JPH02504284A - 抗原、および、抗イディオタイプ抗体、または抗原に対する細胞受容体に特異的な抗体に共通のアミノ酸配列に由来する免疫原および生物学的活性ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 抗原、および、抗イデイオタイプ抗体、または抗原に対する細胞受容体に特異的 な抗体に共通のアミノ酸配列に由来する免疫原および生物学的活性ペプチド［産 業上の利用分野］ 本発明は、伝染性生物、例えば細菌、真菌、寄生虫。 および、特異的抗原を発現するウィルスおよび新生物に対して噛テし類を免疫感 作するのに有用な作用因に関する。 このような生物には、宿主細胞の、受容体部位とよばれ例である。したがって１ 本発明は、哺乳類細胞の受容体たは挙動を変化させ、またはこれに影響を及ぼし 、あるいは、例えば抗原または病原体など、他の作用因がこれらの細胞に及ぼす はずであった影響を阻止または変化させる生物学的活性物質１例えば調合薬にも 関する。 ［従来の技術］ ウィルス性および細菌性病原に対する、安全かつ効果的なワクチンの開発には、 何種類かの方策が用いられている。現在使用中のワクチンの成分は、その大部分 は生きた弱毒病原体であるが、不活化病原体、病原体の成分。 あるいは変性させた青票（トキソイド）からなるものもある。インスティチュー ト・オブ・〆ディシン（Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）　ｍ、　 　’ワクチンの供給と革新（ＶａｃｃｉｎｅＳｕｐｐｌｙ　ａｎｄ　Ｉｎｎｏｖ ａｔｉｏｎ）　Ｊ　　［ワシントン７４　ｇ’１区句？在、ナショナル・アカデ ミ−・プレス（１９３５年）発行］を参照のこと。これらの製剤は、多数の伝染 病に用いられて好結果を得てはいるものの、このような方針が無力であり、ある いは適用不能である病原体も数多く存在する。 ある種の病原体は、その潜在的危険性があまりにも高いために、弱な製剤、ある いは不活化製剤さえもその使用を企図することができない。ある種のレトロウィ ルスを用いた免疫６作によって癌が発生し、あるいはヒト免疫不全ウィルス（） Ｉｎを用いたｒｑ（乍によって後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を発症するな どの危険性によって、全ウィルスの製剤を予防接種に用いることに伴う短所が強 調されている。更に、病原体の多くは顕著な不均一抗原性を示すということが、 効果的な予防接種を困難にしている。上記の理由から、発明者らは、効果的な予 防接種の代替方法を探求することにしたのである。 イエルネ（Ｎ、　Ｋ、　Ｊｅｒｎｅ）によるイディオタイプ・ネットワーク説〔 「免疫系ネットワーク理論の構築（Ｔｏｗａｒｄｓａ　　Ｎｅｔｗｏｒｋ　　Ｔ ｈｅｏｒｙ　　ｏｆ　　ｔｈｅ　　Ｉｍｍｕｎｅ　　Ｓｙｓｔｅｍ）　　Ｊ　　 　：　　アナールーディミュノロジー（Ａｎｎ、　ｒｍｍｕｎｏｌ、）　、　６ １２５巻（１９７４年）３３７〜３８９ベージ（発行地：パ１月］によ九ば、あ る病原体に特異的な中和抗体に対して作り出さメｔた抗イデイオタイプ抗体は、 免疫学的にはその病原体を模倣するものと解さ沈る。したがって、抗イデイオタ イプを用いた感作は、中和抗体および細胞性免疫の出現を伴う顕著な抗病原体応 答を発現させるはずである。近年になって。 レオウィルス３型などいくっがの例で、このような方策が奏効している。シャー プ（Ａ、　Ｉｌ、　５ｈａｒｐｅ）　、ゴールトン（Ｇ、　Ｎ、　Ｇａｕｌｔｏ ｎ）　、−／グディド（Ｋ、　Ｋ、　ＭｃＤａｄｅ）　。 フィールズ（Ｂ、　Ｎ、　Ｆｉｅｌｄｓ）　、およびグリー７（Ｍ、　Ｉ。 Ｇｒｅｅｎｅ）の論文［「同系モノクローナル抗イデイオタイプはレオウィルス に対する細胞免疫を誘導できる（ＳｙｎｇｅｎｉｃＭｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎ ｔｉｉｄｔｏｔｙｐｅ　Ｃａｎ　Ｉｎｄｕｃｅ　Ｃｅ１ｌｕｌａｒ　Ｉｍｍｕｎ ｉｔｙｔｏ　Ｒｅｏｖｉｒｕｓ）　Ｊ　　：ジャーナル・オブ・エクスペリメン タル・メディシン（Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、）　、第１６０蕃（１９８４年） １９５−２０５ベージ］、カウフマン（Ｒ，Ｓ、　Ｋａｕｆｆｍａｎ）　、ノー ズワージ−（Ｊ、　Ｈ，Ｎｏｓｅｗｏｒｔｈｙ）　、ネポ：／　（Ｊ、　Ｔ。 Ｎｅｐｏｍ）　、フィンバーブ（Ｒ，Ｗ、　Ｆｉｎｂｅｒｇ）　、フィールズ、 およびグリー７の論文［「哺乳類レオウィルス２型に対する細胞受容体：モノク ローナル抗イデイオタイプ抗体は細胞とのウィルスの結合を遮断する（Ｃｅｌｌ 　Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓｆｏｒ　Ｍａｍｍａｌｉａｎ　Ｒｅｏｖｉｒｕｓ　ＩＩ　 ：　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉ−１ｄｉｏｔｙｐｉｃＡｎｔｉｂｏｄｙ　 Ｂｌｏｃｋｓ　Ｖｉｒａｌ　Ｂｉｎｄｉｎｇ　ｔｏ　Ｃｅ１ｌｓ）　Ｊ　　：ジ ャーナル・オブ・イミュノロジ−（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、）　、第１３１巻（ １９８３年）２．５３９〜２，５４１ページ〕、および、ゴールトン、シャープ 、チャンド（Ｄ、　Ｗ、　Ｃｈａｎｄ）　、７　イールズ、オヨびグリー７の論 文［「予防ワクチンとしての同系上ツクローナル内部写像抗イディオトープ（Ｓ ｙｎｇｅｎｉｃ　ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌｉｎｔｅｒｎａｌ　ｉｍａｇｅ　ａｎｔ ｉ−ｉｄｉｏｔｏｐｅｓ　ａｓ　ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃｖａｃｃｉｎｅｓ） 　Ｊ　　：ジャーナルーオブ・イミュノＯシー、　　（Ｊ。 Ｉｍｍｕｎｏｌ、）　、第１３７巻（１９ｇ６年＞　２．９３０−２．９３６ベ ージ］を参照のこと。センダイウィルスに関しては、エルトル（）１．　Ｃ，Ｅ ｒｔｌ）およびフィンバーブの論文［「センダイウィルス特異性Ｔ細胞クローン ：ヘルパーＴ細胞クローンに対抗する抗イデイオタイプ抗体による細胞溶解性Ｔ 細胞の誘導（Ｓｅｎｄａｉ　Ｖｉｒｕｓ　５ｐｅｃｉｆｉｃ　Ｔ　Ｃｅ１ｌ　Ｃ １ｏｎｅｓ：Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｒ　Ｃｙｔｏｌｙｔｉｃ　Ｔ　Ｃｅ１ｌｓ 　ｂｙ　ａｎ　Ａｎｔｉ−１ｄｉｏｔｙｐｉｃＡｎｔｉｂｏｄｙ　Ｄｉｒｅｃｔ ｅｄ　Ａｇａｉｎｓｔ　ａ　Ｈｅ１ｐｅｒ　Ｔ　Ｃｅ１ｌ　Ｃ１ｏｎｅ）　」： プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンセズ・オ ブ・ザ・ユナイテド・ステープ・オブ・アメリカ（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ、　Ａｃ ａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ、Ｃ）　、第８１巻（１９８４年）　２．８５０〜２ ．８５４ページ］を参照のこと。狂犬病ウィルスに関する報告としては、レアー ゲン（Ｋ、　Ｊ。 Ｒｅａｇｅｎ）　、ワンナー（Ｗ、　Ｈ，Ｗａｎｎｅｒ）　、ビクトール（丁。 Ｗｉｋｔｏｒ）　、およびコブロフスキー（Ｈ，Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉ）の論文［ 「抗イデイオタイプ抗体は狂犬病ウィルスの糖量白質に対する中和抗体を誘導す る（Ａｎｔｉ−１ｄｉｏｔｙｐｉｃ　ＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓＩｎｄｕｃｅ　Ｎｅ ｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｔｏ　Ｒａｂｉｅｓ　Ｖｉｒｕ ｓＧｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ）　」：ジャーナル・オブ・ピロロジー（Ｊ。 ｖｉｒｏｌ、）　、第４８巻（１９８３年）　６６０−６６６ページ〕を参照の こと。このような方針は、イーデルターグ（Ｆ、　Ｇ、　Ｃ，Ｍ。 Ｕｙｄｅ　ｌ　ｔａａｇ　）およびオステルハウズ（Ａ、　Ｄ、　＆（、Ｅ、　 ０ｓｔｅｒｈａｕｓ）の論文［「マウスにおけるモノクローナル抗イデイオタイ プ抗体を用いたポリオウィルス２型に対する中和抗体の誘導（Ｉｎｄｕｃｔｉｏ ｎ　ｏｆ　Ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ　Ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｉｎ　ＭｉｃｅＡｇ ａｉｎｓｔ　Ｐｏ１ｉｏ　Ｖｉｒｕｓ　Ｔｙｐｅ　ＩＩ　　ｗｉｔｈ　ｋｌｏｎ ｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｉｄｉｏｔｙｐｉｃ　Ａｎｔｉｂｏｄｙ）　」：ジャー ナル・オブ・イミュノロジ−（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、）　、第１３４巻（１９ ３５年）１．２２５−１．２２９ベージ］では、ポリオウィルスに関して考察さ れている。この方針では、抗イデイオタイプは病原体表面の中和エピトープを模 倣し、中和応答を誘導するということが重要な視点の１つとなっている。したが って、無傷の病原体を用いることができない場合、あるいは、不適切な非中和エ ピトープが免疫応答を支配している場合には１強力な抗イデイオタイプワクチン は、理想的な免疫原であるように思われる。しかしながら、ワクチンとして抗イ デイオタイプを実際に適用するには、ヒトモノクローナル抗体を製造するに際し 、また異種抗体の使用による血清病の危険に際しての困難という制約がある。 現在集中的に研究中の別の方法は、免疫応答の対象となる病原微生物の螢白質断 片に対応する合成ペプチドの使用である。この方針は、いくつかの場合に奏効し ており、例えばネコ白血病ウィルスについて［エルダー（Ｊ。 Ｈ，Ｅｌｄｅｒ）　、マッギ−（Ｊ、Ｓ、　ＭｃＧｅｅ）　、？　”ｙ　７　ン （Ｎ−Ｍ、　Ｍｕｎｓｏｎ）　、ホード：ｙ　（Ｒ，Ａ、　Ｈｏｕｇｈｔｅｎ） 　、クレッツア−（Ｗ、　Ｋｌｏｅｔｚｅｒ）　、ビトル（Ｊ、Ｌ、　Ｂｉｔｔ ｌｅ）　、および′グラン）　（Ｃ，Ｋ、　Ｇｒａｎｔ）　：　ｒ抗合成ペプチ ド抗体の使用によるネコ白血病ウィルス外皮遺伝子の中和領域の定位（Ｌｏｃａ ｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ　Ｒｅｇｉｏｎｓ　ｏｆ　 ｔｈｅＥｎｖｅｌｏｐｅ　Ｇｅｎｅ　ｏｆ　Ｆｅ１ｉｎｅ　Ｌｅｕｋｅｍｉａ　 Ｖｉｒｕｓ　ｂｙ　ＵｓｉｎｇＡｎｔｉ−Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　Ｐｅｐｔｉｄｅ 　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）　Ｊ　、ジャーナル。 オブ・ピロロジ−（Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、）　、第６１巻（１９８７年）８〜１５ ページ］、Ｂ型肝炎ウィルスについて［ゲリン（Ｊ、　Ｌ。 （ｉｅｒｉｎ）　、アレキサンダー（Ｈ，Ａｌｅｘａｎｄｅｒ）　、シー（Ｊ。 Ｗ、　５ｈｉｈ）　、バーセル（Ｌ　ＩＣＰｕｒｃｅｌｌ）　、ダポリー１−　 （Ｇ。 Ｄａｐｏｌｉｔｏ）　、エングル（ｎ、　Ｅｎ３１ｅ）　−グリー７、サトクリ ７　（Ｊ、　Ｇ、　５ｕｔｃｌｉｆｆｅ）　、　シニック（Ｔ、　Ｍ、　５ｃｈ ｉｎｎｉｃｋ）　。 およびラーナー（Ｒ，Ａ、　Ｌｅｒｎｅｒ）　　：　　ＦＢ型肝炎ウィルス表面 抗原の化学的合成ペプチドはチンパンジーにおいてＤ／Ｙ特異性を複製し、サブ タイプ特異性抗体を誘導する（Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ　５ｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ 　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｏｆ　Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　ＢＳｕｒｆａｃｅ　Ａｎｔｉ ｇｅｎ　Ｄｕｐｌｉｃａｔｅ　ｔｈｅ　Ｄ／Ｙ　５ｐｅｃｉｆｉｃｉｔｉｅｓ　 ａｎｄＩｎｄｕｃｅ　５ｕｂｔｙｐｅ−３ｐｅｃｉｆｉｃ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅ ｓ　ｉｎ　Ｃｈｉｍｐａｎｚｅｅｓ）　Ｊ　。 プロシーデインダス・オブ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンセズ・オ ブ・ザ・ユナイテド・ステープ・オブ・アメリカ、第８０巻（１９８３年＞　２ ．３６５−２，３６９ベージ］、熱帯熱マラリア原虫（Ｐ１ａｓｍｏｄｉｕａ＋ ハに陀虹凹）について［チェン（Ａ、　Ｃｈｅｕｎｇ）　、レーバン（Ｊ、　Ｌ ｅｂａｎ）　、シ３ウ（Ａ、　Ｒ，５ｈａｖ）　、メルクリ（Ｂ、　Ｍｅｒｋｌ ｉ）　、ストッカー（Ｊ、　５ｔｏｃｋｅｒ）　、シッッオり−＝　（Ｃ，Ｃｈ ｉｚｚｏｌｉｎｉ）　。 サンダー（Ｃ，５ａｎｄｅｒ）　、およびペリン（Ｌ、　Ｈ，Ｐｅｒｒｉｎ）　 　＋「熱帯熱マラリア原虫表面抗原の合成ペプチドを用いた免疫感作は抗メロゾ イト抗体を誘導する（　［ｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎＷｉｔｈ　５ｙｎｔｈｅｔｉ ｃ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｏｆ　ａ　Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ　Ｆａｌｃｉｐａｒｕ ｍＳｕｒｆａｃｅ　　Ａｎｔｉｇｅｎ　　Ｉｎｄｕｃｅｓ　　Ａｎｔｉｍｅｒｏ ｚｏｉｔｅ　　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）　　」　、ブロシーデインダス・オブ・ ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンセズ・オブ・ザ・ユナイテド・ステー ブ・オブ・アメリカ、第８３巻（１９８６年）８．３２８〜８．３３２ベージ］ 、コレラ毒素について［ジャコブ（Ｃ，Ｏ，Ｊａｃｏｂ）　、グロス７エルト（ Ｓ、　Ｇｒｏｓｓｆｅｌｄ）　、セラ（Ｍ、　５ｅｌａ）　、およびアーノン（ Ｒ，Ａｒｎｏｎ）　　：　　ｒ合成ペプチドによって誘導される対コレラ毎葉免 疫応答の開始（Ｐｒｉｍｉｎｇ　Ｉｍｎ＋ｕｎｅ　Ｒｅ５ｐｏｎｓｅｔｏ　Ｃｈ ｏｌｅｒａ　Ｔｏｘｉｎ　Ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　５ｙｎｔｈｅｔｉｃ　Ｐｅｐ ｔｉｄｅｓ）　」、ユーロピアン・ジャーナル・オブ・イミュノロジー（Ｅｕｒ 。 Ｊ、　　Ｉｍｍｕｎｏｌ、）　、第１６巻（１９８６年）　１．０５７−１，０ ６２ページ］、およびその他について報告がある。これらのペプチドは、中和的 な免疫応答を誘発する能力があれば、理想的な免疫原になるものと忍われる。確 かに、これらは特異的な応答を発現させ、宿主に悪影響を与えることはなし１の が通例である。しかし、どのペプチド断片に免疫原性があり、中和応答を発現さ せるのかを予測するのは困難なことがある。特異的応答の「希薄化」あるいは有 害な免疫複合体の形成を招きかねない、外来性エピトープに対する応答を引き起 こすことなく、特異的な中和エピトープに対する応答を誘発する免疫原の開発が 望まれる。 ［発明が解決しようとする課題］ 、本発明の目的は、新奇な生物学的活性ペプチドの提供にある。 また、本発明は、前記ペプチドを製造し、または生物学的活性を示すペプチドま たはこれと同等な化合物の３次構造、または化学的ｔｉ造を決定するための新奇 な方法の提供をも目的とする。 更に、本発明の目的は、病原となる生物および作用因。 特に、例えばレオウィルスなどのウィルスに対して晴ｆＬ類を感作するための♀ ＩＦＩ、い方法の提供にもある。 ［課題を解決するための手段］ 本発明は、生物学的活性ペプチドとして望ましいアミノ酸配列を決定し、こｈを 用いて、望ましい応答の「希薄化」あるいは有害な免疫複合体の形成を招きかね ない、外来性工と１・−ブに対する応答を引き起こすことなく、特異的な中和エ ピトープに対する応答を誘発する能力のある免疫原をもたらす新奇な方法を提供 する。本発明は、ある抗原の細胞受容体に特異的な抗体は、その抗原自身の対応 する領域に見出されるペプチド配列に対してペプチド配列上の相同性を示すとい う驚異的な発見に基ずく。 これによれば、抗受容体抗体は、それ自体がワクチンまたはその類似物として用 いられる代わりに、抗原と抗受容体抗体との対応領域間に共通するペプチド配列 を同定するためにのみ用いられる。次いで、この共通配列からなるペプチドを合 成して、治療目的に用いるのである。 したがって、本発明は、抗原と、その抗原の細胞受容体に特異的な抗体との双方 に見出されるペプチド配列からなる新奇な合成生物学的活性ペプチドをも提供す る。 好適実施例においては、抗原は、例えばレオウィルスなどのウィルスであり、ペ プチドは、その少なくとも６０％、好ましくは８０〜１００％が抗原領域および 抗受容体抗体の対応する領域に見出されるアミノ酸からなるペプチドである。通 常、抗受容体抗体の対応領域は、その抗体の相補的決定領域内に存在する。抗体 の相補的決定領域、および前記抗イデイオタイプ抗体の少なくと６６アミノ酸か らなる配列を用いるのが好ましい。相補的決定領域は。 抗受容体抗体の軽鎖上に位置しているのが普通であるがら、ＣＤＲ１１なる領域 が特に好ましい。 更に、本発明は、宿主細胞の受容体部位と特異的に結合する部位を有する伝染性 生物に対して宿主＠乳類を免疫感作する新奇な方法をも提供する。この方法は、 前記伝染性生物の前記部位と宿主細胞の受容体に特異的な抗体との双方に見出さ れるペプチド配列に対応するペプチド配列を有する合成生物学的活性ペプチドを 、前記宿主が前記生物による感染に犯されやすくなる可能性を減少させるのに有 効な量だけ哺乳類に接種する段階からなる。 この方法は、例えばレオウィルスなどのウィルスによって引き起こされる感染症 に対して宿主哺乳類を感作するのに特に適している。 本発明の方法および製品の実現可能性、および有用性の立証は、噛礼頚細胞のア ドレナリンβ受容体に物理的に類似する構造と特異的に結合して、これらの細胞 の代謝状況を変化させることで知られるレオウィルス３型を用いてなされている 。したがって、晴礼頚に投与してその代謝状況を変化させる方法をも、本発明は 提供する。 この方法は、イ）前記哺乳類の宿主細胞上の受容体部位と特異的に結合する蛍白 質性結合部位をその表面に有し、それと結合した場合に前記細胞の代謝状況に影 響を及ぼすことが知られている既知の物質を選択する段１智と、口）前記＋１＋ ｉテＬ類の彎主細胞上の前記受容体部位に特異的な抗体を調製する段階と、ハ） 前記物質の蛋白質性結合部位と、前記抗受容体抗体の結合部位との対応する領域 を比較して、アミノ酸配列に少なくとも６０％の対応が見られる前記結合部位の 部分を定位し、これによって共通配列領域を同定する段階と、二）前記共通配列 領域の少なくとも一部からなる合成ペプチドを作り上げる段階と、ホ）前記宿主 細胞の代謝状況を変化させるに充分な量の前記合成ペプチドを前記哺乳類に投与 する段階とからなる。本方法は、対象となる既知の物質が、ウィルスなどの生物 である場合に特に有用である。抗受容体抗体の対応領域は、少なくとも６アミノ 酸を共通配列に有する相補的軽鎖決定領域、例えばＣＤＲ１１領域であるのが好 ましい。 更に、本発明は、生物学的活性化合物合成の新奇な方法をも提供する。このよう な方法は、イ）哺乳類細胞の細胞受容体と結合することが知られている病原体遺 伝子産生物を選択する段階と、口）前記病原体遺伝子産生物に対する前記細胞受 容体に特異的な抗体を調製する段階と、ハ）前記遺伝子産生物と前記抗受容体抗 体とのペプチド配列を比較して、少なくとも部分的に共通する配列を決定する段 階と、二）前記共通配列部分の３次構造に対応する生物学的活性部位からなる化 合物を合成する段階とからなる。このようにして合成されたペプチドは、少なく と６６アミノ酸からなる共通配列で少なくとも構成され、かつ好ましくはこれが その必須構成分となっている。イ）の段階で選択される好適な遺伝子産生物とし ては、レオウィルスの遺伝子産生物、例えばレオウィルス３型のそれ、ワクシニ アウィルスの遺伝子産生物、エプスタイン−バーウィルスの遺伝子産生物、およ び、哺乳類のアドレナリンβ受容体群と結合する遺伝子産生物がある。 ＠乳類細胞の増殖を変化させる新奇な方法もまた、本発明によって提供される。 このような方法には、哺乳類細胞に、その細胞のアドレナリンβ受容体と結合す ることが知られている遺伝子産生物と前記アドレナリンβ受容体に特異的な抗体 とに共通していて、前記細胞の増殖を変化させるよう選択されたアミノ酸配列か らなる、前記増殖を変化させるのに有効な量のペプチドを投与する段階が含まれ る。このような方法に用いるのに好適なペプチドおよび病原体遺伝子産生物につ いては既に述べた。 本発明が開示する生物学的活性化合物合成の代替方法も同様に、ある種の病原体 遺伝子産生物、および抗原の細胞受容体に特異的な抗体（例えば抗受容体抗体） には、共通のアミノ酸配列があるという驚異的発見を利用している。この方法も やはり、上記の通り、哺乳類細胞の細胞受容体と結合することが知られている遺 伝子産生物を選択する段階と、前記細胞受容体に特異的な抗体を調製する段階と を含んでいる。次いで、抗受容体抗体のアミノ酸配列を、前記抗体の相補的決定 領域、好ましくはその抗体の軽鎖ＣＤＲ１１部分内に特定して、前記抗受容体抗 体の相補的決定領域の３次構造に対応する部位を含む化合物を合成するのである 。この方法の合成段階には、少なくと６６アミノ酸を含む共通アミノ酸配列から なるペプチドの合成を含めることができ、あるいは他の合成手法を用いて、同等 な３次構造を有する化合物を作り出すこともできる。次いで、このようにして作 られた特異的ペプチドを適当な担体螢白質と結合させて、標的受容体と共通結合 する複合体を形成させることができる。好適実施例においては、この方法には、 好ましくは受容体に対する、得られた化合物の相対的な親和力を測定することに よって、この化合物の相対的な生物学的活性を定量する段階が更に含まれる。定 量の実行には、得られた化合物が病原体に対する抗体産生を誘導する能力を相対 的な親和力の指標として利用することができる。病原体に対する免疫の誘導も、 この方法による製品である化合物の相対的な生物学的活性を定量するための別の 適当な方法である。 ［実施例］ 以下、図面を参照し、実施例を詳細に説明することによって、本発明を明らかに する。 本発明の好適実施例は、レオウィルスｌ型および３！！！と細胞受容体との抗イ デイオタイプという面での相互ｆヤ用を用いて実施された実験と関連して説明さ れている。 これらの実施例は、別途指示のない限り、下記の実験手順を用いて行ったもので ある。 ６〜８週齢の成熟したメスのＢａ１ｂ／ｃなる系統のマウスをメイン州バーハー バー所在のジャクンン・ラボラトリ−（Ｊａｃｋｓｏｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ）より入手する。用いたマウスのすべてから感作前の血清を採取し、レオウィル スの感染力に対する中和作用を用いて検定を行い（下記参照）、実験以前のレオ ウィルスとの接触が皆無であることを確認する。ペプチドを用いて感作したマウ スを動物飼育施設に収容し、飼育飼料［ミズーリ州セントルイス所在、ピュリナ （Ｐｕｒｉｎａ）社製］を任意に摂取させる。レオウィルス３型デイアリング株 を用いて感作したマウスは、別の施設にこれを隔離する。 ウィルス レオウィルス１型（ラング株）およびレオウィルス３型（デイアリング株）、お よび、３．ＨＡ−１および１．ＨＡ−３なる再選別体については、既に記載があ る［フィールズお予防および治療との関係（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｍｅｃｈａｎ ｉｓｍ　ｏｆ　ＶｉｒａｌＰａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ：　　Ｉｍｐｌｉｃａｔｉ ｏｎｓ　　ｆｏｒ　　Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ　　ａｎｄＴｒｅａｔｍｅｎｔ）　 Ｊ　、ネイチャー　（Ｎａｔｕｒｅ）　、第２０巻（１９ｇ２年）　１９〜２３ ベージ］。１．ＨＡ−３および３．ＨＡ−１なるクローンは、σｌなるウィルス 付着ポリペプチド（血球凝＊Ｘ）を暗号化している遺伝子であるＳｌセグメント を分離する。 単−セグメント再選別体クローンである。マウスに対する接種、およびウィルス の中和に用いるために、し細胞で２回遊代したレオウィルス株を、刊行された手 ｉ去［ショクリック（Ｗ、　Ｋ、　Ｊｏｋｌｉｋ）　：　’レオウィルス粒子に 対するキモトリプシンの作用に関する研究（Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅＥｆ ｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｃｈｙｍｏｔｒｙｐｓｉｎ　ｏｎ　Ｒｅｏｖｉｒｉｏｎｓ）　 Ｊ　、ピロロジー（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ）　、第４９巻（１９７２年）　７００〜 ７１５ベージ］を変更して、細胞をホモジエナイズする代わりに超音波破壊を行 って［ブランソン（１３ｒａｎｓｏｎ）社製ウルトラソニック（Ｕｌｔｒａｓｏ ｎｉｃ）　２００号］、精製した。波長２６０ｎｍの吸光度によって、１ｍＱあ たりの粒子数を算定した［スミス（Ｒ。 Ｅ、　Ｓｍ１ｔｈ）　、ツウエールニク（Ｈ，Ｊ、　Ｚｗｅｅｒｎｉｋ）　、お よびショクリック：　「レオウィルス３型の粒子、代表的成分、およびコアのポ リペプチド成分（ＰｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅＣｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｖｉｒ ｉｏｎｓ、　ｔｏｐ　Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ　ａｎｄ　Ｃｏｒｅ　ｏｆＲｅｏｖｉ ｒｕｓ　Ｔｙｐｅ　３）　Ｊ　、ビｏｏジー、第３９巻（１９６９年）３型レオ ウイルスのモノクローナル中和抗体である９８Ｇ５　（マウスＩｇＧ２ａＫ）　 　［パースチン（Ｓ、　Ｊ、　Ｂｕｒ’５ｔｉｎ）、スプリッグス（Ｄ、　Ｒ， Ｓｐｒｉｇｇｓ）　、およびフィールズ：［レオウィルス３型血球凝集素に機能 的ドメインが存在する証’１％　（Ｅｖｉｄｅｎｃｅ　ｆｏｒ　Ｆｕｎｃｔｉｏ ｎａｌ　Ｄｏｍａｉｎｓ　ｏｎ　ｔｈｅｎｅｏｖｊｒｕｓ　Ｔｙｐｅ　３　Ｈｅ ｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）　Ｊ　、ビｏロシー、第１１７巻（１９８２年）１４ ６〜１５５ベージ〕を、ペニシリン、／ストレプトマイシン混合液［ペンシルバ ニア州フィラデルフィア所在、ペンシルバニア大学細胞センターより］。 およびｌＯ％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を加えたダルベツコの最小必須培地［Ｄλ ４ＥＭ：メリーランド州つォーカーズビル所在、エムニー・バイオプロダクツ（ ＭＡ　Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ）社製］で増殖させた細胞を用いたハイブリドー マ上滑から精製する。５０％硫酸アンモニウムを用いて培養液上滑を沈殿させ、 これを蒸留水に溶かし、燐酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で３回透析する。次いで、プ ロティンＡ結合セファロースカラムで抗体を純化吸着させ、　ｐＨ４，５，０， １モルのクエン酸を用いて溶出させる。溶出物をＰＨ８，５，１モルのトリス緩 衝液中に回収して、過剰な酸度を中和し、ＰＢＳで３回透析する。透析物をアミ コン（Ａｍｉｃｏｎ）蛋白質濃縮器にかけ、分子量３０キロダルトン（ＫＤ）を 境として濃縮する。Ｍ製された抗体は、ドデシル硫酸ナトリウム・ポリアクリル アミドゲルを用いた電気泳動（ＳＯ３−ＰＡＧＥ）によれば、９５％を上回る純 度である。ＵＰＣ−１ｏおよびＡｌｌなる不連合モノクローナル抗体（両者とも マウス１３Ｇ２ａＫ）は、これを清澄化腹水［ギブニア　（Ｇｉｂｃｏ）　、す なわちグランド・アイランド・バイオロジカル・カンパニー（Ｇｒａｎｄ　ｌ５ ｌａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｏ、）　ｆｆｌから同様にして精製する。 ８７．９２．６　（マウスＩｇｋｌ、Ｋ）、および、　ＨＯ１’３．４　（マウ スＩｇＭ、　Ｋ、抗丁１１ｙｌ、２）および００２２．　ｌ　（マウス１ｇλ１ 、Ｋ、抗Ｔｈｙ１、　ｌ）なるモノクローナル抗体は、！・イブリドーマの培養 液上清の５０％硫酸アンモニウム沈澱分、あるいはバイブリド−７を有するＢａ １ｂ／ｃ系マウスに生じた腹水の腹水上清からこれをＭ製する。これらをＰＢＳ で３回透析し、ヤギ抗マウスＩｇＭを結合させたアフィゲル（Ａｆｆｉｇｅｌ） 　−ＩＯのカラムに通す。３．５モルの塩化マグネシウムを用いて抗体を溶出、 ＰＢＳで３回透析、次いで、上記の要領で濃縮する。用いたモノクローナル抗体 はすべて、　５Ｏ５−ＰＡＧＥによれば９５％を上回る純度である。 細胞系 マウスＬ細胞は、５％ＦＢＳを加えたショクリックの最小必須培地［エムニー・ バイオプロダクツ社製］を用い、撹拌容器中でこれを増殖させる。Ｒ１，１細胞 （マウス胸腺腫、Ｔｈｙｌ、２陽性）は、Ｌ−グルタミン、１０ミリモルのＨＥ ＰＥＳ緩衝液（エムニー・バイオプロダクツ社製）、および、ｌＯ％ＦＢＳに溶 かしたペニシリン／ストレプトマイシン混合液で強化したＲＰＭＩ　１６４０な る培地（エムニー・バイオプロダクツ社製）中に懸濁培養して、これを増殖させ る。 マウスの免疫感作 遅延型過敏症の応答を調べるため、合成ペプチドまたは生レオウィルス３型のい ずれかを用い、マウス群に対してその背側間脇腹の別個の２ケ所（？＆肢上方） の皮下に接種する。０．２ｍｌあたり５０ｇｇの合成ペプチド、または１０７個 のウィルス粒子を、０．１ｍｔずつ別個に注射して投与する。６日後に、２％ゼ ラチン含有食塩水（３０ｇりに懸濁させた３　ｘｌｏ’個のウィルス粒子を左足 跳に投与して、動物を攻撃する。２４時間後の足ピの腫張を盲検形式によって記 録する［グリー７およびワイナー（Ｈ，Ｌ、　Ｗｅｉｎｅｒ）　　：「レオウィ ルスに感染したマウスにおける遅延型過敏症。 その２：ウィルスの特異的遺伝子産生物に対する寛容誘導、およびサプレッサー Ｔ細胞の誘導（ＤｅｌａｙｅｄＨｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　Ｍｉ ｃｅ　Ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｒｅｏｖｉｒｕｓ、　ＩＩ　。 Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ　ａｎｄ　５ｕｐｐｒｅｓｓｏ ｒ　丁Ｃｅ１ｌｓ　ｔ。 Ｖｉｒａｌ　５ｐｅｃｉｆｉｃ　Ｇｅｎｅ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）　、ジャーナル ・オブ・イミュノロジー、第１２５巻（１９８０年）２８３〜２８７ページ］。 １群あたり４匹の動物を調べ、攻撃した左足踵と未処理の左足踵との比較によっ て、応答の強度を判定する。 ＃−液性免疫応答を調べるには、上記の要領に下記の変更を加えて１合成ペプチ ドまたは生レオウィルス３型のいずれかをマウスに接種する。ペプチドを下記の 要領でニワトリ血清アルブミン（ＣＳＡ）に抱合させ、抱合ペプチド１１００ｐ を２回に分けて皮下に接種する。合成ペプチドで感作するマウスに対しては、最 初の感作は１等量の完全７０インドアジユバントと混合したペプチドを用いてこ れを行い、その後の感作は、ゼラチン含有食塩水にペプチドを懸濁してこれを行 う。毎週１回ずつ５週間マウスをｅ！ｆヤし、奪１回の接種の前、次いで、第２ ａおよび第６週に入る前に血清を採取する。レオウィルス３型で感作するマウス に対しては、第１週および第３週目に１０’プラ一ク形成祇位（ＰＦｔＪ）を皮 下に接種してこれを行放射線免疫検定法 ９６個の＼１字庇の穴のあるポリスチレンプレート［バージニア州アレクサンド リア所在、グイナテ・ｌり・ラボラ１゛リーズ（Ｄｙｎａｔｅｃｈ　Ｌａｂｏｒ ａｔｏｒｉｅｓ）社’Ｈ］の穴のそれぞれに、蒸留水で２５ａｇ／　ｍｙに希釈 したペプチド５０＃ｔを入れ、プレートを３７℃で１晩温置して蒸発させて、ペ プチドの塗膜を形成する。穴のそれぞれに、レオウィルスｌ型または３型の原液 をｐＨ９，５，０，１モルの炭酸水素ナトリウム溶液で４．８ｘｌＯ”個／ｍｕ に希釈したウィルス粒子懸濁液２５１を注ぎ、これを４℃に１晩保って、上記ウ ィルスの塗膜を形成する［ロンドン（Ｓ、Ｄ、　Ｌｏｎｄｏｎ）　、ルピン（Ｄ 、　Ｈ，Ｒｕｂｉｎ）　、およびセブラ（Ｊ、　Ｊ、　Ｃｅｂｒａ）共著：「Ｉ 几血清型レオウィルスを用いた腸粘膜免疫感作は、バイエル板におけるＩｇＡ記 憶細胞ばかりでなく、ウィルス特異的な細胞障害性Ｔ細胞の前駆細胞をも刺激す る（Ｇｕｔ　Ｍｕｃｏｓａｌ　Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　Ｒｅｏｖ ｉｒｕｓ　５ｅｒｏｔｙｐｅ１／Ｌ　Ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ　Ｖｉｒａｌ　５ｐ ｅｃｉｆｉｃ　Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　Ｔ　Ｃｅ１ｌＰｒｅｃｕｒｓｏｒｓ　ａｓ 　Ｗｅｌｌ　ａｓ　ＩｇＡ　Ｍｅｍｏｒｙ　Ｃｅ１ｌｓ　ｉｎ　Ｐｅｙｅｒ’５ Ｐａｔｃｈｅｓ）　Ｊ　　（１９８７年発行）］。１晩温置後、ペプチドまたは ウィルスの塗膜を施した穴を、ＰＢＳで３回洗浄し、０．１％のアジ化ナトリウ ムを加えた１％ゼラチンのＰＢＳ溶液を穴１個あたり２０ＯｐＱずつ加え、３７ ℃で２時間温置して遮蔽する。穴の内容を静かに捨て、ＰＢＳで３回洗浄後、０ ．５％のゼラチンと０．１％のアジ化ナトリウムとを含有するようＰＢＳで希釈 したマウス血清、あるいは６７装七ツクロ一ナル抗体を穴１個あたり５０μ！ず つ加える。３７℃で３時間温置後、穴の内容を靜かに捨て、ＰＢＳで３０洗浄し て、１　ｍｙ、／　ｍＱのニワトリγグロブリンを加えた０、１％のアジ化ナト リウムのＰＢＳ溶液で希釈した、放ｑｔ性沃累化ヤギ抗マウスに鎖を穴１個あた り１００ｐ　Ｉずつ加える。この量は、毎分４８．０００カウント（ＣＰＭ）に 相当する。４℃で１晩プレートを放置し、内容を静かに捨て、水道水で１０回洗 浄し、ヒートランプを用いて乾燥させる。次いで、加熱ワイヤを用いて穴を切り 出し、ガンマ線計数装置で計数する。抗原の塗膜を施さなかったブランクの穴に ついて測定されたＣＰＭを、すべての実験例での抗原塗布の穴について測定され たＣＰＭ値から減じる。 螢光活性化細胞選別機（ＦＡＣ３）を用いた分析Ｒ１，１細胞（トリバンブルー 色素排除法で生存度９９％）に遠心分離を施し、１％のウシ血清アルブミンを加 えた０、１％アジ化ナトトリムＰＢＳ溶液（ＦＡＣ３培地）で２回洗浄する。１ ０’／ｍｕとなるように細胞を、ＦＡＣ３培地のみ、あるいは２００ｐｇ／ａｎ のペプチド−ウシ血清アルブミン抱合物を含有するＦＡＣＳ培地に感温させる。 氷上に細胞を４５分間保ち、その後、０．５ｍｇ／ｍｌの原液からのモノクロー ナル抗体を１００ｐＱのアリコートに加えて、図示の最終濃度とする。更に３０ 分静置後、試料のそれぞれにＦＡＣ５培地５００ｆｆｔを加えて、細胞を遠心分 離し、ＦＡＣＳ培地５００＊Ｑ７：１回洗浄し、２００分の１に希釈したフルオ レセイン標識ヤギ抗マウスＦａｂフラグメン１−［サザン・バイオテクノロジー ・アンーシエイツ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｐ、ｙ　Ａｓ５ ｏｃｉａｔｅｓ１社製〕を含有するＦＡＣ３培地１０ｐ９に再懸濁し、氷上に３ ０分ＤＴｉする。ＦＡＣ３培地５００＃ｔを加えた後、細胞を遠心分離し、ＦＡ ＣＳ培地５００Ｆｔで洗浄、ＦＡＣＳ培地２００１に再懸濁後、ペンシルバニア 大学の螢光活性化細胞選別機を用いて分析する。 ウィルス感染力の中和 血清試料中の中和抗体力価を下記の手順で測定する。 （１）微視的中和：９６穴のプレートを用い、Ｌ細胞（穴１個あたり５　ｘｌｏ ’個）を３７℃で１晩温置する。レオウィルスｌ型ラング株（１／いおよびレオ ウィルス３型ディアリング株（３／Ｄ）を逐次的に希釈し、Ｌ細胞とともに３７ ℃で１時間温置する。穴のそれぞれに、５％ウシ胎児血清および１％グルタミン で強化した最小必須培地７５＃ｔを更に加える。、３７℃で３日間装置した後、 ウィルスを含有する培地を除去し、ゲンチアナバイオレット（３，４ｇ／Ｑおよ びシュウ酸アンモニア８　ｇ　／　Ｑ　）で染色する。中和に用いられたウィル スの力価は、単層り細胞を溶解するウィルス量の４倍過剰である。適当な濃度の レオウィルスエル、あるいはレオウィルス３／Ｄを等量のマウス血清とともに、 ９６穴のプレートを用い、２５℃で１時間温置する。 単細胞層へと移す。視覚的検査によって７０％の単細胞層が保存されていると判 定された量として、抗体の力価を判定する。 （２）ウィルスプラーク減少法：１２大のコスタ−プレートを用い、　１００１ ）ＦｔＪのレオウィルスエルをＬ細胞（穴１個あたり７ｘｌＯ’個）とともに１ 時間温置する。次し１で、！ルーピン（Ｄ、　Ｉｌ、　Ｒｕｂｉｎ）らの論文に 工こ載の要領で、各穴のウィルスの力価を測定する［ルーピン、コーンスタイン （Ｍ、　Ｊ、　Ｋｏｒｎｓｔｅｉｎ）　、およびアンダーソン（Ａ、　Ｄ。 Ａｎｄｅｒｓｏｎ）　　：　　ｒレオウィルス血清型ｌの腸感染：回腸疾患に関 する新奇な複製周期（Ｒｅｏｖｉｒｕｓ　５ｅｒｏｔｙｐｅ　ＩＩｎｆｅｃｔｉ ｏｎ：　Ａ　Ｎｏｖｅｌ　Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｖｅ　Ｃｙｃｌｅ　ｗｉｔｈ　ｌ １ｅａｌＤｉｓｅａｓｅ）　、ジャーナル・オブ・ピロロジー、第５３巻（１９ ８５年）３９１〜３９８ベージ］。 ペプチドの合成 ペプチドの合成には、アプライド・バイオシステムズ・ペプチドシンセサイザー 、モデル４３ＱＡ　［カリフオＩレニア州）オスターシティ−所在アプライド・ バイオシステムズ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）社製〕を用いる。 樹脂上に保護されたペプチドを、１０％アニンールまたは１０％チオアニンール を含有する無水フッ化水素で０℃にて１〜２時よび遊離を行う。次いで、酢酸エ チルまたはジエチルエーテルのいずれかを用いてペプチドを抽出した後、１０％ 酢酸水溶液に溶解させ、濾過して併脂を除去する。凍結乾燥後、アミノ酸分析と 逆相高性能液体クロマトグラフィーの双方を用いて、ペプチドの組成、および純 度を測定する。この手順は、＼１１、および＼／、の変形ペプチドなど、すべて のペプチドの合成に用いられる。 ニワトり血清アルブミン（Ｃ５Ａ）とのペプチドの抱合ペプチドをＣＳＡに抱合 させる前に、シュネールンン（Ｓｃｈｎｅｅｒｓｏｎ　）らの論文［ｒ［３型イ ンフルエンザ菌多糖類−蛋白質抱合体の調製、特性記述、および免疫原性（Ｐｒ ｅｐａｒａｔｉｏｎ、　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　［ｍｍｕ ｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆ　Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ　１ｎｆｌｕｅｎｚａｅ　 Ｔｙｐｅ　ｂ　Ｐｏ１ｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅＰｒｏｔｅｉｎ　Ｃｏｎｊｕｇａ ｔｅｓ）　、ジャーナル・オフ・エクスベリメンタル・メディシン、第１５２巻 （１９８０年）３６１ページ］の記載に従って、Ｃ３Ａをまず、アジピン酸ジヒ ドラジドを成分とする親核性スペーサーを用いて誘導する。０．１モル重炭酸ナ トリウム５ｍｌに溶かしたこのアジピン酸ジヒドラジド誘導Ｃ５Ａ　（Ｃ３Ａ− ＡＤＨ）　３０ｍｇを、ｍ−７レインイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエ ステル［ピアス（Ｐｉｅｒｃｅ）社製〕７ｍｇと室温で１５分間反応させる。次 いで、この反応混液にペプチド５０ｍｇを加え、２５℃で２時間かけてカップリ ング反応を進行させる。０．１モル重炭酸アンモニウムに対する透析、および凍 結乾燥を行った後、Ｃ５Ａ−ＡＤＨ−ペプチド抱合体が乾燥白色粉末として得ら れる。 共通ペプチド配列の決定 従来の研究によって、９８Ｇ５抗レオウイルスモノクロ一ナル中和抗体に対して 誘導した８７．９１６なるモノクローナル抗体は、レオウィルス３型に特異的な 細胞表面受容体に結合するという点で、正常なウィルスをｔλ倣することが明ら かにさ九ている［ノーズワージー、フィールズ。 ティヒター（Ｍ、　Ａ、　Ｄｉｃｈｔｅｒ）　、ソボトカ（Ｃ，５ｏｌ）ｏｔｋ ａ）、バイザー（Ｅ、　Ｐｉｚｅｒ）　、べり−（１，１，Ｐｅｒｒｙ）　、ネ ボム、およびグリース：「咄スし類レオウィルスに対する細胞受容体、そのｌ： 同系抗イデイオタイプモノクローナル抗体は、レオウィルスに対する細胞表面受 容体をＰＦ定する（Ｃｅｌｌ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｍａｍｍ ａｌｉａｎ　Ｒｅｏｖｉｒｕｓ。 １　、　Ｓｙｎｇｅｎｅｉｃ　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉ−１ｄｉｏｔｙ ｐｉｃ　ＡｎｔｉｂｏｄｙＩｄｅｎｔｉｆｉｅｓ　ａ　Ｃｅ１ｌ　５ｕｒｆａｃ ｅ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｆｏｒ　Ｒｅｏｖｉｒｕｓ）　Ｊ　：ジャーナル・オフ ・イミュノロジー、第１３１巻（１９８３年）２、５３３〜２，５３８ベージ； カウフマンら、前出、（１９８３年）；コー（Ｍ、　Ｓ、　Ｃｏ）　＋ゴールト ン、フイールズ、およびグリース：　「哺乳類レオウィルス３型の細胞表面受容 体の単離、および生化学的特性記述（Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｂｉｏｃｈ ｅｍｉｃａｌＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｍａｍｍａｌ ｉａｎ　Ｒｅｏｖｉｒｕｓ　Ｔｙｐｅ　３Ｃｅｌｌ−Ｓｕｒｆａｃｅ　Ｒｅｃｅ ｐｔｏｒ）　Ｊ　、プロシーディングＸ−オフ・ナショナル・アカデミ−・オフ ・サイエンセズ・オフ・ザ・ユナイテド・ステーゾ・オフ゛・アメリカ、第８２ 巻＜　１９８５年）　Ｌ、４９４〜１．４９８ベージ〕。８７．９２．６は、特 異的な細胞受容体との結合においてレオウィルス３型と競合し、これによって、 その結合ドメイン中のウィルス性細胞付着蛋白質であるσｌ　（ウィルス血球凝 集素）を模倣するのである。このドメインはまた、抗体の中和性応答にも関係が ある［バースチンら：前出（１９８２年）；スブリゾグス、カイエ（Ｋ−Ｋａｙ ｅ）　、およびフイールズ：［レオウィルス３型血球凝集二の位相幾何学的分析 （Ｔｏｐｏｌｏｇｉｃａｌ　　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｒ　　ｔｈｅ　　ｒ！ｃｏ ｖｉｒｕｓ　Ｔｙｐｅ　３１（ｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）　」、ピロロジー、 第１２７巻（１９８３年）２２０〜２２４ベージ］。このことは、　８７．９２ ．６が、レオウィルスに対する細胞受容体と作用し合う血球凝集素上の工と１・ −ブを模倣することを意味する。８７．９２−６の重鎮および軽鎖の可変領域（ それぞれＶｌ＋、およびＶｌ、）の核酸配列は、最近決定され［ブラック（Ｃ， Ｂｒｕｃｋ）　、コー、スラウイ（Ｍ、　５ｌａｏｕｉ）　、ゴールトン、スミ ス（Ｔ、　Ｓｍ１ｔｈ）　、フィールズ、マリンズ（Ｊ、　１．　Ｍｕｆｆｉｎ ｓ）　、およびグリース：「内部写像装着モノクローナル抗イディオタイプの核 酸配列、および外部抗原の配列とそれとの比較（ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄ　５ｅ ｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ａｎ　Ｉｎｔｅｒｎａｌ　Ｉｍａｇｅ−Ｂｅａｒｉｎｇ　 ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉ−１ｄｉｏｔｙｐｅ　ａｎｄ　ｉｔｓ　Ｃｏｍｐ ａｒｉｓｏｎ　ｔｏ　ｔｈｅ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆｔｈｅ　Ｅｘｔｅｒｎａ ｌ　Ａｎｔｉｇｅｎ）　Ｊ　、プロシーデインダス・オフ・ナショナル・アカデ ミ−・オフ・サイエンセズ・オフ・ザ・ユナイテド・ステーゾ・オフ・アメリカ 、第８３巻（１９８６年）６．５７８〜６，５８２ベージ］、レオウィルス３型 σｌ蛋白質のそれとの比較がなされた［バッセルーデュービ−（Ｒ，Ｂｕｓｓｅ ｌ−Ｄｕｂｙ）　、ジャヤスリヤ（Ａ−Ｊａｙａｓｕｒｉｙａ）、チャチルジー （Ｄ、　Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅ）　、ゾーネンベルク（Ｎ。 Ｓｏｎｅｎｂｅｒｇ）　、メイゼル・ジュニア（Ｊ、〜’、　Ｍａｉｚｅｌ、　 Ｊｒ、）、およびフィールズ：　「レオウィルス血球’ＭＥ　Ｎ素の配列からコ イル状コイル溝遺が予測される（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　Ｒｅｏｖｉｒｕｓｔ ｌｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ　　Ｐｒｅｄｉｃｔｓ　　ａ　　Ｃｏ１１ｃｄ−（ ｏｉｌ　　５ｔｒｕｃｔｕｒｅ）　　Ｊ　　、ネイチャー、第３１５巻（１９８ ５年）４２１〜４２３ページ］。本発明の方法によって、抗原、および抗イデイ オタイプの共通配列の部分が特定されている。より具体的には、しオウイルス３ 型σ】蛋白質の３１７６目お：び３３２番目のアミノ酸を包含するアミノ酸１６ 分子の配列：土、３７．９２．６の重鎖および軽鎖可変類ｔｔＥ　（それぞｈ　 Ｖ　ｕおよびｖｌ、）の第２相補性決定領域（ＣＤＲ１１）を包含する複合配列 （ＣＤＲｈ　）と類似した配列であることが特定されている。特に、Ｖ　１Ｈの ４３〜５１番目のアミノ酸は、σｌの３１７〜３２４番目のアミノ酸と配列が類 似しており、■、の４６〜５５番目のアミノ酸は、σｌの３２３〜３３２番目の アミノ酸と同一である［ブラ・７りら：前出（１９８６年］。 本発明の方法に従って、σＩＷ白質の３１７〜３３２番目、ｖ８配列の４３〜５ ０番目、およびＶＬ配列の３９〜５５番目のアミノ酸に対応するペプチドが合成 されている。後述において立証する通り、これらのペプチドを用いてＢａ１ｂ／ ｃ系マウスを感（ヤすると、抗しオウィルス３型抗体が中和され、かつレオウィ ルスに対する特異的な細胞性免疫が生じる。したがって、σｌなる細胞付着蛍白 質と抗受容体抗体との間の配列上の相同性が、レオウィルスの血球凝集素、すな わちσｌにおける中和エピトープの存在を予測させるものであることは確実であ る。これを指針とすることによって、病原体における中和エピトープの速やかな 解明と、中和応答を発現させるペプチドワクチンの開発とが可能となる。 ペプチドに対する９８Ｇ５モノクロ一ナル中和抗体の結合８７、９２．６モノク ロ一ナル抗受容体抗体は、レオウィルス３型の受容体および９８Ｇ５中和抗体の 両者と杭合する［カウフマンら：前出（１９８３年）］。発明者らは、８７．９ ２．６とレオウィルス３型のσ１蛋白質との間の相同域に由来するペプチド［ブ ラックら：前出（１９８６年）］には類似の特性があるものと予測した。この仮 説を検証するために合成したペプチドを第１表に示す。 第１表 ８７、９２．６とレオウィルス３型血球凝集素との間の相同域が含まれる合成ペ プチドＴｌｙ（ｅｕ−Ｇｌｎ 対照：　　Ｌｙｓ−５ｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ａｌａ−３ｅｒ−ＴＴｒ千ｍ１Ｉ ｎ−Ｇ　Ｉｎ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｎ−Ａｓｎ（ｅｕ−ペプチド　　Ｔｈｒ−Ｌｅｕ −Ａｓｐ−ｒｌｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇこの研究に用いたペプチドは、前記の固相法 を用いて合成したものである。配列は、相同性が最大に現れるように配置して示 しである。黒丸で示したアミノ酸が同一であり、白丸で示したのは同じ種属のア ミノ酸である。 検証したペプチドには、共通のペプチド配列の他に抗イデイオタイプ抗体残基が 含まｔしていることがＪっがる。 レオなるペプチドは、レオウィルス３型の血球凝集諧の３１７〜３３２ｆＪ目の アミノ酸に対応している。ヨンビュータモデル形成からは、この領域は、圧倒的 にβシート配置となっているが、βターン配置も含まれることが予測される。ｖ １ペプチドは、８７．９２．６の軽鎖可変領域の３９〜５５＃を目のアミノ酸を 表し、第２相補性決定領域（ＣＤＲＩ＋　）を含んでいる。モデル形成からは、 この領域もまた、βシートが支配的であるが、βターンも含まれることが予測さ れる。Ｖ　Ｉ＋ペプチドは、８７．９２．６の重鎮可変領域の４３〜５６番目の アミノ酸からなり、重鎮のＣＤＲＩＩが含まれている。対照ペプチドは、これら とは無関係であるが、比較のために示す。 このような１次構造および２次構造における類似性に基ずき、レオペプチド、お よびＶＬペプチドは、９８Ｇ５抗レオウィルス３型モノクロ一ナル中和抗体の認 識対象に這いないことが予測される。第１図に、このペプチドを塗布した微量力 価測定プレートの穴に対する精製９８Ｇ５モノクロ一ナル抗体の結合を測定する 放射線免疫検定の結果を示す。ポリスチレン製の穴に対する非特異的結合を補正 するために、ペプチドを塗布しなかったブランクの穴について測定した毎分計数 （ＣＰＭ）　Ｍを、ペプチドを塗布した穴について測定したＣＰＭ値から減じた 。更に、これらのペプチドが免疫グロブリン分子の非特異的な接着をも生起する 可能性があることから、ペプチド塗布の穴に対するＬＩＰＣ−１０なる種属適合 不適正モノクローナル抗体の特異的な結合を測定し、この値を９８Ｇ５について の測定値から減じた。本研究に用いた対照ペプチドに対しては、有意な結合はス ごぬられながった。同様に、＼’１１ペプチドに対する結合は、背景レベルに達 したに過ぎず、このエピトープは、９８Ｇ５には認識されなかったことが示され た。カルボキシル末端の配列に、レオペプチドのカルボキシル末端との強力な相 同性があるるｖｌ、ペプチドとは少量の結合があった。少量とはいえ、この知見 は、以降の検定においても再現可能である。９８Ｇ５によるレオペプチドとの結 合に、強力な再現可能性があることは明白である。　９８Ｇ５は中和抗体である から、このデータは、レオペプチドには９８Ｇ５に認識される中和エピトープが 含まれていることを意味する。ｖＬペプチドとの結合は、これらのペプチド間の 相同配列域（σ１蛋白質の３２３〜３３２番目のアミノ酸）が中和エピトープに 関与していることを示している。 レオウィルス受容体とのｖＩ、ペプチドの結合従来の研究によって、９８Ｇ５に 認識される中和エピトープは、レオウィルス３型受容体との結合に関与している ことが示されている［カウフマンら：前出（１９８３年）；ノーズワージーら： 前出（１９８３年）；スプリッグスら：前出（１９８３年）］。このことがら発 明者らは、■Ｌペプチドは、ウィルス受容体とも作用し合うがも知れないと考え た。この仮説を検証するため、ｖｌｌおよびｖＬペプチド、およびウシ血清アル ブミン（ＢＳＡ　）を０．１％ゲルタールアルデヒド中で満面し、　ｒ’Ｂｓに 対する透析を行って。 これらのペプチドをＢＳＡと結合させ、これらの調合物を用いて、　８７．９２ ．６がＲ１，１細胞上のレオウィルス３型受容体と結合するのを特異的に阻止で きるかどうか調べた。 第２図Ａに示す通り、Ｒ１，ｌ細胞をＶ　、、−ＵＳＡ結合物とと６に前満面す ると、　８７．９２．６による結合は阻止され、レオウィルス受容体とＶ　、、 −ＢＳＡとの相互作用が示される。この阻止作用は、Ｒ１，１細胞をＶ　、、− ＢＳＡとともに前満面しても、ｌ０１３．４の結合には影響がなく、Ｒ１，１細 胞表面のＴｈｙｌ、２なる分子と結合するイソタイプ連合対照モノクローナル抗 体にも影響が皆無である（第３図）ことから特異的なものである。このような結 果は、数多くの実験においても一貫して再現可能である。更に、その対照を示す のが第２図Ｃであって、ここでは、Ｖ　Ｌ−ＢＳＡと同じ濃度で用いられた場合 でも、Ｖ　Ｎ−ＢＳＡには、８７．９２−６の結合に対する阻止作用が皆無であ ることが立証されている。これらのデータは、レオウィルス３型受容体とのＶＬ ペプチドの直接的な相互作用を示すものであって、８７．９２．６の■Ｌ鎖の４ ６〜５５番目の残基、および３型σ１蛍白質の３２３〜３３２番目の残基が、レ オウィルス３型受容体と直接的に作用し合うことを意味している。 レオウィルス３型の結合は、受容体の撹乱の際の宿主細胞ＤＮＡ合成を阻害する レオウィルス３型は、受容体の撹乱の際の宿主細胞のＤＮＡ合成を阻害する。こ のような作用は、複製を不完全に行うレオウィルス３型粒子もこの特性を保持す ることから、細胞の感染によるものではない。９６穴微量力価測定プレートの穴 のそ。れぞれに、５ｘｌＯ’個のし細胞を培養液１００ｊｔに慇濁させて、２４ 時間培養する。（Ａ）レオウィルス３型粒子を加えて、更に２４時間温５し、ト リチウムチミジンを加える。（Ｂ）精Ｈモノクローナル抗体の８７、９２．６ま たはＨＯ２２，１を加えて、３７℃で１時間製置し。 次いで、培ＩＩ液を除去、新鮮な培養液１ｏｏｓｅと交換して２４時間温５し、 トリチウムチミジンを加える。細胞を更に４〜６時間温置満面取り込まれた放射 能のＣＰＭを測定する。マウス繊維芽細胞に対するレオウィルス３型のこの作用 を第８図に示す。（レオウィルス３型に対する特異的な受容体を有する）マウス 繊維芽細胞（Ｌ細胞）を、レオウィルス３型を加え、あるいは加えずに、温置す る（第８図Ａ）。２４時間後にＤＮＡ合成の程度を測定する。 レオウィルス３型は、細胞によるＤＮＡ合成を顕著に阻害する。第８７已に示し た通り、８’１９２．６にもこれらの細胞に対する同様な作用がある。この実験 では、し細胞を抗体に接触かつ付着させたまま１時間増殖させ、その時点で、抗 体を除去し、細胞を更に２４時間培養した後、ＤＮＡ合成を測定したが、対照用 抗体（ＩＯ２２，１）の作用は皆無であった。８７．９２．６は、繊維芽細胞、 ニューロン細胞、およびリンパ球によるＤＮＡ合成を同様に阻害した。 レオウィルス３型受容体に対する２量体ペプチドの結合＼１１ペプチドは、レオ ウィルス３型および８７．９２．６が示すのと類似の生物学的作用を示すのでは ないかとも孝えら九な。３７．９２．６は、先天的な抗体としてのみｆヤ用があ るが、ｑｔｚ体のＦａｂフラグメントには作用がない。ｖ１ペプチドを、アミン 末端にシスティン残基が付加されるように合成しくＶ、、Ｓ旧、２量体ペプチド を形成する。０．１モルの重炭酸アンモニウムに＼’　ｂｓＨを５ｍｇ／＋ｌと なるように加えた溶液を空気に曝しつつ、２３℃で１晩撹拌すると、Ｖ　、、Ｓ Ｈペプチドが２量体化する。次いで、ペプチドを凍結乾燥する。２量体化の確認 には、エルマン（Ｇ、　Ｌ。 Ｅｌｌｌｍａｎ）の方法［アーカイブス・オフ・）くイオケミストリー・アンド ・バイオフィジックス（Ａｒｃｈ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ。 Ｂｉｏｐｈｙｓ、）　、第７４巻（１９５８年）４４３ベージ］によるエルマン 定量法を用い、未結合スルフヒドリル基は５％未満であることが示される。Ｌ細 胞を１０％のＦＢＳを含有するＤＭＥＤに１ｍｌあたりの細胞数を１０６として 慇濁し、９６穴微量力価測定プレートの穴に５０ｐ９ずつ加える。２４時間の培 養後、ペプチドを図示の濃度で加え、細胞を更に２４時間培養する。トリチウム チミジンを加えて、更に４〜６時間培養し、取り込まれた放射能のＣＰｋｌを測 定する。阻害の百分比は次式を用いて算出する。 １令加しない場合のａ〜 用いたペプチドのアミノ酸配列は、下記の通りである。 ＼’　＋、：　　　　　　Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｌ３ｓ−Ｔｈｒ−八５ｎ− Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−１１ｅ−Ｔｙｒ−３ｅｒ−Ｇｌｙ|３ｅｒ− Ｔｌｒ（ｅｕ−Ｇｌｎ ＼’＋ＳＩＩ：　　Ｃｙｓ−１ｙｓ−Ｐｒｏ（；１ｙ−１ｙｓ−１１ｒ−Ａｓｎ （ｙｓ（ｅｕ−１−ｅｕ−１１ｅ−Ｔｙｒ−３ｅｒ−Ｇｌｙ| あ−ηｙ−ｌ−ｃｕ−Ｇｌｎ 対ｊ！！１．　：　　Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｌｙ−Ｔｙｒ４ｒｏ（ｙｓ−（；ｌｕ −Ａｓｐ−Ｔｌｙ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｍ３’ｉ’ｓ１６図に示した通り 、Ｖ、、ＳＨをし細胞に投与した場合、ＤＮＡ合成の著しい阻害が認められる。 （システィン残基が付加されていない）■１．ペプチド単量体のし細胞の増殖に 対する作用は皆無である。対照として用いた数種のペプチドにも、この検定にお ける作用は皆無である（第１６図）。このことから、Ｌ細胞のレオウィルス３型 受容体の凝集が、これらのペプチドによるＤＮＡ合成の阻害に不可欠であること がわかる。 ペプチド２量体によるレオウィルス３型受容体のダウンモジュレーション ８７、９２．６によるある種の細胞における°レオウィルス３型受容体の凝集は 、細胞表面からの受容体の消失を招くことがある。ＶｃＳＨペプチドは、これに 類似したダウンモジュレーションをこの受容体に行うのではないかとも考えられ る。これを実験するために、充分に特性記述されたレオウィルス３型受容体を有 するマウス胸腺腫（ＲＬＩ）細胞を用いた。下記の方法に従って、レオウィルス ３型受容体（８７，９２，６によって認識される）、およびＴｈｙｌ、２分子（ ＩＯ１３，４によって認識される）の双方の発現程度に対するペプチドの作用を 流動細胞計測法で測定して調べる。Ｒ１，ｌ細胞を、（Ａ）図示の濃度のペプチ ドとともに、ＣＢ）未処理のまま、あるいは（Ｃ，Ｄ）　５００ｇｇ／ｍｅのペ プチドで処理して、３７℃で１時間培養する。細胞を遠心分離し、０．１％のア ジ化ナトリウムを加えた１％ウシ血清アルブミンの燐酸緩衝食塩水溶液（ＦＡＣ Ｓ培地）で３回洗浄する。　８７．９２．６モノクロ一ナル抗体（親和力で精製 した抗体　１００μＱ）を加えて、氷上に３０分間保つ。 次いで、細胞を洗浄し、フルオレセインで標識したヤギ抗マウスＩｇ［アラバマ 州バーミンガム所在、サザン・バイオテクノロジー・アソーシエイ”／　（Ｓｏ ｕｔｈｅｒｎ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ）社製］の １００分の１希釈液１００ｕｊ２を加えて３０分間保つ、細胞を洗浄し、流動細 胞計測法を用いて蛍光強度を分析する。１吹拭体の存在または不在下で温置した 細胞について、チャネル螢光度の平均を算出し、これを比較する（第３０図Ａ　 ）　、　Ｔｈｙ　１．２分子と結合するＨＯＩ３．４を用い（第１６図Ａ−Ｄの 左側のグラフ）、あるいは、レオウィルス３型受容体と結合する８７．９２．６ を用いて（第１６図Ａ−Ｄの右側のグラフ）細胞を染色する。また、ｖＨペプチ ドで（第１７〜１８図のグラフ）、あるいはＶＬＳ）Ｉペプチドで（第１８〜１ ９図のグラフ）細胞を処理するｅｖＨペプチドの配列は下記の通り。 Ｃ１：　Ｃｙｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−ＧＬｎ−１１ｅ−Ｇｌｙ− Ａｒｇ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ Ｖ　ＬＳ　Ｈペプチドの配列は、第１６図に関して記載したものと同一である。 第２０図に示した通り、Ｖ、Ｓｔ（ペプチドは、投与量依存的な挙動で特異的に レオウィルス３型受容体のダウンモジュレーションを行うが、これらの細胞にお けるＴｂｙＬ、２分子の発現に作用することはなし為、このダウンモジュレーシ ョンは、ＶＬＳＨペプチドの直接的な生物学的作用であって、実験の設定条件に おける他の要因によるものではない、用いた対照ペプチド（ｖ１１ベブヂド）は 、これらの細胞におけるレオウィルス３型受容体の、あるいはｒｈｙ　１．２分 子発現の程度に作用することはない。Ｖ　１１ペプチドは、８７．９２．６４　 鎮ｃＤＲＩＩに由来するので、レオウィルス３型受容体と特異的に作用し合うこ とはない。この形態でのＶ、、ペプチドは、これらの細胞との結合に際して８７ ．９２．６と競合しないが、他の形態のｖＬペプチドは、８７．９２．６の結合 を阻害する可能性がある。その上、第２０図に記載の研究においては、細胞は、 完全に洗浄して遊離Ｖ　ＬＳＨペプチドを除去してから流動細胞計測法にかけて いる。これらのデータは総体として、レオウィルス３型受容体との結合に関する 競合は、８７．９２．６を用いての染色性が減少することの原因ではないことを 示している。発明者らは、レオウィルス３型受容体のダウンモジュレーションが 、この現象の原因であるとの結論に達した。 受容体のダウンモジュレーションは、第１１図に示す通り、受容体の凝集に左右 される。■１．ペプチド単量体の作用とＶ　ＬＳＨペプチドのそれとを比較する ３様の実験のデータを示す。上記の要領で、Ｒ１，ｌ細胞をペプチド（１０（ｌ ｐｇ／ｍ９）、あるいは８７．９２．６　（腹水の１＝１希釈液）テ処理し、レ オウィルス３型受容体（Ｓ７．９２．６）　、あるいはＴｈｙ　１．２分子（Ｉ Ｏ１３，４）の発現を分析する。平均チャネル螢光度の減少の百分比は、下記の 要領で算出する。すなｉ）ち、ペプチドまたは抗体で処理した細胞の平均チャネ ル螢光度を、未処理細胞のそれから減じ、これを未処理細胞の平均チャネル螢光 度で除する。得られた値を１から減じ、１００を乗じるのである。ペプチドで処 理した細胞については、１法統体の存在または不在の下でペプチドで２埋した細 胞について、平均チャネル螢光度を算出する。抗体で処理した細胞については、 １法統体の存在下で抗体で処理した細胞の平均チャネル数から１法統体の不在下 での未処理細胞の平均チャネル数を減じることによって算出する。抗体で処理し 、次いで、１法統体で染色することなく分析した細胞は、未処理の細胞と比較し て、平均チャネル数が増加している。３様の実験における平均値上標準偏差をペ プチドで処理した細胞について示す。これらの実験に用いたペプチドの配列は下 記Ｔ）ｙ−Ｌｅｕ−Ｇ　Ｉｎ Ｖ、ＥＨ：　　Ｃｙｓ（ｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ（ｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ｙｓ（ ｅｕ（ｅｕ−１１ｅ−Ｔｙｒ−３ｅｒ−Ｇｌｙ−３丁−ηｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ 対照：　　Ｃｙｓ−昭−Ｔｙｒ−ｋｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｇ　１ｕ−Ａｓｐ−Ｔ ｈｒ−Ａ　ｌａ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｒｇ■、ペプチド単量体には、レオウィル ス３型受容体の発現に対する作用がない。Ｖ　、、ＳＨペプチドは、レオウィル ス３型受容体の発現に対して、Ｔｈ＞−１，２分子の発現に作用することなく特 異的にグウンモジコ、レーションを行う。＼！　、、５１１ペプチドの作用は、 　８７．９２．０のそノむと類仰、シている（第２１図）。結果から、レオウィ ルス３型受容体に対する＼／　１．ｓｌｌペプチドの作用の特異性が示され、こ のようなｆヤ用の誘導には、受容体の凝集がある種の役割を果たしていることが 確認さｔＬる。 ■１ペプチドとレオウィルス３型受容体との相互作用に関与する■１．ペプチド の特定残基の役割共通領域が確定されたので、推定される■１．ペプチドの結合 ドメイン内のいくつかの位置で置換した変形ペプチドを合成し、このような形態 のペプチドが及ぼす細胞生理学的作用を調べた。これらの研究から、１１番目（ Ｔｙｒ）　、１２番目（Ｓｅｒ）　、１４番目（Ｓｅｒ）、および１５番目（Ｔ ｈｒ）に位置するヒドロキシル基が、レオウィルレス３型受容体との直接的な相 互作用に関与している可能性が示された。この領域は、ｖＬペプチドとレオペプ チドとの間で同一アミノ酸が最も多く共有される領域である（第１表を参照のこ と）。変形ペプチドは、１１−１６番目の位置、すなわち結合ドメインと思われ る■、ペプチドの領域のアミノ酸が置換されている。このような形態のペプチド の細胞生理学的作用を調べるため、レクチンで誘導される有糸分裂誘導を利用し て、受容体の撹乱（ペプチドによる）および凝集（レクチンによる）の双方が誘 導できるような系を用意した。 ペプチドによるリンパ球増殖の阻害 レオウィルス３型、および抗しオウィルス３型受容体抗体は、両者ともコンカナ バリンＡ　（ｃｏｎ　Ａ）によって誘導されるリンパ球増殖を阻害することが立 証さ１１ている［不ボ１１ら：イミュノロジック・リサーチ（１ｍＩＴｌｕｎｏ ｌ。 Ｒｃｓ、）、第１（１９８２年）２５５ベージ；シャ７ブＪｉよびフィールズ： ジャーナル・オフ・ピロロジー、第３８巻（１９３３年）３８９ページ；フオン タナ（Ａ、　Ｆｏｎｔａｎａ）およびワイナー（Ｈ，Ｌ、　Ｗｅｉｎｅｒ）　　 ：ジャーナル・オフ・イミュノロジー、第１２５巻＜　１９８０年）　２．６６ ０ページ］。下記の方法を用いて、コンカナバリンＡの存在下および不在下の双 方でのリンパ球増殖に対する、これらのペプチドおよび変形ペプチドの作用を調 べた。メスのＣ３Ｈ系マウスの牌細胞を単細胞慇濁液として調製し、コンカナバ リンＡの（Ａ）不在下、（Ｂ　）　２．５ｕｇ／　ｓ豐の濃度での存在下で、図 示の濃度のペプチドとともに培養する。７２時間後にトリチウムチミジンを加え 、更に１８時間後に細胞を回収して、取り込まれた放射能のＣＰＭを測定する。 阻害百分比を第１６図に関してと同様にして算出する。用いたペプチドは、第１ ６図の関して記載のものと同じである。コンカナバリンＡの不在下においては、 ＶＬＳＨペプチドは自発的なリンパ球増殖を顕著に阻害するが、ｖＬペプチドに は有意な作用がない（第乙図　参照）。しかしながら、コンカナバリンＡの存在 下においては、Ｖ　、、ＳＨペプチドと＼ｌ、ペプチドとは、リンパ球増殖の阻 害については類似の作用がある（第２３図　参照）。 第Ｕ図に示す通り、１２番目および１５ｉ目の位置にヒドロキシル基を欠く変形 ペプチド（それぞ／ＪＬ　ｖ　１．Ａ１２およびＶ、、Ａｌ１として示す）を用 いた場合、コンカナバリンＡで誘導されるリンパ球瞠殖の阻害は弱められる（第 ２４図　）。 リンパ球増殖は、第２２図に関して記載したと同様にして測定し、用いたペプチ ドは下記の通りである。 Ｖ、：　　Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ（ｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ｙｓ（ｅｕ（ｅｕ −［１ｅ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−３ｅｒ−Ｔ）ｒ（ｅｕ−Ｇｌｎ Ｖ、ＦＩＬ：　Ｌｙｓ（’ｒｏ−Ｇｌｙ（ｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｓｒｄｙｓ（ｅｕ（ ｅｕ（Ｉｅ−Ｐｈｅ−３ｅｒ−Ｇｌｙ−５ｅｒ−Ｔｈｒ（ｅｕ−（；ｌｎ Ｖ　、Ａ１２　：　Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ（ｙｓ−Ｔｈｒ−線上５（ｅｕ−Ｌ ｅｕ−１１ｅ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−３ｅｒ−Ｔ）ｙ（ｅｕ−ＧＩｎ Ｖ　、、Ａｌ３：　Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ（ｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ（ｙｓ（ｅ ｕ−Ｌｅｕ−１１ｅ−Ｔｙｒ−３ｅｒ−Ａｌａ−３ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｇｉ ｎ ＶｆＡ１５：　Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ（ｙｓ−Ｔ）ｒ−Ａｓｎ（ｙｓ（ｅｕ− Ｌｅｕ−１１ｅＴｙｒ−３ｅｒ−Ｇｌｙ−５ｅｒ−Ａｌａ（ｅｕ−Ｇｌｎ このことは、これらのアミノ酸残基が、受容体の撹乱に決定的に重要な相互作用 に関与しており、増殖の阻害を招くことを示している。１１番目（Ｔｙｒ）　、 および１４番目（Ｓｅｒ）の位置のヒドロキシル基は、このような細胞活性に対 してさしたる作用はないらしい（第２５図　）。 ｖＬペプチドの推定上の結合ドメイン内の、１３番目の位置でグリシンとアラニ ンの置換を行ったペプチド（Ｖ、。 Ａｌ３）も試験した。前記の他の位置での置換とは対照的に、用いた濃度の何種 類かにおいてＶ、、Ａ１３には、フンカナバリンＡで誘導されるリンパ球Ｎｔｉ 殖の阻害に対して。 より強いずや用がある（第２５図　）。このＶ、、Ａｌ３なるペプチドはまた。 これらの細胞に対するレオウィルス：３型受容体の作用を模倣するとノど、ｉフ れる９１３Ｇ５モノクロ一ナル抗体との結合力も強い。こね、らの研究から、＼ 偽ベブヂドの改造によって、受容体の撹乱に必要な特定の残基を同定することが でき、生物学的活性の強化と抑制の双方が施された変形ペプチドの開発の道が開 かれることがわかる。 ペプチド存在下での８７．９２．６に対する９８Ｇ５の競合的結合ポリスチレン の穴に、ｐＨ９，５，０，１％の重炭酸ナトリウム溶液でｌｐｇ／ｍｔに希釈し た精製抗体（ヤギ抗マウス１ｇＭのカラムを用いてＭ製）を各穴に５０ｐｔずつ ；主入し、４℃に１晩保って、精製８７．９２．６．および、対照用の）１０２ ２．１なるＩｇＭ、　Ｋ抗体の塗膜を形成する。穴を洗浄し、０．１％のアジ化 ナトリウムを加えたＢＳＡの２％ＰＢＳ溶液を用いて遮蔽を行う。再び穴を洗浄 し、（第３図に示した濃度の）放射性沃素化９８Ｇ５およびペプチドの混合液を 加えて、３７℃で１時間温置する。次いで、穴を洗浄し、計数を行う。 すべての実験例において、　８７．９２．６を塗布した穴に結合したＣＰＭから ＢＳＡのみ塗布したブランクの穴に結合したＣＰＭを減じて、特異的ＣＰＭを算 定する。第２６図に示す通り、ＨＯ２２，１マウス不適正１ｇＭ、　Ｋ抗体を塗 布した穴に対する”’ｌ−９８Ｇ５の結合はフ゛ランクの穴に対する結合と同程 度である。阻害剤の不在下で結合した特異的ＣＰλ１から阻害剤の存在下で結合 した特異的ＣＰλ１を減じ、こ九を阻害がｊの不在下で結合したＣＰλ１で除し 、青らｌｔた値にｌＯＯを乗じて阻害百分比を算出する。２回の実験がら得ら／ −した値の平均値上標準誤差を第２６図に示す。 ■、ペプチドによる９８Ｇ５に対するレオウィルス３型粒子の結合の阻害 葡萄球菌のプロティンＡ　（ＳＰＡ）に対する吸着を利用して、微量力価測定用 プレートの穴に、９８Ｇ５抗レオウイルス３型モノクロ一ナル中和抗体、あるい はＡｌｌ不適正種属適合モノクローナル抗体の塗膜を形成する。ＳＰＡ　［ミズ ーリ州セントルイス所在、シグマ・ケミカル社（ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌ　 Ｃｏ、）製］をｐＨ９，６の０．１モル重炭酸ナトリウムで５ｓｇ／ｍｔに希釈 し、９６穴ポリスチレン製プレートの穴のそれぞれに５０ｐｌずつ注入する。４ ℃に１晩保った後、穴の内容を静かに捨て、　ＰＢＳで３回洗浄し、０．１％ア ジ化ナトリウムを加えたＢＳＡの０．２％ＰＢＳ溶液を加えて３７℃で１時間温 置して、遮断を行う。穴の内容を靜かに捨て、ＰＢＳで３回洗浄し、０．１％ア ジ化ナトリウムを加えたＢＳＡの１％ＰＢＳ溶液でｌｈｇ／ｍｔに希釈した９８ Ｇ５モノクロ一ナル抗体を加え（各穴に５０ｐｇ）で、３７℃で１〜３時間時間 温石。従来の研究から、このような量のＳＰＡおよびマウスＩｇＧ２ａモノクロ ーナル抗体は、穴の抗体吸着炭が最大であることが明らかにされている。穴の内 容を靜かに捨て、ＰＢＳで３回洗浄する。０．４５％の塩化ナトリウムを含む５ ミリモルの燐酸緩衝液に溶がした０、５％のＢＳＡで希釈した競合剤を、図示し た濃度で加え（各穴ｌｏｏ＃ｅ）　、　２３℃で４５〜６０分間の前部室を行う 。対照実験から、これらのペプチドは、穴に結合しているモノクローナル抗体に は作用しないことが示される。阻害剤を加えた前部室に続いて、０．１％アジ化 ナトリウムを加えたＢＳＡの１％ＰＢＳ溶液で希釈した、放射性沃素化しオウイ ルス３型粒子を加Ａ　（各穴ニ５〜１０ｘ　１０’ＣＰＭ）　、４５分間温間を ！！！続する。穴の内容を静かに捨て、ＰＢＳで８〜１０回洗浄し、結合ＣＰＭ を測定する。■、ペプチドは、９８Ｇ５とのレオウィルス３型粒子の結合を阻害 する。第２７図に示す通り、阻害剤の不在下においては、９８Ｇ５を塗布した穴 には６．７０［ＩＣＰＭが結合し、対照（Ａｌｌ）を塗布した穴には５０　Ｄ　 ＣＰ　Ｍが結合した０反復実施した穴の結合阻害度（第２６図に関する記載と同 様にして算出）の平均１１士標準偏差を示す、この研究には、対照ペプチドとし てＢが用いられた。第２７〜２９図の競合ペプチドは、ここに記載のものと同一 である−　ＶＬＡ６競合ペプチドは、６番目に位置するアスパラギンをアラニン で置換した以外は、■Ｌと同一である。競合ペプチドは、９８Ｇ５とのしオウイ ルス３型粒子の結合を阻害する。 ０、１％アジ化ナトリウムを加えたＢＳＡの１％　ＰＢＳ溶液にＬ細胞を１０’ 　／ｍρとなるように懸濁し、９６穴微量力価測定用プレートの穴のそれぞれに ５０μｌ２（５ＸＩＯ’細胞）を加えて、図示した濃度の阻害剤とともに２３℃ で４５〜６０分、前部室する１等量の入力ＣＰＭを有する放射性沃素化したしオ ウイルスの３型、ｌ型、あるいはに変異株粒子を５０μΩずつ加え（各穴に７０ ０．０００〜１．２５０．０００ＣＰＭ）　、４５分開、温満面６．０．１％ア ジ化ナトリウムを加えたＢＳＡの１％ＰＢＳ溶液で細胞を３回洗浄し、第１４図 について記載の要領で、結合した特異的ＣＰＭを算定する。第３０〜３２図に示 した通り、ｖＬペプチドは、Ｌ細胞に対するレオウィルス３型およびに変異株の 結合を阻害する０反復実施した穴における結合の阻害百分比の平均値上標準偏差 を、競合剤の最終濃度と対比して示す、第３２〜３３図に示した通り、■Ｌ変形 ペプチドは、マウスＬ細胞とのしオウィルス３型の結合をも阻害する。 ペプチドによる感作によるしオウィルス紡Ａ　　の２導ｖＬペプチド、およびレ オペプチドには、しオウィルス３型とその特異的細胞受容体との間の相互作用に 関与するエピトープが含まれている。これらのペプチドが、しオウイルス３型と 作用し合って、感染を阻止することのできる抗体を誘導するかどうかを調べるた め、これらによるマウスの感作を行った。これらの合成ペプチドを用い、実験手 順の項に記載の要領で、Ｂａ１ｂ／ｃ系マウス群を感作する。４匹のマウスから なる群に、アジュバントに溶かした対照ペプチド、ニワトリ血清アルブミンとカ ップリングさせてアジュバントに溶かした■、ペプチドい”じＣ５Ａ）、Ｃ，Ｓ 　Ａとカップリングさせてアジュバントに溶かしたｖＬおよびｖＨペプチド（Ｖ Ｌ”Ｖ）Ｉ−ＣＳＡ）　、アジュバントに溶かしたレオペプチド、あるいは、ア ジュバントなしのレオペプチドのいずれかを投与する。正の対照として、レオウ ィルス３型を注射したマウスの群を更に設ける。下記の通り、これらのマウスの ５作前の血Ｗｔには、レオウィルス中和抗体が見出されず、これに先立つウィル スとの接触は皆無であることを示している。 放射線免疫検定法によれば、すべての実験例において、感作抗原に対する強い応 答が認められる（データは示さず）。レオウィルス３型およびｌ型に対する免疫 血清の結合状況（６０日）を第３図に示す、ウィルスを塗布したプレートに結合 したＣＰＭからブランクのプレートに結合したＣＰＭを減じることによって、特 異的な結合を算定する。更に補正のため、ウィルス塗布のプレートに対する正常 マウス血清の特異的な結合をも減じる。説明を単純化するために、４群の動物、 すなわち、対照ペプチドで感作したもの、Ｖ　、−Ｃ３Ａで感作したもの、Ｖ□ ＋Ｖ　Ｌ−ＣＳＡで感作したもの（すべてアジュバント使用）、および、アジュ バントなしにレオペプチドで感作したものについて、特異的結合を示す。アジュ バントを用いてレオペプチドで感作したマウスは、アジュバントを用いてＶ　Ｌ −ＣＳＡまたはＶ　＋＋＋　Ｖ　ｔ、−ＣＳＡ”ｒ５作したものと類似の応答を 示した。レオウィルス３型で感作したマウスは、レオウィルス３型に対する強い 応答を示しく１，０００分の１希釈血清の特異的ＣＰＮｌが１０．４２８±８０ ７）　、　レオウィルスｌ型に対しても顕著な交叉反応性を示した（１．０００ 分の１希釈血清の特異的ＣＰｋ＋カ６．９７６±９１５）　、第３図ニ示す’１ ＴＩ　Ｑ、対！！！ペブヂドで感作したマウスの血清は、用いら、ＬＨ−ないが なる血清希釈率にｉｉいてもレオウィルス３型あるいはｌ型を塗布したプレート とは、ノ）ずかに結合するのみである。 対！！ｒｉ的に、レオウィルス３型あるいはｌ型を塗布したプレートどの免疫血 清の顕著な結合が、＼／１．−ＣＳＡ、　ｖ＋汁＼１ｌ−Ｃ５Ａ、あるいはレオ なるペプチドで感作したマウスにおいて示される。予期された通り、レオウィル ス３型との結合は、いくらかの交叉反応性は見られるものの、レオウィルスｌ型 との結合よりも有意に高い。レオウィルス１型との結合は、実験に用いたペプチ ドと、ｌ型のσｌａ景白質との間で１次配列が相同な領域が存在するためである ように思われる［マネミッ（Ｓ、　Ｍ、　Ｍａｎｅｍｉｔｓｕ）　、アットウォ ーター（Ｊ、　Ａ、　Ａｔｗａｔｅｒ）　、およびサミュエｌしくＣ，Ｅ。 Ｓａｍｕｅｌ）　　：　　ｒレオウィルスに特定されるポリペプチドの生合成。 ／ａ微量キャプシドポリペプチド、および１６ＮＳ非構造ポリペプチドを暗号化 しているレオウィルス血清型１０ング株の双シストロン性５１ｍＲＮＡのｃＤＮ Ａ分子クローニン乙およびヌクレオチド配列（Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ 　Ｒｅｏｖｉｒｕｓ−Ｓｐｅｃｉｆｉｅｄ　Ｐｏ１ｙｐｅｐｔｉｄｅｓ、　Ｍｏ １ｅｃｕｌａｒ　ｃＤＮＡ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄＮｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　５ ｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｒｅｏｖｉｒｕｓ　５ｅｒｏｔｙｐｅ　ｌ　Ｌ ｏｎｇＳｔｒａｉｎ　Ｂｉｃｉｓｔｒｏｎｉｃ　５１ｍＲＮＡ　Ｗｈｉｃｈ　Ｅ ｎｃｏｄｅｓ　ｔｈｅ　ＭｉｎｏｒＣａｐｓｉｄ　Ｐｏ１ｙｐｅｐｔｉｄｅ　／ ａ　ａｎｄ　ｔｈｅ　Ｎｏｎ５ｔｒｕｃｔｕｒａｌ　Ｐｏ１ｙｐｅｐｔｉｄｅ１ ６ＮＳ）　Ｊ　、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミ ュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ。 Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、）、第１４０巻（１９８６年＞　５０１−５１０ベー ジ］。 これらの結果から、レオウィルス３型の７１１足される中和エピトープ、あるい はモノクローナル抗受容体抗体の対応するエビ１−−プがらモデル化されたペプ チドを用いたマウスの感（１ｉが、レオウィルス結合性抗体を誘導することが示 される。 ペプチドで感作したマウスの免疫 血清によるウィルス感染力の中和 ペプチドで感作した動物の血清を３時点で検定して、し細胞のウィルス６染力に 対するその作用を評価した。 感染力の中和の検出には２種類の検定を用いた。一方は、９６穴微量力価測定用 プレートの穴に付着させて増殖させたし細胞のウィルス性溶解に対する血清の作 用を、生体染色を用いて定量する直接的細胞毒性試験であり、他方は、ウィルス 、および軟寒天中のし細胞を用いて、血清によるプラーク形成の阻害を定量する ことである。直接的細胞毒性試験の結果を籠トロに示す。用いた動物すべての感 作前血清を検定し、レオウィルス３型および１型によるし細胞の溶解に対して顕 著な作用は皆無であることを確認する。正の対照として、レオウィルス３型で感 作したマウスの血清を用い、これがレオウィルスによる３型およびｌ型の双方の ウィルスによる溶解を強力に阻害するが、３ｇ！：！ウィルスによる溶解に対し て選択的に作用することが明らかＣ二され、２０日および６０日０におけるレオ ウィルス３型に対する中和力価が１：５１２であるのに対して、２０日および５ ０日０（ｉｉけるレオライｌレス１１５に対する力価は、それぞａｌ：３４２お よび１：２５６である。 Ｚ、ｆ照ペプチドで感作した動物の血清は、しオウイルス１型あるいは３ｆ！： ！によるし細胞の溶解に対する作用がない。 アジュバントを伴い、あるいは伴わずに、＼’　ｔ−Ｃ３Ａ、　ｖｎ＋　Ｖ　を −Ｃ３八、あるいはレオペプチドで感作したマウスの血清は、レオウィルスｌ型 ではなく、３型によるし細胞の溶解を特異的に中和する（第４図Ａ対第４図Ｂ） 。アジュバントの存在または不在下でレオペプチドを用いて感作した動物の血清 についても結果は同様であることから、？＆者の群における結果のみ示す。この ような作用は、これらのマウスの血清をプラーク形成の阻害試験に用いた場合に も見られる。’Ｊｉ　ト１　＠に、アジュバントなしにｖ、−Ｃ３Ａ、　Ｖ　、 、　＋　Ｖ　Ｌ−ＣＳＡ、あるいはレオペプチドで感作した群からの１型および ３型のウィルスについての、５０％の大型プラーク阻害を起こす血清力価の逆数 を示す。ここでも、１型ではなく３型のウィルスによるプラーク形成の特異的な 阻害が認められる。ペプチドで感作した血清は、１型ではなく３型ウイルスの感 染力を特異的に阻害するのであるから、これらのペプチドは、レオウィルス３型 に存在する中和エピトープを示しているのである。 ペプチドを用いた感作によるレオウィルスに対する遅延型Ａ敏症（ＤＴＨ）の発 症 従来の研究によって、レオウィルスの１５染に対するＤＴＨ応答の特異性には、 σｌなるポリペプチドが関与することが立証されている［ワイス（ｔ（、Ｌ、　 １Ｖｅｉｓｓ）　、　グリー７、およびフィールズ＝　「レオウィルスに感染し たマウスに対する遅延型過敏症、免疫応答の原因となる宿主およびウィルスの遺 伝子産生物の同定（Ｄｅｌａｙｅｄ　ＴｙｐｅＨｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔ ｙｔｏ　Ｍｉｃｅ　Ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｒｅｏｖｉ＋ｒｕｓ。 Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　）ｌｏｓｔ　ａｎｄ　Ｖｉｒａｌ　Ｇｅ ｎｅ　ＰｒｏｄｕｃｔｓＲｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｉ＋＋＋ｍ ｕｎｅ　Ｒｅ５ｐｏｎｓｅ）Ｊ　、ジャーナル・オフ・イミュノロシー、第１２ ５巻（１９８０年）２７８〜２８２ページ〕、それ故、これらのペプチドを用い たマウスの感作が、正常なしオウイルスに対してＤＴＨ応答を引き起こすかどう かを調べた。第１３〜１４図に示す通り、■、ペプチドを用いた感作によって、 しオウイルス３型に対する顕著なりＴＨ応答が誘導される。これらの動物は、レ オウィルスＩ型に対しては顕著なりＴ）！応答を示さないことから、この応答は 型特異的なものである。再選別体ウィルスを利用することで、０１蛋白質に対す る応答を位置づけることができる。更に、３型のウィルスで動物を感作すると、 ＶＬペプチドに対して顕著なりＴＨが発症するようになる。しオペチドで感作し たマウスの牌細胞において、レオウィルス３型に対する型特異的な増殖性応答の 存在をも、発明者らは最近明らかにした。これらのデータは、ｖ５およびレオペ プチドが、しオウイルス３型に対するＴ細胞性免疫に関与する重要なエピトープ を表していることを示している。 上記によって、レオウィルス３型の０１ポリペプチドと、８７．９２．６モノク ロ一ナル筑受容体抗体との間で配列が相同であるｆＩ域によって画定される合成 ペプチドは、このウィルスと、　９８Ｇ５中和抗体との相互１＋＝用に関与する 抗体とにあるエピトープを示し、中和抗体を発現させ、かつ、丁細胞性免疫を誘 導することが明らかにされた。 更に、これらのペプチドの１種である＼／、は、ｐ、ｔ、を細胞にあるレオウィ ルス３型の受容体に対する８７．９２．６の結合と競合することも明らかとなっ た。８７．９２．６は、Ｒ１，１細胞に対するレオウィルス３型の結合と競合す る［カウフマンら：前出（１９８３年）］ことから、ウィルスのこのエピトープ は、レオウィルス３型の受容体との直接的相互作用に関与していることが推測さ れる。このことは、ｖＬペプチドには細胞とのレオウィルス３型の結合を阻害す る能力があることによって確認される。（ｉＷれだ受容体が用いられる）レオウ ィルス１型の結合が阻害されないことは、レオウィルス３型の受容体との特異的 な相互１％用が存在することを示している。このエピトープは、σｌペプチドの ３１７〜３３２呑目のアミノ酸を包含することから、この知見は、血球凝集素の ４１９番目のアミノ酸の関与を、中和抗体に対するウィルスの耐性に［バラセル −デユービー、スブリッグス、タイラー（Ｋ、　Ｌ、　Ｔｙｌｅｒ）、およびフ ィールズ＝　「高速配列決定手法を用いたレオウィルス３型Ｓｌ二重鎖ＲＮＡセ グメントにおける弱毒性突然変異の同定（Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ 　ＡｔｔｅｎｕａｔｉｎｇＭｕｔａｔｉｏｎｓｏｎ　　ｔｌｌｅ　　Ｒｅｏｖｉ ｒｕｓ　　Ｔｙｐｅ　　３　　ＳＩ　　Ｄｏｕｂｌｅ−３ｔｒａｎｄｅｄ　　Ｒ ＮＡ　　Ｓｅ８ｍｅｎｔＷ’＋ｔｈ　ａ　Ｒａｐｉｄ　Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　 Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ＞　Ｊ　、ジャーナル０オブ・ピロロジー、第６０巻（１９ ８６年）６４〜６７ページ］、あるいは、このウィルスの組織親和性に［カイエ 、スプリ・ｌゲス、バッセルーデュービー、フイールズ、Ｊｉよびタイラー＝　 「レオウィルス３型（デイアリング株）の免疫選択された抗原を有する変異株の 病５彩成変化に関する遺伝学的根拠（Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｂａ５ｉｓ　ｆｏｒ　Ａ ｌｔｅｒｅｄ　Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆ　ａｎ　Ｉｍｍｕｎｅ−Ｓｅｌｅ ｃｔｅｄ　Ａｎｔｉｇｅｎｉｃ　Ｖａｒｉａｎｔ　ｏｆ　Ｒｅｏｖｉｒｕｓ丁Ｙ ｐｅ　３　（Ｄｅａｒｉｎｇ）」、ジャーナル・オフ・ピロロジー、第５９巻（ １９ｇ６年）　９０〜９７ベージ］求める他の報告とは一見対立するように思わ れる。これらの研究では、ウィルスは、中和抗体の存在下で成長するが故に選択 され［スブリッグスおよびフイールズ：　「血球凝集素抗原を有する変異株の淘 汰から得られたレオウィルス３型弱毒株（Ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ　Ｒｅｏｖｉｒ ｕｓ　Ｔｙｐｅ　３５ｔｒａｉｎｓ　Ｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｂｙＳｅｌｅｃｔｉ ｏｎ　ｏｆ　）Ｉｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ　Ａｎｔｉｇｅｎｉｃ　Ｖａｒｉａ ｎｔｓ）　Ｊ、ネイチャー（ロンドン発行）、第２９７巻（１９８２年）６８〜 ７０ページ］、また、抗体による中和に耐性を有するウィルスは、そのアミノ酸 配列が決定されている［／＜−７セルーデニービーら、前出＜　１９８６年）］ 。これらの結果における不一致の理由には、いくつかの可能性が考えられる。 ４１９番目のアミノ酸に関わる突然変異が、３１７〜３３２呑目のアミノ酸の立 体配置に対するアロステリ・アクな作用をｘｆ４発して、中和抗体の存在下で、 ウィルスの受容体との相互作用を許すのかも知れない。この上うな筋書きの場合 、３１７〜３３２呑目のアミノ酸は、ウィルス受容体および中和抗体との結合に Ｌｉｆ接的に関与するものと想、ゎれる。 ４１９番目のアミノ酸の突然変異は、この領域の立体配置にアロステリ・ツクな 変化を引き起こし、これが、中和抗体の存在下でもウィルスの受容体との結合を 可能にするものと２．われる。別の可能性としては、両方の領域がともにウィル ス受容体の結合に関与することも考えられる。 この場合には、σ１ポリペプチドの３次構造の中では、両領域が非常に近接して 存在するものと思われる。コンピュータモデル形成によれば、両者は血球凝集素 の「球状の頭部」領域に存在するものと推定されることがら、これは可能である ［バラセル−デユービーら：前出（１９８５年）］。４４１９番のアミノ酸の突 然変異は、受容体との血球凝集素のこの領域の相互作用を強化して、これによっ て、３１７〜３３２番目の残基に結合する中和抗体が受容体との結合を遮断する のに打ち勝つものと忠われる。他にも可能性が存在するが、このような問題の解 明には、σ１景白質の３次構造についてのより詳細な知見を待たねばならない。 これらの研究は、ワクチンの開発に直接関係する。微生物に存在する中和エピト ープ像を詳細に描き、全身的な使用に関わる危険性なしに、個体を１５染から効 果的に保護するような合成ワクチンの開発に資することができるのが非常に望ま しいはずである。このことは、病原体の構造は抗原的に著しく不均一であるが、 特定の細胞受容体に対する結合部位は保たれているような状況下では、特に有用 であると、ｌＴ１．わ？Ｌる。受容体と病原体との相互作用に関与する部位の決 定には、部（：Ｌ指向性の突然変異誘発、病原体産生物の配列に由来する１上べ 的なペプチドによる動物の感作なと、多様な方策が可能であり、かつ採用されて いる［エルダーら：前出（１９８７年）］。部位指向性突然変異誘発は、生物学 的作用に差異を生じさせる配列変化に関する特定の情報を生み出す一方で、配列 の差異から結果的に生じるアロステリックな作用が、誘導された作用を無効にす るという欠点も内包する。このような状況においては、ある遺伝子産生物の領域 における配列変化は、離れた部位の生物学的特性を変化させ、錯誤に導くような 情報を生じることがある。病原体産生物に由来する連続的なペプチドを用いた感 作によって誘発される抗体の作用を分析することは、特異的な情報が得られる確 実な研究指針ではあるが１時間がかかり、中和性の免疫応答を探り当てる前に非 常に多数のペプチドの分析を必要とするかも知れない。 発明の′Ｉｉ！：義 上記の実験から、ある抗原と、その抗原に対する抗イデイオタイプ抗体との双方 の対応する領域に見出されるペプチド配列に対応する配列からなる。生物学的活 性を有する合成ペプチドを製造する方法が明らかにされる。 レオウィルス３型の／７１細胞付着蛋Ｃヨ質と、　８７．９２．６抗受容体モノ クローナル抗体との間の配列上り）相同性の立証によって、レオウィルス３型の 中和りエピトープが定位された。これらの研究は、これに関与するエピトープが 、細胞のレオウィルス３型受容体とのウィルスの結合、および中和抗体の誘発に 関与するエピトープであることを確認するものである。 共通する領域が明確になりさえすれば、このペプチドの配列を修飾することによ って、他の生物学的活性ペプチドを調製することが可能となる。このような修飾 は、受容体に対する抗原の結合に関与すると考えられる領域にも加えられる。グ リシン（１３番目）、および、１１番目（チロシン）、１２番目（セリン）、１ ４番目（セリン）、および１５番目（トレオニン）の位置のヒドロキシル基は。 レオウィルス３型受容体との直接的相互作用に関与すると考えられている。共通 ペプチド配列からなるペプチド２量体にも生物学的活性がある。本明細書におけ る研究が示す通り、ｖＬペプチドの修飾によって、生物学的活性を強化し、ある いは抑制した両様の変形ペプチドの開発に道が開かれる。Ｖ　ＬＡ１２なるペプ チドは、モノクローナル中和抗体との結合力が減少し、レオウィルス３型受容体 との結合力が減少し、かつ生物学的活性が減少している。Ｖ　ＬＡ１５ペプチド は、モノクローナル中和抗体との結合力が増大し、レオウィルス３型受容体との 結合力が減少し、かつ生物学的活性が減少している。Ｖ、、Ａ１２のような変形 ペプチドは、免疫原として用いた場合、効果的な免疫応答を阻止する可能性があ る。しかしながら、場合によっては臨床的に有用である可能性もある。■１ペプ チド自体は、免疫原として用いた場合、効果的な免疫応答を誘発する可能性もあ るが、レオウィルス３禁受容体に対する＼／、ペプチドの直接的な作用は、宿主 にとっては有害である可能性がある。この場合には、中和抗体に結合するが生物 学的活性は低い、Ｖ、、Ａ１５のような変形ペプチドが免疫原として理想的であ る可能性があり、その理由は、中和抗体は誘発するであろうが、レオウィルス３ 型受容体に対して顕著な直接的作用があるとはだ、われず、また、宿主に対して 有害であるとも思われないからである。ある抗原と、その抗原に対する抗原イデ ィオタイプ抗体との双方に共通するペプチド領域を明確に定め、次いで、このペ プチドを修飾して、多少とも生物学的活性を有するペプチドを生成するという本 発明の基本方針は、他の受容体−リガント相互作用にも広く適用可能であるもの と思われる。 本基本方針はまた。宿主細胞の受容体部位と特異的に結合する部位を有する伝染 性生物に対して宿主噛礼頚を免疫感作する方法をも明らかにしている。この方法 は、レオウィルス３型の中和エピトープの比較的急速な決定を可能にしたことか ら、それに対する中和性免疫応答の立証が可能な他の病原体にも広く適用可能で あるものと、冒、われる。 本発明の事例において、レオウィルス３型は、咄ｆＬ類のアドレナリンβ受容体 に類似の構造と選択的に結合することが知られている。それに特異的な細胞受容 体！ニ村するある病原体の付着が、その病原体による感染という病態形成の際に 重要であるならば、本明細整に示した基本方針は、病原体−受容体相互（’Ｉ＝ 用に関与するオリゴペプチドのエピトープを決定するための能力をもたらすはず である。これはまた、他の、より広い意味での受容体−リガント相互作用にも連 用可能なはずであり、リガンドがペプチドである場合には、関与する結合エピト ープの決定を可能にするはずである。このような方策は、特定の受容体と予測可 能な仕組みで作用し合う生物学的活性物質の開発へと導くものと忠わ丸る。これ によれば、病原遺伝子産生物、例えば、哺乳類細胞の刑胞性受容体と結合するこ とが知られているレオウィルス３型を用いて、生物学的活性化合物を合成するの に有用な方法が開示される。この際、哺乳類のレオウィルス３型受容体における と同様、このような選択的結合の結果は、対象となる細胞の増殖、あるいは他の 代謝的機能に作用することになり、対象となる方法は、対象となる共通ペプチド 配列が含まれる合成ペプチド、あるいは生物学的活性を有するその変化形をその ような目的のために投与することによって、哺乳類細胞の増殖を変化させるため に、これを用いることができるのである。 本基本方針はまた、生物学的活性ペプチドの開発！ｉよび製造のための代替方法 をも提供する。第１７図に示−た通り、抗原（あるいｊよりガント）（５）の受 容体（１１）に特異的な抗体（１５）　：土、この抗原の抗イデイオタイプ抗体 本（９）が抗原（５）の作用を模倣するのと同じ仕Ｆｕみで、抗原（５）をも模 ｆ放する。Ｉなる経路において、抗体（７）は、抗原（５）の図示のような一般 的形態の中和エピトープ（１９）に相補的な図示のような一般的形態のエピトー プ（２１）を備えている。次いで、この抗体（７）は、別の抗体、すなわち抗イ デイオタイプ抗体（９）の形成に用いられる。これらの抗イデイオタイプ抗体（ ９）は、抗原（５）の中和エピトープ（１９）を模倣する図示のような一般的形 態の領域（２３）を有することになる。１１なる経路においては、細胞表面（１ ３）の受容体（１１）は、抗原（５）の中和エピトープ（１つ）に相補的な図示 のような一般的形態のエピトープ（２５）を備えている。したがって、この受容 体に特異的な抗体（１５）は、抗原（５）の中和エピトープ（１９）を模倣する 図示のような一般的形態の領域（２７）を備えることになる。 抗受容体抗体（１５）は、本明細書に記載の方法で、抗イデイオタイプ抗体（９ ）の代替物、あるいはそれの付加物として用いられることが可能であって、これ を用いて抗原またはりガントの特性を有する生物学的活性ペプチド（１７）を開 発、あるいは製造することができる。 一般に、ウィルスのような抗原には、多数の抗原性エピト−プが含まれているこ とから、リガンド、受容体、あるい：二抗リガンド抗体を用いた接種に応じて産 生さ九る抗体をふるい分けて、抗原の中和フ：と）・−プに対する特異性を有す る抗体を選択する必要があるから知１１ない。 ふるい分けは、細胞の受容体に対する抗原の結合をＩ；Ｊｌ害する抗体の能力を 測定する競合的検定を用いてこれを行うことができ、これらの抗体には、中和エ ピトープを含有または模倣する抗原の結合をより強く阻害する能力がある。適当 なふるい分けの方法としては、本明細書記載の方法などがあるが、異なる抗原と 受容体の組合わせが用いられる場合には、競合的検定には試薬を各種に変化させ る必要があることも、技術の習熟者には明らかであると忍われる。 本明細書に示した通り、レオウィルスのＨＡ３抗原に対する特異性を有する９８ Ｇ５中和抗体は、杭又容体活性を有する抗イデイオタイプ抗体を調製するのに用 いられた。 これらの抗イデイオタイプ抗体は、レオウィルス３型受容体とも結合する。抗体 のふるい分けを行い、抗原であるＨＡ３を模倣するエピトープを含むとされる受 容体との中和抗体の結合と競合し、あるいはこれを阻害する抗体を特定した。こ のような活性を有するある抗体の可変領域を、ＨＡ３抗原の配列と比較して、Ｈ Ａ３と受容体との相互ｆ′Ｆ−用の部位を規定する相同な領域を決定した。 抗イデイオタイプ抗体として産生された抗受容体抗体を用いる代わりに、受容体 自体もまた、抗原を模倣するエピトープを有する抗体を産生させるのに適してい る。 このような経路で抗体を産生させるには、典型的には蛋白質または糖蛋白質であ る受容体を、蛋白質単離の標準的手法、例えば、を用いて、受容体を有する細胞 がら単離する。次いで、精製した受容体を、慣用の手法を用いて、通常はモノク ローナル抗体である抗体を調製するのに用いる。動物、例えばマウスには、最初 に受容体を注射し２その牌細胞を取り出してから骨１ｉｆｉ腫と融合させて。 ハイブリドーマ細胞を形成させる。血清含有の培地で後者をクローン化させ、培 地からモノクローナル抗体を分離する。次いで、上記の通り、中和検定法を用い て抗体をふるい分け、中和エピトープで受容体部位と特異的に結合する抗体を選 択する。 １次構造の共通性と分子的な模倣性とを利用して、互いに作用し合うオリゴペプ チドのエピトープを規定する方策は、このように、生物科学において、分子間の 特異的相互作用を行う領域を画定し、かつ予測可能な生物学的活性を有する物質 の開発に資するための広い適用範囲を有することが明らかである。 当業界の技術の通常の習熟者には、その対象範囲から逸脱することなく、本発明 の化合物（ペプチド）に各種の変更を加えることが可能なことが理解される。例 えば、同じ種属のペプチド、すなわち、チュー（Ｃｈｕ）らの論文［「らせん、 βシート、およびランダムコイルの領域のアミノ酸に対する、蛍白質から算出さ れる立体配置パラメータ（Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ　ｌ’ａｒａｍｅｔｅ ｒｓ　Ｆｏｒ　Ａｍ１ｎｏ　Ａｃ１ｄｓ’＋ｎ　Ｉ（ｅｌｉｃａｌ、　Ｂｅｔａ 　５ｈｅｅｔ、　ａｎｄ　Ｒａｎｄｏｍ　Ｃｏ１１　ＲｅｚｉｏｎｓＣａｌｃｕ ｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）　Ｊ　’＋　バイオケミストリー（ ＢｉｏｃｈｅｍｉｓＬｒｙ）　、第１３巻第２号（１９７４年）２１１ページ］ （参照によって本発明に組み込まれる）に記載の保存性′ｆｉ換体は、得られた ペプチドの活性に悪影響が及ばないようにして、抗体と抗原との間で共通する配 列内での置換を行うことができる。同様に、分子モデル彩成手法によって、１次 および２次構造が全く異なる化合物を、本発明の方法を用いて測定される限りで 同等な３次構造が保た丸るようにして、本発明のペプチドと置換することができ る。更に、他の抗体、例えば、レオウィルス３型の受容体に対する他の杭又容体 抗体、あるいは、中和抗体に対する抗イデイオタイプ抗体もまた、ＣＤＲ領域を 利用して受容体と接触させることもできる。■、、ペプチドについて本明細書に 記載したと類似の生物学的活性を有するこれらの領域に由来するペプチドもまた 、本発明の対象範囲内にとどまるものである。 ４、

【図面の簡単な説明】

第１図は、ペプチドとの９８Ｇ５の特異的な結合を示すグラフであって、実施例 に記載の実験手順中で説明した放射線免疫検定法によって測定を行った。ブラン クの穴に結合した９８Ｇ５のＣＰＭを、ペプチド塗布の穴に結合した９８Ｇ５の ＣＰλ１から減じる。この値からインタイブ連合の対照用モノクローナル抗体で あるＬＩＰＣＩＯについて同様に測定された値を減じて、ペプチドに対する非特 異的結合を補正する。ペプチド塗布の穴と結合した９８Ｇ５の特異的なＣＰＭ： ；、最終体積を５０；９として穴のそれぞれに加えら丸た９１３Ｇ３の量を用い て示される。同じ処理の２穴についての平均値±標準偏差を示す。 第２〜３図は、８７．９２．６抗しオウイルス３型受容体抗体に対する結合との 競合能によって測定した、レオウィルス３型受容体に対するＶＬ−ＢＳＡの結合 を示すグラフである。　Ｒ１，１細胞（１０’／ｍｌ　）を、２００μｇ／ｍｎ のＶ＊−ＢＳＡの存在下または不在下で１％のＢＳＡ中で表示の通り４５分間温 １する０図示の濃度でモノクローナル抗体を加工、更に３０分間保つ、細胞を２ 回洗浄し、ＦＩＴＣで標識したヤギ抗マウスＦａｂ抗体の２００分の１希釈液を 加えて、３０分間保つ、細胞を２回洗浄し、螢光活性化細胞選別による分析装置 （ＦＡＣＳ）を用いて蓄光強度を分析する。競合剤の不在下でモノクローナル抗 体が飽和量のときのＦＡＣＳを用いて陽性と判定された細胞の最大百分比に対す る、図示の抗体濃度のときの陽性の・細胞の百分比の割合として、細胞染色最大 百分比を求める［（その濃度での陽性の％÷陽性の最大％）ｘｌｏＯ］−最大陽 性百分比の値は、２ａが１５．３％、２ｂが９７％、２Ｃが２４％である。 第４〜７図は、ウィルス塗布のプレートとの免疫血清の特異的な結合を示すグラ フであって、実験手順の項に記載の要領による放射線免疫検定法を用いて測定し たものである。ブランクの穴と結合した免疫血清のＣＰ　Ｍをウィルス塗布の穴 と結合したｃ　ｐ　ｂ＋から減じる。ウィルス塗布の穴との非特異的な結合を差 し引くために、免疫血清について測定した値から正常マウス血清について同様に 測定した値を減じる。特異的な結合ｃｐＭを、最終体積を５０μ℃として加えら れたマウス血清の希釈率と対比して示す、３〜４匹のマウスからなる群に対する 同一処理の２穴についての平均値±標準偏差を各希釈率ごとに示す。 第８〜９図は、ウィルスの中和に関する免疫血清検定の結果を示すグラフであっ て、以下に記載の要領で行われたものである。すなわち、ペプチドによる感作の 前（感作前、あるいは０日月）、第１回忌作後２０日目、および６０日０に血清 を採取する。各時点で４匹のマウスからなる群について中和力価を求める。幾何 平均を中和力価の逆数の標準誤差で除した結果を各時点につし）で示す。 第１０〜１１図は、プラーク阻害を示すグラフであって、以下に記載の要領で測 定したものである。すなわち、各群の４匹についてプラーク数を求め、平均値を 算出する。５０％以上のプラーク阻害を生じた血清の最高希釈率を求め、血清を 採取した時点のそれぞれにつｌ／Ｘて示す、１型および３型の双方のウィルスの プラーク阻害を示す。 第１２図は、図示の型のしオウイルスを用い、１０’ＰＦＩｊの皮下注射によっ て、あるいは、図示のペプチドを用い、２回に分けた１００ｕｊ２の皮下注射に よって免疫感作したマウスに関するデータを示すグラフである。１通を攻撃する 。攻撃の４８時間後に、実施例中に記載の要領で足粧の腫張を測定する。マウス の群ごとの平均値上標準誤差を示す。 第１３〜１４図は、ペプチドで感作後のマウスの正常しオウイルス３型に対する 遅延型過敏症（ＤＴＨ）の応答を示すグラフである。 第１５ａ〜１５ｂ図は、レオウィルス３型および８７．９２．６抗体によるし細 胞増殖の阻害を示すグラフである。 第１６図は、ペプチドによるし細胞増殖の阻害を示すグラフである。 第１７〜２０図は、ペプチドによるレオウィルス３型受容体の活性”Ａ′Ｂ作用 を示すグラフである。 第２１図は、ペプチドおよび抗体によるレオウィルス３型受容体の活性１１４８ 作用を示すグラフである。 第２４〜２５図は、コンカナバリンＡ″Ｃ誘導されるリンパ球増殖のペプチドに よる阻害を示すグラフである。 第２６〜２７図は、ペプチド阻言剤の存在下での１１７．９２．６　洗体塗布の 穴に対する９８Ｇ５抗体の競合作用を示すグラフである。 第２８〜２９図は９９ＧＳとのしオウイルス３型粒子の結合に対するｖ５および 変形ペプチドによる阻害を示すグラフであ、る。 第３０〜３３図ＡおよびＢは、Ｌ細胞とのしオウイルスの３型およびに変異株の 結合に対するＶＬペプチドによる阻害を示すグラフであり、第３２図および第３ ３図は、マウスＬ細胞とのしオウイルス３型の結合に封する■、変形ペプチドに よる阻害を示すグラフである。 第３４図は、本発明の方法による、生物学的活性ペプチドの２様の代替的開発方 針を説明するための模式図である。 （５）抗原 （７）抗体 （９）抗イデイオタイプ抗体 （１１）受容体 （１３）細胞表面 （１５）杭又容体抗体 （１７）生物学的活性ペプチド （１９）中和エピトープ （２１）中和エピトープに相補的なエピトープ（２３）中和エピトープを模倣す るエピトープ（２５）中和エピトープに相補的なエピトープ（２７）中和エピト ープを模倣するエビトープペプチド ・　対照 ｖＨ １穴あたりの添加ＣＰＭ ウィルス濃度（粒子数／ｍ１） ペプチド濃度（ｐｇ／ｍＱ） 抗体！（ｐｇ） 抗体量（ｐｇ） 抗体量（μｇ） 第２表 −１うす、ｌ 血清の希釈率 ！耳ケ前　　Ｚ６目　　　　　　印日月レオウィルス３型 ｏ　　ＶＬ（Ｓ炭３型 ＯＶＬ＋Ｖｉ−ｃｓＡ少す３型 Δ　レオペプチド対３型 ム　レオペプチド対１型 ・　ｖＬ−（Ｂ褒Ｕ型 ”　　ｖＬ＋ｖＳＳ対１型 阻害剤 特表千２−５０４２８４　（２０） ０ｖＨ・九 Ｖぶペプチド　　　　　　　　　　　ＶδＨペプチド２ＦＪに用いたＴｈ１ｆ　 　　ＶＬ　　　　　　ＶＬＳＨ８７，９２，６添加阻害剤の濃度（雨） 添加阻害剤の濃度（μＭ） 特表平２−５０４２８４　（２２） 競合剤の濃度（μＭ） 競合剤の濃度（μ）１〜） 阻害剤の濃度（μＭ） 競合剤の濃度（μ（イ） 競合剤の濃度（μＭ） −ノワψ、３４ 国際調査報告 −・瞳−４ゆ軸１＾酬−曜−噂９−・７：７Ｉへ；５Ｓ９１０−ε：５

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. （１）抗原、および、前記抗原に対する抗イディオタイプ抗体または前記抗原の 細胞受容体に特異的な抗体の双方の対応領域に見出されるペプチド配列に対応す るペブチド配列からなることを特徴とする生物学的活性を有する合成ペブチド。
2. （２）抗原、および、抗イディオタイプまたは前記抗原の細胞受容体に特異的な 抗体の双方の対応領域に見出されるペブチド配列にそれぞれが対応する第１およ び第２ペブチド配列からなり、一端で結合されていることを特徴とする生物学的 活性を有する合成ペブチド２量体。
3. （３）第１および第２ペブチド前列がスルフヒドリル結合で結合されている請求 項（２）記載のペブチド２量体。
4. （４）ペブチドが次式のアミノ酸配列 【配列があります】 （式中、Ｘはシステインを表すか、または何も存在しないことを表し、それ以外 の記号は三文字記号によるアミノ酸を表す） を有する請求項（１）または（２）記載の生物学的活性を有する合成ペブチド。
5. （５）ペブチド配列が抗原および抗イディオタイプ抗体の対応領域に見出される アミノ酸の少なくとも６０％からなり、前記対応領域は前記抗イデイオタイプ抗 体の、あるいは前記抗原の細胞受容体に特異的な前記抗体の、相補的決定領域で あり、かつ前記抗原および前記ペブチドのいかなる配列も前記抗原および前記抗 イディオタイプ抗体の、あるいは前記抗原の細胞受容体に特異的な前記抗体の、 対応領域の少なくとも６アミノ酸からなる請求項（１）または（２）記載のペブ チド。
6. （６）生物学的活性化合物の合成法であって、イ）哺乳類細胞の生理学的受容体 と結合することが知られている病原体遺伝子産生物を選択する段階と、 ロ）前記病原体遺伝子産生物に対する抗イデイオタイプ抗体、あるいは前記病原 体遺伝子産生物の細胞受容体に対する抗体を調製する段階と、 ハ）前記遺伝子産生物と前記抗イディオタイプ抗体、あるいは前記病原体遺伝子 産生物に対する細胞受容体に対する抗体とのペブチド配列を比較して、少なくと もその双方に共通する部分を決定する段階と、 ニ）前記共通配列部分の３次構造に対応する生物学的活性部位からなる化合物を 合成する段階と からなることを特徴とする方法。
7. （７）ホ）ニ）の段階で合成された第１ペブチドの一端に結合子を付加する段階 と、 ヘ）ニ）の段階で合成された第２ペブチドの一端に結合子を付加する段階と、 ト）前記各ペブチドの結合子において前記第１および第２ペブチドが会合して２ 量体を形成するよう選択された条件下で前記第１および第２ペブチドを接合させ る段階と が更に含まれる請求項（６）記載の方法。
8. （８）ニ）の段階に請求項（４）記載のペブチドを合成する段階が含まれている 請求項（６）または（７）記載の方法。
9. （９）Ｖ１１領域およびＶ１領域の相補的決定領域ペブチドの組合わせを用いて 抗体結合部位あるいは抗原を作り出す方法。
10. （１０）哺乳類細胞のアドレナリンβ受容体と結合することが知られている病原 体遺伝子産生物と前記病原体に対する抗イデイオタイプ抗体、あるいは前記アド レナリンβ受容体に対する抗体とに共通していて、前記哺乳類細胞の増殖を変化 させるよう選択されたアミノ酸配列を有するペブチドの、前記増殖を変化させる に有効な量を前記細胞に投与する段階からなることを特徴とする哺乳類細胞の増 殖を変化させる方法。
11. （１１）生物学的活性化合物の合成法であって、イ）哺乳類細胞の生理学的受容 体と結合することが知られている病原体遺伝子産生物を選択する段階と、 ロ）前記病原体遺伝子産生物に対する抗イディオタイプ抗体を調製する段階と、 ハ）前記抗イディオタイプ抗体の相補的決定領域内の前記抗体のアミノ酸配列を 決定する段階と、 ニ）前記抗イディオタイプ抗体の前記相補的決定領域の３次構造に対応する部位 を含む化合物を合成する段階と からなることを特徴とする方法。