JPS59116230A - ウイルス性感染因子に対する免疫応答を生起する抗−イデイオタイプ抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、Ｎａｔｌｏｎａｌ　Ｈｅａｒｔｓ　Ｌｕｎｇ
　ａｎｄ　ＢｌｏｏｄＩｎｓｔｉｔｕｔｅ、　Ｎａｔｉ
ｏｎａｌ　Ｉｎａｔｉｔｕｔｅｓ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ
及びｔｈｅＵｎｉｔｅｄ　５ｔａｔｅｓ　Ａｒｍｙ　Ｍ
ｅｄｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌ
ｏｐｍｅｎｔＣｏｍｍａｎｄの許可を受けた研究過程で
成６ｎたものでめる。

クイルズ注肝炎は世界的な流行病でめると考えろ扛、世
界中にＢ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ″）保菌者は２億人い
ると推定されている。従来ワクチンの開発が妨けらｎて
いた原因は組織培養でＢ型肝炎ウィルスが生育し得ない
ことにあり、その結果、Ｂ型肝炎サブユニット粒子ワク
チンを製造する際無症候性保菌者の血漿からＢ型肝炎の
表面抗原（”　ＨＢｓＡｇ　”　）から成る２　２　ｎ
ｍＪボブロチイン粒子を単離しイ々製することが不可欠
とされていた。

しかしながら、そのようなホルマリン又は熱で不活性化
さｎ−念ワクチンは両側で供給源が限定き扛るという欠
点を有する上に、血漿中に存在する因子が不明であるの
で前記供給源に危険が潜在するという欠点をも有する。

更に危険度の高い人々が免疫化さｎるにつれて、大量の
ｆ（ＢｓＡｇｋ含む血漿源が得られにくくなる。

抗原に対する免疫応答はイディオタイプ網（ｎｅｔｗｏ
ｒｋ　）を介して調整さｎ得るという考えは、１９７４
年にＮ１ｅｌｓ　ＪｅｒｎｅＫよって初めて提案ｇｎた
。抗体分子とリンパ球抗原レセプタの抗原結合部位上若
しくはその近傍にｌ！４接して位置するイディオタイプ
（独特な抗原決定基）が、この網の成分である。この槻
宿で、一連のイテイオタイプー抗イデイオメイグ反応が
網に増強又は抑制作用を与え、且つ抗原に対する個々の
免疫応答をコントロールする。感染因子と強力なワクチ
ンとしての抗−イディオタイプ抗体との缶接な関係につ
いて、Ａ、　Ｎ１５ｏｎｏｆｆ及びＥ、　Ｌａｍｏｙｉ
　　が理論的に検討している。イディオタイプ分子の抗
原結合部位を識別する抗イデイオタイプは、イディオタ
イプを誘発する抗原と相同の溝造を有している。従って
、抗イデイオタイプ（第二抗体ンは抗原の内部表像を表
わし侍るので、抗イデイオタイプを注入することにより
従来行なわれていた抗原刺１ｆｉ１行なわすとゝも第一
抗体（イディオタイプ）を誘発させ得る。

上記した如く、感染因子に対して抗イデイオタイプ抗体
が強力なワクチンとな９得る可能性は既に示唆さｆＬｃ
いる。そのようなワクチン又は製造方法に関する参考文
献を以下に提示する。

ｌ　　ＫｕｎｋｅＬｌ（、Ｇ、＊Ｍ、Ｍａｎｎｌｋ＋ａ
ｎｄＲ，Ｃ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ。

１９６３、比田１堕　１４０：１２１８゜２．　　０ｕ
ｄｉｎ、　Ｊ、　＋　ａｎｄ　Ｍ、　Ｍｉｃｈｅｌ、　
１９６３．　Ｃ，Ｒ，Ａｃａｄ。

ル出ゴヱ肛旦ユ２５７：８０５゜ ３、　　Ｊｅｒｎｅ＋　Ｎ、　Ｋ、　１９７４．　人匹
Ｉｍｍｕｎｏ１．　（Ｐａｒｉ＋５）１２５ｅ　：３７
３−３８９゜ ４゜　Ａ、　Ｎ１５ｏｎｏｆｆ　、　Ｅ、　Ｌａｍｏｙ
ｉ　＋　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ。

和皿肋四旦垣２１．３９７（１９８１）。

５、　Ａ、　Ｄ、　Ｓｔｒｏｓｂｅｒｇ、　Ｓｐｒｉｎ
ｇｅｒ　Ｓｅｍ１ｎ、　Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈ。

６．６７（１９８３）。

６、　　　Ｄ、　Ｌ、　５ａｃｋＬ　Ｇ、　Ｈ，Ｋａｌ
ｓｏｅ、　Ｄ、　Ｈ，５ａｃｈｓ＋　１ｂｌｄ。

６．７９（１９８３）。

７、　　　Ｃｏ５ｅｎｚａ＋　Ｈ，ａｎｄ　Ｋｏｈｌｅ
ｒ＋　Ｈ，Ｐｒｏｃ、　ｎａｔｎ、　Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、６９．２７０１−２７０５（１９
７２）。

８、　　　Ｅｉｃｈｍａｎｎ＋　Ｋ、Ｅｕｒ、Ｊ、Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ、　４１２９６−３０２（１９７４）。

９、　　ＨａｒＬ　Ｄ、　Ａ、、　Ｗａｎｇ＋　Ａ、　
ＬＩ　Ｐａｗｌａｋ＋　Ｌ、　Ｌ、　＆Ｎ１５ｏｎｏｆ
ｆ、　Ａ、　Ｊ、　ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１３５．１２
９３−１３００（１９７２）。

１０、　　Ｂ１ｕｅｓｔｏｎｅ＋　Ｊ、　Ａ、＋　Ｓｈ
ａｒｒｏｗ＋　Ｓ、　ｏ、ｌ　Ｅｐｓｔｅｉｎ＋　Ｓ。

Ｌ−１０ｚａｔｏ＋　Ｋ、　＆　Ｓａｃｈｇ、　Ｄ、　
Ｈ，Ｎａｔｕｒｅ　２９１．２３３−２３５（１９８１
）。

１１、　　Ｃａｚｅｎａｖｅ＋　Ｐ、　Ａ、　Ｐｒｏｃ
、　ｎａｔｎ、　Ａｃａｄ、　Ｓｅｔ、　Ｕ、　Ｓ。

Ａ、７４．５１２２−５１２５（１９７７）。

１２、　　Ｋｅｌｓｏｅ、　Ｇ、ｌ　Ｒｅｔｂ＋　Ｍ、
　＆　Ｒａｊｅｗｓｋｙ、　Ｋ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ。

ルｖ、　５２．７５−８８（１９８０）。

工３、　５ａｃｈｓ、　Ｄ、　ｋｌ、　＋　Ｅｌ　−Ｇ
ａｍｉｌ＋　Ｍ、＆　Ｍｌｌｌｅｒ、　Ｇ、　Ｅｕｒ。

Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１１．５０９−５１６（１９８１
）。

１４、　　Ｔｒｅｎ）ｃｎｅｒ、　Ｅ、　＆　Ｒｌｂｌ
ｅＬ　Ｒ，Ｊ、　ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１４２゜１１２
１−１１３５（１９７５）。

１５、　　　ＵｒｂａｉｒｂＪ、＋Ｗｉｋｌｏｒ＋Ｍ、
＋Ｆｒａｎｓｓｅｎ＋Ｊ、Ｄ、＆Ｃｏｌ１Ｃｏ１１ｌ、
　ｃ、　Ｐｒｏｃ、　ｎａｔｎ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ
、　Ｕ、　Ｓ、　Ａ、Ｉ　７４＊５１２６−５１３０（
１９７７）。

１６、　　Ｋｅｎｎｅｄｙ＋　Ｒ，Ｃ，ａｎｄ　Ｄｒｅ
ｅｓｍａｎ＋　Ｇ、　Ｒ，Ｊ。

Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３０：３８５−３８９．１９８３゜
１７、　　　Ｋｅｎｎｅｄｙ、Ｒ，Ｃ，＋５ａｎｅｈｅ
ｚ、Ｙ、、Ｉｏｎｓａｅｕ　−Ｍａｔｉｕｓ１、　＋　
Ｍｅｌｎｌａｋ＋　Ｊ、　Ｌ、　ａｎｄ　Ｄｒｃｖｓｍ
ａｎ、　Ｇ、　Ｒ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ１２２：２１９−
２２１．１９８２゜ １８、　　Ｋｅｎｎｅｄｙ＋　Ｒ，Ｃ１＋　Ｉｏｎｅｉ
ｃｕ−Ｍａｔｉｕｓ　Ｉ＋ｌ　５ａｎｃｈｅｚ＋Ｙ、　
ａｎｄ　Ｄｒｅｅｓｍａｎ＋　Ｇ、　Ｒ，Ｅｕｒ−Ｊ、
　Ｉｍｒｒｒｕｎｏｌ、、　１９８３゜１９、　　Ｋｅ
ｎｎｅｄｙ＋　Ｒ，Ｃ，、Ｄｒｅｅｓｍａｎ＋　Ｇ、　
Ｒ，＋　８ｐａｒｒｏｗ、　Ｊ＋’ｒ、ｌ　Ｃｕｌｗｅ
ｌｌ、　Ａ、　Ｒ，、５ａｎｃｈｅｚ＋　ｙ、ｌ　Ｉｏ
ｎｅｓｃｕ−Ｍａｔｉｕｓ　Ｉ−＋ｆ（ｏｌｌｉｎｇｅ
ｒ、　Ｆ、　Ｂ、　ａｎｄ　Ｍｅｌｎｉｃｋ＋　Ｊ、　
Ｌ、　Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、　４６　：６５３−６５’５
．１９８３゜ ２０、　　　Ｉａｎｓｓｃｕ−Ｍａｔｉｕｓ　ＣＩ　Ｋ
ｅｎｎｅｄｙ＋　Ｒ，Ｃ，＋　Ｓｐａｒｒｏｗ。

Ｊ、　Ｔ、ｅ　ＣｕｌｗｅｌＬ　Ａ、　Ｒ，＋　５ａｎ
ｃｈｅｚ＋　ｙ、、　Ｍｅｉｎｌｃｋ、　Ｊ、　Ｌ。

ａｎｄ　Ｄｒｅｅｓｍａｒｂ　Ｇ、　Ｒ，Ｊ、　Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ、　１３０　：１９４７−１９５２゜１９８３
゜ ２１、　　Ｋｅｎｎｅｄｙ＋　Ｒ，Ｃ＋ａｎｄ　Ｄｒｅ
ｅｓｍａｎ、　Ｇ、　Ｒ，Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ。

盟０垣７：１０３−１１５．１９８３゜２２、　　Ｄ、
　Ｌ、　５ａｃｋｓｅ　Ｋ、　Ｍ、　ｇｓｓｅｒ＋　Ａ
、　５ｈｅｒ　Ｊ’、　Ｅｘｐ。

旋ム１５５．１１０８（１９８２）。

２３、　　　Ｄ、　Ｌ、　５ａｃｋｓ＋　Ａ、　５ｈｅ
ｒ　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３Ｌ１５１１（４９８
３）。

２４、　　　ＥｍｉｎＬＥ、Ａ、＋Ｊａｍｅｓｏｎ、Ｂ
、Ａ、＆′Ｎｉｍｍｅｒ＋ｇ。

Ｎａｔｕｒｅ　３０４，６９９−７０３（１９８３）。

符異な抗体分子の抗原結せ部位上看しくはその近湧に、
イムノグロブリン　イブづオメイグ（より）と呼称さ扛
るユニークな抗原決定基が存在することは、絣考又献１
．２に報告さｎている。参考文献３に報告さｎている如
（、ＩＤ及び同族の抗−ＩＤ抗体が所与の免疫応答を調
整する複雑な反応網の成分でろると提唱されていたつ従
者文献４．５及び６には、抗−ＩＤ抗体が感染症に対す
る強力なワクチンとして使用され得ることが幾つかの理
論的根拠を以って示唆さｎている。実嫉モデル系を）１
いた多数の研究から、抗−Ｉｆ）抗体が免役応答に関与
し得るという上記した考えの正当性が例証さｎた。抗−
ＩＤ抗体江人後抗原を圧入すると、ＩＤ−ポジティブ抗
原結合分子の抑制（参考文献７−９）或いはＩＤ発現及
び抗原結合活性の増加（参考文献１Ｏ−１５）が認めろ
ｎた。

抗−ＨＢｓがＨＢｖ感染に対して防護作用全肩すること
が知らｎてかも、イディオタイプ全Ｂ型肝炎表面抗原に
対する抗体（抗−１（Ｂａ　）と関連させて研究するよ
うＫなった。我々は最初に、２つの異なる個体からアフ
イニテイ′ｎｔ製した抗−ＨＢｓに対する家兎抗−イデ
イオタイプ抗血清４穫を兄生させた。４神の抗−イテイ
オタイプ試楽の夫々が共通の抗−ＨＢｓイディオタイプ
を有して（Ｓた（参考文献１６）。更なるイσｆ究で、
単一の抗−イディオタイプ抗血清が特定された。共通の
ヒトイディオタイプが、３個体からの祠製抗−ＨＢｓ中
にも６人の血友病患者から得た抗−ＨＢａ−ポジティブ
血Ｙが中にも検出さｎｆｃ。ＨＢｓＡｇやウィルス由来
のＨＨｓＡｇ天然ポリ天然ポリベイデイオタイプ−抗イ
ディオタイプ反応を抑制し得ること刀・ら、抗−ＨＢｓ
イディオタイプが抗体結合部位に結びつくであろうと予
想された。イディオタイプ決定基は４別された。何故な
らば、抗−イディオタイプ抗血清は・ （１）抗−ＨＢｓ″ｆ：除去後のイディオタイプドナー
：（１１）抗−ＨＢｓに対してイ・ガテイプなヒトのン
゛−ル血清；及び ｆｉｉｉ）　　−１純ヘルペスウィルスに対して萬レベ
ルの抗体を有する個体； からのＩｇＧ製剤と実買的に相１作用しなかった力為ら
でちる。イディオタイプ時異性について更に調べると、
抗−イディオタイプは）（ＢｓＡｇや天然ＨＢｓＡｇ由
来ポリペグチドと結合し得なかった。これらのデーター
から、共通ヒト抗−ＨＢｓイテイオタイプが結ひつく抗
体結合部位が検出さ扛ることが知見さ扛た（＃考文献、
％Ｌ６）。

更に、共通イディオタイプの％注を調べた結果、夫々Ｈ
ＢｓＡｇ　ａｄｙ　、　シエ及び史サブタイプに対して
ポジティブなヒトのプール血漿から精製した３個の）Ｉ
ＢｓＡｇ−製剤は取量ベースで均等にイデイオメイグー
抗イディオタイプ反応を抑制したので、前記イディオタ
イプはグループｌ決定基により誘発されることが明らか
となった（第１図診照）ＯＨＢａＡｇ由来ポリペプチド
がイブイオタイブ−抗イディオタイプ反応を抑制し得る
か否かも調べた結果・　ドデシル硫酸ナトリウム変性さ
れたＨＢｓＡｇウィルス性ポリベグチドは天然ポリペプ
チドに比べて事実上その抑制能全失っていることが知見
さｎた。更に、ジスルフィド結合を還元し且つ遊離のチ
オール基をアルキル化すると、天然ＨＢａＡｇ由米のポ
９ベプチドのイディオタイプ−抗イデイオタイプ反応を
抑制し得る能力が壊さｎた。以上のデーターから、共通
抗−ＨＢｓイディオタイプはコンフォメーション（ａ存
のグループ％異性邑エピトープに対して方向付けもｎで
いることが示唆さ扛た（読者文献ｙ’１６１７　）。

ＨＢｓＡｇで完投化さｎ友永兎５モルモット、ブタ。

ヤギ、チンパンジー及びＢＡＬＢ　／　ｃマウスで得ろ
ｆ′した抗−１（Ｂ８に、共通のイディオタイプが発現
することが最近認めら′Ｉ″Ｌ、た。棟々の種族からの
血清中にイディオタイプが始められることは尻−ＨＢｓ
分子と関連があった。うま（ＨＢｓＡｇで完投化さ扛た
鶏からの抗−ＨＢｇには、共通のイディオタイプが発現
しないことも認めらｎた（参考文献、、＠　ｉ　ｓ）。

ｐ２５と類似のアミノ酸残基１２２−１３７（ペプチド
１）及び１１７−１３７（ペプチド２）を含む環状合成
ペプチド類が、共通イディオタイプ−抗イデイオタイプ
反応を抑制し得るかについても調ベア’ｃ（第２図診照
り。モル基準で、と扛らのペプチドのイデイオメイプー
抗イディオタイプ反応を抑制するＨし力は無傷のｆ（Ｂ
ａＡｇのそれの１／１０３であった。ペプチドがモル基
準で均等に［ＢｓＡｇと競合し得ないことから、このペ
プチドに完全なｌ決定基はないことが知見され且つ他の
アミノ酸配列が完全なユエピトープを決足する上で重要
なことが示唆さｎた。根状ペプチド１２２−１３７にエ
シイデイオメイプー抗イデイオメイグ反応が抑制ざ扛る
ことから、この配列が共通のイディオタイプを表わ丁ヒ
ト抗−ＨＢａ＃を誘発させる抗原決定桶と関連があるこ
とが示唆される。ペプチド１のジスルフィド結合を還元
させ且つ遊離チオール基をアルキル化することにより、
コンフオメ−シＥ　ンの重要性が知見さｔ′した。これ
にょジペプチド１のイディオタイプ−抗イデイオタイプ
反応の抑制能が破壊された（＃考文献／１６１９）。

環状ペプチド１２２−１３７と反応するマウスのモノク
ローナル抗体はＩＤ−抗ＩＤ反応を抑制するのに対して
、環状ベグチドと反Ｌ′５する抗−ＨＢｇモノクローナ
ルはＩｆ）−抗ＩＤ反応を抑制しないことが認めら扛た
（参考文献ｙ１６２０　）。

抗−ＩＤ抗体及びその特性は、参考文献２１に詳細に記
載さ扛ている。

抗−ＩＤが感染因子に対する防護免疫を生じ得ること〃
が、マウスのモノクローナル抗−ＩＤ剤を用いたアフリ
カ−・トリパノソーマ症の実験で立証されている（参考
文献２２及び２３）。

ポリオ会成ペプチドの予備注入がポリオタイルスに対す
る兇投応谷のプライミングとなることが参考文献２４に
６己載さ７している。

本発明は、（１）新規な組成物、（２）完投化製剤に使
用する組成物、（３）Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ　
）に対する抗体産生を生起する組成物、（４）抗−１（
ＢｓＡｇ抗体産生の生起方法、（５］　ＨＢｓＡｇの接
種に先立つ完投応答プライミング方法、及び（６）合成
Ｈ１３ａＡｇペプチドの接種に先立つ免疫応答プライミ
ング力法に係る０ イディオタイプに対するウサギ免役グロブリンＧ　（Ｉ
ｇＧ　）抗血清を完全に吸着してアイソタイプ抗体及び
アロタイプ抗体を除去し、その後、共通のヒト抗−ｆ（
Ｂｓイディオタイプに結合したＣＮＢｒ−ｆ（４化セフ
アロース４Ｂカラムからの酸溶出にエリアフィニティ稍
製した。このウサギ抗血清の抗−イディオタイプ特性は
既に記載した。イディオタイプε人前にウサギ血清から
得たＩｇＧ画分を対照抗体製剤として使用した。ＩＸ製
剤に対して１５の消光係数を１史用して分光光度計（２
８０ｎｍ）で２ｍの製剤の抗体製置を測定した。免疫原
としては、高抗原性ミセルとして単離した非変性ＨＢｓ
Ａｇ由来ポリペプチドを使用し之。

！ｉｌＩ側性レ発性レベル−ｆ（Ｂｓ免疫応答全定量す
るために、ＩｇＭ−分泌細胞は直接プラークによって、
且つＩｇＧ−分泌細胞は間接プラークによって測定する
Ｊｅｒｎｅ溶血プラークアッセイを実施した。短時間タ
ンニン酸処理したヒツジ赤血球細胞（ＳＲＢＣ）をｆ（
ＢｓＡｇ　（ｆ’ブタイブμ＝ンでコートし上記プラー
クアッセイでインジケーターａｉ胞として１更用しりｏ
　Ｓ　ＲＢ　Ｃ上にＨＢｓＡｇが存在することを確認す
るためにマウス抗−ＨＢｓとの受オ血球凝集反応を利用
した。免疫したＢＡＬＢ　／　ｃマウス由来の牌細Ｊ刑
懸濁液をアガロース上でｋｌＢｓＡｇ−コー）　５ＲＢ
Ｃと混合した。３７５℃で１時間インキュベーションし
ｆ？：、（１、モルモット５ｆＬＢＣ−吸庸補体金証加
し念。３７℃に２時間維持した後、ＩｇｉＶｉ抗体分必
に基づく直接浴面プラークをｔｌ数し、１岸臓当シのＰ
Ｆ’Ｕの数を膵臓の全細胞数から計算した。ＩｇＧ分泌
細胞による間接溶血プラークを、ウサギ抗体を富有する
血清をマウスＩｇＧＫ添加した後補体を添加して測定し
た。各実験で、コートしていない５ＲＢＣ及びオバルプ
ミンでコートしたタンニン酸部４ＳＲＢＣを対照として
使用した。

）（ＢＢＡｇ注人後最適な抗−川り応答が得ら牡る時間
間１４を確立するために、抗−ＨＢｓ　Ｐ　Ｆ　Ｕ応答
のキネティックスを決定する必要があった。第４図のグ
ラ７に示した最初の実験では、ＥＡＬＥ　／　ｅマウス
をイディオタイプに対する精製抗体４０Ａｇの生４食塩
水溶液で、次に、７８後ＨＢｍＡｇ　５μ）で免疫した
。ＨＢｓＡｇ注入Ｏ４、１０及ヒ１４　Ｅｌｔ＆に３匹
のマウスを殺し、ノ＃庸を摘出して膵臓のＰＦＵ数全測
定した３第４図のデータから明らかな工うに、龍接抗−
ＨＢｓ　Ｐ　Ｆ　Ｕ応答は検討した３柚の時間間隔で大
きな違いはなかったが、４日後では間接プラークは検出
されなかった。抗−ＨＢｓ　−分泌細胞が特異的である
ことは、この３種の時同間隔のいずれに於いてもコート
していない又はオバルプミンーコート５ＲＢＣの両者で
直接及び間接プラークがどちらも検出さｎなかつたとい
う事大によって示された。マウスの最終」妾十事後１４
日を後の実験の時間間隔として選択して使用した。

５群のＢＡＬＢ　／　ｃマウスを、イディオタイプに対
する抗体、非免疫ウサギ由来ＩｇＧ又はＨＢｓＡｇで処
置し、最終注入の１４日後ｊ岸細胞のＰＦ’Ｕ応答をア
ッセイした。ＨＢｓＡｇに暴露する前にイディオタイプ
に対する抗体を注入したものは、非免役ウサギ由来Ｉｇ
Ｇを接種したマウスに比較して、かなり高い（比較対照
の１８３に対して５３１）直接ＰＦＵＯ値を示した（肉
ｉＩｌ！ｌ　を−検定に基づく、Ｐ＜ｏ、ｏｓ。辰１参
照ジ。

遣」　仇−１（Ｂ８応答：ｌ岸輔当りのＰＦ’Ｕ　（平
均上平均の標　偏差］で表記 各群６匹のマウスに、４０μノの抗−イディオタイプ抗
体若しくは非免疫ウサギ由来ＩｇＧ（プレーＩｇＧ　）
又は５１１ノのＨＢｓＡｇを、初日（０）に腹腔内注入
し、更に７日目に表中に記載した腹腔内注入を行なった
。２１１日目膵臓を摘出した。各マウス牌細胞に対して
、直接と間接の両者の抗−ＨＢｓＰＦＵの存在の可否全
二重にアッセイした。対照としてコートしてない又はオ
バルグミンーコート５ＲＢＣｉ用いた場合、溶血プラー
クはいかなる牌細胞でも生成しなかった。

プレーＩｇＧ　　　ＨＢｓＡｇ　　　　　８　　　　１
８３上６５　　　　　１２５　±３６フシーＩｇＧ　　
プレーＩｇＧ　　　　　６　　　　　　１６．７±１６
．７　　　　　　　８．３±　８．３ＨＢｓＡｇ　　　
、ｔ（ＢｓＡｇ　　　　６　　　１６７±３６　　　１
６８３±１６８＊１匹は実験中に死亡。＊枢チュープン
ト式両側り一侠矩及び順位テストによる分散の単一因子
解析（ａｉｎｇｌｅ　−ｆａｃｔｏｒ　ａｎａｌｙｓｉ
ｓ　ｏｆ　ｖａｒｉａｎｃｅ　ｂｙ　ｒａｎｋｓｔｅｓ
ｔ　）　ｆｉｆＪちＫｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｊｓテス
トを含む仇討的手法並びに表中の直接ＰＦσは、ＨＢＳ
Ａｇ　＠に抗−イデイオタイプ抗体：と受容した群では
他のマウス群（ｐ＝ｏ、ｏｓ）とはかなシ異なっていた
。

前記時間間隔設定実験（第４図りに比較した場合（表１
では５３１であるが第４図では４５０である）、　Ｊ（
ＢｓＡｇ江人前に抗−イデイオタイプ抗体金受谷したマ
ウスの第２群でｉｌｉ￥接ＰＦＵの平均値の増加が俣出
さｔたのは、サンプルサイズの増加によるものと思わｔ
しる。）（ＢｓＡｇの前に抗−イディオタイプ抗体又は
プレ免＆ＩｇＧｋ受容したマウスで侍ら２した聞汝ＰＦ
Ｕの数は、おｓＡｇを２回注入したマウスに比べて１０
借低い。然しながら、抗−イディオタイプ抗体とｆ（Ｂ
ｓＡｇの両者を受容した群は、ＨＢｓＡｇのみを与えた
群に比較して大きい直接ＰＦＵＯ数を示した（１６７に
対して５３１、Ｋｒｕｓｋａｌ　−４’ａｌｌｉｇ　、
　Ｐ　（０，０５）。２回のＨＢｓＡｇ注入を受容した
群での牌＃４当シの間接ＩｇＧ抗−ＨＢｓＰＦＵの数は
、ｆ（ＢｇＡｇ及び他のウィルス抗原に対する２次応答
に関して報告さｔした膵臓当シのＰＦＵ数と同じオーダ
ーであった。このことは、本発明の溶血プラークアッセ
イが抗−ＨＢｓ−分泌細胞の定量法として有効であるこ
とを示している。

抗−イディオタイプ抗体のみの注入では、プレ兄ｉ　Ｉ
ｇＧのみを受容したマウスに比較して、抗−ＨＢａ％異
性を示す間接ＰＦＵの数が１２倍増加した（８．３に対
して１００　、　Ｋｒｕｓｋａｌ　−Ｗａｌｌｉｓ　＋
　Ｐ　＜０．０５゜表１参照）。抗−イディオタイプ抗
体のみを注入したマウスの直接ＰＦＵ数は、非死没ウサ
ギＩｇＧで処置した群で得られた値（Ｐ＞０．１）エフ
局いとはいっても、それ程大きく異なるわけ二り ではなかった。コートしていない及びオバルミン−コー
トした５ＲＢＣでは直接又は間接アッセイのいずｎにお
いてもグラークが検出さｆｌ−ないことから、ここでも
ＰＦＵ応答の特異性が示さ扛た。

２回の注入ぐ２回とも非免疫ウサギＩｇＧ’に受容した
６匹のマウスのうち１匹しか抗−ＨＢｓ　Ｐ　Ｆ　Ｕが
検出されない理由は現在では判明しているが、これでも
標準偏差内に入るし平均は等しくなっている。この群の
１匹のマウスで得られた直接及び間接ＰＦＵ数は低かっ
たが、こ扛は恐らく有意なものではないたろう。

抗−イディオタイプ抗体のみ又は非免疫ウサギＩｇＧと
ＨＢｓＡｇで処置した群ではＩｍ、接ＰＦＵの標準偏差
が平均全も超えるが、順位による分散の単一因子解析（
Ｋｒｕｓｋａｌ−＊ａｌｌｉｓテスト）によると、直接
ＰＦＵの平均順位は、抗−イディオタイプ抗体とｉｌＢ
ｍＡｇを受答した群とは有意に（Ｐ＜０．００５）異な
っていることが示さｔた。個々の群の間での分散の異實
性のためこの工うな解析が必要でるつた。パラメトリッ
ク５ｔｕｄｅｎｔ式両側を一検定と非パラメトリックＫ
ｒｕｓｋａｌ　−Ｗａｌｌｉｓテストの両者で得ら扛た
有意差レベルは一致していた。

このように、抗−イディオタイプ抗体の注入は細胞性レ
ベルでの抗−ＨＢｓ応答を増強した。ＩｇＭ抗−Ｉ（Ｂ
ｓ−分泌細胞数の増大は抗原暴露前に抗−イディオタイ
プ抗体を注入することで得ら扛た。

ＩｇＭ分泌細施が増加しＩｇＧ分泌細胞は増加しない、
理由は判明していない。然しながら、抗−イディオタイ
プ抗体によって、初期抗−ＨＢｓ応答の誘発を補佐する
補助細胞が漸増し、その結果ＩｇＭ抗−）（Ｂｓ−分泌
細胞の数が増加することに対応して（・ると考えろ扛る
。

従って、ＢＡＬＢ　／　ｃマウス血清中に抗−ＩＤ誘誘
発−ＨＢｓ活性が存在するか否かを検査して、これらの
抗体が、ＩＤ−抗−ＩＤコントロールネットワークの指
標となる極間ＩＤを発現するか否かを確認した。

液初の実験は、抗−ｆ（Ｂｓ応答を増強させる抗−ＩＤ
抗体の最多の免疫原型を決定するために行なった。我々
の以前の研究では、牌細胞レベルでネズミの抗−ＨＢｓ
応答を変調させる際に溶解性抗−ＩＤ抗体を使用してい
た。しかしながら、他の研究者らは、抗原刺激せずとも
クロスリンクした抗−１０の注入によｐＩＤ網内に高レ
ベルの抗体を誘４出来ることを示した。その理由は、Ｈ
ＢａＡｇ水溶液ではなくアラムー沈殿させたＨＢｓＡｇ
を使用すると、ＨＢｇＡｇ刺激前に溶解性抗−ＩＤ抗体
を注入した場合とアラムー沈殿物質を注入した場合の抗
−ＨＢｓ応答への効果を比較すると明らかな如く、高力
価の抗−ＨＢｓが実験動物に生じていたからである。第
２表に示すように、ア２ムー沈殿させた抗−ＩＤを受容
したマウス群の平均抗−ＨＢｓ力価は、ＨＢｓＡｇ刺激
前に生理食塩水中の抗−ＩＤを投与した群より高かつグ
こ（固相ラジオイムノアッセイ、ＡＵＳＡＢ、アボット
研究所、Ｎ、シカゴ、イリノイ州、７２．５に対して４
８７．５のＡＵＳＡＨ力価〕。

溶解性プレーエｇＧコントロール群の４匹のマウスのう
ちたった１匹に抗−）ｉＢｓ応答が認められたのに対し
てＨＢａＡｇ江入前にアシムー沈殿させたプレー　Ｉｇ
Ｇを投与したマウスでは、１：５血７Ｗ希釈でも抗−Ｈ
Ｂｓ応答を検出し得なかった（表２）。この実験では、
抗−ｆ（Ｂｓ応答を、ＩｇＭとＩｇＧ抗−−とを検知す
る市販のＲＩＡ及び固相ＲＩＡｉ用いて測定した。他の
実験では、固相ＲＩＡをマウス抗血清の力価測定に使用
した。何故ならば、固相ＲＩＡ方法は、ＡＵＳＡＢと比
較すると血清の必要嵐が少（（２００μｔに対して５０
μｔ）で済み、エフ感度が高くかつより安価であるから
である。主としてＩｇＭ抗−ＨＢａがＩｇＩｖｌ型特異
ＲＩＡにより、溶解性抗−ＩＤ製剤を注入したマウス群
に於いて検出されたことに注目さｎたい。このことは、
直接ＩｇＭ抗−ＨＢａ　Ｐ　Ｆ　Ｕの数が浴解性抗−１
０の前注入にニジ増加したという前記観察と関連丁生が
ある。

表２ 抗−ＨＢｓの４専に対するアラムー７ｘ、殿させた、及
び溶解性の抗−イディオタイプの比較エアラド沈殿させ
たＨＢｇＡｇ　　　　　４　　４８７．５±３□５．０
　　４９３８　　　□２５０抗−ＩＤ 溶解性抗−ＩＤ　　ＨＢｓＡｇ　　　　４　　　７２．
５±５０．０　　　８６　１０００１、各群のマウスに
、渠θ口重に抗−ＩＤもしくはフ゛レーＩｇＧ１４０μ
ｑ、仄いで第１４６目に）（ＢｓＡｇを６μり、膜腔内
投与した。マウスから第２６日に採血した。

２、　この値は、ＡＵＳＡＢＫより測定したエンドポイ
ントＳ／Ｎが２．１である抗血清の希釈度の逆数である
。

３、　１２５　Ｉ　　標識ヤギ抗マウスγ−鎖符異抗血
清を用い固相ＲＩＡによシ測定したエンドポイントＳ／
Ｎが２．１である抗血清の希釈麗の逆数の平均値。

４　１２６　工　　標識ウサギ抗マウスμ鎖特異抗ＪＱ
行Ｈ全用い固相ＲＩＡにより測定したエンドポイントＳ
／Ｎが２．１である抗血清の希釈度の逆数の平均値。

５、全マウスの抗−ＨＢｓが、に５の血清希釈度でネガ
ティブであった。

第２香目の実験では、アラ六−沈殿させた抗−ＩＤ抗体
の第１回注入と、抗−ＨＢｓ応答を増強させるための後
続のｆ（ＢｓＡｇ接種との間の最適時間間＠を決定した
。アラムー沈殿させた抗−ＩＤはＨＢ＋＋Ａｇに対する
有力な２次ＩｇＧ応＠全生起させるので、ＩｇＧ抗−Ｈ
Ｂｓのみを測定した。以前の実験では、アラムー沈殿さ
せた抗−ＩＤで処理したマウスは、ＩｇＭ抗−ＨＢｓ力
価と比較すると４倍高いＩｇＧ抗−ＨＢｓ力価を示した
（表２）。また、２次体液性抗−ＨＢｓ応答に比べると
以前の観察結果は、ＩｇＧがＨＢｓＡｇブーストの１０
〜２０日後に存在する主な抗体クラスであることを示し
ている。このため、血清はｆ（ＢｓＡｇ注大の１２日後
に定期的に取り、ＩｇＧ抗−ＨＢ＋疋けを残シの研究で
測定した。

第３表に示したデータに基づけば、抗−■０でのブライ
ミングの１４日後にＨＢｓＡｇ　ｆ与えると最適の抗−
ＨＢｓ応答が生じた。各実施例では、ＨＢｓＡｇの１旧
Ｃ抗−１０抗体を投与したマウス群は、プレー　ＩｇＧ
を投与したマウスと比較して高いＨＢｓ応答がみらｊし
た。表３中のＳＥＭ値が極めてｌ司いのは、サンプル数
が少な（（ｎ＝４　）及びマウス間での抗ｆ（Ｂｓ力価
の個体差に起因している。

表３ 抗−ＨＢｓ誘導のための抗イデイオタイプ及びＨＢｓＡ
ｇＢｓＡｇ接種適な時間間崗１抗−ＩＤ　　　　　　７
　　　　　１３０±　３２．１１４　　　　４２２２±
１８２５．７ ２１　　　　　２００±　６４．６ ブＶ−ＩｇＧ７５±　　５．０ １４　　　　　＜５．０” ２１　　　　３０±　１１．５ １、　１群４匹の各群のマウスに、第０口重にア２ムー
沈殿させた抗−ＩＤもしくはプレーＩｇＧ４０μり、次
いで所定の日にＨＢｓＡｇ　６μり全・腹Ｉ臣内没与し
た。マウスからＨＢｓＡｇ接種の１２日後に採血した。

２、この１直は、ＩｇＧ抗−ｆ（Ｂｓ　ｉＪ相ＲＩＡＫ
より測定したエンドポイン）Ｓ／Ｎが２．１で必る抗血
清の希釈度の逆数である。

３、　全マウスの抗−ＨＢｌｌが、１：５の血清希釈度
でもネガティブであった。

抗−ＨＢａ応答を強化させるために必要な抗−よりの最
適量を、次の実験で決定した（表４）。

５ｔｕｄｅｎｔ式両側を検定に依ると、ＨＢａＡｇ刺激
前の７”　Ｌ／　−ＩｇＧ　５０βり接種した場合とア
ラムで沈殿させた抗−ＩＤ５０μｇを接種し之場合のマ
ウス群の抗−ｆ（Ｂｓ力価の有意差は最大（ｐ＜０．０
０１）であった。有意差が、５μり又は２００μｑの抗
−ＩＤ＝ｉ注入したマウス群と、同量のグレーＩｇＧを
接種したコントロール群との比較に於いても認められた
。５０μｑの抗−ＩＤで処理した群に於ける抗−ＨＢａ
平均力価は、５又は２００Ａりの抗−ＩＤで処理した群
と比較して高いけｎども、統ｇｆ学的に有意な差はなか
った。抗−・ＨＢｓ平均力価が高い原因は、また、サン
プル数（ｎ＝４）が少すく且ツマウスの個体差にある。

ＨＢｓ＋ＡｇＯ前ニ５００ｍ９の抗−ＩＤもしくはプレ
ーＩｇＧを投与さｎたマウス群の間の抗−ＨＢｓ応答に
、有意差は認めろ牡なかった（ｐ＞０．２）。更に、抗
−ＨＢｓ平均力価は、多量の抗−ＩＤを投与さ′ｔ′Ｌ
ｆｃマウス群と比較すると低かった。抗原刺激の前に種
々の濃度の抗体を受けた群間の分散の異質性により、逆
数を相加平均して求めた抗−ＨＢｓ力価の常用対数（ｋ
ｇ＋ｏ）で表わして、有意差の計算のための母数によら
ない検定（例えばＫｒｕｓｋａｌ　−Ｗａｌｌｉａ　）
よりもむしろ母数による５ｔｕｄｅｎｔ式を検定の使用
を容易にした。Ｉ（ＢｓＡｇの前にプレーＩｇＧを投与
ざｎたマウスはＩｇＧ抗−Ｂａ応答を生じることに注目
されたい（表４）。このような応答の理由は知ら扛てい
ない。しかしながら、複数の実験でもプレー！ｇＧで処
理した個体群の間で同じ結果が得ら牡た。

表４に示したデータに基づいて、５０μｑの抗−ＩＤが
次の実験に於いて抗−ＨＢｓ　ｆ生しさせる最適量とし
て選定さｎた。

表４ ミクロ−８ＰＩＲＡを用いたＩｇＧ抗−ｆ（Ｂａ誘導の
ためのアラムで沈殿させた抗−イディオタイプの量の効
果１ １．１群４匹の各群のマウスに、第θ８目に種々の濃度
のアラムー沈殿させた抗体、次いで第１４８目に６μり
のＨＢｓＡｇを投与した。第２６日にマウスから採血し
た。

２、逆数を相加平均して求めた力価のｌｏｇ、ｏの標準
偏差。

３、　マウス血清のいくつかは希釈テストでネガティブ
であった。計算全容易にするために、丈ン７’　ルｏ　
濃ｇの２倍をこえる濃度はポジティア”）結果をもたら
すとして、力価の逆数は０．５とした。

４、　　Ｓ　ｔｕｄｉｉｎｔ式両側を検定にょシ決定し
た。

ｍ−ＩＤ抗体のみを受容したＢＡＬＢ　／　ｃマウス１
５間接１ｇＧ抗−ＨＢｓ　Ｐ　Ｆ　Ｕを発生させること
は既：示した（前掲の表参照几こｎらのデータから−ｊ
−ＩＤ抗体がＨＢｓＡｇ刺激を伴わずに抗−ＨＢｇ応４
を誘発し得ることは明らかになった。＠述の実験から得
らｎたｆ１ｖｍＣ表２乃至表４）に基づき、抗−ＩＤの
みを注射することによってＢＡＩ、Ｂ　／　ｅマクス血
清中で抗−ＨＢａを誘導させる試みを行った。アラムで
沈殿させた抗−ＩＤ５０Ａ９を２度注射したマウスには
、グレーＩｇＧ（ｐ＜０．００１）を同様に注射したマ
ウスと比較して、統計的に大＠　１１　ＩｇＧ　％ｉ　
ＨＢｓレスポンスが生じた（表５）。

表５ 抗イデイオタイプの注射によるイデイオタイプレーＩｇ
Ｇ６　　グレーＩｇＧ　　　　＜５　　　０．３　　　
０．００　　　　　　　０−９１．４匹のマウスから成
る複数のグループの谷にアラム沈殿抗−ＩＤ又はプレー
ＩｇＧ抗体のいずれかを１４日の間隔をおいて５０μｑ
ずつ２朋注射した。２回目の注射から１２日後にこむも
マウスの採血を行った。

２、逆数の相加平均力価のｌｏｇ、Ｑの標準偏差。１グ
ループにつき４匹のマウスに注射した。

３、希釈度１：１０におけるＩＤ−抗ＩＤ反応阻害能に
ついて全ての血清を検棄した。

４．３撞のサンプルから何らｎた平均値の範囲５、　ス
チューデント式両１ｉ１１１　を検定により求めた。

６．４匹のマウスの抗血清は希釈テストにおいていず扛
もネカテイブであった。

計算を容易に丁べく、サンプルの濃度の２借金上回る製
置はポジティブの結果をもたらすと想定し、力価の逆数
ヲ０．５として考えた。

抗−ＩＤを投与した４匹のマウスからは１：１０００の
平均抗−ｆ（Ｂｓ力価が得らｎた。逆に、１：５の血清
希釈度でコントロールプレーＩｇＧ　’ｉ注射した４匹
のマウスには抗−ＨＢａは全く検出さｎなかった。これ
らのデータは抗−ＩＤのみがＢＡＬＢ　／　ｃマウスの
体内に検出可能な体液性抗−ＨＢｓを腫生じ得ることを
示している（第３図９゜仇−ＩＤＫよジ誘導さｎた抗−
ＨＢｓを分析した結果異種間ＩＤの光現が検出された（
表５）。これに関しては抗−１０の一纏により生じた抗
−ＨＢａをよむ４棟の血清がＩＤ−抗ＩＤ反応を３８乃
至５４％阻Ｈしたのに対し、グレーＩｇＧを注射した４
匹のマウスの血清を含む非抗１（ＢｓＯ楊台では阻害率
が１０％未満であった。ま之、抗−ＩＤ注射によジ抗ｆ
（Ｂｓを産生するマウスの前兎投血宿は４糊ともＩＤの
抗ＩＤ抗血清への結合を１０％未満阻害した。

これらデータの総括がら、ＢＡＬＢ　／　ｃマウスへの
抗−ｆＤ抗体のインビーボ（１ｎｖｉｖｏ　）　投与ニ
よって類似の異（ヱ間ＩＤを発現する抗−ＨＢｓが誘導
さｔしたことが知見式ｎる。この異種間ＩＤは、ＨＢｓ
Ａｇに先立ち抗−１０又はプレーＩｇＧのいすｎかを受
答した抗〜ＨＢｓポジティブマウスにモ検出された（表
６）。

辰　６ マウス抗−ＨＢｇ”における異裡間イディオタイプの発
現 抗−ＩＤ　　ＨＪ３ｓＡｇ　　　６２５０　　　　５２
抗−１０１（ＢｇＡｇ　　　　２５０　　　　３２抗−
ＩＤ　　ＨＢａＡｇ　　　６２５０　　　　６１抗−Ｉ
Ｄ　　ＨＢａＡｇ　　　　６２５０　　　　６０プレ−
ＩｇＧ　　　ＨＢｓＡｇ　　　　　　２５０　　　　　
　　２８グレ−ＩｇＧ　　ＨＢｓＡ４ｇ　　　　　　ン
５２プレーＩｇＧ　　　ＨＢｓＡｇ　　　　　　　＞５
　　　　　　　５プレ−ＩｇＧ　　　ｆ（ＢｓＡｇ　　
　　　　　２５　　　　　　　１９１、　Ｏ日月マウス
にアンム沈殿抗−ＩＯ又はグレー　ＩｇＧを５μり投与
し、１４日１目）ｉＢｓＡｇを６μ９投与した。２６日
口重とｎもマウスの採血を行った。

２、　２．１のポジティブ（Ｓ）対ネガティブＩｎ）　
ｃｐｍ　＃Ｊｆｒ：もたらした抗血清の逆数希釈度。

興味深いことに、ｌ（ＢｓＡｇに先立ち抗−ＩＤを受容
した４匹のマウスから得らｎた抗−ＨＢｓは、ＨＢｓＡ
ｇに先立ちプレーＩｇＧ　’ｉ投与した４匹中２匹のマ
＋７スかもの抗−ＨＢｓと比較して、イディオタイプ−
抗イディオタイプ反応全よシ大幅に（３２乃至６１Ｘ）
Ｉｍｇした。このようなイブイオタイブ−抗イディオタ
イプ反応の大幅な阻害は抗−よりで処理されたマウスに
おける抗−ＨＢｓ濃度をよシ大きくしたかもしｎノよい
が、前述の横歪では異種間ＩＤ阻害のレベルは抗−ＨＢ
ｓ力価と関係の無いことが示さ扛た。ＨＢｓＡｇに先立
′うプレーＩｇＧを受答し且つ検出可能抗−ＨＢｓ応答
を生じなかった２匹のマウスはイディオタイプ−抗イデ
ィオタイプ反応全く５％阻害した。

血清学的には、ＨＢｓＡｇはａ決定因子と考えられるグ
ループ共通抗原反応性と、２組の対立形質サブタイプ決
定因子、ヰ又はＬと工又はＬとを有しティる。こ扛につ
いては存在し得る）（ＢｓＡｇサブタイプの中４つ即ち
ａｄｖｒ　Ｉ　シ！ｌ見扛及び上とが既に認めらｎてい
る。抗−ＩＤによシ誘発さ扛ＨＢｓＡｇ決定因子を認識
せしめる抗−１（Ｂｓ応答の抗体特異性は、ＨＢ　ｇＡ
ｇサブタイプａｄ”　ｌ　！！及びａｄｒでコートさｎ
たミクロタイタープレート金円いてラジオイムノアッセ
イ（ＲＩＡ）により確認した。抗−ＩＤにより誘導さＡ
た４棟の抗−皿Ｓはいずれも同じくろい良く３種の異な
るＨＢ　ｓＡｇサブタイプを結合せしめた（表７）。こ
のことは抗−Ｉｆ）により誘導さｎた抗−ＨＢｇの反応
性がｌ決定因子に向けらｎたことを意味する（第１図も
参照のこと）。これは、４種のＨＢ♂ＡｇＢｓＡｇサブ
タイプで抗−ＨＢｓ　Ｉ　Ｄ　’ｘブレインキュベート
すルト抗−ＩＤ抗体の結合が同様に阻害されるという前
述の所見を立証するものであり、ｌ決定因子がＩＤの誘
導因子であったことを示している。抗−■ＤＫより誘導
さｎた抗−ＨＢｓがグループに特異なＨＢｓＡｇのｌ決
定因子を認識したという事実は、抗−ＩＤ抗体が伝染性
１（ＢＶに対Ｔる保護免疫性を諺発し得ることの証拠で
ある。これらの事実から、ｌ決定因子に対抗する抗体は
ヒトを１（ＢＹ感染から保護することが証明された。グ
レーＩｇＧのみを２回注射した４匹のマウスの血清につ
いでは、３独のＨＢｓＡｇＢｓＡｇサブタイプ的結合は
皆無でめった。

表７ 抗−ｒＤｒＣｘＢ４ｓさｎ、ｅ抗−１４Ｂａ　〕ＨＢａ
Ａｇ　％異性抗−ＩＤ　　抗−ＩＤ　　　　　５０　　
　８．３　　７．８　７．７１２５０　１．８　１．５
１．６ 抗−ＩＤ　　抗−ＩＤ　　　　　５０　　　８．０　　
７．８　７．８１２５０　２．６　２．３２．０ 抗−ＩＤ　　＋１−ＩＤ５０　　　７．９　　　Ｂ４　
７．７１２５０　３．６　３．３４．４ 抗−ＩＤ　抗−ＩＤ　　　　　５０　　　７．９　　７
．９　８．２１２５０　２．７　４．１４．０ プＬ’−ＩｇＧ２　　グＬ／−ＩｇＧ　　　　　　１０
　　　　（１，８（１，６（１，８■、　ポジティブ１
Ｂ）対ネガティフ遺比の耐昇は前述の方法で行った。

２、　こ扛らのデータはプレーＩｇＧを２回注射した４
匹のマウスに関する複合的結果を表わす。

合成ＨＢａＡｇペプチドに関する主要な問題は、その免
疫原性が比較的弱いことである。アミノ酸配列１２２−
１３７（ペプチド１）を含む未結合の環状合成ベグチド
を接種したマウスでは）ｉＢｓＡｇに附子、る弱い一次
抗体応答（抗−ＨＢａ　）が誘発された。以後、未結合
のペプチドを接種しても、前記の免疫応答はブーストさ
ｎなかった。弱い抗−ＨＢｓ誘発は、外来ＨＢｓＡｇペ
プチドが接種された動物の応答の特徴でるり、免疫原性
を強化するためにペプチドが揮々のキャリヤタンパクに
結合さ扛ているときにも変わらない。我々の知る範囲で
は、ｆ（ＢｓＡｇ粒子に対する場合と同等の高カ価抗−
ＨＢｓが甘酸ペプチドに対して誘発さｎた研死としては
・破傷ノ虱トキソイドに結合されたプラム沈殿環状ペプ
チドｌをマウスに接種したクースしかない。

抗原に対する免役応答がイディオタイプ−抗−イディオ
タイプ網を介して調整さ扛得るとの見解を最初に提示し
たのはＪｅｒｎｅである（珍考文献腐３）。出願人等は
、マウスに於σる抗−ＨＢ８応答の研究中に、環状ベプ
チドエの単独接独以前に抗−イディオタイプ抗体をイン
ビボ投与したときの効果を（ｕｆ究した。表８に示すデ
ータに、Ｃ扛は、環状ペグチド１の接種以前に抗−イデ
ィオタイプ抗体で処理さｎたＢＡＬＢ／　ｃマウスは、
非完投ウサギからのＩｇＧ全接全接定マウスに比較して
商い平均抗−ｆ（Ｂｓ力価（４，０対３８．６］を生じ
た。このような観察は細胞レベルでも確認さ扛た。ν１
ら、ＨＢｓＡｇＢｓＡｇ以Ａｉｌディオタイプ抗体で処
理さｎたマウスは、）（ＢｓＡｇ以前にプレーＩｇＧを
撤積されたマウスグループと比較して商い平均抗−ＨＢ
ｓ力１曲を生じた。注目すべきは、抗−イディオタイプ
。

とペプチド１とを投与さ扛たマウスが・　グレーＩｇＧ
と完全）（ＢｓＡｇとを投与されたマウスと同等の抗−
ＨＢｓ力価を有する（３８．６対３４．０；表１）こと
である。こわらのデータによ扛ば、ペプチド１と併用さ
ｎた抗−イディオタイプが、全［ＢｓＡｇ粒子の早独投
与と同等の抗−ＨＢｓ力価を誘発しイ０ることが判明す
る。このことは、抗−イディオタイプ抗体が、曾成ＨＢ
ｓＡｇペプチド又はインタクトなＨＢｓＡｇ粒子のいず
れに対してもマウスの免役系をプライムし得ることを示
す。

表９は、抗−ＨＢｓ応答の動態を示す。ペプチド以前に
プレーＩｇＧで処理した場合、６匹中２匹のマウスだけ
が検出可能な抗−ＨＢｓ応否金主じた。

対照的に、抗−イディオタイプで処理したマウスは全て
検出可能な抗−ＨＢｓ’ｚ産生じた。どの処理マウスグ
ループでも抗−ＨＢｓ応答は抗原暴露後１６日目にピー
クに達した。抗−イディオタイプとペプチド１とを投与
さ扛たマウスグループとプレー１ｇＧとＨＢｓＡｇとを
投与さｎたマウスグループとを比較すると、免疫応答中
を通じて抗−ＨＢｓ力価は同等であった。但し、抗−イ
ディオタイプ処理グループは、１００％応答性を示すま
でに１６日′ｆｆ：要した。抗−イディオタイプとＨＢ
ｓＡｇとを投与さｊしたマウスでの６ｎ１の平均抗＝Ｈ
Ｂｓ力価が、グレーＩｇＧとＨＢｓＡｇとを投与さｆ′
したマウス、Ｊニジ低い（１０対２６）４由はわからな
い。しかし乍ら、１６日目までには抗−イディオタイプ
抗体及びＨＢｓＡｇを順次投与されたマウスは、他の全
てのグループに比較して最高の抗−ＨＢｓ応答を有して
いた。これらのデータは、抗−イディオタイプ抗体が抗
原刺激以前にマウスの免役系をプライムし得るという知
見と矛盾しない。更にこｎらのデータは、抗−イディオ
タイプ抗体が児長′応答を操作し得るという見解の裏付
けとなる。

感染因子用ワクチンとして抗−ＩＤ仇体を使用する理論
はこｎまでも槙々に提案検討さｔｔて（・る（参考文献
３−５）。しかし乍ら我々の知ｐ得る範囲では、抗−Ｉ
Ｄが感染因子に対する防イｇｌ免疫を誘発し得た実験例
としては、マウスのアフリカトリパノーノーマ病につい
て報告されたものしかない（参考文献２２−２３）。抗
−ＩＤが免役を誘発し得る第２のムコ−能性としては［
Ｂｖが考えろ詐る。これまでの研究により、抗−ＨＢｓ
がｆ（ＢＹによる攻撃又は再感染に対して防御応答を生
じることが知見さ扛ている。抗−１０の単独投与によっ
て抗−ＨＢｓが誘発さ扛得ること、及び、この抗−ＨＢ
ＩＩがＨＢＶに自然感染した人体中で産生される抗−Ｈ
ｆｌｓと共通のイデイオメイプ的決足基を発現すること
にエフ、ＨＢＶ感染用の抗−ＩＩ）ワクチン便用が町ｎ
ｒであると考えろｔＬる。更に抗−ＨＢａはまた、ＨＢ
Ｖに対する防御免疫をｇ発するエピトープたるｌ（Ｂｓ
Ａｇの群特異的見決定基を認識した。この可能性に関す
るテストはまだ十分ではない。（５Ｊ故なら、ヒトＨＢ
Ｖで感染されるのがチンパンジーとヒトとに限ら扛てい
るからである。

又は、抗−ＩＤをｌ（Ｂ＠Ａｇと併用し抗原刺激に先立
って宿主の免疫系をプライムさせることによって、ＨＢ
ｓＡｇの単独投与に比較して抗−ＨＢｓ応答ヲ相乗する
こともげ能であろう。マウスを用い抗−ＩＤの投与に、
！：り抗−ＨＢｓを誘発させるこ扛もの研究は、）（Ｂ
ｓＡｇに対する体液性免役応答をＩＤ網の変調を介して
理解しようとする試みである。本文に記載の変調プロセ
スに於ける抗−ＨＢｓの産生が、ＩＤを発現し抗原と結
合するＡｂ−ａ（抗−抗−ＩＤ抗体）を分泌するクロー
ンの発現によるものか、又は、ＨＢｓＡｇが従来の抗原
刺激を生じさせないような内部表ｆを有することによる
ものかについては未だ解明さｎていない。

抗−イディオタイプ抗体は感染因子に対する免疫応答音
プライム丁べく有用である。本発明に於いて、抗イデイ
オタイプ抗体は、完全Ｈｆ３ｓＡｇによる刺激に先立っ
てマウスの免疫系をプライムする。

更に、抗−イディオタイプの予接種によジ、合成環状ペ
プチド１２２−１３７に全ＨＢｓＡｇ粒子の単独投与に
よって得られるのと同等の抗−ＨＢｓ応答を誘発させ得
た。最近では、ポリオウィルスに対する抗体の中和を後
に誘発する工うに実験動物の免疫系全プライムすべく小
ペプチドが使用さｎた（参考文献２４）。１１：ｌ願人
等は、抗−イディオタイプ抗体が宿主免疫系をプライム
して弱ワクチンに対する防御免疫応答を相乗し得ること
をここに証明したが、感染因子に対しても恐らく全く同
様の現象が生じるであろう。この特性により、壱伏期間
が長く慢性病になり易い病原体を十分に防御するでろろ
う。前記の如き病気の代表とじでＢ型ウィルス肝灸があ
る。

従って、不発明により、所望の目的を十分に達成し得、
本文中に記載の利点及び別の第１ｊ点を得ることがｉＪ
能である。好ましい具体例に基いて本発明を説明してさ
たが、本発明の要旨及び特許請求の範囲に包含される蛇
囲で方法の構成及びステップに関−ｆる多くの変更が可
能であることは自業者に容易に理解さｔ″Ｉ−よう。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ヒト抗−ＨＢｓｔｈＩ　ｌ）−抗−ＩＤと１
（ＢｓＡｇサブタイプ４回！、シエ及び臣との反応の１
利害を示す説明図、 第２図は、）（ＢｓＡｇ　ｆ　洋なう抗−ＨＢａ　、　
Ｉ　Ｄが抗−ＩＤ抗体により阻害されることを示す説明
図、第３図は、ｌ（ＢｓＡｇの投与又は抗−ＩＤ試薬に
応答して抗−ｆ（Ｂｓを並生するマウスの応答を示す説
明図、 第４図は、イディオタイプに対する抗体及び［ＢｓＡｇ
が順次投与さ扛たマウスに於ける抗−１（１３ｓプラー
ク形成ユニソ）　（ＰＦＵ）応答の動態を示す説明図で
ある。 第４図は、詳細には、４０μノのイディオタイプに対す
る抗体が投与さ扛７日後に５μノの１（ＢａＡｇが投与
さｆしたマウスに於ける抗−ＨＢｓプラーク−形成ユニ
ット（ＰＦＵ）応答の！！ｌ］態を示す図であり、図中
の棒グラフは、３匹のマウスの牌ＩｉＡ当りの半均ＰＦ
Ｕ　（１棒グラフは直接ＰＦＵ、斜祿棒グラフは間接Ｐ
ＦＵ）’ｚ示し、ブラケットは咲祭範囲を示１−（コー
トしてない又はオバルブミン処理のＳ　ｋ＜、　Ｂ　Ｃ
では直接又は間接プラークは全くイ芙出さＡ７エかった
ジ。 代理人弁易士今　　　村　　　　元 Ｐｑ　郭　ン乏、　イ東 Ａ　イブにオタ１ノ０６′）理工 Ｂ、　内ａｒ七イ雪岨 Ｆｉｇ、３ イテ゛−オタ１ア イテ７才グイ７

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （ＩＪ　　沈降抗−イデイオメイグ抗体を含有する組成
   物。 （２）　　アジュバントを含有することを特徴とする特
   許請求の範囲第１項に記載の組成物。 （３）沈降抗−イディオメイプ抗体が、異種動物で侍ら
   れた抗血清即ちマウスモノクローナル抗体、ラットモノ
   クローナル抗体、ヒトモノクローナル抗体及びこれらの
   抗体フラグメントｌ含む抗血清から成るグループから選
   択されたものであることを％敵とする特許請求の範囲第
   １槻に記載の組成物。 （４）　　沈１４−抗−イｆイオメイグ抗体がＨＢｓＡ
   ｇに対する免疫応答を特異的に変調するものであること
   を％鍬とする付ｇ！ｆ請求の範囲第１項に記載の組成Ｉ
   ＪＯ ｆ５）　　ＨＢ　ａＡｇの色決定基に対して特異的な抗
   −イディオタイプ抗体を含有し、Ｂ型肝炎表面抗原に対
   する抗体の産生全生起する免役化製剤。 （６）　　抗−イディオタイプ抗体が、ＨＢｓＡｇの１
   決定基又はそのサブタイプ紅Ｗ、更若しくは止に対して
   特異的であることを特徴とする特許請求の範囲第５項に
   記載の免疫化製剤。 （７）　　抗−イディオタイプ抗体を宿主に注入するこ
   と力・ら成る、宿主に１康鳴又はウィルス関連自己免役
   症候群を誘発するウィルス性感染因子又はウィルス因子
   に対する免疫応答の変調方法。 （８）　　ウィルス因子がＢ型肝炎ウィルスであるか、
   又は誘発腫瘍、がＢ型肝炎つィルス関遅初期肝細胞通で
   あることを特徴とする特許請求の範囲第７項に記載の方
   法。 （９）　　ウィルス因子がＢ型肝炎ウィルスであシ且つ
   誘発抗体が抗−）Ｉｎｓであることを特徴とする特許請
   求の範囲第７ｙ４に６己載の方法。 ｌＩＧ　　抗−ＨＢｓがＨＢｓＡｇの先決足載に抗する
   ものであり抗−ＨＢｓイディオタイプ−抗−イディオタ
   イプ種間反応を阻害することｔ特徴と１−る特許請求の
   範囲第９項に記載の方法。 Ｖυ　抗−イディオタイプ抗体を宿主に注入し抗−ＨＢ
   ｓを誘発することから成る、宿主内でのＢ型肝炎表面抗
   原に対する免役応答の変調方法。 ｕ３　　抗−１（ＢｓがＨＢ　ｇＡｇの１姦塞決定基に
   抗するものでめり、抗−ＨＢｓイディオタイプ−抗−イ
   ブ推定 イオタイブ種間反応又は他の抗−ＨＢｓイテＢｓイディ
   オタイプデイオタイプ戸七工反応全阻害することを特徴
   とする′＃訂請求の範囲第１１項に記載の方法。 ０　抗−イデイオタイプ抗体ｔイｄ主に注入した鏝に・
   天然ｆ（ＢｓＡｇを宿主に徽イ■することを特徴とする
   特許請求の範囲第１１唄に記載の方法。 −ユ（イ）抗−イディオタイプ抗体を宿主に注入した鏝
   に、合成ＨＢｓＡｇペプチド又は組換ＤＮＡ技術によっ
   て製造したＨＢｓＡｇを宿主に接種することを特徴とす
   る％ｄ１賄求の範囲第１１項に記載の方法。 ｕ９　　合成Ｉ（ＢｓＡｇペプチドが、アミノば残基１
   １７〜１３７．Ｊ’７１２２〜１３７を共役又は非共役
   形で含有するせ成猿状ベグチドであることを％敵とする
   特許請求の範囲第１１項に記載の方法。