JPH02276587A - ポリエーテル抗生物質ｍｉ２１５―ｎｆ３物質及びその製造法、並びに鶏のコクシジウム症の防除剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は新規な抗生物質であるＭＩ２１５−ＮＦ３物質
及びその塩に関し、またＭＩ２１５−　ＮＦ３物質又は
その塩の製造法に関する。さらに本発明はＭＩ２１５−
　ＮＦ３物質又はその塩を有効成分とする鶏のコクシジ
ウム症の防除剤に関する。また、本発明は新規な微生物
であってＭＩ２１５−　ＮＦ３物質を生産できる特性を
もつアクチノマジュラｓｐ、　ＭＩ２１５−ＮＦ３株に
関する。

（従来技術） 各種のポリエーテル系抗生物質が殺菌活性を有すること
が知られている。また、ポリエーテル系抗生物質に属す
るモネンシン（特公昭４５−１１３号公報参照）あるい
はサリノマイシン（「ザ・ジャーナル・オブ・アンティ
ビオティクス」２７巻８１４〜８２１頁参照）などは、
鶏のコクシジウム症の防除剤として使用されている。

（発明が解決すべき課題） 養鶏においてはコクシジウム症は重大な問題であり、従
来知られるまたは使用されている既知の化合物よりも優
れた抗コクシジウム活性と性質を示す新しい化合物を発
見または創製することは常に要望されており、そのため
の研究が行なわれている。

（課題を解決するための手段） そこで本発明者らは有用な新規抗生物質を発見するべく
研究を行い、その結果アクチノマジュラ（Ａｃｔｉｎｏ
ｍａｄｕｒａ）属に属する新規な菌株を分離することに
成功し、またこの菌株が新しいポリエーテル系抗生物質
を産生ずることを見い出し、これをＭＩ２１５−ＮＦ３
物質と命名した。そして、この阿工２１５−ＮＦ３物質
又はその塩（カルボキシレート）が鶏のコクシジウム症
の防除活性を示すことも見出した。

さらに研究を続け、ＭＩ２１５−　ＮＦ３物質の化学構
造を決定して新規化合物であることを確認し、また後記
の式（Ｉ）により表わせることを知見した。

Ｈ３ （Ｉ） （式中、Ｒは水素原子である）。

しかして、本発明はアクチノマジュラ（Ａｃｔｉｎｏｍ
ａｄｕｒａ）属に属する微生物を培養して得られて、本
発明者らによりＭＩ２１５−　ＮＦ３物質と命名された
物質及びその塩、並びにその製造法、また更に鶏のコク
シジウム症の防除剤としての用途を提供するものである
。

／ すなわち、第１の本発明によると、前記の式（Ｉ）を有
するＭＩ２１５−　ＮＦ３物質及びその塩が提供される
。

式（Ｉ）のＭＩ２１５−ＮＦ３物質は遊離カルボン酸の
形〔式（Ｉ）のＲが水素原子である場合〕であるが、あ
るいは式（Ｉ）のＲが一般的には金属又はアンモニウム
基であることができるので、　ＭＩ２１５−　ＮＦ３物
質の塩も本発明は包含する。この塩はアルカリ金属塩の
形〔式（Ｉ）のＲがアルカリ金属原子である場合〕、　
例えば、ナトリウム塩、カリウム塩又はリチウム塩であ
ることもでき、あるいはアルカリ土類金属塩の形（式（
Ｉ）のＲがアルカリ土類金属原子である場合〕、例えば
カルシウム塩又はマグネシウム塩であることができ、ま
た他の金属塩、例えばアルミニウム塩、鉄塩であること
ができ、更にアンモニウム塩であることができる。

本発明によるＭＩ２１５−ＮＦ３物質の理化学的性質は
次の通りである。

以下に、ＭＩ２１５−　ＮＦ３物質ナトリウム塩の理化
学的性質を示す。

（Ｉ）外　観 無色板状結晶 （２）元素分析 一ヌヨＪＩＪＩＬ　　　　’　　　　Ｃ）ＩＯＮａとし
てＣ６２，４７％　　　　　　６２．８７％Ｈ８，９６
％　　　　　　８．９８％ ０２４．６０％　　　　　　２４．９０％Ｎａ　　３．
５３％　　　　　　３．２５％（３）質量分析（ＳＩＭ
Ｓ） ｍ／ｚ　７０７（Ｍ　＋Ｎａ） （４）融　点 ２１７〜２１８℃ （５）比旋光度 （ａ）”＝＋３０．６’（ｅ　１．０．クロロホルム）
（６）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ錠剤法）添付図面
の第１図に示す通りである。

（７）プロトン核磁気共鳴スペクトル ４００メガヘルツにおいて重クロロホルム中にて室温で
測定したプロトンＮＭＲスペクトルは、添付図面の第２
図に示す通りである。

（８）溶解性 ベンゼン、クロロホルム、アセトン、酢酸エチル、エタ
ノール、メタノールに可溶であるが水に不溶である。

本発明によるＭＩ２１５−ＮＦ３物質の生物学的性質は
次の通りである。

以下に、ＭＩ２１５−　ＮＦ３物質ナトリウム塩の生物
学的性質を示す。

（Ｉ）抗菌スペクトル 各種の微生物に対するＭＩ２１５−　ＮＦ３物質ナトリ
ウム塩の抗菌スペクトルはそれ自体公知の手法で寒天培
地上で倍数希釈法によって測定した。

その結果を第１表に示す。

第二一」−一二表（続き） 第ニー」−一二人（続き） マウスを使用してＭＩ２１５−　ＮＦ３物質Ｎａ塩の急
性毒性を試験するに当って、１０％ジメチルスルホキシ
ド含有の生理食塩水ににＩ２１５−　ＮＦ３物質を懸濁
し、その懸濁液を腹腔内注射し、マウスを１４日間観察
した。その結果、にＩ２１５−　ＮＦ３物質のＬＤ、。

値は５６ｍｇ／ｋｇであると推定された。

（３）抗コクシジウム活性 ＭＩ２１５−　ＮＦ３物質の鶏のコクシジウム症に対す
る防除活性を以下に示す通り試験した。

１、初生ヒナ（雄）を１週間にねたり予備的に飼育し、
２週令のヒナを試験に使用した。

２、試験開始時、ヒナの体重を個体別に測定し、ばらつ
きが少ないように選定して１０羽／群とした。

３、オーシストを１羽当り５Ｘ１０’個、胃ゾンデを用
いて経口投与した。

４、オーシストを投与後、特殊飼料（抗コクシジウム剤
を無添加のもの）に一定量のＭＩ２１５−ＮＦ３物質（
ナトリウム塩）を混合含有させた飼料を自由に摂取させ
た。なお、飲水も自由に摂取させた。

毒 性 ５、オーシスト投与後から７日目までは、毎日、糞便中
のオーシスト数および便の状態を観察した。

６、　感染７日目に解剖した。解剖の手順を下記に示す
。

１）体重をヒナの個体別に測定した。

２）ヒナを類推脱臼して屠殺した。

３）開腹して盲腸を摘出し、盲腸の外部および内部にお
ける病変巣を肉眼検査した。

４）検査した盲腸は個体別にホモジナイザーで砕解して
盲腸懸濁液を作製し、懸濁液中のオーシスト数を算出し
た。

５）各検査結果を基にして下記の計算式により米国メル
ク社の提案する評価方法によるＡＣＩ（Ａｎｔｉｃｏｃ
ｃｉｄｉａｌ　Ｉｎｄｅｘ）の値を評定した。

ＡＣＩ＝（相対増体率＋ヒナの生存率）−（病変値＋オ
ーシスト値）なお、上記のＡＣＩの値を評定するに当っ
て、薬剤効力試験期間中の各群ヒナの増俸率、およびＡ
ＣＩの計算に用いる相対増体率は次式によって算出する
。

増体率＝〔（試験終了時ヒナの平均体重−試験開始時ヒ
ナの平均体重）÷試験開始時ヒナの平均体重）Ｘ１００
゜相対増体率＝（投薬群あるいは感染非投薬群の増体率
÷非感染非投薬群の増体率）ｘｌｏｏ。

また、病変値とは、摘出した盲腸における病変巣を肉眼
検査した結果を指数化した値であり、またオーシスト値
とは、実測したオーシスト数を指数化した値で−ある。

ＡＣＩの値の評定方法の詳細は、例えば文献「鶏コクシ
ジウム症」９５〜１０１頁、角田清監修（チクサン出版
社、昭和５８年５月発行）に記載されである。

得られた結果を第２表に示す。

上記の結果から明らかなように、ＭＩ２１５−　ＮＦ３
物質又はその塩は鶏のコクシジウム症に対する防除剤と
して実用できる。

更に、第２の本発明によると、アクチノマジュラ属に属
する前記の式（Ｉ）のＭＩ２１５−　ＮＦ３物質の生産
菌を培養し、培養物からＭＩ２１５−　ＮＦ３物質又は
その塩を採取することを特徴とする抗生物質ＭＩ２１５
−ＮＦ３物質又はその塩の製造法が提供される。

本発明の方法で用いられるＭＩ２１５−　ＮＦ３物質生
産菌の菌学的諸性質は次の通りである。

本発明で使用するＭＩ２１５−　ＮＦ３物質生産菌は前
述した理化学的性質および生物学的性質を有する抗生物
質を生産する能力を有するものであれば、その種を問わ
ず使用でき、広範な微生物から選ぶことができる。かか
る微生物のうち、ＭＩ２１５−　ＮＦ３物質生産菌の具
体的な好適の一例は、本発明者らにより東京都文京区の
土壌より分難された放ｍｃで。

ＭＩ２１５−　ＮＦ３の菌株番号が付された菌株である
。

以下にＭＩ２１５−　ＮＦ３株の菌学的諸性質について
記載する。

１、形態 顕微鏡下で、分枝した基中菌糸より気菌糸を伸長する。

基中菌糸の分断は認められない。気菌糸上に胞子鎖を形
成し、かぎ又はらせん状を呈する。

成熟した胞子の連鎖は通常７〜１５個、胞子は卵円形（
約０．７　Ｘ　１．０〜１．２ミクロン）を呈し、その
表面はいぼ状である。なお、輪生技および胞子のうはｗ
ｔ察されない。

２、各種培地における生育状態 色の記載について〔〕内に示す標準は、コンテイナー・
コーポレーション・オブ・アメリカのカラー〇ハーモニ
ー・マニュアル（ＣｏｎｔａｉｎｅｒＣｏｒｐｏｒａｔ
ｉｏｎ　ｏｆ　ＡＩＩＩｅｒｉｃａのｃｏｌｏｒ　ｈａ
ｒＩＩｌａｎｙｍａｎｕａｌ）を用いた。

（Ｉ）シュクロース・硝酸塩寒天培地（３０℃培養）無
色〜うすだいだい（３ｇｃ、　Ｌｔ　Ｔａｎ）の発育上
に、白の気菌糸をうつすらと着生する。溶解性色素は認
められない。

（２）グルコース・アスパラギン寒天培地（３０℃培養
） うす黄茶（３ｉｃ、　Ｌｔ　Ａｍｂｅｒ〜３Ｑｅ、　Ｃ
ｉｎｎａｍｏｎ）　〜明るい茶（４ｎｇ、　Ｌｔ　Ｂｒ
ｏｗｎ）の発育上に、白の気菌糸をわずかに着生する。

溶解性色素はや）黄色味を帯びる。

（３）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−培
地５，３０°Ｃ培責） うす黄〜うす黄茶（２Ｑｅ、　Ｍｕｓｔａｒｄ〜３Ｑｅ
。

Ｃ１ｎｎａｎ＋ｏｎ）の発育上に、白〜灰白（２ｄｃ、
　Ｎａｔｕｒａｌ）の気菌糸をうつすらと着生する。溶
解性色素は。

培養後２１日目頃よりかすかに黄茶を帯びる程度である
。

（４）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地４，３
０℃培養） うす黄〜うす黄茶（３ｎｇ、　Ｙｅｌｌｏｗ　Ｍａｐｌ
ｅ）〜黄茶（３ｐｉ、　Ｇｏｌｄｅｎ　Ｂｒｏｗｎｌの
発育上に、ピンク白（５ｂａ。

５ｈａｌｌ　Ｐｉｎｋｌ〜灰白（２ｄｃ、　Ｎａｔｕｒ
ａｌｌの気菌糸を着生する。溶解性色素は、かすかに黄
色味を帯びる。

（５）チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地７，３０℃培養
）うす黄〜黄茶（３ｎｇ、　Ｙｅｌｌｏｗ　Ｍａｐｌｅ
）〜灰味黄茶（３ｎｉ、　Ｃ１ｏｖｅ　Ｂｒｏｗｎ）の
発育上に、黄味灰（ｌｄｃ。

Ｐｕｔｔｙ　〜ｌｅｅ、　Ｌｔ　Ｃ１ｔｒｏｎ　Ｇｒａ
ｙ〕の気菌糸を着生する。溶解性色素は、かすかに黄色
味を帯びる程度である。

（６）栄養寒天培地（３０℃培養） うす黄茶（３ｉｃ、　Ｌｔ　Ａｍｂｅｒ）　〜灰味黄茶
（３ｎｉ。

Ｃ１ｏｖｅ　Ｂｒｏｗｎ）の発育上に、白の気菌糸を部
分的に着生する。溶解性色素は、ごくかすかに黄色味を
帯びる。

（７）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２．３０
℃培養） うす黄茶（２Ｑｅ、　Ｍｕｓｔａｒｄ）　〜灰味黄茶（
２ｎｌ。

Ｃｏｖｅｒｔ　Ｂｒｏｔｉｎ）の発育上に、白〜茶白の
気菌糸を着生する。溶解性色素は、かすかに茶色味を帯
びる。

（８）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培地３．３０℃
培養）うすだいだい〜うす茶（４９ｅ、　Ｍａｐｌｅ）
〜黄茶（３ｎｇ。

Ｙｅｌｌｏｗ　Ｍａｐｌｅ）の発育上に、白〜ピンク白
（５ｂａ。

５ｈｅｌｌ　Ｐｉｎｋ〜７ｂａ、　Ｐｉｎｋ　Ｔｉｎｔ
）の気菌糸を着生する。溶解性色素は、かすかに黄色味
を帯びる。

（９）グリセリン・硝酸塩寒天培地（３０℃培養）無色
〜うす黄〜うす黄茶（３ｆｆｉｅ、　Ｃｉｎｎａｍｏｎ
）の発育上に、白〜ピンク白（５ｂａ、　５ｈｅｌｌ　
Ｐｉｎｋ）の気菌糸を着生する。溶解性色素は、かすか
に黄色味を帯びる程度である。

（ｌＯ）スターチ寒天培地（３０℃培養）うす黄茶〔２
Ｑｅ、　Ｍｕｓｔａｒｄｌ〜灰味黄茶［３ｎｉ。

Ｃ１ｏｖｅ　Ｂｒｏｗｎｌの発育上に、白の気菌糸をわ
ずかに着生する。溶解性色素は認められない。

（Ｉ１）リンゴ酸石灰寒天培地（３０℃培養）無色〜う
す黄の発育上に、白〜ピンク白（５ｂａ　。

５ｈｅｌｌ　Ｐｉｎｋ）の気菌糸を着生する。溶解性色
素は認められない。

（Ｉ２）セルロース（濾紙片添加合成液、３０℃培養）
発育は無色、白の気菌糸をわずかに着生する。

溶解性色素は認められない。

（Ｉ３）ゼラチン穿刺培養 単純ゼラチン培地（２０℃培養）で１発育は無色〜うす
黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認められない。グ
ルコース・ペプトン・ゼラチン培地（２７℃培養）の場
合、発育はうす黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認
められない。

（Ｉ４）脱脂牛乳（３７℃培養） 発育はうす黄〜うす黄茶、気菌糸は着生せず、溶解性色
素は培養後１８８日目頃りかすかに茶色味を帯びる程度
である。

３、生理的性質 （Ｉ）生育温度範囲 スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地４）を用い、
２０℃、２４℃、２７℃、３０℃、３７℃、５０℃の各
温度で試験の結果、５０℃を除いて、いずれの温度でも
生育した。生育至適温度は３０℃付近である。

（２）ゼラチンの液化（Ｉ５％単純ゼラチン培地、２０
℃培養；グルコース・ペプトン・ゼラチン培地。

２７℃培養） 単純ゼラチン培地において、培養後１１１日目頃り液化
が始まるが、その作用は弱い方である。グルコース・ペ
プトン・ゼラチン培地の場合、培養後５日目頃より液化
が認められ、その作用は中等度〜弱い方である。

（３）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地
、　ｌ５Ｐ−培地４．およびスターチ寒天培地。

いずれも３０℃培養） いずれの培地においても氷解性が認められ、その作用は
中等度である。

（４）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（脱脂牛乳、３７℃
培養） 培養後５日目頃より、凝固状を呈し、ただちに完了後、
ペプトン化が始まる。ペプトン化の進度はゆっくりで、
３週間ｗｔ察で未完了であった。

（５）メラニン様色素の生成（トリプトン・イースト・
ブロス、　ｌ５Ｐ−培地１；ペプトン・イースト・鉄寒
天培地、　ｌ５Ｐ−培地６；チロシン寒天培地。

ｌ５Ｐ−培地７；いずれも３０℃培養）トリプトン・イ
ースト・ブロスおよびチロシン寒天培地では、陰性、ペ
プトン・イースト鉄寒天培地では陽性と思われる。

（６）炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ寒天培
地、　ｒｓｐ−培地９，３０℃培養）Ｌ−アラビノース
、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトース
、ラムノース、Ｄ−マンニトールを利用して生育し、シ
ュクロース、イノシトール、ラフィノース、ラクトース
は利用しない。

（７）リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰寒天培地。

３０℃培養） リンゴ酸石灰の溶解は認められない。

（８）硝酸塩の還元反応（０，１％硝酸カリウム含有ペ
プトン水、　ｌ５Ｐ−培地８．３０℃培養）陽性である
。

（９）セルロースの分解（濾紙片添加合成液、３０℃培
養） 陰性である。

以上の性状を要約すると、ＭＩ２１５−　ＮＦ３株は、
気菌糸上にかぎ又はらせん状の胞子鎖を形成し、胞子の
連鎖は７〜１５個を数える。胞子の表面はいぼ状である
。輪生波および胞子のうは認められない。

また、基中菌糸の分断もみられない０種々の培地で、う
す黄〜うす黄茶〜灰味黄茶の発育上に、白〜灰白、ある
いはピンク白の気菌糸を着生する。

溶解性色素はかすかに黄色味を帯びる。

メラニン様色素の生成は、トリプトン・イースト・ブロ
スおよびチロシン寒天培地で陰性を示し、ペプトン・イ
ースト・鉄寒天培地で陽性を示す。

蛋白分解力は中等度〜弱い方、スターチの氷解性は中等
度である。又、硝酸塩の還元反応は陽性である。

ところで、ＭＩ２１５−　ＮＦ３株は、菌体成分として
全菌体中にメソ−ジアミノピメリン酸、および糖成分と
して、グルコース、ガラクトース、マジュロース、リボ
ースを有し、リシバリエら （Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ　ｅｔ　ａｌ、　ｒＩｎｔｅ
ｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ｓｙｓｔｅ
ｍａｔｉｃ　ＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙＪ２０巻、４３
５頁、　１９７０年）の提唱する細胞壁の主要構成成分
のタイプ■Ｂを示した。また、リン脂質はＰＩ型（ホス
ファチジルエタノールアミン、ホスファチジルメチルエ
タノールアミン、ホスファチジルコリンおよび未知のグ
ルコサミン含有リン脂質を含まず、ホスファチジルイノ
シトール、ホスファチジルイノシトールマンノシドを含
む）。　メナキノンの組成はＭＫ−９（ＩＩ、）、　Ｍ
Ｋ−９（Ｈ，）および少量のＭＫ−９（Ｈ４）である。

以上の点より、　ＭＩ２１５−　ＮＦ３株はアクチノマ
ジュラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ）属に属する放線菌
と考えられる。

アクチノマジュラ属の既知菌種より、ＭＩ２１５−　Ｎ
Ｆ３株に類似の種を検索すると、形態、メナキノン組成
等の点で、アクチノマジュラ・シトレア（Ａｃｔｉｎｏ
ｍａｄｕｒａ　ｃｉｔｒｅａ、文献１ｒＡｎｔｉｂｉｏ
ｔｉｋｉＪ１７巻、９６５〜９７０頁、　１９７２年；
及び文献２ｒｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　＆　Ａｐｐｌｉｅ
ｄ　ＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙＪ　６巻。

２６４〜２７０頁、　１９８５年）があげられる、すな
わち、かぎ又はらせん状を呈する胞子鎖、いぼ状の胞子
表面、種々の培地での黄色の溶解性色素、および菌体の
メナキノン組成がにに一〇（Ｈ，）、　ＭＫ−（Ｉ（Ｈ
，）を示す点でよく類似している。しかし１文献上では
不明の点が多く、アクチノマジュラ・シトレアの標準菌
株を入手し比較実験を行なう予定である。これらの事か
ら、現時点ではＭＩ２１５−　ＮＦ３株をアクチノマジ
ュラ・エスピー（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ　ｓｐ、）
　ＭＩ２１５−ＮＦ３と命名する。なお、ＭＩ２１５−
　ＮＦ３株は、日本国茨城系つくば市にある通産省工業
技術院微生物工業技術研究所に昭和６３年１１月２２日
寄託申請し、微工研菌寄第１０３９７号として受託され
たが、現在はブタペスト条約の規定の下に寄託番号ｒＦ
ＥＲＭ　ＢＰ−２６７５Ｊとして寄託しである。

本発明の方法においてはＭＩ２１Ｓ　−ＮＦ３物質の製
造は次の通り行われる。

すなわち１ＭＩ２１５−　ＮＦ３物質の製造はＭＩ２１
５−　ＮＦ３物質生産菌を栄養培地中で２７〜３０℃の
温度で好気的深部条件下に攪拌しながら培養して行うの
が好ましい。このような目的に用いる栄養培地は砂糖。

でんぷん、グリセリンおよび糖みつのような資化性炭素
源、コーン・スチープ・リカー、大豆粉、綿実粉、ペプ
トン、肉エキスおよびホップかすのような有機窒素源、
硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウムおよび塩化アンモ
ニウムのような無機窒素源を含有することができる０発
酵の間に過剰の泡立ちが生じた場合、植物油またはシリ
コーンのような消泡剤を発酵培地に加えることができる
。

発酵中の培地のｐＨが変化したら炭酸カルシウムのよう
な緩衝剤を加えてもよい、深部培養用タンク中の培地の
通気は１分間当りブロスの１容量に対し新鮮な空気の約
１７２ないし２容量の割合を維持するのが好ましい。攪
拌は発酵工業において一般によく知られた攪拌手段によ
って行なわれる。

ＭＩ２１５−　ＮＦ３物質の生産のための種母としては
、寒天培地上、ＭＩ２１５−　ＮＦ３株の斜面培養から
得た生育物を使用する。この生育物は振とうフラスコま
たは種母タンクのいずれに接種する場合にも使用でき、
あるいは種母タンクに振とうフラスコからの生育物を接
種してもよい。

このＭＩ２１５−　ＮＦ３株の生育は通常５ないし７日
で最高に達する。しかし使用する装置、通気速度、攪拌
速度等によって使用菌が最高の生育に達する速度は変化
する。一般に１発酵は充分な抗菌活性が培地に付与され
るまで続ける。この培養液中のＭＩ２１５−　ＮＦ３物
質の力価の経時変化はスタフィロコッカス・アウレウス
・スミスを試験菌とする円筒平板評価法により測定でき
る。

本発明の方法においては、上記のようにして得られた培
養物からＭＩ２１５−　ＮＦ３物質を採取するが、採取
法としては微生物の生産する代謝産物を採取するのに通
常用いられる手段を適宜利用することから成る。たとえ
ば不純物との溶解性の差を利用する手段、各種吸着剤に
対する吸着親和性の差を利用する手段、水と混ざらない
溶媒による抽出などが単独あるいは組み合わせて利用し
てＭＩ２１５−　ＮＦ３物質を採取できる。ｙＫ則的に
は、下記の方法による採取法が好ましい、すなわち、培
養物から菌体を濾取または遠心法により分離し、得られ
る培養濾液から、水と混和しない有機溶媒例えば酢酸ｎ
−ブチル、酢酸エチル等で抽出し、その後、水洗し、有
機溶媒を蒸発乾固する。この乾固物は通常１０％前後の
量でＭＩ２１５−　ＮＦ３物質が含有される。

更にこの乾固物として得られた粗製のＭＩ２１５−　Ｎ
Ｆ３物質の純度を高めるために、シリカゲル系のカラム
クロマトグラフィーによる精製にかけ純度９５％以上の
ＭＩ２１５−　ＮＦ３物質を得ることができる０以上の
方法で得られるＭＩ２１５−　ＮＦ３物質はナトリウム
、カリウム等の塩、若しくは遊離カルボン酸の形である
が、公知の方法で単一の塩とすることができる。例えば
本ＭＩ２１５−　ＮＦ３物質を酢酸エチルに溶解させ、
１モル塩酸水、飽和炭酸ナトリウム溶液で順次洗浄し、
無水硫酸ナトリウムで有機溶媒層を乾燥した後、濃縮乾
固し、酢酸エチル−ヘキサンで結・晶化させると、ＭＩ
２１５−　ＮＦ３物質のナトリウム塩が無色板状結晶と
して得られる。

上記のように精製して収得されたＭＩ２１５−　ＮＦ３
物質（ナトリウム塩）は１例えばこれを酢酸エチル又は
メタノールの如き有機溶媒に溶解させ、その溶液に強酸
性イオン交換樹脂（ＩＩ＋型）を加えて処理すると、遊
離カルボン酸の形のＭＩ２１５−　ＮＦ３物質が生成で
きる。この遊離酸の形のＭＩ２１５−　ＮＦ３物質を例
えば、有機溶媒中で塩基性のアルカリ金属無機塩、例え
ば炭酸ナトリウム又は炭酸カリウムの水溶液、あるいは
塩基性水溶性アルカリ土類金属化合物、例えば水酸化カ
ルシウム又は水酸化マグネシウムで処理すると、対応す
るアルカリ金属塩の形又はアルカリ土類金属塩の形のＭ
Ｉ２１５−　ＮＦ３物質が生成できる。また同様に、そ
の他の金属塩例えば水酸化アルミニウム又は水酸化第２
鉄で処理して相当するアルミニウム塩又は鉄塩を調製す
ることができる。

更に、第３の本発明によると、前記の式（Ｉ）のＭＩ２
１５−　ＮＦ３物質又はその塩を有効成分として含有す
る鶏コクシジウム症の防除剤が提供される。

このコクシジウム症防除剤において、有効成分化合物と
してのＭＩ２１５−　ＮＦ３物質又はその塩は、同様な
用途の既知薬剤におけると同様に、動物医療上許容でき
る公知の担体、例えば澱粉、セルローズ粉末、木粉、あ
るいはエタノール等若しくは食餌材料と混和できる。担
体と混和して得られた組成物中のＭＩ２１５−　ＮＦ３
物質又はその塩の量はコクシジウム症を治療するに有効
である５０〜１１００ｐｐの濃度であることができる。

本発明のコクシジウム症防除剤はＭＩ２１５−　ＮＦ３
物質又はその塩を適当な有機溶媒にとかした溶液若しく
は含水有機溶媒に懸濁した濃厚原液又は分散液の形であ
ることもできる。

このような溶液又は分散液を飼料に添加して、飼料中の
有効成分物質の濃度が５０〜１１００ｐｐになるように
する。

本発明の他の要旨によれば、前記のように有用な式（Ｉ
）の抗生物質を生産できる有用で新規な微生物として、
アクチノマジュラ・エスピーＭＩ２１５−ＮＦ３株が提
供される。

以下に実施例により本発明をより詳細に説明する。

去】１」Ｌ アクチノマジュラ・エスピー（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒ
ａｓｐ、）電ｌ２１５−ＮＦ３株（ＦＥＲＭ　ＢＰ−２
６７５）の斜面培養物の菌体を１１０ｍＱ種母培地（ガ
ラクトース２％、化学用デキストリン２％、ソイペプト
ン１％、コーン・スチープ・リカー０．５％、硫酸アン
モニウム０．２％、炭酸カルシウム０．２％よりなり、
Ｐｔｌ　７．４）を含む５００ｄ容ロータリーフラスコ
に接種し、３０℃、１４４時間１回転シェーカー上で培
養した。得られた培養液を主培養用の培地（グリセリン
１．５％、可溶性でん粉１．５％、大豆粉０．５％、魚
粉１．５％、炭酸カルシウム０．２％よりなり、ｐＨ７
，４）　５　Ｑを１１Ｏｎ＋Ｒずつに分注した５００ｍ
Ｇ容ロータリーフラスコに３重量％の割合で接種した。

接種された培地を２７℃、１４４時間、毎分１８０回転
の回転シェーカー上で培養した。得られた培養物から菌
体を濾取し、得られた培養濾液約４Ωを酢酸エチル３Ｑ
で抽出後、抽出液を水洗し、無水硫酸ナトリウムで乾燥
する。乾燥された酢酸エチル溶液から不溶部を濾別し、
濾液を蒸発乾固する。残金を酢酸エチル１００　ｍｍに
溶解させ、再度不溶部を濾別し、濾液を蒸発乾固しＭＩ
２１５−ＮＦ３物質の粗製物２．４ｇを得た。

失庭盤又 実施例１で得たＭＩ２１５−ＮＦ３物質の粗製物２．４
ｇをクロロホルムに溶かし、メルク社製シリカゲルのキ
ーセルゲル６０（Ｉ５０ｇ）をクロロホルム中で充填し
たカラム・クロマトグラフィーにかけ、クロロホルム／
アセトン（５：１）を展開溶媒として溶出する。　ＭＩ
２１５−　ＮＦ３物質は溶出液の画分１６００ｍｆｌ　
〜３７００ｍＭに溶出する。活性画分から減圧下に溶媒
を留去した後、残金を酢酸エチル９０ｍＭに溶解させ、
０．１モル塩酸水、０．１モル水酸化ナトリウム水溶液
、飽和食塩水で順次洗浄してから無水硫酸ナトリウムで
乾燥した。その後、溶液を減圧下に蒸留して溶媒を留去
すると２５５ｍｇのオイル状物質を得た。

得られたオイルをヘキサン、酢酸エチルで結晶化させ、
ＭＩ２１５−　ＮＦ３物質のナトリウム塩を無色板状結
晶２３２■として得た。

失胤且１ ＭＩ２１５−　ＮＦ３物質のナトリウム塩２００ｍｇを
クロロホルム１００ｍＱに溶解し、水１０ｍＱを加え、
塩酸でｐＨ３，０に調整後、振盪抽出をしてクロロホル
ム層を得た。クロロホルム層は水洗後、無水硫酸ナトリ
ウムで脱水し、濃縮乾固して遊離カルボン酸の形のＭＩ
２１５−　ＮＦ３物質の１ｇ６ｍｇを得た。

災産貢土 ＭＩ２１５−ＮＦ３物質２０ｍｇをアセトン１−に溶解
した。

これに水酸化アルミニウム２．５％サスペンションの０
．３ｍＱを添加し、室温で１８時間反応後、１００ｍＭ
の水を加え、１００ｍΩのクロロホルムで２回抽出した
。

クロロホルム層は水洗、脱水操作後に濃縮乾固して阿Ｉ
２１５−　ＮＦ３物質のアルミニウム塩の１９．８ｍｇ
を得た。

（発明の効果） 本発明の新規な抗生物質ＭＩ２１５−　ＮＦ３物質又は
その塩は、鶏のコクシジウム症の防除剤として有用であ
る。そして治療しつる鶏の種類は特定のものに限られな
い、また、従来使用されているコクシジウム治療用抗生
物質例えばモネンシン又はサリノマイシンと比べて本発
明に係る抗生物質ＭＩ２１５−ＮＦ３物質又はその塩は
小薬量でより有効である。

【図面の簡単な説明】

第１図はＭＩ２１５−ＮＦ３物質ナトリウム塩の、　Ｋ
Ｂｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。第
２図はＭＩ２１５−　ＮＦ３物質ナトリウム塩の重クロ
ロホルム中にて室温で測定した４００ＭＨｚにおけるプ
ロトン核磁気共鳴スペクトルである。 １、。 ２゜ ３゜ 手続補正書 （自発） 平成 ２年 ３月１９日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次の式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒは水素原子である）を有する抗生物質ＭＩ２
   １５−ＮＦ３物質及び式（ I ）におけるＲが金属又は
   アンモニウム基である場合のＭＩ２１５−ＮＦ３物質の
   塩。 ２、式（ I ）におけるＲがアルカリ金属、アルカリ土
   類金属又はその他の金属あるいはアンモニウム基である
   請求項１記載のＭＩ２１５−ＮＦ３物質の塩。 ３、アクチノマジュラに属する請求項１に記載の式（
   I ）のＭＩ２１５−ＮＦ３物質又はその塩の生産菌を培
   養し、培養物からＭＩ２１５−ＮＦ３物質又はその塩を
   採取することを特徴とする抗生物質ＭＩ２１５−ＮＦ３
   物質又はその塩の製造方法。 ４、請求項１に記載の式（ I ）のＭＩ２１５−ＮＦ３
   物質又はその塩を有効成分として含有することを特徴と
   する、鶏のコクシジウム症の防除剤。 ５、請求項１に記載の式（ I ）のＭＩ２１５−ＮＦ３
   物質を生産する特性をもつアクチノマジュラｓｐ．ＭＩ
   ２１５−ＮＦ３株。