JPH03118395A - 新規なトリペプチド、その中間体、それらの製造法及び抗アレルギー剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、新規なトリペプチド、その中間体、それらの
製造法及び抗アレルギー剤に関する。

［従来の技術］ 各種アレルギー疾患の予防及び治療のために種々の薬物
が提案され、開発が行われ、既にいくつかが市販に供さ
れている。

アレルギー症状のうち、即時型アレルギー反応である気
管支喘息、じん麻疹、アレルギー性鼻炎などはＩ型アレ
ルギー反応として分類される。このＩ型アレルギー反応
は、発症機序および抗アレルギー剤の作用機序から一般
に次の三段階がら成るものと考えられている。すなわち
、最初体内に侵入した外来性抗原に対して、マクロファ
ージ、Ｔ細胞及びＢ細胞の相互作用によってＩｇＥ抗体
が産生され、このＩｇＥ抗体が組織の肥満細胞や＋１＋
川の好塩基球のＦｃレセプターに固着して感作が成立す
ることになる。この過程が第１段階である。つぎに、再
び外来抗原が体内に侵入すると、細胞のＦｃレセプター
に固着したＩｇＥ抗体と外来性抗原が結合し、抗原抗体
反応が引き金となって細胞膜酵素の活性化、細胞内への
カルシウムイオンの流入などが起こり、それによって酵
素反応などの生化学的変化、脱顆粒などの組織学的変化
が引き起こされる。その結果、ヒスタミンや５Ｒ５−Ａ
などのケミカルメデイエータ−（化学伝達物質）が細胞
外へ遊離される。この過程が第２段階である。上記、第
２段階で細胞外に遊力１したケミカルメデイエータ−は
、平滑筋の収縮、毛細血管透過性の亢進及び粘液の分泌
を促進し、種々のアレルギー症状を惹起する。この過程
が第３段階である。

従来から知られている抗アレルギー剤のうち、非特異的
減感作療法剤及び抗体産生抑制剤は第１段階に作用する
薬物である。しかし、この第１段階のみに特異的に作用
する薬物は市販されていない。第２段階に作用する薬物
としては、クロモグリク酸すトリウム（以下、ＤＳＣＧ
と略す）、！・ラニラストなどのケミカルメデイエータ
−抑制剤がある。また抗ヒスタミン剤及び気管支拡張剤
は第３段階に作用する薬物である。更に特公昭Ｇｏ−２
３１８号公報には抗アレルギー性ペプチドについての開
示がなされている。

」二記公報によればこのペプチドは下記の一次構造式 ％式％ によって示されるように、ＩｇＥ抗体のＦｃ領域のアミ
ノ酸残基５個から成るＩｇＥ抗体由来のペンタペ　− ブチドである。

このペプチドは第１段階のＩｇＥ抗体産生を抑制する作
用は確認されていないが、第２段階の最初に起こる肥ｊ
：ｌ＋細胞へのＩｇＥ抗体の結合をｔ！１１　＋１：す
ると共に、第２段階の既に結合したＩｇＥ抗体をこのペ
プチドで置換することによって、アレルギーを遮断する
性質をもつものと考えられる。

［発明が解決しようとする課題］ 従来の抗アレルギー剤の開発は、上記のアレルギー症状
発症の３つの段階のうちの１つの段階に作用する薬物の
開発に向けられ、この３つの段階の連鎖をいずれかの段
階で遮断することによってアレルギー症状発症を予防し
、又は治療する療法の研究が行われてきた。そしてこの
ような研究によるアレルギー症状発症の３つの段階のう
ちの１つの段階に作用する薬物の開発によって一応の効
果が期待される療法が開発されている。

しかしながら、既知のこうした化学療法剤は」二記の３
つの段階の連鎖を完全に遮断するものではない。そのた
め、３つの段階の１つに作用する薬剤と他の１つに作用
する薬剤とを紺み合わせて用いることによって、連鎖の
遮断を完全なものとする発想のものに複数個の薬剤を組
み合わせて使用することも行われているが、ぞの効果は
必ず【７も期待通りのものではない。

そこで、単一の薬剤で」１記のアレルギー症状発症の３
つの段階のうちの複数の段階に作用しうる薬剤が開発さ
れた場合には、抗アレルギー剤としての効果が飛躍的に
増大されうることが期待され、このような薬剤の開発が
望まれているのである。

また上記のアレルギー症状発症のメカニズムから、Ｉｇ
Ｅ抗体のＦｃ領域由来のペプチド又はそれと類似するペ
プチドを開発することによって優れたアレルギー剤が人
手できるｉ１Ｊ能性も考えられ、このようなアプローチ
からの新規なペプチドの開発も期待されていたのである
。

本発明は、ＩｇＥ抗体のＦｃ領域のペプチド部分又はそ
の類似ペプチドを種々合成し、優れた薬理？（ζ性をも
つ抗アレルギー性ペプチドを提供することを目的とする
。

［課題を解決するための手段］ 」二足目的を達成するため、本発明者らはＩｇＥ抗体の
Ｆｃ領域にみられるーＡｓｐ−Ｓｅｒ−の結合に着目し
、従来液相法では困難とされたーＡｓｐ−Ｓｅｒ−を有
すペプチド又はその誘導体を副反応を抑えながら収率良
く合成する方法を見出し、種々の〜Ａｓｐ−Ｓｅｒ−結
合を含むオリゴペプチドを合成して、その抗アレルギー
活性を検討した結果、Ｈ−Ａｓｐ−８ｅｒ−Ａｓｐ−Ｏ
Ｈで表わされるトリペプチドがヒスタミン遊離を抑制す
るとともにＩｇＥ抗体産生を抑制することを見出し、本
発明を完成した。

すなわち本発明は、 （１）次の式（Ｉ） ＩＩ−Ａｓｐ−５ｅｒ−Ａｓｐ−ＯＨ（Ｉ　）（ただし
、ＡｓｐはＬ−アスパラギン酸残Ｌ　ＳｅｒはＬセリン
残基を示す）で表されるトリペプチド又はその薬学的に
許容される塩。

（２）次の式ＣＩＩ　） Ｚ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｓｅｒ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）
　　（］ＩＩ）（ただし、ＡｓｐはＬ−アスパラギン酸
残基、ｓｅｒはＬセリン残基、Ｚはベンジルオキシカル
ボニル基、Ｂｚｌはベンジルノ、（を示ず）で表される
Ｌ−アスパラギン酸−Ｌ−セリン−Ｌ−アスパラギン酸
誘導体。

（３）次の式（Ｉｌｌ　） ％式％） （ただし、ＳｅｒはＬ−セリン残基、ＡｓｐはＬ−アス
パラギン酸残基、Ｂｏｃはｔ−ブチルオキシカルボニル
基、Ｂｚｌはベンジル基を示す）で表されるＬ−セリン
ーＬ−アスパラギン酸誘導体。

（４）　Ｂｏｃ−５ｅｒ−ＯＨ（ただし、ＳｅｒはＬ−
セリン残、２Ｈ、Ｂｏｃはｔ−ブチルオキシカルボニル
基を示す）で表されるＬ−セリン誘導体とＩＩ−Ａｓｐ
（ＯＢｚｌ）−ＯＨｚｌ　（ただし、ＡｓｐはＬ−アス
パラギン酸残基、Ｂｚｌはベンジル基を示すンで表され
るＬ−アスパラギン酸誘導体を、脱水縮合さＵｏてＢｏ
ｃ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−０８ｚｌとし、次い
で酸でＢｏｃ基を外し、これにＺ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）
−ＯＨで表されるＬ−アスパラギン酸誘導体を加え、脱
水縮合させ、次いで接触還元することを特徴とする」１
記（１）のｌｌ−Ａｓｐ−８ｅｒ−Ａｓｐ−Ｏｌｌの製
造法。

（５）　Ｂｏｃ−５ｅｒ−ＯＨ（ただし、ＳｅｒはＬ−
セリン残基、Ｂｏｃはｔ−ブチルオキシカルボニル基を
示す）で表されるＬ−セリン誘導体とＨ−Ａｓｐ（ＯＢ
ｚｌ）−ＯＢｚｌ　（ただし、ＡｓｐはＬ−アスパラギ
ン酸残基、Ｂｚｌはベンジル基を示す）で表されるＬ−
アスパラギン酸誘導体を、脱水縮合させてＢｏｃ−Ｓｅ
ｒ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＢｚｌとし、次いで酸でＢ
ｏｃ基を外し、これにＺ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨで
表されるＬ−アスパラギン酸誘導体を加え、脱水縮合さ
せることを特徴とする」１記（２）のＺ−Ａｓｐ（ＯＢ
ｚｌ）−Ｓｅｒ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＢｚｌの製造
法。

（６）　Ｂｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨ（ただし、ＳｅｒはＬ−
セリン残基、Ｂｏｃはｔ−ブチルオキシカルボニル基を
示す）で表されるＬ−セリン誘導体とｌｌ−Ａｓｐ（Ｏ
Ｂｚｌ）−ＯＢｚｌ　（ただし、ＡｓｐはＬ−アスパラ
ギン酸残基、Ｂｚｌはベンジル基を示す９で表されるＬ
−アスパラギン酸誘導体を、脱水縮合させることを特徴
とする」１記（３）のＢｏｃ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ（ＯＢｚ
ｌ）−ＯＢｚｌの製造法。

（７）」１記（１）のペプチド又はその薬学的にｉ／ｌ
容される塩をイＩ効成分として含打する抗アレルギー剤
。

に関するものである。

０ 本発明のＩｆ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−ＯＨで表され
るトリペプチドの薬学的に８′１容される塩としては、
ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩及びカル
シウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩のよ
うな金属塩、アンモニウム塩、有機塩基類、有機酸塩、
無機酸塩等が挙げられる。

本発明のＺ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｓｅｒ−Ａｓｐ（Ｏ
Ｂｚｌ）で表されるＬ−アスパラギン酸−Ｌ−セリン−
Ｌ−アスパラギン酸誘導体はｌｌ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａ
ｓｐ−ＯＨで表されるトリペプチドの中間体である。

本発明のＢｏｃ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨｚ
ｌで表わされるＬ−セリンーＬ−アスパラギン誘導体は
Ｚ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−５ｅｒ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）
−ＯＢｚｌで表されるＬ−アスパラギン酸し−セリン−
Ｌ−アスパラギン酸誘導体の中間体である。

本発明の式〔１〕で表されるトリペプチドＨ−Ａ　Ｓ　
Ｉ）Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｏｌｌは下記の第１〜４の工程を
紅で製造することができる。

以’ｍ：、ｉ；：′ １ 第１の工程： 第２の工程： Ｂｏｃ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ） 第３の工程： ＯＢｚｌ−”Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）ＯＢｚｌ 第４の工程： Ｚ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｓｅｒ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）
−ＯＢｚｌ−＋Ｈ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−ＯＨただ
しＡｓｐ、　Ｓｅｒ、　ＢｏｃＸＺ及びｌ１ｚｌは」１
記と同じで次の意味を表わす。

Ａｓｐ　：　Ｌ−アスパラギン酸残基 Ｓｅｒ　：　Ｌ−セリン残基 Ｂｏｃ　：　ｔ−ブチルオキシカルボニルＺ：ベンジル
オキシ力ルボニル ２ Ｂｚｌ　：ベンジル 第１の工程で用いるα−アミノ基をＢｏｃ基で保護した
セリン誘導体Ｂｏｃ−Ｓｅｒ−Ｏ１１及びα−カルボキ
シル基もβ−カルボキシル基もノ１にベンジルエテルで
保護したアスパラギン酸誘導体Ｈ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）
ＯＢｚｌはＬ体のものを用いる。これらは遊離形又は塩
の形のものが市販されており、容易に人手できる。

Ｂｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨとＨ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＢ
ｚｌの脱水縮合反応は次のようにして行なうことかでき
る。Ｂｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨをジメチルホルムアミド、テ
トラヒドロフラン、塩化メヂレン、アセトニトリル 媒（混合溶媒でもよい）に溶かし、０℃以下、好ましく
は一８℃以下、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨに対しモル比で１
、０〜１．’！（ニアｆｔのジシクロヘキシルカルボジ
イミド（以下ＤＣＣと略す）及び１−ヒドロキシベンツ
トリアゾール（以下１１０Ｂｔと略す）を加えて撹拌し
、Ｂ□Ｃ−Ｓｅｒ−０１（に対して等モルのＩｌ−Ａｓ
ｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＢｚｌを加え、０℃以下、好ましく
は一８℃以下、１〜１０時間、好ましくは４〜６時間撹
拌する。引き続き室３ 温で１〜１０時間、好ましくは４〜６時間撹拌する。

この段階で温度を初めに０℃以下とするのは副生物（ア
シルイソ尿素）の生成を抑えるためであり、次いで温度
を室温とするのはペプチド結合の形成を促進させるため
である。

反応により生成する副生物及び未反応の原料を濾過、ア
ルカリ洗浄等の適当な方法で除き、溶媒は減圧蒸発等の
方法で除いたのち、再結晶等により、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ−
Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＢｚｌを得る。

第２の工程で、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−
ＯＢｚｌから、Ｂｏｃ基を外すために用いる酸としては
トリフルオロ酢酸（以下、ＴＦＡと略す）、塩酸、酢酸
、臭化水素酸、ギ酸等がある。これらの酸と共に、アニ
ソール、チオアニソール、フェノール、メタクレゾール
等のカチオン除去剤を加えてもよい。Ｂｏｃ−Ｓｅｒ−
Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨｚｌの１０〜３０倍量（モル
比）のＴＦＡ等の酸と１〜１．３倍量（モル比）のアニ
ソール等のカチオン除去剤を加え、Ｂｏｃ基が外れるま
で撹拌する。反応後、酸及びカチオン除去剤を除くため
エーテル、石油エーテル等の溶媒を加える。

４ 沈殿物をとり、真空乾燥等の適当な方法で乾燥し、Ｈ−
Ｓｅｒ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＢｚｌを得る。

第３の工程で、反応に用いる原料の一つ、βカルボキシ
ル基をＢｚｌで保護したアスパラギン酸誘導体Ｚ−Ａｓ
ｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨは１７体のものを用いる。これら
は遊離形又は塩の形のものが市販されており、容易に人
手できる。

Ｚ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨとｔｌ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ
（ＯＢｚｌ）−ＯＢｚｌの脱水縮合反応は次のようにし
て行なうことができる。

Ｚ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨをジメチルホルムアミド
等の極性の大きい溶媒に溶かし、０℃以下、好ましくは
一８℃以下、Ｚ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨに対しモル
比で１．０〜１．４倍■のＤＣＣ及びＨＯＢｔを加え、
１〜ｌＯ時間、好ましくは４〜６時間撹拌する。次いで
、第２の工程で得たｌｌ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）
−ＯＢｚｌをＺ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨに対して等
モルとり、ジメチルホルムアミド等の溶媒に溶かして加
え、更に１０℃以下で１〜２４時間撹けする。この反応
を１０℃以下で行うのはＡｓｐ−Ｓｅｒのあいだで起こ
る副反応（イミド体の生成）を抑えるためである。

反応終了後、副生物及び未反応の原料の除去は第１の工
程と同様に行い、再結晶等によりＺ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ
）−Ｓｅｒ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＢｚｌを得る。

第４の工程では、第３の工程で得たＺ−Ａｓｐ（ＯＢｚ
ｌ）−Ｓｅｒ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＢｚｌを接触還
元により保護基を外して目的とするトリペプチドＨ−Ａ
ｓｐ−Ｓｅｒ−ＡｓｐＯＨを得る。触媒として、Ｐｄ黒
や炭素粉末を担体としたＰｄ炭素触媒等を用い、Ｚ−Ａ
ｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｓｅｒ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＢ
ｚｌを、例えばメタノール、酢酸、水の混液等の溶媒に
溶かし、水素ガスを通じ撹拌すればよい。

反応終了後、触媒をろ過により除く。ろ液は液が少量に
なるまで減圧濃縮し、エーテル等の有機溶媒を加えて振
り混ぜ、未反応の原料及び不純物等を除く。水層から、
ゲルクロマトグラフィー等の通常の精製手段により、精
製されたｌｌ−Ａｓｐ−ＳｅｒＡｓｐ−Ｏｌｌを得る。

式（１）で表されるトリペプチドの薬学的に許容される
塩は、上記第４の工程において保護基を外したのちに、
水酸化すトリウム、水酸化カリウ６ ム等の塩基又は塩酸、酢酸等の酸を加え、相当する塩と
することもできるし、式（１）で表されるトリペプチド
を単離したのち、」１記と同様に塩基又は酸を加えて、
塩とすることもできる。

本発明物質の構造、純度の確認はＨＸ’５速液体クロマ
トグラフィー、元素分析、アミノ酸分析等により行う。

本発明の抗アレルギー剤は製薬的にｉｊ１容される担体
又は希釈剤と本化合物又は医薬品として許容されるその
塩からなる製剤を包含する。塩の好ましい例はすトリウ
ム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩及びカルシウム塩
、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩のような金属
塩、アンモニウム塩、有機塩基類、有機酸塩、無機酸塩
等が挙げられる。本製剤は、患者への投薬後、活性成分
が迅速に、持続的にまたは遅延的に遊離するように製剤
化することができる。

本発明の抗アレルギー剤は経１コ的又は非経口的に投与
するための形態を適宜に採り得る。代表的な投与方法と
しては経口、直腸、皮層透過、皮下、１７ 静脈内、筋肉内、吸入または鼻腔的経路を含む種々の経
路により投与することができる。

これらの段り方法では、本発明の抗アレルギー剤は種々
の薬学的製剤の形態で投与されうる。これらの薬学的製
剤の形態としては、錠剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤
、顆粒剤、散剤、トローチ剤、坐剤、シロップ剤、クリ
ーム剤、軟膏剤、ノ１ツブ剤、注射剤、懸澗剤、吸入剤
、エアロゾール剤などがある。また他の抗アレルギー剤
、その他の医薬と共に二重層錠、多重層錠などとするこ
ともできる。さらに錠剤の場合には必要に応じて通常の
剤皮を施し、例えば糖衣錠、腸溶被錠とすることもでき
る。

錠剤、顆粒剤、散剤などの固体製剤とする場合は、製剤
化に当って公知の添加剤、例えば乳糖、ショ糖、ブドウ
糖、結晶セルロース、コーンスターチ、リン酸カルシウ
ム、ソルビトール、グリシン、カルボキシメチルセルロ
ース、ヒドロキシプロピルセルロース、アラビアゴム、
ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、ステ
アリンｔＳ 酸マグネシウム、タルク等を添加することができる。

半固体製剤とする場合は、植物性ワ・ソクス、ミクロク
リスタリンワックス、脂肪例えばタローラノリンなどの
祠料を添加することができる。

液体製剤とする場合は、添加剤、例えば塩化すトリウム
、ソルビト−ル、グリセリン、オリーブ油、アーモンド
油、プロピレングリコール、エチレングリコール、エチ
ルアルコールなどの月利を添加することができる。

式（１）で表されるペプチドの段勺量は、患者の年令、
体重、症状などにより適宜増減することができるが、経
Ｉ」投与の場合の投与ｌｉｔは１１」当たり０．０１〜
１０ｍｇ／ｋｇ、　ｍ腔内では１回の段！ｙ、　：ｌＨ
ｌは０１〜１００ｍｇである。非経口投与の場合の量は
１「１当たりｌＯ〜１，０００μｇ／ｋｇである。

［実施例］ 以下に記載する実施例によって本発明を具体的に説明す
る。

実施例１ Ｂｏｃ−８ｅｒ−Ａｓ　（ＯＢｚｌ）−ＯＢｚｌの　造
＋１−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＢｚｌ・ＴｏｓＯＩＩ　
［ツバ・バイオケム（Ｎｏｖａ　Ｂｉｏｃｈｅｍ）社製
コ４．８６ｇをジメチルホルムアミド（以下、ＤＭＦと
略す）　２５ｍ１に溶解し、水冷下トリエチルアミン１
．４ｍｌを加え中和したのち、ＢｏｃＳｅｒ−ＯＨ（国
産化学製）　２．０５ｇ、ｌｌ０Ｂｔ　（国産化学製）
１．６２ｇ及びＤＣＣ（国産化学製）　２．４７ｇを加
えて８時間撹拌した。副生物のジシクロヘキシル尿素を
ろ過により除去後、酢酸エチルを加え、順次８ｗｔ％炭
酸すトリウム、飽和食塩水、８ｗｔ％クエン酸、そして
飽和食塩水で洗浄した。酢酸エチル層を無水硫酸すトリ
ウムで乾燥後、溶媒を留去し、石油エーテルから結晶化
してＢｏｃ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−０Ｂｚ１３
．６５ｇ　（収率７３％）を得た。

融点：１０９〜ｌ　１１　’Ｃ ［α］　２６：　−１６，１”　１ｃ＝１．０、ＤＭＦ
）し 薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：　０．７１０ 元素分析値：　（Ｃ２６１１３２Ｎ２０８として）（％
）ＣＩＩ　　　　　　Ｎ 理論値：　　６２．３９　　６．４４　　５．６０実測
値：　　［ｉ２，３９　　６．（ｉ２　　５．６７酸分
解後のアミノ酸分析値：　（モル比）アスパラギン酸　
　１．０ セリン　　　　　１．０ なお、薄層クロマトグラフィーはプレートとしてシリカ
ゲル６０（メルク社製）を用い、展開溶媒はクロロホル
ム／メタノール／水（容量比で８＝３：１）混液で行っ
た。

実施例２ Ｚ−Ａｓ　（ＯＢｚｌ）−５ｅｒ−Ａｓ　（ＯＢｚｌ）
−ＯＢｚｌの　造実施例１で得たＢｏｃ−８ｃｒ−Ａｓ
ｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＢｚｌ　２．Ｏｇにアニソール０．
５ｍｌ及びＴＦＡ５ｍｌを加えて溶かし、室温で１時間
撹拌しｌ１ｏｃノ！を切断した。エーテル／石油エーテ
ル混合溶液（容ｈｌ比１　：　１　）　１００ｍ１を加
え沈澱させたのち、残渣［Ｈ−５ｅｒ−Ａｓｐ（ＯＢｚ
ｌ）−ＯＢｚｌ・ＴＦＡ　］を水酸化すトリウムを含む
デシケータ−で吸引乾燥した。別にＺ−Ａｓｐ（ＯＢｚ
ｌ）−ＯＨ（国産化１１ 学制）　１．５７ｇ、　１１０ＢｔＯ，６５ｇ及びＤＣ
Ｃｏ、９９ｇをとり、ＤＭＦ５ｍｌに溶解し、水冷下３
時間撹拌し、次いで先のＨ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ
）−ＯＢｚｌ・ＴＦＡのトリエチルアミン０　、６３ｍ
１を含むＤＭＦ　（１０ｍｌ）溶液を加え、４℃で一晩
撹拌した。

ジシクロヘキシル尿素をろ過で除去後、酢酸エチルを加
え、次いで８ｗｔ％ＮａｚＣＯ３、飽和食塩水、０、Ｉ
Ｎ　ｌｌＣｌ及び飽和食塩水で順次洗浄した。酢酸エチ
ル層を無水流酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を留去した。

エーテルから結晶化し、更に酢酸エチル／エーテルから
再結晶してＺ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｓｅｒ−Ａｓｐ（
ＯＢｚｌ）−ＯＢｚｌの精製結晶１．９９ｇ　（収率６
８％）を得た。

融点：１０８〜１１０℃ ［αコ　２６　　：　　−１１，７°　（ｃ＝０．７６
、ＤＭＦ）薄層クロマトグラフィーのＲｆ値＋　０．８
２元素分析値：　（Ｃ４ＯＨ４１Ｎ３ＯＨとして）ＣＩ
Ｉ　　　　Ｎ 理論値：　　６４．９４　　５，５９　　５．６８実測
値：　　６４．７７　　５．７３　　５．７８酸分解後
のアミノ酸分析値：　（モル比）（％） ２２ アスパラギン酸　　２．０ セリン　　　　　０９ なお、薄層クロマ１−グラフィーは実施例１と同様に行
なった。

実施例３ ＩＩ−Ａｓ　−Ｓｅｒ−Ａｓ　−ＯＨのり゛１造実施例
２で得たＺ−Ａｓｐ（Ｏ１’１ｚｌ）−Ｓｅｒ−Ａｓｐ
（ＯＢｚｌ）−ＯＢｚｌ　４００ｍｇにメタノール１０
ｍ１．酢酸４ｍｌ、及び水６ｍｌを加えて溶かし、５％
Ｐｄ−炭素４００ｍｇを加え、水素ガスを５時間通じ、
すべての保設基を切断した。Ｐｄ−炭素をろ過により除
去し、ろ液に水を加え、溶媒を減圧下で留去し、エーテ
ルで洗浄した。

再び水を加え、約２ｍｌに減圧濃縮したのち、セファデ
ックスＧ−１０（ファルマシア社製、２．５Ｘ４２ｃｍ
）カラムにかけ、０．５ｗｔ％ｌｌ１１酸水溶液で展開
し、フラクション４ｍｌづつ分取した。２３〜２８番目
のフラグジョンに単一性のピークを認め、この部分を集
め凍結乾燥し、トリペプチドｌｔ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａ
ｓｐ−ＯＨ１６６，３ｍｇ　（収率９２％）を得た。

［α］　２’　：　−８，６°　（ｃ＝０　、１６、＋
１２０）３ 薄層クロマトグラフィーのＲｆ値＝０５１高速Ｈｋ休ク
ロマトグラフィー：第１図元素分析値： （Ｃ＋＋　１１１７　Ｎ３０９・ｌ／２　Ｃ１１３Ｃ０
ＯＨ・２ｔ１２０として）（％） ＣＩＩ　　　　　Ｎ 理論値：　　３６．０９　　５．８０　１０．５２実測
値：　　３５．７８　　５．４４　１０．７５酸分解後
のアミノ酸分析値：　（モル比）アスパラギン酸　　２
．０ セリン　　　　　０．９５ なお、薄層クロマトグラフィーは、展開溶媒をｎ−ブタ
ノール／ピリジン／酢酸／水（容量比で１＝１　：　１
　：　１）混液としたほかは実施例２と同様に行った。

また高速液体クロマトグラフィーはウォーターズ社の高
速液体クロマトグラフィー装置Ｍ６００型で、カラムと
してＭＭＣパックＡ−３０２０ＤＳ（山村化学研究新製
、４．６　Ｘ　１５０ｍｍ）を用い、溶媒は０．０５％
ＴＦＡを含む水溶液と０．０５％ＴＦＡを含むアセトニ
トリルの９５：５　（容１＋ｔ　１ｔ、　）混合液、続
いて７０：３０　（容４ 量比）混合液を段階的に用い、流速は０．５ｍｌ／ｍｉ
ｎ、検出波長２ＺＯｍｍ　テ（ｊ　ッた。

次に式（１）で表されるトリペプチドＩｆ−ＡｓｐＳｅ
ｒ−Ａｓｐ−ＯＨの薬理活性試験の結果を示す。

体重３００〜３５０ｇのｋｉｆ性ウィつター系ラッうを
受動感作し、その腹腔内肥満細胞を用いて試験を行った
。受動感作に用いるラット抗血清はＭｏｔａの方法［１
ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、ニＬ　Ｉ）、６８１　（１９６４
）］およびＨａｍａｏｋａの方法　［Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇｙ、　１１３　　ｐ、９５８　（１９７４）］に
準じて作製した。すなわち、卵白アルブミン（１０ｍｇ
／ｋｇ）をウィスター系雄ラット（体重２００〜２５０
ｇ）の両大腿部筋肉内に５ｍｌ／ｋｇを注射し、同時に
２　ＸｌｏＩＯ個の百日咳死菌（Ｋｉｌｌｅｄ　Ｂｏｒ
ｄｅｔｅｌｌａｒ’ｅｒｔｕｓｓｉｓ　）を腹腔内に段
！ｊして免疫した。初回感作から１２１コ目にエーテル
麻酔下に腹部大動脈から採血し、抗血清を分ｇｉ：　し
た。抗血清は一２０℃で凍結保存した。抗血清の力価は
４８ｈｒラッ１−ＰＣＡ反応により測定し、その力価が
１２８〜２５６Ｇ’ｒ、のものを５ 実験に供した。得られた卵白アルブミンラットＩｇＥ血
清を２倍希釈し、その１ｍｌを腹腔内に投与して感作し
た。感作４８ｈｒ後にラッＩ・を出血致死させ、腹腔内
にリン酸緩衝化液（ＮａＣ１８ｇ、　ＫＣＩ　Ｏ，２ｇ
、　ＮａｚｔｌＰ０４・１２１１ｚ０２．８８ｇ、　Ｋ
１１２ＰＯ４０，２ｇ、　ＥＤＴＡ−２Ｎａ　Ｏ，２ｇ
及びウシ血清アルブミン１ｇを精製水に溶かして１リツ
トルとした溶液、ｐＨ７，４、以下ＰＢＳ　（−）と略
記する）１５ｍｌを注入し、約２分間軽く腹部をマッサ
ージ後、開腹して腹腔内細胞を採取した。この細胞浮遊
液を遠心分離（１、００Ｏｒｐｍ　。

１０分間）シ、更にＰＢＳ　（−）で再懸濁し、アラビ
アゴム比重液（比重１．０７５）で重層し、遠心分離（
２，５０Ｏｒｐｍ、　１０分間）した。沈殿した細胞を
ＰＢＳ（−）で２回洗浄し、新たにＰＢＳ（＋）［ＰＢ
Ｓ（−）のうちＥＤＴＡ・２Ｎａに代えてＣａＣｌ２０
．１ｇを添加した溶液、ＰＢＳ（＋）と略記する］に浮
遊さぜ、ｌＸ１０５個／ｍｌに調整した後、シリコンで
処理した試験管にその細胞浮遊液を０．８ｍｌずつ分注
し、３７℃でｌＯ分間プレインキュベ−トシた。細胞浮
遊液を入れた試験管にＰＢＳ　（＋）で希釈した種々の
溶ｉＩｋの検体溶液を０．１ｍｌ添加し、６ ３７℃で１５分間インキュベー１・後、肥満細胞からヒ
スタミンを遊離させるために抗原である卵白アルブミン
（最終濃度１ｍｇ／ｍｌ）とフォスフアジチルＬ−セリ
ン（最終濃度１００μｇ／ｍｇ）の混合溶１ｔｋＯ，１
ｍｌを加え、さらに１５分間インキュベートシてヒスタ
ミンを遊離させた。ただし、比較薬剤の一つのＤＳＣＧ
は抗原添加３０秒前に加え、抗原添加後更に１５分間イ
ンキュベー１・した。水冷したＰＢＳ（＋）１ｍｌを加
え反応を停止させ、２　、５０Ｏｒｐｍで１０分間遠心
分離した。」１清２ｍｌをとり、４ｗ１％過塩素酸溶液
１ｍｌを加え、遊離ヒスタミンＪｉｔを定量する試料と
した。全ヒスタミン量を定量する試料は無処置の肥満細
胞浮遊液（１×１０５個／ｍ１）０．８ｍｌをＩＯ分間
？ＪＢ騰水中に置き、次いで４ｗｔ％過塩素酸を添加し
て、試料とした。

各試料のヒスタミンｈ１は蛍光法により測定し、次式に
より、ヒスタミン遊離率（％）を算出した。

ヒスタミン遊離率（％）− （遊離ヒスタミン量／仝ヒスタミン［１）　Ｘ１００式
［１１で表わされるペプチドと比較薬剤のしス＝２７ クミン遊離率（％）を第２図に示した。第２図から明ら
かなように、式［１］で表わされるペプチドは１０−６
Ｍ以上の濃度で明らかにヒスタミン遊離抑制作用を示し
、その作用は比較薬剤のＩＩ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ
−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨより強＜　、ＤＳＣＧと同程度
又はそれ以上の強さであった。

免疫動物は、Ｉ　ＪＥ７．５匹ノＢＡＬＢ／ｃＡｊ［マ
ｒ’７　ス（６退会）とし、抗原のジニトロフェニルア
スカリス（ＤＮＰ−Ａｓｃａｒｉｓ）　１０　μｇを免
疫増強剤の水酸化アルミニウムゲル４ｍｇに吸着させて
、下記に示す２通りの実験を行った。

一方の実験では式［１］のペプチド１ｍｇ及び１０ｍｇ
を腹腔内に投与し、３０分間後にＤＮＰ−Ａｓｃａｒｉ
ｓと水酸化アルミニウムゲルを腹腔内に投与し、その後
１４目目に採血して血清を得た。

他方の実験ではＤＮＰ−Ａｓｃａｒｉｓと水酸化アルミ
ニウムゲルを腹腔内に投与し、７１３目、１４目目及び
２１目目の計３回、式［Ｉ］のペプチド１ｍｇを腹腔内
２８ に投与し、２８目目に採血して血清をＩＸＩた。

両実験で得られた血清はラットの４８時間ＰＣＡ反応を
行い、抗体価を測定した。

すなわち、Ｗｉｓｔ訂系）１１ラッ１−（２００〜２５
０ｇ）の背部の陵内に血清を感作し、４８時間後に０．
５ｗｔ％エバンスブルーを含むＤＮＰ−Ａｓｃａｒｉｓ
溶液を尾静脈内に注射し、現われる色素斑を３０分後に
測定してＩｇＥ抗体価を求めた。なお、Ｉ’ＣＡ反応で
ｉ−Ｉられた抗体価がＩｇＥ抗体であることを確認する
ために、血清をあらかじめ５６℃で３時間加熱処置した
もので感作し、同様に操作して、ＰＣＡ反応によって抗
体価を測定した。

式［１１のペプチドを１ｍｇ／ｋｇ投すしたときのＩｇ
Ｅ抗体産生■をＰＣＡ反応で求めた抗体価で表わしたも
のが第３図及び第４図である。第３図及び第４図から明
らかなように、式［１］のペプチドはＩｇＥ抗体産生を
強く抑制した。なお、加熱処理血清の抗体価は一方の実
験（第３図の斜線部分）ではほとんどＯであったが、他
方の実験（第４図の斜線部分）では、わずかではあるが
抗体価を示し９ た。

［発明の効果］ 本発明の式（１）で表されるペプチドはヒスタミン遊離
抑制作用とともにＩｇＥ抗体産生抑制作用を示す。本発
明により、抗アレルギー剤として優れた性質をもつ新規
ペプチドを提供することができた。

また、式〔■〕及び式（ＩＩＩ）で表されるペプチド誘
導体は、式（Ｉ）で表されるペプチドを製造する際の中
間体として重要で、この化合物を経由することにより、
式（Ｉ）で表されるペプチドを容易に製造することがで
きた。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明のＨ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−ＯＨの
高速液体クロマトグラムを示す。縦軸は２２０目ｍの紫
外線吸収の強度、横軸は溶出時間（分）である。 第２図は、本発明のｌｌ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｏ
Ｈ及び比較薬剤（ｌ（−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｐｒ
ｏ−Ａｒｇ−Ｏｆ＋及びＤＳＣＧ）のヒスタミン遊離率
（％）を示したグラフである。縦軸はヒスタミン遊離率
（％）、横軸は化合物及び濃０ 度（Ｍ）である。 第３図は、本発明のｌｌ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｏ
ｌｌの前段！ｊによって産生されたＩｇＥ抗体価を示し
たグラフで、ネ１線の部分は加熱処理した血？１１ｔの
抗体価である。 第４図は、ＩｇＥ抗体産生の持続期に本発明のｌｌＡｓ
ｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｏｉｌを段！フした場合に産生さ
れたＩｇＥ抗体価を示したグラフで、斜線の部分は加熱
処理した血清の抗体価である。第３図及び第４図はそれ
ぞれ縦軸に抗体価、横軸に化合物及びその段ＬｊＩｉｔ
（ｍｇ／ｋｇ）を示シテいル。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次の式〔 I 〕 Ｈ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−ＯＨ〔 I 〕 （ただし、ＡｓｐはＬ−アスパラギン酸残基、Ｓｅｒは
   Ｌ−セリン残基を示す）で表されるトリペプチド又はそ
   の薬学的に許容される塩。 ２、次の式〔II〕 Ｚ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｓｅｒ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）
   〔II〕（ただし、ＡｓｐはＬ−アスパラギン酸残基、Ｓ
   ｅｒはＬ−セリン残基、Ｚはベンジルオキシカルボニル
   基、Ｂｚｌはベンジル基を示す）で表されるＬ−アスパ
   ラギン酸−Ｌ−セリン−Ｌ−アスパラギン酸誘導体。 ３、次の式〔III〕 Ｂｏｃ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＢｚｌ〔III
   〕（ただし、ＳｅｒはＬ−セリン残基、ＡｓｐはＬ−ア
   スパラギン酸残基、Ｂｏｃはｔ−ブチルオキシカルボニ
   ル基、Ｂｚｌはベンジル基を示す）で表されるＬ−セリ
   ン−Ｌ−アスパラギン酸誘導体。 ４、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨ（ただし、ＳｅｒはＬ−セリ
   ン残基、Ｂｏｃはｔ−ブチルオキシカルボニル基を示す
   ）で表されるＬ−セリン誘導体とＨ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ
   ）−ＯＢｚｌ（ただし、ＡｓｐはＬ−アスパラギン酸残
   基、Ｂｚｌはベンジル基を示す）で表されるＬ−アスパ
   ラギン酸誘導体を、脱水縮合させてＢｏｃ−Ｓｅｒ−Ａ
   ｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＢｚｌとし、次いで酸でＢｏｃ基
   を外し、これにＺ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨで表され
   るＬ−アスパラギン酸誘導体を加え、脱水縮合させ、次
   いで接触還元することを特徴とする請求項１記載のＨ−
   Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−ＯＨの製造法。 ５、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨ（ただし、ＳｅｒはＬ−セリ
   ン残基、Ｂｏｃはｔ−ブチルオキシカルボニル基を示す
   ）で表されるＬ−セリン誘導体とＨ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ
   ）−ＯＢｚｌ（ただし、ＡｓｐはＬ−アスパラギン酸残
   基、Ｂｚｌはベンジル基を示す）で表されるＬ−アスパ
   ラギン酸誘導体を、脱水縮合させて、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ−
   Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＢｚｌとし、次いで酸でＢｏｃ
   基を外し、これにＺ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨで表さ
   れるＬ−アスパラギン酸誘導体を加え、脱水縮合させる
   ことを特徴とする請求項３記載のＺ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ
   ）−Ｓｅｒ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＢｚｌの製造法。 ６、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨ（ただし、ＳｅｒはＬ−セリ
   ン残基、Ｂｏｃはｔ−ブチルオキシカルボニル基を示す
   ）で表されるＬ−セリン誘導体とＨ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ
   ）−ＯＢｚｌ（ただし、ＡｓｐはＬ−アスパラギン酸残
   基、Ｂｚｌはベンジル基を示す）で表されるＬ−アスパ
   ラギン酸誘導体を、脱水縮合させることを特徴とする請
   求項３記載のＢｏｃ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｏ
   Ｂｚｌの製造法。 ７、請求項１記載のペプチド又はその薬学的に許容され
   る塩を有効成分として含有する抗アレルギー剤。