JPH02268197A

JPH02268197A - 新規ペプチド及びその製造用中間体

Info

Publication number: JPH02268197A
Application number: JP1088562A
Authority: JP
Inventors: Takeshi Yamamura; 山村　剛士
Original assignee: ICHIKAWA GOSEI KAGAKU KK
Current assignee: ICHIKAWA GOSEI KAGAKU KK
Priority date: 1989-04-07
Filing date: 1989-04-07
Publication date: 1990-11-01
Also published as: CA2046484A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】皮果上ｑ丑亙分豊本発明は、医薬、機能性材料の分野において利用される
ペプチド−金属錯体を得るためのリガンドとしての新規
ペプチドおよびその製造用中間体に関する。

技■呵豊員近年、生物無機化学的領域において、ペプチドに金属を
配位させた錯体の挙動が注目されており、これらのペプ
チド−金属錯体の一部は、医薬、機能性材料の分野にお
いて実用化されているものも少くない、しかし、従来知
られているペプチド金属錯体の多くは、生体内に存在す
る錯体と比較して酸化還元電位が小さ（、機能性につい
て問題があった。

なお、本発明に係るペプチド自体も代謝１）ｆＩｆｆ、
抗腫瘍性等の生理的活性を有するものであることは、従
来公知のペプチドの活性からみて当然考えられる。

日が　°　しようとする量本発明は、生体類似機能に−そう近い機能性の金［錯体
を得るために必要であるリガンドとして有用な新規ペプ
チドを提供することを課題とする。

さらに、本発明は、このペプチドを製造するのに用いる
新規中間体を提供することも課題とする。

示　を　゛するための生体において金属はペプチドにより挟み込まれた形態で
存在しており、例えば鉄はＣＦｅａＳａ（ターＣｙｓＬ
）”−の形態でペプチドのシスティン基に挟み込まれて
いることが知られている。これまでに、（Ｆｅ４Ｓ４（
Ｓ−ｔ−Ｂｕ＊）ａ）”−あるいはＣＦｅａＳａ　（Ｓ
−Ｐｈ）　ａ　）”−のような４鉄クラスターあるいは
（Ｆｅ４Ｓ４（Ｂｏｃ−（Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ）　
ａ−ＮＨ＊　）”−または（ＦｅｔＳ＊（ｚ−Ｃｙｓ−
Ｇｌｙ−八Ｉａ−ＯＭｅ）＠）”−のような４鉄クラス
ター−ペプチド錯体が合成され、それらの酸化還元電位
が知られているが、いずれもその値は低い。

本発明は、リガンド中にシスティン基を２個含んだペプ
チドを２ブロック組合せて金属錯体を得ることが可能で
あるとの見地に基き、活性なアミノ酸のＮＨ，基および
Ｃ０ＯＨ基の保護と脱保護を繰り返しながら、システィ
ン、バリン、プロリンのそれぞれを反応させることによ
り、目的ペプチドを得るものである。

なお、本発明では、例えばシスティン基を２個含むペプ
チドを２分子環化すれば環状のペプチドが得られるので
、これにさらにアミノ酸を反応させて大分子量のペプチ
ドを得ることも可能である。

以下に本発明に係るペプチドおよびそれを製造するため
の中間体の製造例を示す。

実施例１本例は式（■）で表わされる中間体の製造を示したもの
である。

Ｂｏｃ−ＶａＩ−Ｃｓ（ＡｃＩｌｌ）−Ｖａｌ−Ｐｒｏ
−ＯＭｅ　（■）のＡＢｏａ−Ｃｙｓ（Ａｃｌｌ）−Ｖ
ａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ　３．５２ｇ（７ｍｍｏｌ）に４
Ｍ塩酸／ジオキサンを加え、室温で１時間攪拌した。

次いで、得られた反応混合物中のジオキサンを真空留去
し、さらに、４０ｍのエーテルを加えて真空留去を繰返
し行い、粘性を有する下記式で示される化合物を得た。

Ｈ−Ｃｙｓ（Ａｃ購）−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ−ＨＣ
Ｉ　。

次に、この化合物を２００ｍのジメチルホルムアミド（
以後ＤＭＦと略記する）に溶解し、水冷撹拌しながらト
メチルモルフォリン（以後ＮＭＭと略記する）　０．７
７ｍ（７ｓ＋５ｏｌ）を加えた。１０分経過後これにＢ
ｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ１，５２ｇ（７ｓｍｏｌ）、Ｎ−ヒ
ドロキシベンゾトリアゾール（以後ＨＯＢ　ｔと略記す
る）１．４４ｇ（７ｍｍｏｌ）およびジシクロへキシル
カルボジイミド（以後ＤＣＣと略記する）　１．４４ｇ
（７ｓ＋５ｏｌ）を順次加えて、−３℃の温度で４時間
、０℃で１０．５時間および室温で５時間順次的に撹拌
した０次いで、反応混合物中のＤＭＦを真空留去した後
、４０−の酢酸エチルに溶解した後、冷却し、不溶結晶
を濾別した。酢酸エチル層を水、１Ｍ炭酸水素ナトリウ
ム溶液、水、Ｉｎクエン酸溶液および水で順次洗浄し、
無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を真空留去して黄白
色のアモルファスの粗生成物を得た。これをカラムクロ
マトグラフィーで精製して上記式（ＩＩ）で示される目
的物を得た。

収量２８ｇ１収率５４．１％。

次に得られた目的物の物性を示すと下記のとおりである
。

■元素分析（重量％）実験値　Ｃ：　５２．６６　、Ｈ：　７．３９、Ｎ　：
　１２．２８計算値　Ｃ：　５２．６８　、Ｈ：　８．
１２、Ｎ　：　１２．２９上記元素分析値は、Ｃ＊ｔＨ
ａ？０ｓＮｓＳ−Ｄ　Ｍ　Ｆ　・ｏ、ｓｕ＊ｏとしての
計算値により示した。

■’ＮＭＲ（ＣＤＣ１３） δＴＭＳ（ｐｐｍ）＝０．６８〜１．１６（ｍ、１２８
．　Ｖａｌ　Ｈｒ）１．４４（ｓ、９ｆ（、Ｂｏｃ：　
Ｃ１）ｓ）１．７２〜２．４０（＊、９Ｈ１Ａｃｅ　Ｃ
１）３）Ｖａｌ　Ｈｒ、Ｐｒｏ　Ｈｒ、ｒ）２．７２〜２．９６（ｍ、２Ｈ，Ｃｙｓ　Ｈｒ）３．３
２〜３．８４（ｓ、２ＨＳ　Ｐｒｏ　　Ｈｒ）３．６８
（ｓ、３Ｈ，ＨＣＩ２）３．８４〜４．９６（ｍ、６１）、Ｖａｌｌｌａ）Ｃｙ
ｓＨｉｙ、ＰｒｏＨｒｌ’、Ａｃ鋼ＣＬ）５．１４　　　　　（ｄ、Ｈｌｏ）６．８０”８．００　　ＣＭ、４１）、　ＩＮ（Ｃｙａ
、　Ｖａｌ、Ａｃｍ）　］実施例２本例は式（ＩＩＩ）で表わされる中間体の製造を示した
ものである。

Ｂｏｅ−Ｃｓ（八ＣＭ）　−Ｖａ　１ｐ−守成実施例１で得られた化合物０．６０ｇ（ｌａｍｏｌ）を
ＩＭの４Ｍ塩酸／ジオキサンに溶解し、室温下に撹拌し
た。得られた反応混合物中のジオキサンを真空留去し、
さらに、５−のエーテルを加えてジオキサンの留去を繰
返し行って、白色アモルファスの１ｌ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ
（Ａｅ＋ｍ）−Ｖａｌ−ＰｒｏＬＯＭｅ　・ＨＣＩの式
で表わされる化合物を得た。

次に、この化合物を３０ｍのジクロロメタンに溶解し、
−３℃で攪拌しながらＮ　Ｍ　ＭＯ，ｌｉｄ　（Ｌｓｉ
ｏｌ）を加え、１０分後にＨｏｅ−Ｃｙｑ　（ＡＣｍ）
−Ｏｌｌを０．２９ｇ（ｌａｍｏｌ）、夏（ＯＢ　ｔを
０．１５ｇ（１，ｌａｍｏｌ）およびｌ’）ＣＣを０．
２１ｇ（ｌａｍｏｌ）順次的に加えて一３℃で５時間、
０℃で１０時間および室温で５．５時間遅次撹拌した。

得られた反応混合物中の溶媒を留去した後、３〇−のク
ロロホルムに溶解して不純物を濾Ｊした。得られた濾過
を水、ＩＮ炭酸水素す；・リウム水冷液、水およびｉ＞
ｔクエン酸ナトリウム水溶液で順次洗浄し、次いで無水
硫酸すｊ・リウムで乾煙し、溶媒を真空留去して黄白色
アモルファスの粗生成物を得た。

これをカラムクロマトグラフィで精製し１、白色アモル
ファスの式（ＩＮＮ）の目的物を得た。

収量０．５ｂ、収率６７゜０％。

この目的物の物性を示すと下記のとおりである。

■元素分析（重置％）実験値　Ｃ：　４９．４２　、Ｈ：　７．２１．　Ｎ　
：　１２．０９計算値　Ｃ：　４９．３５　、Ｈ：　７
．５５、Ｎ　８１２．２１上記元素分析値は、ＣｚＪｓ
、０ｒｉｉＮ、Ｓｚ　’　１．５Ｈ＊０としての計算値
により示した。

■−ＮＭＲ（Ｃ１３Ｃ１３） δＴＭＳ（ｐｐｍ）　＝０．６８〜１．１６（ｍ、１２
ＨＳＶａ！　Ｈｒ　）１．４４（Ｓ１９Ｈ％　ＢＯＣＣ
ＨＪｌ、７２〜２．４６（ａｍ、１２１）％Ａｅｍ　ＣＨｓ
）ＶａＩ　Ｈβ、Ｐｒｏ　ＨｓＩｒ）２．４６〜３．２０（ｅａ、４Ｈ，Ｃｙｓ　）Ｉβ）３
．６９（ｓ、３Ｈ−０Ｃ１）＋）３６４０〜４．００（ｍ、２Ｈ１Ｉ’ｒｏ　　Ｈδ）４
．００〜５．１２（ｍ、９Ｈ１ＶａｌＨａｒ、ＣｙｓＨ
ａ：、Ｐｒｏ　Ｈδ Ａｃｔ　ＣＨｌ）７．７６．７．００〜７．８０〔鵬、５Ｈ，Ｈ’ （Ｃｙｓ、　Ｖａｌ、Ａｃ、５ｉ））実施例３本例は下記式（ＩＶ）で表わされる中間体の製造を示し
たものである。

Ｈｏｅ−Ｃ５（Ａｅ＋ｍ）−Ｖａｌ−Ｃ５（Ａｃ＋ｗ）
−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ＯＨ（ＩＶ）の且実施例２で得られた式（ｍ）　（７）物質３３７ｍｇ　
（０，５ｍｍｏｌ）を５−のメタノールに溶解し、これ
に１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液０．５５ｍ　（０，５５
ｇｍｏｌ）を加え、室温で５時間撹拌した。次いで、得
られた反応混合液に５Ｍ！、の水を加えてメタノールを
真空留去した後、５ｄのＤＩクエン酸水溶液を加えてｐ
Ｈを３に調整し、酢酸エチルで抽出を行った。得られた
有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、溶媒を留去
して白色アモルファスの式（ＫＶ）の目的物を得た。

収量２２２静ｇ、収率５８．３％。

得られた目的物の物性を示すと下記のとおりである。

■元素分析ｃ重量％）実験値　Ｃ：　４９．５６　、ＨＸ　７．３７、Ｎ　８
１）６０計算値　Ｃ８４９゜５５　、Ｈ：　７．４８、
Ｎ　：　１）．９０」−記計算元素分析値は、Ｃｓ５Ｈ
ｓａＯ＋Ｊ？Ｓｔ　・０．５ＡｅＯＲｔ・１ｉｔＯとし
ての計算値により示した。

■ ’ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄｉ） δＤＤＳ　（ｐｐｍ、）　−０，８８（ａ＋、　１２１
）、ＶａｌＨｒ）１．４０（ｓ、９Ｈ１Ｂｏｃ　ＣＨ，
）１．６８〜２．２４（帽１２Ｈ，Ａｃｅ　　Ｃ１）ｉ
）Ｖａｌ　　Ｈａ、Ｐｒｏ　Ｉｆβｌ７）２．５６〜２
．８８（ｍ、４Ｈ１Ｃｙｓ　Ｈａ）３．６０（ｓ＋、２
Ｈ、Ｐｒｏ　Ｈａ）３．８８〜４．７２（Ｉｓ、９Ｈ，
Ｖａｌ　　Ｈａ）ＣｙｓＨα、ＰｒｏＨｃｒＡｃｌｌＣＨｌ）７．０８．７．５６．７．８８．８．１７　（ｄ、４）１．　　（Ｃｙｓ、Ｖ
ａｌ）　　Ｉｔ’）８．４０〜８．７２（ｔ、２Ｈ，Ａ
ｃｅ　ｔｌ’）１２．５１　　（ｂｒ、１８．ＯＨ）実施例４本例は本発明によるペプチドの製造を示したものである
。

実施例３により得られた式（ＩＶ）の物質２３４．４ｍ
ｇ（０，３１ｍｍｏｌ）を３Ｍ１のＤＭＦに溶解し、こ
れに水冷下でｌ−エチル−３−（３−ジメチルアミノプ
ロピル）−カルボジイミド塩酸塩（以下ＥＤＣ・ＩＩｃ
Ｉ　と略記する）１）８．０ｍｇ（０，６２ｍｍｏｌ）
とＮ−ヒドロキシコハク酸イミド（ＨＯＮｓｕと略す）
　７２．１ｍｇ（０，６２ｍｍｏｌ）を順次的に加え、
０℃で１６時間攪拌し、次いでＤＭＦを真空留去した。

この留去後の残渣に酢酸エチル１〇−を加え、１Ｍ炭酸
水素ナトリウム水溶液および水で洗浄後、溶媒を留去し
て粗生成物を得た。これを酢酸エチル−石油エーテルで
再結晶して、薄赤色アモルファスの目的ペプチドを得た
。

収量１）５．８驕ｇ、収率４２．３％。

得られたペプチドの物性を示すと下記のとおりである。

■　分子式　Ｃ３ｓｌｌｓｓＯ＋□Ｎｅ５ｔ■　元素分
析（重量％）実験値　Ｃ：　４８．１６　、Ｈ：　６．７４、Ｎ　：
　１）．９Ｂ計算値　Ｃ：　４８．６９　、Ｈ：　６．
９０、Ｎ　：　１）．９６■’ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄｉ
） δ００Ｓ（ｐｐｍ）−０，８８（ｓ、１２Ｈ，Ｖａｌ　
Ｈｒ）１．４０（ｓ、９Ｈ，Ｂｏｃ　ＣＨｓ）１．６８
〜２．２２（ｓ＋、１２Ｈ，＾ｃｍ　　ＣＨｓ）Ｖａｌ
　　Ｈａ、Ｐｒｏ　Ｈａ、γ）２．８２（ｓ、４Ｈ，ＯＮＳｕ）２．５８〜３．００（ｍ、４ＨＳ　Ｃｙｓ　　Ｈａ）３
．４０〜４．８４（ｍ、９Ｈ，Ｖａｌ　　Ｈａ、ＣＶＳ
Ｈｃｘ、Ｐｒｏ　Ｈａ、Ａｃｅ　ＣＨ，）７．０８．７．５６．

Claims

【特許請求の範囲】

（１）式（ I ）Ｂｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｖａｌ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）
−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ＯＮＳｕ（ I ）（ただし、式中Ｂ
ｏｃはターシャリブチルオキシカルボニル基を表わし、
Ａｃｍはアセトアミドメチル基を表わし、ＯＮＳｕはＮ
−オキシコハク酸イミドを表わす）で示される新規ペプ
チド。
（２）Ｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｖａｌ−Ｐ
ｒｏ−ＯＭｅ（式中のＢｏｃおよびＡｃｍは上記と同じ
意味を表わし、ＯＭｅはメトキシ基を表わす）。
（３）Ｂｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｖａｌ−Ｃｙｓ（Ａ
ｃｍ）−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ（式中のＢｏｃ、Ａｃ
ｍおよびＯＭｅは上記と同じ意味を表わす）。
（４）Ｂｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｖａｌ−Ｃｙｓ（Ａ
ｃｍ）−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ＯＨ（式中のＢｏｃおよびＡ
ｃｍは上記と同じ意味を表わす）。