JPH03154867A - １―メチルアデノシンの免疫学的測定方法，そのための測定試薬及び試薬キット - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は１−メチルアデノシンに対するモノクローナル
抗体を用いた免疫学的測定方法、そのための測定試薬及
び試薬キットに関する。

し従来の技術］ 癌の診断や術後のモニタリングにおいて、患者の血清ヰ
や尿中に増加する癌関連物質いわゆる腫瘍マーカーの測
定は欠かせぬものとなっている。

現在、測定されている腫瘍マーカーとしては、癌胎児性
抗原（ＣＥＡ）、免疫抑制酸性蛋白（ＩＡＰ）や、肝癌
特異的なαフェトプロティン（ＡＦＰ）あるいは肝癌特
異的な糖鎖抗原の一種であるＣ　Ａ　１９−９などがあ
げられる。

ところで、癌になると増加する物質、すなわち腫瘍マー
カーと呼ばれている物質の中で、進行癌患者尿中に増加
するものとして１−メチルアデノシイが知られている。

この物質はトランスフて−・す府ヌ“クレイツクアシド
（ｔ−ＦｔＮＡ）の構成成分の１つであり、その増加の
原因は、癌組織におけるｔ−ＲＮＡのブレークダウン（
ｂｒｅａｋｄｏｗｎ）が正常組織に比較し、亢進してい
るためであるといわれているが、その増加のメカニズム
の詳細については未解明である。

現在、この１−メチルアデノシンの量を測定し、これか
ら進行癌の存在を判定する試みがなされているが、１−
メチルアデノシンの定量は高速液体クロマトグラフィー
（ＨＰＬＣ）でおこなわれれるため、サンプルの前処理
等が煩雑であり、多検体を測定するには非常に長時間を
要するという欠点があった。

本発明者らは先に、簡便な１−メチルアデノシンの測定
法を開発すべく、種々検討をおこなった結果、１−メチ
ルアデノシンに対するモノクローナル抗体を新たに作成
し、これを用いることにより、尿サンプルの前処理操作
を行うことなくＥＬＩＳＡ法を応用した多検体同時測定
方法を実施することができ、測定の迅速化、簡素化がは
かれることを見出し特許出願した（特開昭６２−２９９
７６６号公報）。

［発明が解決しようとする課題〕 その測定方法は、１−メチルアデノシンと牛血清アルブ
ミン（ＢＳＡ）との結合物を担体に固定化し、これに検
体（尿など）と１−メチルアデノシンに対するモノクロ
ーナル抗体とを添加し、組木上の１−メチルアデノシン
に結合したモノクローナル抗体量を測定し、検体中の１
−メチルアデノシンを特異的に測定する迅速かつサンプ
ルの前処理操作のない簡便な優れた方法である。しかし
、より経済的に、かつより正確に測れる感度の高い方法
が望まれていた。

［課題を解決するための手段］ 本発明者らは、前記状況に鑑み、１−メチルアデノシン
を迅速、簡便に特異的に測定し、かつ、より経済的に、
より正確に測定できるキットを開発すべく種々検討を行
なった結果、抗体を担体に固定し、標識抗原と検体中の
抗原とを溶液状態で一合させることにより前記問題を解
決できることを見い出し本発明に到達した。

即ち、本発明は試料中の１−メチルアデノシンを競合法
で測定するに際し、１−・メチルアデノシンに対するモ
ノクローナル抗体を不溶性担体番＝固定した固定化抗体
と標識物質で標識した標ａ１−メチルアデノシンを用い
ることを特徴とする１−メチルアデノシンの測定方法、
そのための測定試薬および試薬キットである。

本発明の測定方法は、特開昭６２−２９９７６６号公報
の測定方法と競合法による方法である点で共通するが、
１−メチルアデノシンに対する抗体を不溶性担体に固定
化し、検体と標識抗原とを溶液状態で競合させる点に特
徴がある。それ故、標識抗原の一定量を精度良く反応系
に添加することが可能と・なり、常に一定条件下で競合
反応を行なうことができるなめ、バラツキがより少なく
なり、より正確に測定することが可能となった。また、
特開昭６２−２９９７６６号公報では２種類の標識化試
薬すなわち酵素標識抗体と１−メチルアデノシン標識Ｂ
ＳＡを必要としたが、本発明では酵素標識１−メチルア
デノシンのみでよく、複雑な標識化反応工程を必要とす
る試薬を減らすことができ、より経済的に測定キットを
作ることが可能となった。

本発明で用いる１−メチルアデノシンに対するモノクロ
ーナル抗体は、１−メチルアデノシンを特異的に認識す
るモノクローナル抗体であればよい０例えば、本゛発明
者らが先に出願した特開昭６２−２９９７６６号公報に
記載した方法によって調製することができる。

すな〜わち、まず、１−メチルアデノシンを用いて動物
を免疫し、その動物の肺細胞を採取する。

この工程において、１−メチルアデノシンはそれ単独よ
りはむしろ適当なキャリア・プロティン（Ｃａｒｒｉｅ
ｒ　Ｐｒｏｔｅｉｎ）と結合させたのち、免疫原と“し
て用いる。１−メチルアデノシンとしては、例えば進行
癌患者の尿中から公知の方法、例えば市販されている標
品を用いることができ、キャリア・プロティンとしては
、ハプテン部分を免疫担当細胞が認識することを可能に
する目的で用いられるプロティン、例えばキーホール・
リンペット・ヘモシアニン、牛血清アルブミン等を用い
ることができる。また、この１−メチルアデノシンとキ
ャリア・プロティンを結合する方法としては、例えば、
核酸塩基の糖部分を過ヨウ素酸で酸化したのちキャリア
・プロティンと結合させる等の方法が挙げられる。更に
、免疫動物としては、マウス、ラット等が挙げられる。

次に得られた免疫動物の肺細胞を骨１ｕｒｔ、ｍ胞と融
合し、ハイブリドーマを得る。細胞融合においては、公
知のポリエチレングリコールを用いる方法（Ｈａｒｃ　
５ｈｕｌｉａｎ、　Ｃ，Ｄ、Ｗｉｄｅ　＆　Ｇ、に５ｈ
ｌｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ２７６　、２６９−２７０　（１
９７８））　、例えばＥｐＳｔｅｉｎ−８ａｒｒＶｉｒ
ｕｓを感染させて形質転換細胞を作成する方法（Ｇ、Ｋ
ｏｈｌｅｒ　＆　Ｃ，旧ｌ５ｔｅｉｎ、　Ｎａｔｕｒｅ
　２５６．４９５−４９７　（１９７５））　、あるい
は電気パルスによる方法（Ｊ、Ｖｉｅｎｋｅｎ＆　Ｕ、
　Ｚｉｉｉｅｒｉａｎｎ、　ＦＥ８Ｓ　Ｌａｔｔｅｒｓ
　１３７゜１１−１３　（１９８２））のいずれを用い
ても良い、尚、ハイブリドーマのスクリーニングに当た
っては、キャリア・プロティンに対する抗体産生ハイプ
リドーマを除去するための工夫が必要である。このため
には、免疫に用いたキャリア・プロティンと異なった種
由来のプロティンを１−メチルアデノシンに結合させた
ものを抗原として用い、抗体産生ハイブリドーマのスク
リーニングを行う等の方法を用いることが望ましい。

斯くして得られたハイブリドーマは、更に遊離の、１−
メチルアデノシンで阻害されるか否か検討し、以下常法
によりクローニングして目的の抗体を産生するハイブリ
ドーマを得る。

このようにハイブリドーマを経由してモノクローナル抗
体を製造する際の、肺細胞とミエローマ細胞は、同一種
の動物からのものが好ましく、特にマウス牌細胞とマウ
ス由来ミエローマ細胞が実用上に好適である。

このようにして選択したハイブリドーマ又は形質転換細
胞を培養して、所望の特異的モノクローナル抗体を生成
させる。クローニングによって選択された、１−メチル
アデノシンを認識する抗体を産生ずるハイブリドーマ又
は形質転換細胞は凍結して保存することができ、また、
これを適当な方法で大量に培養することもできる。そし
て、培養上清から１−メチルアデノシンに特異的に結合
するモノクローナル抗体を得ることができる。また、か
かる細胞を動物に移植してｌ１ｌｆＩ＆化し、その腹水
や血清から目的とする抗体を得ることもできる。モノク
ローナル抗体の精製は、アフィニティクロマトグラフィ
ー等の方法によって行なわれる。

本発明に用いられる１−メチルアデノシンに対するモノ
クローナル抗体は、そのフラグメント、例えばＦ（ａｂ
’）２．　Ｆａｂ’、　Ｆａｃｂであってもよい。

Ｆ（ａｂ’）２．　Ｆａｂ’、　Ｆａｃｂなとの抗体ノ
フラグ、ｓ＜ントの調製は、モノクローナル抗体を公知
の方法で酵素処理等することによって得られる０例えば
、抗体をペプシン処理・してＦ（ａｂ’）２を得、さら
にこのフラグメントを還元処理してＦａｂ’を得ること
ができる（Ａ、　Ｎ１５ｏｎｏｆｆ　ｅｔ　ａｌ　、　
Ａｒｃｈ、　Ｂｉｏｃｈｅｎ。

Ｂｉｏｏｈｙｓ、、　８９．２３０（１９６０）　、　
Ｐ、Ｐａｒｈａｉ、　Ｊ。

Ｉｍｎｏｎｏｌ、、　１３１．２８９５（１９８３）等
を参照のこと）。

本発明の不溶性担体としては、ポリスチレン。

ポリエステル、ポリエチレン、ポリプロピレン。

ＡＢＳ　、ポリフッ化ビニル、ポリアミンメチルビニル
エーテル−マレイン酸共重合体、６−ナイロン。

６．６−ナイロンなどのプラスチック、アミノ酸重合体
、ガラス、シリカゲルなどがあげられる。

かかる不溶性担体の形状はビーズ、マイクロスフイア−
、スティック、試験管、フィルム、マイクロプレートあ
るいはメンブレンなど特に限定されない、またその表面
は鏡面、粗面などどのような形態であってもよいが、例
えば、ビーズとして、中心線平均粗さ（Ｒａ）が１．５
μｍ以下である鏡面化されたビーズが、好ましく用いら
れる。

不溶性担体にかかる抗体を固定化する方法や手段は何ら
限定されるものではなく公知の方法や手段、例えば、不
溶性担体のアミノ基、カルボキシル基などと架橋剤を介
して不溶性担体と抗体とを共有結合させる方法、不溶性
担体のマトリックス中に固定する方法、生物学的親和性
を利用して固定する方法、例えば抗体に対する抗体ある
いはプロチインＡなどを担体に予め固定しておき、これ
に抗体を固定させる方法あるいは不溶性担体に物理吸着
させる方法などが挙げられる。なかでも物理吸着法が好
ましく用いられる。物理吸着法の一般的な操作法として
は、例えば、抗体溶液中に不溶性担体を浸漬して、４℃
で一晩又は室温で数時間反応させるという方法が用いら
れる。この場合、抗体溶液のｐＨは限定されるものでは
ないがｐＨ２，０〜１０の抗体溶液中に不溶性担体を浸
漬して抗体を固定化することができる０通常は中性付近
のｐＨが好ましく用いられる。用いる抗体によっては酸
性側のｐＨが好ましく用いられる。

かかる水溶液としては特に限定されないが緩衝液が好ま
しい０Ｍ衝液としてはクエン酸−リン酸二ナトリウム緩
衝液、リン酸−ナトリウム−リン酸二ナトリウムＭｍ液
、炭酸ナトリウム−炭酸水素ナトリウムなどを挙げるこ
とができる。ＭＩｌｉ液の塩濃度は０．１〜ＩＭの範囲
で用いられ、好ましくは０．１〜０．５　Ｍの範囲であ
る。

例えば物理的吸着法による場合、抗体溶液中の抗体等の
濃度及び固定時間等の条件は、抗体又は抗体フラグメン
トの種類によって異なるが、一般には１〜１００μｇ　
／　ｍｌの溶液が用いられ、この溶液中に抗体を固定す
べき不溶性担体を浸漬し２〜８℃で１〜２４時間、又は
室温で数時間静置する。

静置が終わり抗体の固定化された不溶性担体は、例えば
、リン酸緩衝液生理食塩水（ＰＢＳ）で数回洗浄した後
、ウシ血清アルブミンの１％程度のＰＢＳ溶液（以下、
ＢＳＡ−ＰＢＳと略す）に室温で２〜１２時間又は２〜
８℃で一晩装置しＰＢＳで数回洗浄し、適当なＭ錆液に
浸漬して保存するか、そ、のまま風乾するか、抗体の失
活を防ぐために蛋白や糖を含んだ溶液に浸漬してから遠
心分離して乾燥する方法がとられる。又、必要に応じて
上記固定抗体を加熱処理することもできる。

本発明の測定方法に用いられる標識抗原の標識物質とし
ては、酵素、蛍光物質１発光物質及び放射性物質等を使
用するのが有利である。酵素としては、ペルオキシダー
ゼ、アルカリフォスファターゼ、β−Ｄ−ガラクトシダ
ーゼ、蛍光物質とししてはフルオレッセインインチオシ
アネート、フィコビリプロティン等、発光物質としては
インルシノール、ルシゲニン等、そして放射性物質とし
ては１２５．　１３１，１４０．３Ｈ等を用いることが
できるが、これらは例示したものに限らず、免疫学的測
定方法に使用し得るものであれば、他のものでも使用で
きる。好ましくは酵素である。標識物質が酵素である場
合には、その活性を測定するために基質、必要により発
色剤が用いられる。

酵素としてペルオキシダーゼを用いる場合には、基質と
してＨｚＯ□を用い、発色剤として２．２’−アジノジ
ー［３−エチルベンズチアゾリンスルホンａ］アンモニ
ウム塩（ＡＢＴＳ）、５−アミノサリチル酸、０−フェ
ニレンジアミン、４−アミノアンチピリン、３，３°、
５，５°−テトラメチルベンジジン等、酵素にアルカリ
フォスファターゼを用いる場合は基質として０−ニトロ
フェニルフォスフェート等、酵素にβ−Ｄ−ガラクトシ
ダーゼを用いる場合は基質としてフルオレセイン−ジー
（β−Ｄ−ガラクトピラノシド）、４−メチルウンベリ
フェリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド等を用いること
ができる。

また、標識化の方法は何ら限定されるものではなく公知
の方法、例えば核酸塩基の糖部分を過ヨウ素酸で酸化し
たのちに標識物質のアミノ基と結合させるなどの方法が
挙げることができる。

次にこのようにして得られる測定試薬を用いて、試薬料
中の１−メチルアデノシンを測定する方法について説明
する。

本発明は１−メチルアデノシンに対するモノクローナル
抗体を不溶性担体に固定した固定化抗体と原籍１−メチ
ルアデノシンを用いて、競合法で測定する方法である。

すなわち、例えばチューブの中に試料、標識１−メチル
アデノシン及び固定抗体とを加え、試料中の１−メチル
アデノシンと標識１−メチルアデノシンとを固定抗体と
競合的に一定時間反応させる０次いで試料と標識１−メ
チルアデノシンとを除去するために洗浄し、固定抗体に
結合した標識１−メチルアデノシンの標識物質量を測定
する。標識物質が酵素′の場合には、洗浄後、更に酵素
の基質と必要に応じて発色剤を加え一定時間酵素反応を
行った後停止液を加えて酵素反応を停止させ、発色した
溶液の吸光度を測定する。また、試料中の１−メチルア
デノシンを標識１−メチルアデノシンとモノクローナル
抗体とをあらかじめ反応させ、次いでモノクローナル抗
体と親和性を有する生物学的親和性物質、例えば抗マウ
ス抗体を固定化した不溶性担体を加え、不溶性担体に結
合した標識１−メチルアデノシンの標識物質を測定して
もよい。

測定に際しての免疫反応温度条件は、構成要素である蛋
白質の性質を変性させず、かつ免疫反応を著しく抑制し
ない限り特に制限はないが、一般には５０℃以下、好ま
しくは約り℃〜４５℃程度の温度条件下に約５分から２
０時間程度を要して反応を行えばよい。

上記における免疫反応に用いられる溶媒としては反応に
悪影響を与えない＃１１街液が通常用いられる０例えば
リン酸緩衝液、トリス−塩＃！ｉ緩衝液。

酢酸Ｍ錆液などのｐＨが６．０から８．０程度のものを
用いるのが好ましい。

また本発明においては、必要に応じて免疫反応溶液中に
、ＢＳＡなどの蛋白質やシュクロースなどの糖類や界面
活性剤や防腐剤などを含んでもよい、特に、免疫反応溶
液に分子量１，６万〜５．０万及び等電点１．０〜５．
０である蛋白質又はそれを含む混合物を存在せしめ、こ
れらの免疫反応溶液における最終濃度が０．０２〜０．
９重量％となるように調整すると、非特異的吸着が抑制
され、高感度が得られやすくなり好ましい、かかる蛋白
質又はそれを含む混合物は、本発明の免疫学的測定方法
に用いる試薬キットの他の一部を構成する免疫測定試薬
に免疫反応溶液中に前記所定の量となるように含有せし
めることもできる。かかる蛋白質としては、例えばカゼ
イン、ペプシン、オボグリコプロテイン、オロソムコイ
ドなどがあげられる。このような混合物としては、例え
ば主成分として前記タンパク質１０〜６０重量％、好ま
しくは２０〜５０重景％、糖（例えば乳糖）３０〜８０
重量％、好ましくは４０〜６０重量％、その他脂肪（例
えば０．５〜２重量％）、灰分（例えば５〜１２重量％
）、水分（例えば２〜８重量％）などを含むことができ
る。このような混合物として典型的なのはスキムミルク
である。スキムミルクはタンパク質としてカゼインを含
むものであるが、カゼインを単独で使用した場合に比べ
て、スキムミルクは、免疫反応溶液中における分散性が
良く、非特異的吸着を低減させる効果が高く、温度４℃
における保存性が良い（沈澱が生じにくい）という特徴
を有する。なお、スキムミルクとしては、脱脂したミル
クであれば、何の由来の乳でありも良く、−香典型的な
もののひとつとしては、市販されているＤｉｆＣＯ社製
のスキムミルクがある。

本発明はまた、試料中の１−メチルアデノシンを競合法
で測定するための、（ａ）１−メチルアデノシンに対す
るモノクローナル抗体を不溶性担体に固定化した固定化
抗体試薬と（ｂ）標識物質で標識化した標識１−メチル
アデノシンとからなる測定試薬及び、かかる測定のため
の前記測定試薬（ａ）、　（ｂ）とを含むことからなる
試薬キットであって、前記測定試薬（ａ）、　（ｂ）以
外にも（Ｃ）溶解剤。

（ｄ）洗浄剤、及び標識物質として酵素が用いられる場
合には（ｅ）酵素活性を測定するための基質及び反応停
止剤をも含むことができる。更にこれら試薬以外にも発
色剤等その他の公知の試薬が使用され得る。

本発明の試料としては、なんら限定されるものではない
が例えばヒトや動物の尿、血清、血漿などの体液や細胞
培養液などが挙げられる。

［発明の効果］ 本発明の方法は、１−メチルアデノシンを迅速。

簡便に一高感度で特異的に測定し、かつバラツキが少な
く、添加回収試験や希釈回収試験など実用上十分な性能
を有し、高精度に進行癌などの有無を判定することがで
きるという効果を有する。また、より経済的に試薬及び
キットを提供できる。

［実施例］ 次に実施例を挙げ、本発明を説明するが本発明はこれら
実施例に限定されるものではない。

実施例１ （１）　　固定化抗体の調製 １−メチルアデノシンに対するモノクローナル抗体は、
本発明者らが先に出願した特開昭６２−２９９７６６号
公報の実施例１に記載した方法で得た。このモノクロー
ナル抗体を０．１８リン酸緩衝液（＋ｄ１６．Ｏ）に溶
解した２０μｇ　／　ｒｎｎ温溶液中にポリスチレンビ
ーズ（イムノクミカル社製Ｄ−７゜直径６．３１）を加
え、４℃で１８時間浸漬静置した。ビーズを０．ＯＩＨ
Ｐ　Ｂ　Ｓで洗浄後、１％ＢＳＡ　−０，ＯＩＭ　Ｐ　
Ｂ　Ｓ　（ａｌｌ７．２）溶液に２５℃で２時間浸漬し
、固定化抗体を得た。固定化抗体は０．０１Ｍトリス−
塩酸緩衝液の中に浸漬し、４℃で保存した。

（２標識抗原の調製 １−メチルアデノシン１０．を０．ＩＨＮａＩＯ４水溶
液０．３ｍｌに溶解し、水冷下４０分間静置した。１Ｍ
エチレングリコール水溶液３０μ！を加えて５分間静置
後、Ｋ、ｃｏ、水溶液でｐＨを９．０に調整した。この
溶液に西洋ワサビパーオキシダーゼ（ＨＲＰ）の２０　
ｓｇ　／　ｍｌ水溶液１　ａｌｌを加え、４℃で３０分
間反応させ、１−メチルアデノシンにパーオキシダーゼ
を結合させた。更に、ＮａＢＨａで還元後、０．０１Ｈ
Ｐ　Ｂ　Ｓ中で透析し、高速液体クロマトグラフィー（
Ｔｏｓｏｈ　ＴＳＫ−ＧｏｌＧ３０００５Ｗ）で１−メ
チルアデノシン−ｔｌＲＰ複合体を分離・精製し、１−
メチルアデノシン１モルに対しＩＩＲＰが１．２モル結
合したＨＲＰ標識化１−メチルアデノシン（１−メチル
アデノシン濃度８５０μｇ／ｍｌ）を得た。

（３１−メチルアデノシンの測定 １、−メチルアデノシンの３．１．０．３　、０．１　
。

０．０３．　ＯＩＨ／　（ＤＩ温溶液０．５％ＢＳＡ−
０，０５ＭＰＢＳ）の２００μｌとＨＲＰ標識１−メチ
ルアデノシンを１％卵アルブミン−０，５％ＢＳＡ−０
，４％シュクロース−〇、０１１４　Ｐ　Ｂ　Ｓ溶液’
（ＤＩ７．２）で４００倍に希釈した溶液２００μ！を
プラスチックチューブに加え、更に、この中に抗体固定
化ビーズ１ケを加え、３１℃で６０分間反応させた。生
理食塩液で洗浄後、５ｎＨＨ，ｏ、と０．０４５％３，
３°、５．５°−テトラメチルベンジジン・塩酸塩溶液
の等量混合溶液４０９μｌを加え、３７℃で３０分間反
応させた。その後、１ＮＨ２ｓＯａ１−を加えて反応を
停止させ、４５０ｎｍの吸光度を測定した。その結果、
第１図及び第１表に示したように１−メチルアデノシン
濃度に依存して固定化抗体と標識化抗原の反応が阻害さ
れ吸光度が低下し良好な検量線が得られた。また、この
ときの測定値（ｎ＝２）のバラツキ（変動係数Ｃｖ）は
５％以下で良好であった。

（４）希釈回収性及び添加回収性の検討（３に記載の方
法に従って、ヒト尿検体（Ａ〜Ｄ）を用いて希釈回収試
験と添加回収試験を行った。この場合、検体は０．５％
ＢＳＡ−０，０５ＭＰＢＳ溶液で２０倍希釈して測定し
た。測定結果を第２表及び第３表に示した。その結果、
いずれも±２０％以内の回収性を示し良好であった。

第２表希釈回収性試験結果 第１表　１−メチルアデノシン濃度と吸光度及び変動係
数第３表添加回収試験結果 第４表から本発明の測定は精度良く定量が可能であり、
臨床上、癌の診断やモニタリングに有用であることがわ
かる。

第４表　尿検体の測定値 実施例２ 実施例１の（１）の固定化抗体の調製において、固定化
後の処理を１％ＢＳＡ−２０％ラクトースー０．０１Ｍ
　Ｐ　Ｂ　Ｓ　（ｐＨ７，２）溶液で、２５℃３時間浸
漬処理し、脱水後、真空乾燥して固定化抗体を調製した
以外は、実施例１と同様な方法で正常人及び白血病患者
の尿検体を用い１−メチルアデノシンを測定した。その
結果を第４表に示した。濃度表示としてはクレアチニン
補正を行い表示した。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例１で作成した本発明の１−メチルアデ
ノシンの測定方法における検量線を示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、試料中の１−メチルアデノシンを競合法で測定する
   に際し、１−メチルアデノシンに対するモノクローナル
   抗体を不溶性担体に固定した固定化抗体と標識物質で標
   識した標識１−メチルアデノシンを用いることを特徴と
   する１−メチルアデノシンの測定方法。 ２、試料中の１−メチルアデノシンを競合法で測定する
   ための測定試薬であって、（ａ）１−メチルアデノシン
   に対するモノクローナル抗体を不溶性担体に固定した固
   定化抗体試薬と（ｂ）標識物質で標識した標識１−メチ
   ルアデノシンとを含むことからなる測定試薬。 ３、試料中の１−メチルアデノシンを競合法で測定する
   ための試薬キットであって、（ａ）１−メチルアデノシ
   ンに対するモノクローナル抗体を不溶性担体に固定した
   固定化抗体試薬、（ｂ）標識物質で標識した標識１−メ
   チルアデノシンとを含むことからなる試薬キット。