JPH03187386A - ４―ヒドロキシアルカン酸を繰り返し単位とするポリエステル及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、４−ヒドロキシアルカン酸を繰り返し単位と
するポリエステル及びその製造方法と使用方法に関する
。

更に詳しくは、本発明は、炭素数４〜６の４ヒドロキシ
アルカン酸を主要な繰り返し単位とするポリエステルに
関し、特に４−ヒドロキシブタン酸を主要な繰り返し単
位とするポリエステルが好ましいものである。

〔従来の技術〕

特定のバクテリアが、細胞内で３−ヒドロキシブタン酸
残基からポリエステルを蓄積（ｃｏｎｃｅｎｔｒｔｉｎ
ｇ）する能力を有することが知られている。そのような
ポリエステルは、必然的に好気性微生物または土壌微生
物の細胞内において特に粒体として存在する。このよう
なポリエステル類は、基本的にはＤ−（−）−β−ヒド
ロキシブタン酸のポリマーとして存在している（ダウニ
ス（Ｄａｗｅｓ）ら、Ａｒｃｈ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、
Ｐｈｙｓｉｏｌ、　１４，２０３−２６６．１９７３　
）。

生分解性ポリエステル類は、従来から知られており、飽
和脂肪族ヒドロキシモノカルボン酸（アルカン酸）から
微生物学的方法で得られ、それらはアルカリゲネスユー
トローファス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎ−ｅｓ　ｅｕｔｒｏ
ｐｈｕｓ）の作用により得ることができるものであるが
、３−ヒドロキシブタン酸（３ＨＢ）及び４−ヒドロキ
シブタン酸（４ＨＢ）の両方を種々の割合でランダムに
含む（クニオカら（Ｋｕｎ　１ｏｋａｅｔ　ａｌ、　）
、　Ａｐｐｌ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　Ｂｉｏｔｅｃ
ｈｎｏｌ、　３０（６）、　５６９５７３、１９８９）
か、または、２種の異なる３−ヒドロキシアルカン酸類
の偶然混合物を含む共重合体からなるものである（ＤＢ
−Ｏ３３，８１１，２３１５ＥＰ−Ａ　２８８゜９０８
）。

これまで、４−ヒドロキシアルカン酸から異性体に関し
て純粋なポリエステルの合成法は知られていない。

生体内吸収性ポリエステルは、現在、医療の分野で注目
されている。分解して無毒性物質になるポリマーについ
て多様な利用方法に照らして、その化学的構造が正確に
決定されている生体内吸収性ポリエステルに対する興味
は益々高まっているのである。

〔発明が解決すべき課題〕

本発明の目的は、４−ヒドロキシアルカン酸を繰り返し
単位とし、その化学的構造が決定されているポリエステ
ルを製造することにある。

〔課題を解決するための手段〕

この課題の解決方法として、飽和脂肪族モノカルボン酸
、好ましくは４−位に水酸基が置換した炭素数４〜６の
鎖長の飽和脂肪族モノカルボン酸、特に４−ヒドロキシ
ブタン酸が、異性体に関して純粋であり、かつ、４−ヒ
ドロキシアルカン酸の含有量が４０％以上、６０％以上
、７０％以上、または９０％以上であることによって特
徴づけられるポリエステルの製造出発原料として一使用
できること、及び一方ではその重合反応が、特定の微生
物及びそれらから得られた突然変異株の作用によって進
行するということが見出された。

４ＨＢを炭素源として使用しても、４ＨＢを０〜３７モ
ル％の変動域で含む共重合ポリエステル類しか得られな
いという先行技術（クニオカらの前掲文献）から、また
他方ではポリ（３ＨＢ）を得ることを目的とした生合成
法しか知られていないことから、この種のポリエステル
合成法はこれまで知られておらず、また、予測されても
いなかった。それ故、異性体に関しても純粋であり、か
つ、４−ヒドロキシアルカン酸の組成が４０％以上であ
る、４−ヒドロキシアルカン酸から得られるポリエステ
ルの微生物による製造は、実施不可能であるとみられて
いた。

驚くべきことに、３ＨＢに用いること及びそれをポリ（
３ＨＢ）の形で蓄積することで知られており（例えば、
ダウニスらの前掲文献）、また、４ＨＢについて用いる
ことができるが４ＨＢを偶然比率（４ＨＢ、０〜３７モ
ル％）で、それも限られた範囲内でしか含まない共重合
体を生成することで知られている微生物を使用すること
によって、培養培地中のこれら微生物に適切な４−ヒド
ロキシアルカン酸が供給されたならば、対応する４−ヒ
ドロキシアルカン酸、特に炭素数４〜６の鎖長の４−ヒ
ドロキシアルカン酸、更に好ましくは４−ヒドロキシブ
タン酸から、本発明によるポリエステルを製造すること
が可能であることが判った。もし、これら微生物が突然
変異操作に付されたならば、これらポリエステルを縮合
できる突然変異株は選択的に単離され得る。

従って、本発明は、対応する４−ヒドロキシブタン酸か
らポリ（４−ヒドロキシブタン酸）を合成する能力のあ
る微生物に関するものでもあり、これら微生物の突然変
異によって得ることができる微生物に関するものでもあ
る。

本発明によれば、本発明によるポリエステルは以下の段
階を含む工程によって製造され得る。

１、４−ヒドロキシアルカン酸、好ましくは、炭素数４
〜６の鎖長の４−ヒドロキシアルカン酸、更に好ましく
は４−ヒドロキシブタン酸からなるポリエステルを合成
する能力を有する微生物からの純粋な培養物の蓄積（ｃ
ｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　）及び選別、またはそれら
の突然変異株の純粋な培養物の調製。

２、上記の４−ヒドロキシアルカン酸の一種を含む培養
培地中でのバッチ法、連続バッチ法（ｆｅｄｂａｔｃｈ
　ｍｅｔｈｏｄ）（バイオテクノロジーハンドブック（
Ｈａｎｄｂｕｃｈ　ｄｅｒ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｉｅ）第２版プレフエ（Ｐｒａｖｅ）ら著、１９８４年
オルデンブルグ（Ｏｌｄｅｎｂｕｒｇ）にて発行）、二
段階法または連続法によるこれら微生物の純粋な培養物
の培養。

なお、かかる４−ヒドロキシアルカン酸は、対応するポ
リ（４−ヒドロキシアルカン酸）を蓄積する手段におい
て、適宜塩の形で、例えば、ナトリウム塩またはカリウ
ム塩の形で存在してもよい。

３、本発明による微生物の細胞から生成したポリエステ
ルの単離。

本発明によるポリエステルの製造に適した微生物は、公
知の突然変異法及び蓄積法（アルゲマインーミクロビオ
ロギー（Ａｌｌｇｅｍｅｉｎｅ　Ｍｉｋｒｏｂｉｏｌｏ
ｇｉｅ）第６版シュレーゲル（Ｓｃｈｌｅｇｅｌ）著、
１９８５年発行）によって得られるであろうものであり
、更に４−ヒドロキシアルカン酸から対応するポリエス
チルを合成する能力のある全ての微生物、特に土壌微生
物、好ましくは好気性土壌微生物、またはそれらの突然
変異株を含む。ポリ（３−ヒドロキシブタン酸）を合成
し蓄積できることが知られているそれら微生物（ダウニ
スらの前掲文献）は、好ましい候補である。特に、アル
カリゲネス（Ａｌｃａｌ　ｉｇｅｎｅｓ）属、シュード
モナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、アセトバクター
（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属、ノカルジア（Ｎｏｃａ
ｒｄ　ｉａ）属、アクチノミセス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃ
ｅｓ）属、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　）属、アゾト
バクタ−（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ）属、アクアスビリ
ラム（Ａｑｕａｓｐｉｒ−ｉｌｌｕｍ）属、ロードスピ
リラム（Ｒｈｏｄｏｓｓｐｉｒｉｌｌｕｍ）及びパラコ
ッカス（Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ）属に属する微生物及び
その微生物から調製される突然変異株が好ましい。その
うちのアルカリゲネス属及びシュードモナス属が、本発
明によるポリエステル調製の出発株として特に好ましい
のであり、広く知られまた文献にも記載されている（バ
ーゲイの分類書（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏ
ｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ
ｏｇｙ）バルチモア／ロンドン版クリーグ（Ｋｒｉｅｇ
）ら著、ウィリアムス＆ウィルキンス１９８４年発行）
。

微生物を蓄積（ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）するため
には、例えば、ＢＰ　−Ａ　２８８．９０８に開示され
ているように、炭素源、無機塩及び微量元素よりなる公
知の組成の培地中で２０℃〜４０℃、好ましくは、３０
℃付近の温度でそれらをインキュベートするものであり
、目的とするポリエステルに対応する４−ヒドロキシア
ルカン酸の存在下に行うのである。

本発明による微生物の突然変異株は、純粋な培養物とし
て以下の操作、即ち、突然変異、蓄積、選別及び培養に
よって調製することができる。

突然変異を起こすため、対象となる微生物を、標準的な
手順に従って公知の化学的または物理的突然変異開始剤
で処理する。例えば、この目的のため、微生物の細胞を
ニトロソ−尿素またはメタンスルホン酸エチルの存在下
でインキュベートするか、または高エネルギー放射線を
照射する。

得られた突然変異株は、野性型細胞と同じ方法で蓄積さ
れる。

得られた突然変異株は、密度勾配遠心法を使用して選択
することができる。

しかし、突然変異株の単離は、パーコール（Ｐｅｒｃｏ
ｌｌ）密度勾配法で、例えば、シュベルトら（Ｓｃｈｕ
ｂｅｒｔ　ｅｔ　ａｌ、）による、Ｊ、Ｂａｃｔ、　１
７０．５８３７−５８４７．１９８８．に記載の方法に
従って、遠心分離を行うならば、特に都合よくできるこ
とが明らかとなった。

本発明による微生物及びそれから得られる微生物は、例
えば、ＢＰ　−Ａ　２８８．９０８または前掲のシュベ
ルトらの文献に記載されている公知の人造のまたは天然
の炭素源（Ｃ−源）、公知の窒素源、無機物及び微量元
素を含む通常用いられる完全培地中で培養できる。

驚いたことに、新たに見出された微生物について、培養
の第１段階の最中でさえも、培地中に対応する４−ヒド
ロキシアルカン酸のあるものを添加すると、本発明のポ
リエステルの合成及び蓄積が、微生物の細胞の増殖と同
時に行われるということが見出された。この方法は、本
発明に従ってポリエステルを蓄積するという目的の下に
連続培養を行う能力を前適応細胞（ｐｒｅ−ａｄａｐｔ
ｅｄ　ｃｅｌｌｓ）が既に有しており、その結果として
、細胞の培養から本発明のポリエステル類の貯蔵への転
換をより迅速に行い得る、という多くの利益をもたらす
ものである。

従来から行われてきた方法においては、その培地は必須
の第２培養段階の途中に決定的なＣ−源、例えば、ポリ
（３−ヒドロキシブタン酸）で補充されてきただけ（例
えば、ＥＰ　−Ａ　２８８．９０８参照）なので、本発
明に従い、４−ヒドロキシアルカン酸の存在下で微生物
を好都合に培養出来ることは、単独のＣ−源、または１
又はそれ以上の他の公知のＣ−源と共に使用するものの
いずれであっても、予期できるものではなかった。

本発明による微生物及びそれらから得られる突然変異株
の培養過程は、培養条件に依存するであろう。その条件
は、主として温度、培地中の酸素濃度（好気性条件）、
及び培地自体（Ｃ−源の量、無機塩、微量元素、ｐＨ）
で左右される。本発明による微生物及びそれらから得ら
れる突然変異株の培養条件には、本技術分野の熟練者に
知られていない格別な条件を考慮に入れる必要はなく、
例えば、ＢＰ　−Ａ　２８８．９０８に記載された条件
を適用することができる。

４−ヒドロキシアルカン酸の使用量は、特に微生物また
はそれらから得られる突然変異株に依存する。とはいえ
、培養液ｌｌ当たり４−ヒドロキシアルカン酸１ｇの濃
度である０、　１％（ｗｔ／ｖｏｌ）から、１００ｇ／
ｉ？の濃度である１０％（ｗｔ／ｖｏｌ）の範囲の濃度
、より好ましくは０．２％（ｗｔ／ｖｏｌ）〜５％（ｗ
ｔ／ｖｏｌ）の範囲の濃度を指標とすることができる。

細胞は、一般に対数増殖期が定常期に移行している間、
好ましくは定常期において採取する。細胞は、１回の培
養後に培地から完全に回収されるか（バッチ法または連
続バッチ法）、または連続培養の手段、例えば、遠心分
離または濾過によって連続的に得ることができる。

採取された細胞は、例えば、水、更に好ましくはリン酸
塩緩衝液、特に中性（ｐ　Ｈ７，０）のリン酸ソーダ緩
衝液で任意に洗浄してもよく、そのあと、凍結して凍結
乾燥に付するか、または噴霧乾燥に付してもよい。

本発明によるポリエステルは、公知の方法、好ましくは
、溶解または有機溶媒での抽出により回収され、特に、
例えば、クロロホルムまたは塩化メチレン等の塩素化炭
化水素による抽出が好ましい。

本発明で得られるポリエステルの固有粘度の範囲は、２
５°Ｃ１クロロホルム溶媒で測定した場合０、１〜１０
ｄｌ／ｇ、好ましくは１〜９ｄｌ／ｇであり、また、分
子量の範囲は１０．０００〜１０．０００．０００、好
ましくは１００．０００〜５．０００．０００であるが
、これらはいずれも培養条件及び使用される菌株の種類
に依存する。

本発明によるポリエステルが熱可塑性樹脂である場合、
処理が容易であり、かつ、多くの用途に使用することが
可能である。それらは、例えば外科手術の分野において
開口部を閉鎖する物品（例えば、縫合材料、クランプ等
）を製造するのに使用でき、また、骨の固定部材（例え
ば、固定ピン、固定板、固定ねじ、固定合せピン等）と
して、分離部材、充填材または被覆材（例えば、織物、
不織布材、詰綿）として、医薬の分野（例えば、賦形剤
、担体、徐放系製剤等）において、カプセル化剤、マイ
クロカプセル化剤及び活性物質（植物保存剤、肥料、調
味料、食品添加物、着色料等）に、分解性パッケージ（
例えば、フィルム、びん等の中空体、アンプル、つぼ、
袋、箱、ケース等）の製造に、その他の物品（フィルム
、繊維、フィラメント等）または生分解性であることが
要求される日常品の製造に、及び他の化学物質の出発原
料（シントン（ｓｙｎｔｈｏｎ）　）として使用できる
。

本発明によるポリエステルの用途には、一定の適切な固
有粘度の範囲がある。例えば、ポリマー粉末のホットプ
レスまたは加圧溶融によって製造される、例えば骨合或
のために用いる外科的インブラントの製造には、２〜■
Ｏｄｌ／ｇ、好ましくは５〜１０ｄｌ／ｇの固有粘度が
適切であり、射出成形または押出成形によって製造され
る上記の如きインブラントには、１〜６ｄｌ／ｇ、好ま
しくは２〜４ｄｌ／ｇが適切であり、活性成分の放出を
妨害または制御した薬物製剤及びガレン処方剤の製造に
は、０．１−１Ｏｄｌ／ｇ、好ましくは０．２〜２ｄｌ
／ｇが適切であり、例えば肥料や植物防腐剤等のコーテ
ィング等、農業の分野における用途には、０、１−１０
　ｄｉ／ｇ、好ましくは０，２〜５ｃ／／／ｇが適切で
あり、例えば分解性であることが要求されるフィルム、
包装袋、日常品等の製造のための技術的用途には、０．
３〜６ｄｌ／ｇ、好ましくは１〜４ｄｌ／ｇが適切であ
る。

上掲の如き相違する目的に必要な粘度は、これまで説明
した微生物的方法によってのみ得られるというのではな
く、高分子量生成物を分解するという公知の方法によっ
ても得られるものであることは、強調されるべきである
。

以下の実施例は、本発明を説明したものであり、実施例
に記載された方法は、理論的に他の微生物、特にアルカ
リゲネス属、シュードモナス属、アセトバクター属、ノ
カルジア属、アクチノミセス属、バチルス属、アゾトバ
クタ−属、アクアスピリラム属、ロードスピリラム属、
パラコッカス属、好ましくは、ポリ（３−ヒドロキシブ
タン酸）を合成及び縮合する能力を有するものとして知
られている微生物（ダウニスらの前掲文献）にも応用で
きるものであるということを強調するものである。

叉爽亘ユ Ａ、アルカリゲネスユートローファス（Ａｌｃａｌｉｇ
−ｅｎｅｓ　ｅｕｔｒｏｐｈｕｓ）株ＪＭＰ２２２（０
３Ｍ５６３０．ブダペスト条約に基づいて１９８９年１
１月３日に寄託）からの突然変異株ＳＫ２８１３の調製
５０ｍＭの亜硝酸塩存在下、複合培地（Ｂにて特定した
もの）中３０℃で１０分間インキュベートした後、０．
５％のフルクトースを含み塩化アンモニウムを含まない
無機塩培地（シュベルトらの前掲文献）に移して好気性
条件下３０℃で２４時間インキュベートした。生成した
細胞懸濁液から、前述（シュベルトらの前掲文献）のパ
ーコール密度勾配法（１５０ｍＭ食塩溶液、細胞懸濁液
０．２１ｎｌ［細胞数約１０１］中、パーコール濃度７
５％ｖｏｌ／ｖｏｌ　　［シグマケミカル社製］）で遠
心分離により目的とする突然変異株を単離した。得られ
た目的とする突然変異株は、上記の野性型細胞よりも低
密度かつ多くの縞を有していた。各密度勾配ごとに分別
し、その０．１−をＭＭフルクトースプレート上にＯ，
ＯＯ５％（ｖｏｌ／ｖｏｌ　）　ＮＨｔ　ＣＩ溶液と共
に塗布した。目的とする突然変異株の各コロニーは、対
応する野性型細胞のコロニーよりも透明性が優っている
ようであった。これらコロニーの一つを、突然変異株Ｓ
Ｋ　２８１３と命名し、更に先の工程で使用した。

Ｂ、培養（バッチ式培養） 肉エキス（３ｇ）及びペプトン（５ｇ）からなる複合培
地中、Ａ段階において得られた突然変異株ＳＫ　２８１
３　（５０ｄ、３０℃、よく振った株）の前定常期株２
−を脱イオン水ｌｌ中に溶解し、以下の組成の無機塩培
地５０ｄに接種し、Ｎａ２ＨＰＯ４”　１２Ｈ２０９，
ＯｇＫＨ，Ｐｏ、　　　　　　　　　１．５ｇＮＨ，Ｃ
１Ｏ，５ｇ Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏ４・　７Ｈ２００，２ｇＣａＣ１２・２
Ｈ２００，０２ｇ Ｆｅ（ＩＩ１）ＮＨ４−クエン酸　０．００１２　ｇ以
下の組成の微量金属溶液１０ｍ／を含む脱イオン水ｌｌ
中に溶解し、 チドリプレックスｍ　（Ｔｉｔｒｉｐｌｅｘ　）５００
■ Ｆ　ｅ　ＳＯ＋　　・７Ｈ２０２００ｍｇＺｎ５Ｏ＋　
　＊　７Ｈ２０１０ｍｇ ＭｎＣＩ２　”　４Ｈ２０３ｍｇ Ｈｓ　Ｂ　Ｏｓ　　　　　　　　　　　３０　ｍｇＣｏ
Ｃ１２・６Ｈ２０２０ｍｇ ＣｕＣ１２・２Ｈ２０１ｍｇ ＮｉＣｌ２　◆６Ｈ２０２■ Ｎａ２Ｍｏｏ＋　　・２Ｈ２０３ｍｇ ４−ヒドロキシブタン酸（ナトリウム塩）の０．５％（
ｗｔ／ｖｏｌ）溶液を加えた脱イオン水１１中に溶解し
、好気性条件下、振盪フラスコ中で３０℃で４８時間培
養した。

Ｃ８得られたポリエステルの特性 Ｂ段階で得られたバクテリアを遠心分離により採取し、
リン酸ソーダ緩衝液（ｐ　Ｈ７，０）で洗浄したのち、
凍結し凍結乾燥に付した。そして、ブランドルら（Ｂｒ
ａｎｄｌ　ｅｔ　ａｌ）の方法（Ａｐｐｌ、　Ｅｎｖｉ
ｒｏｎ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　５４．　１９７７−
１９８２．１９８８）に従って、得られた細胞をメタツ
リシスに付した。細胞内に蓄積したポリマーの量及び組
成は、ヒドロキシアルカン酸のメチルエステルを対照物
質として、ガスクロマトグラフィーで測定した（ブラン
ドルらの前掲文献）。

得られたポリエステルの分析結果から、ポリエステルの
量は、乾燥細胞に対し１８．８重量％であった。このポ
リマーは、４−ヒドロキシブタン酸（（４ＨＢ）モノマ
ー）単位だけからなり、従って、ホモポリエステルであ
った。以下は固有粘度及び分子量の測定結果（２バッチ
分）である。

［ηコ　：固有粘度（ｄｌ／ｇ） 測定条件　クロロホルム溶液、２５°ＣＭ、二重量平均
分子量 測定方法　ＧＰＣ法、充填剤ＣｈｌｏｒｏｆｏｒｍＨｉ
ｇｈ　ｗｉｔｈ　ＮＤ−ＰｏｌｙｓｔｙｒｏｌＳｔａｎ
ｄａｒｄｓ　（メルク社製） Ｍ７　：数平均分子量 測定方法　Ｍ、と同じ Ｘ隻亘ユ 突然変異株ＳＫ２８１３の代わりに野性型株アルカリゲ
ネスユートローファスＪＭＰ２２２を使用した以外は、
実施例１と同じ手順で実験を行った。

野性型株から得られたポリエステルの分析結果から、ポ
リエステルの量は、乾燥細胞に対し２１．５重量％であ
った。このポリマーは、９２．１％の４ＨＢと７．９％
の３−ヒドロキシブタン酸（３ＨＢ）からなっていた。

Ｘ皇盟ユ 突然変異株ＳＫ２８１３の代わりに野性型味シュードモ
ナスｓｐ、を使用した以外は、実施例１のＢ及びＣを繰
り返した。

このシュードモナス突然変異株から得られたポリエステ
ルの分析結果から、ポリエステルの量は、乾燥細胞に対
し１８重量％であった。このポリマーは、４ＨＢだけか
らなり、従って、ホモポリエステルであった。

叉立亘１ この場合は、野性型株アルカリゲネスユートローファス
株ＪＭＰ２２２を使用して２段階法により培養を行った
。まず、第１段階において、好気性条件下、複合培地（
実施例１で特定したもの）中３０℃で４８時間インキュ
ベートした。

次に、第２段階で遠心分離によりこれら細胞を採取し、
ＮＨ，ＣＩを含まない（実施例１と同様の）無機塩培地
中に分散した。該培地には、４−ヒドロキシブタン酸（
２％、ｗｔ／ｖｏｌ）を補充した。

窒素源がないため成長できないこの細胞を、好気性条件
下３０℃で４８時間インキュベートした。

遠心分離によりこれらバクテリアを採取し、リン酸ソー
ダ緩衝液（ｐＨ）で洗浄したのち、凍結し凍結乾燥に付
した。生成ポリマーの量及び組成は、実施例１と同様に
して測定した。得られたポリマーの量は、乾燥細胞に対
し４２重量％であった。

このコポリマーは、７８．９％の４８Ｂと２１．１％の
３ＨＢからなっていた。

害」１生エ アルカリゲネスユートローファス株ＪＭＰ２２２（実施
例２）の代わりにアゾトバクタ−ｓｐ、　ＤＳＭ１７２
１を使用した以外は、実施例１のＢ及びＣを繰り返した
。

得られたポリマーの量は、乾燥細胞に対し１４゜６重量
％であった。このコポリマーは、７３．５％の４ＨＢと
２６．５％の３ＨＢからなっていた。

Ｘ旗史１ 唯一の炭素源として４−ヒドロキシバレリン酸（４ＨＶ
）をｏ、　ｉ％（ｗｔ／ｖｏｌ）含む実施例１のＢと類
似の無機酸塩培地５０−を、実施例１のＢと類似の複合
培地中の下記菌株の前培養物ｌＯ−とともに３００−三
角フラスコ中に接種した。これら菌株は、前述の菌株で
あり、入手可能なものである。

（１）アルカリゲネスユートローファスＡ？　（シュミ
ット（Ｓｃｈｍｉｄｔ）ら、　Ａｐｐｌ、　Ｅｎｖｉｒ
ｏｎ、　Ｍｉｃｒ。

ｂｉｏｌ、　、　４４．３３−３９．１９８２　）、（
２）アルカリゲネスユートローファスＣＨ３４（マーギ
ー（Ｍｅｒｇｅａｙ）ら、　Ａｒｃｈ、　Ｉｎｔ、　Ｐ
ｈｙｓｉｏｌ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、　８６．４４０−４４１．１９７８　
）、（３）アルカリゲネスユートローファスＪＭＰ２２
２（ペンパートン（Ｐｅｍｐｅｒｔｏｎ）ら、　Ｉｎ：
ＰＩａｓｍｉｄｓｏｆ　ｍｅｄｉｃａｌ　ａｎｄ　ｃｏ
ｍｍｅｒｃｉａｌ　ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ［Ｋ、Ｎ、Ｔ
ｉｍｍ１ｓ　＆　Ａ、Ｐｊｈｌｅｒ、ｅｄｓ、］アムス
テルダムのエルゼビエル（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）、［９７
９）、（４）アルカリゲネスユートローファスＴＦ９３
（ＡＴＣＣ１７６９７、ＤＳＭ　５３１　）、（５）ア
ルカリゲネスキジロスオキシダンスｓｓｐ。

ジナイトラフィカンス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ　ｘｙ
ｌｏｓｏ−ｘｉｄａｎｓ　ｓｓｐ、　ｄｅｎｉｔｒｉｆ
ｉｃａｎｓ）　（シュミット（Ｓｃｈｍｉｄｔ）ら、Ｆ
ＥＭＳ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、Ｅｃｏｌｏｇｙ、６２゜
３１５−３２８．１９８９）、 （６）シュードモナスオキサラチカス（Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏ−ｎａｓ　ｘｏａｌａｔｉｃｕｓ）　（ＤＭＳ　１１
０５）これを３０℃で振盪した。当初に添加した炭素源
を消費し尽くしたあと、炭素源を０．１％（ｗｔ／ｖｏ
ｌ）の水準に維持するため４ＨＶを合計４〜５回補充し
た後、実施例１のＣと同様の操作で細胞の採取、洗浄、
及び蓄積したポリエステル生成物の試験を行った。

これらバクテリアを使用して得られた３種類の単量体か
らなるポリエステルの分析結果は以下の通りである。

３、ＨＶ＝３−ヒドロキシバレリン酸 犬隻亘ユ 実施例６に挙げたバクテリアを実施例１のＢの複合培地
５〇−中で高い細胞密度で培養した後、これを実施例１
のＣで説明したように遠心分離して採取、洗浄した後、
実施例１のＢと類似の無機塩培地であるが塩化アンモニ
ウム（ＮＨ，Ｃ１）を含まず唯一の炭素源として０．５
〜２．０％（Ｗ／Ｖ）の４−ヒドロキシバレリン酸（４
ＨＶ）を含有する培地中（同量）に移した。この培地中
３０℃で４８時間細胞を撹拌した。この操作で得られた
３種類の単量体からなるポリエステルの４ＨＶの割合は
、一般に実施例６におけるよりも高く、その値は８モル
％以下であった。

Claims (22)

【特許請求の範囲】
1. （１）４−ヒドロキシアルカン酸を繰り返し単位とする
   ポリエステル。
2. （２）異性体を含まないポリエステルであることを特徴
   とする、請求項（１）記載のポリエステル。
3. （３）４−ヒドロキシアルカン酸の繰り返し単位が４０
   モル％を越えることを特徴とする、請求項（１）記載の
   ポリエステル。
4. （４）４−ヒドロキシアルカン酸の炭素数が４〜６であ
   ることを特徴とする、請求項（１）〜（３）記載のポリ
   エステル。
5. （５）４−ヒドロキシアルカン酸が４−ヒドロキシブタ
   ン酸であることを特徴とする、請求項（１）〜（４）記
   載のポリエステル。
6. （６）３−ヒドロキシブタン酸単位、３−ヒドロキシバ
   レリン酸単位及び４−ヒドロキシバレリン酸単位からな
   ることを特徴とする、請求項（１）記載のポリエステル
   。
7. （７）３−ヒドロキシブタン酸単位を１５モル％以上、
   ３−ヒドロキシバレリン酸単位を４０モル％以上、４−
   ヒドロキシバレリン酸単位を１モル％以上含むことを特
   徴とする、請求項（６）記載のポリエステル。
8. （８）微生物を使用する、請求項（１）〜（７）のいず
   れか１項に記載のポリエステルの製造方法。
9. （９）微生物が土壌微生物であることを特徴とする、請
   求項（８）記載の方法。
10. （１０）微生物がアルカリゲネス属、シュードモナス属
    、アセトバクター属、ノカルジア属、アクチノミセス属
    、バチルス属、アゾトバクター属、アクアスピリラム属
    、ロードスピリラム属及びパラコッカス属から選ばれた
    微生物であることを特徴とする、請求項（９）記載の方
    法。
11. （１１）微生物が突然変異株であることを特徴とする、
    請求項（８）〜（１０）のいずれか１項に記載の方法。
12. （１２）微生物またはその微生物から得られる突然変異
    株を４−ヒドロキシアルカン酸の存在下で成長させ、蓄
    積し、または培養し、次いでその細胞を採取した後、請
    求項（１）〜（７）のポリエステルを得ることを特徴と
    する、請求項（８）〜（１１）のいずれか１項に記載の
    方法。
13. （１３）微生物またはその微生物から得られる突然変異
    株をまず複合培地で成長させ、その後該株を４−ヒドロ
    キシアルカン酸の存在下無機塩培地で培養し、そしてそ
    の細胞を採取した後、ポリエステルを得ることを特徴と
    する、請求項（８）〜（１１）のいずれか１項に記載の
    方法。
14. （１４）無機塩培地が塩化アンモニウムを含有しないこ
    とを特徴とする、請求項（１３）記載の方法。
15. （１５）請求項（８）〜（１４）記載の方法によって製
    造することができるポリエステル。
16. （１６）請求項（１）〜（３）記載のポリエステルを製
    造するための請求項（８）〜（１１）のいずれか１項に
    記載の微生物の使用方法。
17. （１７）請求項（１）〜（７）記載のポリエステルを製
    造するための微生物。
18. （１８）土壌微生物であることを特徴とする、請求項（
    １７）記載の微生物。
19. （１９）アルカリゲネス属、シュードモナス属、アセト
    バクター属、ノカルジア属、アクチノミセス属、バチル
    ス属、アゾトバクター属、アクアスピリラム属、ロード
    スピリラム属及びパラコッカス属から選ばれたものであ
    ることを特徴とする、請求項（１８）記載の微生物。
20. （２０）１９８９年１１月３日に寄託したアルカリゲネ
    スユートローファス株ＪＭＰ２２２、ＤＳＭ５６３０か
    ら得られた突然変異株ＳＫ２８１３。
21. （２１）請求項（１）〜（７）記載のポリエステルを外
    科、医薬の分野におけるカプセル化剤、マイクロカプセ
    ル化剤、及び活性物質として、並びに分解性パッケージ
    、物体、及び成形品の製造のために使用する方法。
22. （２２）請求項（１）〜（７）記載のポリエステルから
    なる成形品。