで増加させ、流速７．〇−
／ｍｉｎ、で溶出した。溶出液をＡ２８０ｎｍでモニタ
ーし、目的物を含む両分を集め、凍結乾燥し、ＨＣＮＰ
（２−１０）　ＮＨａ１０８．０麿ｇを得た。

得られたＨＣＮＰ（２−１０）ＮＨ，は、逆相系充填剤
ＹＭＣ−八Ｍ３０３　（Ｓ−５）−００Ｓカラム（４，
６φＸ２５０ｍｍ）を用いた、１０％から５０％までの
０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリルの直線濃度勾配溶
出法による分析において保持時間１９．７分を示し、そ
のアミノ酸分析値は理論値と一致した。

アミノ酸分析 加水分解：４Ｎメタンスルホン酸−２％トリプタミン、
１１０℃、２４時間 分析方法：　ＰＩＣＯ−Ｔへ〇　（逆相−ＰＴＣアミノ
酸）法＊基準アミノｉ！ｉ！　　（）内理論値Ａｓｘ：
０．９５（１） Ｇｌｘ：０．９２（１） Ｓｅｒ：０．９４（１） Ｇｌｙ：０．９５（１） ＊ＡＩａ　：２．ＯＯ（２） Ｐｒｏ：０．９９（１） １１ｅ：１．００（１） Ｔｒｐ：０．８２（１） 実施例１４ ＨＣＮＰ（２−８）ＮＬの合成： 実施例４に記載のＩＩｃＮＰ（２−８）　ＮＨ，ペプチ
ド樹脂０゜７６ｇにアニソール３−、エチルメチルスル
フィド０．５−１無水フッ化水素２０ｍ１を加え、−２
０℃６０分間、０℃６０分間反応させた。減圧濃縮後、
ジエチルエーテル２００＋ａｌ！を加え３０分間撹拌し
、濾過しジエチルエーテル１００−で洗浄した。濾上物
に５％酢酸水１００ｍｊ！を加えて３０分間撹拌後、樹
脂を濾別し、５％酢酸水１００ｙｄ！で洗浄した。濾洗
液を凍結乾燥後、得られた粗ペプチドを１０％酢酸水１
００−に溶解し、予め０．１％ＴＦＡ水で平衡化させた
逆相系充填剤ＹＭＣ−ＳＨ−３４３−５（Ｓ−５）　Ｏ
ＤＳカラム（２０φＸ２５０ｍｍ）に注入し、カラムを
０．１％ＴＦ＾水で洗浄後、アセトニ）ＩＪル濃度を１
８０分で２２％まで、さらに６０分で２８％まで増加さ
せ、流速？、Ｏｍ／ｍｉｎ、で溶出した。

溶出液を＾２８０ｎｍでモニターし、目的物を含む画分
を集め、凍結乾燥し、ＨＣＮＰ　（２−８）　ＮＬ６９
．４■を得た。

得られたＨＣＮＰ（２−８）Ｎ）１．は、逆相系充填剤
ＹＭＣ−ＡＭ３０３　（Ｓ−５）−〇〇Ｓカラム（４，
６φＸ２５０ａ＋ｍ）を用いた、１０％から５０％まで
の０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリルの直線濃度勾配
溶出法による分析において保持時間２０．４分を示し、
そのアミノ酸分析値は理論値と一致した。

アミノ酸分析 加水分解：４Ｎメタンスルホン酸−２％トリプタミン、
１１０℃、２４時間 分析方法：　ＰＩＣＯ−ＴＡＧ　　（逆相−ＰＴＣアミ
ノ酸）法＊基準アミノ酸　（）内理論値 Ａｓｘ：０．９８（１） Ｇｌｘ：０．９７（１） Ｓｅｒ：０．９２（１） ＊Ａ１ａ　：２．ＯＯ（２＞ １１ｅ：０．９Ｂ（１） Ｔｒｐ：０．８５（１） 実施例１５ １（ＣＮＰ　（２−７）の合成： 実施例５に記載のＩＩｃＮＰ　（２−７）ペプチド樹脂
０．９２ｇにアニソール３ｒｎｅ１エチルメチルスルフ
イド０゜５ｍｌ！、無水フッ化水素２０−を加え、−２
０℃６０分間、０℃６０分間反応させた。減圧濃縮後、
ジエチルエーテル２００ｍｊ！を加え３０分間撹拌し、
濾過しジエチルエーテル１００−で洗浄した。濾上物に
５％酢酸水１００Ｗｎ１を加えて３０分間撹拌後、樹脂
を濾別し、５％酢酸水１００−で洗浄した。濾洗液を凍
結乾燥後、得られた粗ペプチドを１０％酢酸水１００−
に溶解し、予め０．１％ＴＦ＾水で平衡化させた逆相系
充填剤ＹＭＣ−ＳＨ−３４３−５（Ｓ−５〉ロロＳカラ
ム（２０φＸ２５０ｍｌ０）に注入し、カラムを０．１
％ＴＦＡ水で洗浄後、アセトニトリル濃度を１８０分で
２４％まで、さらに６０分で３０％まで増加させ、流速
７．Ｑｄ／ｍｉｎ、で溶出した。

溶出液を＾２８０ｎｍでモニターし、目的物を含む画分
を集め、凍結乾燥し、ＨＣＮＰ　（２−７）　３５．８
■を得た。

得られたＩＩｃＮＰ　（２−７）は、逆相系充填剤ＹＭ
Ｃ−八Ｍ３０３　（Ｓ−５）−〇ＯＳカラム（４，６φ
Ｘ２５０ｍ）を用いた、１０％から５０％までの０．１
％ＴＦ＾を含むアセトニトリルの直線濃度勾配溶出法に
よる分析において保持時間２１．９分を示し、そのアミ
ノ酸分析値は理論値と一致した。

アミノ酸分析 加水分解：４Ｎメタンスルホン酸−２％トリプタミン、
１１０℃、２４時間 分析方法：　ＰＩＣＯ−ＴＡＧ　　（逆相−ＰＴＣアミ
ノ酸）法＊基準アミノ！　　（）内理論値 Ａｓｘ　：０゜９９（１） Ｇｌｘ：０．９７（１） Ｓｅｒ：０．９４（］） ＊ＡＩａ：１．００（］） １１ｅ：０．９９（１） Ｔｒｐ：０．７８（１） 実施例１６ Ｈｃ）ｉｆ’　（３−９）　Ｎｉ２の合成：実施例３に
記載のＨＣＮＰ　（３−９）　ＮＨｚペプチド樹脂０゜
７１ｇにアニソール３−、エチルメチルスルフィド０．
５ｍｌ、無水フッ化水素２Ｇ−を加え、−２０℃６０分
間、０℃６０分間反応させた。減圧濃縮後、ジエチルエ
ーテル２００−を加え３０分間撹拌し、濾過しジエチル
エーテル１００−で洗浄した。濾上物に５％酢酸水１０
０−を加えて３０分間撹拌後、樹脂を濾別し、５％酢酸
水１００ｒｎ１で洗浄した。濾洗液を凍結乾燥後、得ら
れた粗ペプチドを１０％酢酸水１００ｍ１’に溶解し、
予め０．１％ＴＦＡ水で平衡化させた逆相系充填剤ＹＭ
Ｃ−Ａ３６３　（Ｓ−５）　０［ＩＳカラム（３０φＸ
２５０ｍｍ）に注入し、カラムを０．１％ＴＦＡ水で洗
浄後、アセトニトリル濃度を１８０分で２１％まで増加
させ、流速？、０ｍｆｆ１／ｍｉｎ。

で溶出した。溶出液をＡ２８０ｎｍでモニターし、目的
物を含む両分を集め、凍結乾燥し、ＨＣＮＰ　（３−９
）　Ｎｉｌ。

２２．８を得た。

得られたＨＣＮＰ　（３−９）　Ｎｉ２は、逆相系充填
剤ＹＭＣ−八Ｍ３０３　（Ｓ−５）−００Ｓカラム（４
６６φ×２５０叩）を用いた、１０％から５０％までの
０，１％ＴＦ＾を含むアセトニトリルの直線濃度勾配溶
出法による分析において保持時間１８．８分を示し、そ
のアミノ酸分析値は理論値と一致した。

アミノ酸分析 加水分解：４Ｎメタンスルホン酸−２％トリプタミン、
１１０℃、２４時間 分析方法：　ＰＩ（’０−ＴＡＧ　　（逆相−ＰＴＣア
ミノ酸）法＊基準アミノＭ　　（）内理論値 Ａｓｘ：０．９９（１） Ｇｌｘ：０．９６（１） Ｓｅｒ：０．９２（１） Ｇｌｙ：０．９７（１） ＊Ａｌａ　　：１．ＯＯ（１） ！１ｅ：０．９９（１） Ｔｒｐ：０．８２（１） 実施例１７ １１ｃＮＰ　（４−８）　ＮＨ，の合成：実施例４に記
載のＨＣＮＰ（４−８）ＮＨ２ペプチド樹脂１゜１６ｇ
にアニソール３−、エチルメチルスルフィド０．５−１
無水フッ化水素２０−を加え、−２０℃６０分間、０℃
６０分間反応させた。減圧濃縮後、ジエチルエーテル２
００−を加え３０分間撹拌し、濾過しジエチルエーテル
１００−で洗浄した。濾上物に５％酢酸水１００−を加
えて３０分間撹拌後、樹脂を濾別し、５％酢酸水１００
−で洗浄した。濾洗液を凍結乾燥後、得られた粗ペプチ
ドを１０％酢酸水１００−に溶解し、予め０．１％ＴＦ
Ａ水で平衡化させた逆相系充填剤ＹＭＣ−＾３６３　（
Ｓ−５）　ＯＤＳカラム（３０φＸ２５０ｍｍ）に注入
し、カラムを０．１％ＴＦ＾水で洗浄後、アセトニトリ
ル濃度を３６０分で１７％まで増加させ、流速７．　Ｏ
ｎｅ　／　ｍ　ｉ　ｎ。

で溶出した。溶出液を＾２８０ｎｍでモニターし、目的
物を含む両分を集め、凍結乾燥し、ＨＣＮＰ　（４−８
）　Ｎ）Ｉ。

１２１、３■を得た。

得られた）ＩＣＮＰ（４−８）ＮＨ２は、逆相系充填剤
ＹＭＣ−ＡＭ３０３　（Ｓ−５）−〇ＯＳカラム（４，
６φＸ２５０ｍｍ）を用いた、１０％から５０％までの
０．１％ＴＦＡを含むアセトニ）　Ｕルの直線濃度勾配
溶出法による分析において保持時間１６．２分を示し、
そのアミノ酸分析値は理論値と一致した。

アミノ酸分析 加水分解＝４Ｎメタンスルホン酸−２％トリプタミン、
１１０℃、２４時間 分析方法：　ＰＩＣＯ−ＴＡＧ　　（逆相−ＰＴＣアミ
ノ酸）法＊基準アミノ酸　（）内理論値 Ｇｌｘ：０．９９（１） Ｓｅｒ：０．９１（１） ＊Ａ１ａ　：１．ＯＯ（１） １１ｅ：０．９９（１） Ｔｒｐ：０．７１（１） 実施例１８ １１ｃＮＰ　（４−８）の合成： 使用した樹脂は粒径１００−２００メツシユのクロロメ
チル化されたポリスチレンビニルベンゼン樹脂である（
１％ジビニルベンゼンで架橋、樹脂１ｇ当たり０．６８
ミリモルのクロライドを含有）。

ＨＣＮＰ（４−８）を合成するに当たり、まず２Ｊ１ｇ
のＢ。

Ｃ−＾１ａ−ＯＨをエチルアルコール１０ｍ１！、水３
−へ溶解し、２０％炭酸セシウム水溶液にてｐＨ７とし
、減圧濃縮し、乾燥させた。これに口ＭＦ１２０−を加
え、１５ｇのクロロメチル化樹脂を加え、５０℃にて１
２時間、さらに室温にて１２時間撹拌しエステル化した
得られたＢｏｃ−＾１ａ−ロー樹脂を濾過し、ＤＭＦ、
　９０％ＤＭＦ、　ＤＭＦ、エチルアルコールにて順次
洗浄し、かつ乾燥した。収量１５．８　ｇ　。

このＢｏｃ−Ａｌａ−０−樹脂３ｇを固相合成反応容器
に入れ、実施例４に記載のスケジュール２に従って、Ｂ
ｏｃ−Ｔｒｐ−０）１．　　Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−Ｏｆｆ、
　　Ｂｏｃ−５ｅｔ（Ｂｚｌ）−〇〇、Ｂ。

ｃ−１１ｅ−ロＨを順次カップリングさせた。その結果
、ＨＣＮＰ　Ｃ４−８）ペプチド樹脂４．０１ｇが得ら
れた。

このＨＣＮＰ　（４−８）ペプチド樹脂２．００ｇにア
ニソール３−、エチルメチルスルフィド０．５ｍ　、無
水フッ化水素２０−を加え、−２０℃６０分間、０℃６
０分間反応させた。減圧濃縮後、ジエチルエーテル２０
０−を加え３０分間撹拌し、濾過しジエチルエーテル１
００−で洗浄した。濾上物に５％酢酸水１００ｍ１！を
加えて３０分間撹拌後、樹脂を濾別し、５％酢酸水１０
０−で洗浄した。濾洗液を凍結乾燥後、得られた粗ペプ
チドを２．５％酢酸水２００−に溶解し、予め０．１％
ＴＦ＾水で平衡化させた逆相系充填剤ＭＭＣ−ＯＤＳ　
（Ｓ−１０／２０）カラム（３０φＸ３００ｍ１りに注
入し、カラムを０．１％ＴＦ＾水で洗浄後、アセトニト
リル濃度を２００分で１６％まで増加させ、流速６．Ｏ
−／　ｍｉｎ、で溶出した。溶出液をＡ２８０ｎｍでモ
ニターし、目的物を含む両分を集め、凍結乾燥し、ＨＣ
ＮＰ　（４−８）　１６６、３■を得た。

得られたＨＣＮＰ　（４−８）は、逆相系充填剤ＹＭＣ
−ＡＭ３０３（Ｓ−５）−００Ｓ力５　Ａ　（４，６φ
×２５０Ｉｌｆｆｉ）ヲ用イタ、１０％から５０％まで
の０．１％ＴＦ＾を含むアセトニトリルの直線濃度勾配
溶出法による分析において保持時間１７．９分を示し、
そのアミノ酸分析値は理論値と一致した。

アミノ酸分析 加水分解：４Ｎメタンスルホン酸−２％トリプタミン、
１１０℃、２４時間 分析方法：　ＰＩＣＤ−ＴＡＧ　　（逆相−ＰＴＣ７ミ
／酸）法＊基準アミノ酸　（）内理論値 Ｇｌｘ：１．０３（１） Ｓｅｒ：０．９７（１） ＊Ａ１ａ　：１．ＯＯ（１） １１ｅ：１．１１（１） Ｔｒｐ：０．６９（１） 実施例１９ ＮＨａ　（ＣＬ）　、Ｃ０−１１ｃＮＰ（２−７）の合
成：ＮＬ　（ＣＨ２）　、ＣＤ−）ＩＣＮＰ　（２−７
）の合成するに当たり、まずＮ）＋２（Ｃ）１．）　、
Ｃ００Ｈ１３，１ｇをＴＨＦ５０ｍｊ！　、水５ｏ−の
混合溶媒に溶解し、氷冷下ＴＢ＾１４−を加えまたは（
Ｂ。

ｃ）　ａｏ　２４．　Ｏｇを滴下し、室温で１２時間撹
拌した。

反応液に水１００ｍ１！、＾ｃＯＦｉｔ１００−を加え
、分液後水層をクエン酸で酸性にし、＾ｃＯＢｔｌｏＯ
−で２回抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、硫酸
マグネシウムで乾燥し溶媒を留去した。残渣にジエチル
エーテル４００−を加えて溶解後、ＣＩＡ９．９　ｇを
滴下し３０分間撹拌した。結晶を濾取し、ジエチルエー
テルで洗浄し、乾燥しテＢＯＣ−ＮＨ（ＣＨＩ）　ｓｃ
Ｏ叶・Ｃ）ｌ＾２８Ｊｇを得た。

実施例５に記載のＨＣＮＰ　（２−７）　ヘプｆｌ’樹
脂０．５０ｇを固相合成反応容器に入れ、実施例４に記
載のスケジュール２に従って、アミノ基保護アミノ酸の
代わりに上記Ｂｏｃ−ＮＨ（ＣＨＩ）ｓｃＯＯＨ−ＣＨ
＾を用いてカップリングを行った。但し、Ｂｏｃ−ＮＨ
（ＣＬ）　ａｃＯＯｆｌ・Ｃ）ＩＡはカップリングに先
だって、必要量を＾ｃＯＢｔ及び１０％クエン酸に懸濁
させ、全て溶解した後、有機層をさらに飽和食塩水で洗
浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し溶媒を留去すること
により、ＣＨ＾塩をはずしてから使用した。その結果、
ＮＨ２（Ｃ１，）　５ｃＯ−ＨＣＮＰ　（２−７）ペプ
チド樹脂０．５１ｇが得られた。

このＮ１１２（ＣＬ）ｓｃＯ−ｔｌｃＮＰ（２−７）ペ
プチド樹脂０．５１ｇにアニソール３−、エチルメチル
スルフィド０゜５−１無水フツ化水素２０ｎｄｌを加え
、−２０℃６０分間、０℃６０分間反応させた。減圧濃
縮後、ジエチルエーテル２００−を加え３０分間撹拌し
、濾過しジエチルエーテル１００−で洗浄した。濾上物
に５％酢酸水１００−を加えて３０分間撹拌後、樹脂を
濾別し、５％酢酸水１００−で洗浄した。濾洗液を凍結
乾燥後、得られた粗ペプチドを２．５％酢酸水２００Ｗ
ｄｌに溶解し、予め０．１％ＴＦ＾水で平衡化させた逆
相系充填剤ＹＭＣ−ロｏｓ（Ｓ−１０／２０）カラム（
３０φＸ３００ｍｍ）に注入し、カラムを０．２％Ｔｌ
’＾水で洗浄後、アセトニトリル濃度を２００分で２１
％まで増加させ、時速６．　Ｏｍｌ！／　ｍｉｎ。

で溶出した。溶出液を＾２８０ｒｃｍでモニターし、目
的物を含む画分を集め、凍結乾燥し、−吹精製Ｎ）＋２
（ＣＬン、Ｃ０−）ＩＣＮＰ（２−７）６０．９■を得
た。この−吹精製Ｎ）１２（Ｃ）１ｆ）ｓｃＯ−）ＩＣ
ＮＰ（２−７）はさらに５％酢酸水１００Ｎ１に溶解し
、予め０．１％ＴＦ＾水で平衡化させた逆相系充填剤Ｍ
ＭＣ−ＳＨ−３４３−５（Ｓ−５）　０口Ｓカラム（２
０φＸ５００１１１）に注入し、カラムを０．１％ＴＦ
＾水で洗浄後、アセトニ）　ＩＪル濃度を１８０分で１
９％まで、さらに６０分で２２％まで、さらに６０分で
２４％まで増加させ、流速７．Ｏｗｅ／ｍｉｎ、で溶出
した。溶出液を＾２８０ｎｍでモニターし、目的物を含
む両分を集め、凍結乾燥し、ＮＬ　（ＣＬ）　５ｃＯ−
ＨＣＮＰ　（２−７）　３４．３■を得た。

得られたＮｌ２（ＣＨ２）ＳＣＯ−ＨＣＮＰ（２−７）
は、逆相系充填剤ＹＭＣ−＾Ｍ３０３　（Ｓ−５）−〇
ＯＳカラム（４，６φ×２５０ｍａ＋）を用いた、１０
％から５０％までの０゜１％ＴＦ＾を含むアセトニ）　
ＩＪルの直線濃度勾配溶出法による分析において保持時
間２２．１分を示し、そのアミノ酸分析値は理論値と一
致した。

アミノ酸分析 加水分解：４Ｎメタンスルホン酸−２％トリプタミン、
１１０℃、２４時間 分析方法：　ＰＩＣＯ−ＴＡＧ　　（逆相−ＰＴＣアミ
ノ酸〉法＊基準アミノ酸　（）内理論値 Ａｓｘ：０．９４（１） Ｇｌｘ：０．９１（１） Ｓｅｔ：０．９０（１） ＊ＡＩａ：１．００（１） １１ｅ：１．０２（１） Ｔｒｐ：０．６２（１） ６−＾ｍ１ｎｏｈｅｘａｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　：　０．
７２　（１）実施例２０ ＨＯＯＣ（ＣＨＩ）、Ｃ０−ＨＣＮＰ（２−７）の合成
実施例５に記載ノＨＣＮＰ　（２−７）　ペプチド樹脂
０．５０ｇを固相合成反応容器に入れ、実施例４に記載
のスケジュール２に従って、工程１＝９の脱保護および
中和を行い、工程１０では無水グルタル＊０゜３４ｇの
塩化メチレン溶液１５ＩＩＩｊ！を加えて反応させた。

さらに工程１１〜１５をおこない、再び無水グルタル＃
０．３４ｇ、　　）リエチルアミン０．８４ｓｔｌ！の
塩化メチレン溶液１５−を加えて反応を行った。その後
、工程１１．１２．１５．１８の洗浄を行い、乾燥しテ
ＨＯ口Ｃ（ＣＨ，）　ａｃｔ−ＨＣＮＰ　（２−７）　
ヘプ−Ｆ−）’樹脂０゜４６ｇが得られた。

このＨＯＯＣ（ＣＨａ）　ｓＣローＨＣＮＰ　（２−７
）ペプチド樹脂０．４６ｇにアニソール３ｔｔ’、エチ
ルメチルスルフィド０゜５１Ｒ１、無水フッ化水素２０
−を加え、−２０℃６０分間、０℃６０分間反応させた
。減圧濃縮後、ジエチルエーテル２００−を加え３０分
間撹拌し、濾過しジエチルエーテル１００−で洗浄した
。濾上物に５％酢酸水１００ＩＩｄｌを加えて３０分間
撹拌後、樹脂を濾別し、５％酢酸水１００ｍｇで洗浄し
た。濾洗液を凍結乾燥後、得られた粗ペプチドを２．５
％酢酸水２００ＷＩ＆に溶解し、予め０．１％ＴＦ＾水
で平衡化させた逆相系充填剤ＹＭＣ−５Ｈ−３４３−５
（Ｓ−５）ロロＳカラム（２０φＸ２５０ｍ）に注入し
、カラムを０．１％ＴＦ＾水で洗浄後、アセトニトリル
濃度を１８０分で２５％まで、さらに６０分で２８％ま
で、さらに６０分で３０％まで増加させ、流速７．９ｄ
／ｍｉｎ、で溶出した。溶出液を＾２ＪｌＯｎｍでモニ
ターし、目的物を含む両分を集め、凍結乾燥し、ＨＯＯ
Ｃ（ＣＨ２）バトＨＣＮＰ（２−７）　１７．０■を得
た。

得られたＨＯＯＣ（ＣＨ，）　、ＣＤ−ＨＣＮＰ（２−
７）は、逆相系充填剤ＹＭＣ−ＡＭ−３０３−（Ｓ−５
）　ＯＤＳカラム（４，６φ×２５０關）を用いた、１
０％から５０％までの０．１％ＴＦ＾を含むアセトニト
リルの直線濃度勾配溶出法による分析において保持時間
２４．８分を示し、そのアミノ酸分析値は理論値と一致
した。

アミノ酸分析 加水分解＝４Ｎメタンスルホン酸−２％トリプタミン、
１１０℃、２４時間 分析方法：　ＰＩＣローＴＡＧ　　（逆相−ＰＴＣアミ
ノ酸）法＊基準アミノ！　　（）内理論値 Ａｓｘ：１．０１（１） Ｇｌｘ：０．９９（１） Ｓｅｒ：０．９８（１） ＊ＡＩａ：１．００（１） １１ｅ：１．０８（１） Ｔｒｐ：０．６７（１） 実施例２１ ＮＨ２Ｃ，（・ＮＨ）ＮＨＣ１１２ＣＯ−ＨＣＮＰ（２
−７）の合成：ＮＨａＣ（＝ＮＨ）　ＮＨＣＨａＣＯ−
ＨＣＮＰ　（２−７）を合成するにあたり、まずグアニ
ド酢Ｍ１０．ＯｇをＩＮ塩酸３０〇−に溶解し、撹拌後
減圧下濃縮した。残渣にジエチルエーテルを加えて、結
晶化した。結晶を濾取、ジエチルエーテルで洗浄し、乾
燥してグアニド酢酸・塩酸塩１３．１ｇが得られた。

実施例５に記載のＨＣＮＰ　（２−７）ペプチド樹脂０
．５０ｇを固相合成反応容器に入れ、実施例４に記載の
スケジュール２に従って、アミノ基保護アミノ酸の代わ
りに上記グアニド酢酸・塩酸塩を用いてカップリングを
行った。その時、５０％ＤＭＦ−５０％塩化メチレンの
代わりにＤＭＦを用い、添加剤は加えなかった。またニ
ンヒドリンで試験はせず、カップリングは２回行った。

さらに最初のカップリング後は中和工程は行わず、最後
のアセチル化も行わなかった。その結果、ＮＨ２Ｃ（＝
Ｎｌｌ）　ＮＨＣＨＩＣＤ−ＨＣＮＰ（２−７）ペプチ
ド樹脂０．４９ｇが得られた。

このＮＨａＣ（＝ＮＨ）　ＮＨＣＨＩＣＤ−ＨＣＮＰ　
（２−７）ペプチド樹脂０．４９ｇにアニソール３−、
エチルメチルスルフィド０．５−１無水フツ化水素２０
ｄを加え、−２０℃６０分間、０℃６０分間反応させた
。減圧濃縮機、ジエチルエーテル２００ｗｌ！を加え３
０分間撹拌し、濾過しジエチルエーテル１００−で洗浄
した。濾上物に５％酢酸水１００−を加えて３０分間撹
拌後、樹脂を濾別し、５％酢酸水１（１０ＩＲ１で洗浄
した。濾洗液を凍結乾燥後、得られた粗ペプチドを２．
５％酢酸水２００−に溶解し、予め０゜１％ＴＦ入水で
平衡化させた逆相系充填剤ＹＭＣ−ＯＤＳ（Ｓ−１０／
２０）カラム（３０φＸ３００ｍｍ）に注入し、カラム
を０．１％ＴＦ＾水で洗浄後、アセトニトリル濃度を２
００分で１９％まで増加させ、流速６．Ｏｗｉ／ｍｉｎ
、で溶出した。溶出液を＾２８Ｑｒｖでモニターし、目
的物を含む両分を集め、凍結乾燥し、ＮＨ，Ｃ（＝ＮＨ
）Ｎ）ＩＣＨ２ＣＯ−ＨＣＮＰ（２−７）　７．２■を
得た。

得られたＮＨ＊Ｃ（＝ＮＨ）　ＮＨＣＨ２Ｃ０−ＨＣＮ
Ｐ　（２−７）は、逆相系充填剤ＹＭＣ−ＡＭ３０３　
（Ｓ−５）−ＤＤＳカラム（４，６φ×２５０ｍ５）を
用いた、１０％から５０％までの０．１％ＴＦ＾を含む
アセトニトリルの直線濃度勾配溶出法による分析におい
て保持時間２１．５分を示し、そのアミノ酸分析値は理
論値と一致した。

アミノ酸分析 加水分解＝４Ｎメタンスルホン１１２−２％トリプタミ
ン、１１０℃、２４時間 分析方法：　ＰＩＣローＴＡＧ　　（逆相−ＰＴＣアミ
ノ酸〉法＊基準アミノ酸　（〉内理論値 Ａｓｘ：１．０５（１） Ｇｌｘ：１．０２（１） Ｓｅｒ：０，９７（１） ＊Ａｌａ：１．００（１） １１ｅ：１．０８（１） Ｔｒｐ：０．７３（１） 実施例２２ ＨＣＮＰ（１−７）ＮＨ（ＣＨりＳＣロロＨの合成　：
使用した樹脂は粒径１００−２００メツシユのクロロメ
チル化されたポリスチレンビニルベンゼン樹脂である（
１％ジビニルベンゼンで架橋、樹脂１ｇ当たり０．６６
　ミリモルのクロライドを含有）。

）１ＧＮＰ（］−７）Ｎ）１（Ｃ）１２）ｓｃＯＯ）１
を合成するに当たり、まず１．３１ｇのＢＯＣ−ＮＨ（
ＣＨ２）ＳＣロロＨ−ＣＨ＾をＡｃ０Ｂｔ及び１０％ク
エン酸に懸濁させ、全て溶解した後、有機層をさらに飽
和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し溶媒を
留去して、Ｃ８＾塩をはずした。そしてエチルアルコー
ル１０ｄ、水３ｍｊ！へ溶解し、２０％炭酸セシウム水
溶液にてｐＨ７とし、減圧濃縮し、乾燥させた。これに
ＤＭＦ４０−を加え、５ｇのクロロメチル化樹脂を加え
、５０℃にて２４時間撹拌し、エステル化した。得られ
たＢ。

ｃ−ＮＨ（ＣＬ）　ｓＣロロー樹脂を濾過し、ＤＭＦ、
　９０％ＤＭＦ、ローＦ、エチルアルコールにて順次洗
浄し、かつ乾燥した。収量５．２４ｇ。

このＢｏｃ−ＮＨ（ＣＨｓ）　ｓＣ口〇−樹脂２．２４
ｇを固相合成反応容器に入れ、実施例４に記載のスケジ
ュール２に従って、Ｂｏｃ−Ｔｒｐ−０）１．　Ｂｏｃ
−Ｇｌｎ−ロＨ，Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ〉−叶、　Ｂ
ｏｃ−１１ｅ−叶、　Ｂｏｃ−＾５ｐ（ＯｃＨｅｘ）−
０１（、Ｂｏａ−＾ｌａ−ロＨを順次カップリングさせ
た。最後のＢｏｃ−＾１ａ−ＯＨのカップリング及びア
セチル化工程終了後に、約１／２の樹脂を取り出し、残
りの樹脂はさらにスケジュール２に従って、Ｂｏｃ−Ａ
ｌａ−ＯＨをカップリングさせた。その結果、ＨＣＮＰ
　（１４）　Ｎｌ（（ＣＬ）　ｓｃ［１Ｏｔｌペプチド
樹脂１．６０ｇが得られた。

このｆ（ＣＮＰ　（１−７）　ＮＦＩ　（ＣＮ會）　５
ｃＱＯＮペプチド樹脂Ｏ，ａＯｇにアニソール３−、エ
チルメチルスルフィド０゜５ｍｉ’、無水フッ化水素２
０ｍ１！を加え、−２０℃６０分間、０℃６０分間反応
させた。減圧濃縮後、ジエチルエーテル２００−を加え
３０分間撹拌し、濾過しジエチルエーテル１００−で洗
浄した。濾上物に５％酢酸水１００ｄを加えて３０分間
撹拌後、樹脂を濾別し、５％酢酸水１００−で洗浄した
。濾洗液を凍結乾燥後、得られた粗ペプチドを２．５％
酢酸水２００−に溶解し、予め０．１％ＴＦ＾水で平衡
化させた逆相系充填剤ＹＭＣ−０口Ｓ　（Ｓ−１０／２
０）カラム（３０φＸ３００ｍｍ）に注入し、カラムを
０．１％ＴＦ＾水で洗浄後、アセトニトリル濃度を２０
０分で２４％まで増加させ、流速６．Ｑ−／ｍｉｎ。

で溶出した。溶出液を＾２８０ｎｍでモニターし、目的
物を含む画分を集め、凍結乾燥し、ＨＣＮＰ　（１−７
）　Ｎ）Ｉ（ＣＨｉ）　５ｃＯＯｆ１６．６７■を得た
。

得られたＨＣＮＰ　（１−７）　ＮＨ（ＣＬ）　５ｃｏ
ｏ旧よ、逆相系充填剤ＹＭＣ−ＡＭ３０３　（Ｓ−５＞
−［１０８カラム（４，６φＸ２．５０閤）を用いた、
１０％から５０％までの０．１％ＴＦＡを含むアセトニ
トリルの直線濃度勾配溶出法による分析において保持時
間２５．７分を示し、そのアミノ酸分析値は理論値と一
致した。

アミノ酸分析 加水分解：４Ｎメタンスルホン酸−２％トリプタミン、
１１０℃、２４時間 分析方法：　ＰＩＣローＴＡＧ　　（逆相−ＰＴＣアミ
ノＷ１）法＊基準アミノ酸　（）内理論値 Ａｓｘ：１．０５（１） Ｇｌｘ：１．０３（１） Ｓｅｒ：０．９８（１） ＊ＡＩａ：２．００　（２） １１ｅ：１．１０（１） Ｔｒｐ：０．８２（１） ６−＾ｍ１ｎｏｈｅｘａｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　：　０．
７２　（１）実施例２３ ＨＣＮＰ（２−７）ＮＨ（Ｃ）ｌａ）ｅＮＨ＊の合成：
（１）　　ＨＣＩ・　ＨＪ（ＣＨａ）ｓＮ）ｌ−Ｚの合
成ＨＪ　（ＣＨ２）　５Ｎｌｌａ　２０．　Ｏｇをアセ
トニトリル１１に溶解し、水冷下ＩＮ水酸化ナトリウム
水溶液１３９−を加え、２−Ｃｌ２２．２−を１０分間
で滴下し、３時間撹拌した。反応液をＩＮ塩酸で中和後
、析出した結晶を濾別した。濾液はさらに減圧下濃縮し
てアセトニトリルを留去し、析出した結晶を濾過し、水
洗後乾燥してＨＣＩ　−Ｈ，Ｎ（ＣＨＩ）　ＩＮＨ−Ｚ
　７．５２ｇを得た。

（２）　　Ｂｏｃ−Ｔｒｐ−ＮＨ（ＣＨｔ）ａＮＨ−Ｚ
の合成ＨＣＩ・　Ｈ，Ｎ（ＣＨａ）ＪＨ−２１，０ｇを
０ＭＦ２０−に懸濁し、ＴＢＢＯ２３７ｇを加えて中和
、溶解させた。

この溶液にＨＯＢｔ　Ｏ，５０ｇ、　Ｂｏｃ−Ｔｒｐ−
ＤＨ１，１ｇを加えて溶解させたのち、氷冷下ＥＯＣ−
ＨＣＬ　Ｏ，７０ｇを加えて３０分間撹拌し、さらに室
温で５時間撹拌した。反応液に＾ｃＯＢｔ２００Ｗ１１
を加え、５％クエン酸水、飽和炭酸水素ナトリウム水、
飽和食塩水の順に洗浄し硫酸マグネシウムにて乾燥後溶
媒を留去してＢｏｃ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−ＮＨ（ＣＨａ）
　５ＮＨ−Ｚｌ、９４ｇを得た。

（３）　Ｂｏｃ４ｒｐ−ＮＨ（ＣＨｉ）　ａＮＨ−Ｚの
合成りｏｃ−Ｔｒｐ−ＮＨ（ＣＨａ）ＪＨ−２１，９４
ｇをアセトニトリル２０−に溶解し、水冷下メタンスル
ホン酸２．４８ｇを加えた。室温にもどし１時間撹拌後
、０ＭＦ２０−を加え氷冷下ＴＥ＾２．６１ｇで中和し
た。

この溶液にＨＯ口ｔＯ，５４ｇ　、　Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−
ＤＨ０，９８ｇを加えて溶解させたのち、ＥＤＣ−ＨＣ
Ｌ　０．７６ｇを加えて３０分間撹拌し、さらに室温で
５時間撹拌した。反応液に＾ｃＯＢｔ２００−を加え、
５％クエン酸水、飽和炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩
水の順に洗浄し硫酸マグネシウムにて乾燥後溶媒を留去
して８ｏｃ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−ＮＨ（ＣＨ２）ｓＮＨ−
Ｚ２．０５ｇを得た。

（４）　　Ｂｏｃ−３ｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ
−Ｎｔｌ（Ｃ）ｌａ）ａＮＨ−Ｚの合成Ｂｏｃ−Ｇｌｎ
−Ｔｒｐ−ＮＨ（ＣＨａ）ｓＮＨ−２２，０５ｇをアセ
トニ）　ＩＪル２０−に溶解し、水冷下メタンスルホン
！’３．ＯＯｇを加えた。室温にもどし３時間撹拌後、
０ＭＦ２０ｍ１を加え水冷下ＴＥＡ３．１６ｇで中和し
た。この溶液に）ｌＯＢｔｏ、　４６　ｇ　、　Ｂｏｃ
−Ｓｅｔ　（Ｂｚｌ）−０８１、Ｏｌｇを加えて溶解さ
せたのち、ＥＤＣ−ＨＣＬＯ，６５ｇを加えて３０分間
撹拌し、さらに室温で２時間撹拌した。飽和食塩水１５
０−に反応液を滴下し、析出した沈澱を濾取した。濾上
物をヘキサン５０−で３回洗浄後、乾燥してＢｏｃ−Ｓ
ｓＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−ＮＨ（
ＣＨａ）　＠ＮＨ−Ｚ２．２９ｇをアセトニトリル２０
−に溶解し、水冷下メタンスルホン酸２．０２ｇを加え
た。室温にもどし１時間撹拌後、口ＭＦ２０ａｌ！を加
え氷冷下ＴＢ＾２．１２ｇで中和した。この溶液にＨ口
Ｂｔｕ、　４４ｇ　、　Ｂｏｃ−１１ｅ−ロＨ０，７７
ｇを加えて溶解させたのち、［！ＤＣ−ＨＣＬＯ，６１
ｇを加えて３０分間撹拌し、さらに室温で２時間撹拌し
た。飽和食塩水１５０−に反応液を滴下し、析出した沈
澱を濾取した。濾上物をヘキサン５０−で３回洗浄後、
乾燥してＢｏｃ−１１ｅ−３ｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｇｉｎ−
Ｔｒｐ−ＮＨ（ＣＨｚ）ｓＮＨ−Ｚ　２．３８ｇを得た
。

（６）　　　Ｂｏｃ−＾５ｐ（０＋ＪＩｅｘ）−１１ｅ
−Ｓｅｒ（口ｚｌ）−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｎｆｌ（ＣＬ）
　、ＮＨ−Ｚの合成 Ｂｏｃ−１１ｅ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−
Ｎ）Ｉ（ＣＬ）ＪＨ−２２，３８ｇをアセトニトリル２
０ｍｊ！に溶解し、水冷下メタンスルホン酸２．７１ｇ
を加えた。室温にもどし２時間撹拌後、口ＭＦ２０ＷＩ
ｄｌとＮＭＰ２０１Ｉｄｔを加え氷冷下Ｔｌｌ！＾２．
９１ｇで中和した。この溶液にＨＯＢｔＯＪ６ｇ、　Ｂ
ｏｃ−＾ｓｐ（口ｃＨｅｘ）−ＯＨＯ，８４ｇを加えて
溶解させたのち、ＢＤＣ−ＨＣＬ　Ｏ，５１ｇを加えて
３０分間撹拌し、さらに室温で２時間撹拌した。飽和食
塩水１５０ｄに反応液を滴下し、析出した沈澱を濾取し
た。濾上物をヘキサン５０−で３回洗浄後、乾燥してＢ
ｏｃ−＾ｓｐ　（ＯｃＨｅｘ）−ｌ　１ｅ−Ｓｅｒ　（
Ｂｚｌ）−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−ＮＨ（ＣＨｓ）　５ＮＨ−
Ｚ　　２．８０ｇを得た。

（７）　　Ｂｏｃ−＾１ａ−Ａｓｐ（ＯｃＨｅｘ）−１
１ｅ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−ＮＨ（Ｃ１
，）　５ＮＨ−ＺｊＤ　合ａＢｏｃ−＾ｓｐ　（ＯｃＨ
ｅｘ）　−１１ｅ−３ｅｒ　（Ｂｚ　１）　−Ｇ　Ｉｎ
−Ｔｒｐ−ＮＨ（ＣＨＩ）　５ＮＨ−Ｚ　０．６０　ｇ
をアセトニトリルｌＯ−に溶解し、水冷下メタンスルホ
ン酸０．７４ｇを加えた。

室温にもどし１時間撹拌後、０ＭＦ２０−とＮＭＰ１５
Ｗｄｌを加え氷冷下ＴＢ＾Ｏ，？８ｇで中和した。この
溶液にＨＯＢｔＯ００８ｇ　、　Ｂｏｃ−＾５ｐ（Ｏｃ
Ｈｅｘ）−叶０．１１ｇを加えて溶解させたのち、ＢＤ
Ｃ−ＨＣＬ　Ｏ，１１ｇを加えて３０分間撹拌し、さら
に室温で３時間撹拌した。飽和食塩水１５０Ｉ１１１に
反応液を滴下し、析出した沈澱を濾取した。濾上物をヘ
キサン５０−で３回洗浄後、乾燥して８ｏｃ−＾１ａ−
＾５ｐ（ＯｃＨｅｘ）−１１ｅ−５ｅｒ　（Ｂｚｌ）−
Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−Ｎｌ（（ＣＬ）　ＪＨ−１Ｏ，７１ｇ
を得た。

（８）　ＨＣＮＰ（２４）ＮＨ（ＣＨＩ）Ｊｆ（＊の合
成：Ｂｏｃ−＾１ａ−＾５ｐ（ＯｃＨｅｘ）−ｆｌｅ−
Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−ＮＨ（ＣＨａ）　
ＪＨ−Ｚ　０．７１　ｇにアニソール３ｍｊｉ’、エチ
ルメチルスルフィド０．５ｍｌ’、無水フッ化水素２〇
−を加え、−２０℃６０分間、０℃６０分間反応させた
。減圧濃縮後、ジエチルエーテル２００−を加え３０分
間撹拌し、濾過しジエチルエーテル１００ａ１で洗浄し
た。濾上物に５％酢酸水１００−を加えて３０分間撹拌
後、樹脂を濾別し、５％酢酸水１００ｍ１！で洗浄した
。濾洗液を凍結乾燥後、得られた粗ペプチドを１０％酢
酸水５０−に溶解し、予め０．１％ＴＦ＾水で平衡化さ
せた逆相系充填剤ＹＭＣ−ＳＨ−３４３−５（Ｓ−５）
　ＯＯＳカラム（２０φＸ２５０ｍｍ）に注入し、カラ
ムを０．１％ＴＦ＾水で洗浄後、アセトニトリル濃度を
１８０分で２３％まで、さらに６０分で２６％まで、さ
らに６０分で２８％まで増加させ、流速？、　Ｏａ７　
／　ｌｌｌ１ｎ、で溶出した。溶出液を＾２８０ｒ＋ｍ
でモニターし、目的物を含む両分を集め、凍結乾燥し、
ＨＣＮＰ（２−７）Ｎ）Ｉ（ＣＨ，）ＪＨ，１７０，７
■を得た。

得られたＨＣＮＰ（２−７）ＮＨ（ＣＨＩ）、ＮＨ，は
、逆相系充填剤ＹＭＣ−ＡＭ３０３　（Ｓ−５）−〇〇
Ｓカラム（４，６φ×２５０ｍｍ）を用いた、１０％か
ら５０％までの０゜１％ＴＦ＾を含むアセトニトリルの
直線濃度勾配溶出法による分析において保持時間２３．
４分を示し、そのアミノ酸分析値は理論値と一致した。

アミノ酸分析 加水分解：４Ｎメタンスルホン酸−２％トリプタミン、
１１０℃、２４時間 分析方法：　ＰＩＣＯ−ＴＡＧ　（逆相−ＰＴＣアミノ
酸）法＊基準アミノ酸　（）内理論値 Ａｓｘ：０．８０（１） Ｇｌｘ：０．７９（１） Ｓｅｒ：０．８９（１） ＊Ａ１ａ　　：ｉ、ｏｏ　　（１） １１ｅ：１．０１（１） Ｔｒｐ：０．６５（１） 実施例２４ ＨＣＮＰ　（２４）　ＮＨ（ＣＨａ）　４８ＨＣ（＝Ｎ
Ｈ）　ＮＨｓの合成：（１）　Ｂｏｃ−ＮＨ（ＣＨＩ）
、ＮＨＣ（＝Ｎｌｌ）ＮＨ−Ｔｏｓの合成アグマチン硫
酸塩０．５５ｇを水１０ｍ１’に溶解しＴＩ！八〇へ６
ｇを加えて中和した。この溶液に（Ｂｏｃ）ｓｏｏ、７
８ｇとジオキサン２−を加えて、室温で２４時間撹拌し
た。反応液に水を加え、ジエチルエーテルで洗浄してＢ
ｏｃ−ＮＨ（Ｃ１，）　４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ，水溶
液（約３０−）が得られた。この水溶液に水冷下ＮａＯ
Ｈ１，２ｇを加え、Ｔｏｓ−ＣＩ２．７５ｇのＴＨＦ（
１０ｍｇ）溶液を滴下し、さらに室温で１５時間撹拌し
た。反応液を４ＮＨＣＩで中和後、Ａｃ０Ｅｔを加え飽
和食塩水で洗浄し硫酸マグネシウムにて乾燥後溶媒を留
去してＢｏＣ−Ｎ）Ｉ（Ｃ）１２）ａＮ）ＩＣ（＝ＮＨ
）Ｎ）Ｉ−Ｔｏｓ　１．２２ｇを得た。

（２）Ｂｏｃ−Ｔｒｐ−ＮＨ（Ｃ）Ｉ　、）　４ＮＨＣ
（＝ＮＨ）　Ｎ）Ｉ−Ｔｏｓの合或Ｂｏｃ−ＮＨ（ＣＨ
ａ）ａＮＨｃ（＝ＮＨ）ＮＨ−Ｔｏｓ　１．２２ｇをア
セトニトリル１０ｍｆに溶解し、メタンスルホンＷ１０
゜９１ｇを加え室温で３０分間撹拌した。反応液を水冷
下ＴＥＡ０．９６ｇで中和し、０ＭＦ２０−を加え、さ
らにＨＯＢｔｏ、５１ｇ、　Ｂｏｃ−Ｔｒｐ−ＤＨｌ、
１６ｇを加えて溶解させたのち、ＢＤＣ−ＨＣＬ　０．
７３ｇを加えて室温で３時間撹拌した。アセトニトリル
を減圧留去後、＾ｃＯεｔと水を加え、１０％クエン酸
水、飽和炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水の順に洗浄
し硫酸マグネシウムにて乾燥後溶媒を留去して　Ｂｏｃ
−Ｔｒｐ−ＮＨ（ＣＨａ）ＪＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ−Ｔｏ
ｓ　２．０９ｇを得た。

（３）　Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−ＮＨ（ＣＨｚ）ＪＨ
Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ−Ｔｏｓの合成Ｂｏｃ−Ｔｒｐ−ＮＨ
（Ｃ）ｌ＊）ＪＨＣ（：Ｎ）ｌ）ＮＨ−Ｔｏｓ　２．０
９ｇをアセトニトリル２０ｄに溶解し、メタンスルホン
８１３、５３　ｇを加え室温で２時間撹拌した。反応液
を水冷下τε＾３．７０ｇで中和し、ＯＭＦ　２０−を
加え、さらにＨＯＢｔ　Ｏ，５９ｇ、　Ｂｏｃ−Ｇｉｎ
−ＯＢｌ、０９ｇを加えて溶解させたのち、ＥＤＣ−Ｈ
ＣＬ　０．８４ｇを加えて室温で２．５時間撹拌した。

アセトニトリルを減圧留去後、＾ｃＯＢｔと水を加え、
１０％クエン酸水、飽和炭酸水素ナトリウム水、飽和食
塩水の順に洗浄し硫酸マグネシウムにて乾燥後溶媒を留
去してＢｏｃ−Ｇｉｎ−ＴｒＰ−ＮＨ（ＣＨａ）　４Ｎ
ＨＣ（＝ＮＨ）　ＮＨ−Ｔｏｓ　２．２７ｇを得た。

（４）　　Ｂｏｃ−５ｅｔ（口ｚｌ）−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ
−ＮＨ（ＣＨａ）４ＮＨＣ←１ｉｆｔ）ＮＨ−Ｔｏｓの
合成 Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−ＮＨ（ＣＬ）、ＮＨＣ（二Ｎ
ｔｌ）ＮＨ−Ｔｏｓ　　２．２７ｇをアセトニトリル２
０−に溶解し、メタンスルホン＃３．１２ｇを加え室温
で３０分間撹拌した。

反応液を水冷下↑Ｅ＾３．７０ｇで中和し、アセトニト
リル（１５ｍり溶液で中和し、口ＭＦ５０−を加え、さ
らにＨＯＢｔ　Ｏ，５２ｇ、　Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（口ｚｌ
）−ＤＨ８゜０５　ｇを加えて溶解させタノち、ＢＤＣ
−１（ＣＬ　５゜２３ｇを加えて室温で一夜撹拌した。

反応液にＡｃ０ｆｉｔと水を加え、１０％クエン酸水、
飽和炭酸水素す）　ＩＪウム水、飽和食塩水の順に洗浄
し硫酸マグネシウムにて乾燥後溶媒を留去した。得られ
た残渣を＾ｃＯＥｔ−ジエチルエーテルより再結晶し、
濾取し、ジエチルエーテルにて洗浄後乾燥して　Ｂｏｃ
−５ｅｒ　（Ｂｚ　Ｉ）−Ｇ　Ｉｎ−ＴｒＰ−Ｎ）ｌ　
（ＣＨａ）　４　ＮＨＣ（＝ＮＩＩ）　ＮＨ−Ｔｏｓｌ
、　９６ｇを得た。

（５）　　ロｏｃ−１１ｅ−Ｓｅｔ（口ｚｌ）−Ｇｌｎ
−Ｔｒｐ−ＮＨ（ＣＨｇ）４ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｎｆｌ−
Ｔｏｓの合成 Ｂｏｃ−３ｅｒ　（Ｂｚｌ）−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｎ）ｌ
（ＣＨｌ）　ＪＨＣ（：ＮＨ）　ＮＨ−Ｔｏｓｌ、９６
ｇをアセトニトリル５０−に溶解し、メタンスルホンＲ
２，１５ｇのアセトニトリル（１０−〉溶液を加え室温
で１時間撹拌した。反応液を水冷下ＴＩＥＡ２．２６　
ｇのアセトニトリル（２５ｍｌ）溶液で中和し、０ＭＦ
５０−を加え、さらにＨＯＢｔ　Ｏ，６０ｇ、　Ｂｏｃ
−１１ｅ−ＯＮ　１．０８　ｇを加えて溶解させたのち
、ＥＯＣ−１（ＣＬ　Ｑ、　８５ｇを加えて室温で一夜
撹拌した。反応液に＾ｃＯＢｔと水を加え、１０％クエ
ン酸水、飽和炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水の順に
洗浄した。有機層にヘキサンを加え、析出した沈澱を濾
取し、ヘキサンにて洗浄後乾燥してＢｏｃ−１１ｅ−３
ｅｒ　（８ｚｌ）−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−Ｎｆｌ（ＣＨａ）
　−ＮＨＣ（＝ＮＨ）　ＮＨ−Ｔｏｓｌ、　７９　ｇを
得た。

（６）　　Ｂｏｃ−八５ｐ（ＯｃＨｅｘ）−１１ｅ−３
ｅｔ（Ｂｚｌ）−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｎ）ｌ（ＣＨ２）　
、　ＩＩＨｃ　（＝Ｎｌ＋）〜Ｈ−Ｔｏｓの合成８ｏｃ
−１１ｅ−３ｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−ＮＨ（
Ｃ）Ｉａ）　、ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ−Ｔｏｓｌ、　７
９ｇをアセトニトリル６ｏｒｎＩ！に溶解し、メタンス
ルホン酸１．７４ｇのアセトニトリル（１０−）溶液を
加え室温で１．５時間撹拌した。反応液を水冷下Ｔ６＾
１．８３ｇのアセトニトリル（３０ｍｌ’）溶液で中和
し、口ＭＦ１００１ｎ１を加え、さらに　ＨＯＢｔ　０
１４８ｇ、　８ｏｃ−＾５ｐ（ＯｃＨｅｘ）−ＤＨ１，
１４ｇ１Ｊ［Ｉｔテ溶解すｆり（７）チ、ＥＤＣ−）Ｉ
ＣＬ　０．６９ｇを加えて室温で２時間撹拌した。反応
液に飽和食塩水２００−を水冷下で滴下し、沈澱を濾取
し、水洗後乾燥してＢｏｃ−＾ｓｐ（口ｃＨｅｘ）　−
１１ｅ−Ｓｅｒ　（Ｂｚｌ）−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−Ｎ）ｌ
　（ＣＬ）　４８）ＩＣ（＝ＮＨ）　Ｎ）ｌ−Ｔｏｓ２
．８６　ｇを得た。

（７）　Ｂｏｃ−＾１ａ−＾５ｐ（ＯｃＨｅｘ）−１１
ｅ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−ＮＨ（ＣＨ２
）　ｓ　ＮＨＣ（＝ＮＨ）　ＮＨ−Ｔｏｓの合成Ｂｏｃ
−＾５ｐ（ＯｃＨｅｘ）−１１ｅ−Ｓｅｒ　（Ｂｚｌ）
−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−ｆｔ（ＣＬ）　＜ＮＨＣ（二ＮＨ）
ＮＨ−Ｔｏｓ２．８６ｇをアセトニトリル４０−に溶解
し、メタンスルホンＲ２，３２ｇのアセトニトリル（１
０ｍｆ）溶液を加え室温で１時間撹拌した。反応液を水
冷下ＴＢ＾２．４３ｇのアセトニトリ、ル（２５−）溶
液で中和し、叶Ｆ　１００−を加え、さらにＨＯＢｔ　
０．６５ｇ、　Ｂｏｃ−＾１ａ−ＯＨ０゜９１ｇを加え
て溶解ｉｋ　ｆ　タ（Ｄち、ｌＩＤＣ−ＨＣＬ　Ｏ，９
２ｇを加えて室温で一夜撹拌した。反応液に飽和食塩水
２００−を氷冷下で滴下し、沈澱を濾取し、水洗後乾燥
してＢｏｃ−＾１ａ−＾ｓｐ（口ｃＨｅｘ）−１１ｅ−
Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−ＮＨ（ＣＨ２）Ｊ
ＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ−Ｔｏｓ　１゜１１２ｇを得た。

（８）　ＨＧＮＰ（２−７）Ｎ）Ｉ（Ｃ）Ｉｓ）４ＮＨ
Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨａの台底：Ｂｏｃ−Ａｌａ−＾５ｐ（
ＯｃＨｅｘ）−１１ｓ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｇｌｎ−Ｔ
ｒｐ−ＮＨ（ＣＨａ）４ＮＩＣ（＝Ｎ）ｌ）ＮＨ−Ｔｏ
ｓ　Ｏ，９１ｇにアニソール３−、エチルメチルスルフ
ィド０．５ｄ、無水フッ化水素２０ａ１！を加え、−２
０℃６０分間、Ｏ℃６０分間反応させた。減圧濃縮後、
ジエチルエーテル２００−を加え３０分間撹拌し、濾過
しジエチルエーテル１００−で洗浄した。濾上物に５％
酢酸水１００−を加えて３０分間撹拌後、樹脂を濾別し
、５％酢酸水１００Ｉｎｌで洗浄した。濾洗液を凍結乾
燥後、得られた粗ペプチドを１０％酢酸水１００ｄに溶
解し、予め０゜１％↑Ｆ＾水で平衡化させた逆相系充填
剤ＹＭＣ−ＳＨ−３４３−５（Ｓ−５）　０口Ｓカラム
（２０φＸ５００ａ＋ｓ）に注入し、カラムを０．１％
ＴＦ＾水で洗浄後、アセトニトリル濃度を１８０分で１
８％まで、さらに６０分で２１％まで、さらに６０分で
２３％まで増加させ、流速７．０ｙｄ　／　ｍｉｎ、で
溶出した。

溶出液を＾２８０ｎｍでモニターし、目的物を含む両分
を集め、凍結乾燥し、ｔｌｃＮＰ（２−７）Ｎ）ｌ（Ｃ
Ｈｆｆ）４Ｎ）ＩＣ（＝ＮＨ）ＮＨａ　１２２．４１１
ｇを得た。

得られたＨＣＮＰ　（２−７）　ＮＨ（ＣＨ雪）４Ｎ）
Ｉｃ（＝Ｎｔｌ）ＮＨ２は、逆相系充填剤Ｙ肛−＾Ｍ３
０３　（Ｓ−５）−〇〇Ｓカラム（４，６φＸ２５０ａ
ｍ）を用いた、１０％から５０％までの０．１％ＴＦ＾
を含むアセトニトリルの直線濃度勾配溶出法による分析
において保持時間１９．３分を示し、そのアミノ酸分析
値は理論値と一致した。

アミノ酸分析 加水分解：４Ｎメタンスルホン酸−２％トリプタミン、
１１０℃、２４時間 分析方法：　ＰＩＣＯ−ＴＡＧ　（逆相−ＰＴＣアミノ
ＷＮ）法＊基準アミノＨ（）内理論値 Ａｓｘ：０．９０（１） Ｇｌｘ：０．８６＜１） Ｓｅｒ：０．９５（１） ＊Ａｌａ　：１．００　（１） １１ｅ：１．００（１） Ｔｒｐ：０．６６（１） ＾ｇｍａｔｉｎｅ：　１．１８　　（１）実施例２５ 生物学的活性の測定： 生物学的活性の測定法は、小腹幸生ら〔薬物・精神・行
動、７巻、４４７〜４５１頁（１９８５）　］の方法に
準じて行った。即ち、胎令１６日目のラット脳から摘出
した中隔中心核を細切後、ファルコン社製３５ｍｍプラ
スチック製培養皿中で、１％ＦＣ３を含むボッテンシコ
タイン（８ｏｔｔｅｎｓｔｅｉｎ）等の改変Ｎ２培養液
を用いて、７％炭酸ガス混合空気、３６℃の条件下で培
養した。培養３日目より、検体として神経栄養ペプチド
誘導体を培養系に添加しく対照群は無添加）、培養９日
目に培養組織のアセチルコリン（ＡＣｈ）産生能を測定
し、生物学的活性とした。ＡＣｈ産生能は培養組織をト
リス塩酸（ｐＨ７，４）を緩衝系とするタイロード液に
てプレインキコベーションした後、１１００ｎ　［’８
１コリンクロライド（１５ｃｉ／ｍｍｏｌ）を含む緩衝
液で３７℃、３０分インキエベート後、フリーの〔＋ｌ
Ｈ〕コリンを洗浄除去後、１Ｎギ酸／アセトン（１５：
８５）溶液で組織を溶解し、フリー〔３）１）コリンを
コリンキナーゼ（０，１ユニット／−）でフｔスフォコ
リンに転換、Ｃ″Ｈ）ＡＣｈをテトラフェニルボロン（
５■／＋ｆ！アセトニトリル）で抽出し、培養組織のＡ
Ｃｈ産生能を検討した。培養組織のＡＣｈ産生能は単位
培養組織片当たりのＡＣｈ量の対照群に対する変化量で
表現した。

以下の表−１に、本発明の神経栄養ペプチド誘導体のい
くつかの代表例について、特徴的な生物学的活性の一例
を示す。但し、ＡＣｈ産生能は対照群を１００％とした
値である。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記の式（ I ）で表されるアミノ酸配列の全部
   または一部のペプチド鎖からなるコリナージック・ニュ
   ーロンのアセチルコリン合成能増大活性を有するペプチ
   ド又はそのＮ末端及び／又はＣ末端を修飾したペプチド
   である神経栄養ペプチド誘導体（但し、 【遺伝子配列があります。】 を除く）。 【遺伝子配列があります。】（ I ）
2. （２）配列−Ｔｒｐ−を含有することからなる請求項（
   １）記載の神経栄養ペプチド誘導体。
3. （３）３個以上のアミノ酸を含有することからなる請求
   項（１）または（２）記載の神経栄養ペプチド誘導体。
4. （４）請求項（１）、（２）又は（３）記載の神経栄養
   ペプチド誘導体を有効成分とする神経変性疾患治療剤。
5. （５）請求項（１）、（２）又は（３）記載の神経栄養
   ペプチド誘導体を有効成分とする抗痴呆剤。