JPH0315380A - レーザ光等の照射用容器 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は細胞の培養容器に係り、特に細胞の表面へのレ
ーザ照射に好適な細胞へのレーザ光照射用培養容器に関
するものである。

〔従来の技術〕

従来のレーザ照射用容器は、たとえばアブライド　フィ
ジ▼クス　ビ−　３５（１９８４）　　第１３５頁から
第１４０頁（　Ａｐｐ目ｅｄ　Ｐｈｙｓｌｃｍ　　Ｂ３
　５　（　１　９　８　４　）　ＰＰ　　１　３　５〜
１４０）に紀載されているように、市販されている培養
ビン等の一部に顕微鏡対物レンズの行動距離を’Ｊ４Ｍ
した板厚の薄いガラス部分を設けた形状になっていた。

拭料細胞は、この容器の板厚の薄いガラス部分の内面（
ｇ．下、試料固定面という）に付着培養等で固定され、
この試料細胞に対物レンズを通して集光したレーザ光が
照射されるとともに、同じ対物レンズで顕微鏡観察され
る。この場合、第２図（ａ）に示すように細胞等の厚さ
の中心付近の面（第２図（ａ）　Ｂ面）と対物レンズの
画像の焦点面とが一致した時、顕ＩＩｋ鏡画像の細胞輪
郭は最も鮮明になると考えられる。一方、レーザ光が最
も細（絞られる面（以下、レーザ光の焦点面という、第
２図＜！）のＣ面）は、試料細胞の輪郭が鮮明に観察で
きる状態に顕微鏡画像の焦点面を第２図（ａ）　Ｂ面に
固定したままで、レーザ光の光路内のレンズを移動する
ことで、対物レンズの光軸方向の任意の位置に移動する
ことが可能である。この時、前記レンズの移動量とレー
ザ光の焦点面の移動■とはあらかじめ較正されている。

仮に第２図（ｂ）のように、試料細胞の輪郭を観察しな
がら拭料固定面（第２図（ｂ）人面）にレーザ光の焦点
面を一致させることを考えると、レーザ光の熱点面を顧
徽鏡画像の焦点面に対し細胞の厚さの半分の距離だけ移
動させる必要がある。そのため、従来１１８Ｉ＆の！！
面に照射する時は、ａ胞の厚さの半分の距離だけあらか
じめ求めた較正曲線を用いてレーザ光の魚点面を移動し
てレーザ光を照射していた。

〔発明が解決しようとする課勉〕

上記従来技術では細胞の輪郭が鮮明に観察される時の画
像の焦点面の位置が真に第２図（ａ）　Ｂ面にあるかが
不明確であるため、レーザ光の焦点面を前記のように移
動させた場合にも、正確に試料固定面にレーザ光の焦点
面が合っているかどうかは不明である。そのためレーザ
光で処理する効率が低くなる可能性が大きい。また、こ
の方法は細胞の形態が球形である場合は有効であるが、
第３図に示すように楕円形等の形態の細胞の場合は、細
胞の厚さ《第５のΔｒ）の把握が難しいため、レーザ光
の焦点面の移動距離の判断が困難であった。

本発明の目的は細胞表面へのレーザ光の焦点合わせが容
易なレーザ光等の照射用容器を提供することにある。

〔課題を解決するための手段〕

上記目的を連戚するために、試料固定面の全面あるいは
一部に半透明状の薄膜処理を施した。この薄農は集光さ
れたレーザ光のエネルギーで容易に破壊される。また、
この薄膜は半透明状であるため、この薄膜を介しても試
料細胞の透過照明による顕微鏡観察が可能であり、また
薄膜の破壊痕跡の確認が可能である。

〔作　　　用〕

レーザ光の焦点面は最もレーザ光のエネルギー密度が高
い面、すなわち最も低い照射エネルギーで試料の破壊が
可能な面である。これを利用すると蒸着膜を破壊の対象
とし、レーザ光の焦点面の移動、破壊された蒸着膜の観
察、レーザの照射エネルギーの増減を繰り逼すことによ
りレーザ光の焦点面を蒸着膜の面すなわち試料固定面の
細胞に一致させることができる。

〔実　施　例〕

以下、本発明の一実施例を第１図ないし第４図により説
明する。

ｉ！ｌ図において、カバーグラス３の内面はＣｒを一面
に蒸着している。二の蒸＊ｍ面４は焦光されたレーザ光
８の一エネルギーで容易に破壊され、カバーグラス３に
は痕跡が残る（以下穿孔跡という）。また、この蒸着膜
面４は、透過照明による試料細胞５の顕微鏡ＩＩ察が容
易で、かつ上記の穿孔跡の確認が可能な程度の厚さを持
つ半透明状のものである。このカバーグラス３は、ａｌ
ｌｌｌｌＩ　４を内側にしてｆｆＭｋの培養ビン２に設
けられた穴に接着後滅菌して培養に使用する。培養時に
はカバーグラス３面が下側になるように培餐ビン２を静
置して蒸着Ｊｉｌ０１４に試料細胞５を付着培養する。

細胞がカバーグラス３の蒸ＩＦ膜１ｉｉ４に付着したら
、培養液を細胞処理液６に交換し、レーザ光８の照射装
置の顕微鏡部が正立型の場合カバーグラス３を上向きに
してレーザ光８を試料細胞５に照射する。

試料固定面へのレーザ光の焦点面合わせの方法を第３図
により説明する。

第３図において、試料細胞が鮮明゛に観察できるように
顕微鏡画像の焦点を合わせレーザ光を照射し、次に蒸着
膜面に画像の焦点面を合わせて穿孔跡をＩＩｉ察する。

この一連の操作をレーザ光の出力を増減しながら繰り返
して蒸着膜の破壊が最少限の照射エネルギーでの破壊、
すなわち破壊のしきい値付近で破壊するようにする。次
に試料を載せたステージを上下に移動してレーザ光の随
射を行い穿孔跡の有無を調べる。ステージを上下に移動
しても穿孔跡が観察されればレーザ光の焦点面は薄膜面
にないのでレーザ光跡内のレンズを動かしてレーザ光の
焦点面を移動する。この時、ステージを下げて蒸肴農が
穿孔される場合はレーザ光の焦点面を対物レンズ側に移
動し、ステージを上げた時に穿孔される場合はレーザ光
の焦点面を対物レンズから遠ざける方に移動することに
よりレーザ光の焦点面は蒸着膜側に移動する。以上の操
作を何度が繰り覚すことによりレーザ光の熱点面を蒸１
ｌＭの面に合わせることができる。このようにしてレー
ザ光の焦点合わせが終了したら、再度試料細胞５に画像
焦点を合わせてレーザ光８の照射を開始する。レーザ光
８を照射した部位は′！Ｊｉ４図（ａ）に示すようにＣ
ｒ　１１１１穿孔跡９が確認されるため、レーザ光８を
照射した細胞と照射しない細胞との識別が容易である。

第４図（ｂ）は本発明の他の実施例を示すものであり、
カバーグラス３の一部分に枠を作るような形に蒸着換処
理を施す。レーザ光８の焦点合わせは蒸着膜処理を施し
ている部分で行い、レーザ光８の焦点合わせが充了後、
培養容器を載せた顕微鏡ステージを動かして接着膜枠内
の細胞にレーザ光８の照射を行う。本実施例によれば、
レーザ光の照射した部位にはａＳＳ処理が施されておら
ず、蒸着膜破壊による細胞への悪影響、蒸着膜への細胞
の付着性等が懸念される場合には特に有効であり、レー
ザ光の照射した細胞群も容易に識別できる。また、本実
施例では蒸着膜で枠を作リレーザ光の照射した細胞の識
別ができるようにしたが、レーザ光の照射した細胞の識
別が不要な場合は蒸！ＩＩＪｌＫで枠を作る必要は無く
、レーザ光の焦点合わせのために蒸Ｉ１展部位をカバー
グラスに１〜数箇所設けるのみで良い。

〔発明の効果〕

本発明によれば、細胞の形態が球形あるいは球形でない
場合も細胞を鮮明に観察しながら試料固定面すなわち細
胞の表面ヘレーザ光の焦点面を正確に合わせることが容
易となり、それだけレーザ光で処理する効率が増す。ま
た、レーザ光を照射した細胞をマーキングすることもで
きる等の効果がある。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の一実施例のレーザ光等の照射用容器正
面断面図、第２図は画像焦点とレーザ光焦点の説明図、
ＩＩ！３図は本発明の一実施例に係るフローチャート図
、第４図は本発明の他の実施例に係る説明図、第５図は
従来の培養容器に係る説明図である。 ３・・一・・カバーグラス、４・・・・・・薄膜処理面
、５・・・試料細胞、７・・−・・対物レンズ、８・・
・・・・レーザ光、オｌ　図 Ａｚ　　図 ６ θ−−−−レーザ）し 牙４ 図 ９ ｊ 目

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、集光されたレーザ光で容易に破壊される半透明状の
   薄膜を試料固定面の全面、あるいは一部に設けたことを
   特徴とするレーザ光等の照射用容器。 ２、レーザ光等を照射する目的で細胞等を固定する容器
   において、 細胞等が接触する面の全体あるいは一部に半透明状の薄
   膜処理を施したことを特徴とするレーザ光等の照射用容
   器。