JPH0250921B2

JPH0250921B2 -

Info

Publication number: JPH0250921B2
Application number: JP56131575A
Authority: JP
Inventors: Shigeru Yamamoto; Yoichi Hashimoto; Yoichi Tsuburaya; Aryasu Shibata
Original assignee: Seikagaku Corp
Current assignee: Seikagaku Corp
Priority date: 1981-08-24
Filing date: 1981-08-24
Publication date: 1990-11-05
Also published as: JPS5834803A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は植物由来の血液型活性物質に関し、更
に詳細には、ヒトABO（Ｈ）式血液型のＨ型活性
物質の提供に関する。ヒトの血液型は、そのヒトの赤血球の型によつ
て示され、型の検定を行う際に用いられる動物の
血清、又は、凝集素、沈降素の種類によつて
ABO（Ｈ）式、Rh式、MN式など多くの方式が
ある。これらの血液型は、輸血、産科、遺伝鑑定
など種種の医学上の問題に関係する重要なもので
ある。種々の血液型標準物質は型の種類を決定する場
合、必要欠くべからざるもので、これらは従来、
ヒト由来の血球、その他の臓器などから精製され
て来た。しかしながら、輸血学、遺伝学、人類
学、産科学、法医学等の領域における検査及び研
究を進める上に必要な型活性物質の供給は、ヒト
の血球、臓器を使用することが人権、道義上の制
約を受けるために不充分であり、検査及び研究が
思うように進展していないのが現状である。本発明者らは血液型活性をもつ物質が動物のみ
ならず植物界にも存在することを知り、通常容易
に栽培することにより多量に入手し得る植物体に
つき血液型活性物質の検索を行つた結果、ダイコ
ン、カブラ、キヤベツ、ナシ、リンゴ、オランダ
イチゴ、ソバ等に血液型Ｈ型活性を認め、これら
の植物の中でもとりわけダイコン、カブラ、キヤ
ベツ等のアブラナ科植物の葉部に強いＨ型活性物
質を初めて見出し本発明に到達した。本発明はダイコン、カブラ、キヤベツ等アブラ
ナ科（十字花科）植物に特に多量に含まれるＨ型
活性を有する血液型活性複合多糖を提供するもの
である。本発明の血液型活性複合多糖の骨格構造を成す
３，６−ガラクタン及びアラビノ−３，６−ガラ
クタンはアカシア類（Acacia）、ライグラス
（Lolium multiflorum）、その他の植物に広く分
布していることが知られているが、これらはＨ型
活性を全く有しない。そのようなアラビノガラク
タンの非還元性末端の一部にα−Ｌ−フコースの
結合しているものは今回初めて見出され、而も、
強い血液型活性を有するＬ−フコシルアラビノガ
ラクタンは全く新規な物質である。本発明のＬ−フコシル−、４−Ｏ−メチルグル
クロニル−、アラビノガラクタンはその骨格構造
を成すアラビノガラクタンが広く植物界に分布す
ることから、各種の植物に存在する可能性が大で
あるが、多くの植物につき抗Ｈ凝集素阻害活性の
検索を行つた結果、かなり限られた植物にのみ高
い阻害活性の現れることが判明した。本発明の血
液型活性を有するフコシル−４−Ｏ−メチルグル
クロニルアラビノガラクタンを容易に大量に与え
る植物体はダイコン（Raphanus Sativus var.
hortensis）、カブラ（Brassica Rapa var.
glabra）、キヤベツ（Brassica oleracea var.
capitata）等のナタネ科植物の葉茎部であり、こ
れらの植物体を水、生理的食塩水、又は緩衝化さ
れた塩類溶液などで室温あるいは加熱し抽出する
ことにより、Ｈ型活性成分を分離することが出来
る。これらの植物体から本発明のＨ型活性を有する
フコシル−、４−Ｏ−メチルグルクロニル−、ア
ラビノガラクタンを単離するには、水性抽出液を
メタノール、エタノール、プロパノール等の低級
アルコールを用いる分別沈殿操作に付すことより
粗型活性物質を得る。次に、得られた粗型活性物
質を通常のデキストラン系、セルロース系、その
他の親水性分子篩剤を用いてゲル過に付すこと
により分離・精製することが出来る。更に精製を
進めるには再度ゲル過を行い、DEAE（ジエチ
ルアミノエチル）セルロースなどの陰イオン交換
体を用いて夾雑する蛋白等のイオン性の高い物質
を除去する。本発明のＨ型活性物質はアブラナ科、タデ科、
バラ科等の植物に含まれるが、抗Ａ−、抗Ｂ−活
性を含まず、高い抗Ｈ活性のみの単一型活性を示
し、アブラナ科の植物、とりわけダイコン、カブ
ラ、キヤベツから採取される。本発明のアブラナ
科植物由来のＨ型活性物質は耐熱性の優れた多糖
であり、100℃、30分間の熱処理でも活性が低減
しない。本発明の粗型活性物質をセフアロース CL−
6B（フアルマシアフアインケミカルス社）を担体
とするカラムクロマトグラフイーを行うとき、２
成分の多糖画分に分離され、それぞれ、いずれも
高いＨ型活性を示し、その構成糖は加水分解物の
ペーパークロマトグラフイーによる分析及び加酢
分解還元物のガスクロマトグラフイーによる分析
により何れもＤ−ガラクトース、Ｌ−アラビノー
ス、４−Ｏ−メチル−Ｄ−グルクロン酸、及びＬ
−フコースから成ることが判明した。本発明を実施例をもとに具体的に説明する。実施例１各種植物葉、茎、果実部等を夫々細切し、１Kg
宛３〜４の14.5mMりん酸緩衝液／生理的食塩
水（PH7.2、0.01％NaN₃を含む）で煮沸して30分
間抽出し、布にて過した。液を冷却後、
3000rpmで遠心分離し、不溶物を除去し、上澄液
を１／３容に濃縮し、これを二分して、夫々にエ
チルアルコール１容及び９容を加え、撹拌後、静
置し、アルコール50％沈渣及び90％沈渣を得た。
これら粗型活性物質の収量、並びに抗凝集活性を
第１表に示す。凝集阻止活性は医化学実験法講座
５巻Ｂ（遺伝生化学）378頁〜380頁等に記載の
一般的な赤血球凝集反応及び同凝集抑制反応の手
法に基づいて、抗Ａ−及び抗Ｂ−ヒト血清は市販
品を用い（日本標準血清）、抗Ｈ凝集素はウナギ
血清を採取分離して用い、抗Ｈ−ニワトリ免疫凝
集素はヒトＯ型血球をニワトリに静注し調製した
ものを使用し、ヒト新鮮Ｏ型赤血球との凝集反応
を阻止するに必要な最少量（mg／ml）で示した。

【表】実施例２実施例１に準じ、ダイコン葉部６Kgをホモジナ
イズし、18の14.5mMりん酸緩衝液／生理的食
塩水（PH7.2、0.01％NaN₃を含む）を用い60℃、
１時間抽出した後、布（100メツシユ）を用い
て過し、液を煮沸した。冷却後、生じた蛋白
質の沈殿を3000rpmで遠心除去し、上澄液を約30
℃で５迄減圧濃縮し、更に限外過膜を用いて
１迄濃縮した。この濃縮液に1.5の98％エタ
ノールを加え撹拌後、一夜静置し、生じた沈殿
（粗Ｈ型活性物質）を遠心分離し、アルコールで
洗浄後、乾燥して９ｇの粗Ｈ型活性物質を得た。この粗Ｈ型活性物質を14.5mMりん酸緩衝液／
生理的食塩水に溶かし、セフアロースCL−6Bカ
ラムにてゲル過を行つた結果を第１図に示す。
第１図によれば、，のヒトＯ血球の抗Ｈウナ
ギ血清による凝集を阻止する活性が、糖質の溶出
画分と一致して得られた。これら，の糖質画
分を分取し、夫々、再びクロマトグラフイーに付
し（第２図及び第３図参照）、活性画分を集めて
更にDEAEセルロースによるクロマトグラフイー
に付して精製し（第４図及び第５図参照）、脱塩、
濃縮、アルコール沈殿及び乾燥を行つた。その結
果、精製多糖，を夫々200mg、150mg得た。第
４図及び第５図における鋭い活性曲線は、Ｈ活性
物質の純度を示している。精製多糖，の赤外線吸収スペクトルは、第
６図及び第７図に示す如く典型的な多糖の性質を
示している。精製多糖，の分子量、比旋光度
（〔α〕_D）及び構成糖のモル比を第２表に示す。構成糖比は加酢分解後還元し、アルデイトール
アセテートとし、Gas−ChromQ3mm×２ｍ、３
％ECNSS−Ｍカラムを用い島津GC−5Aにより
180℃、N₂Gas50ml／min、FID法で検出した。更にこれらの精製血液型活性多糖，をメチ
ル化後分解して構成単糖のメチル化物を質量分析
法等を用いて分析した結果を第３表に示す。これらの結果、及び従来の研究成果を総合する
と、本発明のＨ型活性複合多糖は次のような構造
を持つと考えられる。但し、次式において、Galはガラクトースを、
Araはアラビノースを、Fucはフコースを、４−
Methyl−Glc UAは４−メチルグルクロン酸を
表す。

【表】

【表】【図面の簡単な説明】

第１図は、ダイコン葉抽出液の60％アルコール
沈殿画分のセフアロース6Bによるカラムクロマ
トグラムを示す。第２図は、ダイコンＨ型活性多
糖（第１図におけるフラクシヨン）のセフアロ
ース6Bカラムによる再クロマトグラフイーによ
つて得られたクロマトグラムを示す。第３図は、
ダイコンＨ型活性多糖（第１図におけるフラクシ
ヨン）のセフアロース6Bカラムによる再クロ
マトグラフイーによつて得られたクロマトグラム
を示す。第４図は、ダイコンＨ型活性多糖（第１
図におけるフラクシヨン）のDEAE−セルロー
スによるカラムクロマトグラムを示す。第５図
は、ダイコンＨ型活性多糖（第１図におけるフラ
クシヨン）のDEAE−セルロースによるカラム
クロマトグラムを示す。第１図〜第５図におい
て、●−●は、フエノール−硫酸法による糖量を
吸光度（490nm）によつて表わし、▲―▲は、血
液凝固阻止価（活性）（HAI：
Hemagglutination Inhibition Titre）を表わす。
第６図は、ダイコンＨ型活性多糖の赤外吸収ス
ペクトルを示す。第７図は、ダイコンＨ型活性多
糖の赤外吸収スペクトルを示す。

Claims

【特許請求の範囲】１アブラナ科（十字花科）植物の茎葉部より抽
出し、抽出物を分離精製することを特徴とする、
２−α−Ｌ−フコシル、６−β−Ｄ−４−Ｏ−メ
チルグルクロニル、３−α−Ｌ−アラビノシル、
β−１，３−Ｄ−ガラクタンを部分構造単位とし
て有する血液型活性複合多糖であつて、ゲル過
法による分子量が130000又は74000である血液型
活性複合多糖の製造法。２血液型活性が、抗Ｈ凝集素もしくは抗Ｈ沈降
素を強力に阻止する活性である特許請求の範囲第
１項記載の製造法。