JPH0243757B2

JPH0243757B2 -

Info

Publication number: JPH0243757B2
Application number: JP56172515A
Authority: JP
Inventors: Jinuemon Konishi
Original assignee: Nippon Zoki Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Nippon Zoki Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1981-10-28
Filing date: 1981-10-28
Publication date: 1990-10-01
Also published as: JPS5872549A; ZA827839B

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、新規ペプチド類並びにそれを含有し
てなる医薬組成物に関する。近年、種々のペプチド及びその誘導体が合成さ
れ生体に対する作用が研究されている。本発明者
は、新規な特定のペプチド類が優れた抗潰瘍作用
を有することを見出し、本発明を完成した。本発明ペプチド類は、次の一般式（）で表わ
される化合物である。〔式中、R₁は水素、ｔ−ブトキシカルボニル、
ベンジルオキシカルボニル又は式R₁−Ａ−で表
わされる基（Ａはグリシン残基）、R₂はヒドロキ
シ又はベンジルオキシ、R₃は水素又はベンジル、
R₄は水素又はトシル、R₅は水素又はベンジルオ
キシカルボニル（塩素で置換されてもよい）を表
わす。〕前記一般式（）において、Ser、His、Lysは
それぞれセリン、ヒスチジン、リジンの残基を表
わし、Ｄ−、Ｌ−又はDL−体のいずれであつて
もよい。 R₁は水素、ｔ−ブトキシカルボニル、ベンジ
ルオキシカルボニル又は式R₁−Ａ−で表わされ
る基であり、このときＡはグリシン残基、R₁は
好ましくはR₁−Ａ−を除く前記の各基である。
R₂は、ヒドロキシ又はベンジルオキシを表す。
R₃はβ−ヒドロキシが無置換、又はベンジルに
よつて置換され、 R₄は、β−イミダゾリルが無置換、又はトシ
ルによつて置換され、 R₅は、ε−アミノが無置換、又はベンジルオ
キシカルボニル（塩素で置換されてもよい）によ
つて置換されている。本発明は、前記一般式（）で表わされる化合
物の薬学的に許容しうる塩を包含し、例えば塩
酸、硫酸、硝酸、臭化水素酸、リン酸、ホウ酸、
ギ酸、酢酸、シユウ酸、マレイン酸、クエン酸、
酒石酸、コハク酸、グルコン酸、乳酸、安息香
酸、ｐ−トルエンスルホン酸等との酸付加塩、又
はナトリウム、リチウム等のアルカリ金属との塩
が挙げられる。前記一般式（）で表わされる本発明ペプチド
類及びその薬学的に許容しうる塩は、抗潰瘍剤等
の医薬又はそれを製造するための合成中間体とし
て有用な化合物である。本発明ペプチド類は、ペプチド化学における通
常の方法によつて製造することができ、液相法若
しくは固相法のどちらによつてもよい。ペプチド結合を形成させるための縮合法として
はアジド法、活性エステル法、混合酸無水物法、
酸クロリド法、縮合剤を用いる方法等があり、こ
れらを適宜組み合わせてもよい。縮合反応に際しては、アミノ酸は本発明ペプチ
ド類を構成する適当な置換基を有しているものを
用いることができ、例えば前記置換基中、R₃が
必要に応じアルキル又はアラルキル、R₄が必要
に応じトシル、トリチル、アラルキル、又はハロ
ゲン、アルコキシ若しくはニトロで置換されてい
てもよいアラルキルオキシカルボニル、R₅がア
ルコキシカルボニル、トシル、又はハロゲン、ア
ルコキシ若しくはニトロで置換されていてもよい
アラルキルオキシカルボニルであるアミノ酸が利
用できる。又、各アミノ酸のα−アミノ基が、ア
ルコキシカルボニル又はハロゲン、アルコキシ若
しくはニトロで置換されていてもよいアラルキル
オキシカルボニルで置換されたものを用いるのが
よい。また、R₂としてアルコキシ、アリールオ
キシ又はアラルキルオキシであるものを用いるこ
とができる。これらの置換基は、本発明ペプチド類の合成工
程中、若しくは合成終了後、接触還元、酸分解等
の手段により選択的に若しくは全部を除去するこ
とができ、さらに所望により、通常の方法で他の
本発明ペプチド類を構成する置換基を導入するこ
とができる。固相法による合成の場合、適当な樹脂、例えば
クロロメチル化又はアミノメチル化樹脂を用い
て、順次縮合を繰り返して行なう。樹脂より本発
明ペプチド類を分離するに際し、フツ化水素酸を
用いることにより、構成アミノ酸に結合した各置
換基も同時に除去することができる。本発明ペプチド類は通常の方法で単離、精製で
き又、各縮合工程において十分に精製することが
好ましい。得られた目的物は、融点、TLC、比旋光度、
IR、NMR、アミノ酸分析、元素分析等を用いて
同定した。次に、実施例により本発明ペプチド類の製造例
を示す。各実施例において、特に示さない限りア
ミノ酸はＬ−体を用いた。置換基、試薬等の略号
は以下のとおりである。Ｚ；ベンジルオキシカルボニルＺ−Cl；ｏ−クロロベンジルオキシカルボニル Boc；ｔ−ブトキシカルボニル Tos；トシル（ｐ−トルエンスルホニル） Bzl；ベンジル OBzl；ベンジルオキシ TosOH；ｐ−トルエンスルホン酸 DCHA；ジシクロヘキシルアミン DCC；ジシクロヘキシルカルボジイミド DMF；ジメチルホルムアミドまた、TLCはシリカゲル上で、以下の溶媒系
を用いた。 (a) 酢酸エチル：ｎ−ヘキサン＝２：１ (b) クロロホルム：メタノール：水＝８：３：１（上層） (c) 酢酸エチル (d) ｎ−ブタノール：水：酢酸：ピリジン＝42：30：24：４ (e) フエノール：水：28％アンモニア水＝775：215：104 実施例１ (i) Lys（Ｚ）−OBzl・TosOH76.3ｇ、Boc−His
（Tos）・DCHA63.3ｇをテトラヒドロフラン
800mlに懸濁し、DCC32.0ｇを加え−10〜−15
℃で２時間、０℃で６時間さらに室で10時間撹
拌した後、不溶物をろ去、溶媒を留去した。残
渣に酢酸エチルを加え、クエン酸水溶液、飽和
食塩水、重ソウ水で洗浄、無水芒硝で乾燥後溶
媒を留去した。得られたオイル状物にエーテル
を加えて固化させ、これをエーテル洗浄後乾燥
してBoc−His（Tos）−Lys（Ｚ）−OBzlの結晶
91.0ｇを得た。 (ii) TosOH・H₂O9.8ｇをジオキサン26mlに溶解
し、Boc−His（Tos）−Lys（Ｚ）−OBzl5.0ｇに
添加、適時振盪しながら室温に１時間置いた
後、水を加え酢酸エチルで抽出した。重ソウ
水、飽和食塩水で洗浄後無水芒硝で乾燥し、溶
媒を留去して、淡褐色オイルのHis（Tos）−
Lys（Ｚ）−OBz13.75ｇを得た。 (iii) Boc−Ser（Bzl）1.67ｇ、His（Tos）−Lys
（Ｚ）−OBzl3.75ｇ、塩化メチレン13.2mlの混合
物を−15℃に冷却し、撹拌下DCC1.28ｇを添
加、２時間後さらに室温で２時間撹拌した。不
溶物をろ取し、酢酸エチルで洗浄、ろ液に合せ
クエン酸水溶液、飽和食塩水、重ソウ水で洗
浄、無水芒硝で乾燥後溶媒を留去した。得られ
たオイル状残渣にエーテルを加えて結晶化させ
Boc−Ser（Bzl）−His（Tos）−Lys（Ｚ）−
OBzl4.2ｇを得た。 mp：86〜88℃ TLC：Rf＝0.21(a)、0.83(b)、0.83(c) 〔α〕²³ _D＝−4.95゜（ｃ＝２，DMF） IR（KBr，cm^-1）：3300（NH）， 1740，1720，1690，1640（CO）， 1530（amide，Ar）実施例２ TosOH・N₂O1.5ｇをジオキサン４mlに溶解
し、これをBoc−Ser（Bzl）−His（Tos）−Lys
（Ｚ）−OBzl1.0ｇに添加し、室温で40分間振盪し
た後、水を加え酢酸エチルで抽出した。重ソウ
水、飽和食塩水で洗浄後無水芒硝で乾燥、溶媒留
去し、エーテルを加えて結晶化させSer（Bzl）−
His（Tos）−Lys（Ｚ）−OBzlの白色粉末0.75ｇを
得た。 mp：133〜136℃ TLC：Rf＝0.68(b) 〔α〕²³ _D＝＋0.4゜（ｃ＝２，DMF） IR（KBr，cm^-1）：3380，3280（NH）， 1720，1710，1645（CO）， 1540，1510（amide，Ar）実施例３Ｚ−Gly16.45ｇ、Ser（Bzl）−His（Tos）−Lys
（Ｚ）−OBzl60ｇ、塩化メチレン314mlの混合溶液
を−15℃に冷却し、撹拌下DCC16.23ｇを加え、
そのままの温度で２時間さらに室温で撹拌を設け
た。析出物をろ取、これを塩化メチレンで洗浄
し、洗液をろ液に合しクエン酸水溶液、飽和食塩
水、重ソウ水で洗浄後無水芒硝で乾燥、溶媒を留
去した。得られた油状物に酢酸エチルを加えて結
晶化し、Ｚ−Gly−Ser（Bzl）−His（Tos）−Lys
（Ｚ）−OBzlの白色粉末60.2ｇを得た。 mp：144〜145.5℃ TLC：Rf＝0.03(a)、0.82(b)、0.73(c) 〔α〕²³ _D＝−6.2゜（ｃ＝２，DMF） IR（KBr，cm^-1）：3450，3300（NH）， 1735，1690，1660，1635（CO）， 1540，1515（amide，Ar）実施例４Ｚ−Gly−Ser（Bzl）−His（Tos）−Lys（Ｚ）−
OBzl10.3ｇを塩化メチレン150mlに溶かし、１−
ヒドロキシベンゾトリアゾール2.7ｇを添加、室
温で15時間撹拌した。生成したゲル状物をろ取、
酢酸エチルで洗浄した。ろ液を濃縮し、アセトン
を加えて生成した固形物を前記ゲル状物と合せ、
メタノールアセトンより再結晶してＺ−Gly−
Ser（Bzl）−His−Lys（Ｚ）−OBzlの無色粉末6.1
ｇを得た。 mp：171〜175℃ TLC：Rf＝0.53(b) 〔α〕²³ _D＝−5.2゜（ｃ＝0.5，DMF） IR（KBr，cm^-1）：3320（NH）， 1730，1680，1665，1640，1620（CO）， 1565，1525（amide，Ar）実施例５Ｚ−Gly−Ser（Bzl）−His−Lys（Ｚ）−
OBzl23.2ｇを、メタノール160ml、酢酸40ml、水
20mlの混合溶媒中に懸濁し、パラジウム−炭素
10.5ｇを加え、水素常圧下38時間撹拌した。触媒
ろ去、水洗後ろ液を濃縮した。粗成物を水に溶解
し、強酸性イオン交換樹脂（NH₄ ⁺タイプ）に付
し、0.5N−アンモニア水で溶出した。溶出液を
濃縮し、酢酸２mlを添加して撹拌後濃縮乾固し
た。アセトンを加えて結晶化しGly−Ser−His−
Lys・CH₃COOH・H₂O9.2ｇを得た。 mp：126〜132℃（分解） TLC：Rf＝0.29(d)、0.48(e) 〔α〕²³ _D＝−30.6゜（ｃ＝２，H₂O） IR（KBr，cm^-1）： 3600−2500（NH，OH，NH₃ ⁺）， 1680−1500（CO，amide）元素分析：（C₁₇H₂₉O₆N₇・CH₃COOH・H₂Oと
して）Ｃ％Ｈ％Ｎ％理論値 45.15 6.93 19.41 実測値 45.43 6.79 19.58 実施例６ (i) Boc−Lys（Ｚ−Cl）・ｔ−ブチルアミン30ｇ
を水300mlに溶かし、氷冷してクエン酸水溶液
を加えてPH４とし、酢酸エチルで抽出、洗浄、
乾燥した。得られたBoc−Lys（Ｚ−Cl）にクロ
ロメチル化樹脂（２％ジビニルベンゼン−ポリ
スチレン、Cl含量1.32mmole／ｇ）47ｇ、エタ
ノール140ml、クロロホルム65ml、トリエチル
アミン7.7mlを加え、室温で１時間撹拌後さら
に48時間加熱還流した。樹脂をろ過、エタノー
ル、酢酸、メタノール、塩化メチレンで洗浄
し、減圧乾燥して57ｇのBoc−Lys（Ｚ−Cl）−
樹脂を得た。 (ii) 固相法合成反応器にBoc−Lys（Ｚ−Cl）−樹
脂15ｇを入れ、塩化メチレンで振盪、ろ過を繰
り返し樹脂の洗浄、膨潤化を行なつた。塩化メ
チレン中トリフルオロ酢酸でBoc化し（室温、
20分）、塩化メチレンで十分に洗浄した後、ト
リエチルアミンで10分間処理し、さらに塩化メ
チレンで洗浄した。Boc−His（Tos）6.8ｇの
塩化メチレン溶液及びDCC3.4ｇの塩化メチレ
ン溶液を加え、２時間振盪した後、塩化メチレ
ン、エタノールで洗浄を繰り返した。少量の樹
脂をとり出して縮合の完結度をチエツクしなが
ら、同様の方法でBoc−Ser−（Bzl）4.9ｇ、
Boc−Gly2.9ｇを用いて順次反応をくり返し、
18.6ｇの樹脂を得た。 (iii) 得られたBoc−Gly−Ser（Bzl）−His（Tos）
−Lys（Ｚ−Cl）−樹脂9.6ｇとアニソール９mlを
HF反応管に入れて減圧し、−70℃以下に冷却
後HF90mlを導き、０℃で１時間撹拌した。
HF留去後水を加えて撹拌し、樹脂をろ過、こ
れを水洗した。ろ液と洗液を合し、エーテルで
洗浄、水層を濃縮した。強酸性イオン交換樹脂
（NH₄ ⁺タイプ）に付し、0.03N〜0.5N−アンモ
ニア水で溶出した。以下実施例５と同様にして
Gly−Ser−His−Lys・CH₃COOH・H₂Oを得
た。さらに、これをTosOHで処理して、Gly−Ser
−His−Lys・2TosOHを得た。 mp：184〜188℃（分解）以下に、本発明ペプチド類の薬理作用について
述べる。急性毒性本発明ペプチド（前記実施例５）をマウスに静
脈内投与し、72時間後の死亡数より急性毒性を評
価した。その結果、本発明のペプチドのLD₅₀は1500
mg／Kg以上であつた。幽門結紮潰瘍抑制作用一群10匹のウイスター系雄性ラツトを24時間絶
食後、エーテル麻酔下に幽門部を結紮した。本発
明ペプチド（前記実施例５）を腹腔内投与し、18
時間後胃を摘出、切開した後、前胃部に出現した
潰瘍をNarumiらの方法〔Ｓ・Narmi，etal；J.
Takeda Res.Lab.，29，85（1970）〕に準じて６
段階の潰瘍指数を用いて評価した。結果を第１表
に示す。

【表】次に、本発明ペプチドの各種実験潰瘍に対する
50％抑制量（ID₅₀）を後記第２表に示す。なお、本発明ペプチド（前記実施例５）に並び
に比較薬として用いたシメチジン、アトロピンは
静脈内投与した。拘束ストレス潰瘍抑制実験(A) Takagiらの方法〔Takagi，K.etal.；Chem.
Pharm.Bull.，12，465（1964）〕に準じて、ラツ
トの金網拘束水浸ストレス（25℃，４時間）潰瘍
に対する効果を調べた。被検薬はストレス負荷前
に各１回投与した。アスピリン潰瘍抑制実験(B) Brodieらの方法〔Brodie，D.A.＆ Chase，
B.J.；Gastroenterology，53，604（1967）〕に準
じ、ラツトに被検薬各１回投与後アスピリン200
mg／Kgをそれぞれ経口投与した。ヒスタミン潰瘍抑制実験(C) Bucherらの方法〔Bucher F.etal.；Beitr.
Path.Anat.，81，391（1928）〕に準じ、ラツトに
被検薬各１回投与後ヒスタミン300mg／Kgをそれ
ぞれ腹腔内投与した。コルチゾン潰瘍抑制実験(D) Robertらの方法〔Robert，A.＆ Nezamis，
J.E.；Proc.Soc.Exptl.Biol.Med.，99，443
（1958）〕に準じ、ラツトを絶食させ酢酸コルチゾ
ン20mg／Kgを１日１回４日間皮下投与して潰瘍を
誘発させた。被検薬はそれぞれ酢酸コルチゾンと
同時に１日１回４日間投与した。システアミン十二指腸潰瘍抑制実験(E) Robertらの方法〔Robert，H.etal.；
Digestion，11，199（1974）〕に準じ、システアミ
ン塩酸塩400mg／Kgを皮下投与してラツト十二指
腸潰瘍を作成した。被検薬は各１回システアミン
投与前に投与した。

【表】ジン
アトロ 0.4 0.52 0.35 0.25 0.3
5
ピン

Claims

【特許請求の範囲】１次の一般式（）で表わされる化合物及びそ
の薬学的に許容しうる塩。〔式中、R₁は水素、ｔ−ブトキシカルボニル、
ベンジルオキシカルボニル又は式R₁−Ａ−で表
わされる基（Ａはグリシン残基）、R₂はヒドロキ
シ又はベンジルオキシ、R₃は水素又はベンジル、
R₄は水素又はトシル、R₅は水素又はベンジルオ
キシカルボニル（塩素で置換されてもよい）を表
わす。〕２下記化合物又はその薬学的に許容しうる塩を
有効成分として含有する抗潰瘍剤。 Gly−Ser−His−Lys