JPH03128329A - 虚血性心疾患の予防・治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は虚血性心疾患の予防・治療剤、更に詳しくは虚
血が原因で引き起こされる、例えば狭心症および心筋梗
塞の予防・治療剤に関する。

見来夏挟先 成人病のひとつとして近年著しく増加のみられる心臓病
の中でも虚血性心疾患、とくに狭心症、心筋梗塞はその
症状の激しさ、死亡率の高さ、また軽症であっても患者
にとっての心理的不安の大きさなどから、その予防およ
び治療は重要な課題である。狭心症および心筋梗塞は心
臓への血液供給が減少あるいは遮断されることにより生
じる。

特に血液遮断の時間が長くなれば心筋細胞の障害あるい
は壊死値（心篩梗塞巣）は進展し、心臓はポンプ機能失
調に陥いり全身循環不全により死に至る。心臓の血液供
給は冠動脈を介して行われており、この冠動脈が収縮あ
るいは彎縮を生じることがこれら疾患の主な原因とされ
ている。

このため、これまで狭心症あるいは心筋梗塞の予防ない
し治療には、心臓への血液供給を増加させる冠血管拡張
薬、また心臓の負担を軽減する利尿薬、さらに積極的に
心筋の収縮力を増加させる強心薬が用いられているが、
未だ満足すべき効果は得られていない。

一方、最近の研究では内皮細胞より生成される２１個の
アミノ酸よりなるエンドセリンが冠動脈においても、こ
れまでに見出された生体内物質あるいは合成物質の中で
も最も強力かつ持続的な収縮作用を有することが示され
、狭心症あるいは心筋梗塞の主要原因とされる冠動脈収
縮に関与している可能性が示唆されるに至った。

エンドセリンに関しては、内皮細胞培養上清中より見出
されたエンドセリン−１（アミノ酸配列：Ｃｙｓ　　Ｓ
ｅｒ　　Ｃｙｓ　　Ｓｅｒ　　Ｓｅｒ　　Ｌｅｕ　　Ｍ
ｅｔ　　Ａｓｐ　　Ｌｙｓ　　Ｇｌｕ　　Ｃｙｓ　　Ｖ
ａｌ　　Ｔｙｒ　　Ｐｈｅ　　Ｃｙｓ　　Ｈｉｓ　　Ｌ
ｅｕ　　Ａｓｐ　　ｌ１ｅ１１ｅＴｒｐ）、およびその
遺伝子ファミリーとして染色体ＤＮＡよりその配列が決
定されたエンドセリン−２（アミノ酸配列：Ｃｙｓ　　
５ｅｒＣｙｓ　　Ｓｅｒ　　Ｓｅｒ　　Ｔｒｐ　　Ｌｅ
ｕ　　Ａｓｐ　　Ｌｙｓ　　Ｇｌｕ　　Ｃｙｓ　　Ｖａ
ｌ　　Ｔｙｒ　　Ｐｈｅ　　Ｃｙｓ　　Ｈｉｓ　　Ｌｅ
ｕ　　Ａｓｐ　　Ｉ］、ｅ　　Ｉｌｅ　　Ｔｒｐ）およ
びエンドセリン−３（アミノ酸配列：ＣｙｓＴｈｒ　Ｃ
ｙｓ　　Ｐｈｅ　　Ｔｈｒ　　Ｔｙｒ　　ＬｙｓＡｓｐ
　　Ｌｙｓ　　Ｇｌｕ　　Ｃｙｓ　　Ｖａｌ　　Ｔｙｒ
　Ｔｙｒ　　Ｃｙｓ　　Ｈｉｓ　　Ｌｅｕ　　Ａｓｐ　
　Ｉｌｅ　　Ｉｌｅ　　Ｔｒｐ）が知られている。また
エンドセリン−１の前廓体としてアミノ酸３８個からな
るヒトビッグ−エンドセリン−１（アミノ酸配列：Ｃｙ
ｓＳｅｒ　　Ｃｙｓ　　Ｓｅｒ　　Ｓｅｒ　　Ｌｅｕ　
ＭｅｔＡｓｐ　　Ｌｙｓ　　Ｇｌｕ　　Ｃｙｓ　　Ｖａ
ｌ　　Ｔｙｒ　　Ｐｈｅ　　Ｃｙｓ　　Ｈｉｓ　　Ｌｅ
ｕ　　Ａｓｐ　　Ｉｌｅ　　ＩＩｅ　　Ｔｒｐ　　Ｖａ
ｌ　　Ａｓｎ　　Ｔｈｒ　　Ｐｒｏ　　ＧｌｕＨｉｓ　
　Ｖａｌ　　Ｖａｌ　　Ｐｒｏ　　Ｔｙｒ　　ＧｌｙＬ
ｅｕ　　Ｇｌｙ　　Ｓｅｒ　　Ｐｒｏ　　Ａｒｇ　　５
ｅｒ）およびアミノ酸３９個からなるブタビッグ−エン
ドセリン−１（アミノ酸配列：Ｃｙｓ　　Ｓｅｒ　　Ｃ
ｙｓ　　Ｓｅｒ　　Ｓｅｒ　　Ｌｅｕ　　Ｍｅｔ　　Ａ
ｓｐ　　ＬｙｓＧｌｕ　　Ｃｙｓ　　Ｖａｌ　　Ｔｙｒ
　　Ｐｈｅ　　ＣｙｓＨｉｓ　　Ｌｅｕ　　Ａｓｐ　　
Ｉｌｅ　　ＩＩｓ　　Ｔｒｐ　　Ｖａｌ　　Ａｓｎ　　
Ｔｈｒ　　Ｐｒｏ　　Ｇｌｕ　　Ｈｉｓ　　ＩＩｅ　　
Ｖａｌ　　Ｐｒｏ　　Ｔｙｒ　　Ｇｌｙ　　Ｌｅｕ　　
ＧｌｙＳｅｒ　　Ｐｒｏ　　Ｓ、ｅｒ　　Ａｒｇ　　５
ｅｒ）も得られている。

本明細書においては、これらのエンドセリン関連ペプチ
ドをあわせてエンドセリンと総称する。

先１１邂迭すべき栗延 以上述べたように虚血が原因で引き起こされる、心疾患
の予防・治療剤を提供することが急務であった。

出画」Ｊ動生ｔ１１４８桿り反 本発明者等はエンドセリンの作用を特異的に抑制する抗
体を作製し、本抗体特有の薬理作用を見出した。

すなわち、本抗体が種々の動物の冠動脈においてエンド
セリンによる収縮を抑制し、あるいはエンにセリンによ
る細胞障害活性を抑制し、さらには虚血／再潅流モデル
における心筋梗塞巣の縮小作用を有することを見出し、
これらの知見に基づいてさらに検討の結果、本発明を完
成した。

すなわち本発明はエンドセリンの作用を特異的に抑制す
る抗体を含有する虚血性心疾患予防および治療剤である
。該エンドセリンの作用としては哺乳動物大動脈血管平
滑筋収縮活性、あるいは細胞障害活性等が挙げられる。

該抗体としては、ポリクローナル抗体およびモノクロー
ナル抗体が含まれる。

本発明のポリクローナル抗体の調製は一般に免疫抗原の
エンドセリンとキャリアー蛋白との複合体をつくり、こ
のものを動物に接種して免疫を行い、該免疫動物から抗
エンドセリン抗体含有物を採取、抗体の分離精製を行う
ことによる。

本発明のモノクローナル抗体の調製に当っては、上記免
疫動物から抗体価の高い個体を選び、最終免疫３〜５日
後に膵臓あるいはリンパ節を採取、それらに含まれる抗
体産生細胞を骨髄腫細胞と融合させ、安定的に力価の高
い抗体を産生ずるハイブリドーマを選択し、モノクロー
ナルなハイブリドーマを得ることによる。

免疫抗原のエンドセリンとしては、例えば、前記文献等
に記述された天然精製標品あるいは合成標品等いずれも
使用でき、先に述べたエンドセリンーエ、エンドセリン
−２、エンドセリン−３゜ヒトビッグ−エンドセリン−
１，ブタビッグ−エンドセリン−１およびそれらの一部
分がこの中に含まれる。

本発明で用いられる種々のペプチドは、ペプチド合成の
公知の常套手段で製造しうる。固相合成法、液相合成法
のいずれによってもよい。

固相法によりエンドセリンを合成する場合、メリーフィ
ールドの同相ペプチド合成方法〔ジャーナルオブジアメ
リカンケミカルソサイエテイ（Ｊ、Ａ１１．　Ｃｈｅｗ
、　Ｓｏｃ、）、８５．２１４９（１９６３））を用い
るのが好ましい。不溶性樹脂として当該技術分野で知ら
れたもののいずれであってもよく、例えばクロロメチル
化されたスチレン−ジビニルベンゼン共重合体、フェナ
シルアセティツクメチル化されたスチレン−ジビニルベ
ンゼン共重合体のようなポリスチレン型樹脂、ポリジメ
チルアクリルアミド樹脂のようなポリアミド型樹脂が挙
げられる。

Ｃ末端のＮ−保護アミノ酸を不溶性樹脂に結合させた後
、エンドセリンのＣ末端側から保護アミノ酸を常法に従
って順次結合し、次いでフッ化水素で処理した後、ジス
ルフィド結合を形成させ目的とするエンドセリンを合成
することができる。Ｎ−保護アミノ酸としては、α−ア
ミノ基はすべてＢｏｃ基で保護し、セリン水酸基はＢｚ
ｌ基で、グルタミン酸、アスパラギン酸のω−カルボン
酸は０Ｂｚｌ基、リジンのε−アミノ基はＣＱ−Ｚ基、
システィンのチオール基はＡｃｍ基、Ｍ　ｅ　Ｂ　ｚ　
１基、チロシンの水酸基はＢｒ−Ｚ基、ヒスチジンのイ
ミダゾール基はＴｏｓ基、トリプトファンのインドール
基はＣＨＯ基で保護するのが好ましい。

液相法による合成の手段としては、たとえば「ザペプチ
ズ（Ｔｈｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）　Ｊ　、第１巻（１９
６６年）　、５ｃｈｒｏｄｅｒ　ａｎｄ　Ｌｕｂｋａ著
、　ＡｃａｄｅＩＩｌｉｃ　Ｐｒｅｓｓ。

Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、Ｌｌ−５−Ａ、あるいは“ペプチド
合成”、泉屋ら著、丸善株式会社（１９７５年）に記載
された方法、たとえばアジド法、クロライド法、酸無水
物法、混合無水物法、ＤＣＣ法、活性エステル法。

ウッドワード試薬Ｋを用いる方法、カルボジイミダゾー
ル法、酸化還元法、ＤＣＣ／アディティブ（例、ＨＯＮ
Ｂ、ＨＯＢｔ、ＨＯ８ｕ）法などがあげられる。

哺乳動物を免疫するために用いられるエンドセリンとキ
ャリアー蛋白との蛋白複合体に関し、キャリアー蛋白の
種類およびキャリアーとハプテン（この場合ペプチド）
との混合比は、キャリアーにカプリングさせて免疫した
ハプテンに対して抗体が効率よく出来れば、どの様なも
のをどの様な比率でカプリングさせてもよいが、例えば
、牛血清アルブミンや牛サイログロブリン、ヘモシアニ
ン等を重量比でハプテンエ対し０．１〜２０、好ましく
は１〜５０割合でカプルさせる方法が用いられる。

また、ハプテンとキャリアーのカプリングには、種々の
縮合剤を用いることが出来るが、グルタルアルデビトや
カルボジイミド、マレイミド活性エステル等が好都合に
用いられる。

縮合生成物は温血動物に対して投与により抗体産生が可
能な部位にそれ自体あるいは担体、希釈剤とともに投与
されるが、なかでも皮下注射が好ましい、投与に際して
抗体産生能を高めるため、完全フロインドアジュバント
や不完全フロインドアジュバントを投与してもよい。投
与は通常２〜６週毎に１回ずつ、計３〜６回程度行われ
る。

用いられる温血動物としては、たとえばサル、ウサギ、
イヌ、モルモット、マウス、ラット、ヒツジ、ヤギ、ニ
ワトリがあげられる。

抗体は上記の方法で免疫された温血動物の血液、腹水（
好ましくは血液）などから採取される。抗血清中の抗エ
ンドセリン抗体価の測定は、例えば後記の標識化エンド
セリンと抗血清とを反応させたのち、抗体に結合した標
識剤の活性を測定することによりなされる。抗体の分離
精製は免疫グロブリンの分離精製法〔例、塩析法、アル
コール沈殿法、等電点沈殿法、電気泳動法、イオン交換
体（例、ＤＥＡＥ）による吸脱着法、超遠心法、ゲルろ
過払、抗原結合物あるいはプロティン−Ａ等の活性吸着
剤により特異抗体のみを採取し、結合を解離させて抗体
を得る特異的精製法〕に従って行われる。

このようにして作製された抗体は、ＩｇＧを主たる成分
とし、ＩｇＭ、ＩｇＡ等、他の免疫グロブリンも含む。

また、このものはエンドセリンと特異的に結合し、アン
ジオテンシン−Ｈには結合しない。

一方、上記のポリクローナル抗体のｖＲ製法と同様に免
疫された温血動物、たとえばマウスから抗体価の認めら
れた個体を選択し最終免疫の２〜５日後に膵臓またはリ
ンパ節を採取し、それらに含まれる抗体産生細胞を骨髄
腫細胞と融合させることにより、抗エンドセリン抗体産
生ハイブリドーマをｙＡ製することができる。融合操作
は既知の方法、たとえばケーラーとミルスタインの方法
〔ネーチャー（Ｎａｔｕｒｅ）　、　２５６，４９５　
（１９７５））に従い実施できる。融合促進剤としては
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）やセンダイウィルス
などが挙げられるが、好ましくはＰＥＧが用いられる。

骨髄腫細胞としてはたとえばＭＳ−１、Ｐ３Ｕ１．５Ｐ
２１０などがあげられるが、特にＰ３Ｕ１が好ましく用
いられる。用いられる抗体産生細胞（肺臓細胞）数と骨
髄細胞数との好ましい比率は１：１〜２０：工程度であ
り、ＰＥＧ　（好ましくはＰＥＧ１０００〜Ｐ　Ｅ　Ｇ
　６０００）が１０〜８０％程度の濃度で添加され、２
０〜４０℃、好ましくは３０〜３７℃で３〜１０分間イ
ンキュベートすることにより効率よく細胞融合を実施で
きる。

抗エンドセリンモノクローナル抗体の分離精製は上記の
ポリクローナル抗体の分離精製と同様に免疫グロブリン
の分離精製法に従って行われる。

このようにして作製・精製された抗エンドセリン抗体の
中から、エンドセリンの作用を特異的に抑制する抗体を
スクリーニングする方法としては、エンドセリンの薬理
作用を検出するいかなる方法を用いることも可能であり
、例えば、エンドセリンのブタ、ラット、ウサギ、モル
モット、イヌ、ヒト等、各種血管平滑筋収縮活性を指標
とする生体外の測定系、あるいはエンドセリンの上記動
物の血圧上昇活性を指標とする生体の測定系が挙げられ
る。

得られたエンドセリンの作用を特異的に抑制し得る抗体
はＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭいかなるクラスのものでもよ
く、またそれらからＦｃあるいはＦｃ領域を除去したＦ
ａｂ’あるいはＦａｂ画分あるいはその重合体でもよい
。また、エンドセリンの作用を特異的に抑制し得るモノ
クローナル抗体の可変遺伝子部と、ヒトイムノグロブリ
ン定常遺伝子部とを融合させ、組み換え体として発現さ
せたキメラ抗体を用いることもできる。

また得られた抗体がエンドセリン−１のＮ端領域を認識
する抗体であるならば、この抗体は同時にヒトビッグ−
エンドセリン−１およびブタビッグ一二ンドセリンー１
の薬理活性を中和することが期待され、また、エンドセ
リン−ｌのＣ端領域を認識する抗体であるならば、この
抗体は同時にエンドセリン−２およびエンドセリン−３
の薬理活性を中和することが期待される。

本発明の虚血性心疾患の予防・治療剤は、そのまま液剤
として、または適当な剤型の医薬組成物として、哺乳動
物（例、ヒト、ウサギ、イヌ、ネコ、ラット、マウス）
に対して経口的または非経口的に投与することができる
。投与量は投与対象、対象疾患、症状、投与ルートなど
によっても異なるが、たとえば成人の狭心症、心筋梗塞
、心不全の予防・治療のために使用する場合には、エン
ドセリンの活性を抑制する抗体を１回量として通常０．
０１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重程度、好ましくは０．１〜Ｉ
ＯＫ／一体重程度、さらに好ましくは０．１〜５■／ｋ
ｇ体重程度を、１日１〜５回程度、好ましくは１日１〜
３回程度、静脈注射により投与するのが好都合である。

他の非経口投与および経口投与の場合もこれに準する量
を投与することができる。症状が特に重い場合にはその
症状に応じて増量してもよい。

本発明のエンドセリンの活性を抑制する抗体はそれ自体
または適当な医薬組成物として投与される。上記投与に
用いられる医薬組成物は、上記エンドセリンの活性を抑
制する抗体またはその塩と薬理学的に許容され得る担体
、希釈剤もしくは賦形剤とを含むものである。かかる組
成物は経口または非経口投与に適する剤形として提供さ
れる。

すなわち、たとえば経口投与のための組成物としては、
固体または液体の剤形、具体的には錠剤（糖衣錠、フィ
ルムコーティング錠を含む）、乳剤、顆粒剤、散剤、カ
プセル剤（ソフトカプセル剤を含む）、シロップ剤、乳
剤、懸濁剤などがあげられる。かかる組成物は自体公知
の方法によって製造され、製剤分野において通常用いら
れる担体、希釈剤もしくは賦形剤を含有するものである
。たとえば、錠剤用の担体、賦形剤としては、乳糖。

でんぷん、蔗糖、ステアリン酸マグネシウムなどがあげ
られる。

非経口投与のための組成物としては、たとえば注射剤、
重刑などがあげられ、注射剤は静脈注射剤、皮下注射剤
、皮肉注射剤、筋肉注射剤、点滴注射剤などの剤型を包
含する。かかる注射剤は自体公知の方法、すなわちエン
ドセリン活性抑制物質またはその塩を通常注射剤に用い
られる無菌の水性もしくは油性液に溶解、懸濁または乳
化することによって調製される。注射用の水性液として
は生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等銀波
などがあげられ、適当な溶解補助剤、たとえばアルコー
ル（例、エタノール）、ポリアルコール（例、プロピレ
ングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン界
面活性剤〔例、ポリソルベート８０．　　ＨＣＯ−５０
（ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｙｌｅｎｅ　（５０ｍｏｌ）ａ
ｄｄｕｃｔ　ｏｆ　ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ　ｃａｔ
ｓｏｒ　ｏｉｌ））などと併用してもよい。油性液とし
てはゴマ油、大豆油などがあげられ、溶解補助剤として
安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどを併用して
もよい。

ｖＲ製された注射液は通常適当なアンプルに充填される
。直腸投与に用いられる重刑は、エンドセリンの活性を
抑制する抗体またはその塩を通常の生薬用基剤に混合す
ることによって調製される。

上記の経口用または非経口用医薬組成物は、活性成分の
投与量に適合するような投薬単位の剤形に調製されるこ
とが好都合である。かかる投薬単位の剤形としては、錠
剤、乳剤、カプセル剤、注射剤（アンプル）、重刑など
が例示され、それぞれの投薬単位剤形当り通常５〜５０
０ｍｇ、とりわけ注射剤では５〜１１００１Ｉ１、その
他の剤形では１０〜２５０■のエンドセリンの活性を抑
制する抗体が含有されていることが好ましい。

なお前記した各組成物は、エンドセリンの活性を抑制す
る抗体との配合により好ましくない相互作用を生じない
限り他の活性成分を含有してもよい。

去１１性 以下に実施例を示して本発明をさらに詳しく説明するが
、本発明はこれに限定されるべきものではない。

後述の実施例で用いられているマウスモノクローナル抗
体Ａ　ｗ　Ｅ　Ｔ　Ｎ４０ａを産生するハイブリドーマ
細胞ＡｗＥＴＮ４０は財団法人発酵研究所（■ＦＯ）に
受託番号ＩＦＯ５０１６８として昭和６３年７月１４日
から寄託されている。また該ハイブリドーマは通商産業
省工業技術院微生物工業技術研究所（ＦＲＩ）に受託番
号ＦＥＲＭ　ＢＰ−１９５０としてブタペスト条約に基
き昭和６３年７月１２日から寄託され、ＦＲＩに保管さ
れている。

ＡｗＥＴＮ４０が産生するマウスモノクローナル抗体Ａ
ｗＥＴＮ４０ａはエンドセリン−１のＮ端領域を認識し
、エンドセリン−２、ヒトビッグ一二ンドセリンー１お
よびブタビッグ−エンドセリン−■とは１００％かそれ
以上の交差反応性を示し、エンドセリン−３とは０．１
％以下の交差反応性しか示さない。

犬１ｕ」Ｌ （ｉ）実験方法 ２０ｍＱの液槽中にブタ左冠状動脈前下行技（ＬＡＤ）
を懸垂し用いた。エンドセリン−１を累積的に加え、そ
の収縮張力を測定し、６０ｍＭ　ＫＣＱ収縮に対する％
で表わした。マウスモノクローナル抗体ＡｗＥＴＮ４０
ａ　（ｍＡｂ）１０−’Ｍを液槽中に加えた後、エンド
セリン−１を同様に累積的に投与した。

（ｉｉ）実験結果 実験結果の一部を次表に示した。

エンドセリン−１（Ｍ） １０″″”　　　　　ＩＮ’　　　　　ＩＮ’（ｎ　＝
　３　） ｍＡｂ　１０−’Ｍはエンドセリン−１１０−１１１〜
１０−”Ｍの収縮反応を５０％以上抑制すると共に、濃
度−反応曲線（１０−１”〜１０−’　Ｍ　）を右方に
平行移動する競合型拮抗作用を示し、そのＰＡ、は７．
９２であった。

（ｉ）実験方法 ２０ｍＱの液槽中にラット大動脈を懸垂し用いた。

６０ｍＭＫＣｌの収縮張力を測定した後、ｍ　Ａ　ｂ（
１０””’、　ＩＦ’および１０″″’Ｍ）を液槽中に
加え、エンドセリン−１１０−”Ｍを添加し、その収縮
張力を測定した。

（ｉｉ）実験結果 実験結果は６０ｍＭＫＣｌ収縮張力に対する％で表わし
た。

ｍＡｂ（Ｍ） ０　　　　１０−’　　　　　１０−’　　　　　１０
”数字は％で標準誤差（ｎ＝４） ｍＡｂはエンドセリン−１１０−”Ｍによる収縮を濃度
依存性に抑制し、ＩＮ’Ｍではほぼ完全に抑制した。

（ｉ）実験方法 雄性ｗｉｓｔａｒラット（体重２５０〜３００ｇ）をベ
ンドパルビタール麻酔下に用いた。右頚動脈に挿入した
カニユーレより血圧を測定した。エンドセリン−↓０，
３　ｎ　ｍｏｌ／　ｋｇを静注投与し血圧に対する作用
を調べた。１時間後にｍＡｂ　　１０ｎｍｏｌ／ｋｇを
静注投与して１分後にエンドセリン−１を同用量静注投
与し血圧に対する作用を調べた。

（ｉｔ）実験結果 昇圧　　　　３３．４±１０．４　　９．９±２．６（
ｎ−４） ｍ　Ａ　ｂはエンドセリンーエの降圧および昇圧反応を
それぞれ８７．０および７０．４％抑制し、拮抗作用を
有することが明らかとなった。

（ｉ）実験方法 雄性Ｗｉｓｔａｒラット（体重２６０〜３１５ｇ）を用
いた。ベンドパルビタール麻酔後、人工呼吸下に開胸し
、左冠状動脈前下行技（ＬＡＤ）を１時間結紮した後、
血流を再開した。覚醒下に保ち、再潅流２４時間後に心
臓を摘出し、トリフェニルテトラゾリウムクロライド染
色し、梗塞巣を秤量した。ｍＡｂは冠動脈結紮および再
潅流の５分前、再潅流後１時間毎に５回、計７回を１０
および３０ｎｍｏｌ／ｋｇの用量で静脈内投与した。対
照群には生理食塩水およびＩｇＧ１．にを投与した。

（ｉｆ）実験結果 次表にまとめて示す。

対照群　　　　　　ｍＡｂ群 生理食塩水　Ｉ　ｇＧ　１．　に１０　　３０（ｎ　ｍ
ｏｌ／　ｋｇ）３４．８　　　３２．２　　　２７，１
　　　　２０．０±３．０（８）　　　上１゜８（５）
　　　上２゜４（１１）　　　上１゜２（６）数値は左
心室重量当りの梗塞巣の大きさ（％）（）内数字は実験
例数。

ｍＡｂは用量依存性に虚血−再潅流時の心筋梗塞巣の大
きさを縮小した。虚血−再潅流時の心筋梗塞巣の進展に
エンドセリン−１が関与していることが示唆される。

（ｊ）実験方法 雄性Ｗｉｓｔｅｒラット（体重２５０〜３３０　ｇ　）
を用いた。

ベンドパルビタール麻酔後、人工呼吸下に開胸し、左冠
状動脈前下行枝を１時間結紮した後、血流を再開した。

覚醒下に保ち、再潅流２４時間後に、再び動物を麻酔し
た後、腹部大動脈より血液をまた心臓を摘出し、それぞ
れエンドセリン−１’ａ’量を測定した。無処理群およ
びＬＡＤ結紮を行なわせなかったＳｈａｍ群についても
エンドセリン−１の含量を測定した。

（ｉｉ）実験結果 結果を次表に示す。

無処理群　Ｓｈａｍ群　　虚血−再潅流群数字は平均値
上標準誤差（ｎ＝４） エンドセリンは正常ラットの血中に１．０８ｐｇ／ｍｆ
ｉ、また心筋組織中に４．８ｐｇ／ｇの濃度で存在する
ことが明らかとなった。手術侵襲によっては組織あるい
は全血中のエンドセリン−１含量には変化がなく、冠動
脈の結紮−再潅流により梗塞部を含む心筋組織中でのみ
エンドセリン−１の濃度の増加がみとめられたことは、
心筋梗塞の進展にエンドセリン−１が深く関与している
ことを示すものである。

又１す１監 本発明の抗体は種々の動物の冠動脈標本においてエンド
セリンによる収縮あるいは細胞障害を抑制し、さらにラ
ット心臓における虚血／再潅流モデルにおいて心筋梗塞
巣の縮小作用あるいは心機能障害を改善する作用が認め
られた。

したがって１本発明の予防・治療剤はヒトなどの哺乳動
物における虚血性心疾患（例えば狭心症、心筋梗塞など
の諸疾患）などの予防・治療剤として有用である。

代理人　大多和　明敏 代理人　大多和　暁子

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. （１）エンドセリンの活性を抑制する抗体を含有するこ
   とを特徴とする虚血性心疾患の予防・治療剤。
2. （２）エンドセリンが ＣｙｓＳｅｒＣｙｓＳｅｒＳｅｒＬｅｕＭｅｔＡｓｐＬ
   ｙｓＧｌｕＣｙｓＶａｌＴｙｒＰｈｅＣｙｓＨｉｓＬｅ
   ｕＡｓｐＩｌｅＩｌｅＴｒｐのアミノ酸配列を有するエ
   ンドセリン−１である、請求項１記載の虚血性心疾患の
   予防・治療剤。
3. （３）エンドセリンが ＣｙｓＳｅｒＣｙｓＳｅｒＳｅｒＴｒｐＬｅｕＡｓｐＬ
   ｙｓＧｌｕＣｙｓＶａｌＴｙｒＰｈｅＣｙｓＨｉｓＬｅ
   ｕＡｓｐＩｌｅＩｌｅＴｒｐのアミノ酸配列を有するエ
   ンドセリン−２である、請求項１記載の虚血性心疾患の
   予防・治療剤。
4. （４）エンドセリンが ＣｙｓＴｈｒＣｙｓＰｈｅＴｈｒＴｙｒＬｙｓＡｓｐＬ
   ｙｓＧｌｕＣｙｓＶａｌＴｙｒＴｙｒＣｙｓＨｉｓＬｅ
   ｕＡｓｐＩｌｅＩｌｅＴｒｐのアミノ酸配列を有するエ
   ンドセリン−３である、請求項１記載の虚血性心疾患の
   予防・治療剤。
5. （５）エンドセリンが ＣｙｓＳｅｒＣｙｓＳｅｒＳｅｒＬｅｕＭｅｔＡｓｐＬ
   ｙｓＧｌｕＣｙｓＶａｌＴｙｒＰｈｅＣｙｓＨｉｓＬｅ
   ｕＡｓｐＩｌｅＩｌｅＴｒｐＶａｌＡｓｎＴｈｒＰｒｏ
   ＧｌｕＨｉｓＶａｌＶａｌＰｒｏＴｙｒＧｌｙＬｅｕＧ
   ｌｙＳｅｒＰｒｏＡｒｇＳｅｒ のアミノ酸配列を有するヒトビッグエンドセリン−１で
   ある、請求項１記載の虚血性心疾患の予防・治療剤。
6. （６）抗体がエンドセリン（エンドセリン−３を除く）
   のＮ端部位 ＣｙｓＳｅｒＣｙｓＳｅｒＳｅｒＬｅｕＭｅｔＡｓｐＬ
   ｙｓＧｌｕＣｙｓＶａｌＴｙｒＰｈｅＣｙｓあるいは ＣｙｓＳｅｒＣｙｓＳｅｒＳｅｒＴｒｐＬｅｕＡｓｐＬ
   ｙｓＧｌｕＣｙｓＶａｌＴｙｒＰｈｅＣｙｓ を認識する抗体であることを特徴とする請求項１記載の
   虚血性心疾患の予防・治療剤。
7. （７）抗体がエンドセリン−１、エンドセリン−２、お
   よびエンドセリン−３のＣ端部位ＣｙｓＨｉｓＬｅｕＡ
   ｓｐＩｌｅＩｌｅＴｒｐを認識する抗体であることを特
   徴とする請求項１記載の虚血性心疾患の予防・治療剤。
8. （８）抗体がマウスモノクローナル抗体ＡｗＥＴＮ４０
   ａかあるいは、その抗原結合部位を含む一部分であるこ
   とを特徴とする請求項１記載の虚血性心疾患の予防・治
   療剤。