JPH0315398A

JPH0315398A - 光学活性３―フェニルグリシッド酸エステル類化合物の製法

Info

Publication number: JPH0315398A
Application number: JP1226504A
Authority: JP
Inventors: Takeji Shibatani; 柴谷　武爾; Katsuhiko Nakamichi; 中道　勝彦; Hiroaki Matsumae; 裕明松前
Original assignee: Tanabe Seiyaku Co Ltd
Current assignee: Tanabe Seiyaku Co Ltd
Priority date: 1988-09-02
Filing date: 1989-08-31
Publication date: 1991-01-23
Anticipated expiration: 2009-01-05
Also published as: JPH0678B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔技術分野〕本発明は、光学活性３−フエニルグリシッド酸エステル
類化合物の新規製法に関する。

〔従来技術〕

光学活性３−フェニルグリシッド酸エステル類化合物は
、冠血管拡張剤として有用な塩酸ジルチアゼム及びその
他各種医薬化合物の合威中間体として重要な化合物であ
るが、従来、この化合物の製法としては、トランス−３
−（４−メトキシフェニル）グリシッド酸メチルエステ
ルを加水分解して対応するカルボン酸とし、このカルボ
ン酸を光学活性アミン類で光学分割した後、エステル化
する方法（特開昭６０−１３７７５　、同６０−１３７
７６　）が知られている。

〔解決すべき技術的課題〕

しかしながら、上記方法は工程数が多く、しかも目的と
する光学活性トランス−３−（４−メトキシフェニル）
グリシッド酸メチルエステルが純度の低い油秋物として
しか得られないという難点があった．〔発明の構威及び効果〕本発明者らは、かかる難点を解決すべく鋭意研究を重ね
た結果、ラセミ型３−フェニルグリシッド酸エステル類
化合物から、目的とする光学活性３−フェニルグリシッ
ド酸エステル類化合物を一挙にかつ結晶として取得しう
る方法を見出し、本発明を完或するに到った．すなわち、本発明によれば、光学活性３−フエニルグリ
シッド酸エステル類化合物は、一般式（但し、環Ａは置
換基を有することもあるフエニル基、Ｒはエステル残基
を表す。）で示されるラセミ型３−フェニルグリシッド酸エステル
類に、エステル結合を不斉加水分解する能力を有する酵
素、微生物の培養液、菌体又は菌体処理物を作用させて
一方の光学活性体を加水分解した後、反応液より対掌体
を分離・採取して製造することができる．本発明方法は、一般式（１）で示されるグリシッド酸エ
ステルが、環Ａに低級アルキル基、低級アルコキシ基及
びハロゲン原子から選ばれる置換基を有している場合で
も、置換基のない場合と同様に実施できる．そのような
置換基としては、例えば４位におけるメチル基、メトキ
シ基又はクロロ原子などがある．エステル残基Ｒは、通
常、低級アルキル基であり、例えばメチル基、エチル基
、イソプロビル基又はＬ−ブチル基である。

本発明において、原料化合物であるラセミ型３−フェニ
ルグリシッド酸エステル類化合物（１）としては、（２
Ｓ、３Ｒ）体及び（２Ｒ、３Ｓ）体を等量含むものだけ
でなく、これら光学活性体を共に含むものであればいず
れも用いることができる．グリシッド酸エステル類化合物（１）のエステル結合の
不斉加水分解酵素としては、たとえば、リパーゼ或いは
エステラーゼと呼ばれる一群の酵素が使用できる．これ
らの酵素は微生物由来のものであっても、動物細胞由来
のものであっても、更には植物細胞由来のものであって
もよい．また、これらの加水分解酵素を含有する微生物
菌体、動物細胞或いは植物細胞から公知方法により抽出
したものであってもよく、市販のものであってもよい．
具体的には例えば、アルカリ性リパーゼ（アクロモバク
ター由来、和光純薬製）、リパーゼＬＰ　　（クロモバ
クテリウム　ヴイスコサム由来、東洋醸造製）、リパー
ゼＢ（シェードモナス　フラジ２２−３９　Ｂ由来、和
光純薬製）、リパーゼＭ「アマノ」１０（ムコール　ジ
ャバニカス由来、天野製薬製）、リバーゼ　タイプＸＩ
　（リゾプス　アリザス由来、米国、シグマ社製）、タ
リパーゼ（リゾプス　デレマー由来、田辺製薬製）、リ
パーゼＮＫ−１１６　　（リゾプス　ジャボニカス由来
、長瀬産業製）、リパーゼＮ（リゾプス　ニビウス由来
、天野製薬製）、リバーゼ　タイブ■（キャンディダ　
シリンドラシア由来、米国、シグマ社製）、リバーゼ（
ブタ膵臓由来、和光純薬製）、エステラーゼ（ブタ肝臓
、米国、シグマ社製）、コレステロールエステラーゼ（
キャンディダ　ルゴサ由来、長瀬産業製）等を用い得る
．また、本発明に使用しうる微生物は、上記の如き加水分
解酵素を生産する能力を有するものであればよく、例え
ばこのような能力を有する黴、細菌、酵母、放線菌等の
微生物を好適に使用することができる．具体的には黴と
してはアプシディア属、アスペルギルス属、フサリウム
属、ギベレラ属、ムコール属、ノイロスボラ属、トリコ
デルマ属又はリゾブス属に属する微生物があげられ、細
菌としてはアクロモバクター属、アルカリゲネス属、バ
シルス属、プレビバクテリウム属、コリネバクテリウム
属、プロビデンシヤ属、シュードモナス属、セラチア属
に属する微生物があげられ、酵母としてはキャンディダ
属又はサッカロマイコプシス属に属する微生物があげら
れ、又　放線菌としてはノカルディア属に属する微生物
があげられる．かかる微生物の具体例としては、例えば
アプシディア　コリンビフェラ（　Ａｂｓｌｄｉａ　　
ｃｏｒ　＋＊ｂｉｆｅｒａ　）　ＩＦＯ　４００９　、
同ＩＰ０　４０１Ｇ、アスペルギルスオクラセウス（　
Ａｓ　ｅｒ　ｉｌｌｕｓ　　ｏｃｔｉｒａｃｅｕｓ　　
ＩＦＯ　４３４６、アスペルギルス　テレウス（　Ａｓ
　ｅｒ　ｉｌｌｕｓｔｅｒｒｅｕｓ　）　ＩＰＯ　６１
２３　、フサリウム　オキシスポラム（　Ｆｕｓａｒｉ
ｕｍ　　ｏｘ　ｓ　ｏｒｕｍ　）　　ＩＦＯ　５９４２
　、同ＡＴＣＣ　６５９　、フサリウム　ソラニ（　Ｐ
ｕｓａｒｉｕｍｓｏｌａｎｉユＩＦＯ　５２３２　、ギ
ベレラ　フジクロイ（　Ｇｌｂｂｅｒｅｌｌａ　　ｆｕ
　ｌｋｕｒｏｉ　）　　ＩＦＯ　５２６８　、ムコール
　アングリマクロスボラス（　Ｍｕｃｏｒ　　ａｎｕｌ
ｌ−−駐旦臼ヵ残ｒｕｓ　）　ＩＡＭ　６１４９　、ム
コール　シルシネロイデス（　Ｍｕｃｏｒ　ｃｉｒｃｉ
ｎｅｌｌｏｉｄｅｓ　）　ＩＦＯ　６７４６、ムコール
　フラバス（　Ｉｌｕｃｏｒ　ｆｌａｖｕｓ　）　ＩＡ
Ｍ　６１４３、ムコール　フラギリス（　Ｍｕｃｏｒ　
　ｆｒａ　ｉｌｌｓ　）　ＩＦ０　６４４９、ムコール
　ジェネベンシス（　Ｍｕｃｏｒ？虹践ｎｓｉｓ　）　
ＩＡＭ　６０９１　，ムコール　グロボサス（ｈ■正一
己α旦狙ｓ　）　−１ＦＯ　６７４５、ムコール　ヒエ
マリス（　Ｍｕｃｏｒ　ｈｉｅｍａｌｉｓ　）　ＯＬＩ
Ｔ　１０４５　、同ＯｔｌＴ　１０４７、ムコール　ジ
アンセニ（　Ｍｕｃｏｒ　　ａｎｓｓｅｎｉｉ　）ＯＵ
Ｔ　１０５０　、同ＩＰ０　５３９Ｂ　、ムコール　　
ジャバニカス（　Ｍｕｃｏｒ　　ａｖａｎｉｃｕｓ　）
　ＩＦＯ　４５６９、同ＩＦＯ　４５７０、同ＩＦＯ　
４５７２、同ＩＰ０　５３８２　、ムコール　ランフ゜
ロスボラス（　Ｍｕｃｏｒ　　ｌａｗ　ｒｏｓ　ｏｒｕ
ｓ　）　　ＩＦＯ　６３３７、ムコール　ペトリンスラ
リス（　Ｍｕｃｏｒ一肚立ハｌ辻旺ｉｓ　）　ＩＦＯ　
６７５１　、ムコール　プランベウス（　Ｍｕｃｏｒ　
　ｌｕｍｂｅｕｓ　）　ＩＡＭ　６１１７　、ムコール
プライ−（　Ｍｕｃｏｒ　　ｒａｉｎｉ　）　ＩＡＭ　
６１２０，ムコール　プシラス（　Ｍｕｃｏｒ　　ｕｓ
ｉｌｌｕｓ　）　ＩＡＭ　６１２２、ムコール　ラセモ
サス（　Ｍｕｃｏｒ　　ｒａｃｅｍｏｓｕｓ　）　ＩＦ
０　４５８ｌ１ムコール　ラマニアヌス（　Ｍｕｃｏｒ
ｒａｍａｎｎｉａｎｕｓ　）ＩＡＭ　６１２Ｂ、ムコー
ル　レカルバス（　Ｍｕｃｏｒ　ｒｅｃｕｒｖｕｓ）　
ＩＡＭ　６１２９、ムコール　シルバティカス（　Ｍｕ
ｃｏｒ　ｓｉｌｖａｔｉｃｕｓ　）　ＩＦＯ　６７５３
　、ムコール　スピネッセンス（　Ｍｕｃｏｒ　　ｓ　
ｉｎｅｓｃｅｎｓ　）　ＩＡ？Ｉ　６０７１，ムコール
　サプチリシマス　（　Ｍｕｃｏｒ？ｕｂｔｉｌｉｓｓ
ｉｍｕｓ　）　ＩＰ０　６３３Ｂ、ノイロスポラ　クラ
ッサ（　Ｎｅｕｒｏｓ　ｏｒａ　　ｃｒａｓｓａ　）　
ＩＦＯ　６０６８　、リゾプス　アリザス（　Ｒｈｉｚ
ｏ　ｕｓ　　ａｒｒｈｉｚｕｓ　）　ＩＦＯ　５７８０
、リゾプス　デレマー（゛勤ｎ並…』吐斐社）　ＡＴＣ
Ｃ　３４６１２　、リゾプス　ジャボニカス（■一ｈｎ
も工世＞　ＩＦ０　４７５８、トリコデルマ　ビリデ（
　Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒ＋ｓａ　ｖｉｒｉｄｅ　）　ＯＵ
Ｔ　４２０８　、同ＩＦ０　４８４７、アクロモバクタ
ー　サイクロクラステス（　八ｃｈｒｏａ＋ｏｂａｃｔ
ｅｒ　　ｃ　　ｃｌｏｃｌａｓｔｅｓ　　）　　Ｉ＾Ｍ
　　１０１３　　、　アルカリゲネス　フエカーリス（
　Ａｌｃａｌｉ　ｅｎｅｓｆａｅｃａｌｉｓ　）　０υ
Ｔ　８０３０　、バシルス　スフェリカス（’　Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓ　　ｓ　ｈａｅｒｉｃｕｓ　）　ＩＦＯ　３
５２５　、バシルスサプチルス（　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　
ｓｕｂｔ目ｉｓ　）　ＯＵＴ　８１０４、同ＯＵＴ　８
１０６　、ブレビバクテリウム　ケトグルタミカム（　
Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｓ＋　ｋｅｔｏ　ｌｕｔａ
ｍｉｃｕｍ　）＾ＴＣＣ１５５８Ｂ、コリネバクテリウ
ム　アルカノリティカム（　Ｃｏｒ　ｎｅｂａｃｔｅｒ
ｉｕａ＋　　ａｌｋａｎｏｌ　ｔｉｃｕａ＋　）　ＡＴ
ＣＣ　２１５１ｌ１コリネバクテリウム　ハイドロカー
ボクラスタム（　Ｃｏｒ　ｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｎ＋　
ｈ　ｄｒｏｃａｒｂｏｃｌａｓｔｕｎ＋　）ＡＴＣＣ　
１５５９２、コリネバクテリウム　プリモリオキシダン
ス（　Ｃｏｒ　ｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｒｉｍｏｒ
ｉｏｘ　ｄａｎｓ　）ＡＴＣＣ　３１０１５　、プロビ
デンシヤ　アルカリファシエンス（　Ｐｒｏｖｉｄｅｎ
ｃｉａ　ａｌｃａｌｉｆａｃｉｅｎｓ　）　ＪＣＭ　１
６７３、シェードモナス　ムタビリス（　Ｐｓｅｕｄｏ
ｍｏｎａｓｍｕｔａｂｉｌｆｓ　）　ＡＴＣＣ　３１０
１４、シュードモナス　プチダ（　Ｐｓｅｕｄ６ｍｏｎ
ａｓ　’ｕ旦ｄａ　）　ＡＴＣＣ　１７４２６　、同Ａ
ＴＣＣ　１７４５３　、同ＡＴＣＣ　３３０１５　、セ
ラチア　リクエファジエンス（　Ｓｅｒｒａｔｉａ　ｌ
ｉ　ｕｅｆａｃｉｅｎｓ　）　ＡＴＣＣ　２７５９２、
セラチア　マルセッセンス（　Ｓｅｒｒａｔｉａｍａｒ
ｃｅｓｃｅｎｓ　）　ＡＴＣＣ　１３Ｂ８０、同ＡＴＣ
Ｃ　１４７６４　，同ＡＴＣＣ　１９１８０　，同ＡＴ
ＣＣ　２１０７４　、同ＡＴＣＣ　２７１１７、Ｍ　Ａ
ＴＣＣ　２１２１２　、キャンディダ　パラプシロシス
（　Ｃａｎｄｉｄａ　　ｒａ　ｓｔｌｏｓｉｓ　）　Ｉ
Ｆ０　０５８５　、サツカロマイコブシス　リポリティ
力（　Ｓａｃｃｈａｒｏｍ　ｃｏ　ｓｉｓ鳥也阻υＩＦ
Ｏ　０７１７、同ＩＦ０　０７４６　、同ＩＦＯ１１９
５、同ｔｐｏ　１２０９　、同ＩＦ０　１５４８　、ノ
カルディア　アステロイデス（　Ｎｏｃａｒｄｉａ　ａ
ｓｔａｒｏｉｄｅｓ　）　ＩＦ０　３３８４＜同ＩＦＯ
　３４２４　、同ＩＦＯ　３４２３　、ノカルディア　
ガードネリ（　Ｎｏｃａｒｄｉａ　　ａｒｄｎｅｒｉ　
）八ＴＣＣ９６０４などがある。これらは野性株、変異
株であつてもよく、更にはこれらの微生物から、遺伝子
組み換え、細胞融合などの生物工学的手法により誘導さ
れるものであってもよい．また、上記微生物の培養液及び菌体は、例えば当該微生
物を、通常この分野において用いうる培地、例えば、慣
用の炭素源、窒素源及び無機塩類含有培地中、常温ない
し加温下（好ましくは約２０〜４０゜Ｃ）、かつ好気的
条件下、ｐＨ約５〜８で培養し、必要とあれば常法によ
り培養液から菌体を分離・採取して得ることができる．
なお、培養に際しては、培地にラセ果型３−フェニルグ
リシッド酸エステル類化合物（１）を約０．００１Ｘ以
上、とりわけ約０．１−ＩＸ程度、添加して酵素活性を
あげることもできる．又、かかる微生物菌体の処理物としては、上記微生物の
凍結乾燥菌体、アセトン乾燥菌体、菌体自己消化物、菌
体抽出物、菌体磨砕物、菌体の超音波処理物などがあげ
られる．更に、本発明の微生物菌体或いは菌体処理物は
、例えばポリアクリルアミド法、含硫多糖ゲル法（カラ
ギーナンゲル法等）、アルギン酸ゲル法、寒天ゲル法等
の公知方法により固定化して使用することもできる。

本発明にかかる不斉加水分解反応は、適当な溶媒中で、
ラセ逅型３−フェニルグリッシド酸エステル類化合物（
１）に酵素、微生物の培養液、該培養液から採取した菌
体又は菌体処理物を接触させることにより実施すること
ができる．基質の濃度は概ね０．０５〜２０％、とりわ
け０．５〜５％が好ましく、反応は、常温ないし加温下
、好ましくは１０〜５０℃、とりわけ好ましくは２５〜
４０゜Ｃで好適に進行する．また反応に際しては、反応
液のｐＨが５〜１０、とりわけ６〜９となるよう調整す
るのが好ましい．この際、基質は水難溶性のものが多い
ので、反応は水または水性溶媒と有機溶媒との二相溶媒
系で実施するのが好ましい．かかる有機溶媒としては、
例えばベンゼントルエン、キシレン、四塩化炭素、クロ
ロホルム、ジクロロメタン、トリクロロエチレン、クロ
ロベンゼン、酢酸エチル、酢酸ブチル、ｎ−プロビルア
ルコール、イソプロビルアルコール、ｎ一ブチルアルコ
ール、Ｌ−プチルアルコール、ジェチルエーテル、ジイ
ソプロビルエーテル、メチルエチルケトン、メチルイソ
ブチルケトンなどがあげられ、とりわけ酢酸エチル、四
塩化炭素、トルエンが好ましい．また、酵素源として微
生物菌体またはその培養液を用いる場合、上記反応を界
面活性剤の存在下に実施すれば、反応時間の短縮や光学
活性３−フェニルグリシッド酸エステル類化合物［１］
の収量増加をはかることができる．かかる界面活性剤と
しては、臭化セチルピリジニウム、臭化セチルトリメチ
ルアンモニウム、ポリエチレングリコール、ボリオキシ
エチレンオクチルフェニルエーテル、ラウリル硫酸ナト
リウム等を用いることができ、その添加量は反応液に対
し、約０．０００１〜０．１χ程度であるのが好ましい
．かくして得られる加水分解反応液からの光学活性３−
フェニルグリシンド酸エステル頬化合物〔Ｉ〕の単離は
常法にしたがって容易に実施することができる．例えば
加水分解反応を水一有機溶媒二相系で実施した場合には
、３−フエニルグリシッド酸エステル類化合物（Ｉ）の
一方の光学活性体は加水分解されて水層に移行し、反応
を受けない他方の光学活性体は有機溶媒中に残存するの
で、有機溶媒層を分取し、減圧濃縮することにより光学
活性３−フェニルグリシッド酸エステル類化合物を結晶
として採取することができる。

上記、本発明方法は、光学活性３−フェニルグリシッド
酸エステル類化合物（１）を短工程で、しかも高純度の
結晶として取得できるので、工業的有利な製法となりう
るちのである。

実施例１グルコースＯ．ＳＸ，ペプトンＩＬ肉エキスＩＬ酵母エ
キス１．２５Ｋ　，塩化ナトリウム０．５χ、からなる
培地５０ａｄｌ　（ｐｌｌ７．ｏ）を５００ｍｇ容振盪
フラスコに入れ、１２０″Ｃで１０分間滅菌した。この
培地に、セラチア　マルセッセンス＾ＴＣＣ　２７１１
７を１白金耳接種し、３０゜Ｃで２０時間振盪培養した
。上記培養液５．４２から遠心分離により集めた菌体を
、生理食塩水に懸濁後さらに遠心分離により集菌した．
菌体を臭化セチルトリメチルアンモニウム０．０１Ｘを
含む１０ａＭリン酸緩衝液１．８　４！　（ｐＨ７．５
）に懸濁し、ラセミ型３−（４−メトキシフエニル）グ
リシツド酸メチルエステル７．２ｇを含む四塩化炭素１
．８ｌに添加した後、３０℃で３日間不斉加水分解反応
させることにより、（２３，３Ｒ）−３−　（４一メト
キシフェニル〉グリシッド酸メチルエステルが完全に分
解した．四塩化炭素層を分取したのち、減圧濃縮し、（
２Ｒ，３３）−３−　（４−メトキシフェニル）グリシ
ッド酸メチルエステル３．０ｇを粗結晶として得た．こ
の粗結晶３．０ｇにイソブロビルアルコール１０Ｊｄを
添加した後、８０℃にて撹拌しなから２０分間加熱溶解
した．３時間かけて８０℃から２０゜Ｃへ徐冷した後、
１時間氷冷し、析出した結晶をろ取することにより、（
２Ｒ，３Ｓ）　−３−（４−メトキシフエニル）グリシ
ツド酸メチルエステルのプリズム状結晶２．９８を得た
．Ｍ．Ｐ．　　　：　　８７−８８゜Ｃ〔α）”　　：−２０７．０８°（Ｃ・１．メタノール
）Ｄ純度　　＝１００　　％元素分析値；理論値　Ｃ：６３．４５，　Ｈ：５．８１
．　０：３０．７４測定値　Ｃ：６３．４４，　ｌＩ：
５．８（Ｌ　Ｏ：３０．７６赤外吸収スペクトル　：第
１図核磁気共鳴スペクトル：第２図質量分析スペクトル　：第３図実施例２実施例ｌに示した培地に下記第ｌ表に示す細菌を接種し
、３０℃で２０時間培養した．上記培養液４５ｄより遠
心分離により集めた菌体を、生理食塩水に懸濁後さらに
遠心分離により集菌した．該菌体を臭化セチルトリメチ
ルアンモニウム０．０１χを含むｌＯ−リン酸緩衝液１
５ｄ（ＰＩ１７．５）に懸濁し、ラセミ型３−（４−メ
トキシフェニル）グリシッド酸メチルエステル６０Ｂを
含む四塩化炭素１５　ｄに添加し、３０゜Ｃにて３日間
不斉加水分解反応させた．反応後、四塩化炭素層を分取
して、（２Ｒ、３Ｓ）−３−（４−メトキシフェニル）
グリシッド酸メチルエステル含有反応液を得た．この反
応液の（２Ｒ、３Ｓ）体の含量は下記第１表の通りであ
り、また、その対掌体である（２３，３Ｒ）体は反応液
中から殆ど検出されなかった．尚、上記光学活性体の定量はダイセル化学工業■製のキ
ラルセルＯＪΦ４．６　Ｘ　２５（ｌｍを用い、高速液
体クロマトグラフィーにより行った．（以下、同〉実施例３グルコース１ｚ、ベブトン０．５Ｘ，酵母エキス０．３
！、麦芽エキス．０．３χからなる培地５０Ｍ１（　ｐ
Ｈ６．２）を５００ＩＲ１容振とうフラスコに入れ、１
２０゜Ｃで１０分間滅菌した．この培地に、下記第２表
に示す黴または酵母を１白金耳接種し、カビは６８時間
、酵母は２０時間、２７゜Ｃで振盪培養した．上記培養
液４５ｄに、ラセミ型３−（４−メトキシフェニル）グ
リシッド酸メチルエステル６０■を含む四塩化炭素１５
　ｄを添加し、さらに反応液中の濃度が０．００１χと
なる量の臭化セチルトリメチルアンモニウムを加えて、
３０゛Ｃにて３日間不斉加水分解反応させた．反応後、
四塩化炭素層を分取し、（２Ｒ、３Ｓ）−３−　（４−
メトキシフエニル）グリシツド酸メチルエステルを含む
反応液を得た．この反応液の（２Ｒ、３Ｓ）体の含量は
下記第２表の通りであり、又、その対掌体である（２Ｓ
、３Ｒ）体は反応液中から殆ど検出されなかった．第２
表実施例４グルコース０．４χ、酵母エキス０．４ｚ、麦芽エキス
１．０Ｘからなる培地５０ｔｔｔｌ　（　ｐＨ７．３　
）を５００　ｄ容振とうフラスコに入れ、１２０゜Ｃで
１０分間滅菌した。

この培地に、下記第３表に示す放線菌を１白金耳接種し
２７゜Ｃで６８時間振盪培養した．上記培養液４５一に
、ラセミ型３−（４−メトキシフェニル）グリシッド酸
メチルエステル６０ｎ＋ｇを含む四塩化炭素１５　ｄを
添加し、さらに反応液中の濃度が０．００１２となる量
の臭化セチルトリメチルアンモニウムを加えて、３０゜
Ｃにて３日間不斉加水分解反応させた．反応後、四塩化
炭素層を分取し、（２Ｒ、３Ｓ）−３−　（４−メトキ
シフェニル）グリシッド酸メチルエステルを含む反応液
を得た．この反応液の（２Ｒ、３Ｓ）体の含量は下記第
３表の通りであり、また、その対軍体である（２３、３
Ｒ）体は反応液中から殆ど検出されなかった．取し、（
２Ｒ，３３）−３−　（４−メトヰシフェニル）グリシ
ッド酸メチルエステルを含む反応液を得た．この反応液
の（２Ｒ、３３）体の含量は下記第４表の通りであり、
また、その対掌体である（２３．３Ｒ）体は反応液中か
ら殆ど検出されなかった．第４表実施例５下記第４表に示すリパーゼ又はエステラーゼ酵素を各酵
素の至適ｐｌｌに調製したｌＯｍＭリン酸緩衝液ｌＩｄ
に懸濁した後、ラセミ型３−（４−メトキシフエニル）
グリシフド酸メチルエステル４■ヲ含む四塩化炭素ｌ１
ｄを添加し、３０゜Ｃにて２日間不斉加水分解反応させ
た．反応後、四塩化炭素層を分メチルエステルを含む反
応液を得た．この反応液の（２Ｒ、３Ｓ）体の含量は下
記第５表の通りであり、また、その対掌体である（２３
，３Ｒ）体は反応液中から殆ど検出されなかった．実施
例６下記第５表に示す酵素ｌＯ■を各酵素の至適ｐｌＩに調
製した１００ｍＭリン酸緩衝液ｌＩＩ１に懸濁した後、
ラセミ型３−（４−メトキシフェニル）グリシッド酸メ
チルエステル４ｍｇを含む四塩化炭素ＩＩＩ１を添加し
、３０℃にて１日間不斉加水分解反応させた。反応後、
四塩化炭素層を分取し、（２Ｒ、３Ｓ）−３−（４−メ
トキシフヱニル）グリシッド酸実施例７５ｇ／ｊ！の濃度のリバーゼＯＦ−３６０　（キャンデ
ィダシリンドラシア由来、名糖産業製〕を含む０．５Ｍ
リン酸緩衝液５００　ｒｒｄｌ　（ａｌｌ７．５）に、
ラセ逅型３一（４−メトキシフェニル）グリシッド酸メ
チルエステル１００　ｇを含むトルエン５００　ｍを添
加し、３０゜Ｃ、６００ｒｐ■の撹拌速度で６時間不斉
加水分解させた．反応後、トルエン層を分取した後、減
圧濃縮し、（２Ｒ，３Ｓ）−３−　（４−メトキシフエ
ニル）グリシッド酸メチルエステル４２．５ｇを粗結晶
として得た．この粗結晶にイソプロビルアルコールー４
０　ｍを添加した後、８０℃にて撹拌しなから２０分間
加熱溶解した．３時間かけて８０゜Ｃから２０゛Ｃへ徐
冷した後、１時間水冷し、析出した結晶をろ取すること
により、（２Ｒ、３Ｓ）−３−　（４−メトキシフェニ
ル）グリシッド酸メチルエステルの結晶４０．２ｇを得
た．Ｍ．Ｐ．　　　：　　８７−８８゜Ｃ〔α）　”　　：　　−２０６．４　＠（Ｃ＝１．　メ
タノール）む純度　　：〉９９　　％

【図面の簡単な説明】

第１図は、（２Ｒ．　３Ｓ）　−３−　（４−メトキシ
フェニル〉グリシッド酸メチルエステルの赤外吸収スペ
クトノレ、第２図は同化合物の核磁気共鳴スベクトル、第３図は同化合物の質量分析スペクトルである．

Claims

【特許請求の範囲】（１）フェニル基上に置換基を有することもあるラセミ
型３−フェニルグリシッド酸エステルに、エステル結合
を不斉加水分解する能力を有する酵素、微生物の培養液
、菌体又は菌体処理物を作用させて一方の光学活性体を
加水分解した後、反応液より対掌体を分離・採取するこ
とを特徴とする光学活性３−フェニルグリシッド酸エス
テル類化合物の製法。（２）分離・採取する対掌体の立
体配置が（２Ｒ、３Ｓ）である請求項１記載の製法。（３）酵素がエステラーゼ又はリパーゼである請求項１
記載の製法。（４）微生物がアプシディア属、アスペルギルス属、フ
サリウム属、ギベレラ属、ムコール属、ノイロスボラ属
、リゾプス属、トリコデルマ属、アクロモバクター属、
アルカリゲネス属、バシルス属、プレビバクテリウム属
、コリネバクテリウム属、プロビデンシヤ属、シュード
モナス属、セラチア属、キャンディダ属、サッカロマイ
コプシス属又はノカルディア属に属する微生物である請
求項１記載の製法。