JPH02422A - 低温保護溶液及び方法 - Google Patents
低温保護溶液及び方法Info
- Publication number
- JPH02422A JPH02422A JP63261287A JP26128788A JPH02422A JP H02422 A JPH02422 A JP H02422A JP 63261287 A JP63261287 A JP 63261287A JP 26128788 A JP26128788 A JP 26128788A JP H02422 A JPH02422 A JP H02422A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- sperm
- solution
- betaine
- cells
- freezing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 33
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 title 1
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N Betaine Natural products C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 64
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 48
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 claims abstract description 36
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 6
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 6
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 claims abstract description 4
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 3
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O N,N,N-trimethylglycinium Chemical compound C[N+](C)(C)CC(O)=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims abstract 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 29
- 239000008150 cryoprotective solution Substances 0.000 claims description 23
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 claims description 7
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 claims description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 abstract description 28
- 230000008014 freezing Effects 0.000 abstract description 28
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 abstract description 6
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract description 6
- 238000010257 thawing Methods 0.000 abstract description 6
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 abstract description 5
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 abstract description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 3
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 abstract description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 3
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 abstract 1
- 229960000999 sodium citrate dihydrate Drugs 0.000 abstract 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 21
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 18
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 11
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 10
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 8
- 230000009027 insemination Effects 0.000 description 7
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 6
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 6
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 5
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- 230000009087 cell motility Effects 0.000 description 3
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 3
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 238000004017 vitrification Methods 0.000 description 2
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 230000000959 cryoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 150000004683 dihydrates Chemical class 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- JTJMJGYZQZDUJJ-UHFFFAOYSA-N phencyclidine Chemical compound C1CCCCN1C1(C=2C=CC=CC=2)CCCCC1 JTJMJGYZQZDUJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 235000011083 sodium citrates Nutrition 0.000 description 1
- 230000009182 swimming Effects 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
- A01N1/0221—Freeze-process protecting agents, i.e. substances protecting cells from effects of the physical process, e.g. cryoprotectants, osmolarity regulators like oncotic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Dentistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は精子、卵子及び血球のような生存可能な細胞の
ための改良された低温保護性溶液に関する。本発明の溶
液は細胞にとって生理的に受容可能でありかつベタイン
を含む水性懸濁性ビヒクルを含む。方法面に於て、本発
明はベタインを含む水性懸濁性ビヒクル中に細胞を低温
で保持することによる生存可能な細胞の改良された低温
保存方法に関する。
ための改良された低温保護性溶液に関する。本発明の溶
液は細胞にとって生理的に受容可能でありかつベタイン
を含む水性懸濁性ビヒクルを含む。方法面に於て、本発
明はベタインを含む水性懸濁性ビヒクル中に細胞を低温
で保持することによる生存可能な細胞の改良された低温
保存方法に関する。
凍結はずっと以前から精子、卵子及び血球のような生細
胞の保存に用いられ又は考えられており、凍結貯蔵はか
かる細胞がもとの生物から除去又は分離された後に使用
されることを可能にする。事実、マンテガフザ（Ｍａｎ
ｔｅｇａｚｚａ）は１８６６年にヒト精子を保存するた
めの凍結金庫（ｆｒｏｚｅｎｂａｎｋｓ）の使用を最初
に提案したようである〔マンテガッザ（Ｍａｎｔｅｇａ
ｚｚａ）、 Ｄ、＋ スロ・スペルマ・ウマノ （Ｓ
ｕｌｌｏ ｓｐｅｒｍａ ｕｍａｎｏ）、 Ｒｅｎｄｉ
ｃ、 Ｒｅｏｌｅ。
胞の保存に用いられ又は考えられており、凍結貯蔵はか
かる細胞がもとの生物から除去又は分離された後に使用
されることを可能にする。事実、マンテガフザ（Ｍａｎ
ｔｅｇａｚｚａ）は１８６６年にヒト精子を保存するた
めの凍結金庫（ｆｒｏｚｅｎｂａｎｋｓ）の使用を最初
に提案したようである〔マンテガッザ（Ｍａｎｔｅｇａ
ｚｚａ）、 Ｄ、＋ スロ・スペルマ・ウマノ （Ｓ
ｕｌｌｏ ｓｐｅｒｍａ ｕｍａｎｏ）、 Ｒｅｎｄｉ
ｃ、 Ｒｅｏｌｅ。
Ｉｎ５ｔ、 Ｌｏｍｂ、 ３：１８３ （１８６６）
）例えば、男性からとった新鮮な精子は比較的短期間、
例えば１〜８日間生存可能であるが、とってから長時間
後例えば数か月後に精子を利用することはしばしば必要
又は有益である。同様に、子宮からとった女性の卵子は
ほんの短期間しか生存可能でない。精子及び（又は）卵
子を比較的長期間保存するために種々の方法（主として
凍結）が用いられており、人工授精の増加と共に精子及
び（又は）卵子を有効に貯蔵することが必要になって来
た。例えば、精子又は卵子の凍結は家畜飼育業者（牛、
馬、豚、ヤギ、家禽などの）が必要なときに使用するた
めの有用な精子及び（又は）卵子の株を保持することを
可能にし、家畜の輸送よりも費用や面倒が少ない該株の
飼育目的の輸送をも可能にし、かつ遺伝的に優性の雄を
より多くの数の雌に種つけすることを可能にする。ヒト
に関しては、人工授精は種々の医学上及び健康上の理由
でも用いられている。
）例えば、男性からとった新鮮な精子は比較的短期間、
例えば１〜８日間生存可能であるが、とってから長時間
後例えば数か月後に精子を利用することはしばしば必要
又は有益である。同様に、子宮からとった女性の卵子は
ほんの短期間しか生存可能でない。精子及び（又は）卵
子を比較的長期間保存するために種々の方法（主として
凍結）が用いられており、人工授精の増加と共に精子及
び（又は）卵子を有効に貯蔵することが必要になって来
た。例えば、精子又は卵子の凍結は家畜飼育業者（牛、
馬、豚、ヤギ、家禽などの）が必要なときに使用するた
めの有用な精子及び（又は）卵子の株を保持することを
可能にし、家畜の輸送よりも費用や面倒が少ない該株の
飼育目的の輸送をも可能にし、かつ遺伝的に優性の雄を
より多くの数の雌に種つけすることを可能にする。ヒト
に関しては、人工授精は種々の医学上及び健康上の理由
でも用いられている。
しかし、精子、卵子及び赤血球のような生細胞の貯蔵及
び保存は、先行技術の凍結方法を用いる生存可能細胞の
生存率がしばしば全く低いので、全く困難であることが
わかった。凍結条件は比較的苛酷であり、凍結及び融解
条件の両方から生ずる熱的衝撃又は他の結晶生成のよう
な現象がしばしば細胞を殺す。従って、融解した細胞の
生存率を最大にすることが多くの研究者の目標であった
。
び保存は、先行技術の凍結方法を用いる生存可能細胞の
生存率がしばしば全く低いので、全く困難であることが
わかった。凍結条件は比較的苛酷であり、凍結及び融解
条件の両方から生ずる熱的衝撃又は他の結晶生成のよう
な現象がしばしば細胞を殺す。従って、融解した細胞の
生存率を最大にすることが多くの研究者の目標であった
。
例えば、精子アリクウォット（ａｌｉｑｕｏｔｓ）に関
しては、融解された調製物が、典型的には精子細胞の運
動性で測定される最低の授精率を示さねばならない。そ
うでなければそのアリクウオットが人工授精に好結果で
使用できる見込みはない。
しては、融解された調製物が、典型的には精子細胞の運
動性で測定される最低の授精率を示さねばならない。そ
うでなければそのアリクウオットが人工授精に好結果で
使用できる見込みはない。
先行技術は精子及び卵子のような凍結細胞の生存率を改
良するための種々の方法を記載している。
良するための種々の方法を記載している。
米国特許第４．００７．０８７号〔エリクソン（Ｅｒｉ
ｃｓｓｏｎ） ）は凍結貯蔵で生存する運動性精子の百
分率を増加すると主張する精子分別及び貯蔵方法を記載
している。エリクソン（Ｅｒｉｃｓｓｏｎ）は非運動性
の、不完全な、又は死んだ精子から運動性精子を分離す
る方法を記載し、運動性精子を含む分画を次に凍結する
。エリクソン（ＩＩ！ｒｉｃｓｓｏｎ）は自分の方法が
試料の授精率に影響を与える環境（全精子：運動性精子
の比）及び生存能（運動性精子の運動性の累進）因子を
増強することによって精子試料の授精率を増加すると報
告しているが、彼の方法は恐らくは最も重大である個体
数（運動性精子数）を改良しない。
ｃｓｓｏｎ） ）は凍結貯蔵で生存する運動性精子の百
分率を増加すると主張する精子分別及び貯蔵方法を記載
している。エリクソン（Ｅｒｉｃｓｓｏｎ）は非運動性
の、不完全な、又は死んだ精子から運動性精子を分離す
る方法を記載し、運動性精子を含む分画を次に凍結する
。エリクソン（ＩＩ！ｒｉｃｓｓｏｎ）は自分の方法が
試料の授精率に影響を与える環境（全精子：運動性精子
の比）及び生存能（運動性精子の運動性の累進）因子を
増強することによって精子試料の授精率を増加すると報
告しているが、彼の方法は恐らくは最も重大である個体
数（運動性精子数）を改良しない。
米国特許第３，７９１，３８４号〔リヒター（Ｒｉｃｈ
ｔｅｒ）ら〕はデキストロース、エチレンジニトロ四酢
酸２水化物、クエン酸ナトリウム及び炭酸水素ナトリウ
ムを含む不活性化用溶液による新鮮な精子の不活性化を
含む雌豚の精子の深い凍結及び融解方法を記載している
。リヒター（Ｒｉｃｈｔｅｒ）は精子の不活性化が凍結
に対するより大きい抵抗力を与えると報告している。
ｔｅｒ）ら〕はデキストロース、エチレンジニトロ四酢
酸２水化物、クエン酸ナトリウム及び炭酸水素ナトリウ
ムを含む不活性化用溶液による新鮮な精子の不活性化を
含む雌豚の精子の深い凍結及び融解方法を記載している
。リヒター（Ｒｉｃｈｔｅｒ）は精子の不活性化が凍結
に対するより大きい抵抗力を与えると報告している。
米国特許第４，４２９，５４２号〔サカオ（Ｓａｋａｏ
）ら〕、第４．４８７．０３３号〔サカオ（Ｓａｋａｏ
）ら〕、第３．８９３，３０８号〔バーケイ （Ｂａｒ
ｋａＹ）ら〕及び第４．４８０，６８２号〔カメタ（Ｋ
ａｍｅｔａ） ら〕はすべて、精子及び卵子試料の授精
率を改良すると主張する異なる凍結方法を記載している
。これらの方法のすべてに於て、熱的衝撃を減少しかつ
存在する生存可能な精子及び卵子の生存率を増加させる
ことを企てる種々の手段によって溶液中の精子及び卵子
の温度を低下する。しかし、これらの方法のほとんどは
利用するのが複雑で、面倒でありかつ費用が高い。液体
窒素蒸気中での“ジャーマン（Ｓｈｅｒｒｎａｎ） ”
の急速凍結法〔ジャーマン（Ｓｈｅｒｍａｎ） ＋Ｊ、
Ｋ、、凍結及び凍結乾燥によるヒト精子の改良保存方
法（Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｐｒｅ
ｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ）Ｉｕｍａｎ Ｓｐｅｒｍａ
ｔｏｚｏａ ｂｙ Ｆｒｅｅｚｉｎｇ ａｎｄ Ｆｒｅ
ｅｚｅ Ｄｒｙｉｎｇ）、 Ｆｅｒｔｉｌ、 ５ｔｅｒ
ｉ！、、１４ ： ４９〜６４（１９６３））及び“ベ
ールマンーサナダ（Ｂｅｈｒｍａｎ−３ａｎａｄａ）
”の徐々の凍結方法〔ベールマン（Ｂｅｈｒｍａｎ）ら
、液体窒素冷凍機中で凍結、貯蔵されたヒト精液による
メトロロガウス及びフモロガス授精（Ｍｅｔｅｒｏ−１
ｏｇｏｕｓ ａｎｄ Ｈｕｍｏｌｏｇｕｓ Ｉｎｓｅｍ
ｔｎａｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ＨｕｍａｎＳｅｍｅｎ
Ｆｒｏｚｅｎ ａｎｄ ５ｔｏｒｅｄ ｉｎ ａ Ｌｉ
ｑｕｉｄ ＮｉｔｒｏｇｅｎＲｅｆｒｉｇｅｒａｔｏｒ
）、 Ｆｅｒｔｉｌ、 ５ｔｅｒｉ１．１７：４５７
−４６６（１９６６））を含む他の凍結方法も用いられ
ている。
）ら〕、第４．４８７．０３３号〔サカオ（Ｓａｋａｏ
）ら〕、第３．８９３，３０８号〔バーケイ （Ｂａｒ
ｋａＹ）ら〕及び第４．４８０，６８２号〔カメタ（Ｋ
ａｍｅｔａ） ら〕はすべて、精子及び卵子試料の授精
率を改良すると主張する異なる凍結方法を記載している
。これらの方法のすべてに於て、熱的衝撃を減少しかつ
存在する生存可能な精子及び卵子の生存率を増加させる
ことを企てる種々の手段によって溶液中の精子及び卵子
の温度を低下する。しかし、これらの方法のほとんどは
利用するのが複雑で、面倒でありかつ費用が高い。液体
窒素蒸気中での“ジャーマン（Ｓｈｅｒｒｎａｎ） ”
の急速凍結法〔ジャーマン（Ｓｈｅｒｍａｎ） ＋Ｊ、
Ｋ、、凍結及び凍結乾燥によるヒト精子の改良保存方
法（Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｐｒｅ
ｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ）Ｉｕｍａｎ Ｓｐｅｒｍａ
ｔｏｚｏａ ｂｙ Ｆｒｅｅｚｉｎｇ ａｎｄ Ｆｒｅ
ｅｚｅ Ｄｒｙｉｎｇ）、 Ｆｅｒｔｉｌ、 ５ｔｅｒ
ｉ！、、１４ ： ４９〜６４（１９６３））及び“ベ
ールマンーサナダ（Ｂｅｈｒｍａｎ−３ａｎａｄａ）
”の徐々の凍結方法〔ベールマン（Ｂｅｈｒｍａｎ）ら
、液体窒素冷凍機中で凍結、貯蔵されたヒト精液による
メトロロガウス及びフモロガス授精（Ｍｅｔｅｒｏ−１
ｏｇｏｕｓ ａｎｄ Ｈｕｍｏｌｏｇｕｓ Ｉｎｓｅｍ
ｔｎａｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ＨｕｍａｎＳｅｍｅｎ
Ｆｒｏｚｅｎ ａｎｄ ５ｔｏｒｅｄ ｉｎ ａ Ｌｉ
ｑｕｉｄ ＮｉｔｒｏｇｅｎＲｅｆｒｉｇｅｒａｔｏｒ
）、 Ｆｅｒｔｉｌ、 ５ｔｅｒｉ１．１７：４５７
−４６６（１９６６））を含む他の凍結方法も用いられ
ている。
はとんどの凍結方法に於て、生細胞は、凍結に先立って
、生理的に受容可能な低温保護溶液で希釈される。１９
４９年に、ウシの精子を凍結するための保護剤としてグ
リセロールが好結果で使用できることが発見され〔ボル
ゲ（Ｐｏｌｇｅ）ら、低温に於けるガラス化及び脱水後
の精子の再生（Ｒｆｖａｉｖａｌ ｏｆ Ｓｐｅｒｍａ
ｔｏｚｏａ Ａｆｔｅｒ Ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ａｔ Ｌｏｗ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）、 Ｎａｔｕ
ｒｅ＋ １６４ ： ６６６（１９４９））、その時以
来、標準低温保護溶液はグリセロール、黄卵、クエン酸
ナトリウム、緩衝系、ブドウ糖、グリセリン及び時々１
種又は２種以上の抗生物質を含んでいる〔例えば“アカ
−マン（Ａｃｋｅｒｍａｎ）″溶液：ベールマン（Ｂｅ
ｈｒｍａｎ）及びアカ−マン（Ａｃｋｅｒｍａｎ）、
Ａｍ、 Ｊ、 ０ｂｓｔｅｔ、 ａｎｄ鉦匣ｃｏ１．．
１０３：６５４ ６５５ （１９６９））。
、生理的に受容可能な低温保護溶液で希釈される。１９
４９年に、ウシの精子を凍結するための保護剤としてグ
リセロールが好結果で使用できることが発見され〔ボル
ゲ（Ｐｏｌｇｅ）ら、低温に於けるガラス化及び脱水後
の精子の再生（Ｒｆｖａｉｖａｌ ｏｆ Ｓｐｅｒｍａ
ｔｏｚｏａ Ａｆｔｅｒ Ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ａｔ Ｌｏｗ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）、 Ｎａｔｕ
ｒｅ＋ １６４ ： ６６６（１９４９））、その時以
来、標準低温保護溶液はグリセロール、黄卵、クエン酸
ナトリウム、緩衝系、ブドウ糖、グリセリン及び時々１
種又は２種以上の抗生物質を含んでいる〔例えば“アカ
−マン（Ａｃｋｅｒｍａｎ）″溶液：ベールマン（Ｂｅ
ｈｒｍａｎ）及びアカ−マン（Ａｃｋｅｒｍａｎ）、
Ａｍ、 Ｊ、 ０ｂｓｔｅｔ、 ａｎｄ鉦匣ｃｏ１．．
１０３：６５４ ６５５ （１９６９））。
低温保護希釈剤の有効性は細胞の生存率にとって重大で
あり、精子又は卵子アリクウォソトに関しては、そのア
リクウォットの授精率に直接関係する。
あり、精子又は卵子アリクウォソトに関しては、そのア
リクウォットの授精率に直接関係する。
今回、細胞にとって生理的に受容可能でありかつベタイ
ンを含む水性懸濁性ビヒクルを含む生存可能細胞用低温
保護溶液が細胞の生存率を顕著に増加することが発見さ
れた。例えば、本発明の低温保護溶液で凍結した精子試
料はベタインを含まない典型的な低温保護溶液で凍結し
た試料に比べて運動性の劇的な増加を示す。本発明は有
効でしかも比較的単純かつ安価な低温保護溶液並びに生
細胞の凍結及び保存方法を提供する。
ンを含む水性懸濁性ビヒクルを含む生存可能細胞用低温
保護溶液が細胞の生存率を顕著に増加することが発見さ
れた。例えば、本発明の低温保護溶液で凍結した精子試
料はベタインを含まない典型的な低温保護溶液で凍結し
た試料に比べて運動性の劇的な増加を示す。本発明は有
効でしかも比較的単純かつ安価な低温保護溶液並びに生
細胞の凍結及び保存方法を提供する。
本発明はかかる細胞の生存率を増加させる生存可能細胞
用低温保護溶液を意図している。本発明の低温保護溶液
は細胞にとって生理的に受容可能でありかつ該溶液の約
１〜３０重量％の量のベタインを含む水性懸濁性ビヒク
ルを含む。好ましくは、低温保護溶液中のベタインの濃
度は該溶液の約２５重量％又はそれ以下である。１つの
特殊な低温保護溶液はベタイン、及び付加的に乳糖、卵
黄、グリセロール、ブドウ糖、エチレンジアミン四酢酸
（“ＥＤＴＡ”）、炭酸水素ナトリウム、クエン酸三ナ
トリウム・２水化物、蒸留水及びペニシリンを含む。
用低温保護溶液を意図している。本発明の低温保護溶液
は細胞にとって生理的に受容可能でありかつ該溶液の約
１〜３０重量％の量のベタインを含む水性懸濁性ビヒク
ルを含む。好ましくは、低温保護溶液中のベタインの濃
度は該溶液の約２５重量％又はそれ以下である。１つの
特殊な低温保護溶液はベタイン、及び付加的に乳糖、卵
黄、グリセロール、ブドウ糖、エチレンジアミン四酢酸
（“ＥＤＴＡ”）、炭酸水素ナトリウム、クエン酸三ナ
トリウム・２水化物、蒸留水及びペニシリンを含む。
方法面に於て、本発明は、細胞にとって生理的に受容可
能でありかつビヒクルの約１〜約３０重世％の範囲の量
のベタインを含む水性懸濁性ビヒクル中に細胞を低温に
於て保持することを含む生存可能細胞の改良凍結方法を
意図している。
能でありかつビヒクルの約１〜約３０重世％の範囲の量
のベタインを含む水性懸濁性ビヒクル中に細胞を低温に
於て保持することを含む生存可能細胞の改良凍結方法を
意図している。
以下、本発明の好ましい実施態様を詳しく説明する。生
存可能細胞用低温保護溶液は貯蔵されたアリクウォット
の凍結及び融解に生き残る細胞の数を増加させ、従って
、これらのアリクウォットの効率及び存用性を増加させ
る。凍結された精子及び卵子に関しては、低温保護溶液
は凍結されたかかる細胞のアリクウォットを長期間授精
率の低下なしに貯蔵することを可能にする。本発明は、
それらに限定されないが、ウマ、ウシ、ブタ、家禽、ヒ
ツジ、ヤギ、魚又はヒトからの血球、精子、及びこれら
の源からの卵子（受精及び未受精の両方の）を含む、任
意の源からの生存可能細胞の凍結のために利用すること
ができる。
存可能細胞用低温保護溶液は貯蔵されたアリクウォット
の凍結及び融解に生き残る細胞の数を増加させ、従って
、これらのアリクウォットの効率及び存用性を増加させ
る。凍結された精子及び卵子に関しては、低温保護溶液
は凍結されたかかる細胞のアリクウォットを長期間授精
率の低下なしに貯蔵することを可能にする。本発明は、
それらに限定されないが、ウマ、ウシ、ブタ、家禽、ヒ
ツジ、ヤギ、魚又はヒトからの血球、精子、及びこれら
の源からの卵子（受精及び未受精の両方の）を含む、任
意の源からの生存可能細胞の凍結のために利用すること
ができる。
驚いたことには、低温保護溶液へのベタインの添加は凍
結細胞の生存率の劇的な増加を引き起こすことを示した
。ベタイン（水酸化ｌ−カルポキシーＮ、Ｎ、Ｎ−１−
リメタナミニウム）は同一分子内に陽イオン部位と陰イ
オン部位とを含む分子内塩（又は双性イオン）である。
結細胞の生存率の劇的な増加を引き起こすことを示した
。ベタイン（水酸化ｌ−カルポキシーＮ、Ｎ、Ｎ−１−
リメタナミニウム）は同一分子内に陽イオン部位と陰イ
オン部位とを含む分子内塩（又は双性イオン）である。
ベタインはいわゆる“ビオゲニソクアミン”としても知
られている。ベタインは人工リポソームの低温保護剤と
して作用することは知られていたが、今まで精子、卵子
などのような生細胞の低温保護溶液の一部分として利用
されたことはない。ベタインが凍結細胞の生存率を増加
させる正確な機構はわかっていない。
られている。ベタインは人工リポソームの低温保護剤と
して作用することは知られていたが、今まで精子、卵子
などのような生細胞の低温保護溶液の一部分として利用
されたことはない。ベタインが凍結細胞の生存率を増加
させる正確な機構はわかっていない。
精子試料の凍結用に用いられる典型的な低温保護溶液へ
のベタインの添加は、融解後、ベタインを含まない同じ
低温保護溶液で凍結された試料に比べて、細胞運動性の
実質的な増加を示す試料をもたらした。試験した精子試
料は種馬からとったものであるが、本発明の低温保護溶
液で凍結後の改良された生存能は他の源、例えばウシ、
豚、家禽、魚、ヒトなどからの精子についても、又卵子
（受精又は未受精の）及び血球についても得られ得る。
のベタインの添加は、融解後、ベタインを含まない同じ
低温保護溶液で凍結された試料に比べて、細胞運動性の
実質的な増加を示す試料をもたらした。試験した精子試
料は種馬からとったものであるが、本発明の低温保護溶
液で凍結後の改良された生存能は他の源、例えばウシ、
豚、家禽、魚、ヒトなどからの精子についても、又卵子
（受精又は未受精の）及び血球についても得られ得る。
爽施拠
低温保護溶液中へ、該溶液の１．２（５，１０，１５，
２０，２５，３０重量％レベルでベタインを含有させた
。対照試料はベタインを含まなかった。すべての実験的
研究に於て、溶液はベタイン以外に １１重量％乳糖水溶液 ５２ｍｌメルク（Ｍｅｒ
ｃｋ）溶液 ２３ｎｊ２卵黄 ２０Ｉ
１１１ ８７重量％グリセロール ５ｍｆによって構成さ
れた。
２０，２５，３０重量％レベルでベタインを含有させた
。対照試料はベタインを含まなかった。すべての実験的
研究に於て、溶液はベタイン以外に １１重量％乳糖水溶液 ５２ｍｌメルク（Ｍｅｒ
ｃｋ）溶液 ２３ｎｊ２卵黄 ２０Ｉ
１１１ ８７重量％グリセロール ５ｍｆによって構成さ
れた。
メルク（Ｍｅｒｃｋ）溶液は本質的に
ブドウ糖 ６ｇ
ＥＤＴＡ ０．３７ｇ炭酸水素
ナトリウム ０．１２ ｇクエン酸三ナトリウ
ム ・ ２水化物０． ３ ７ ５ ｇ蒸留水
１００ｍｊ！ペニシリン
５０．０ＩＵ（国際単位） からなっていた。
ナトリウム ０．１２ ｇクエン酸三ナトリウ
ム ・ ２水化物０． ３ ７ ５ ｇ蒸留水
１００ｍｊ！ペニシリン
５０．０ＩＵ（国際単位） からなっていた。
この低温保護溶液を、最初の３回の射出が取られるオー
プン（ｏｐｅｎ）方法で集めたウマの精子の試料へ添加
した。各実施例は包装及び希釈する前に２０分間順化さ
せた。試料の温度は３２℃であった。順化された精子試
料（１ｍＪ）を低温保護溶液１００μｌを有するエッペ
ンドルフ管に充填した。得られた試料をセル・フリーザ
ー・モデルＲ２０４（フラナー・プロダクツ社（Ｐｌａ
ｎｅｒ Ｐｒｏ−ｄｕｃｔｓ Ｌｔｄ、）、 ＵＳＡ）
中で３つの方法によって凍結した。
プン（ｏｐｅｎ）方法で集めたウマの精子の試料へ添加
した。各実施例は包装及び希釈する前に２０分間順化さ
せた。試料の温度は３２℃であった。順化された精子試
料（１ｍＪ）を低温保護溶液１００μｌを有するエッペ
ンドルフ管に充填した。得られた試料をセル・フリーザ
ー・モデルＲ２０４（フラナー・プロダクツ社（Ｐｌａ
ｎｅｒ Ｐｒｏ−ｄｕｃｔｓ Ｌｔｄ、）、 ＵＳＡ）
中で３つの方法によって凍結した。
方法■：試料を３２℃に於て１０分間保つ。試料温度を
最初毎分１℃の速度で一７℃まで下げ、試料を一７℃に
於て１０分間保ち、次に試料温度を再び毎分０．３℃の
速度で一３０℃に下げ、次に毎分０．１℃の速度で一３
３℃まで下げた。試料をその後−１９６℃の液体窒素中
に貯蔵した。
最初毎分１℃の速度で一７℃まで下げ、試料を一７℃に
於て１０分間保ち、次に試料温度を再び毎分０．３℃の
速度で一３０℃に下げ、次に毎分０．１℃の速度で一３
３℃まで下げた。試料をその後−１９６℃の液体窒素中
に貯蔵した。
方法■：試料を３２℃に於て１０分間保ち、次に試料温
度を毎分３℃の速度で一３５℃に達するまで下げた。次
に試料を一１９６℃の液体窒素中に貯蔵した。
度を毎分３℃の速度で一３５℃に達するまで下げた。次
に試料を一１９６℃の液体窒素中に貯蔵した。
方法■：試料を３２℃に於て１０分間保った。試料温度
を一７℃に達するまで毎分１℃の速度で下げた。試料温
度を一７℃で１０分間保った後、温度が一３５℃に達す
るまで毎分３℃の速度で下げた。その後で、試料を。
を一７℃に達するまで毎分１℃の速度で下げた。試料温
度を一７℃で１０分間保った後、温度が一３５℃に達す
るまで毎分３℃の速度で下げた。その後で、試料を。
−１９６℃の液体窒素中に貯蔵した。
すべての試料を、４５℃の水浴中で約１分間融解させた
。
。
２つの実験相を行った。第１相に於て、１頭の種馬から
の３つの異なる射精をとった。各射精からの試料を上で
示した種々のレベルのベタインを含む低温保護溶液なら
びにベタインを有する幾ら、かの低温保護溶液と共に凍
結させた。各組の試料について３つの凍結方法（上記■
、■、■）を用いた。第２相に於て、５頭の種馬からの
精子を集め、一定レベル（該溶液の約２５重量％）のベ
タインを有する低温保護溶液と共に凍結させた。おのお
のが凍結法（上記■、■、■）の１つによって行われる
３つの試験を行った。
の３つの異なる射精をとった。各射精からの試料を上で
示した種々のレベルのベタインを含む低温保護溶液なら
びにベタインを有する幾ら、かの低温保護溶液と共に凍
結させた。各組の試料について３つの凍結方法（上記■
、■、■）を用いた。第２相に於て、５頭の種馬からの
精子を集め、一定レベル（該溶液の約２５重量％）のベ
タインを有する低温保護溶液と共に凍結させた。おのお
のが凍結法（上記■、■、■）の１つによって行われる
３つの試験を行った。
融解された試料を、存在する精子細胞の生存能を測定す
るために試験した。下記の運動性測定を行った。
るために試験した。下記の運動性測定を行った。
１、全運動性（％） （” ｔｏｔａｌ ｍｏｔ、
” ） ：細胞の運動性、すなわち運動性を示す精子
細胞の百分率 ２、 νｍｏｔ” （μｍ／ｓ）：精子細胞の平均速
度３、累進的運動性（％）（“ｐｒｏｇｒ、”）：累進
的遊泳移動を示す精子細胞の百分率 ４、 ｖ−累進的速度（μｍ／Ｓ） （”ｖｐｒｏ
ｇｒ”）：精子細胞の平均累進的速度 測定は、ＢＧＴビオテクニ７り （Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉ
ｃ）ＧｍｂＨから商品名“モティリ−（Ｍｏｔｉｌｉｅ
） ”で発売されているソフトウェアを用いるレージー
モット（Ｌａｚｙｍｏｔ）装置ＣＢＧＴビオテクニ７り
（Ｂｉｏ−ｔｅｃｈｎｉｃ） ＧｍｂＨ）を用いて行
われた。各試料の運動性はＨｅ−Ｎｅレーザーで検出さ
れ、結果を上記ソフトウェアを用いて計算した。
” ） ：細胞の運動性、すなわち運動性を示す精子
細胞の百分率 ２、 νｍｏｔ” （μｍ／ｓ）：精子細胞の平均速
度３、累進的運動性（％）（“ｐｒｏｇｒ、”）：累進
的遊泳移動を示す精子細胞の百分率 ４、 ｖ−累進的速度（μｍ／Ｓ） （”ｖｐｒｏ
ｇｒ”）：精子細胞の平均累進的速度 測定は、ＢＧＴビオテクニ７り （Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉ
ｃ）ＧｍｂＨから商品名“モティリ−（Ｍｏｔｉｌｉｅ
） ”で発売されているソフトウェアを用いるレージー
モット（Ｌａｚｙｍｏｔ）装置ＣＢＧＴビオテクニ７り
（Ｂｉｏ−ｔｅｃｈｎｉｃ） ＧｍｂＨ）を用いて行
われた。各試料の運動性はＨｅ−Ｎｅレーザーで検出さ
れ、結果を上記ソフトウェアを用いて計算した。
表
Ｉ ：
融解された精子試料の運動性−
凍結方法Ｉ
表
■ ：
融解された精子試料の運動性−
凍結方法■
表
■ ：
融解された精子試料の運動性−
凍結方法■
（対照） ２０ ３２ １３ ６０
表１、■、■はそれぞれ凍結方法Ｉ、■、■を用いて単
一の種馬からとった凍結精子からのデータを示す。各場
合に於て、ベタインを含む低温保護溶液中で凍結された
試料はベタインを含まない低温保護溶液中で凍結された
対照試料よりも大きい全運動性を示した。ベタイン含有
低温保護溶液で凍結された試料は、又、対照試料に比べ
て増加したｖｍｏｔ 、累進的運動性及び速度累進性を
も示し、細胞の増加した生存能をさらに明示している。
表１、■、■はそれぞれ凍結方法Ｉ、■、■を用いて単
一の種馬からとった凍結精子からのデータを示す。各場
合に於て、ベタインを含む低温保護溶液中で凍結された
試料はベタインを含まない低温保護溶液中で凍結された
対照試料よりも大きい全運動性を示した。ベタイン含有
低温保護溶液で凍結された試料は、又、対照試料に比べ
て増加したｖｍｏｔ 、累進的運動性及び速度累進性を
も示し、細胞の増加した生存能をさらに明示している。
最適ベタイン濃度は該溶液の約２０〜約２５重量％の範
囲であった。重要なことは、融解された試料、特に最適
範囲内の試料が新鮮な精子試料の運動性（一般に例えば
約６０〜約８０％の全運動性を示す）に比べて、種々の
パラメーターで測定される運動性の高いレベルを示した
ことである。本発明の低温保護溶液を用いる融解された
試料は人工授精操作に用いるため非常に適している。
囲であった。重要なことは、融解された試料、特に最適
範囲内の試料が新鮮な精子試料の運動性（一般に例えば
約６０〜約８０％の全運動性を示す）に比べて、種々の
パラメーターで測定される運動性の高いレベルを示した
ことである。本発明の低温保護溶液を用いる融解された
試料は人工授精操作に用いるため非常に適している。
表■、■、■は５頭の異なる種馬からとった凍結精子試
料に関するデータを示す。全運動性及び他の運動性パラ
メーターを、２５％（該溶液重量の）ベタイン含有低温
保護溶液で凍結した融解試料及びベタインを含まない低
温保護溶液で凍結した融解試料について測定した。これ
らのデータは、ベタイン含有低温保護溶液が対照試料に
比べて全運動性並びに他の運動性パラメーターの劇的増
加を示しており、本発明の低温保護溶液で凍結された試
料は融解後高度の生存能を示す。対照試料の全運動性は
、はとんどの場合、むしろ低く、これらの試料は人工授
精に不適であることを意味する。
料に関するデータを示す。全運動性及び他の運動性パラ
メーターを、２５％（該溶液重量の）ベタイン含有低温
保護溶液で凍結した融解試料及びベタインを含まない低
温保護溶液で凍結した融解試料について測定した。これ
らのデータは、ベタイン含有低温保護溶液が対照試料に
比べて全運動性並びに他の運動性パラメーターの劇的増
加を示しており、本発明の低温保護溶液で凍結された試
料は融解後高度の生存能を示す。対照試料の全運動性は
、はとんどの場合、むしろ低く、これらの試料は人工授
精に不適であることを意味する。
これに反して、本発明の低温保護溶液で凍結した試料は
高度の運動性を示し、これらの試料が人工授精に極めて
好適であることを示している。
高度の運動性を示し、これらの試料が人工授精に極めて
好適であることを示している。
以上の一般的説明及び実施例は本発明の説明のためのも
のであり、限定と考えられるべきではない。本発明の精
神及び範囲内での他の変化は可能であり、当業者には明
らかであろう。
のであり、限定と考えられるべきではない。本発明の精
神及び範囲内での他の変化は可能であり、当業者には明
らかであろう。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、細胞にとって生理的に受容可能な水性懸濁性ビヒク
ルと溶液の約１〜約３０重量％の範囲の量のベタインと
を含むことを特徴とする生存可能な細胞のための低温保
護溶液。 ２、ベタインの量が該溶液の約２５重量％であることを
特徴とする請求項１記載の低温保護溶液。 ３、生存可能な細胞が精子細胞であることを特徴とする
低温保護溶液。 ４、該溶液の約１〜約３０重量％の範囲の量のベタイン
と、付加的に乳糖、卵黄、グリセロール、ブドウ糖、エ
チレンジアミン四酢酸、炭酸水素ナトリウム、クエン酸
三ナトリウム２水化物、蒸留水及びペニシリンを含むこ
とを特徴とする細胞にとって生理的に受容可能な生存可
能細胞用低温保護溶液。 ５、細胞にとって生理的に受容可能な水性懸濁性ビヒク
ル中に低温に於て細胞を保持する工程を含みかつ該ビヒ
クルが該溶液の約１〜約３０重量％の範囲の量のベタイ
ンを含むことを特徴とする生存可能な細胞の低温保存方
法。 ６、懸濁性ビヒクル中に存在するベタインの量が該懸濁
性ビヒクルの約２５重量％であることを特徴とする請求
項６記載の方法。 ７、該生存可能な細胞が精子細胞であることを特徴とす
る請求項６記載の方法。 ８、該精子が種馬の精子であることを特徴とする請求項
７記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US109495 | 1987-10-16 | ||
| US07/109,495 US4980277A (en) | 1987-10-16 | 1987-10-16 | Cryoprotectant solution and method |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02422A true JPH02422A (ja) | 1990-01-05 |
Family
ID=22327967
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63261287A Pending JPH02422A (ja) | 1987-10-16 | 1988-10-17 | 低温保護溶液及び方法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4980277A (ja) |
| EP (1) | EP0312114A3 (ja) |
| JP (1) | JPH02422A (ja) |
| FI (1) | FI884758A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002538113A (ja) * | 1999-03-02 | 2002-11-12 | メッサデク ジャラル | 抗血栓剤用途へのグリシンベタインの使用 |
| JP2007119372A (ja) * | 2005-10-26 | 2007-05-17 | Hiroshima Univ | 抜歯体の凍結保存方法 |
| JP2013523704A (ja) * | 2010-03-31 | 2013-06-17 | スタビリテック リミテッド | ウイルス粒子、ポリペプチド又は生体材料を安定化させる添加剤 |
| US10029007B2 (en) | 2011-10-05 | 2018-07-24 | Stabilitech Biopharma Ltd | Stabilisation of polypeptides |
| US10206960B2 (en) | 2010-03-31 | 2019-02-19 | Stabilitech Biopharma Ltd | Stabilisation of viral particles |
Families Citing this family (63)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5192553A (en) * | 1987-11-12 | 1993-03-09 | Biocyte Corporation | Isolation and preservation of fetal and neonatal hematopoietic stem and progenitor cells of the blood and methods of therapeutic use |
| US5045446A (en) * | 1988-08-26 | 1991-09-03 | Cryopharm Corporation | Lyophilization of cells |
| IL90188A0 (en) * | 1988-05-18 | 1989-12-15 | Cryopharm Corp | Process and medium for the lyophilization of erythrocytes |
| US5153004A (en) * | 1989-06-02 | 1992-10-06 | Cryopharm Corporation | Freezing and thawing of erythrocytes |
| WO1992012722A1 (en) * | 1990-01-17 | 1992-08-06 | The Regents Of The University Of California | Antifreeze glycopeptide compositions to protect cells and tissues during freezing |
| US5358931A (en) * | 1990-01-17 | 1994-10-25 | The Regents Of The University Of California | Interaction of thermal hysteresis proteins with cells and cell membranes and associated applications |
| EP0542914A4 (en) * | 1990-08-10 | 1993-11-18 | Analytical Control Systems, Inc. | Improved diagnostic and therapeutic compositions |
| AU650045B2 (en) * | 1990-09-12 | 1994-06-09 | Lifecell Corporation | Method and apparatus for cryopreparation dry stabilization and rehydration of biological suspensions |
| US5336616A (en) * | 1990-09-12 | 1994-08-09 | Lifecell Corporation | Method for processing and preserving collagen-based tissues for transplantation |
| US8067149B2 (en) | 1990-09-12 | 2011-11-29 | Lifecell Corporation | Acellular dermal matrix and method of use thereof for grafting |
| US5242792A (en) * | 1991-02-25 | 1993-09-07 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Method for the preservation of red blood cells by lyophilization using glycerol or inositol with disaccharides |
| GB9114202D0 (en) * | 1991-07-01 | 1991-08-21 | Quadrant Holdings Cambridge | Blood products |
| US5817453A (en) * | 1991-12-06 | 1998-10-06 | University Of Pennsylvania | Techniques for freezing spermatogonia cells |
| US5328821A (en) * | 1991-12-12 | 1994-07-12 | Robyn Fisher | Cold and cryo-preservation methods for human tissue slices |
| US6663780B2 (en) | 1993-01-26 | 2003-12-16 | Danisco Finland Oy | Method for the fractionation of molasses |
| FI96225C (fi) | 1993-01-26 | 1996-05-27 | Cultor Oy | Menetelmä melassin fraktioimiseksi |
| US5595866A (en) * | 1994-05-27 | 1997-01-21 | Methodist Hospital Of Indiana, Inc. | Step-wise method to remove cryoprotectant from sperm |
| US5795398A (en) | 1994-09-30 | 1998-08-18 | Cultor Ltd. | Fractionation method of sucrose-containing solutions |
| US5580714A (en) * | 1995-03-08 | 1996-12-03 | Celox Laboratories, Inc. | Cryopreservation solution |
| US6224776B1 (en) | 1996-05-24 | 2001-05-01 | Cultor Corporation | Method for fractionating a solution |
| AU3290097A (en) * | 1996-05-29 | 1998-01-05 | Universal Preservation Technologies, Inc. | Loading and unloading of permeating protectants for cell, tissue, and organ cryopreservation by vitrification |
| US20040229203A1 (en) * | 1996-06-14 | 2004-11-18 | Biostore New Zealand Ltd. | Compositions and methods for the preservation of living tissues |
| US6037116A (en) * | 1996-06-14 | 2000-03-14 | Biostore New Zealand, Ltd. | Compositions comprising betaine, sodium citrate and sodium chloride and methods for the preservation of biological materials |
| US5827640A (en) * | 1996-06-14 | 1998-10-27 | Biostore New Zealand Limited | Methods for the preservation of cells and tissues using trimethylamine oxide or betaine with raffinose or trehalose |
| US5879875A (en) * | 1996-06-14 | 1999-03-09 | Biostore New Zealand | Compositions and methods for the preservation of living tissues |
| US5962213A (en) * | 1996-06-14 | 1999-10-05 | Biostore New Zealand Limited | Compositions and methods for the preservation of living tissues |
| US6361933B1 (en) | 1996-06-14 | 2002-03-26 | Biostore New Zealand Limited | Solutions for the preservation of tissues |
| WO1997047192A1 (en) * | 1996-06-14 | 1997-12-18 | Biostore New Zealand Limited | Compositions and methods for the preservation of living tissues |
| US6743575B2 (en) | 1996-06-14 | 2004-06-01 | Biostore New Zealand Ltd. | Compositions and methods for the preservation of living tissues |
| JP2001502664A (ja) * | 1996-09-06 | 2001-02-27 | ユニバーサル プリザーベーション テクノロジーズ，インコーポレイテッド | 細胞、組織、器官及び生物体の貯蔵保存用ガラス化溶液 |
| AU752985B2 (en) | 1997-01-31 | 2002-10-03 | Xy, Llc. | Optical apparatus |
| US6149867A (en) | 1997-12-31 | 2000-11-21 | Xy, Inc. | Sheath fluids and collection systems for sex-specific cytometer sorting of sperm |
| US6933326B1 (en) | 1998-06-19 | 2005-08-23 | Lifecell Coporation | Particulate acellular tissue matrix |
| JP2002521043A (ja) | 1998-07-30 | 2002-07-16 | エックスワイ，インコーポレイテッド | 非外科的人工授精のためのウマシステム |
| US6485959B1 (en) | 1998-10-07 | 2002-11-26 | Cedars Sinai Medical Center | Cell preconditioning and cryopresevation medium |
| US20030049840A1 (en) * | 1998-10-07 | 2003-03-13 | Demetriou Achilles A. | Cell preconditioning and cryopreservation medium |
| US6140123A (en) * | 1998-10-07 | 2000-10-31 | Cedars-Sinai Medical Center | Method for conditioning and cryopreserving cells |
| US7208265B1 (en) | 1999-11-24 | 2007-04-24 | Xy, Inc. | Method of cryopreserving selected sperm cells |
| DK2258172T3 (en) | 2000-05-09 | 2017-08-07 | Xy Llc | Flow cytometer for differentiation of X-chromosome-bearing and Y-chromosome-bearing populations of spermatozoa |
| MXPA03001069A (es) * | 2000-08-10 | 2004-04-02 | Gtc Biotherapeutics Inc | Crio-preservacion de esperma. |
| US7713687B2 (en) | 2000-11-29 | 2010-05-11 | Xy, Inc. | System to separate frozen-thawed spermatozoa into x-chromosome bearing and y-chromosome bearing populations |
| WO2002043574A2 (en) | 2000-11-29 | 2002-06-06 | Xy, Inc. | System to separate frozen-thawed spermatozoa into x-chromosome bearing and y-chromosome bearing populations |
| US7087371B2 (en) * | 2002-06-28 | 2006-08-08 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Material and methods for the production of sperm and analysis thereof |
| CA2532376C (en) | 2002-08-01 | 2015-05-12 | Colorado State University Research Foundation | Low pressure sperm cell separation system |
| US8486618B2 (en) | 2002-08-01 | 2013-07-16 | Xy, Llc | Heterogeneous inseminate system |
| MXPA05001654A (es) | 2002-08-15 | 2005-10-18 | Xy Inc | Citometro de flujo de alta resolucion. |
| US7169548B2 (en) | 2002-09-13 | 2007-01-30 | Xy, Inc. | Sperm cell processing and preservation systems |
| CA3074799C (en) | 2003-03-28 | 2022-12-06 | Inguran, Llc | Apparatus, methods and processes for sorting particles and for providing sex-sorted animal sperm |
| US20060263829A1 (en) | 2003-05-15 | 2006-11-23 | Evans Kenneth M | Efficient haploid cell sorting flow cytometer systems |
| US7892725B2 (en) | 2004-03-29 | 2011-02-22 | Inguran, Llc | Process for storing a sperm dispersion |
| CA2574499C (en) | 2004-07-22 | 2016-11-29 | Monsanto Technology Llc | Process for enriching a population of sperm cells |
| US20090123436A1 (en) * | 2007-11-08 | 2009-05-14 | Surmodics, Inc. | Cryopreservative compositions and methods |
| US8835104B2 (en) | 2007-12-20 | 2014-09-16 | Fenwal, Inc. | Medium and methods for the storage of platelets |
| US8968992B2 (en) * | 2008-03-21 | 2015-03-03 | Fenwal, Inc. | Red blood cell storage medium for extended storage |
| US8871434B2 (en) * | 2008-03-21 | 2014-10-28 | Fenwal, Inc. | Red blood cell storage medium for extended storage |
| WO2011049709A1 (en) | 2009-10-23 | 2011-04-28 | Fenwal, Inc. | Methods and systems for providing red blood cell products with reduced plasma |
| WO2012139017A1 (en) | 2011-04-07 | 2012-10-11 | Fenwal, Inc. | Automated methods and systems for providing platelet concentrates with reduced residual plasma volumes and storage media for such platelet concentrates |
| CN102258006B (zh) * | 2011-05-19 | 2013-09-25 | 广西壮族自治区水产研究所 | 凡纳滨对虾精荚低温保存方法 |
| GB201406569D0 (en) | 2014-04-11 | 2014-05-28 | Stabilitech Ltd | Vaccine compositions |
| CN104161036A (zh) * | 2014-07-15 | 2014-11-26 | 西北农林科技大学 | 家畜精液冷冻保存用抗冻剂、稀释液及其应用 |
| CN105685016B (zh) | 2016-04-08 | 2018-06-08 | 天津大学 | 细胞冻存保护组合物、该组合物的用途以及细胞冻存的方法 |
| GB2562241B (en) | 2017-05-08 | 2022-04-06 | Stabilitech Biopharma Ltd | Vaccine compositions |
| CN107668026A (zh) * | 2017-11-03 | 2018-02-09 | 西北农林科技大学 | 芦丁作为家畜精液冷冻保存剂的应用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU609524A1 (ru) * | 1976-12-20 | 1978-06-05 | Центральный Ордена Ленина И Ордена Трудового Красного Знамени Научно-Исследовательский Институт Гематолигии И Переливания Крови | Раствор дл замораживани костного мозга |
| SU677750A1 (ru) * | 1977-12-06 | 1979-08-05 | Всесоюзный Ордена Трудового Красного Знамени Научно-Исследовательский Институт Овцеводства И Козоводства | Среда дл замораживани спермы |
| SU888896A1 (ru) * | 1980-04-18 | 1981-12-15 | Институт проблем криобиологии и криомедицины АН УССР | Способ консервации эритроцитов |
-
1987
- 1987-10-16 US US07/109,495 patent/US4980277A/en not_active Expired - Fee Related
-
1988
- 1988-10-14 FI FI884758A patent/FI884758A/fi not_active Application Discontinuation
- 1988-10-15 EP EP19880117215 patent/EP0312114A3/en not_active Withdrawn
- 1988-10-17 JP JP63261287A patent/JPH02422A/ja active Pending
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002538113A (ja) * | 1999-03-02 | 2002-11-12 | メッサデク ジャラル | 抗血栓剤用途へのグリシンベタインの使用 |
| JP2007119372A (ja) * | 2005-10-26 | 2007-05-17 | Hiroshima Univ | 抜歯体の凍結保存方法 |
| JP2013523704A (ja) * | 2010-03-31 | 2013-06-17 | スタビリテック リミテッド | ウイルス粒子、ポリペプチド又は生体材料を安定化させる添加剤 |
| JP2016121155A (ja) * | 2010-03-31 | 2016-07-07 | スタビリテック リミテッド | ウイルス粒子、ポリペプチド又は生体材料を安定化させる添加剤 |
| US10206960B2 (en) | 2010-03-31 | 2019-02-19 | Stabilitech Biopharma Ltd | Stabilisation of viral particles |
| US10029007B2 (en) | 2011-10-05 | 2018-07-24 | Stabilitech Biopharma Ltd | Stabilisation of polypeptides |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0312114A2 (en) | 1989-04-19 |
| US4980277A (en) | 1990-12-25 |
| FI884758A0 (fi) | 1988-10-14 |
| FI884758A (fi) | 1989-04-17 |
| EP0312114A3 (en) | 1991-01-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH02422A (ja) | 低温保護溶液及び方法 | |
| Graham | Cryopreservation of stallion spermatozoa | |
| Vishwanath et al. | Storage of bovine semen in liquid and frozen state | |
| Parkinson et al. | Advantages and disadvantages of artificial insemination | |
| Lake et al. | An exploration of cryoprotective compounds for fowl spermatozoa | |
| WEIDEL et al. | Cryosurvival of human spermatozoa frozen in eight different buffer systems | |
| Prieto et al. | Sperm cryopreservation in wild animals | |
| JP2003530312A (ja) | 選択された精子細胞の低温保存方法 | |
| Nunes et al. | Strategies to improve the reproductive efficiency of goats in Brazil | |
| Foote et al. | Factors affecting preservation and fertility of bull sperm: a brief review | |
| KR102316820B1 (ko) | 소 생식세포의 동결 보존용 조성물 및 동결 보존 방법 | |
| O’Brien et al. | Preservation of beluga (Delphinapterus leucas) spermatozoa using a trehalose-based cryodiluent and directional freezing technology | |
| Waheed et al. | Evaluation of duck egg yolk for the cryopreservation of Nili-Ravi buffalo bull semen | |
| Saha et al. | Cryopreservation techniques for ram sperm | |
| Hammitt et al. | Concentration of glycerol required for optimal survival and in vitro fertilizing capacity of frozen sperm is dependent on cryopreservation medium | |
| Abe et al. | Artificial insemination with canine spermatozoa frozen in a skim milk/glucose-based extender | |
| Pérez-Garnelo et al. | Post-thaw viability of European bison (Bison bonasus) semen frozen with extenders containing egg yolk or lipids of plant origin and examined with a heterologous in vitro fertilization assay | |
| KR102226182B1 (ko) | 난황추출물과 유단백추출물을 포함하는 정자의 동결보존용 조성물 | |
| Bertol | Cryopreservation of epididymal sperm | |
| Stănescu et al. | Freezing of dog’s sperm: a review | |
| Barun | A review on applications & advantages of cryopreservation in different fields of science | |
| Ocampo et al. | Live birth after artificial insemination using cryopreserved epididymal sperm recovered from the cauda epididymis of slaughtered non-descript bucks in the Philippines. | |
| VanDemark et al. | Preservation of bull semen at sub-zero temperatures | |
| Zaenuri et al. | Effects of additional crude extract of fig fruit (Ficus carica L) into Tris egg yolk based extender on quality of buck semen | |
| De los Reyes et al. | Evaluation of glucose as a cryoprotectant for boar semen |