JPH03163015A - がん細胞の多剤耐性を消失させるための薬剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、トレミフェンおよびその代謝産物Ｎ−デメチ
ルトレミフェン（４−クロロー１．２−ジフエニル−１
−（４−（２−（Ｎ−メチルアミノ）エトキシ）フエニ
ル）−１−ブテン）および４−ヒドロキシトレミフェン
（４−クロローｌ−（４−ヒドロキシフェニル〉−２−
フエニルー１−（４−（２−（Ｎ．Ｎ−ジメチルアミノ
）エトキシ）フエニル）−１−ブテン）を有効成分とす
る、細胞傷害性薬（ｃｙｔｏｔｏｘ＋ｃ　ｄｒｕｇｓ）
に対するがん細胞の多剤耐性を消失させるための（『０
『ｒｈｅ　ｒｅｖｅｒｓａｌ　ｏｒ　ｓｕＨＩｄｒｕｇ
　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）薬剤に関する。

［従来の技術・発明が解決しようとする課題］細胞傷害
性薬を用いたヒトのかん治療は、現代の臨床上のかん治
療において重要な部分である。細胞傷害性化学療法は、
しばしば最初は有効であるが、耐性の鮭瘍細胞クローン
が発生するため、しばしば最終的には失敗に終わる。耐
性は典型的には、いくつかの細胞傷害性薬に対して同吋
に発生し、それゆえに多剤耐性（ＭＤＲ）と呼ばれる（
デューチャーズ・ケーエル（Ｄｅｕｃｈａｒｄｓ　ＫＬ
）、リング・ヴイ（Ｌｌｎｇ　Ｖ）　：ピー−グリコプ
ロテイン・アンド・マルチドラッグ・レジスタンス・イ
ン・キャンサー・ケモセラピー　セミナーズ・イン・オ
ンコロジー（Ｐ−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｌｎ　ａｎｄ　
ｇｕｌｔｌｄｒｕｇ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　Ｉｎｃａ
ｎｃｅｒ　ｃｈｃｓｏｔｈｅｒａｐｙ．　Ｓｅｍｉｎａ
ｒｓ　ＩｎＯｎｃｏｌｏｇｙ）　、１９８９年、１６巻
、１５８　〜１６５頁；バスタン・アイ（Ｐａｓｔａｎ
　Ｉ）、ゴッテスマン・エム（Ｇｏｒｔｅｓｍａｎ　Ｍ
）　　：マルチプルードラッグ・レジスタンス●イン●
ヒューマン●キャンサー、エヌエム●イーエヌジーエル
・ジエイ●エムイーデイ−　（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ−ｄｒ
ｕｇ　ｒｅｓｌｓｔａｎｃｅ　Ｉｎ　ｈｕｍａｎｃａｎ
ｃｅｒ．　ＮＭ．　Ｅｎｇｌ．　Ｊ．　Ｍｅｄ．）、１
９８７年、３１８巻、１３８８〜ｌ３９３頁参照）。Ｍ
ＤＲの機構はあまりよく知られていないが、少なくとも
２つの細胞の小象（ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｅｖｅｎｔｓ）
はＭＤＲと同時に起こるように思われる。すなわちそれ
は、（１）分子量が１　７０ｋＤの特定の細胞膜糖タン
パク質（ｇｐｌ））およびそのｍＲＮ＾（ｇｄｒ−１）
の発現の州加（フッカ・エスエーダブリュ（Ｐｕｑｕａ
　ＳＡＷ）　、モレッティーロジャス・アイエム（Ｍｏ
ｒｃｔｔｌ−　ＲｏＪａｓ　ＩＮ）　　シュナイダ一〇
エスエル（Ｓｃｈｎｃｌｄｅｒ　ＳＬ）、マツグワイヤ
・ダブリュエル（Ｍｃｇｕｉｒｅ　Ｗｌ．）　：ビー−
グリコプロテイン・エクスプレッション・イン・ヒュー
マン●ブレスト・キャンサー・セルズ、キャンサーやリ
サーチ（Ｐ−ｇｌｙｃｏｐｒｏＬｅｌｎｅｘｐｒｅｓｓ
ｉｏｎ　Ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｌ＋ｒｃａｓｔ　ｃａｎｃ
ｅｒ　ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ　ｒｃｓ．　）　、１
９８７年、４７巻、２１０３　〜２１０６頁参！ｔｃｏ
および（ａ細胞内への細胞傷害性薬の蓄積の威少（デュ
ーチャーズ・ケーエル（ＤｃｕｅｈａｒｄｓＫＬ）、リ
ング●ヴイ（Ｌｌｎｇ　Ｖ）　：ビー−グリコプロテイ
ンやアンド・マノレチドラ・ソグ・レジスタンス◆イン
・キャンサーｅケモセラビー　セミナーズ・イン・オン
コロジー（Ｐ−　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎａｎｄ　　
ｍｕｌｔｌｄｒｕｇ　　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　　Ｉｎ
　　ｃａｎｃｅｒｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．　　Ｓｅ
ｓｌｎａｒｓ　　ｉｎ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）　　Ｓ１９
８９年、ｌ６巻、１５６〜１８５頁；ベル・ディーアー
ル（Ｂｅｌｌ　ＤＲ）　、ゲルリッヒ・ジエイエイチ（
Ｇｅｒｌｌｃｈ　Ｊｌｌ）、カルトナー−エヌ（Ｋａｒ
ｔｎｅｒ　Ｎ）、ブイック・アールエヌ（Ｂｕｌｃｋ　
ＲＮ）、リング・ヴイ（Ｌｌｎｇ　Ｖ）　：ディテクシ
ョン・オブ・ビー−グリコプロテイン・イン・オヴアリ
アン・キャンサー（Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　　ｏｒ　Ｐ−
ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｉｎｏｖａｒｌａｎ　ｃａ
ｎｃｅｒ）　　；ア●モレキュラ一〇マーカー・アソシ
エイティッド・ウイズ・マルチドラッグ・レジスタンス
、ジエイ・シーエルアイエヌ−オーエヌシーオーエル（
ａ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒ　ａｓｓｏｃｉａ
ｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｍｕｌＬ１ｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａ
ｎｃｅ．　Ｊ．　ＣＩＩｎ．　Ｏｎｃｏｌ．　）　、１
９８５年、３巻、ａｔｔ〜３１５頁参照）のことである
。これら２つの事象は当然関連し合い、ｇ９　１７０は
細胞からの細胞傷害性薬の流出の増加の原因となるタン
パク質であると思われる。

ＭＤＩ？を消失させることは、ヒトのがんの細胞傷害性
治療（ｃｙｔｏｔｏｘｌｃ　ｔｒｃａｔａ＋ｅｎｔ）の
結果を改良するために非常に有利な方法である。細胞膜
内および細胞内の主要なカルシウム結合タンパク質、カ
ルモデュリンに影響を及ぼす化合物を用いてＭＤＩ？を
〆ｎ失させうることが明らかにされている（ミラー・ア
ールエル（旧１１ｃｒ　ＲＬ）　　ブコウスキー・アー
ルタブリュ（Ｂｕｋｏｗｓｋｌ　ＲＷ）ブッド・ジーテ
ィ−（Ｉｌｕｄｄ　ＧＴ）ら、クリニヵル・モデュレー
ション・オブ・ドキソルビシン・レジスタンス・パイ・
ザ・カルモデュリン・インヒビター，トリフルベラジン
（ＣＩＩｎｌｃａｌ１１０ｄＵｌａｔｌｏｎ　Ｏ『ｄｏ
ｘｏｒｕｂｌｃｌｎ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｂｙｔｈ
ｅ　ｅａｌｓｏｄｕｌｌｎ　Ｉｎｈｌｂｌｔｏｒ，　ｔ
ｒｌｒｔｕｐｃｒａｚ！ｎｅ）：ア◆フエーズＩ／ｎ｝
ライアル、ジエイ・シーエルアイエヌ・オーエヌシーオ
ーエル（Ａ　ｐｈａｓｅ１／　Ｕ　　ｔｒｉａｌ．　Ｊ
．　ＣＩＩｎ．　Ｏｎｃｏｌ．　）　、１９８８年、６
巻、８８０〜８８８頁参照）。同様にグルタチオン−ｓ
−　トランスフエラーゼの活性の変化およびＭ電位の低
下がＭＤＲと関連していることが明らかにされている（
コーワン・ケーエイチ（ＣｏｖａｎＫｌ＋）　　：ザ●
ロール・オブ・グルタチオン−Ｓ一トランスフエラーゼ
・イン・ドラッグ・レジスタンス、ピーアールオーシー
●エーエムイーアール◆エーエスエスオーシー●キャン
サー●リサーチ（Ｔｈｅ　ｒｏｌｅ　ｏｆｇｌｕｔａＬ
ｈｌｏｎｅ−Ｓ−ｔｒａｎｓｌ’ｅｒａｓｅＩｎ　ｄｒ
ｕｇ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．　Ｐｒｏｃ．＾ｌｅｒ．
＾ｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．）、１９８９年、
３０ａ，　６７４頁；クレイマー●アールエー（Ｋｒａ
ｍｅｒ　ＲＡ）　、ザクハー●ジェイ（Ｚａｋｈｅｒ　
Ｊ）、キム・ジー（Ｋｌａ　Ｇ）　　：　ｏ−ル◆オブ
・ザ◆グルタチオン●レドックス●サイクル・イン・ア
クワイヤード・アンド・デ・ノボ●マルチドラッグ●レ
ジスタンス、サイエンス（Ｒｏｌｅ　ｏｒ　ｔｈｅ　ｇ
ｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ　ｒｅｄｏｘ　ｃｙｃｌｅ　ｉｎ
ａｃｑｕｉｒｅｄ　ａｎｄ　ｄｅ　ｎｏｖｏ　ｍｕｌｔ
ｉｄｒｕｇ　ｒｅｓｌｓｔａｎｃｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ）
、ｌ９８８年、２４１巻、８９４　〜６９７頁参照）。

プロテインキナーゼＣもまた、ＭＤＲの発生に重要とな
りうる。これは、様々な調節信号（ｒｅｇｕｌａｔ１ｎ
ｇ　ｓｉｇｎａｌ）を細胞に導入する際に重要な役割を
果たし、細胞傷害性薬がこのタンパク質を阻害すること
が報告されている（バラヨア・エステ｛　−　（Ｐａｌ
ａｙｏｏｒ　ＳＴ）　、ステイン・ジエイエム（Ｓｔａ
ｉｎ　ＪＭ）、ヘイト●ダブリュエヌ（ｆｌａｉｌ　Ｖ
Ｎ）　：インヒビション・オブ・プロテインキナーゼＣ
●バイ・アンチネオプラスチック−工−ジェンツ（Ｉｎ
ｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏ［’　ｐｒｏｔｅｉｎｋｌｎａｓ
ｅ　Ｃ　ｂｙ　ａｎＬ１ｎｅｏｐｌａｓｔｌｃ　ａｇｅ
ｎｔｓ）　：インプリケーション・フォー・ドラッグ・
レジスタンス（Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ　Ｉ’ｏｒ　ｄ
ｒｕｇ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）　、バイオケミカルー
アンド・バイオフィジカル・リサーチ●コミｓニケーシ
ョンズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．旧ｏｐｈｙｓ．　Ｒｅｓ．　
Ｃｏｓｖｕｎ．）、１９８７年、１４８巻、７１８〜７
２５頁参照）。ＭＤＲを消失させるのに知られている機
構に影響を与える化合物は、ＭＤＲを消失させることを
達成するのに必要な投与範囲ではその毒性のため、一般
に臨床的には用いられない（ゴッテスマン●エムエム（
ＧｏｔｔｅｓｍａｎＭＷ）　：クリ二カル●トライアル
ズ●オブ●エージェンツ・ザット・リバース・マルチド
ラッグ●レジスタンス（ＣＩｌｎｌｃａｌ　Ｌｒ１ａｌ
ｓ　ｏｒ　ａｇｅｎｔｓｔｔ＋ａＬ　ｒｅｖｅｒｓｅ　
ｍｕｌＬＩｄｒｕｇ−ｒｅｓｌｓｔａｎｃｅ）、ジエイ
・シーエルアイエヌ・オーエヌシーオーエル（Ｊ．ＣＩ
Ｉｎ．　Ｏｎｃｏｌ．）　、１９８９年、７巻、４０９
　〜４１Ｇ頁参照）。

最近、薬物タモキシフエンはＭＤＲを消失させる作用を
有することが明らかにされている（フォスター・ビージ
エイ（Ｆｏｓｔｅｒ　ＢＪ）　、グロツインガー●ケー
アール（Ｇｒｏｔｚｌｎｇｃｒ　ＫＲ）　、マツコイ・
ダプリュエム（Ｍｃｋｏｙ　ＷＭ）、ルビンステイン・
エルヴイ（ＲｕｂｌｎｓＬｅｌｎ　ＬＶ）　、ハミルト
ン・ティーシー（ｌｌａｍｉｌｔｏｎ　ＴＣ）：モデュ
レーション●オプ・インデュースド・レジスタンス・ト
ウ・アドリアマイシン●イン◆トウ●ヒューマン●プレ
スト●キャンサー●セル●ラインズ●ウイズ・タモキシ
フエン・オア・ベルヘキシリン・マレエート（Ｍｏｄｕ
ｌａｔｉｏｎ　ｏｒ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｒｅｓｉｓｔａ
ｎｃｅｔｏ　ａｄｒｉａＢｅｌｎ　ｉｎ　ｔｗｏ　ｈｕ
ｍａｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒｃｅｌｌ　１１ｎ
ｅｓ　ｗｉｔｈ　ｔａｍｏｘｌｒｅｎ　ｏｒ　ｐｅｒｈ
ｅｘｌｌｌｎｅＩｌａｌｅａｔｅ）、キャンサー・シー
エイチイーエムオーティーエイチイーアール●ビーエイ
チェーアールエムエーシーオーエル（Ｃａｎｃｅｒ　Ｃ
ｈｅｍｏｔｈｅｒＰｈａｒａ＋ａｃｏｌ））　２２：　
１４７　〜１５２頁、■９８８年参照）。

他の化学的感作削（ｃｈｅｓｏｓｅｎｓｌｔｌｚｌｎｇ
　ａｇｅｎｉｓ）と同様に、タモキシフエンは有意な母
性を１１１４なわずに薬剤耐性を消失させるのに必要な
生体内濃度に達することはできないかもしれない。

トレミフェン（Ｆｃ−１１５７ａ）は、トリフェニルエ
チレン構造を有する抗エストロゲン化合物である。その
薬理学的特性、抗エストロゲンおよびＩＩＩ　１ｙＪＩ
ｊｌ壊効果は、たとえば米国特許第４８９８９４９号明
細書および刊行物：カリオ（Ｋａｌｌｌｏ）ら：ア●ニ
ュー−トリフェニルエチレン●コンバウンド（＾ｎｅｗ
　ｔｒｌｐｈｃｎｙｌｃｔｈｙｌｅｎｃ　ｃｏＩＩｐｏ
ｕｎｄ）、Ｐｃ−１１５７ａ．　Ｉ　　ホルモナル●エ
フエクツ、キャンサー・シーエイチイーエムオーティー
エイチイーアール●ビーエイチェーアールエムエーシー
オーエル（Ｉｌｏｒｓｏｎａｌ　ｅｔｒｅＣｔｓ．　Ｃ
ａｎｃｅｒ　Ｃｈｅｓｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｓａｃｏｌ
　．）、ｌ９Ｂ６年、■７巻、１０３　〜１０８頁；カ
ンガス（Ｋａｎｇａｓ）ら：ア・ニュー・トリフエニル
エチレン・コンバウンド（＾ｎｅｖ Ｌｒｌｐｈｅｎｙｌｅｔｈｙｌｅｎｅ　　ｃｏｍｐｏｕ
ｎｄ）　　、　Ｆｃ−１１５７ａ．　　　ＩＩアンチチ
ユーモア・エフエクツ、キャンサー・シーエイチイーエ
ムオーティーエイチイーアール●ピーエイチェーアール
エムエーシーオーエル（Ａｎｔｌｔｕａｏｒ　ｅｒｒｅ
ｃｔｓ．　Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｈｅａ＋ｏｔｈｅｒＰｈａ
ｒｍａｃｏｌ．）　、１９８［ｉ年、１７巻、１０９　
〜１１３頁；エブス・エスアール（Ｅｂｂｓ　ＳＲ）　
、ロバーツ・ジエイヴ｛　（Ｒｏｂｅｒｔｓ　ＪＶ）、
バウム・エム（Ｂａｕｗ　Ｍ）　：アルターナティブ・
メカニズム・オブ・アクション・オブ・　“アンチーエ
ストロゲンズ●イン・ブレスト・キャンサー（Ａｌｔｅ
ｒｎａｔｉｖｅｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏ（’　ａｃｔｉ
ｏｎ　ｏｌ’　”ａｎｔｉ−ｏｅｓｔｒｏｇｅｎｓＩｎ
　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ．）、ランセト（Ｌａｎ
ｃｅｔ），　１９８７年、１１、６２１頁参照）に記載
されている。

〔課題を解決するための手段〕

本発明は、トレミフェンおよびその代謝産物Ｎ−デメチ
ルトレミフェンおよび４−ヒドロキシトレミフェンの新
規な用途に関する。すなわち、本発明はトレミフエンま
たはその代謝産物Ｎ−デメチルトレミフェンもしくは４
−ヒドロキシトレミフェンまたはその非毒性の薬学的に
許容しうる塩からなる化合物をｈ゛効成分とする、細胞
傷害性薬を用いたがん治療においてＸｉ細胞傷害性楽に
対するがん細胞の多剤耐性を消失させるための薬剤に関
する。これらの化合物、とくにトレミフエンは、細胞傷
害性薬に対する耐性を消失させるために好適に用いられ
つる。なぜなら、大量に段与されてもこれらの化合物の
毒性が比較的低いことにより、臨床的に有効な投与量に
達しうるからである。後天性のおよび自然の耐性はとも
にこの化合物の影轡を受ける。この特性は重要であり、
かつ細胞傷害性療法の臨床上の効力をかなり改良しうる
。本発明の主要な特徴は以下のとおりである。

１　化合物、とくにトレミフエンは、細胞傷害性薬、と
くにドキソルビシンのみならず、エトボシド、シスプラ
チンおよびシクロホスファミドに対して感受性のある多
剤耐性がん細胞を嚢化させる。

２　トレミフエンおよび細胞傷害性薬の組合せ物（ｃｏ
ｍｂｉｎａｔｉｏｎ）は、どちらか１１１独の処理によ
る毒性の程度にはあまり影響を及ぼさない。

３　トレミフエンは、ｚｌｉ独の処理として用いられる
ときはとくに乳がんにおける抗腫瘍作用を有するが、Ｍ
ＤＲを消失させるのは乳がんに限定されない。実際、す
べてのタイプの腫瘍は、組合せ物を用いて同様に良好に
治療されうる。

４　　ＭＤ｝ｌを消失させる際に、トレミフエンは細胞
傷害性化学療法に対する添加物であり、これは別に示さ
れている。したがって、トレミフェンは、確立されたが
ん化学療法の本質を変化させない。

５　　ＭＤＩ？を消失させる際に、高濃度のトレミフエ
ンは、低濃度よりも効果的である。したがって、ＭＤＲ
を冫肖失させるためのトレミフエンの段与量は多くなけ
ればならない。トレミフエンがＭＤＲを消失させること
を達或するのに必要な投与レベルにおいても非常に安全
な薬物であることは、臨床フエーズＩ、ＩＩおよびｍの
研究において示されている。これは、他のいかなるＭＤ
Ｒを消失させる薬剤（ＭＤＲｒｅｖｅｒｓｔｎｇ　ａｇ
ｅｎｔ）に対しても述べられていない独特な特性である
。

臨床治療計画は以下のように述べることができる。トレ
ミフェンは、大量、好ましくは最大許容投与量で用いら
れるべきである。段与範囲は、成人１人あたり１日に約
６０〜８００＋＋＋ｇが望ましい。好ましい段与瓜は成
人１人あたり１日に約４００ｍｇである。薬剤は錠剤と
して経口的に投与されるのが好ましい。

トレミフエンを用いてＭＲＤを消失させる計画：ｌ　ト
レミフエンは、可能なかぎり高い血液および組織濃度に
達するために細胞傷害性処理の５〜ｌＯ日前に開始され
る。

２　細胞傷害性処理は、通常どおり行なわれる。

３　トレミフエン授与は、細胞傷害性処理期間の終了ま
で続けられる。

細胞傷害性薬は一般に周期的に（およそ１日〜２週１８
１の処理期間があり、そのあとにおよそ２週間〜３ケ月
の合い間が続く）投与されるので、トレミフエン処理も
また、薬剤の合い間が同時に開始するような周期で行な
われる。トレミフェン投与は細胞傷害性処理の５〜ｌＯ
日前に開始するので、トレミフエンの処理期間は細胞傷
害性処理期間よりも５〜１０日長い。

前記の処理計画（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｓｃｈｅｄｕｌ
ｅ）はトデメチルトレミフエンおよび４−ヒドロキシト
レミフェンにも同様に適用しうる。Ｎ−デメチルトレミ
フェンおよび４−ヒドロキシトレミフェンはトレミフエ
ンの代謝産物であり、トレミフエンでの処理期間のあい
だにＭＤＲ消失（ＭＤＲｒｅｖｅｒｓａｌ）に効果的な
濃度に達する。

［実施例］ １インビト口試験 ドキソルビシン感受性細胞および耐性細胞におけるトレ
ミフェン＋ドキソルビシンの組合せ物の効果を調べるた
めに、初期の細胞成長研究（Ｉｎｉｔ１ａｌ　ｃｅｌｌ
　ｇｒｏｗｔｈ　ｓｔｕｄｉｅｓ）を行なった。

野生型０１１０−Ｋｌ細胞およびＣＩＩＯ−Ａｄｒ細胞
を用いて細胞培養を行ない、ＣＩＩＯ−Ａｄｒ細胞は０
．４ｕｔｒ／ｍ＋のドキソルビシン存在下でのドキソル
ビシン耐性クローンの一連の段階的な遺沢により選択さ
れた。その細胞系はドキソルビシンに対して耐性を示し
たが、同時にビン力アルカロイド類（Ｖｌｎｃａ　ａｌ
ｋａｌｏｉｄｓ）　，ダウノルビシン、アクチノマイシ
ンＤおよびコルヒチンに対して交叉耐性を示した。耐性
細胞は、ドキソルビシン不存在下での細胞培養において
は安定であった。両細胞系は、５％新生ウシ血清、５％
ウシ胎児血？青、抗生物質および３ＩＩＩＭグルタミン
で補われたｆｌａｗｓ　Ｐｉｎ培地内で培養された。細
胞は、５％ＣＯｚにおいて３７℃で、単層培養として維
持された。ＣＩＩＯ−Ｋｌ細胞およびＣＩＩＯ−Ａｄｒ
細胞内の薬剤感受性は、半自動比色ＮＴＴアッセイによ
って評価した。アッセイは、生存可能な細胞のミトコン
ドリアデヒドロゲナーゼによるＮＴＴ　（３−１４．５
−ジメチルチアゾール−２−イルＡ−２．５−ジフェニ
ルテトラゾリウムプロミド、チアゾリルブルー）の分光
光度計でＩｌｌ定された青色のホルマザン産物への細胞
性還元（ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｒｅｄｕｅｔｌｏｎ）に依
存する。９Ｇ−ウエルプレート上に細胞を播種し、５％
のＣＯＺ内、３７℃で１２時間安置した。増殖培地中に
希釈された適切な薬剤濃度を２４時間加えた。

９５％エタノール倍液（ｅｔｈａｎｏｌ　ｓｔｏｃｋ　
ｓｏｌｕｔｌｏｎ）中にトレミフエンを溶解し、水中で
ドキソルビシン倍液を調製した。最終培地内のエタノー
ル濃度は０，１％を超えることはなく、細胞成長に影響
を及ぼさなかった。細胞は、２４時間薬剤とともにイン
キユベーションされ、その後リン酸緩衝生理食塩水で２
度洗浄し、さらに４８時間、２００μｐの新鮮な培地中
に配置した。このインキュベーションの最後に各ウエル
に０．ｌ■のＮＴＴを加え、４時間インキユベーション
した。

培地を注意深くアスピレーション（ａｓｐｌｒａｔＩｏ
ｎ）し、その結晶を１００μｇのＤＭＳＯ　（ジメチル
スルホキシド）中に可溶化した。５４０ｎ一での吸光度
をエリザマルチスカンリーダー（ＥＬＩＳＡＭｕｌＮｓ
ｋａｎ　ｒｅａｄｅｒ）で直ちに読取った。その結果は
、対照と比較した薬剤処理された細胞の吸光度の百分率
で表わした。

トレミフエンはα１一酸性糖タンパク質（ＡＡＧ）にあ
る程度結合するため、このタンパク質はＭＤＨの消失に
影響を与えうるかどうかを評価するためにある一連のテ
ストで成長培地に加えた。

桔果 このアッセイの結果を、第１表および第１図〜第６図に
示す。

（トレミフエンの毒性） ＣＩ１０−Ｋｌ細胞系およびＣ１１０−＾ｄ『細胞系は
、トレミフエンの２４時間接触に対して等しく感受性を
示した。１０μ間以上のトレミフェンで毒性が見られた
。がん患者に見られるのと同じ濃度（２■／ｍｌ）で加
えられたＡＡＧは、両細胞系をトレミフエン毒性から保
護した（第１図参照）。第１図はＣＩＩＯ−Ｋｌ細胞系
（●−●、〇一〇）および０１１０−＾ｄｒ細胞系（▲
一▲、Δ一Δ）における２４時間接触後のトレミフエン
の濃度増加の影響を示すグラフである。第１図中、線：
●−●およヒＩＲ　：　Ａ−ＡハＡＡＧ　（７）不存在
下、＊：　ｏ−ｏおよび線：Δ一ΔはＡＡＧ（２■／ｍ
ｌ）の存在下のものである。

（トレミフエンによるドキンルビシン（アドリアマイシ
ン）細胞傷害性の相乗作用） トレミフェンの投与量を１μＨからｌＯμＨに堆加させ
ると、ＣＩＩＯ−Ｋｌ細胞におけるドキソルビシン毒性
の相乗作用が増大した。この効果は、より低いドキソル
ビシン濃度で最も顕著であった（第２図参照）。第２図
は、トレミフエンの不存在下（●−●）ならびにトレミ
フエン１μＭ　（〇一〇）、　５．０μＭ　（○・・・
Ｏ）お，よび１０μＭ　（●・・・●）の存在下での、
アドリアマイシンに対するＣＩＩＯ−Ｋｌ細胞の感受性
を示すグラフである。

同時に、トレミフエンによるＣ１１０−＾ｄ『細胞の｝
口乗作用はあったが、その度合はより大きかった（第３
図参照）。第３図はトレミフエンの不存在下（▲一▲）
ならびにトレミフエン　１．０μＭ　（Δ一　Δ）、５
μＭ　（ローロ）および１０μＭ　（■−■）の存在下
での、アドリアマイシンに対するＣＩＩＯ一＾ｄ『細胞
の感受性を示すグラフである。

（トレミフエンによるドキ゛ハレビシン毒性の相乗作用
における八八〇の効果） ＣＩ１０−Ｋｌ細胞系および０１１０−Ａｄｒ細胞系（
よ、トレミフェン不７ｊ在下で等４性であり、力１つｌ
Ｏｕ間のトレミフエンの７７　（Ｅ下で残存物を同様１
こ還フしさせるドキソルビシン濃度でインキユベーショ
ンされた（第４図参照）。第４図は０．０５μＨおよび
０．１μＨアドリアマイシンに対するそれぞれＣＩＩＯ
−Ｋｌ細胞系およびＣＩＩＯ−Ａｄｒ細胞系の感受性な
らびにＣＩＩＯ−Ｋｌ細胞系（●−●）およびＣＩＩＯ
−Ａｄｒ細胞系（▲一▲）におけるｌＯμＨトレミフエ
ン存在下でのアドリアマイシン細胞障害性にｚ．ｔする
＾ＡＧ　　（０〜２ｍｇ／ｍｌ）の濃度１曽７Ｊｌ］の
影響を示すグラフである。０．１〜２ｍｇ　／　ｍｌの
ｌａ度のＡＡＧの効果は、トレミフエンによって生じた
相乗作用に関して計価した。０．５ｍｇ／ｍｌ以上の＾
ＡＧの濃度で、トレミフエンの相乗効果（よ徐々に泪失
し、最も高いレベルの２　ｍｇ　／　ｍｌでＣよ、ドキ
ソルビシン毒性に関するトレミフエンの効果はもはや存
在しなかった。これは、耐性のおよび野生型の細胞系両
方で起こった。なお、第１図〜第４図のグラフの縦軸は
対照に基づく％吸光度（％ａｂｓｏｒｂａｎｃｃ　ｏｒ
　ｃｏｎｔｒｏｌ）を示す。

（ドキソルビシン暢送（ｔｒａｎｓｐｏｒｔ）に関する
トレミフエンの効果） ２μＨトレミフエンは１μＨドキソルビシンの薬剤蓄積
を、野生型ＣＩＩＯ−Ｋｌ細胞においては高めたが（第
５図参照）、耐性細胞においては高めなかった（第６図
参照）。第５図はトレミフエンの不存在下（●一●）お
よび１０μＨトレミフエンの存在下（ローロ）でのＣＩ
ＩＯ−Ｋｌ細胞における１μＨアドリアマイシンの取込
みの経過を示すグラフである。第６図はトレミフエンの
不存在下（▲一▲）およびｌＯμＨトレミフエンの存住
下（一一１）でのＣＨＯ−＾ｄ『細胞における１μＭア
ドリアマイシンの取込みの経過を示すグラフである。

（Ｃ１１０−Ｋｌｌｌｌ胞およびＣＩＩＯ−Ａｄｒ細胞
におけるトレミフエンによるドキソルビシン毒性の相対
的相乗作用） トレミフエンの濃度を１曽加させると、相乗作用に対す
る用量反応曲線が急勾配となり、これは、野生型細胞よ
りも耐性細胞に対してより大きかった。以下の第１表に
、ＣＩＩＯ−Ｋｌ細胞およびＣＩ１０−＾ｄ『細胞のア
ドリアマイシンに対する感受性へのトレミフエンの効果
を示す。

［以下余白］ ２つのヒトの卵巣がん細胞系におけるトレミフエンとド
゛キソルビシンとの組合せ物は、ファルモス・キャンサ
ー●リサーチ・ラボラトリー（ＰａｒＩｌｏｓ’　ｃａ
ｎｃｅｒ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）
で開発され、１つのヒトのメラノーマにおいては、ツル
ク・ユニバーシティー　（Ｔｕｒｋｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓ
ｉｔｙ）、デパートメント・オブ・ガイネコロジ−（Ｄ
ｅｐｔ　．ｏ１’　ｇＹｎｅｃＯＩｏｇｙ）のグレンマ
ン博士（Ｄｒ．　Ｇｒｅｎｍａｎ）によって開発された
。

方法 ２つのヒトの卵果細胞系は、新鮮な漿液性の卵巣がん細
胞からイン・ビトロで確立された。

１％のストリッピングされていない （ｕｎｓｔｒ［ｐｐｅｄ）ウシ胎児の血清を含ａするイ
ーグルの最小基礎培地（ＭＥＮ）で細胞を培養した。９
６個のウェルプレート上で、５％のＣＯ２内３７℃でア
ッセイを行なった。成長培地中にドキソルビシンを溶解
させ、９５％のエタノール中にトレミフェンを溶解させ
、それからこれを或長培地で希釈した。エタノールの濃
度は０．０７％を越えず、細胞の成長には影響しなかっ
た。生細胞（ｌｉｖｉｎｇ　ｅｅｌ！ｓ）の数は、生物
発光方法で定量され、これは以前に記載されている（カ
ンガス●エル０（ａｎｇａｓ　Ｌ）、二−ミネン●エー
一エル（Ｎｌｃｍｌｎｅｎ　Ａ−Ｌ）、グレンルース・
エム（Ｇｒｏｎｒｏｏｓ　Ｍ）　：バイオルミネツセン
ス・オブｅセルラー●エーティーピー（Ｂｌｏｌｕｓｌ
ｎｅｓｃｅｎｃｅｏ１’　ｃｅｌｌｕｌａｒ＾ＴＰ）　
：ア・二二一・メソッド・フォー・エバリュエーション
・オブ・サイトトキシック●エージェンツ●イン●ビト
ロ、エムイーディー◆ビーアイオーエル（ａ　ｎｅｗ　
ｍｅｔｈｏｄ１’ｏｒ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｒ　
ｃｙｔｏｔｏｘｌｃ　ａｇｅｎｔｓ　Ｉｎｖｌｔｒｏ．
　Ｗｅｄ．　Ｂ１ｏ１．）、！９８４年、６２巻、３３
８〜３４３頁参照）。

結果 以下の３つの表に結果を示す。

細胞系＋１０Ｖ−００７においてトレミフェンおよびド
キソルビシンを用いた生細胞の数（対照値に基づく百分
率（ｐｅｒ　ｃｅｎｔ　ｏｒ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｖａｌ
ｕｅｓ））を以下の第２表に示す。細胞の数は、３日間
培養したのち定ユした。

第 ２ 表 細胞系＋１０Ｖ−０１８においてトレミフェンおよびド
キソルビシンを用いた生細胞の数を以下の第３表に示す
（説明のため、前の表を参照）。ドキソルビシン濃度０
．１および０．３μｇ；　／　ｍｌについて試験された
。

第 ３ 表 細胞は、両化合物に対してｉｌｉ独でほぼ耐性があるが
、組合せ物を川いることにより著しく感受性を増した。

ヒトメラノーマＵＶ−ｉｅ−　１を用いて、細胞を２日
間培養した。トレミフエンおよびドキソルビシンのｌ農
度は、以下の第４表に示されるとおりである。

第 ４ 表 この細胞系は相対的にドキソルビシンＩ１１独に対して
感受性が強いが、組合せ物、とくにドキソルビシン濃度
が低く、かつトレミフェン濃度が高いぼあい明確である
。

トレミフェンおよびドキソルビシンの組合せ物の効果は
、異なる細胞系で変化する可能性がある。しかしながら
、高濃度で最良の効果が達成される。これが臨床上でも
有効ならば、最も有効な抗１１Ｊｆ瘍効果を達成するた
めに、高い投与僅のトレミフェンおよび細胞成長抑制剤
を用いるべきである。

Ｎｅｔ’−７は確立されたヒト乳がん細胞系である。

これはエストロゲン受容体陽性（ｅｓｔｒｏｇｅｎｒｅ
ｃｅｐｔｏｒ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ）であり、乳がん研究
におけるインビトロモデル（Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｍｏｄ
ｅｌ）で広く用いられる。オリジナルの細胞系はケン・
コーウエン博士（Ｄｒ．　Ｋｅｎ　Ｃｏｖｅｎ　）　　
（ナショナル・キャンサー・インスティチュート（Ｎａ
目ｏｎａ　ＩＣａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）　、
ベテスダ（Ｂｅｔｈｅｓｄａ）、メリーランド（Ｍａｒ
ｙｌａｎｄ）、ユーエスエー（ＵＳＡ））より人手した
。ドキソルビシン耐性変異体ＭＣＦ−７／ＤＯＸ細胞系
は、細胞を、増加する濃度のドキソルビシンに段階的に
接触させることにより発生した。細胞は、コーニング７
５−ｃｍ”　組！フラスコ（ＣｏｒｎｉＢ　７５−ｃｍ
２ｔｉｓｓｕｅ　Ｎａｓｋｓ）中で培養され、５％ウシ
胎児血ｌＩ？で補ったＲＰＭ１０４０培地を用いて５％
ＣＯ２および９５％空気中で対数増殖（ｅｘｐｏｎｅｎ
ｔｌａｌ　ｇｒｏｗｔｈ）の状態に維持された。細胞１
曽殖（ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｐｒｏｌｌｒｅｒａｔｌｏｎ
）の阻害は先に記載された方法（フォード・ジェイエム
（Ｆｏｒｄ　ＪＭ）　　プロジアレック・ダブリュシー
（Ｐｒｏｚｌａｌｃｃｋ　ＷＣ）　、ヘイト・ダブリュ
エヌ（ｌｌａｌｔ　ＷＮ）　　：ストラクチュラル・フ
ィーチャーズ・デターミニング・アクティビティー・オ
ブ・フェノチアジンズ・アンド・リレーティッドドラッ
グス・フォー・インヒビション・オブ・セル・グロース
・アンド・リバーサル・オブ・マルチドラッグ・レジス
タンス（Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｒｃａｔｕｒｃｓ　ｄｃ
ｔｅｒＩｌｌｎｉｎｇ　ｉｔｃｔ＋Ｖｉｔｙ　ｏｒｐｌ
）ｃｎｏｔｌ＋Ｉａｚｌｎｃｓ　ａｎｄ　ｒｅｌａｔｅ
ｄ　ｄｒｕｇｓ　Ｉ’ｏｒＩｎｈｉｂｉＮｏｎ　ｏｒｃ
ｅｌｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｒｅｖｅｒｓａｌ　ｏ
ｌ’ｆｆｌｕ口１ｄｒｕｇ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）　
、モレキュラ一〇ファ一マコロジー（Ｍｏ１．Ｐｈａｒ
Ｉｌａｃｏｌ．）、１９８９年、３５巻、１０５〜１１
５百参照）で測定した。細胞を９６−ウエルマイクロタ
イターウエル上で１００μρ容童で培徨した。その方法
の原理は薬物／組合せ薬物（ｄｒｕｇ　／ｄｒｕｇ　ｃ
ｏｍｂｌｎａＮｏｎｓ）の存在下で４８時１ｉｉＪ　！
ＩＩ＋胞を培養するというものである。このあと生細胞
をメチレンブルーで着色し、アップルＵ　ｅ　（Ａｐｐ
ｌｃｌｌ　ｅ　）コンピュータにうまく適合したマイク
ロタイタープレートリーダー （ａ＋Ｉｃｒｏｔｉｔｅｒ　ｐｌａｔｅ　ｒｅａｄｅｒ
）　　（タイターテクモデル　エムシーシー／３４０（
Ｔｌｔｅｒｔｅｋ　ＭｏｄｅｌＭＣＣ／３４０）を用い
て分光光度計分析により定量した。細胞成長のｌｌ［ｌ
害は、ビヒクル処理された対照培養物の吸光度に基づく
百分率として表わされる。ヒト血漿サンプルは、８週間
毎日１０，　２０、４０、ＧＯ、２００または４００■
のトレミフェンを投与される臨床フェーズＩ研究に参加
している患者からえられた。血漿からの限外ろ過液（ｕ
ｌＬｒａｒ［ｌｔｒａＬｅｓ）は、血漿標本をアミコン
　シーエフ−１０（ＡｍＩｃｏｎ　　ＣＰ−１０）フィ
ルター（分子量、切捨てｔｏｏｏｏ）中に配置し、つい
で２０分間５０００　Ｘｇで遠心分離して調製した。限
外ろ過液は、臨床的に到達した濃度がＭＣＰ−７／ＤＯ
Ｘを感作するかどうか研究するために用いられた。増殖
培地の一部は血漿限外ろ過液に取りかえられ、細胞を４
日間増殖させ、そして着色し、前記のように定量した。

トレミフェンに加えて、トレミフェンの［ｔ産物、Ｎ−
デメチルトレミフェンおよび４−ヒドロキシトレミフェ
ンもトレミフエンと同様に扱った。このように、抗エス
トロゲン性 （ａｎｔｌａｓｔｒｏｇｅｎｉｃＨｙ）とＭＤＲを消失
させる能力（ＭＤＲ　ｒｅｖｅｒｓｉｎｇ　ａｂｉｌｉ
ｔｙ）との関係を研究することができた。

タモキシフェン、トレミフエンおよびＮ−デメチルトレ
ミフェンは、第５表および第７図に示すようにＭＣＰ−
７／ＤＯＸ細胞においてＭＤＲを消失させるのにほぼ等
しく効果的であった。低い内在性のエストロゲン性を有
し、より有力な抗エストロゲンである４−ヒドロキシト
レミフェンは、わずかに効力が低い。このことは、ＭＤ
Ｈの消失は化合物の抗エストロゲン特性によらないとい
うことを示唆している。臨床サンプル中のトレミフエン
十Ｎ−デメチルトレミフェンの濃度（２０μＨ以上）は
ＭＤＩ？をｔｒｌ失させるために必要とされるａ度（１
０μＭ）以上が適当であった。患者の血冫−１Ｉ中のＭ
ＤＲ消失効果（ＭＤＲ　ｒｅｖｅｒｓｉｎｇ　ｅｒｆ’
ｅｃｔ）において明確な濃度一依存性が見られた（第８
図および第９図参照、番号づけされた点は患者サンプル
に関連する）。このことは、より多い投与量のトレミフ
ェンがＭＤＲ消失効果において適当であることを示唆し
ている。したがって、臨床上の実際面では、できる限り
高投与量でトレミフェンを投与することが望ましい。最
大許容投与Ｉｎ（ＩＩａｘｉＩｌａｌ　ｔｏｌｅｒａｔ
ｅｄ　ｄｏｓｅ）は臨床フ工−ズＩ試験により約４００
〜６００■／日である。

これらの投与量で、効果的なＭＤＲ消失のために充分な
血漿および組織濃度に上昇させられる。

ｍ要なのは、タモキシフェン処理においては、タモキシ
フエンの高い毒性のため、このように高ｔＨ度にはでき
ないということである。以下のＴ５５表に、ＭＤＩ？細
胞におけるドキソルビシン活性のトレミフェンおよび代
謝産物による相乗作用を示す。

［以下余白］ ■インビボ試験 （町下披膜アッセイ（ｓｕｂｒｅｎａｌ　ｃａｐｓｕｌ
ｅ　ａｓｓａｙ））新軒なヒトの腫瘍の断片を、ネズミ
の腎臓の外側の彼膜（ｏｕｔｅｒ　ｃａｐｓｕｌｅ）下
に移植した０　トレミフエン（１５０ａ＋ｇ　／　ｋｇ
経口投与）とともに、またはトレミフエンなしで細胞傷
害性薬の異なる組合せ物（各々の組合せの毒性により予
め選択された投与量）でネズミを処理した。対照動物に
は食塩水を注射した。肚瘍をインキユベーションしたの
ち、５目間連続して薬剤を与えた。

インキュベーション直後（初期サイズ（Ｉｎｉｔｉａｌ
ｓｉｚｅ））および動物が屠殺された６日目（最終サイ
ズ（ｆｉｎａｌ　ｓｉｚｅ））に、Ｉｌ！ｆ！瘍片の大
きさを接眼マイクロメータが取付けられた立体顕微鏡で
ＡＩ定した。最終サイズと初期サイズとの差は、ＩｌＦ
瘍の成長または退縮（ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ）を示す。

測定１１１位は、接眼マイクロメータ単位（ＯＷＵ）で
あった。１０　ｏｍｕは１．０關と等しい。腫瘍のサイ
ズに加えて、動物の体重ま曽加を測定した。体重増加は
、処理の４性を示す。一般に、最終体重／テスト前体重
の比は０．８０以上であるべきである。

そうでなければ、毒性は許容不可能であると考えられる
。

以下の第５表に、新鮮なヒトの腫瘍サンプルでの腎下披
膜アッセイ（ＳＲＣＡ）における細胞傷害性薬と組合さ
れたトレミフエンの効果を示す。

［以下余白］ この結果から、とくにＩＩＩ　１７％が部分的にまたは
完全に細胞傷害性薬の組合せ物に耐性があるぱあい、ヒ
トの蝕瘍における細胞傷害性薬に対する感受性をトレミ
フエンが１曽加させうろことが示された。アッセイ中の
動物の体重増加は、トレミフェンの添加によっては影響
されなかった。

トレミフエンおよびドキソルビシンの抗肚瘍効果の計両
依存性（ｓｃｈｅｄｕｌｅ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｙ）は
、マウス充実性種瘍で研究された。ルイス・ラング（Ｌ
ｃｖｉｓ　Ｌｕｎｇ）（ＬＬ）またはメラノー７Ｂ−１
６１１１瘍細胞、２　Ｘ　１０６細胞／動物を雌性Ｃ−
５７マウスの筋肉内に接種した。Ｉｌｌ　鳴を平均直径
１．５ｃｍになるまで成長させ、その後以下の第６表に
示されるように、トレミフエン／ドキソルビシン処理を
開始した。Ｉ｝ｆｉ瘍のサイズは、処理前およびｌＯ日
後に、２つのディメンション（旧ｍｅｎｓｌｏｎ）でＭ
１定され、平均値を肚瘍直径と見なした。動物の体重も
エ己録した。

この粘果から、トレミフェンおよびドキンルビシンがこ
の種瘍モデルにおいて同時に与えられたとき最良の抗肚
瘍効果を有することが示される。０５７マウスでのＢ−
１（ｉメラノーマにおいて、同様の結果かえられた。

［以下余白］ 本研究において、野生型Ｃ１１０細胞（ＣＩＩＯ−Ｋｌ
）およびそのＭＤＲ変異体（ＣＩＩＯ−Ａｄｒ）におけ
るドキンルビシンに対する感受性は、単独では細胞成長
を抑制しないトレミフェン濃度によって堆大しうること
が論証された。相乗作用の程度は、親細胞系よりもＣ１
１０−＾ｄ『細胞系においてはるかに高い。しかしなが
ら、トレミフエンによるドキソルビシン細胞傷害性の変
調（ａ＋ｏｄｕｌａＮｏｎ）の正確な機構は、不明確で
ある。２つの細胞系においてエストロゲン受容体は測定
できるほどのレベルのものではなかったので（結果は示
されていない）　、ＭＤＩ？の消失は２つの細胞系のエ
ストロゲン受容体の状態に無関係であるという結論にな
る。スザーランド（Ｓｕｔｈｅｒｌａｎｄ）ら（ネイチ
＋　−　（Ｎａｔｕｒｅ）２８８：　２７３　〜２７５
頁参照）は、培養された細胞における大量のタモキシフ
エン投与により引き起こされた成長抑制効果がエストラ
ジオールにより消失させられえなかったことを観察し、
それらがエストロゲン受容体系とは無関係の機構を伴な
うということを示唆している。ラム（Ｒａｍｕ）ら（キ
ャンサー●リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．）４４　
：　４３９２　〜４３９５頁参照）は、タモキシフエン
、クロミフェン、ナフオキシジンなどのトリパロノール
類似体によるＭＤＨの消失を論証している。彼らは、Ｍ
ＤＲ細胞膜において報告されている増大した膜の硬直Ｃ
ｔｓｅｔｓｂｒａｎｅｒｉｇｉｄｉｔｙ）はトリパロノ
ール類似体により減少し、それによってドキソルビシン
の拡散がより容易となり、その細胞傷害性が高められる
、ということを示唆している。フォスター（Ｆｏｓｔｅ
ｒ）ら（シーエイチイーエムオーティーエイチイーアー
ル・ピーエイチェーアールエムエーシーオーエル（Ｃｈ
ｅｍｏ目１ｅｒ．　　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．）２２　　
：　　１４７　　″１５２頁参照）は、１０μＨのタモ
キシフエンまたはマレイン酸ベルヘキシレンでＭＣＦ−
７エストロゲン受容体陽性乳がん細胞系における多剤耐
性の変調を報告している。５０ｎＨのエストラジオール
の添加はタモキシフェンの効果を減じないので、タモキ
シフエンによるＭＤＨの消失がエストロゲン依存性では
ないことを示唆している。しかしながら、Ｃｌ４−ドキ
ソルビシン蓄積は堆加せず、それに対して細胞が耐性を
有する抗がん剤の細胞内蓄積を増加させることのない機
構によリタモキシフエン（および他の類似体）がＭＤＲ
を変調しうる可能性が高まる。

プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）は、親和性の高いフォ
ルボールエステル受容体である。フォルボールエステル
および他の肚瘍プロモーターは、インビトロおよびイン
ビボで、ジグリセリド置換基および活性ＰＫＣとして作
用することにより機能を果たす。ＰＫＣは、種々の成長
促進信号をトランスダクションすると考えられており、
肚瘍促進に重要な役割を果たす可能性がある。細胞成長
の２１整におけるＰκＣの重要性は、ＰＫＣ抑制剤が効
果的な抗増殖剤であることがわかったことを示唆してい
る。オブライアン（０’Ｂｒｌａｎ）ら（ジャーナル・
オブ・ナショナル・キャンサ・インスティチュート（Ｊ
．　Ｎａｔ．　ＣａｎｃｅｒｎｓＬ．）８０　：　１０
２ｇ　〜１６３３ｊ’ｆ：参！ＩＩ：０は、（のタモキ
シフエンと、酵素の触媒ドメイン（ｃａＬａｌｙｔｌｃ
ｄｏｍａｌｎ）に結合する化合物が介在するその主代謝
産物である４−ヒドロキシタモキシフエンとによるイン
ビトロのラットＰＫＣ活性の抑制および山）　ＰＫＣ活
性に対する抑制効果がＭＣＦ−７細胞系に見られるエス
トロゲン非哨失性の細胞傷害性効果と関連することにつ
いて報告している。ホーガン（ｌｌｏｒｇａｎ）ら（ビ
ーアイオーシーエイチイーエム・ピーエイチェーアール
エム（旧ｏｃｈｅｔｘ．Ｐｈａｒｖ．）　３５：　４４
６３　〜４４０５頁参照）は、タモキシフエンによるイ
ンビボのＰＫＣ活性の抑制について示している。したが
って、これらの結果はＰＫＣの抑制がトレミフエンによ
る抗Ｉ｝ｌ瘍効果およびＭＤＨの変調（ｍｏｄｕｌａｔ
ｉｏｎ）に重要な役割を果たすであろうことを強く示唆
する。最高のＡＡＧ濃度では、細胞生存度は、ドキソル
ビシンが単独で存在しているときのものとは衣ならなか
った。したがって高４度のＡＡＧは、ドキソルビシン細
胞傷害性に対するトレミフエンの変調効果を坊げうる。

この研究の臨床上の意味は、トレミフェンおよびその代
１｛産物が、効果的な細胞傷害薬および多剤耐性のモデ
ュレータ−（ＩＩｌｏｄｕｌａｔｏｒ）と判明すること
ができ、その有効性に対する限定要因は高レベルのＡＡ
Ｇとなりえたことである。化学療法におけるトレミフェ
ンまたはその代謝産物を添加する臨床上の拭みは、エス
トロゲン受容体の状態にかかわらず、抗がん剤の治療指
数を増大させることができた。

本発明により、化学的感作物質が臨床上適切な濃度に到
達し、ヒトにおいて維持されるというｆｆｉｆな報告が
示されている。これらの結果から、トレミフエンおよび
その代謝産物がヒトにおける他の細胞傷害性薬との組合
せにおいて腫瘍薬剤耐性の臨床上のモデュレーター （ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｓｏｄｕｌａＬｏｒ）として用い
るのに独特に適していることが示される。

［発明の効果］ 本発明によれば、細胞傷害性薬を用いたがん治療におい
て、該細胞障害性楽に対するがん細胞の多剤耐性を泪失
させることができる。

【図面の簡単な説明】

第１図はＣＩ１０−Ｋｌ細胞系（●−●、〇一〇）およ
びＣＩＩＯ−Ａｄｒ細胞系（▲−▲、Δ一Δ）における
２４時間接触後のトレミフエンの濃度増加の影響を示す
グラフである。第１図中、線：●−●および線：▲一▲
はＡＡＧの不存在下、線：Ｏ一〇および線：Δ一ΔはＡ
ＡＧ　　（　２　ｍｇ／　ｍｌ　）の存在下のものであ
る。第２図は、トレミフエンの不存（Ｅ下（●−●）な
らびにトレミフエン１μＨ（○−○）、５．０μＭ　　
（０・・・○）およびｌＯμＨ（●・・・●）の存在下
での、アドリアマイシンに女・１するＣＩＩＯ−Ｋｌ細
胞の感受性を示すグラフである。 第３図はトレミフェンの不存在下（▲一▲）ならびにト
レミフエン　１．０μＭ　（Δ−Δ）、５μＭ　（ロー
ロ）およびｌＯμＭ　（■−■）の存在下での、アドリ
アマイシンに対するＣＩＩＯ−Ａｄｒ細胞の感受性を示
すグラフである。第４図はそれぞれ０、０５μＭおよび
０．１μＨアドリアマイシンに対するＣＩＩＯ−Ｋｌ細
胞系およびＣＩＩＯ−Ａｄｒ細胞系の感受性ならびにＣ
｝１０−Ｋｌ細胞系（●−●〉およびＣＩ！Ｏ−Ａｄｒ
細胞系（▲一▲）におけるｌＯμＨトレミフェン存（Ｉ
Ｅ下でのアドリアマイシン細胞障害性に対するＡＡＧ　
　（　０　〜２　ｍｇ／　ｍｌ　）の濃度増加の影響を
示すグラフである。第５図はトレミフエンの不７ｌ在下
（●一●）およびｌＯμＨトレミフェンの７７−在下（
ローロ）でのＣＩＩＯ−Ｋｌ細胞における１μＨアドリ
アマイシンの取込みの経過を示すグラフである。第６図
はトレミフェンの不存在下（▲−▲）およびｌＯμＨト
レミフエンの存在下（一一一）での０１１０−Ａｄｒ細
胞における１μＨアドリアマイシンの取込みの経過を示
すグラフである。第７図は化学的感作物質（タモキシフ
ェンおよびトレミフエン）の濃度とＭＤＲ比との関係を
示すグラフである。第８図は血漿トレミフエンの濃度と
ＤＯＸ相乗作用との関係を示すグラフである。第９図は
血漿デメチルトレミフエンの濃度とｏｏｘ　ｔｏ乗作用
との関係を示すグラフである。 双匪！．．！ヨ゛い　水容ゼシ よ匪！．．！′ｌ：ｌｉｌＰ　求釜架セπ≧ソメｒ承套
氷ろ １４ｃ一 アドリアマイシン （ｐｍｏｌ／ｍｇタンパク質） ０ 〕４（，−　７　ドＩＪ　アマイｖ＞　（ｐｍｏｌｅｓ
／ｍｇ　　タンノクク質）一　　　一　　　〜　　　〜
　　　　一一　　〇　　一　　〇（ｊｌ　　　０ オ ７ 口 Ｏ ２ ４ ６ ８ １０ １２ ［化学的感作物質］（μＭ） オ８ 図 −５０ −２５ Ｏ ２５ ５０ ７５ １００ １２５ １５０ ＤＯ×相乗作 用 （＝Ａ）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　トレミフェンまたはその代謝産物Ｎ−デメチルトレ
   ミフェンもしくは４−ヒドロキシトレミフェンまたはそ
   の非毒性の薬学的に許容しうる塩からなる化合物を有効
   成分とする、細胞傷害性薬を用いたがん治療において該
   細胞傷害性薬に対するがん細胞の多剤耐性を消失させる
   ための薬剤。 ２　化合物がトレミフェンである請求項１記載の薬剤。 ３　細胞傷害性薬がアルキル化剤、細胞分裂抑制薬、代
   謝拮抗薬、白金化合物、抗生物質からなる群より選ばれ
   たものである請求項１または２記載の薬剤。 ４　抗生物質がアントラサイクリン系抗生物質である請
   求項３記載の薬剤。 ５　アントラサイクリン系抗生物質がドキソルビシンで
   ある請求項４記載の薬剤。