JPH02308788A - ストレプトマイセス属の新種の微生物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［技術分野］ 本発明は、土壌伝染性の病原性糸状菌に対し、顕著な抑
止力を示す５ｔｒｅｐｔｏＩｙｃａｓｆｉの新種の徴生
り勿に関するものである。

［従来技術とその問題点］ 農家−戸当りの栽培面積の小さい我国では、狭小な畑を
高度利用して当面の収益性を追究するために、特定野菜
の強度の連作が行なわれて、輪作による栽培体系が実銭
され難い、そのために地力が消耗、土壌環境が悪化して
病原菌密度が上昇し、土壌病害が発生する等の連作障害
の増大による収量及び品質の低下がおこフている。それ
が野菜の生産性の向′上と安定を阻害している大きな要
因である。。

特定野菜の連作によりておこる土壌病害は、細菌、放線
菌よりも糸状菌によりておこるものが多い、糸状菌によ
る±ｉＪＩ病害としては、フザリウム菌によっておこる
ウリ類のツルワレ痛、イチゴ、ダイコン、キャベツ等の
萎黄病、インゲンノ根腐れｆｒｉ：リゾクトニア菌によ
っておこるキ゛エウリ、ナス等各種野莱の苗立枯れ病、
ホウレンソウの株腐れ病；パーティシリクム菌によって
おこるナス、トマト、イチビ、フキ等の半身萎ｍｆＦｉ
；ブラズモジオホーラ菌によっておこるアブラナ科野菜
のネコブ病がある。

これらの病原性糸状菌は、土壌の物理・化学的案件や土
壌微生物間の拮抗作用に汀肪りて生存できる耐久体を土
壌や作物遺体の中に形成するので、一旦病徴が現われる
と防除が非常に厄介である。

かかる土壌病害の防除法としては、殺菌剤の一場への散
布、燻蒸剤による作土の燻蒸、更には蒸気消毒等化学的
若しくは物理的方法がある。しかしながら、このような
防除法は病原菌のみを選択的に抑制、又は死滅させるこ
とはできず、作物と様々な共生関係にある有用な土壌微
生物の生育をも阻害する等土壌生！ａ′ｒｋを著しく破
壊する。

その上、これら処理により土壌が一時的にせよ無菌状態
になるため、病原菌が外部より侵入した場合には、容易
に増殖して被害が処理前に比べて酷くなることさえある
。

その他、一部地域では薬剤の刺激的臭いのために、圃場
に隣接する住民との間で社会問題を引き起こして、使用
制限を受けている。このように公知の土壌病害防除法は
種々の問題点を有している。

〔発明が解決しようとする問題点〕

従来の防除技術のこれら問題点を補うために、本発明者
らは１０年以上に互る特定野菜の強度の連作にも拘わら
ず、土壌病害がまりたく認められず、野菜が健全に生育
している病害抑止土壌が存在することに着目して、この
土壌に潜在する病害抑止のメカニズムを鋭意研究した。

そして、本土壌の病害抑止効果が特異な微生物の働きに
よって発現することを突きとめ、その微生物の！＃離に
成功して本発明を完成するに至りた。

［問題点を解決するための手段］ 本発明は、下記（１）〜（３）の構成を有する。

（１）　Ｓｔｒａｐｔｏｍｙｃａｓ属のＣＤ−３株が属
する種で、土壌伝染性のｆｒ４原性糸状菌に対し顕著な
抑止力を有するＳｔｒａｐｔｏｍｙｃａｓ属の新種の微
生物。

（２）該微生物がＳｔｒａｐｔｏｍｙｃａｓ、ｓｐ、Ｃ
Ｄ−３株（微工研寄託第１０５３３号）である前記第１
項記載の微生物。

（３）土壌伝染性の病原性糸状菌が、フザリウム菌、リ
ゾクトニア菌、パーティシ、リウム菌及びビシウム菌で
ある前記第１項記載の微生物。

（本発明の微生物の性質） 本発明の微生物は、以下のような性質を有する。

■、形態的特徴 本発明の微生物は気菌糸及び基土菌糸を形成する。基土
菌糸の分断はみられず、分節胞子嚢も認められない、抱
子の理性部位は、気菌糸でループ状及びラセン状の分節
抱子の連鎖が観察きれて、輪生、疑似膓子嚢、分生子殻
、菌核、クラブ状砲子嚢は観察されない。

Ｉｆ　、各種培地上での性状 ｉ、シょ糖・硝酸塩寒天培地 基土菌糸　量：中位　　　色：明るい黄色２、グルコー
ス・アスパラギン寒天培地基土菌糸　量：中位　　　色
：明るい黄色３、グリセリン・アスパラギン寒天培地基
土菌糸　量：中位　　　色：明るい黄色４、スターチ寒
天培地 基土菌糸　量：中位　　　色：明るい黄褐色５、チロシ
ン寒天培地 基土菌糸　量：中位　　　色：明るい黄褐色６．栄養寒
天培地 基土菌糸　量：わずか　　色：薄い黄白色７、イースト
麦芽寒天培地 基土菌糸　量：豊富　　　色：黄褐色 ８、オートミール寒天培地 基土菌糸　量；豊富　　　色：明るい黄褐色ＩＩ＋生理
的性質 ！、生育温度範囲　１７〜４６℃、最適温度範囲は３８
．５〜４１℃である。

２、生育ｐＨ範囲　４．５〜９．０．最適生育ｐＨ範囲
は５．５〜６．５である。

３、食塩耐性　２％：有り ５％：有り（１力月で極僅か） ７％：無し ４、嫌気的生育　　　　陰性 ５、ゼラチンの液化　　陽性 δ、カゼインの分解　　陽性 ７、ミルクの凝固　　　陰性 ６、Ｉ２粉の加水分解　　陽性 ９、尿素の分解　　　　陽性 １０、硝酸還元　　　　　陰性 １！、硫化水素の生成　　陰性 （コーザー　　　：陰性） １３、無機Ｎ源の利用　ＮＨｎ：陽性 ＮＯ３：陰性 １４、メラニン色素の生成　陽性（チロシン培地４ロ目
） １５、ＩＩＩＪａ壁ノシ７ミ／１３２　　ＬＬ−ＤＡＰ
！８．キノン分子種　　　　輩に−９（Ｉｎ）■炭素源
の資化性 寒天培地に培養して調べた結果は、下記の通りである。

生育＊ キシロース　　　　　　　　＋ アラビノース　　　　　　　＋ グルコース　　　　　　　＋＋ フラクトース　　　　　　＋＋ シェフロース　　　　　　　士 ラフィノース　　　　　　　± ラムノース　　　　　　　　＋ イノシトール　　　　　　　± マンニトール　　　　　　　− 炭素源なし　　　　　　　　− ■、同定 以上の諸性貢からＣＤ、−３株は５ｔｒｅｐｔｏｓｙｃ
ａｓｐＡに属するものと考えられる。

廁子鎖がループ状及びラセン状であり、気菌糸が白色若
しくは灰色で、メラニン色素を産生ずることからパーシ
ーズ・マニエアル・オブ・デイターミネイティブ・バク
テリオロジー第８版（１９７５年）で検索すると、ホワ
イトシリーズの４菌種あるいはグレーシリーズの４３菌
種が該当１゜る。

しかし、この中には本菌株と同様な炭素源の資化性を示
すものは無く、また他の生理学的性質から本国はホワイ
トシリーズ４菌ｆｆｆｉ、グレーシリーズ４３菌橿とは
異なる。

以上の所見から本菌株に該当する既知菌株は存在せず、
本菌株は新菌種であると認められ、本発明者らは本国疎
をＳｔｒａｐｔｏｍｙｃ＠ｓ、ｓｐ、ＣＤ−３株と命名
した。

上記のＳｔｒｅｐｔｏｍｙｅｅｓ、ｉｐ、ＣＤ−３株は
工業技術院微生物工業技術研究所に受託番号徹工研菌寄
第１０５３３号で受託されている。

（本発明の微生物の単離及びスクリーニング方法）本菌
株は以下の方法で土壌から単離され、土壌伝染性の病原
性糸状菌に対する抑止力のスクリーニングを経て選定さ
れた。

■単離方法： １０年以上前から、緩効性肥料２−オキソー４−メチル
−トウレイドへキサヒドロピリミジン（以下ＯＭＵＰと
いう、商品名ＣＤＵ　）を連用して、ハクサイ又はキャ
ベツを毎年春と秋に作付しているが、土壌病害の発生等
連作障害が全く認められず、常に安定した収量が得られ
ている圃場（黒色火山灰土壌）が静岡県富士市五味島１
３４にある０本国株はここで栽培されているキャベツの
根圏土壌から１９８８年３月に単離された。

即ち、根圏土壊が付着した定植後１ケ月目の生育旺盛な
キャベツの根を滅菌水３００ｍ１につけて、手で静かに
損って土を根から離して土壌懸濁水を得た。

この懸濁水を１０倍ずつ順次希釈して、各々の土壌希釈
水１■ｌをＯＭＩＩＰを唯一の炭素及び窒素源とする寒
天平板培地（ＯＭＵＰ　０．７ｇ、にｔＨＰＯ４１，Ｏ
Ｊｌ。

ＭｇＳＯ４・７）１ｔ０　０．５ｇ、ＣａＣ１＊・２）
１２０　０．２ｇ％ＮａＣ１０，２ｇ。

ＦｅＳＯ４・６Ｈｚ００．０１ｇ、水道水　Ｉ　Ｊ２　
ｐＨ６，８）上に拡げた。そして、　３０℃でＳ日間培
養すると、コロニーができるので、平板当りのコロニー
数が約１５０〜２００個の平板培地上から無作為に１２
０株を単離して前記のＯＭＵＰを唯一の炭素及び窒素源
とする斜面培地に穆した。

■土壌伝染性の病原糸状菌に対する抑止力のスクリーニ
ング方法： 単離した菌は、純粋化した後、病原性糸状菌に対する抑
止力を平板培地で、更には栽培条件下で調査した。

平板培地での抑止力のスクリーニングは対峙培養法で行
なった。即ち、ＪＩＬＭｉ菌をポテト・デキストロース
寒天平板培地の中央に線条に塗布して、３０℃で２日間
培養すると、Ｊ１１Ｌｌ！！を菌が生育してコロニーが
で診る。２８目に予めポテト・デキストロース寒天平板
培地で培養した病原菌（フザリウム菌：　Ｆ、ｏｘｙｓ
ｐｏｒｕｓ　）の菌叢を直径５〜８■のコルクポーラで
円板状′に抜取フて、Ｊ＃離菌が生育する平板培地上で
単離菌より２０１１１１離れた所に置く。

更に５〜７日間培養すると、拮抗性がある場合には病原
菌の生育が抑止されて、ＪＩＩＬ離菌と病原菌の間に阻
止帯が形成されるので、その幅を測定することにより単
離菌の抑制力を評価した。

次に、上記の評価法により培地上で１ｏ■■以上の阻止
帯を示したＪＩＬＩ！ＩＩ菌について、栽培条件下で各
種の病原菌に対する抑止力を評価した。

！ｌＬ！ｌＩｔ菌を液体培！！（培地ニゲＡ／コー２１
０ｇ、コーンステイープリカー５ｇ、大豆油３ｇ、Ｎａ
１１５ｇ、（ＮＨ４）ＪＰＱ４　Ｌｇ、水道水　１ぶ、
ｐ）Ｉ　ＬＯ）　シて１０′′〜１０°個／！■１の菌
体細胞を含む培養物を調製して、この培養物ｔｏｏｓｌ
あたりを０．５Ｋｇの滅菌土壌に吸着させた。

このものと、フザリウム菌、リゾクトニア菌等の病原性
糸状菌が著しく感染した発病土壌を１：３の容積比で混
合して、キエウリ、トマトの宿主植物を植えて、１０〜
４５日間栽培すると、牟踵菌無施用及び車離菌を施用し
ても土壌中での抑止力が弱い場合には、地上部に病徴が
現われ病状が徐々にｉ行して植物が枯死する。

これに対して抑止力の強い阜蔵菌では、病徴の発生時期
が遅れるか、何ら病徴が現れることなしに生育する。そ
こで定期的に、病徴が現れた株数と、発病の程度を調査
して牟離菌の抑止力を評価した。

このような過程をへてスクリーニングして、培地上及び
栽培条件下で顕著で且つ、実用的な抑止力を示したもの
が本発明の微生物である。

［本発明の微生物゛の培養方法コ 本発明の微生物を培養するには、培地はこの菌が属する
属の放線菌の培養に用いることができる培地であればよ
く、格別の制限はない、このような培地にはビタミン類
、アミノ酸、若しくはプリンＰＬ基等の生育促進物質を
添加してもよい。

具体的なものとしては、 グルコース　１０ｇ１　コーンステイープリカー５ｇ、
大豆油　３ｇ、　ＮａＣ１５ｇ、（ＮＨ４）　ｔＨＰ０
４１ｇ、及び水道水ＩＪ２　（ｐＨ６，６）からなる培
地（ストマイ培地と略称）が示される。

本菌株の接種は、保存株より直接行なうか、あるいは少
量の培地で３０℃、３〜７日間好気的に培養したものを
１〜５％添加することにより行なうことができる。大量
の培養液に接種する場合には、少量の培地で前培養した
ものを使って接種するのが好ましい。

培養ＤＨは５〜９で、好ましくは５．５〜７．０である
。培養温度は１７〜４６℃であり、好ましくは３０〜４
１℃である。

期間は使用する培地により異なるが２〜７日間、好まし
くは２〜４日間である。培養は好気的に行ない、そのた
めには培地の単位面積あたりの表面積が広く空気に触れ
る状態にて静置すればよく、強制的に振盪若しくは通気
攪拌゛を行なってもよい。

（本発明の微生物の施用方法） かかる培養法で得られた培養物は、培養後の水分の多い
状態のままでも土壌に施用できるが、該培養物を遠心脱
水して無為な水分の一部又は大部分を除去して施用して
もよい。

施用量は、本発明の微生物が土壌１ｇ当り少なくとも１
０６信以上、好ましくは１０’個以上になるように施用
すればよい、施用の仕方には格別の制限はないが、作物
根周辺部の病原菌密度を低下させればよいので、畑全体
に施用して不必要な部位に本発明の微生物を施すよりも
、根圏への局所施用した方が経済性の点で好まルい。

（本発明の微生物で抑止される土壌病害）本発明の微生
物で抑止される士ｔＪＨＦＪ害は、フザリウム菌、リゾ
クトニア菌、バーティシリウム菌、ビシウム菌に起因す
るものである０例えば、フザリウム菌による萎ｒｓ、つ
る割病；リゾクトニア菌及びビシウム菌による苗立枯、
病、根腐病；ビシウム菌及びバーティシリウム菌による
半身萎７ｊ１病が示される。

［本発明の微生物の効果〕 本発明の微生物は土壌伝染性の病原性糸状菌に対して強
い抑止力を示すので、この微生物を培養して土壌に添加
することによりフザリウム菌、リゾクトニア菌、ビシウ
ム菌及びバーティシリウム菌に起因する土壌病害が顕著
に抑制された。

尚、病害抑制メカニズムについては、目下研究中である
が、本発明の微生物が土壌中で抗生物質等の病原菌生育
抑止物質を分泌して、ｆｒｉ原菌を死滅させ、その密度
を低下させることにより効果が発現するものと推察して
いる。

以下、本発明の微生物の効果を実施例により説明する。

実施例−１ 土壌伝染性病原性糸状菌に対する本発明の微生物の抑止
力を対峙培養法で調査した６本発明の微生物を前述のス
トマイ培地で３０℃、４日間振盪培養する。この培養物
をφ９ｃｍのシャーレに入れたポテト・デキ、ストロー
ス寒天平板培地の中央に線条に塗布して３０℃で２日間
培養した。

そして、予めツアベックス・ドックス寒天培地上で培養
したフザリウム菌、リゾクトニア菌、バーティシリウム
菌、若しくはビシクム菌の菌叢をφ５〜８Ｉ１ｍのコル
クポーラ−で円板状に抜取って、ＪＩＬｍ菌が生育する
平板培地上で単離菌から２０ｍ１離れた位置に置いた。

そして、２８℃で培養すると阻止帯ができるので、その
幅を測定した。

結果は第１表に示した。

第１表　土壌伝染性ｆ；＊Ｍ糸状菌に対する抑止力＊平
板培地に本発明の微生物を塗布しない場合は阻止帯がで
きなかった。

実施例−２ フザリウム菌に対する本発明の微生物の抑止力をキエウ
リ栽培条件下で調べた。

本発明の微生物を前述のストマイ培地で３０℃で４日間
振盪培養して、５　Ｘ　１０’個、／＋＋１の菌体細胞
を含む培養物を得た。そして、この培養物１００ｍ１Ｏ
，５にｇの滅菌土壊（黒ボク）に吸着させた。

そして、本発明の微生物を吸着させた土ｌｉＬ、又は本
発明の微生物を吸着させていない同種の土ＩＩＬを、Ｎ
ｍＰＩＯＩ−にｔｏｌｌｍｌ、ｏｇのＯＭＵＰ、過方、
硫酸カリと共にキュウリの連作によりフザリウム菌（Ｆ
、ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ　ｆ、ｃｕｃｕｍ＠ｒｌｎｕｍ　
）の著しい感染を受けた火山灰土壌３Ｌと混合して、２
０Ｘ４０Ｘ　１５ｃｓ＋のプランタ−に入れ、キュウリ
の種子２５粒を播種してガラス室で栽培した。

定期的に地上部に消徴が現われた株数、及び発病程度を
調査した。結果は、第２表に示した。

第２表　キュウリのフザリウム病に対する効果種子数　
　　ｘｌｏ。

（播種したキュウリは総て発芽した。）発病指数二　〇
−地上部に１！徴無 １→地上部に軽い萎凋 ２→全身萎凋 ３→枯死 実施例−３ バーティシリウム菌に対する本発明微生物の抑止力をト
マト栽培条件下で調べた。

実施例−２で調製した本発明徴生物吸着土ｔｊｌｌＬ、
または該株を吸着させていない土壌ＩＬをＮ−ＰｔＰｓ
　−ＬＯ−１，０ｇのＯＭＵＰ、過方硫酸カリと共に、
トマトの連作によりバーティシリウム菌（Ｖａｒｔｌｃ
ｌｌｌｌｕｍ　ｄａｈｆｌａａ）に著しい感染を受けた
火山灰土１３Ｌと混合して、２０Ｘ　４０Ｘ　１５ｃｍ
（Ｄプランタ−に入れ、＃１ｆＩＩ後１４日目のトマト
苗２５本を条植してガラス室で栽培した。

地上部に病徴が現れた株数、及び発病程度を定期的に調
査した。結果は第３表に示した。

第３表　トマトのパーティシリクム病に対する効果注、
発病株％：地上部に病徴が現われた株数／定植した株数
×１００発病指数：　Ｏ→　地上部にＩｒｉ徴無１→　
貧化へ下部落葉 ２→　全身ｌ！凋 ３→　枯死 実施例−４ リゾクトニア菌に対する本発明微生物の抑止力をトマト
栽培条件下で調べた。

実施例−２でｓＷ製した本発明微生物吸着土壌ＩＬ、又
は該株を吸着させていない土壌ＩＬを、Ｎ　”　２２０
ｍ−１ｈＯ−１，０ｇのＯＭＵＰ、過方、硫酸加里と共
に、トマトの連作によりリゾクトニア菌（Ｒｉｌｚｏｃ
ｔｏｎｌａ　５ｏｌａｎｌ）の著しい感染を受けた火山
灰土壊３Ｌと混合して、２０ｘ　４０ｘ　１５ｃ＋ｓの
プランタ−に入れ、播種後１４日口のトマト苗２５木を
定植して、ガラス室で栽培した。

地上部に病徴が現れた株数、及び発病程度を定期的に調
査した。結果は第４表に示した。

？ｇ４表　トマトのりジフトニア病に対する効果注、発
病株％：地上部に病徴が現われた株数／定植した株数８
１００発病指数：　Ｏ→　地上部に病徴無 １−　地際部が部分的に褐〜黒褐変 ２→　地際部にくびれがくびれを生む倒伏３→　枯死 実施例−５ ビシクム菌に対する本発明微生物の抑止力を、キエリ栽
培条件下で調べた。

実施例−２で調製した本発明微生物吸着土壌ＩＬ又は該
株を吸着させていない土壊ＩＬを、Ｎ＝＝Ｐ、０．瓢に
、０−１．０ｇのＯＭＰＵ％過石、硫過方里と共に、キ
エウリの連作によりビシクム菌（Ｐｙｔｈｌｕｍ　。

ｓｐ）の著しい感染を受けた火山灰土壌３Ｌと混合して
％　２０ｘ　４０ｘ　１５ｃ■のプランタ−に入れ、キ
ュウリ梯子２５粒を＄１　ｆｌ　シ、ガラス室で栽培し
た。

地上部に病徴が現れた株数、及び発病程度を定期的に調
査した。結果は第５表に示した。

Ｍ５表　キュウリのビシウム病に対する効果種子数　×
１００ 発病指数二　〇−地上部に病徴無 １→　地際部が水浸状を呈する ２→　地際部が軟化、腐敗する ３→　倒伏、枯死する 以上 手　　続　　補　　正　　書 １、事件の表示 平成１年特許願第１２９．９２０号 ２、発明の名称 ストレプトマイセス属の新種の微生物 ３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 大阪府大阪市北区中之島三丁目６番３２号（〒５３０）
（２０７）チッソ株式会社 代表者　　野　木　貞　雄 ４、代理人 ６、補正により増加する請求項の数 な　　　　し ７、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄。

８、補正の内容 明細書をつぎのとり訂正します。

Ａ０発明の詳細な説明をつぎのとおり訂正します。

（１）第１３頁下から４行目の「この培養物１００＋ｊ
ｌあたりを」を「この培養物をｌｏｏｍＪ２あたり」に
訂正する。

（２）第２０頁６行目の「この培養物１００ｍＪＲＪを
「この培養物をｌｏｏｍＪ２を」に訂正する。

（３）第２２頁６行目の全文をつどのとおり訂正する。

「Ｎ電Ｐ、０．−に、０−１．０ｇのＯＭＵＰ　、過方
、硫酸カリと共」 以　　　上

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属のＣＤ−３株が属す
   る種で、土壌伝染性の病原性糸状菌に対し顕著な抑止力
   を有するＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属の新種の微生物。
2. （２）該微生物がＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ．ｓｐ．Ｃ
   Ｄ−３株（微工研寄託第１０５３３号）である特許請求
   の範囲第１項記載の微生物。
3. （３）土壌伝染性の病原性糸状菌が、フザリウム菌、リ
   ゾクトニア菌、バーティシリウム菌及びビシウム菌であ
   る特許請求の範囲第１項記載の微生物。